CN114609069A - 一种检测白细胞介素2含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医学检测技术领域，特别是涉及一种检测白细胞介素2含量的方法，具体包括如下步骤：S1、预处理：室温下血液自然凝固，离心后收集上清；S2、加样：在标准品孔内分别添加标准品，在样本孔内添加上清样品，并别加入酶标试剂温育60min；S3、样品处理：添加洗涤液，重复洗涤5次；S4、样品检测：加入显色剂A和显色剂B，避光显色，依次测量各孔的吸光度；S5、计算浓度。本发明操作简单，检测速度快，可定量或大批量检测，检测结果的准确性高，重复性良好，稳定性和检测效率高。
Description
技术领域
本发明涉及医学检验技术领域，特别是涉及一种检测白细胞介素2含量的方法。
背景技术
白细胞介素是由多种细胞产生并作用于多种细胞的一类细胞因子，是指一类分子结构和生物学功能已基本明确，具有重要调节作用而统一命名的细胞因子。它和血细胞生长因子同属细胞因子，两者相互协调，相互作用，共同完成造血和免疫调节功能。白细胞介素在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用。
白细胞介素2(IL-2)主要由活化的CD4+细胞产生，通过自身分泌和旁分泌作用于分泌IL-2的细胞本身或邻近的CD4+和CD8+细胞，是机体免疫网络中最重要的调节免疫因子。它能诱导和激活机体多种免疫细胞发挥效应，在机体免疫应答、免疫调节和肿瘤免疫中具有重要作用。因此，IL-2活性的检测已成为评价机体免疫功能的重要指标之一。
目前市面上通常用ELISA检测试剂盒检测IL-2，通过形成抗体-抗原-酶标抗体复合物来检测白细胞介素2的含量。但这些试剂盒检测时稳定性差，使用不便，检测效率低，样本检测的准确度不高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测白细胞介素2含量的方法，以解决上述背景技术中提到的问题。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种检测白细胞介素2含量的方法，包括以下步骤：
S1、预处理：室温下血液自然凝固10～20分钟，离心20min后收集上清；
S2、加样：在酶标板上设置标准品孔和样品孔，在标准品孔内分别添加50μL不同浓度的标准品，在样本孔内添加50μL的上清样品，并向标准品孔和样品孔内分别加入100μL酶标试剂，用封板膜密封酶标板，并在37℃下将酶标板温育60min；
S3、样品处理：温育结束后，揭去酶标板上的封板膜，弃去酶标板上的液体，甩干，并向标准品孔和样品孔内分别添加250μL洗涤液，静置30s后弃去，重复洗涤5次，拍干；
S4、样品检测：向标准品孔和样品孔内分别加入50μL显色剂A，再分别加入50μL显色剂B，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟，再向各孔内分别加入50μL终止液终止反应，450nm波长下依次测量各孔的吸光度；
S5、计算浓度：以标准物的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘出标准曲线，并计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的吸光度值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
优选的，步骤S1中，离心时转速设置为2000～3000r/min。
优选的，步骤S2中，加样时加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
优选的，步骤S3中，所述洗涤液选自用蒸馏水稀释20倍后的浓缩洗涤液。
优选的，步骤S4中，终止反应后的15min内测量各孔的吸光度。
优选的，酶标板上还设置有空白孔，所述空白孔内进行步骤S2-S5。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1.本发明操作简单、检测速度快、可定量检测和大批量检测，能够有效降低生产成本，具有良好的应用前景。
2.本发明提高了检测结果的准确性，重复性良好，稳定性和检测效率高。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例1中检测一的标准曲线示意图；
图2为本发明实施例1中检测二的标准曲线示意图；
图3为本发明实施例1中检测三的标准曲线示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例检测中采用了酶标仪(THERMO SCIENTIFIC MULTISKAN GO)、培养箱(Thermo 3111)和离心机(Thermo Micro 17R)。实施例中采用的试剂包括蒸馏水和白细胞介素2酶联免疫分析试剂盒(含包被板、标准品、酶标试剂、样品稀释液、显色剂、终止液和洗涤液)，采用的仪器包括1.5mL EP管、多道微量移液器、单通道移液器(2μL、20μL、200μL、1mL)、微量移液器吸头(无菌，无致热源)、加样槽、烧杯和量筒。实施例中所用的原料和仪器，除另有说明外，均为市售工业品。
实施例1：
本实施例提供了一种检测白细胞介素2含量的方法，包括以下步骤：
S1、预处理：室温下血液自然凝固10～20分钟，设置离心转速为2000～3000r/min，离心时间设置为20min，离心后收集上清，当保存过程中上清样品出现沉淀时，需要再次离心；
S2、加样：在酶标板上设置标准品孔和样品孔，在标准品孔内分别添加50μL浓度为0.25ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、4ng/mL、8ng/mL的IL2标准品，在样本孔内添加50μL的上清样品，并向标准品孔和样品孔内分别加入100μL酶标试剂，加样时加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，用封板膜密封酶标板，并在37℃下将酶标板温育60min；
在酶标板上设置空白孔作为空白对照组，空白孔内不加样品及酶标试剂，其余各步操作与标准品孔和样品孔一致。
S3、样品处理：温育结束后，揭去酶标板上的封板膜，弃去酶标板上的液体，甩干，并向空白孔、标准品孔和样品孔内分别添加250μL洗涤液，洗涤液选自用蒸馏水稀释20倍后的浓缩洗涤液，每次洗涤静置30s，重复洗涤5次，拍干；
S4、样品检测：向空白孔、标准品孔和样品孔内分别加入50μL显色剂A，再分别加入50μL显色剂B，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟，再向各孔内分别加入50μL终止液终止反应，此时溶液颜色由蓝色立转黄色，终止反应后的15min内，在450nm波长下依次测量各孔的吸光度；
S5、计算浓度：以标准物的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘出标准曲线，并计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的吸光度值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
按上述方法做三次平行检测，记录各孔的OD值并作标准曲线。结果表明IL2在浓度0.25ng/mL～8ng/mL的范围内，OD值与浓度呈现良好的回归关系。由附图1-3三次独立检测的标准曲线及回归系数可知，三次检测的相关系数均大于0.95，符合检测的稳定性要求。
实施例2：
本实施例提供了一种采用上述方法检测血清中白细胞介素2的应用。
取来源于3个志愿者的血清，按照实施例1所述方法进行IL2含量检测，各做6个平行。显色后记录各孔OD值，代入标准曲线计算IL2含量及RSD值。
具体结果如下表所示。
由上表可看出，三个样本IL2含量测定结果显示RSD均在15％以内，说明本发明提供的检测白细胞介素2的方法重复性良好。
选择一份血清样品，分别加入浓度为4ng/mL、2ng/mL、1ng/mL的标准品溶液进行2倍稀释制备加标样品。按照实施例1所述方法进行检测，分别做3个平行检测。显色后记录各孔OD值，代入标准曲线计算IL2含量及回收率。
具体结果如下表所示。
由上表可看出，高中低三个浓度加标的血清样品的回收率均处于70％～110％之间，说明本发明提供的检测白细胞介素2的方法准确度高。
取来源于3个志愿者的血清，由不同的实验人员各自独立操作，按照实施例1所述方法进行检测，分别做6个平行检测。显色后酶标仪读取OD值后，代入标准曲线计算样品浓度，求出平均值并并计算所得结果含量的RSD值。具体结果如下表所示。
由上表可看出，不同人员分别测定样本中IL2的含量，结果表明RSD均在11％以内，甚至能够低于1％，说明本发明提供的检测白细胞介素2的方法区间精密度良好。
综上所述，本发明操作简单，检测速度快，可定量或大批量检测，检测结果的准确性高，重复性良好，稳定性和检测效率高。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种检测白细胞介素2含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、预处理：室温下血液自然凝固10～20分钟，离心20min后收集上清；
S2、加样：在酶标板的标准品孔内分别添加50μL不同浓度的标准品，在酶标板的样本孔内添加50μL的上清样品，并向标准品孔和样品孔内分别加入100μL酶标试剂，用封板膜密封酶标板，并在37℃下将酶标板温育60min；
S3、样品处理：温育结束后，揭去酶标板上的封板膜，弃去酶标板上的液体，甩干，并向标准品孔和样品孔内分别添加250μL洗涤液，静置30s后弃去，重复洗涤5次，拍干；
S4、样品检测：向标准品孔和样品孔内分别加入50μL显色剂A，再分别加入50μL显色剂B，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟，再向各孔内分别加入50μL终止液终止反应，450nm波长下依次测量各孔的吸光度；
S5、计算浓度：以标准物的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘出标准曲线，并计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的吸光度值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
2.根据权利要求1所述的一种检测白细胞介素2含量的方法，其特征在于，步骤S1中，离心时转速设置为2000～3000r/min。
3.根据权利要求1所述的一种检测白细胞介素2含量的方法，其特征在于，步骤S2中，加样时加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
4.根据权利要求1所述的一种检测白细胞介素2含量的方法，其特征在于，步骤S4中，终止反应后的15min内测量各孔的吸光度。
5.根据权利要求1～4中任意一项所述的检测白细胞介素2含量的方法，其特征在于，步骤S3中，所述洗涤液选自用蒸馏水稀释20倍后的浓缩洗涤液。
6.根据权利要求1～4中任意一项所述的检测白细胞介素2含量的方法，其特征在于，所述酶标板上还设置有空白孔，所述空白孔内进行步骤S2-S5。
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