CN114601030A - 一种提高动物免疫力和生产性能的多糖组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种提高动物免疫力和生产性能的多糖组合物及其应用，涉及动物养殖技术领域。本发明提供了一种提高动物免疫力和生产性能的多糖组合物，利用白术多糖和人参多糖协同发挥作用。经实验证实可知，本发明所述多糖组合物能够提高动物的体重和日采食量，提高了动物的生产性能；同时证实其能够显著提高IgG等免疫指标，提高动物的免疫力。

Description

一种提高动物免疫力和生产性能的多糖组合物及其应用

技术领域

本发明涉及动物养殖技术领域，具体涉及一种提高动物免疫力和生产性能的多糖组合物。

背景技术

长期以来，由于动物饲料中广泛使用抗生素、化学合成药物、激素等促生长保健剂，导致动物机体内细菌耐药性增强、耐药菌株增多，畜禽产品品质下降、药物残留严重，直接危害人体健康、破坏生态环境等。因此，无污染、无残留和无公害的安全绿色食品已成为人们追求的目标。

多糖(polysaccharide)是由多个单糖分子缩合、失水而成，是一类分子机构复杂且庞大的糖类物质，广泛分布于动物、植物及微生物中。目前多糖提取的主要原料是植物和微生物，作为一类重要的生物活性物质，多糖在促进生长、抗肿瘤、抗病毒、调节免疫功能等方面显示出诱人的前景。康懋琴等研究了黄芪多糖对雏鸡增重及抗IBV的作用，结果显示，与对照组相比，试验组雏鸡在低日龄配合饮用适量黄芪多糖后有明显的增重效应，能明显提高雏鸡成活率，产生较强的抗IBV能力。可以看出，具有抗氧化和增强免疫力等多种生物学功能的多糖可代替化学合成产品以提高饲料品质。多糖在国外饲料工业中的应用也证明它有多方面有益作用，如替代部分抗生素、改善饲料风味、提高饲料的适口性以及满足畜禽的营养需要，促进机体生长等，因此多糖制品在畜牧业中将会有巨大的市场。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种提高动物免疫力和生产性能的多糖组合物，包括人参多糖和白术多糖，二者协同发挥作用，能够显著提高动物的生产性能和免疫力。

为解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种提高动物免疫力和生产性能的多糖组合物，其特征在于，所述多糖组合物包括重量份为0.8-2.0份人参多糖和0.8-2.0份白术多糖。

优选的，所述多糖组合物包括重量份为0.9-1.5份人参多糖和0.9-1.5份白术多糖。

优选的，所述多糖组合物包括重量份为1.0份人参多糖和1.4份白术多糖。

本发明提供了上述的多糖组合物在提高动物免疫力中的应用。

本发明提供了上述的多糖组合物在提高动物生产性能中的应用。

优选的，所述多糖组合物单独或作为饲料添加剂应用于动物。

本发明还提供了一种动物饲料，所述动物饲料包括上述的多糖组合物。

优选的，所述动物饲料还包括动物基础日粮。

本发明的有益效果：

本发明提供了一种提高动物免疫力和生产性能的多糖组合物，利用白术多糖和人参多糖协同发挥作用。经实验证实可知，本发明所述多糖组合物能够提高动物的体重和日采食量，提高了动物的生产性能；同时证实其能够显著提高IgG等免疫指标，提高动物的免疫力。

具体实施方式

本发明提供了一种提高动物免疫力和生产性能的多糖组合物，其特征在于，所述多糖组合物包括重量份为0.8-2.0份人参多糖和0.8-2.0份白术多糖。

本发明中，所述多糖组合物优选的包括重量份为0.9-1.5份人参多糖和0.9-1.5份白术多糖，更优选的包括重量份为1.0份人参多糖和1.4份白术多糖。本发明中，所述人参多糖和白术多糖优选为市售产品，在本发明的具体实施例中，所述人参多糖和白术多糖均购自西安小草植物科技有限责任公司。本发明中，所述市售人参多糖和白术多糖在使用之前优选的进行多糖含量的测定，所述测定的方法优选包括：标准曲线制作、样品中多糖含量测定。在本发明的具体实施例中，所述市售人参多糖中多糖的含量为0.125mg/mL，所述市售白术多糖中多糖的含量为0.156mg/mL。

本发明还提供了市售多糖的组合物，本发明具体实施例中所述人参多糖、白术多糖、黄芪多糖和参苓白术散中多糖含量的测定方法包括如下步骤：(1)标准曲线制作：准确称取标准品葡萄糖100mg于250mL容量瓶中配成0.4mg/mL的标准溶液，用蒸馏水别配成0、0.08、0.16、0.24、0.32、0.4mg/mL溶液，分别取1mL梯度溶液加入5％苯酚溶液1mL，并迅速加入浓硫酸5mL，静置10min摇匀，30℃放置30min后于490nm测定OD值，以葡萄糖含量为横坐标，OD值为纵坐标，制作得到标准曲线Y＝5.976x+0.16753(r＝0.997449)；(2)样品中多糖含量测定：称取人参提取物、白术提取物、茯苓提取物、黄芪提取物、参苓白术散提取物各0.1g分别加蒸馏水100mL备用，分别取各提取物溶液1mL加1mL水，加2mL5％苯酚，并迅速加入浓硫酸10mL，静置10min摇匀，30℃放置30min后于490nm测定OD值，并代入标准曲线方程计算样品的总糖含量，最终获得的多糖含量结果如表1。

表1多糖含量测定

本发明提供了上述的多糖组合物在提高动物免疫力或提高动物生产性能中的应用。本发明中，所述白术多糖和人参多糖具有增强免疫力，促进造血，降血糖，抗利尿，抗衰老，抗血栓，抗菌，抗炎，抗肿瘤等功能，能够协同发挥提高动物生产性能和提高免疫力的功效。本发明中，所述多糖组合物单独或作为饲料添加剂应用于动物。本发明对所述多糖组合物的添加剂量并没有特殊限定，所述多糖组合物在动物饲料中的添加比例根据兽药典不同动物给药量规定按体重进行添加即可。

本发明还提供了一种动物饲料，所述动物饲料包括上述的多糖组合物。本发明中，所述动物饲料还包括动物基础日粮。本发明对所述多糖组合物与基础日粮的质量比并没有特殊限定，根据动物的体重按常规剂量进行添加即可。本发明对所述动物基础日粮的组成并没有特殊限定，根据所应用的动物选择常规饲喂的基础日粮即可。

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例对本发明进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

下述实施例中，如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、设备等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1

由1份人参多糖和1.4份白术多糖混合得到本发明所述多糖组合物。

实施例2

由0.8份人参多糖和2.0份白术多糖混合得到本发明所述多糖组合物。

实施例3

由0.9份人参多糖和1.5份白术多糖混合得到本发明所述多糖组合物。

实施例4

1.试验动物

随机选取25日龄“杜长大”断奶仔猪90头分成5个试验组，每组3个重复，每个重复6头，要求体质量相近的。

2.饲粮配制及饲养管理

根据断奶仔猪的营养需求和生理特点，并参照NRC(1998)营养需要推荐及饲养标准配制日粮见表2，试验分组日粮见表3。

表2试验基础日粮配方及其营养水平

注：(1)0.5％预混料可为每千克饲粮提供：铜205mg；铁150mg；锌130mg；锰36mg；硒0.5mg；碘0.6mg；氯化胆碱l000 mg；维生素A 8 800IU；维生素D3 1 800 IU；VE 200U；VK3 4mg；VBl 2mg；VB2 8 mg；泛酸钙7mg；烟酸25mg；VB6 30 mg；VBl2 0.030mg；叶酸0.08mg；生物素0.08mg。(2)其中粗蛋白、钙、总磷为实测值，其余为计算值。

表3试验设计及饲粮组成

其中，多糖的添加量是根据仔猪的体重确定的，即黄芪多糖组是每kg的仔猪添加1.33g市售黄芪多糖，人参多糖组是每kg的仔猪添加3.34g的市售人参多糖，白术多糖组是每kg的仔猪添加2.34g的市售白术多糖，实施例1组是每kg的仔猪添加1.67g市售人参多糖和1.17g市售白术多糖。

3.检测指标及方法

3.1生产性能有关指标

试验进行4周，试验开始在饲喂前所有仔猪逐头进行空腹称重，同时计算饲料消耗量，并以每个分组为单位计算、统计试验猪平均日增质量、平均日采食量和饲料与增重比。计算方法如下：

日增重(g)＝总增重/(试验天数×试验猪头数)

日采食量(g)＝总耗料量/(试验天数×试验猪头数)

料重比＝总消耗量/总增重。

3.2血液样品的制备与测定

试验结束当天早晨对仔猪进行空腹前腔静脉采血，每头10mL，每个重复随机抽取2头，每组6头。所采血液4000r/min离心10min，制备血清样品-20℃储存，用于IgG、IgA和IgM以及补体C3、C4的测定。所述测定的方法为ELISA方法，具体操作按ELISA试剂盒说明书进行，所述ELISA试剂盒购于江苏酶免实业有限公司。

3.3统计分析

试验数据以平均数±标准差表示，试验数据采用SPSS 8.0统计软件中的ANOVA程序进行方差分析和邓肯氏(Duncan)多重比较。

4.结果与分析

4.1不同的多糖对断奶仔猪生产性能的影响见表4。

表4不同多糖组对断奶仔猪生长性能的影响

注：同行肩标含有相同字母表示差异不显著(P>0.05)，小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，大写字母不同表示差异极显著(P<0.01)。

由上述结果可以看出，各试验组初始体重没有显著差异(P＞0.05)，试验结束后各多糖组体重显著高于对照组(P＜0.05)，分别提高了3.95％、4.26％、4.58％，实施例1组极显著高于对照组(P＜0.01)提高了6.70％。日增重方面，各多糖组和实施例1组日增重显著高于对照组(P＜0.05)，分别提高了8.35％、7.88％、11.06％和13.70％。日采食量各组均无显著差异(P＞0.05)。料重比各多糖组比对照组显著降低(P＜0.05)，分别降低4.02％、4.52％、3.52％，实施例1组极显著低于对照组(P＜0.01)降低了5.03％。

4.2断奶仔猪血清免疫指标的影响见表5。

表5断奶仔猪血清免疫指标的影响

注：同行肩标含有相同字母表示差异不显著(P>0.05)，小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，大写字母不同表示差异极显著(P<0.01)。

根据上述结果可以看出，免疫球蛋白方面：各多糖组显著提高了IgG含量(P＜0.05)分别提高5.6％、6.29％、5.30％、实施例1组差异极显著(P＜0.01)提高了7.28％。IgA含量各多糖组、实施例1组和对照组差异不显著。各多糖组、实施例1组均极显著提高了Ig M含量，分别提高18.6％、23.25％、18.6％、23.25％。

补体方面：所有试验组均提高了C3的含量，各多糖组差异显著(P＜0.05)分部提高了17.65％、19.61％、21.57％，实施例1组差异极显著(P＜0.01)提高了23.53％。各多糖组、实施例1组均显著提高了C4含量(P＜0.05)分别提高29.41％、35.29％、26.47％、47.06％。

综上可知，黄芪多糖与本发明所述多糖组合物均可以提高断奶仔猪免疫力，且本发明的多糖组合物的效果最佳。

实施例5

1.小鼠生长性能与免疫器官指数测定

1.1材料与方法

1.1.1实验动物分组

将600只昆明小鼠随机分为10组，每组60只。饲养期间小鼠自由摄食、饮水，饲养时间30d。试验小鼠动物分组和给药计量见下表6。

表6动物分组和给药剂量

其中，参苓白术散组饲喂的为市售参苓白术散剂，购自西安小草植物科技有限责任公司。

1.1.2小白鼠采样方法

饲养结束每组随机取30只小鼠不注射环磷酰胺采样，另外30只腹腔注射环磷酰胺24h后，所有小鼠摘眼球采血，颈椎脱臼处死。小鼠摘眼球采血，静置至析出血清后，3000r/min离心10min，收集血清分装于Eppendorf管中，-20℃保存，待测。

1.1.3免疫器官指数计算方法

小鼠颈椎脱臼处死，摘取脾脏和胸腺，除去表面的结缔组织，分析天平称重。计算免疫器官指数：胸腺指数＝胸腺重量(mg)/鼠活重(g)；脾脏指数＝脾脏重量(mg)/小鼠活重(g)。

2.结果与分析

根据上述方法计算得到小鼠生长性能和免疫器官指数结果如下表7所示。

表7小鼠生长性能及免疫器官指数

注：与T10组比较，△代表p<0.05，△△代表p<0.01。

根据上述结果可知，试验结束后各组小鼠脾脏指数均高于空白对照组，本发明实施例1组差异显著。胸腺指数各组也均高于空白对照组，其中参苓白术散组显著高于空白对照组。

2.血液免疫指标测定方法

2.1材料与方法

实验动物饲养分组以及采样方法按1.1.1和1.1.2方法进行。CD4细胞、CD8细胞、免疫球蛋白(IgG、IgA和IgM)、细胞因子(IL-1、IL-2和TNF-α)含量测定均按实施例4所述的ELISA试剂盒说明书进行。

测定的具体操作步骤如下：

(1)标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。

(2)加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μL，然后再加待测样品10μL(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

(3)加酶：每孔加入酶标试剂100μL，空白孔除外。

(4)温育：用封板膜封板后置37℃温育60min。

(5)配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

(6)洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30s后弃去，如此重复5次，拍干。

(7)显色：每孔先加入显色剂A 50μL，再加入显色剂B 50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15min。

(8)终止：每孔加终止液50μL，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

(9)测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)，测定应在加终止液后15min以内进行。

2.2试验结果

根据上述实验方法测定得到的结果表下表8和表9所示。

表8未使用免疫抑制剂各试验组免疫指标含量结果

注：与T10组比较，△代表p<0.05，△△代表p<0.01。

表9使用免疫抑制剂各试验组免疫指标含量结果

注：与T10组比较，△代表p<0.05，△△代表p<0.01。

根据上述结果可知，正常使用多糖添加的小鼠IL-1、TNF-α各组差异不显著，参苓白术散、人参多糖以及本发明实施例1三组显著提高了IL-2含量。同时，各组对小鼠血清免疫球蛋白含量都有提高但差异不显著，进行腹腔注射环磷酰胺后，血清IgG、IgM和IgA含量均与对照组差异不显著。各多糖组均能提高使用免疫抑制剂后的IgG、IgM含量，对环磷酰胺的免疫抑制有拮抗作用。

而且，经过对比可知，本发明所述多糖组合物对环磷酰胺的免疫抑制有拮抗作用，促进球蛋白抗细菌、抗病毒和抗外毒素等多种活性，在一定程度上改善和提高动物机体的体液免疫的效果最佳。综上可知，本发明所述多糖组合物促进动物生长性能，提高机体免疫力的效果最佳。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (8)

1.一种提高动物免疫力和生产性能的多糖组合物，其特征在于，所述多糖组合物包括重量份为0.8-2.0份人参多糖和0.8-2.0份白术多糖。

2.根据权利要求1所述的多糖组合物，其特征在于，所述多糖组合物包括重量份为0.9-1.5份人参多糖和0.9-1.5份白术多糖。

3.根据权利要求1所述的多糖组合物，其特征在于，所述多糖组合物包括重量份为1.0份人参多糖和1.4份白术多糖。

4.权利要求1-3任意一项所述的多糖组合物在提高动物免疫力中的应用。

5.权利要求1-3任意一项所述的多糖组合物在提高动物生产性能中的应用。

6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述多糖组合物单独或作为饲料添加剂应用于动物。

7.一种动物饲料，其特征在于，所述动物饲料包括权利要求1-3任意一项所述的多糖组合物。

8.根据权利要求7所述的动物饲料，其特征在于，所述动物饲料还包括动物基础日粮。