CN114674899A - 一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法 - Google Patents

一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法，用TAE/Mg2+缓冲液将双足DNA walker与封闭链block退火形成双链DNA walker/block；用TAE/Mg2+缓冲液将DNA‑H1、DNA‑H2、DNA‑H3、DNA‑H4退火形成发夹DNA‑H1，发夹DNA‑H2，发夹DNA‑H3，发夹DNA‑H4；用三(2‑羧乙基)膦)还原巯基修饰的DNA‑H1，然后滴至金电极表面孵育10小时，再用6‑巯基‑1‑己醇处理0.5‑1h；将双链DNA walker/block、不同浓度的APE1酶与发夹DNA‑H2混合滴至金电极表面进行反应；再将发夹DNA‑H3、发夹DNA‑H4混合滴至电极表面进行反应；在室温下将亚甲基蓝滴在电极表面，避光孵育，超纯水冲洗、N2吹干，得到检测APE1酶的超灵敏电极；将上述超灵敏电极置于PBS中，进行方波伏安法信号检测，得出不同浓度的APE1酶对应的SWV信号，并绘制出标准曲线；把待测样品加入到超灵敏电极表面，37℃下孵育，设定一样的检测条件，测得不同待测样品的SWV信号，获得APE1酶的特异性检测结果。

Description

一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法
技术领域
本发明属于生物化学分析方法，具体涉及一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法。
背景技术
脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶又称氧化还原效应因子1(即APE1)是一种重要的DNA修复蛋白，在碱基切除修复(BER)过程中，它通过切割无碱基(AP)位点维持基因组稳定性。它还参与调节细胞对氧化应激条件的反应。在肿瘤细胞中发现了APE1的异常表达，癌细胞中APE1的水平通常会升高。迄今为止，已经开发出许多用于检测APE1的方法，例如酶联免疫吸附测定，电化学免疫测定，电化学发光免疫传感器和荧光DNA探针。随着对APE1酶的研究增多，在对追求APE1检测的灵敏度和选择性要求越来越高，因此对其研究的越来越广泛。DNA出色的可编程性使DNA walker的构建成为可能，DNA walker的渐进运动提供了执行多项任务和信号放大的可能性，为分子运输，生物传感器和生物合成提供了有价值的平台。因此，基于DNA walker的有效信号放大，结合灵敏的电化学信号方法，为APE1酶的检测可能提供了一种独特的思路。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法。具体提供了如下的技术方案：
1、一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法，步骤为：
1)用TAE/Mg2+缓冲液将双足DNA walker与封闭链block退火形成双链DNA walker/block；
2)用TAE/Mg2+缓冲液将DNA-H1、DNA-H2、DNA-H3、DNA-H4退火形成发夹DNA-H1，发卡DNA-H2，发卡DNA-H3，发卡DNA-H4；
3)用三(2-羧乙基)膦)还原巯基修饰的DNA-H1，然后滴至金电极表面孵育10小时，再用6-巯基-1-己醇处理0.5-1h，以减少非特异性吸附；
4)将步骤1)得到的双链DNA walker/block、不同浓度的APE1酶与步骤2)的发夹DNA-H2混合滴至金电极表面进行反应；
5)再将DNA-H3、DNA-H4混合滴至电极表面进行反应；
6)在室温下将亚甲基蓝滴在电极表面，避光孵育，超纯水冲洗、N2吹干，得到检测APE1酶的超灵敏电极；
7)将步骤6)得到的超灵敏电极置于PBS中，进行方波伏安法信号检测，得出不同浓度的APE1酶对应的SWV信号，并绘制出曲线；
8)把待测样品加入步骤6)得到超灵敏电极表面，37℃下孵育，设定与步骤6)一样的检测条件，测得不同待测样品的SWV信号，获得APE1酶的特异性检测结果。
进一步，步骤4)所述的双链walker/block、APE1酶与DNA-H2反应的时间为1h-3h，步骤5)所述的DNA-H3与DNA-H4反应的时间为1h-3h。
进一步，步骤4)所述的双链walker/block、APE1酶与DNA-H2反应的时间为2.5h，DNA-H3与DNA-H4反应的时间为2h。
进一步，所述的巯基修饰的DNA-H1序列为SEQ ID NO.1；所述的双足DNA walker序列为SEQ ID NO.2；所述的封闭链block序列为SEQ ID NO.3；所述的DNA-H2的序列为SEQ IDNO.4；所述的DNA-H3的序列为SEQ ID NO.5；所述的DNA-H4序列为SEQ ID NO.6。
进一步，步骤1)所述的TAE/Mg2+缓冲液组成为40mM Tris，20mM醋酸，1mM EDTA，10mM Mg2+，pH＝8。
进一步，所述的双足DNA walker与封闭链block等摩尔量，所述的DNA-H2、DNA-H3和DNA-H4等摩尔量。
进一步，步骤4)所述的APE1酶范围为0.001-1000U/ml。
进一步，步骤3)所述的6-巯基-1-己醇的用量为1-5mM。
进一步，步骤7)所述的亚甲基蓝的用量为1-5mM。
进一步，步骤8)所述的方波伏安法的参数设置为Init E：-0.5V，Final E:0.1V，Quite Time:2s，其余参数使用默认设置。
本发明的有益效果在于：DNA walker作为一种动态纳米器件常被用做检测靶标的信号放大装置，其具有高效、稳定等优良的特性。我们将DNA walker与杂交链式反应(HCR)双放大信号结合，并利用电化学的高灵敏度和快速响应的特点，设计了超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法。我们将发夹H1通过Au-S键固定在金电极表面，随后加入被封闭的双足DNA walker。第一个信号放大方式是DNAwalker的渐进运动，其由三部分组成，包括轨道链、步行链、驱动力，即电极表面修饰的DNA-H1、产生的双足DNA walker链、辅助发夹DNA-H2发生的链置换作用力。第二个信号放大方式是杂交链式反应(HCR)的引入，HCR产生的长链可以吸附多个电化学信号分子，产生强烈的电化学方波伏安电流信号(SWV)。当靶标APE1酶存在时，APE1识别双足DNA walker/block双链处的AP位点，切割AP位点后，block由于碱基互补能力减弱，从而脱离，产生双足DNA walker单链。DNA walker通过发夹DNA-H1的脚趾域引发DNA-H1，在辅助发夹DNA-H2存在下，发生链置换反应以提供DNA walker渐进运动的动力，驱动DNA walker的下一个循环，产生的H1/H2双链进一步引发发夹DNA-H3与发夹DNA-H4的HCR反应，由于DNA单链可以通过静电作用吸附亚甲基蓝活性分子(MB)或者DNA双链通过π-π叠加作用插入大量的MB分子，通过将MB分子整合到HCR产生的长DNA链中，获得强烈的电流信号，提高了传感器对APE1酶的检测灵敏度，在疾病的临床诊断中具有潜在的应用价值。当靶标APE1酶不存在的时候，无法释放DNA walker单链，即无法引发后续反应，则不会产生电化学信号。本发明将DNA walker与电化学结合，为了提高电流信号并加入了HCR的放大策略，过程简单易行、响应迅速、灵敏度高、检测限低，成功的用于APE1的检测，在疾病的临床诊断中具有潜在的应用价值。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图：
图1为本发明的一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法检测原理示意图；
图2为APE1酶切双链双足DNA walker/block的聚丙烯酰胺凝胶电泳图；
图3为验证实验原理可行性的聚丙烯酰胺凝胶电泳图；
图4为电极表面实验可行性表征的循环伏安CV图；
图5为电极表面实验可行性表征的电化学阻抗EIS图；
图6为HCR反应过程的时间优化；
图7为不同HCR反应时间与SWV电流信号对应关系绘制的拟合图；
图8为DNA walker步行反应过程的时间优化；
图9为不同DNA walker的步行反应时间与SWV电流信号对应关系绘制的拟合图；
图10为不同APE1酶浓度引发体系测得的SWV测量值；
图11为不同APE1酶浓度与SWV电流信号对应关系绘制的拟合图；
图12为不同APE1酶浓度与SWV电流信号的线性关系图；
图13为不同酶靶标的选择性分析图。
具体实施方式
一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法如图1所示，双足DNA walker最初由两条序列相同的block链封闭，在无靶标时无法触发block链断裂及后续反应，在靶标APE1酶存在时，可以切割DNA双链的AP位点，封闭链断裂并由于结合力不足而脱落，产生单链双足walker；在金电极表面修饰发夹DNA-H1，释放的双足walker可以打开H1，在H2链置换作用下，双足walker再次被释放并产生H1/H2双链，链置换反应起到驱动双足walker行走的作用。产生的H1/H2双链可以进一步引发HCR反应生成长的双链DNA，亚甲基蓝分子MB通过静电吸附与ssDNA结合，或通过π-π叠加作用与dsDNA结合，以产生强烈的电化学信号，获得了对APE1酶检测的灵敏度。
下面结合附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。
实施例1对探针DNA进行预处理
首先，从上海生工订购的粉末状引物DNA使用前离心4000rpm/min，1min，用超纯水按要求溶解，形成100μM DNA溶液。使用时用TAE/Mg2+缓冲液配制，缓冲液组成为40mM Tris，20mM醋酸，1mM EDTA，10mM Mg2+，pH＝8。
DNA-H1序列为5’-SH-TTT TTT TTC GAT CCA ATC ATC AGC CTA GCT CCG AAT TCCGCT GAT GAT TGG ATC GAG TGC CT-3’(SEQ ID NO.1)；
双足DNA walker序列为5’-AGG CAC TCG ATC CAA TCA TCA GCA CCA CAC ATTATC TGG CAC TCC AAC AGT GCC TAG GCA CTC GAT CCA ATC ATC AGC-3’(SEQ ID NO.2)；
封闭链block序列为5’-CAT CAG CXA ACC TGG G-3’(SEQ ID NO.3)；
DNA-H2序列为5’-TCT ACC TAC CTA GCT CCG AAT TCC GAT CCA ATC ATC AGCGGA ATT CGG AGC TAG GCT GAT GAT-3’(SEQ ID NO.4)；
DNA-H3序列为5’-GGA ATT CGG AGC TAG GTA GGT AGA GTA ATG CCG TCT ACCTAC CTA GCT CCG-3’(SEQ ID NO.5)；
DNA-H4序列为5’-CCG TCT ACC TAC CTA GCT CCG AAT TCC CGG AGC TAG GTAGGT AGA CGG CAT TAC-3’(SEQ ID NO.6)。
实施例2聚丙烯酰胺凝胶电泳进行方案可行性验证
各个发夹DNA首先退火形成发夹，双足DNA walker与封闭链退火杂交形成双链，按照对应条带的条件在37℃反应。配制10％聚丙烯酰胺凝胶电泳，在100V电压下实行。然后将其置于凝胶成像仪上成像。结果如图2、图3所示，图2表示酶切双足DNA walker的过程，条带1与条带2分别对应封闭链block与walker链；条带3表示被封闭的双链-双足DNA walker/block；条带4表示的是无AP位点的双链-双足DNA walker/block，其位置与带有AP位点的条带位置一样；条带5表示的是在条带4的基础上加APE1酶，由于双链中不含AP位点，因此APE1不能切割双链，无法产生其它条带；条带6表示在条带3的基础上加APE1酶，由PAGE图可以看到walker链的位置，并且双链消失，这是由于APE1切割双链中的AP位点，封闭链裂解，碱基互补配对的结合力无法使封闭链稳定的与walker链结合，从而产生单链DNA walker；条带7表示在不存在APE1酶的基础上加H1，walker无法被释放进而不能引发H1，仍存在大量双链DNA walker与H1；条带8表示在存在APE1酶的基础上加H1，walker被释放打开H1，可以看出walker链与两个H1结合的条带，双链DNA walker与H1条带逐渐消失。这表明我们的靶标APE1可以识别双链中AP位点，并合理的引发H1反应。后续电极表面的反应的PAGE结果如图3所示，条带1、2、3、4、5分别代表双链DNA walker/block、H1、H2、H3、H4；条带6表示APE1存在时，walker引发H1、H2发生链置换反应，得到H1/H2双链的条带；条带7表示APE1存在时，并且walker引发H1、H2发生链置换反应后，继续发生HCR的反应，产生长链HCR产物；条带8表示靶标APE1不存在时，无法引起整个反应链的发生。聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果验证了我们方案的可行性。
实施例3金电极的处理
首先，将金电极依次用1.0、0.3和0.05μm Al2O3粉末抛光成镜面，每一步金电极均用超纯水冲洗干净；然后用乙醇和超纯水超声清洗。超声清洗、在氮气流下干燥后，在0.1M的新配硫酸溶液中反复扫循环伏安直至图形稳定。最后，对金电极进行超纯水冲洗、N2吹干，将预处理的金电极用于制造电化学生物传感器。
实施例4金电极表面DNA的修饰及其表征
首先，1μM的发夹H1用TCEP避光处理1h。取上述溶液滴加到处理过的电极上室温孵育，超纯水冲洗并用N2干燥后，将发夹H1修饰的金电极置于6-巯基-1-己醇(MCH)中处理0.5-1h，以减少非特异性吸附。此时，获得已经修饰好的H1/GE。接下来将双链walker/block、一定量APE1酶、H2滴至电极表面37℃反应2.5h，之后将H3、H4混合滴至电极表面反应2h。以上步骤每一步修饰完均用超纯水冲洗并用N2吹干。
为了验证电极表面DNA的修饰及实验反应的可行性，我们用电化学阻抗谱(EIS)以及循环伏安法(CV)进行了表征。EIS与CV均在铁氰化钾电解液中进行。电化学阻抗谱对电极表面修饰是一种有效的方法，通常由半圆和线性部分组成。半圆部分在高频区，用来反映界面电荷转移电阻的大小，线性部分则在低频区，用来反应界面电荷的扩散过程。结合循环伏安法的电流表征，我们证实了实验方案在电极表面的可行性，结果如图4、图5所示，曲线a显示裸金电极的圆弧半径很小，且CV图的峰电流最高，表明界面电荷转移电阻很小；当金电极表面修饰上H1之后，DNA显示负电性，阻碍了[Fe(CN)6]3-/4-在电极表面的电子传递，使得曲线b显示电荷转移阻抗增大，且CV图峰电流降低；随着MCH封闭电极以及杂交链式反应(HCR)产生长链DNA后，曲线c、d显示电荷转移阻抗持续增大，且CV图峰电流持续降低，这表明酶切walker后步行触发了后续HCR的进行。实验结果与电极表面实验方案的设计一致。
实施例5实验条件的优化
本发明分别对DNA walker的步行过程和HCR引发过程的时间进行了优化，在各个DNA探针浓度一致，反应温度固定时，分别对DNA walker步行过程进行了1h、2h、2.5h、3h的分析，对HCR发生过程进行了0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h的分析。实验结果如图6、7、8、9所示，图6与图7分析得到HCR反应过程最佳时间为2h，图8与图9分析得到了DNA walker步行最佳时间为2.5h。本实验选择DNA walker步行2h，HCR触发2.5h。
实施例6 DNA walker纳米器件的性能分析
1μM的发夹H1用标准方法在电极表面室温孵育过夜，并通过MCH处理以减少非特异性吸附后，获得已经修饰好的H1/GE。接下来将双链walker/block、不同浓度的APE1酶(浓度分别为0.001U/ml、0.01U/ml、0.1U/ml、1U/ml、10U/ml、100U/ml、200U/ml、1000U/ml)、H2滴至电极表面37℃反应2.5h，之后将H3、H4混合滴至电极表面反应2h。反应完成后，在室温下将MB滴在电极表面，避光孵育。以上步骤每一步修饰完均用超纯水冲洗并用N2吹干。方波伏安法在PBS电解液中进行，在进行电化学测量之前，应使用高纯度氮气彻底吹扫电解液约15-30分钟，以避免受到氧气还原的干扰。
DNA walker纳米器件的性能分析实验结果如图10所示，在相同条件下，0-1000U/ml靶标范围内，随待测物APE1酶浓度的增加，电流信号强度逐渐增加。图11直观的显示了不同浓度APE1对应的电流信号。图12表面，我们的实验在0.001U/ml到1U/ml有良好的线性关系，检测限为0.001U/ml。
实施例7实验选择性分析
在实验的反应过程中，将APE1酶换成10U/ml的UDG酶、T5 Exo酶、Lambda Exo、ExoⅠ，其余在相同条件下进行反应，测其方波伏安电流强度，结果如图13所示，所获得的电流信号均比APE1酶存在时得到的电流信号低，证实了本发明有良好的特异性。
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法，其特征在于，步骤为：
1)用TAE/Mg2+缓冲液将双足DNA walker与封闭链block退火形成双链DNA walker/block；
2)用TAE/Mg2+缓冲液将DNA-H1、DNA-H2、DNA-H3、DNA-H4退火形成发夹DNA-H1，发夹DNA-H2，发夹DNA-H3，发夹DNA-H4；
3)用三(2-羧乙基)膦)还原巯基修饰的DNA-H1，然后滴至金电极表面孵育10小时，再用6-巯基-1-己醇处理0.5-1h；
4)将步骤1)得到的双链DNA walker/block、不同浓度的APE1酶与步骤2)的发夹DNA-H2混合滴至金电极表面进行反应；
5)再将发夹DNA-H3、发夹DNA-H4混合滴至电极表面进行反应；
6)在室温下将亚甲基蓝滴在电极表面，避光孵育，超纯水冲洗、N2吹干，得到检测APE1酶的超灵敏电极；
7)将步骤6)得到的超灵敏电极置于PBS中，进行方波伏安法信号检测，得出不同浓度的APE1酶对应的SWV信号，并绘制出标准曲线；
8)把待测样品加入步骤6)得到超灵敏电极表面，37℃下孵育，设定与步骤6)一样的检测条件，测得不同待测样品的SWV信号，获得APE1酶的特异性检测结果。
2.根据权利要求1所述的一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法，其特征在于，步骤4)所述的双链walker/block、APE1酶与DNA-H2反应的时间为1h-3h，步骤5)所述的DNA-H3与DNA-H4反应的时间为1h-3h。
3.根据权利要求2所述的一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法，其特征在于，步骤4)所述的双链walker/block、APE1酶与DNA-H2反应的时间为2.5h，DNA-H3与DNA-H4反应的时间为2h。
4.根据权利要求1所述的一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法，其特征在于，所述的巯基修饰的DNA-H1序列为SEQ ID NO.1；所述的双足DNA walker序列为SEQ IDNO.2；所述的封闭链block序列为SEQ ID NO.3；所述的DNA-H2的序列为SEQ ID NO.4；所述的DNA-H3的序列为SEQ ID NO.5；所述的DNA-H4序列为SEQ ID NO.6。
5.根据权利要求1所述的一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法，其特征在于，步骤1)所述的TAE/Mg2+缓冲液组成为40mM Tris，20mM醋酸，1mM EDTA，10mM Mg2+，pH＝8。
6.根据权利要求1所述的一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法，其特征在于，所述的双足DNA walker与封闭链block等摩尔量，所述的DNA-H2、DNA-H3和DNA-H4等摩尔量。
7.根据权利要求1所述的一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法，其特征在于，步骤4)所述的APE1酶范围为0.001-1000U/ml。
8.根据权利要求1所述的一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法，其特征在于，步骤3)所述的6-巯基-1-己醇的用量为1-5mM。
9.根据权利要求1所述的一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法，其特征在于，步骤7)所述的亚甲基蓝的用量为1-5mM。
10.根据权利要求1所述的一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法，其特征在于，步骤8)所述的方波伏安法的参数设置为Init E：-0.5V，Final E:0.1V，Quite Time:2s，其余参数使用默认设置。
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111549103A (zh) * 2020-04-17 2020-08-18 重庆工商大学 一种基于一步触发的分支dna纳米结构的微小rna检测方法
CN112280831A (zh) * 2020-09-07 2021-01-29 江苏大学 一种基于DNA walker的电化学生物传感器的制备方法及其应用
CN113201580A (zh) * 2021-04-28 2021-08-03 青岛科技大学 一种环金属铱配合物敏化NiO阴极光电化学生物传感器的制备方法
CN113219031A (zh) * 2021-03-15 2021-08-06 皖南医学院 Dna双足步行者信号放大器、基于纳米电极的生物传感器及其使用方法和它们的应用
CN113512579A (zh) * 2021-07-29 2021-10-19 山东大学 一种检测尿嘧啶dna糖基化酶的荧光生物传感器及其检测方法和应用
CN113624815A (zh) * 2021-06-30 2021-11-09 江西师范大学 一种基于三维DNA Walker和滕氏蓝的双信号miRNA-21检测方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111549103A (zh) * 2020-04-17 2020-08-18 重庆工商大学 一种基于一步触发的分支dna纳米结构的微小rna检测方法
CN112280831A (zh) * 2020-09-07 2021-01-29 江苏大学 一种基于DNA walker的电化学生物传感器的制备方法及其应用
CN113219031A (zh) * 2021-03-15 2021-08-06 皖南医学院 Dna双足步行者信号放大器、基于纳米电极的生物传感器及其使用方法和它们的应用
CN113201580A (zh) * 2021-04-28 2021-08-03 青岛科技大学 一种环金属铱配合物敏化NiO阴极光电化学生物传感器的制备方法
CN113624815A (zh) * 2021-06-30 2021-11-09 江西师范大学 一种基于三维DNA Walker和滕氏蓝的双信号miRNA-21检测方法
CN113512579A (zh) * 2021-07-29 2021-10-19 山东大学 一种检测尿嘧啶dna糖基化酶的荧光生物传感器及其检测方法和应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JIE JIANG ET AL.: "Electrochemiluminescence biosensor based on a 3D DNA walking nanomachine with a powerful payload capacity", 《SENSORS AND ACTUATORS: B. CHEMICAL》 *
MENG-MEI LV ET AL.: "A bipedal DNA nanowalker fueled by catalytic assembly for imaging of base-excision repairing in living cells", 《CHEMICAL SCIENCE》 *
MENGRU ZHOU ET AL.: "An electrochemical biosensor integrating immunoassay and enzyme activity analysis for accurate detection of active human apurinic/apyrimidinic endonuclease 1", 《BIOSENSORS AND BIOELECTRONICS》 *
XINGCONG WANG ET AL.: "Electrochemical biosensor based on bipedal DNA walker for highly sensitive amplification detection of apurinic/apyrimidinic endonuclease 1" *
王嘉禹 等: "荧光分析法测定人体血液样品中脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)的活性", 《北京大学学报(医学版)》 *

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