CN114599654B

CN114599654B - 一种acc抑制剂及其用途

Info

Publication number: CN114599654B
Application number: CN202080074573.2A
Authority: CN
Inventors: 张军波; 朱曙灏; 齐晓昕
Original assignee: Nanjing Ruijie Pharma Co ltd
Current assignee: Nanjing Ruijie Pharma Co ltd
Priority date: 2019-11-07
Filing date: 2020-11-06
Publication date: 2023-07-04
Anticipated expiration: 2040-11-06
Also published as: WO2021088980A1; EP4056574A4; CN114599654A; EP4056574A1; CN112778325A; US20230002405A1

Abstract

本发明提供了一种适用作乙酰基CoA羧化酶ACC抑制剂的化合物，具体而言是噻吩并吡啶衍生物，以及该化合物在制备用于治疗代谢病、癌症或其他增生性病症、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的药物中的用途。

Description

一种ACC抑制剂及其用途

技术领域

本发明属于有机化学领域，具体涉及一种ACC抑制剂及其用途。

背景技术

肥胖症为庞大群体的健康危机。由每个成人所损失的质量调整生命年(quality-adjusted life-years)测量的肥胖症的健康负担已超过吸烟，从而成为最严重的、可预防的死因。在美国，约34％的成人患有肥胖症，高达从1999年的31％和1960年至1980年的约15％。肥胖症增加所有年龄和所有种族的男性和女性因所有原因所致的死亡率。肥胖症还导致社会贬低和歧视，这显著降低生活品质。因肥胖症引起的慢性疾病使美国经济每年在体重相关的医疗帐单方面花费超过1500亿美元。此外，约一半肥胖群体和25％一般群体患有代谢综合征，即，与腹部肥胖症、高血压、血浆甘油三酯增加、HDL胆固醇降低和胰岛素抵抗相关的病症，其增加2型糖尿病(T2DM)、中风和冠状动脉性心脏病的风险。(Harwood，Expert Opin.Ther.Targets 9：267，2005)。

饮食和运动即使当结合当前药物疗法使用时，也不会提供长期健康效益所需的可持续性减重。当前，在美国仅批准使用少数抗肥胖症药物，脂肪吸收抑制剂奥利司他(orlistat)、5-HT2C拮抗剂罗卡西林(lorcaserin)和组合疗法苯丁胺/托吡酯(phentermine/topiramate)。令人遗憾的是，较差功效和不良胃肠副作用限制奥利司他的使用。手术可能有效，但限于具有极高身体质量指数(BMI)的患者，并且较低手术处理量使此方式的影响限于每年约20万患者。大多数在临床开发中的肥胖症药物经设计以在CNS中经中枢作用减少热量摄取(例如降食欲剂和饱腹感药剂)。然而，FDA已采取对CNS活性剂的反对立场，归因于其不太大的功效和观察到的/潜在的副作用特征。

持续并且渐增的肥胖症问题和当前缺乏治疗其的安全并且有效的药物突出强调了对用以治疗此病症和其根本原因的新药物的迫切需要。

另外，非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一种无声疾病，其被定义为由酒精因素(饮酒量小于20克/天)外的原因造成的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征。NAFLD的范围从良性的单纯性脂肪肝(SFL)到非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及其相关肝硬化。具体而言，正常肝脏中多于5％的肝细胞的细胞质内出现脂滴(lipid droplets，LD)积累被定义为肝脏脂肪变性(hepatic steatosis)，即SFL；随着肝脏脂肪变性的进一步发展，肝脏组织会出现小叶炎症和细胞的损伤等，这时就会形成脂肪性肝炎，即NASH；当脂肪性肝炎继续加重，星状细胞被激活，肝脏中出现胶原纤维沉积时，则形成肝脏纤维化，继续恶化就会导致肝硬化。坏死/炎性过程会促使纤维化在肝脏中的逐渐累积，最终除肝硬化外还会导致肝功能衰竭、肝细胞癌(HCC)、肝移植和肝死亡。从流行病学和病理生理学两种观点来看，NAFLD，尤其NASH与肥胖症、胰岛素抵抗、代谢综合征和2型糖尿病等代谢紊乱密切相关。在过去的几十年中，随着肥胖及其相关代谢综合征全球化的流行趋势，NAFLD，尤其NASH的盛行率急剧提高，尤其在欧美等发达国家和我国富裕地区NASH已成为慢性肝病的重要病因，并且NASH已变成美国肝脏移植的首要原因。NASH是单纯脂肪肝向肝纤维化及肝硬化发展的重要阶段，以肝细胞脂肪变性、炎细胞浸润和肝小叶纤维化为主要特征。NASH被认为是全球范围内日益严重的公共健康问题；然而，目前全球对于NASH的治疗方案仅限于改变日常的生活方式，尚无用于NASH的最佳诊断解决方案和批准的治疗方法。发现和挖掘针对NAFLD的有效治疗药物是防治NAFLD，尤其NASH的有效方法之一，也是一个亟待解决的科学难题。

另一个持续存在的问题是缺乏对广谱真菌病原体具有活性的抗真菌药物。通常，给定的抗真菌药物对一种真菌物种具有活性，但对其他(甚至密切相关的)物种如白色念珠菌(Candida albicans)、克鲁斯念珠菌(Candida krusei)和近平滑念珠菌(Candidaparapsilosis)缺乏活性。

吉利德公司的化合物可有效作为乙酰基-CoA羧化酶(ACC)的抑制剂，适用于治疗多种与调控脂肪酸的产生或氧化相关的疾病、病症或病状。在专利WO2019015583A1中公布了通式化合物：

本发明的化合物具有与上述结构相同的母核结构，在吡啶环上N原子的末端取代上有所不同，得到的化合物对ACC1和ACC2均能产生良好的抑制效果，对HepG2细胞抑制效果好，且具有较佳的药代动力学性质。本发明化合物和其药学上可接受的组合物可用于治疗多种与脂肪酸产生或氧化的调节相关的疾病、障碍或病症。尤其是在NAFLD治疗方面，本发明化合物和其药学上可接受的组合物对从SFL到NASH及其相关肝硬化的多个NAFLD阶段，尤其NASH有着广阔的治疗前景。

发明内容

一种式c化合物

或其药学上可接受的盐，其中：

R₁为H，C_1-6烷基，C_1-6卤代烷基，C_1-6烷氧基；

R₂为H，C_1-6烷基，C_1-6卤代烷基，C_1-6烷氧基；

R₃为H，C_1-6烷基，C_1-6卤代烷基，C_1-6烷氧基，或者R₁和R₃与它们键合的碳原子一起形成3至6元环烷基；

R₄为H，C_1-6烷基，C_1-6卤代烷基，C_1-6烷氧基，或者R₄和R₂与它们键合的碳原子一起形成3至6元环烷基。

在一些实施方案中，R₂和R₄分别为H，R₁和R₃形成四元环。

在一些实施方案中，R₁和R₃分别为H，R₂和R₄形成四元环。

在一些实施方案中，化合物为：

(R)-3-((1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧杂-1，4-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(2H)-基)甲基)环丁烷-1-羧酸；

(S)-3-((1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧杂-1，4-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(2H)-基)甲基)环丁烷-1-羧酸；

(R)-2-(3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧代-1，4-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(2H)-基)环丁基)乙酸；

(S)-2-(3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧代-1，4-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(2H)-基)环丁基)乙酸；

2-((1R，3r)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧代-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)环丁基)乙酸；

2-((1S，3s)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧代-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)环丁基)乙酸。

在一些实施方案中，式I-3加入式e或f化合物进行反应，得到式I-4化合物；或式II-3加入式e或f化合物进行反应，得到式II-4化合物；或式I-3-1加入式e或f化合物进行反应，得到式I-4-1化合物；或式I-3-2加入式e或f化合物进行反应，得到式I-4-2化合物。优选地，式e化合物为2-(三异丙基甲硅烷基)恶唑，2-(三丁基甲硅烷基)恶唑；式f化合物为2-(三异丙基甲锡烷基)恶唑，2-(三丁基甲锡烷基)恶唑。化合物具体结构见下文中所述。

可由式c化合物制备得到式c′化合物。

在一些实施方案中，化合物为：

(R)-3-((1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧杂-1，4-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(2H)-基)甲基)环丁烷-1-羧酰胺；

(S)-3-((1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧杂-1，4-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(2H)-基)甲基)环丁烷-1-羧酰胺；

(R)-2-(3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧代-1，4-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(2H)-基)环丁基)乙酰胺；

(S)-2-(3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧代-1，4-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(2H)-基)环丁基)乙酰胺。

上述化合物可制备用于治疗代谢病的药物中的用途。其中代谢病为肥胖症，血脂异常或高血脂症。

上述化合物可制备用于治疗癌症或其他增生性病症的药物中的用途。

上述化合物可制备用于治疗从SFL到NASH及其相关肝硬化的多个NAFLD阶段，尤其非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的药物中的用途。

如本文所用的术语“药学上可接受的盐”是指在合理医学判断的范围内适用于与人类和低等动物的组织接触而无过度的毒性、刺激性、过敏反应和其类似反应，并且与合理效益/风险比相匹配的那些盐。药学上可接受的盐在本领域中为熟知的。举例而言，S.M.Berge等人于药物制剂科学杂(J.Pharmaceutical Sciences)，1977，66，1-19中详细描述药学上可接受的盐，所述文献以引用的方式并入本文中。本发明化合物的药学上可接受的盐包括来源于适合无机和有机酸和碱的盐。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例为由例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸的无机酸或由例如乙酸、草酸、顺丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、丁二酸或丙二酸的有机酸形成或通过使用本领域中所用的其他方法(例如离子交换)而形成的氨基的盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、丁二酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。

来源于适当碱的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐和N⁺(C_1-4烷基)₄盐。代表性碱金属或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等。适当时，其他药学上可接受的盐包括无毒铵、季铵，和使用例如卤素离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根的抗衡离子形成的胺阳离子。

除非另有说明，否则本文所描绘的结构还欲包括所述结构的所有异构体(例如对映异构体、非对映异构体和几何(或构型)异构体)形式；例如各不对称中心的R和S构型，Z和E双键异构体，和Z和E构型异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构体、非对映异构体和几何(或构型)异构体混合物在本发明的范围内。除非另有说明，否则本发明化合物的所有互变异构型式均在本发明的范围内。另外，除非另有说明，否则本文所描绘的结构还欲包括不同之处仅为存在一个或多个同位素富集原子的化合物。举例而言，具有包括以氘或氚替代氢或以¹³C或¹⁴C富集的碳替代碳的本发明结构的化合物在本发明的范围内。所述化合物适用作例如分析工具、生物分析中的探针或本发明的治疗剂。

用途、制剂和给药和药学上可接受的组合物

根据另一实施方案，本发明提供一种组合物，其包含本发明化合物或其药学上可接受的盐、酯或酯盐和药学上可接受的载体、辅料或媒介物。本发明组合物中化合物的量为有效地以可测量程度抑制生物样品中或患者中的ACC的量。在某些实施方案中，本发明组合物中化合物的量为有效地以可测量程度抑制生物样品中或患者中的ACC的量。在某些实施方案中，本发明组合物经配制以供给药于需要所述组合物的患者。在一些实施方案中，本发明组合物经配制以供经口给药于患者。

如本文所用的术语“患者”是指动物，优选为哺乳动物，并且最优选为人类。

术语“药学上可接受的载体、辅料或媒介物”是指不破坏与其一起配制的化合物的药理活性的无毒载体、辅料或媒介物。可用于本发明组合物中的药学上可接受的载体、辅料或媒介物包括(但不限于)离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；血清蛋白，例如人血清白蛋白；缓冲物质，例如磷酸盐；甘氨酸；山梨酸；山梨酸钾；饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物；水；盐或电解质，例如硫酸鱼精蛋白(protamine sulfate)、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐；胶体二氧化硅；三硅酸镁；聚乙烯吡咯烷酮；基于纤维素的物质；聚乙二醇；羧甲基纤维素钠；聚丙烯酸酯；蜡；聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物；聚乙二醇和羊毛脂。

“药学上可接受的衍生物”是指本发明化合物的任何无毒盐、酯、酯盐或其他衍生物，其在给药于接受者时，能够直接或间接提供本发明化合物或其抑制的活性代谢物或残余物。

如本文所用的术语“其抑制的活性代谢物或残余物”是指其代谢物或残余物也为ACC抑制剂。

本发明组合物可经口、肠胃外、由吸入喷雾、局部、经直肠、经鼻、含服、经阴道或经由植入式贮器给药。如本文所用的术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。组合物优选经口、腹膜内或静脉内给药。本发明组合物的无菌可注射形式可为水性或油性悬浮液。这些悬浮液可根据本领域中已知的技术使用适合分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制。无菌可注射制剂也可为于肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如于1，3-丁二醇中的溶液。可采用的可接受媒介物和溶剂有水、林格氏溶液(Ringer′s solution)和等张氯化钠溶液。另外，无菌不挥发性油常规用作溶剂或悬浮介质。

出于此目的，可以采用任何温和不挥发性油，包括合成的单酸甘油酯或二酸甘油酯。油酸的脂肪酸和其甘油酯衍生物如同天然药学上可接受的油(如橄榄油或蓖麻油，尤其呈其聚氧乙基化形式)那样适用于制备可注射剂。这些油溶液或悬浮液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，如羧甲基纤维素或常用于配制药学上可接受的剂型(包括乳液和悬浮液)的类似分散剂。出于配制的目的，还可以使用其他常用表面活性剂(如吐温(Tweens)、司盘(Spans))和其他常用于制造药学上可接受的固体、液体或其他剂型的乳化剂或生物利用度增强剂。

本发明的药学上可接受的组合物可以按任何经口可接受剂型经口给药，所述剂型包括(但不限于)胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在用于经口使用的片剂的情况下，常用载体包括乳糖和玉米淀粉。还通常添加如硬脂酸镁的润滑剂。对于以胶囊形式经口投药，有用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当为了经口用途需要水性悬浮液时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。必要时，也可以添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。

或者，本发明的药学上可接受的组合物可以供直肠给药的栓剂形式给药。这些栓剂可通过将药剂与适合的非刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温为固体而在直肠温度下为液体并且因此将在直肠中熔化以释放药物。所述物质包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。

本发明的药学上可接受的组合物也可局部给药，尤其当治疗目标包括通过局部施用而容易到达的区域或器官(包括眼、皮肤或下肠道的疾病)时。对于这些区域或器官中的每一个，易制备适合的局部制剂。

对下肠道的局部施用可以直肠栓剂制剂(见上文)或以适合灌肠剂制剂实现。还可使用局部经皮贴片。

对于局部施用，所提供的药学上可接受的组合物可配制于含有悬浮或溶解于一种或多种载体中的活性组分的适合软膏中。用于局部给药本发明化合物的载体包括(但不限于)矿物油、液体矿脂、白矿脂、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，所提供的药学上可接受的组合物可配制于含有悬浮或溶解于一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分的适合洗剂或乳膏中。适合载体包括(但不限于)矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨酸酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。

对于眼部使用，所提供的药学上可接受的组合物可在存在或不存在例如氯苄烷铵(benzylalkonium chloride)的防腐剂的情况下配制成于pH值经调整的等张无菌盐水中的微粉化尺寸化悬浮液，或优选配制成于pH值经调整的等张无菌盐水中的溶液。或者，对于眼部使用，药学上可接受的组合物可配制于例如矿脂的软膏中。

本发明的药学上可接受的组合物也可通过鼻用气雾剂或吸入给药。所述组合物根据药物配制技术中熟知的技术来制备，并且可采用苄醇或其他适合防腐剂、用以增强生物利用度的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其他常规增溶剂或分散剂而制备成于盐水中的溶液。

本发明的药学上可接受的组合物最优选经配制以供经口给药。所述制剂可与食物或不与食物一起给药。在一些实施方案中，本发明的药学上可接受的组合物不与食物一起给药。在其他实施方案中，本发明的药学上可接受的组合物与食物一起给药。

可与载体物质组合产生呈单一剂型的组合物的本发明化合物的量将视所治疗的主体、特定给药模式而变化。所提供的组合物优选应经配制以使得可向接受这些组合物的患者给药0.01-100毫克/千克体重/日的剂量的抑制剂。

还应了解，针对任何特定患者的特定剂量和治疗方案将视多种因素而定，包括所用特定化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、排泄速率、药物组合和治疗医师的判断以及所治疗的特定疾病的严重性。组合物中本发明化合物的量还将视组合物中的特定化合物而定。

化合物及其组合物的用途

医药用途

乙酰基-CoA羧化酶(ACC)催化乙酰基-CoA的ATP依赖性羧化以形成丙二酰基-CoA。以两个半反应，即生物素羧化酶(BC)反应和羧基转移酶(CT)反应进行的此反应为脂肪酸(FA)生物合成中的第一关键步骤并且为该通路的限速反应。ACC催化反应的产物丙二酰基-CoA除了作为FA生物合成中的底物的作用以外，还在通过催化粒线体FA氧化中的第一关键步骤的酶-肉碱棕榈酰基转移酶I(CPT-I)的别位抑制而控制粒线体FA吸收方面起重要调控作用。因此，丙二酰基-CoA为对例如在运动期间动物的饮食变化和营养需求改变作出反应而控制FA产生和利用的关键代谢信号，并且因此在控制肝脏和骨胳肌中的碳水化合物与脂肪利用之间的转换方面起关键作用(哈伍德(Harwood)，2005)。

在哺乳动物中，ACC以两种组织特异性同工酶形式存在，即存在于脂质生成组织(肝脏、脂肪)中的ACC1和存在于氧化组织(肝脏、心脏、骨胳肌)中的ACC2。ACC1和ACC2是由独立基因编码，展现不同细胞分布，并且除了将ACC2指向粒线体膜的ACC2的N端延长序列(extension)以外共享75％的总体氨基酸序列一致性。缺乏此靶向序列的ACC1定位至细胞质。在合成脂肪酸的能力有限的心脏和骨胳肌中，由ACC2形成的丙二酰基-CoA发挥调控FA氧化的功能。在肝脏中，在细胞质中通过ACC1的作用而形成的丙二酰基-CoA用于FA合成和伸长，促使甘油三酯形成和VLDL产生，而在粒线体表面上由ACC2形成的丙二酰基-CoA用以调控FA氧化(童(Tong)和哈伍德(Harwood)，细胞生物化学杂志(J.Cellular Biochem.)99：1476，2006)。丙二酰基-CoA的此区室化来自于合成接近性(synthesis proximity)(阿布-艾海格(Abu-Elheiga)等人，PNAS(USA)102：12011，2005)与丙二酰基-CoA去羧酶的快速作用(陈(Cheng)等人，药物化学杂志(J.Med.Chem.)49：1517，2006)的组合。

对ACC1和ACC2的酶活性的同时抑制提供抑制脂质生成组织(例如肝脏和脂肪)中重新产生FA的能力，同时刺激氧化组织(例如肝脏和骨胳肌)中的FA氧化，并且因此提供以协同方式有利影响与肥胖症、糖尿病、胰岛素抵抗和代谢综合症相关的许多心血管危险因素的具有吸引力的模式。

多方证据强有力地支持以下概念：直接抑制作为重要治疗目标的ACC活性来治疗肥胖症、糖尿病、胰岛素抵抗和代谢综合症。

阿布-艾海格(Abu-Elheiga)等人(美国科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)100：10207-10212，2003)证明，ACC2基因敲除小鼠展现骨胳肌和心肌丙二酰基-CoA减少、肌肉FA氧化增加、肝脏脂肪减少、总体脂肪减少、骨胳肌解偶联蛋白3(UCP3)升高(其指示能量消耗增加)、体重下降、血浆游离FA减少、血糖减少和组织糖原减少，并且免于患上饮食诱发的糖尿病和肥胖症。

萨维奇(Savage)等人(临床研究杂志(J.Clin.Invest.)116：817，2006)使用ACC1和ACC2反义寡核苷酸来证明，分离的大鼠肝细胞中和喂食高脂肪膳食的大鼠中的FA氧化受到刺激、和肝脏甘油三酯降低、胰岛素敏感性改善、肝脏葡萄糖产生减少和高脂肪喂养大鼠中的UCP1mRNA增加。ACC1与ACC2表达均受抑制的情况与ACC1或ACC2表达单独受抑制的情况相比，这些效应较高。

哈伍德(Harwood)等人(生物化学杂志(J.Biol.Chem.)278：37099，2003)证明，同等抑制从大鼠、小鼠、猴和人类分离的ACC1和ACC2(IC₅₀＝约60nM)而不抑制丙酮酸羧化酶或丙酰基-CoA羧化酶的同工酶非选择性ACC抑制剂CP-640186减少Hep-G2细胞中的FA合成、甘油三酯合成和分泌而不影响胆固醇合成，并且减少apoB分泌而不影响apoA1分泌。CP-640186还刺激C2C12细胞中和大鼠肌肉薄片中的FA氧化，并且增加Hep-G2细胞中的CPT-I活性。在实验动物中，CP-640186急剧降低喂食状态与禁食状态下脂质生成组织与氧化组织中的丙二酰基-CoA浓度，减少肝脏和脂肪组织FA合成，并且增加全身FA氧化。在经CP-640186处理三周的蔗糖喂养大鼠中，CP-640186以时间和剂量依赖性方式减少肝脏、肌肉和脂肪甘油三酯，因选择性脂肪减少使体重下降而不减少瘦体质，降低瘦素(leptin)含量，减轻由高蔗糖膳食产生的高胰岛素血症而不改变血糖含量，并且改善胰岛素敏感性。

萨哈(Saha)等人(糖尿病杂志(Diabetes)55：A288，2006)证明，由CP-640186在化合物给药30分钟内刺激胰岛素抵抗大鼠肌肉组织中的胰岛素敏感性，并且富勒(Furler)等人(糖尿病杂志(Diabetes)55：A333，2006)的研究使用双示踪剂分析显示用CP-640186急性(46分钟)处理大鼠刺激FA清除而不减少葡萄糖清除。

ACC在脂肪酸合成中是限速酶，且其产物丙二酰基CoA充当脂肪酸氧化的重要调节剂。因此，ACC抑制剂既减少从头脂质合成又促进现有脂肪的氧化。对脂质代谢的这一双重作用提高ACC抑制剂与其他机制相比将实质上更有效地减少过量脂肪的可能性。此外，ACC抑制剂将影响胰岛素敏感性、血浆和组织甘油三酯以及空腹血浆葡萄糖，因此全身和组织特异性脂肪质量减少且不需要多重用药(poly-pharmacy)。

ACC抑制剂仅需要在外周隔室中接近肝脏和肌肉。避开CNS将解决与靶向CNS受体的晚期肥胖症程序相关的许多副作用。还预期ACC抑制剂会具有优于现有代谢疾病药剂的安全性特征。举例来说，ACC抑制剂将不大可能促成如在胰岛素模拟物、胰岛素促分泌物和胰岛素降解抑制剂下通常可见的危及生命的低血糖。此外，由于ACC抑制剂将减少全身脂肪质量，故其将优于会增加全身脂肪质量作为其作用机制一部分的格列酮(glitazone)。

引起显著体重减轻且改进其他代谢终点的外周起作用的药剂充分符合美国FDA批准新肥胖症药剂的要求。然而，如果对肥胖症的批准在5-7年内持续具挑战性，那么ACC抑制剂可被批准用于家族性联合高脂质血症和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。目前尚无市售的ACC抑制剂，因此同工酶非选择性ACC抑制剂将代表用于治疗肥胖症和代谢综合症的首创一类新药(first-in-class)疗法。

可在体外或体内分析在本发明中用作ACC的抑制剂或者肥胖症或代谢综合症治疗的化合物的活性。可使用肥胖症或代谢综合症的动物模型(例如啮齿动物或灵长类动物模型)进行本发明化合物功效的体内评估。可使用例如从表达ACC的组织中分离的细胞系进行基于细胞的分析。另外，可进行基于生物化学或机制的分析，例如使用经纯化蛋白的转录分析、RNA印迹(Northern blot)、RT-PCR等。体外分析包括测定经本发明化合物处理的细胞的细胞形态、蛋白质表达、和/或细胞毒性、酶抑制活性、和/或后续功能后果的分析。替代性体外分析定量一种抑制剂结合于细胞内的蛋白或核酸分子的能力。抑制剂结合可通过在结合之前放射性标记所述抑制剂、分离抑制剂/靶标分子复合物以及测定所结合的放射性标记的量来测量。或者，抑制剂结合可以通过进行竞争实验来测定，其中将新抑制剂与结合到已知放射性配体的经纯化蛋白或核酸一起孵育。用于分析在本发明中用作ACC抑制剂的化合物的详细条件阐述于以下实施例中。上述分析为示例性的且并不意欲限制本发明的范围。熟练的从业者可了解，可对常规分析进行修改以开发会获得相同结果的等效分析。

本文中所用的术语“治疗”是指逆转、减轻如本文中所述的疾病或病症或其一或多种症状，延迟其发作，或抑制其进展。在一些实施方案中，治疗可在已出现一或多种症状后给药。在其他实施方案中，治疗可在不存在症状下给药。举例来说，可以在症状发作之前向易感个体(例如根据症状病史和/或根据遗传学或其他易感性因素)给药治疗。还可以在症状已消退之后继续进行治疗，例如以预防或延迟其复发。

根据本发明方法的化合物和组合物可使用有效治疗代谢障碍或病症、癌症、细菌感染、真菌感染、寄生虫感染(例如疟疾)、自身免疫病症、神经变性或神经病症、精神分裂症、骨相关病症、肝病或心脏病症或者减轻其严重度的任何量和任何给药途径给药。

在一些实施方案中，根据本发明方法的化合物和组合物可使用有效治疗与ACC相关的疾病或减轻其严重度的任何量和任何给药途径给药((Tong等人，“Acetyl-coenzyme Acarboxylase：crucial metabolic enzyme and attractive target for drugdiscovery”Cell and Molecular Life Sciences(2005)62，1784-1803)。

在一些实施方案中，根据本发明方法的化合物和组合物可使用有效治疗代谢障碍、疾病或病症或减轻其严重度的任何量和任何给药途径给药。在一些实施方案中，代谢障碍为肥胖症；代谢综合症；糖尿病或糖尿病相关的病症，包括1型糖尿病(胰岛素依赖性糖尿病，IDDM)和2型糖尿病(非胰岛素依赖性糖尿病，NIDDM)；葡萄糖耐量受损；胰岛素抵抗；高血糖症；糖尿病并发症，包括但不限于动脉粥样硬化、冠心病、中风、外周血管疾病、肾病变、高血压、神经病变和肾病变；肥胖症并存病，包括但不限于代谢综合症、血脂异常、高血压、胰岛素抵抗、糖尿病(包括1型和2型糖尿病)、冠状动脉疾病和心脏衰竭。在一些实施方案中，代谢障碍、疾病或病症为非酒精性脂肪肝病或肝脏胰岛素抵抗。

在一些实施方案中，本发明提供一种治疗本文中描述的代谢障碍、疾病或病症的方法，其包含给药本发明化合物以及一或多种药剂。可以与本发明化合物组合使用的适合的药剂包括抗肥胖症药剂(包括食欲抑制剂)、抗糖尿病药剂、抗高血糖药剂、降脂剂和抗高血压药剂。

可与本发明化合物结合使用的适合的降脂剂包括但不限于胆酸螯合剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、HMG-CoA合成酶抑制剂、胆固醇吸收抑制剂、酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶(ACAT)抑制剂、CETP抑制剂、角鲨烯合成酶抑制剂、PPAR-α激动剂、FXR受体调节剂、LXR受体调节剂、脂蛋白合成抑制剂、肾素-血管紧张素系统抑制剂、PPAR-δ部分激动剂、胆酸再吸收抑制剂、PPAR-γ激动剂、甘油三酯合成抑制剂、微粒体甘油三酯转运抑制剂、转录调节剂、角鲨烯环氧酶抑制剂、低密度脂蛋白受体诱导剂、血小板凝集抑制剂、5-LO或FLAP抑制剂、烟酸和烟酸结合的铬。

可与本发明化合物结合使用的适合的抗高血压药剂包括但不限于利尿剂、β-肾上腺素阻断剂、钙离子通道阻断剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、中性内肽酶抑制剂、内皮素拮抗剂、血管扩张剂、血管紧张素II受体拮抗剂、α/β肾上腺素阻断剂、α1阻断剂、α2激动剂、醛固酮抑制剂、盐皮质激素受体抑制剂、肾素抑制剂和血管生成素2结合剂。

可与本发明化合物结合使用的适合的抗糖尿病药剂包括但不限于其他乙酰-CoA羧化酶(ACC)抑制剂、DGAT-1抑制剂、AZD7687、LCQ908、DGAT-2抑制剂、单酰基甘油O-酰基转移酶抑制剂、PDE-10抑制剂、AMPK活化剂、磺酰脲(例如乙酰苯磺酰环己脲(acetohexamide)、氯磺丙脲(chlorpropamide)、氢磺丙脲(diabinese)、格列本脲(glibenclamide)、格列吡嗪(glipizide)、格列苯脲(glyburide)、格列美脲(blimipiride)、格列齐特(gliclazide)、格列太特(glipentide)、格列喹酮(gliquidone)、格列索脲(glisolamide)、甲磺吖庚脲(tolazamide)、甲苯磺丁脲(tolbutamide))、美格替耐(meglitinides)、α-淀粉酶抑制剂(例如淀粉酶抑肽(tendamistat)、萃他丁(treastatin)、AL-3688)、α-葡糖苷水解酶抑制剂(例如阿卡波糖(acarbose))、α-葡糖苷酶抑制剂(例如脂解素(adiposine)、卡格列波糖(camiglibose)、乙格列酯(emiglitate)、米格列醇(miglitol)、伏格列波糖(voglibose)、普拉米星-Q(pradimicin-Q)、萨保菌素(sarbostatin))、PPAR-γ激动剂(例如巴拉列酮(balaglitazone)、环格列酮(ciglitazone)、达格列酮(darglitazone)、恩格列酮(englitazone)、伊萨列酮(isaglitazone)、吡格列酮(pioglitazone)、罗格列酮(rosiglitazone)、曲格列酮(troglitazone))、PPAR-α/γ激动剂(例如CLX-0940、GW-1536、GW-1929、GW-2433、KRP-297、L-796449、LR-90、MK-0767、SB-219994)、双胍(例如二甲双胍(metformin)、丁双胍(buformin))、GLP-1调节剂(肠促胰岛素类似物(exendin)-3、肠促胰岛素类似物-4)、利拉鲁肽(liraglutide)、阿必鲁肽(albiglutide)、艾塞那肽(exenatide，Byetta)、他司鲁肽(taspoglutide)、利司那肽(lixisenatide)、度拉糖肽(dulaglutide)、司美鲁肽(semaglutide)、N，N-9924、TTP-054、PTP-1B抑制剂(特罗杜明(trodusquemine)、西替欧醛萃取物(hyrtiosal extract))、SIRT-1抑制剂(例如白藜芦醇(resveratrol)、GSK2245840、GSK184072)、DPP-IV抑制剂(例如西他列汀(sitagliptin)、维格列汀(vildagliptin)、阿格列汀(alogliptin)、多格列汀(dutogliptin)、利拉利汀(linagliptin)、沙格列汀(saxagliptin))、胰岛素促分泌物、脂肪酸氧化抑制剂、A2拮抗剂、JNK抑制剂、葡糖激酶活化剂(例如TTP-399、TTP-355、TTP-547、AZD1656、ARRY403、MK-0599、TAK-329、AZD5658、GKM-001)、胰岛素、胰岛素模拟物、糖原磷酸化酶抑制剂(例如GSK1362885)、VPAC2受体激动剂、SGLT2抑制剂(达格列净(dapagliflozin)、卡格列净(canagliflozin)、BI-10733、托格列净(tofogliflozin)、ASP-1941、THR₁474、TS-071、、LX4211)、胰高血糖素受体调节剂、GPR119调节剂(例如MBX-2982、GSK1292263、APD597、PSN821)、FGF21衍生物、TGR5(GPBAR1)受体激动剂(例如INT777)、GPR40激动剂(例如TAK-875)、GPR120激动剂、烟酸受体(HM74A)活化剂、SGLT1抑制剂(例如GSK1614235)、肉碱棕榈酰基转移酶抑制剂、果糖1，6-二磷酸酶抑制剂、醛糖还原酶抑制剂、盐皮质激素受体抑制剂、TORC2抑制剂、CCR2抑制剂、CCR5抑制剂、PKC(例如PKC-α、PKC-β、PKC-γ)抑制剂、脂肪酸合成酶抑制剂、丝氨酸棕榈酰基转移酶抑制剂、GPR81调节剂、GPR39调节剂、GPR43调节剂、GPR41调节剂、GPR105调节剂、Kv1.3抑制剂、视黄醇结合蛋白4抑制剂、糖皮质激素受体调节剂、生长抑素受体(例如SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR5)抑制剂、PDHK2抑制剂、PDHK4抑制剂、MAP4K4抑制剂、IL1-β调节剂和RXR-α调节剂。

适合的抗肥胖症药剂包括但不限于11-β-羟基类固醇去氢酶1抑制剂、硬脂酰基CoA去饱和酶(SCD-1)抑制剂、MCR-4激动剂、CCK-A激动剂、单胺再摄取抑制剂(例如西布曲明(sibutramine))、拟交感神经药剂、β-3-肾上腺素受体激动剂、多巴胺受体激动剂(例如溴麦角环肽(bromocriptine))、黑色素细胞刺激激素和其类似物、5-HT_2C激动剂(例如氯卡色林(lorcaserin)/百维克(Belviq))、黑色素浓集激素拮抗剂、瘦素、瘦素类似物、瘦素激动剂、甘丙胺素拮抗剂、脂肪酶抑制剂(例如四氢利普司他汀(四氢lipstatin)/奥利司他)、厌食剂(例如铃蟾素(bombesin)激动剂)、NPY拮抗剂(例如韦利贝特(velneperit)、PYY_3-36(和其类似物)、BRS3调节剂、阿片样受体混合拮抗剂、拟甲状腺素药剂、脱氢表雄酮、糖皮质激素激动剂或拮抗剂、食欲素拮抗剂、GLP-1激动剂、睫状神经营养因子(例如阿索开(Axokine))、人类鼠灰色相关蛋白质(AGRP)抑制剂、H3拮抗剂或反向激动剂、神经介肽U激动剂、MTP/ApoB抑制剂(例如消化道选择性MTP抑制剂，如迪罗哌德(dirlotapide)、JTT130、优斯他派(Usistapide)、SLX4090)、MetAp2抑制剂(例如ZGN-433)；在胰高血糖素、GIP和GLP1受体中的两者或两者以上处具有混合调节活性的药剂(例如MAR-701、ZP2929)；去甲肾上腺素再摄取抑制剂、阿片样拮抗剂(例如纳曲酮(naltrexone))、CB1受体拮抗剂或反向激动剂、胃内激素激动剂或拮抗剂、胃泌酸调节素和其类似物、单胺摄取抑制剂(例如泰索酚辛(tesofensine))、和组合药剂(例如丁胺苯丙酮(buproprion)加唑尼沙胺(zonisamide)(恩派提克(Empatic))、普兰林肽(pramlintide)加美曲普汀(metreleptin)、丁胺苯丙酮(buproprion)加纳曲酮(肯特拉伍(Contrave))、苯丁胺加托吡酯(topiramate)(Qsymia)。

在一些实施方案中，与本发明化合物组合使用的抗肥胖症药剂选自消化道选择性MTP抑制剂(例如迪罗哌德(dirlotapide)、米瑞他匹(mitratapide)、英普他派(implitapide)、R56918)、CCK-A激动剂、5-HT_2C激动剂(例如氯卡色林/百维克)、MCR4激动剂、脂肪酶抑制剂(例如赛利司他(Cetilistat))、PYY_3-36(包括其类似物和聚乙二醇化类似物)、阿片样拮抗剂(例如纳曲酮)、油酰基雌酮、奥尼匹肽(obinepitide)、普兰林肽、泰索酚辛、瘦素、溴麦角环肽、奥利司他、AOD-9604和西布曲明。

在一些实施方案中，根据本发明方法的化合物和组合物可使用有效治疗LKB1或Kras相关疾病或减轻其严重度的任何量和任何给药途径给药。在一些实施方案中，LKB1或Kras相关疾病选自肝细胞癌、LKB1突变体癌症、LKB1杂合性缺失(LOH)驱动的癌症、Kras突变体癌症、普-杰二氏综合症(Peutz-Jeghers syndrome，PJS)、考登氏病(Cowden′sdisease，CD)和结节性脑硬化(TS)((Makowski等人，“Role of LKB 1in Lung CancerDevelopment”British Journal of Cancer(2008)99，683-688)。在一些实施方案中，LKB1或Kras相关疾病为Kras阳性/LKB1缺陷型肺肿瘤。

在一些实施方案中，根据本发明方法的化合物和组合物可使用有效治疗癌症或减轻其严重度或抑制癌细胞生长或诱导其凋亡的任何量和任何给药途径给药(Wang等人，“Acetyl-CoA Carboxylase-alpha Inhibitor TOFA Induces Human Cancer CellApoptosis”Biochem Biophys Res Commun.(2009)385(3)，302-306；Chajes等人，“Acetyl-CoA Carboxylase alpha Is Essential to Breast Cancer Cell Survival”Cancer Res.(2006)66，5287-5294；Beckers等人，“Chemical Inhibition of Acetyl-CoA CarboxylaseInduces Growth Arrest and Cytotoxicity Selectivity in Cancer Cells”CancerRes.(2007)8180-8187；Brusselmans等人，“RNA Interference-Mediated Silencing ofthe Acetyl-CoA-Carboxylase-alpha Gene Induces Growth Inhibition and Apoptosisof Prostate Cancer Cells”Cancer Res.(2005)65，6719-6725；Brunet等人，“BRCA1andAcetyl-CoA Carboxylase：The Metabolic Syndrom ofBreast Cancer”MolecularCarcinogenesis(2008)47，157-163；Cairns等人，“Regulation of Cancer CellMetabolism”(2011)11，85-95；Chiaradonna等人，“From Cancer Metabolism to NewBiomarkers and Drug Targets”Biotechnology Advances(2012)30，30-51)。

在一些实施方案中，根据本发明方法的化合物和组合物可使用有效治疗NAFLD或减轻其严重度的任何量和任何给药途径给药。在一些实施方案中，NAFLD为SFL、NASH及其相关肝硬化，优选NASH。

在一些实施方案中，根据本发明方法的化合物和组合物可使用有效治疗黑素瘤或减轻其严重度的任何量和任何给药途径给药。在一些实施方案中，黑素瘤为携带有活化MAPK通路的黑素瘤(Petti等人，“AMPK activators inhibit the proliferation ofhuman melanomas bearing the activated MAPK pathway”Melanoma Research(2012)22，341-350)。

本发明化合物特别适用于三阴性乳癌，因为肿瘤抑制因子蛋白BRCA1结合ACC的非活性形式且使其稳定，由此上调从头脂质合成，引起癌细胞增殖(Brunet等人，“BRCA1andacetyl-CoA carboxylase：the metabolic syndrome of breast cancer”Mol.Carcinog.(2008)47(2)，157-163)。

在一些实施方案中，根据本发明方法的化合物和组合物可使用有效治疗脂肪肉瘤或减轻其严重度的任何量和任何给药途径给药。脂肪肉瘤已展示出依赖于从头长链脂肪酸合成以便生长，且沙罗酚A(soraphen A)对ACC的抑制会抑制脂肪生成以及肿瘤细胞生长(Olsen等人，“Fatty acid synthesis is a therapeutic target in humanliposarcoma”International J.of Oncology(2010)36，1309-1314)。

在一些实施方案中，根据本发明方法的化合物和组合物可使用有效治疗肝病或减轻其严重度的任何量和任何给药途径给药。在一些实施方案中，肝病选自丙型肝炎、肝细胞癌、家族性联合高脂质血症和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝癌、胆管癌、血管肉瘤、血管内皮瘤和进行性家族性肝内胆汁郁积。

所需的精确量将在受试者之间变化，取决于受试者的物种、年龄以及整体状况、感染的严重程度、特定药剂、其给药模式等。优选地按单位剂型配制本发明化合物以实现易于给药和剂量均一性。如本文中所用的表述“单位剂型”是指适于待治疗患者的药剂的物理不连续单位。然而，应了解，本发明的化合物和组合物的每日总用量将由主治医师在合理医学判断范围内来决定。针对任何特定患者或有机体的特定有效剂量水平将取决于多种因素，包括所治疗的病症和病症的严重程度；所用特定化合物的活性；所用特定组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所用特定化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所用特定化合物组合或同时使用的药物；和医学领域中熟知的类似因素。

本发明的药学上可接受的组合物可以取决于所治疗感染的严重程度而口服、经直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过散剂、软膏或滴剂)、含服、作为口服或鼻喷雾等向人类和其他动物给药。在具体实施方案中，本发明化合物可以每日每千克受试者体重约0.01mg到约50mg且优选地每千克受试者体重约1mg到约25mg的剂量水平，每日一或多次口服或肠胃外给药，以获得所要治疗效果。

用于口服给药的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除活性化合物外，液体剂型还可含有所属领域中常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂，诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(尤其是棉籽油、落花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇脂肪酸酯和其混合物。除惰性稀释剂外，口服组合物还可包括辅料，如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。

可根据已知技术使用适合的分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如呈在1，3-丁二醇中的溶液形式。可使用的可接受媒介物和溶剂包括水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。另外，常规地采用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。出于这个目的，可以使用任何温和不挥发性油，包括合成单酸甘油酯或二酸甘油酯。此外，在可注射剂制备中使用脂肪酸，如油酸。

可注射制剂可例如通过经由截留细菌的过滤器过滤和/或通过并入杀菌剂来灭菌，所述制剂呈在使用之前可溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质中的无菌固体组合物形式。

为了延长本发明化合物的作用，通常需要减慢化合物从皮下或肌肉内注射的吸收。这可以使用具有弱水溶性的结晶或非晶形物质的液体悬浮液来实现。化合物的吸收速率则取决于其溶解速率，溶解速率又可以取决于晶体尺寸和结晶形式。或者，通过将化合物溶解或悬浮于油媒介物中来延迟肠胃外给药的化合物形式的吸收。通过形成化合物在可生物降解聚合物(如聚丙交酯-聚乙交酯)中的微胶囊基质来制造可注射贮库形式。取决于化合物与聚合物的比率和所用特定聚合物的性质，可以控制化合物的释放速率。其他可生物降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还通过将化合物覆埋于与身体组织可相容的脂质体或微乳液中来制备贮库可注射制剂。

用于直肠或阴道给药的组合物优选是栓剂，其可通过混合本发明化合物与适合的无刺激性赋形剂或载体(如可可脂、聚乙二醇)或栓剂蜡来制备，所述栓剂蜡在环境温度下是固体，但在体温下是液体，且因此在直肠或阴道腔中熔化并释放活性化合物。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、散剂和颗粒。在所述固体剂型中，将活性化合物与如以下至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体混合：柠檬酸钠或磷酸二钙；和/或a)填充剂或增量剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b)粘合剂，如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；c)保湿剂，如甘油；d)崩解剂，如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶解延迟剂，如石蜡；f)吸收加速剂，如季铵化合物；g)湿润剂，如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；h)吸附剂，如高岭土和膨润土；和i)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠，和其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型也可包含缓冲剂。

也可使用相似类型的固体组合物作为使用如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂的软质和硬质填充明胶胶囊中的填充剂。片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂和颗粒的固体剂型可以用包衣和外壳(如肠溶包衣和药物制剂技术中众所周知的其他包衣)来制备。它们可以任选地含有遮光剂，并且也可以具有使其任选地以延迟方式仅或优先在肠道某一部分中释放活性成分的组成。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物和蜡。也可使用相似类型的固体组合物作为使用如乳糖以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂的软质和硬质填充明胶胶囊中的填充剂。

活性化合物还可以呈与一或多种如上文所示的赋形剂的微囊包囊形式。片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂以及颗粒的固体剂型可以用包衣和外壳(如肠溶衣、释放控制包衣和药物配制技术中众所周知的其他包衣)来制备。在此类固体剂型中，活性化合物可以与至少一种惰性稀释剂(如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。正常实践时，此类剂型还可以包含除惰性稀释剂以外的其他物质，例如压片润滑剂和其他压片助剂，如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，所述剂型还可包含缓冲剂。其可任选含有遮光剂，且也可具有使其任选地以延迟方式仅在或优先在肠道某一部分释放活性成分的组成。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物和蜡。

用于局部或经皮给药本发明化合物的剂型包括软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、散剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴片。在无菌条件下将活性组分与药学上可接受的载体和任何所需防腐剂或缓冲剂按要求混合。还预期眼用制剂、滴耳剂和滴眼剂处于本发明的范围内。此外，本发明涵盖使用经皮贴片，其具有提供化合物向身体的控制递送的额外优点。所述剂型可通过将化合物溶解或分散于适当介质中来制备。也可使用吸收增强剂来增加化合物穿过皮肤的流量。速率可通过提供速率控制膜或将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制。

根据一个实施方案，本发明涉及一种抑制生物样品中的ACC的方法，其包含以下步骤：使所述生物样品与本发明化合物或包含所述化合物的组合物接触。

在具体实施方案中，本发明涉及一种调节生物样品中的脂肪酸水平的方法，其包含以下步骤：使所述生物样品与本发明化合物或包含所述化合物的组合物接触。

本文中所用的术语“生物样品”包括但不限于细胞培养物或其提取物；由哺乳动物获得的活组织检查物质或其提取物；和血液、唾液、尿液、粪便、精液、眼泪或其他体液或其提取物。抑制生物样品中的酶适用于所属领域的技术人员已知的多种目的。所述目的的实例包括但不限于生物学分析、基因表达研究和生物靶标鉴别。

本发明的另一实施方案涉及一种抑制患者的ACC的方法，其包含以下步骤：向所述患者给药本发明化合物或包含所述化合物的组合物。

根据另一实施方案，本发明涉及一种在患者中抑制脂肪酸产生、刺激脂肪酸氧化或两者皆有的方法，其包含以下步骤：向所述患者给药本发明化合物或包含所述化合物的组合物。根据具体实施方案，本发明涉及一种在患者中抑制脂肪酸产生、刺激脂肪酸氧化或两者皆有使得减轻肥胖症或缓解代谢综合症的症状的方法，其包含以下步骤：向所述患者给药本发明化合物或包含所述化合物的组合物。在其他实施方案中，本发明提供一种治疗有需要的患者的由ACC介导的病症的方法，其包含以下步骤：向所述患者给药根据本发明的化合物或其药学上可接受的组合物。所述病症详细地描述在本文中。

在一些实施方案中，本发明的化合物和组合物可以用于治疗肥胖症或另一种代谢障碍的方法。在具体实施方案中，本发明的化合物和组合物可以用于治疗哺乳动物的肥胖症或其他代谢障碍。在具体实施方案中，哺乳动物为人类患者。在具体实施方案中，本发明的化合物和组合物可以用于治疗人类患者的肥胖症或其他代谢障碍。

在一些实施方案中，本发明提供一种治疗肥胖症或另一种代谢障碍的方法，其包含向患有肥胖症或另一种代谢障碍的患者给药本发明的化合物或组合物。在具体实施方案中，治疗肥胖症或另一种代谢障碍的方法包含向哺乳动物给药本发明的化合物和组合物。在具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一些实施方案中，代谢障碍为血脂异常或高脂质血症。在一些实施方案中，肥胖症为普拉德-威利综合症(Prader-Willi syndrome)、巴-比二氏综合症(Bardet-Biedl syndrome)、科恩综合症(Cohen syndrome)或MOMO综合症的症状。在一些实施方案中，肥胖症为给药另一种药物的副作用，所述另一种药物包括但不限于胰岛素、磺脲、噻唑烷二酮、抗精神病药、抗抑郁剂、类固醇、抗惊厥剂(包括苯妥英(phenytoin)和丙戊酸盐)、苯噻啶(pizotifen)或激素避孕药。

在具体实施方案中，本发明提供一种治疗癌症或另一种增生性病症的方法，其包含向患有癌症或另一种增生性病症的患者给药本发明的化合物或组合物。在具体实施方案中，治疗癌症或另一种增生性病症的方法包含向哺乳动物给药本发明的化合物和组合物。在具体实施方案中，哺乳动物为人类。

如本文所用，术语“抑制癌症”和“抑制癌细胞增殖”是指通过细胞毒性、营养物耗乏或诱导细胞凋亡来抑制单独地或与其他癌细胞聚集的癌细胞的生长、分裂、成熟或存活力和/或引起癌细胞死亡。

含有增殖受到本文所述的化合物和组合物抑制且本文所述的方法适用于对抗的癌细胞的组织的实例包括但不限于乳房、前列腺、脑、血液、骨髓、肝脏、胰脏、皮肤、肾脏、结肠、卵巢、肺、睾丸、阴茎、甲状腺、副甲状腺、垂体、胸腺、视网膜、葡萄膜、结膜、脾、头、颈、气管、胆囊、直肠、唾液腺、肾上腺、咽喉、食道、淋巴结、汗腺、皮脂腺、肌肉、心脏和胃。

在一些实施方案中，利用本发明的化合物或组合物治疗的癌症为黑素瘤、脂肪肉瘤、肺癌、乳癌、前列腺癌、白血病、肾癌、食道癌、脑癌、淋巴瘤或结肠癌。在具体实施方案中，癌症为原发性渗出性淋巴瘤(PEL)。在某些优选实施方案中，待利用本发明的化合物或组合物治疗的癌症为携带有活化MAPK通路的癌症。在一些实施方案中，携带有活化MAPK通路的癌症为黑素瘤。在某些优选实施方案中，利用本发明的化合物或组合物治疗的癌症为与BRCA1突变相关的癌症。在一个尤其优选的实施方案中，利用本发明的化合物或组合物治疗的癌症为三阴性乳癌。

在具体实施方案中，可利用本发明化合物治疗的疾病为神经病症。在一些实施方案中，所述神经病症为阿尔茨海默病(Alzheimer′s Disease)、帕金森病(Parkinson′sDisease)、癫痫症、局部缺血、年龄相关的记忆损伤、轻度认知障碍、弗里德希氏共济失调(Friedreich′s Ataxia)、GLUT1缺陷型癫痫症、矮妖精貌综合症(Leprechaunism)、拉布桑-门登霍尔综合症(Rabson-Mendenhall Syndrome)、冠状动脉旁路移植痴呆、麻醉诱发的记忆丢失、肌肉萎缩性侧索硬化、神经胶质瘤亨廷顿病(gliomaor Huntington′s Disease)。

在具体实施方案中，所提供的化合物或其组合物与另一种ACC抑制剂或抗肥胖药剂组合给药。在一些实施方案中，所提供的化合物或其组合物与一或多种其他治疗剂组合给药。所述治疗剂药剂包括但不限于如奥利司他(赛尼可(Xenical))、CNS刺激剂、奎斯米亚(Qsymia)或百维克(Belviq)。

在具体实施方案中，所提供的化合物或其组合物与另一种抗癌药、细胞毒素或化学治疗剂组合给药有需要的患者。

在具体实施方案中，与本发明的化合物或组合物组合使用的抗癌药或化学治疗剂包括但不限于二甲双胍、苯乙双胍(phenformin)、丁双胍、伊马替尼(imatinib)、尼罗替尼(nilotinib)、吉非替尼(gefitinib)、舒尼替尼(sunitinib)、卡非唑米(carfilzomib)、盐孢菌素A(salinosporamide A)、视黄酸、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、氮芥(mechlorethamine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、异环磷酰胺(ifosfamide)、硫唑嘌呤(azathioprine)、巯嘌呤(mercaptopurine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、吉西他滨(gemcitabine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、硫鸟嘌呤(tioguanine)、长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、长春瑞滨(vinorelbine)、长春地辛(vindesine)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)、塔呋泊苷(tafluposide)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、伊立替康(irinotecan)、拓扑替康(topotecan)、安吖啶(amsacrine)、放线菌素(actinomycin)、多柔比星(doxorubicin)、道诺霉素(daunorubicin)、伐柔比星(valrubicin)、伊达比星(idarubicin)、表柔比星(epirubicin)、普卡霉素(plicamycin)、丝裂霉素(mitomycin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、美法仑(melphalan)、白消安(busulfan)、卡培他滨(capecitabine)、培美曲塞(pemetrexed)、埃博霉素(epothilones)、13-顺式-视黄酸、2-CdA、2-氯去氧腺苷、5-阿扎胞苷(Azacitidine)、5-氟尿嘧啶、5-FU、6-巯嘌呤、6-MP、6-TG、6-硫鸟嘌呤、阿布拉生(Abraxane)、或以上各者中的任一者的组合。

在具体实施方案中，本发明化合物可与选自二甲双胍、苯乙双胍或丁双胍的双胍一起给药有需要的患者。在具体实施方案中，被给药本发明化合物和双胍的组合的患者罹患癌症、肥胖症、肝病、糖尿病或上述中的两者或两者以上。

在具体实施方式中，两种或更多种治疗剂的组合可以与本发明化合物一起给药。在具体实施方式中，三种或更多种治疗剂的组合可以与本发明化合物一起给药。

本发明抑制剂也可与之组合的药剂的其他实例包括但不限于：维生素和营养补充剂；癌症疫苗；用于嗜中性白血球减少症的疗法(例如G-CSF、非格司亭(filgrastim)、来格司亭(lenograstim))；用于血小板减少的疗法(例如血液输液、促红细胞生成素)；PI3激酶(PI3K)抑制剂；MEK抑制剂；AMPK活化剂；PCSK9抑制剂；SREBP位点1蛋白酶抑制剂；HMG CoA-还原酶抑制剂；止吐药(例如5-HT3受体拮抗剂、多巴胺拮抗剂、NK1受体拮抗剂、组胺受体拮抗剂、大麻素(cannabinoid)、苯二氮用于治疗精神分裂症的药剂，如再普乐(zyprexa)、理斯必妥(risperdal)、思瑞康(seroquel)和氟哌啶醇(haloperidol)；抗炎剂，如皮质类固醇、TNF阻断剂、IL-1RA、硫唑嘌呤、环磷酰胺和柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)；免疫调节剂和免疫抑制剂，如环孢素(cyclosporin)、他克莫司(tacrolimus)、雷帕霉素(rapamycin)、霉酚酸吗啉乙酯(mycophenolate mofetil)、干扰素、皮质类固醇、环磷酰胺、硫唑嘌呤和柳氮磺胺吡啶；神经营养因子，如乙酰胆碱酯酶抑制剂、MAO抑制剂、干扰素、抗惊厥剂、离子通道阻断剂、利鲁唑(riluzole)和抗帕金森氏病剂；用于治疗心血管疾病的药剂，如β-阻断剂、ACE抑制剂、利尿剂、硝酸酯类、钙离子通道阻断剂和他汀类药(statin)、贝特类药(fibrate)、胆固醇吸收抑制剂、胆酸螯合剂和烟酸；用于治疗肝病的药剂，如皮质类固醇、消胆胺(cholestyramine)、干扰素和抗病毒剂；用于治疗血液病症的药剂，如皮质类固醇、抗白血病药剂和生长因子；用于治疗免疫缺乏病症的药剂，如γ球蛋白；和抗糖尿病药剂，如双胍(二甲双胍、苯乙双胍、丁双胍)、噻唑烷二酮(罗格列酮、吡格列酮、曲格列酮)、磺酰脲(甲苯磺丁脲、乙酰苯磺酰环己脲、甲磺吖庚脲、氯磺丙脲、格列吡嗪、格列苯脲、格列美脲、格列齐特)、氯茴苯酸类(meglitinides)(瑞格列奈(repaglinide)、那格列奈(nateglinide))、α-葡糖苷酶抑制剂(米格列醇、阿卡波糖)、肠促胰岛素模拟物(艾塞那肽、利拉鲁肽、他司鲁肽)、胃抑制性肽类似物、DPP-4抑制剂(维格列汀、西他列汀、沙格列汀、利拉利汀、阿格列汀)、淀粉素类似物(普兰林肽)以及胰岛素和胰岛素类似物。

在具体实施方案中，本发明化合物或其药学上可接受的组合物与反义药剂、单克隆或多克隆抗体或siRNA治疗剂组合给药。

那些额外的药剂可以与本发明的化合物或组合物分开给药，作为多次给药方案的一部分。或者，那些药剂可以是单一剂型的一部分，在单一组合物中与本发明化合物一起混合。如果作为多次给药方案的一部分给药，那么两种活性剂可以同时、依次或彼此间隔一定时间段(通常彼此间隔在五小时以内)提供。

本文中所用的术语“组合”、“结合”和相关术语是指同时或依次给药根据本发明的治疗剂。举例来说，本发明化合物可以与另一治疗剂以独立单位剂型或共同呈单一单位剂型同时或依次给药。因此，本发明提供包含本发明化合物、其他治疗剂和药学上可接受的载体、辅料或媒介物的单一单位剂型。

可以与载体物质组合产生单一剂型的本发明化合物和其他治疗剂两者(在包含如上所述的其他治疗剂的那些组合物中)的量将取决于所治疗的主体和特定给药模式而变化。优选地，应该配制本发明组合物，使得可以给药介于每天每千克体重0.01mg与100mg之间的剂量。

在包含其他治疗剂的那些组合物中，所述其他治疗剂和本发明化合物可以协同地起作用。因此，这些组合物中其他治疗剂的量将低于仅使用所述治疗剂的单一疗法中所需的量。在这些组合物中，可以给药剂量介于每天每千克体重0.01μg与100μg之间的其他治疗剂。

存在于本发明组合物中的其他治疗剂的量将不大于通常在包含所述治疗剂作为唯一活性剂的组合物中所给药的量。优选地，本发明所公开的组合物中其他治疗剂的量将在通常存在于包含所述药剂作为唯一治疗活性剂的组合物中的量的约50％到100％范围内。

具体实施方式

下面将结合示意图对本发明的具体实施方式进行更详细的描述。根据下列描述，本发明的优点和特征将更清楚。需说明的是，附图均采用非常简化的形式且均使用非精准的比例，仅用以方便、明晰地辅助说明本发明实施例的目的。

合成中间体(R)-4-(2-溴-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)四氢-2H-吡喃3.61

方法A：

合成化合物3.2

在氮气下，向圆底烧瓶中放入DMSO。随后加入NaH。将该混合物在室温搅拌。在室温，向其中分批加入三甲基碘化亚砜。将所得溶液搅拌。向该混合物中滴加化合物3.1，将该反应在室温搅拌，然后通过加入NH₄Cl(水溶液)淬灭。将所得溶液用EtOAc萃取并将有机层合并，用无水Na₂SO₄干燥并真空浓缩，得到3.2，其为黄色油。

合成化合物3.3

在氮气下，向圆底烧瓶中加入四氢吡喃-4-醇和FeCl₃。随后滴加3.2。将该反应在室温搅拌。将所得溶液用H₂O稀释，然后用EtOAc萃取。将有机层合并并将溶剂真空除去。将粗产物通过柱色谱纯化，得到3.3，其为白色固体。

合成化合物3.41

向圆底烧瓶中加入3.3、甲苯、CAL-B和丁酸乙烯酯。将该反应在室温搅拌。将固体过滤掉并将滤液真空浓缩，得到3.41，其为无色油。

合成化合物3.51

向圆底烧瓶中加入3.41、甲醇、水、NaOH。将该反应在室温搅拌，然后通过加入乙酸淬灭。将所得混合物真空浓缩，然后用EtOAc萃取。将有机层合并并真空浓缩。粗产物通过柱色谱纯化，得到3.51，其为白色固体。

合成化合物3.61

在氮气下，向圆底烧瓶中加入3.51、CBr₄、CH₂Cl₂、PPh₃。将该反应在室温搅拌过夜，然后真空浓缩。将粗产物通过柱色谱纯化，得到3.61，其为黄色油。

合成中间体(S)-4-(2-溴-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)四氢-2H-吡喃3.62

方法B：

合成化合物3.2

合成化合物3.3

合成化合物3.42

向圆底烧瓶中加入3.3、甲苯、CAL-B和丁酸乙烯酯。将该反应在室温搅拌。将固体过滤掉并将滤液真空浓缩，得到3.42，其为无色油。

合成化合物3.52

向圆底烧瓶中加入3.42、甲醇、水、NaOH。将该反应在室温搅拌，然后通过加入乙酸淬灭。将所得混合物真空浓缩，然后用EtOAc萃取。将有机层合并并真空浓缩。粗产物通过柱色谱纯化，得到3.52，其为白色固体。

合成化合物3.62

在氮气下，向圆底烧瓶中加入3.52、CBr₄、CH₂Cl₂、PPh₃。将该反应在室温搅拌过夜，然后真空浓缩。将粗产物通过柱色谱纯化，得到3.62，其为黄色油。

合成式e化合物

方法C：

取恶唑和化合物d加入THF中搅拌，干燥过滤提纯得到式e化合物。其中R₆为C_3-6烷基。

合成式f化合物

方法F：

取恶唑和化合物d’加入THF中搅拌，干燥过滤提纯得到式f化合物。其中R₆为C_3-6烷基。

合成式c化合物

方法D：

采用现有技术已知的方法，可以制备得到中间体I-1，并按照方法D进一步反应得到通式I的化合物。其中R₁为H，C_1-6烷基，C_1-6卤代烷基，C_1-6烷氧基；R₂为H，C_1-6烷基，C_1-6卤代烷基，C_1-6烷氧基；R₃为H，C_1-6烷基，C_1-6卤代烷基，C_1-6烷氧基，或者R₁和R₃与它们键合的碳原子一起形成3至6元环烷基；R₄为H，C_1-6烷基，C_1-6卤代烷基，C_1-6烷氧基，或者R₄和R₂与它们键合的碳原子一起形成3至6元环烷基。R₅为C_1-6烷基。R₆为C_3-6烷基。

方法G：

采用现有技术已知的方法，可以制备得到中间体I-1，并按照方法G进一步反应得到通式I-I-1和I-I-2的化合物。其中R₁为H，C_1-6烷基，C_1-6卤代烷基，C_1-6烷氧基；R₂为H，C_1-6烷基，C_1-6卤代烷基，C_1-6烷氧基；R₃为H，C_1-6烷基，C_1-6卤代烷基，C_1-6烷氧基，或者R₁和R₃与它们键合的碳原子一起形成3至6元环烷基；R₄为H，C_1-6烷基，C_1-6卤代烷基，C_1-6烷氧基，或者R₄和R₂与它们键合的碳原子一起形成3至6元环烷基。R₅为C_1-6烷基。R₆为C_3-6烷基。

方法E：

采用现有技术已知的方法，可以制备得到中间体II-1，并按照方法E进一步反应得到通式II的化合物。其中R₁为H，C_1-6烷基，C_1-6卤代烷基，C_1-6烷氧基；R₂为H，C_1-6烷基，C_1-6卤代烷基，C_1-6烷氧基；R₃为H，C_1-6烷基，C_1-6卤代烷基，C_1-6烷氧基，或者R₁和R₃与它们键合的碳原子一起形成3至6元环烷基；R₄为H，C_1-6烷基，C_1-6卤代烷基，C_1-6烷氧基，或者R₄和R₂与它们键合的碳原子一起形成3至6元环烷基。R₅为C_1-6烷基。R₆为C_3-6烷基。

向化合物c的DCM溶液中加入EDCI(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)和DMAP(4-二甲氨基吡啶)和NH₄Cl。将反应混合物搅拌。TLC显示无起始原料残留后，加入水，并将分离的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。将残余物用制备型HPLC纯化，得到化合物c’，为白色固体。

在某些实施方案中，本发明的式c化合物选自表1。

表1.式c的示例化合物

/>

/>

实施例1

合成化合物(R)-3-((1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧代-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)甲基) 环丁烷羧酸c-1

合成3-(氨基甲基)环丁烷甲酸乙酯1.2

在0℃下，向化合物1.1(1.0g，7.75mmol)的EtOH(10mL)溶液中缓慢加入H₂SO₄(0.1g，98％)。将得到的混合物在80℃下搅拌6小时。然后将反应混合物冷却至室温，加入饱和NaHCO₃溶液，并萃取至THF。合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到化合物1.2(980mg)，为黄色油。

质谱：158[M+H]⁺

合成2-(3-((3-(乙氧基羰基)环丁基)甲基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯1.3

向化合物2-氨基-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯(1.30g，7.01mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加BTC(622mg，2.10mmol)和吡啶(0.5mL)。在室温搅拌2小时后，向反应混合物中加入化合物1.2(1.0g，6.37mmol)。将得到的混合物在室温搅拌2小时。将反应混合物用水稀释，并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(PE/EA＝4/1)，得到化合物1.3(1.72g)，为白色固体。

质谱：369[M+H]⁺

合成3-((5-甲基-2，4-二氧-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)甲基)环丁烷甲酸乙酯1.4

向化合物1.3(800mg，2.17mmol)在EtOH(20mL)中的溶液中添加NaOEt(449mg，6.51mmol)。在室温搅拌8小时后，将反应混合物用H₂O(50mL)稀释，并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶快速色谱纯化(PE/EA＝5/1)，得到化合物1.4(510mg)，为白色固体。

质谱：323[M+H]⁺

合成3-((6-溴-5-甲基-2，4-二氧-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)甲基)环丁烷羧酸乙酯1.5

向化合物1.4(500mg，1.55mmol)的DCM(10mL)溶液中加入NBS(277mg，1.55mmol)。将反应混合物在室温搅拌3小时。然后将反应混合物用水稀释，并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(PE/EA＝5/1)，得到化合物1.5(520mg)，为白色固体。

质谱：401，403[M+H]⁺

合成(R)-乙基3-((6-溴-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2，4-二氧-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)甲基)环丁烷羧酸酯1.61

向化合物1.5(200mg，0.5mmol)的DMF(3mL)溶液中加入(R)-4-(2-溴-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)四氢-2H-吡喃3.61(329mg，1.05mmol)和K₂CO₃(207mg，1.50mmol)。在微波下于150℃下搅拌3小时后，将反应冷却至室温，用H₂O稀释并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(PE/EA＝4/1)，得到化合物1.61(262mg)，为白色固体。

质谱：635[M+H]⁺

合成(R)-乙基3-((1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑)-2-基)-2，4-二氧-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)甲基)环丁烷羧酸酯1.71

向化合物1.61(200mg，0.315mmol)的DMF(6mL)溶液中加入2-(三异丙基甲硅烷基)恶唑(101.6mg，0.473mmol)，Pd(OAc)₂(6.9mg，0.032mmol)，CuI(23.9.0mg，0.126mmol)，CsF(143.7mg，0.945mmol)和CatCxium A(24.2mg，0.065mmol)。然后将反应混合物在氮气下于120℃搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温，用H₂O稀释，并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(PE/EA＝3/1)，得到化合物1.71(106.5mg)，为白色固体。

质谱：624[M+H]⁺

合成(R)-3-((1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧代-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)甲基)环丁烷羧酸c-1

向化合物1.71(100mg，0.161mmol)的MeOH(3mL)和水(1mL)溶液中加入NaOH(19.3mg，0.482mmol)。将反应混合物在40℃下搅拌2小时。用5％HCl将反应混合物的pH调节至7，并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到残余物，将其通过制备型HPLC纯化，得到化合物c-1(52.5mg)，为白色固体。

质谱：596[M+H]⁺

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.95(br s，1H)，8.23(s，1H)，7.48(d，J＝7.2Hz，1H)，7.33-7.29(m，1H)，7.31-7.29(m，1H)，7.05-6.95(m，1H)，6.51(s，1H)，5.31(d，J＝5Hz，1H)，4.10-4.02(m，3H)，3.96(s，3H)，3.74-3.49(m，2H)，3.34-3.32(m，1H)，3.31-3.30(m，2H)，2.89(s，3H)，2.39-2.37(m，2H)，2.32-2.17(m，2H)，2.11-2.08(m，2H)，1.32-1.23(m，4H)。

实施例2

合成化合物(S)-3-((1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧代-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)甲基) 环丁烷羧酸c-2

对于c-2的合成，可类似参考c-1的合成方法。

实施例3

合成化合物(R)-2-(3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)环丁基) 乙酸c-3

合成2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)亚环丁基)乙酸乙酯2.2

在0℃下，向2-(二乙氧基膦基)乙酸乙酯(1.0g，4.81mmol)的THF(20mL)溶液中加入NaH(230.9mg，5.77mmol)。在室温搅拌1小时后，向反应混合物中加入化合物2.1(978.8mg，5.29mmol)。将所得混合物在室温搅拌6小时后用水稀释，并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶快速色谱纯化(PE/EA＝6/1)，得到化合物2.2(1.05g)，为白色固体。

质谱：256[M+H]⁺

合成2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)环丁基)乙酸乙酯2.3

向化合物2.2(800mg，3.13mmol)在EtOH(15mL)中的溶液中加入10％Pd/C(80mg)。将反应混合物在室温在H₂(1atm)下搅拌8小时。向反应混合物中加入二异丙醚，并通过过滤收集得到化合物2.3(750mg)，为黄色油。

质谱：258[M+H]⁺

合成2-(3-氨基环丁基)乙酸乙酯2.4

向化合物2.3(650mg，2.53mmol)的1，4-二恶烷(10mL)溶液中加入4N盐酸的二恶烷(10mL)溶液。将反应混合物在室温搅拌过夜。向反应混合物中加入乙醚，并通过过滤收集得到化合物2.4(385mg)，为白色固体。

质谱：158[M+H]⁺

合成2-(3-(3-(2-乙氧基-2-氧乙基)环丁基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯2.5

向化合物2-氨基-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯(647mg，3.50mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加BTC(312mg，1.05mmol)和吡啶(0.5mL)。在室温搅拌2小时后，向反应混合物中加入化合物2.4(500mg，3.18mmol)。将得到的混合物在室温搅拌2小时。将反应混合物用水稀释，并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(PE/EA＝4/1)，得到化合物2.5(890mg)，为白色固体。

质谱：369[M+H]⁺

合成2-(3-(5-甲基-2，4-二氧-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)环丁基)乙酸乙酯2.6

向化合物2.5(500mg，1.36mmol)的EtOH(10mL)溶液中加入NaOEt(281mg，4.07mmol)。在室温搅拌8小时后，将反应物用水稀释，并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(PE/EA＝5/1)，得到化合物2.6(368mg)，为白色固体。

质谱：323[M+H]⁺

合成2-(3-(6-溴-5-甲基-2，4-二氧-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)环丁基)乙酸乙酯2.7

向化合物2.6(368mg，1.14mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入NBS(204.5mg，1.14mmol)。将反应混合物在室温搅拌3小时。然后将反应混合物用水稀释，并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶快速色谱纯化(PE/EA＝5/1)，得到化合物2.7(410mg)，为白色固体。

质谱：401，403[M+H]⁺

合成(R)-乙基2-(3-(6-溴-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基)乙基-2，4-二氧-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)环丁基)乙酸酯2.81

向化合物2.7(400mg，1.0mmol)的DMF(5mL)溶液中加入(R)-4-(2-溴-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)四氢-2H-吡喃3.61(688.6mg，2.2mmol)和K₂CO₃(414mg，3.0mmol)。在微波下于150℃下搅拌3小时后，将反应冷却至室温，用H₂O稀释，并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶快速色谱纯化(PE/EA＝4/1)，得到化合物2.81(412mg)，为白色固体。

质谱：635[M+H]⁺

合成(R)-乙基2-(3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)环丁基)乙酸酯2.91

向化合物2.81(200mg，0.315mmol)的DMF(6mL)溶液中加入2-(三异丙基甲硅烷基)恶唑(101.6mg，0.473mmol)，Pd(OAc)₂(6.9mg，0.032mmol)，CuI(23.9.0mg，0.126mmol)，CsF(143.7mg，0.945mmol)和CatCxium A(24.2mg，0.065mmol)。然后将反应混合物在120℃下搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温，用H₂O稀释，并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶快速色谱纯化(PE/EA＝3/1)，得到化合物2.91，为白色固体。

质谱：624[M+H]⁺

合成化合物(R)-2-(3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)环丁基)乙酸c-3

向化合物2.91(90mg，0.145mmol)的MeOH(3mL)和水(1mL)溶液中加入NaOH(17.3mg，0.433mmol)。将反应混合物在40℃下搅拌2小时。用5％HCl将反应混合物的pH调节至7，并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到残余物，将其通过HPLC纯化，得到化合物c-3，为白色固体。

质谱：596[M+H]⁺

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.70(s，1H)，7.56-7.52(m，1H)，7.59-7.57(m，1H)，7.27(d，J＝4.0Hz，1H)，7.21(s，1H)，7.04-7.00(m，1H)，6.86(d，J＝8.0Hz，1H)，5.40-5.36(m，1H)，5.14(s，1H)，4.16-4.06(m，2H)，3.85(s，3H)，3.76-3.68(m，2H)，3.41(d，J＝4.0Hz，1H)，3.34-3.31(m，3H)，2.69-.258(m，4H)，2.13(s，1H)，1.82-1.79(m，4H)，1.70(d，J＝5.6Hz，2H)，1.58(d，J＝9.2Hz，2H)。

实施例4

合成化合物c’-3

向化合物c-3(59.6mg，0.10mmol)在1.2mL DCM中的溶液中加入EDCI(27mg，0.14mmol)和DMAP(25.8mg，0.21mmol)和NH₄Cl(15mg，0.28mmol)。将反应混合物在40℃下搅拌2小时。TLC显示无起始原料残留后，加入5mL水，并将分离的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。将残余物用制备型HPLC纯化，得到化合物c’-3(27.8mg)，为白色固体。

质谱：595[M+H]⁺

实施例5

合成化合物(S)-乙基2-(3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)环丁基)乙酸酯c-4

对于c-4的合成，可类似参考c-3的合成方法。

实施例6

合成2-(三异丙基甲硅烷基)恶唑

/>

在N₂下在-78℃下向恶唑(1.0g，14.5mmol)在THF(15mL)中的溶液中逐滴加入正丁基锂(11.6mL，29mmol，2.5M的己烷溶液)。在-78℃下再搅拌45分钟后，在-78℃下将三异丙基甲硅烷基三氟甲磺酸盐(6.65g，21.8mmol)缓慢地添加到反应混合物中。添加完成后，将反应混合物缓慢升温至室温，并搅拌12小时。将反应混合物用水稀释，并用EA萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法纯化(PE/EA＝20/1)，得到化合物2-(三异丙基甲硅烷基)恶唑(1.1g)，为黄色油状物。

实施例7

手性分离

化合物2.7通过手性分离而分离为2.7-1(2.0g，反式异构体)和2.7-2(4.2g，顺式异构体)。

质谱：401，403[M+H]⁺

合成2-((1R，3r)-3-(6-溴-1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2，4-二氧代-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)环丁基)乙酸乙酯2.81-1

向化合物2.7-1(1.4g，3.5mmol)的DMF(20mL)溶液中加入(R)-4-(2-溴-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)四氢-2H-吡喃3.61(2.0g，6.4mmol)和K₂CO₃(1.5g，11mmol)。在138℃于密封管中搅拌6小时后，将反应物冷却至室温，用H₂O稀释，并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶快速色谱纯化(PE/EA＝10/1)，得到化合物2.81-1(1.6g)，为无色油。

质谱：637[M+H]⁺

合成2-((1R，3r)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧代-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)环丁基)乙酸乙酯2.91-1

向化合物2.81-1(1g，1.6mmol)的甲苯(20mL)溶液中加入2-(三丁基甲锡烷基)恶唑(1.7g，4.7mmol)和Pd(PPh₃)₄(0.5g，0.4mmol)。然后将反应混合物在110℃搅拌10小时。将反应混合物冷却至室温，用H₂O稀释，并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶快速色谱纯化(PE/EA＝3/1)，得到化合物2.91-1(700mg)，为黄色固体。

质谱：624[M+H]⁺

合成化合物2-((1R，3r)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧代-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)环丁基)乙酸c-3-1

向化合物2.91-1(500mg，0.8mmol)的EtOH(15mL)和水(3mL)的溶液中加入LiOH(300mg，7.1mmol)。将反应混合物在50℃搅拌2小时。用5％HCl将反应混合物的pH调节至7，并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到残余物，将其通过硅胶快速色谱纯化(DCM/MeOH＝50/1)，得到化合物c-3-1(300mg)，为白色固体。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：11.99(br s，1H)，8.22(s，1H)，7.50-7.48(m，1H)，7.38(d，J＝0.8Hz，1H)，7.32-7.27(m，1H)，7.05-6.95(m，2H)，5.52-5.43(m，1H)，5.31(t，J＝6.4Hz，1H)，4.10-3.95(m，2H)，3.78(s，3H)，3.60-3.55(m，1H)，3.52-3.49(m，1H)，3.41-3.36(m，1H)，3.28-3.20(m，2H)，2.917-2.88(m，2H)，2.78(s，3H)，2.71-2.67(m，1H)，2.54-2.50(m，2H)，2.03-1.97(m，2H)，1.65-1.63(m，2H)，1.36-1.31(m，1H)，1.20-1.16(m，1H)。

MS计算值：595；MS实验值：596[M+H]⁺。

合成2-((1S，3s)-3-(6-溴-1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2，4-二氧代-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)环丁基)乙酸乙酯2.81-2

向化合物2.7-2(2.0g，5.0mmol)的DMF(20mL)溶液中加入(R)-4-(2-溴-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)四氢-2H-吡喃3.61(3.2g，10mmol)和K₂CO₃(2g，14mmol)。在138℃于密封管中搅拌6小时后，将反应物冷却至室温，用H₂O稀释，并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶快速色谱纯化(PE/EA＝10/1)，得到化合物2.81-1(3g)，为无色油。

质谱：637[M+H]⁺

合成2-((1S，3s)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧代-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)环丁基)乙酸乙酯2.91-2

向化合物2.81-2(1g，1.6mmol)的甲苯(20mL)溶液中加入2-(三丁基甲锡烷基)恶唑(1.7g，4.7mmol)和Pd(PPh₃)₄(0.5g，0.4mmol)。然后将反应混合物在110℃搅拌10小时。将反应混合物冷却至室温，用H₂O稀释，并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶快速色谱纯化(PE/EA＝3/1)，得到化合物2.91-2(600mg)，为黄色固体。

质谱：624[M+H]⁺

合成化合物2-((1S，3s)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2，4-二氧代-1，2-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(4H)-基)环丁基)乙酸c-3-2

向化合物2.91-2(1g，1.6mmol)的EtOH(15mL)和水(3mL)溶液中加入LiOH(338mg，8.0mmol)。将反应混合物在50℃搅拌2小时。用5％HCl将反应混合物的pH调节至7，并用EA萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到残余物，将其通过硅胶快速色谱纯化(DCM/MeOH＝50/1)，得到化合物c-3-2(600mg)，为白色固体。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：11.98(br s，1H)，8.22(s，1H)，7.50-7.48(m，1H)，7.38(d，J＝0.4Hz，1H)，7.32-7.27(m，1H)，7.05-6.97(m，2H)，5.30(t，J＝6.4Hz，1H)，5.13-5.04(m，1H)，4.11-4.00(m，2H)，3.78(s，3H)，3.61-3.57(m，1H)，3.53-3.48(m，1H)，3.41-3.35(m，1H)，3.28-3.20(m，2H)，2.78(s，3H)，2.50-2.45(m，3H)，2.43-2.31(m，4H)，1.66-1.62(m，2H)，1.38-1.31(m，1H)，1.23-1.15(m，1H)。

MS计算值：595；MS实验值：596[M+H]⁺。

实施例8

合成2-(三丁基甲锡烷基)恶唑

采用类似于实施例6的方法制备2-(三丁基甲锡烷基)恶唑。

实施例9

体外乙酰基-CoA羧化酶(ACC)抑制测定

可用于确定本发明化合物对ACCl或ACC2的抑制作用的体外ACC抑制测定的示例性程序如下。使用来自普洛麦格公司(Promega)的ADP-Glo^TM激酶测定试剂盒。ADP-Glo^TM激酶测定为发光ADP检测测定，用以通过定量酶反应期间所产生的ADP量来测量酶活性。所述测定以两个步骤进行；首先，在酶反应之后，添加等体积ADP-Glo^TM试剂以终止反应并且耗尽剩余ATP。其后，添加激酶检测试剂以同时将ADP转化成ATP并且可使用荧光素酶/荧光素反应测量新合成的ATP。可通过使用ATP向ADP转化的曲线使发光与ADP浓度相关联。详细程序如下。在384孔板中加入4.5μL工作液。用DMSO以1：3连续稀释化合物。将0.5μL经稀释的化合物溶液添加至384孔白色Optiplate测定板中。在室温将所述板孵育15分钟。将5μL底物工作溶液添加至各孔中以起始反应。最终ACC反应液由以下组成：0.5nM ACC，10μM ATP，5μM乙酰基-CoA，15mM NaHCO₃，测试化合物终浓度：1μM、0.333μM、0.111μM、0.037μM、0.0123μM、0.00411μM、0.00137μM、0.000457μM、0.000152μM和0.000051μM。在室温将板孵育30分钟。添加10μL ADP-Glo^TM试剂，在室温孵育40分钟。添加20μL激酶检测试剂。在室温将板孵育40分钟，接着在铂金埃尔默(Perkin Elmer)EnVision 2104板读取器上以相对光单位(RLU)读取发光。

取各浓度以及阳性和阴性对照的数据的平均值，并且计算标准差。由下式计算抑制百分比：100×(平均阴性对照-化合物)/(平均阴性对照-平均阳性对照)。通过使数据与非线性回归方程式拟合来计算各化合物的IC₅₀：Y＝最低值+(最高值-最低值)/(1+10^((LogIC₅₀-X)×希尔斜率))，其中X为化合物浓度的对数并且Y为抑制百分比。

体外ACC1和ACC2抑制测定的示例性结果在表2中列出。化合物编号对应于表1中的化合物编号。

表2.体外ACC1和ACC2抑制测定的结果。

由表格中可知，化合物c-1和c-3，c-3-1，c-3-2具有良好的ACC1和ACC2抑制性能。本发明的其他化合物对ACC1和ACC2均具有好的抑制活性，具有与化合物c-1和c-3相当的ACC1和ACC2的IC₅₀值。

实施例10

HepG2细胞中的[2-¹⁴C]-乙酸结合测定

完全培养基：

DMEM(GIBCO，目录号：11965-092)用作HepG2细胞(ATCC，目录号：HB-8064)的完全培养基。在DMEM培养基中加入10％胎牛血清(FBS，GIBCO，目录号：10099-141)，青霉素(100单位/mL)和链霉素(100μg/mL)(Pen/Strep，GIBCO，目录号：15140-122)。

细胞培养条件：

HepG2细胞于含5％二氧化碳的37℃培养箱中培养，每2-3天传代一次。[2-¹⁴C]-乙酸结合测定：

将HepG2细胞以2×105个细胞/孔的密度铺于24孔板(Corning，目录号：3524)，每孔500μL，于含5％二氧化碳的37℃培养箱中培养。培养至第四天，加入50μL 1∶3梯度稀释的化合物，DMSO终浓度为0.5％(v/v)，在培养箱中培养1小时。向每个孔中加入1μCi[2-¹⁴C]-乙酸钠(Perkin Elmer，目录号：NEC085H001MC)后，再培养5小时。将每个孔中的培养基分别转移至15mL离心管(BD，目录号：352096)中，加入0.5mL的0.1M NaOH，反复吹洗细胞，并将其转移至新的离心管中。随后向每个离心管中加入1mL乙醇和0.17mL的50％KOH溶液，在90℃水浴中1小时。接着，使其冷却至室温，向每个离心管中加入5mL石油醚，颠倒数次进行混合，离心5分钟(Eppendorf，型号：5702，1000rpm)，丢弃上层有机相。向每个离心管中加入1mL浓盐酸，离心5分钟，转移4mL石油醚到玻璃管(18×180mm)中。将玻璃管中的样品在64℃下干燥，然后加入400μL点样液(三氯甲烷∶正己烷＝1∶1)使其溶解、重悬。用移液管(BIOHIT，型号：Proline Plus)吸取50μL溶解的样品，点样到Isoplate-96微孔板(Perkin Elmer，目录号：6005040)中，加入200μLULTIMA GOLD闪烁液(Perkin Elmer，目录号：77-16061)，放置5分钟。最后，用MicroBeta(PerkinElmer，型号：2450)读取闪烁信号。

数据分析：

选用XLFit 5.3.1.3(2006-2011 ID Business Solutions Limited)中的4参数逻辑模型或S形剂量响应模型(4Parameter Logistic Model or Sigmoidal Dose-ResponseModel)拟合IC₅₀：拟合＝(A+((B-A)/(1+((C/x)^D))))；其中x轴是化合物浓度的对数，y轴是CPM(每分钟计数)。

[2-¹⁴C]-乙酸结合测定的示例性结果在表3中列出。化合物编号对应于表1中的化合物编号。

表3.[2-¹⁴C]-乙酸结合测定的结果。

化合物编号	IC₅₀(μM)
		c-1	0.2317
c-3	0.0185
		c-3-1	0.0131
c-3-2	0.0180

由表3中可知，上表所列化合物，尤其化合物c-3、c-3-1和c-3-2具有良好的HepG2细胞抑制性能。本发明的其他化合物对HepG2细胞均具有好的抑制活性，具有与化合物c-3，c-3-1和c-3-2相当的IC₅₀值。

实施例11

化合物在大鼠体内的药代动力学评估

本实施例用于考察SD大鼠在静脉注射(iv)以及口服灌胃(po)给药条件下，本发明化合物和ND630在大鼠体内的药代动力学情况。除非特殊说明，否则所用实验试剂及仪器均为市售可得。ND630为吉利德乙酰基CoA羧化酶ACC抑制剂，其结构式如下：

化合物配制：以5％DMSO+5％Solutol HS 15+90％HP-β-CD(20％w/v)的生理盐水溶液作为溶剂，配制终浓度为0.4mg/mL的化合物用于静脉给药；终浓度为1mg/mL的化合物用于口服灌胃给药。

动物饲养与管理：选取6-8周龄且体重在180-250g之间的雄性SD大鼠，饲养于透明树脂塑料鼠笼中。大鼠给药前禁食过夜，至少禁食16小时，给药4小时后恢复饲料供应。

对于静脉注射给药组，给药剂量为2mg/kg，在给药后5min、15min、30min、1h、3h、5h、8h在颈静脉采集血样0.2mL。对于口服灌胃给药组，给药剂量为10mg/kg，在给药后15min、30min、1h、3h、5h、8h、12h、24h在颈静脉采集血样0.2mL；且在给药后的1h、3h和24h采集肝脏组织。

血液样品在采集后，以4000rpm(10分钟，4℃)迅速离心分离出血浆。肝脏组织样品在采集后，加入3倍体积甲醇∶水(1∶1，v/v)制备匀浆液。吸取50μL血浆或匀浆液样品，加入200μL内标(30ng/mL特非那定，乙腈)沉淀。在4℃，15400g离心10分钟，取上清液待分析。

采用LC-MS/MS方法检测目标化合物的浓度。根据血药浓度-时间曲线，使用WinNonlin7.0软件非房室模型(NCA)计算药代动力学参数，代表性化合物的药代动力学特性列于以下表4。分析结果表明，本发明化合物在大鼠体内具有良好的药代动力学性质，例如高生物利用度F(％)，高暴露量(AUC)及高肝血比(L/P)等。

表4.药代动力学结果

F％：生物利用度

C_max：一次给药后的最大血药浓度

T_max：达到最大血药浓度的时间

AUC：血浆药物浓度-时间曲线下的面积，药物吸收度

t_1/2：半衰期

V_SS：稳态表现分布容积

Cl：血液药物清除率

/>

Claims

1.一种化合物，或其药学上可接受的盐，所述的化合物为：

2.一种组合物，其特征在于，所述的组合物包含如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐。

3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物为药学上可接受的组合物。

4.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包含药学上可接受的载体。

5.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物的制剂是口服制剂或静脉内制剂。

6.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、或如权利要求2所述的组合物在用于制备药物方面中的用途，所述的药物抑制乙酰基-CoA羧化酶。

7.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、或如权利要求2所述的组合物在用于制备药物方面中的用途，所述的药物治疗由乙酰基-CoA羧化酶介导的病症。

8.如权利要求7所述的用途，所述的由乙酰基-CoA羧化酶介导的病症为代谢病、癌症和/或非酒精性脂肪性肝炎。

9.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述乙酰基-CoA羧化酶包括乙酰基-CoA羧化酶1和乙酰基-CoA羧化酶2中的一种或多种。

10.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述代谢病包括肥胖症、血脂异常和高血脂症中的一种或多种。

11.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述癌症包括肝癌、胆管癌、血管肉瘤、血管内皮瘤、黑素瘤、脂肪肉瘤、肺癌、乳癌、前列腺癌、白血病、肾癌、食道癌、脑癌、淋巴瘤和结肠癌中的一种或多种。

12.如权利要求11所述的用途，其特征在于，所述肝癌的细胞为HepG2细胞。