CN114568386A - 建立慢性银屑病炎症动物模型的方法 - Google Patents
建立慢性银屑病炎症动物模型的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114568386A CN114568386A CN202210187079.8A CN202210187079A CN114568386A CN 114568386 A CN114568386 A CN 114568386A CN 202210187079 A CN202210187079 A CN 202210187079A CN 114568386 A CN114568386 A CN 114568386A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mouse
- hair
- psoriasis
- chronic
- days
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 title claims abstract description 79
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 52
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 title claims abstract description 33
- 238000011645 inflammation animal model Methods 0.000 title claims abstract description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims abstract description 72
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 claims abstract description 44
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims abstract description 43
- DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N imiquimod Chemical compound C1=CC=CC2=C3N(CC(C)C)C=NC3=C(N)N=C21 DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 37
- 229960002751 imiquimod Drugs 0.000 claims abstract description 36
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims abstract description 33
- 238000010171 animal model Methods 0.000 claims abstract description 20
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000000465 moulding Methods 0.000 claims abstract description 7
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims abstract description 6
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 claims description 25
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 claims description 25
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 18
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 claims description 17
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 13
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 8
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 8
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 claims description 6
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 6
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 4
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 3
- 230000001185 psoriatic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003973 paint Substances 0.000 claims 1
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 13
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 abstract description 9
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 abstract description 9
- 230000037380 skin damage Effects 0.000 abstract description 8
- 230000007774 longterm Effects 0.000 abstract description 7
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 abstract description 5
- 230000007547 defect Effects 0.000 abstract description 4
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 abstract 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 11
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 8
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 4
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 4
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 4
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 description 3
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 description 3
- 102000013264 Interleukin-23 Human genes 0.000 description 3
- 108010065637 Interleukin-23 Proteins 0.000 description 3
- 241000669298 Pseudaulacaspis pentagona Species 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 230000031774 hair cycle Effects 0.000 description 3
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 description 3
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 206010000349 Acanthosis Diseases 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 206010013954 Dysphoria Diseases 0.000 description 2
- 208000005775 Parakeratosis Diseases 0.000 description 2
- 108010060825 Toll-Like Receptor 7 Proteins 0.000 description 2
- 108010060752 Toll-Like Receptor 8 Proteins 0.000 description 2
- 102100039390 Toll-like receptor 7 Human genes 0.000 description 2
- 102100033110 Toll-like receptor 8 Human genes 0.000 description 2
- 208000038016 acute inflammation Diseases 0.000 description 2
- 230000006022 acute inflammation Effects 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000035617 depilation Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 2
- 208000031648 Body Weight Changes Diseases 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 102000039989 IL-17 family Human genes 0.000 description 1
- 108091069193 IL-17 family Proteins 0.000 description 1
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 description 1
- 206010040844 Skin exfoliation Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000010398 acute inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 229940060265 aldara Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000004579 body weight change Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000005482 chemotactic factor Substances 0.000 description 1
- 230000012085 chronic inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002951 depilatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000035618 desquamation Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000004475 gamma-delta t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 1
- 108010074109 interleukin-22 Proteins 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000013309 psoriasis mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/02—Breeding vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
一种建立慢性银屑病炎症动物模型的方法，包括如下步骤：步骤S1，将建模小鼠，按照标准饲养方式饲养；步骤S2，在准备造模的前两天，将小鼠背部按区域分为至少两部分，先将第一部分毛发脱去后，采用咪喹莫特乳膏均匀涂抹，连用5天停用2天为一个周期，第二个周期将结束时小鼠第一部分的毛发有再次长出迹象，将小鼠背部第二部毛发脱去，同样的方法继续涂抹；以此类推，建立银屑病慢性炎症动物模型。长期连续外用咪喹莫特乳膏银屑病皮损会逐渐稳定或减轻，本发明通过间断外用法避免了这一缺陷，有效地模拟银屑病在人体慢性反复的发病过程，减轻小鼠脱水及体重减轻状况，有效地建立了银屑病慢性炎症动物模型。
Description
技术领域
本发明涉及建立模型的方法，具体的说是建立慢性银屑病炎症动物模型的方法。
背景技术
银屑病是一种常见、慢性、免疫介导的系统性疾病，以患部表面覆盖鳞屑性红斑或斑块为主要表现，严重影响患者的生活质量，是世界卫生组织及皮肤研究领域重点研究疾病之一。银屑病动物模型有助于探究其潜在发病机制，是药物疗效评价的重要工具。目前，对于银屑病的实验性动物研究主要采用的是62.5mg的5% 咪喹莫特乳膏涂抹小鼠背部皮肤7-8天制备一个短期的急性炎症模型，该方法虽然能很好的模仿银屑病在人体的发病机制及临床表现，但它存在较大缺点：
一是没有办法模拟银屑病在人体慢性反复的发病过程，且不能利用该急性炎症模型研究银屑病所引起的系统性疾病。
二是5%咪喹莫特乳膏是Toll样受体7/8激动剂，激活固有免疫系统导致中性粒细胞、γδT细胞在皮损浸润，产生炎症因子、趋化因子等，促进或加重银屑病样皮损改变，长期连续使用，背部皮损会逐渐稳定或减轻，引起小鼠脱水及体重减轻，可致小鼠死亡，连续长期外用不能作为银屑病的慢性观察模型。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提出一种建立慢性银屑病炎症动物模型的方法，包括如下步骤：
步骤S1，将建模小鼠，按照标准饲养方式饲养；
进一步的，所述步骤S1还包括将小鼠分组的步骤，将步骤S1中小鼠分为两组，第一组为对照组CON，不做任何处理；第二组为实验组IMQ；
进一步的，将建模小鼠，饲养在在恒温（22℃）与恒湿（40-60%）环境中，光照周期为12小时黑暗/12小时光照循环，自由喂养水和标准动物饲料喂养。
本发明将建模小鼠，饲养在在恒温（22℃）与恒湿（40-60%）环境中，防止出现烦躁、躁动，从而影响建模。
本发明采用对建模小鼠，光照周期为12小时黑暗/12小时光照循环，能够更好的模拟自然环境，防止出现烦躁、躁动，从而影响建模。
进一步的，所述小鼠为6-7周C57BL/6雌性小鼠，SPF级。
C57BL/6鼠不仅易于繁殖、体格健壮，通过研究更是发现咪喹莫特诱导C57BL/6鼠出现的表型比其他品系更接近人类银屑病疾病基因谱，本发明选用C57BL/6鼠，能够更好的模拟银屑病在人体慢性反复的发病过程。
6-7周C57BL/6鼠处于青春后期，机体发育已成熟，免疫系统完善，本发明选用6-7周C57BL/6鼠，其免疫系统能够识别和清除外来入侵的抗原，识别和清除体内发生突变的肿瘤细胞、衰老细胞、死亡细胞或其他有害的成分，还能通过自身免疫耐受和免疫调节使免疫系统内环境保持稳定，能够更好的模拟银屑病在人体慢性反复的发病过程。
雌鼠性格较雄鼠温顺，更配合实验人员进行实验操作操作。本发明选用6-7周C57BL/6雌鼠，能够使得造模过程更加安全。
步骤S2，在准备造模的前两天，将小鼠背部按区域分为至少两部分，先将第一部分毛发脱去后，采用咪喹莫特乳膏均匀涂抹连用5天停用2天为一个周期；
第2个周期将结束时（造模第九天左右）小鼠第一部分的毛发有再次长出迹象，将小鼠背部的第二部毛发脱去，同样的方法继续涂抹；以此类推，建立银屑病慢性炎症动物模型。
本发明通过间断外用方法，有效地建立了银屑病慢性炎症动物模型。本发明方法有效地模拟银屑病在人体慢性反复的发病过程，避免了连续长期外用咪喹莫特乳膏导致的建模鼠背部皮损逐渐稳定或减轻，从而无法成为银屑病的慢性观察模型的缺陷，减轻脱水及体重减轻状况。
进一步的，步骤S2中，将小鼠背部分为不同的部分，对脱去毛发的区域，采用45 mg-55 mg的5%咪喹莫特乳膏均匀涂抹，较佳的采用50mg 的5%咪喹莫特乳膏均匀涂抹，连用5天停用2天为一个周期，连续涂抹两个周期。
申请人通过实验发现，采用45 mg -55 mg小剂量5%咪喹莫特乳膏均匀涂抹背部不仅能诱导出银屑病样皮损，剂量比造急性模型使用的62.5mg剂量更安全，小鼠死亡率极低。
较佳的，经反复实验发现，采用50mg小剂量5%咪喹莫特乳膏均匀涂抹背部不仅能较好的诱导出银屑病样皮损，而且50mg的剂量比造急性模型使用的62.5mg剂量更安全，小鼠死亡率极低。
采用50mg小剂量5%咪喹莫特乳膏均匀涂抹C57BL/6小鼠背部后，C57BL/6小鼠在脱毛的5-6天局部皮肤开始变黑，第9-11天局部可见新毛长出，第20天左右皮肤开始变成粉红色。本发明将小鼠背部按区域分为不同部分，当第一部分毛发长出时，诱导其它部分皮肤出现银屑病皮损，完美的避开了小鼠的毛发生长周期对银屑病造模的影响。间断涂抹5%咪喹莫特乳膏，很好的模拟了银屑病慢性反复的发病过程。
本发明连用5天停用2天为一个周期。长期连续外用咪喹莫特乳膏会引起小鼠免疫耐受，出现银屑病皮损减轻或消失，小鼠因严重脱水体重减轻，死亡率较高，外用咪喹莫特乳膏第3天小鼠皮肤就会出现红斑，第5天红斑上出现白色鳞屑覆盖皮肤厚度增加，连用5天停用2天，既能诱导出小鼠出现银屑病样皮损，又可有恢复期避免了长期使用所造成的严重脱水死亡，能更好的模拟银屑病慢性反复的发病过程。
较佳的，步骤S2中，在准备造模的前两天，将小鼠背部按区域分为上下两部分，先将上部毛发脱去后，采用咪喹莫特乳膏均匀涂抹连用5天停用2天为一个周期；
第2个周期将结束时（造模第九天左右）待小鼠上部的毛发有再次长出迹象时，将小鼠背部下部毛发脱去，同样的方法继续涂抹；建立银屑病慢性炎症动物模型。
本发明将小鼠背部按区域分为上下两部分，先将上部毛发脱去后，采用咪喹莫特乳膏均匀涂抹，待小鼠上部的毛发有再次长出迹象时，再将小鼠背部下部毛发脱去，同样的方法继续涂抹，有效避免小鼠本身毛发生长周期对造模的影响。
较佳的，还可以将小鼠背部按区域分为左、右三部分，将小鼠背部按区域分为左、右两部分进行逐步均匀涂抹咪喹莫特乳膏，能够较好的模拟银屑病在人体慢性反复的发病过程。
较佳的，步骤S2中，在准备造模的前两天，将小鼠背部按区域分为上、中、下三部分，先将上部毛发脱去后，采用咪喹莫特乳膏均匀涂抹；
待小鼠背部上部的毛发有再次长出迹象时，将小鼠背部中部毛发脱去，同样的方法继续涂抹；
待小鼠背部中部的毛发有再次长出迹象时，将小鼠背部下部毛发脱去，同样的方法继续涂抹；建立银屑病慢性炎症动物模型。
本发明将小鼠背部按区域分为上、中、下三部分，当上部毛发长出时，诱导中部皮肤出现银屑病皮损，当中部毛发长出时，诱导下部皮肤出现银屑病皮损，不仅完美的避开了小鼠的毛发生长周期对银屑病造模的影响，使得小鼠长期且稳定的维持银屑病状态，能更好的模拟银屑病在人体慢性反复的发病过程。
较佳的，还可以将小鼠背部按区域分为左、中、右三部分，将小鼠背部按区域分为左、中、右三部分进行逐步均匀涂抹咪喹莫特乳膏，能够更好的模拟银屑病在人体慢性反复的发病过程。
进一步的，还包括步骤S3，验证慢性银屑病炎症动物模型是否成功复制银屑病；
采用改良的银屑病皮损面积和严重程度指数mPASI评分标准评价小鼠背部皮损严重程度，给出mPASI分值；
组织病理学染色检测小鼠皮损组织病理学变化，酶联免疫吸附试验ELISA法检测血清中炎性指标IL-6、TNF-α水平；
当mPASI分值大于3分，和实验组IMQ的血清IL-6水平高于对照组CON的血清IL-6水平，以及实验组IMQ的血清TNF-α水平高于对照组CON的血清TNF-α水平时，慢性银屑病炎症动物模型有效。
有益效果：一方面，本发明通过间断外用方法有效地模拟银屑病在人体慢性反复的发病过程，避免了连续长期外用咪喹莫特乳膏导致的建模鼠背部皮损逐渐稳定或减轻，引起小鼠脱水及体重减轻，致小鼠死亡，无法制作银屑病的慢性观察模型的缺陷。有效地建立了银屑病慢性炎症动物模型。另一方面，本发明操作简单、易于复制、经济、适宜在普通的实验室进行推广应用，小鼠死亡率极低、因脱水造成的体重减轻影响较小，体重增长整体趋势是上升的，且可以长期且稳定的维持银屑病状态，避开了C57BL/6小鼠毛发生长周期的影响，为研究银屑病系统影响研究提供了一个良好的实验模型。
附图说明
图1为实施例1实验组小鼠背部显示的皮损图；
图2为实施例1mPASI评分对比图；
图3为实施例1小鼠血清IL-6水平；
图4为实施例1小鼠血清TNF-α水平；
图5为实施例1实施技术图；
图6为实施例1小鼠模型体重变化图；
图7为实施例1mPASI评分表。
具体实施方式
实施例1：
所用的实验动物为购自于南京医科大学实验动物中心的C57BL/6品系雌性小鼠（6-7周），被饲养在在温度(22°C)、湿度（50-70%）可控的通风环境，有适当的光暗循环(12小时光/12小时暗循环)。本研究中动物实验方案均由南京医科大学动物管理和伦理委员会批准。
饲养3天适应期后进行正式实验。
制备银屑病慢性炎症模型实施技术路线，如图5所示；
将小鼠分为两组，一组为对照组（CON），不做任何处理；一组为实验组（IMQ）。
实验组在准备造模的前两天，将小鼠背部分为上下两部分，将上部毛发轻柔手法脱去，后采用50mg5%咪喹莫特乳膏（IMQ, Aldara, 3M Health Care Limited,Loughborough, UK）均匀涂抹，连用5天停用2天为一个周期。两个周期后小鼠上部的毛发有再次长出迹象，将小鼠背部的下部毛发脱去，同样的方法继续涂抹，制备银屑病慢性炎症模型。
（1）检测小鼠模型皮损
采用照相机拍照方法记录小鼠皮损变化，如图1所示，实验组小鼠背部显示出典型的银屑病样皮损，皮肤厚度增加，红斑上覆以白色鳞屑，组织病理图显示角化不全、棘层增厚、炎症细胞浸润等慢性炎症特征。
依据改良银屑病样皮损面积和严重程度指数(mPASI)评分标准，对小鼠皮损处红斑、鳞屑及浸润增厚程度计分，三者积分相加为总积分。PASI评分标准：0分，无；1分，轻度；2分，中度；3分，重度；4分，极重度。
严重程度指数(mPASI)评分标准见图7 mPASI评分表。
经过评分，实施例1实验结果如图2所示。
当mPASI分值大于3分时，银屑病样皮损被认定已出现，如图2统计所示，咪喹莫特乳膏间断外用制备银屑病样慢性模型其皮损在造模期间稳定存在。
（2）采用ELISA法检测小鼠血清IL-6、TNF-α水平
实验方法按实施例1，IL-6、TNF-α的水平在人类银屑病发病机制中是升高的，且它的水平升高，说明机体处于炎症状态，ELISA法检测小鼠血清IL-6、TNF-α水平。
小鼠血清IL-6检测结果如3所示；小鼠血清TNF-α水平检测结果如4所示。
实验结果表明：实验组小鼠血清IL-6、TNF-α水平比对照组高，且差异有统计学意义（p＜0.5），实验组小鼠机体处于慢性炎症状态。
（3）检测小鼠模型体重变化
实验方法按实施例1，分别在第0天、第2天、第4天等每隔2天称量小鼠体重。小鼠体重变化如图6所示。
结果表明：实验组小鼠在造模期间体重有波动，但是总体趋势仍是上升的，间断用药小鼠耐受较好，并没有因脱水而造成严重的体重下降。
实施例2：咪喹莫特乳膏是Toll样受体7/8激动剂，应用于小鼠皮肤引起红斑、脱屑、角质形成增殖伴棘层肥厚、角化不全、免疫细胞浸润，该表型诱导涉及 IL-17/IL-23 轴细胞因子（例如，IL-17A、IL-17F、IL-22 和 IL-23）并且部分依赖于 IL-23、IL-17 家族细胞因子和 T淋巴细胞的存在。所有这些特征与人类银屑病疾病发展模式一致。外用咪喹莫特乳膏被视为一种方便且易于操作的急性炎症反应银屑病小鼠模型的方法，长期连续使用引起免疫耐受，皮损减轻或消失，目前没有使用咪喹莫特乳膏构建一个慢性炎症反应银屑病模型的方法。
本实施例提供一种慢性炎症反应银屑病模型构建方法，采用的是间断外用方法，包括如下步骤：
第一步：6-7周C57BL/6雌性小鼠，SPF级，标准饲养方式饲养。分为两组，一组为对照组（CON），不做任何处理；一组为实验组（IMQ）。
C57BL/6鼠易于繁殖、体格健壮，是免疫学、生理学等最常用的实验动物品系，已有数据证明咪喹莫特诱导C57BL/6出现的表型比其他品系更接近人类银屑病疾病基因谱，所以本发明选用了C57BL/6。6-7周C57BL/6鼠处于青春后期，机体发育已成熟，免疫系统完善，雌鼠性格较雄鼠温顺，更配合实验人员进行实验操作操作。
第二步：实验组在准备造模的前两天，将小鼠背部分为上下两部分，先将上部用电动刀轻柔剃去长毛发，脱毛膏脱去剩余毛发，后采用50mg 的5%咪喹莫特乳膏均匀涂抹，连用5天停用2天为一个周期。两个周期后小鼠上部的毛发有再次长出迹象，将小鼠背部的下部毛发脱去，同样的方法继续涂抹，制备银屑病慢性炎症模型。
实验证明50mg小剂量5%咪喹莫特乳膏均匀涂抹背部也能诱导出银屑病样皮损，且50mg的剂量比造急性模型使用的62.5mg剂量更安全，小鼠死亡率极低。C57BL/6小鼠在脱毛的5-6天局部皮肤开始变黑，第9-11天局部可见新毛长出，第20天左右皮肤开始变成粉红色。我们将小鼠背部分为上下两部分，当上部毛发长出时，诱导下部皮肤出现银屑病皮损，完美的避开了小鼠的毛发生长周期对银屑病造模的影响。间断涂抹5%咪喹莫特乳膏，很好的模拟了银屑病慢性反复的发病过程。连用5天停用2天为一个周期，长期连续外用咪喹莫特乳膏会引起小鼠免疫耐受，出现银屑病皮损减轻或消失，小鼠因严重脱水体重减轻，死亡率较高，外用咪喹莫特乳膏第3天小鼠皮肤就会出现红斑，第5天红斑上出现白色鳞屑覆盖皮肤厚度增加，连用5天停用2天，既能诱导出小鼠出现银屑病样皮损，又可有恢复期避免了长期使用所造成的严重脱水死亡，也很好模拟银屑病慢性反复的发病过程。
第三步：验证此模型是否成功复制银屑病。采用改良的银屑病皮损面积和严重程度指数（mPASI）评分评价小鼠背部皮损严重程度，mPASI评分法已广泛用于评价小鼠的银屑病皮损面积及严重程度。组织病理学染色检测小鼠皮损组织病理学变化，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清中炎性指标IL-6、TNF-α水平。
Claims (7)
1.一种建立慢性银屑病炎症动物模型的方法，其特征在于包括如下步骤：
步骤S1，将建模小鼠，按照标准饲养方式饲养；
步骤S2，在准备造模的前两天，将小鼠背部按区域分为至少两部分，先将第一部分毛发脱去后，采用咪喹莫特乳膏均匀涂抹；小鼠第一部分的毛发有再次长出迹象，将小鼠背部的第二部毛发脱去，同样的方法继续涂抹；以此类推，建立银屑病慢性炎症动物模型。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
所述步骤S1还包括将小鼠分组的步骤，将步骤S1中小鼠分为两组，第一组为对照组CON，不做任何处理；第二组为实验组IMQ；
还包括步骤S3，验证慢性银屑病炎症动物模型是否成功复制银屑病；
采用改良的银屑病皮损面积和严重程度指数mPASI评分标准评价小鼠背部皮损严重程度，给出mPASI分值；
组织病理学染色检测小鼠皮损组织病理学变化，酶联免疫吸附试验ELISA法检测血清中炎性指标IL-6、TNF-α水平；
当mPASI分值大于3分，和实验组IMQ的血清IL-6水平高于对照组CON的血清IL-6水平，以及实验组IMQ的血清TNF-α水平高于对照组CON的血清TNF-α水平时，慢性银屑病炎症动物模型有效。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
步骤S2中，将小鼠背部分为不同的部分，对脱去毛发的区域，采用50mg 的5%咪喹莫特乳膏均匀涂抹，连用5天停用2天为一个周期，连续涂抹两个周期。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于： 所述小鼠为6-7周C57BL/6雌性小鼠，SPF级。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：将建模小鼠，饲养在在恒温22℃与恒湿40%-60%环境中，光照周期为12小时黑暗、12小时光照循环，自由喂养水和标准动物饲料喂养。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S2，在准备造模的前两天，将小鼠背部按区域分为上下两部分，先将上部毛发脱去后，采用咪喹莫特乳膏均匀涂抹，连用5天停用2天为一个周期；
第2个周期将结束时待小鼠上部的毛发有再次长出迹象，将小鼠背部下部毛发脱去，同样的方法继续涂抹；建立银屑病慢性炎症动物模型。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S2，在准备造模的前两天，将小鼠背部按区域分为上、中、下三部分，先将上部毛发脱去后，采用咪喹莫特乳膏均匀涂抹；
待小鼠背部上部的毛发有再次长出迹象时，将小鼠背部中部毛发脱去，同样的方法继续涂抹；
待小鼠背部中部的毛发有再次长出迹象时，将小鼠背部下部毛发脱去，同样的方法继续涂抹；建立银屑病慢性炎症动物模型。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210187079.8A CN114568386B (zh) | 2022-02-28 | 2022-02-28 | 建立慢性银屑病炎症动物模型的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210187079.8A CN114568386B (zh) | 2022-02-28 | 2022-02-28 | 建立慢性银屑病炎症动物模型的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114568386A true CN114568386A (zh) | 2022-06-03 |
| CN114568386B CN114568386B (zh) | 2022-09-16 |
Family
ID=81777451
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210187079.8A Active CN114568386B (zh) | 2022-02-28 | 2022-02-28 | 建立慢性银屑病炎症动物模型的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114568386B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104335970A (zh) * | 2013-08-05 | 2015-02-11 | 应哲康 | 一种构建人银屑病小鼠模型的方法及其应用 |
| WO2020144538A1 (en) * | 2019-01-07 | 2020-07-16 | Enzychem Lifesciences Corporation | Compositions and methods for modulating an inflammatory response |
| CN112533628A (zh) * | 2019-07-19 | 2021-03-19 | 广州新创忆药物临床研究有限公司 | 含溶菌酶的药物组合物及其应用 |
| CN215584885U (zh) * | 2021-06-03 | 2022-01-21 | 中南大学湘雅医院 | 一种搭载咪喹莫特用于小鼠银屑病模型构建的药贴 |
| CN114708975A (zh) * | 2022-03-23 | 2022-07-05 | 三峡大学 | 非诊断目的的小鼠背部银屑病模型构建后的评估方法 |
-
2022
- 2022-02-28 CN CN202210187079.8A patent/CN114568386B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104335970A (zh) * | 2013-08-05 | 2015-02-11 | 应哲康 | 一种构建人银屑病小鼠模型的方法及其应用 |
| WO2020144538A1 (en) * | 2019-01-07 | 2020-07-16 | Enzychem Lifesciences Corporation | Compositions and methods for modulating an inflammatory response |
| CN112533628A (zh) * | 2019-07-19 | 2021-03-19 | 广州新创忆药物临床研究有限公司 | 含溶菌酶的药物组合物及其应用 |
| CN215584885U (zh) * | 2021-06-03 | 2022-01-21 | 中南大学湘雅医院 | 一种搭载咪喹莫特用于小鼠银屑病模型构建的药贴 |
| CN114708975A (zh) * | 2022-03-23 | 2022-07-05 | 三峡大学 | 非诊断目的的小鼠背部银屑病模型构建后的评估方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 诸蓉: "Vγ4+γδ+T细胞对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮炎的影响研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士)医药卫生科技辑》 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114568386B (zh) | 2022-09-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Joven et al. | Model systems for regeneration: salamanders | |
| Teunissen et al. | Composition of innate lymphoid cell subsets in the human skin: enrichment of NCR+ ILC3 in lesional skin and blood of psoriasis patients | |
| Martin | The evolution of human reproduction: a primatological perspective | |
| Bergler-Czop et al. | Pro-inflammatory cytokines in patients with various kinds of acne treated with isotretinoin | |
| Do Carmo et al. | Animal energetics in extensive grazing systems: rationality and results of research models to improve energy efficiency of beef cow-calf grazing Campos systems | |
| O'Brien et al. | Cytokine expression by invariant natural killer T cells is tightly regulated throughout development and settings of type-2 inflammation | |
| Benghiat et al. | Interleukin 17–producing T helper cells in alloimmunity | |
| CN114568386B (zh) | 建立慢性银屑病炎症动物模型的方法 | |
| Al-Kawmani et al. | Developmental changes in testicular interstitium in the Najdi Ram Lambs | |
| Manuelian et al. | Multi-breed herd approach to detect breed differences in composition and fatty acid profile of cow milk | |
| da Silva et al. | IL-17 Induction by ArtinM is Due to Stimulation of IL-23 and IL-1 Release and/or Interaction with CD3 in CD4+ T Cells | |
| KR20210021358A (ko) | 약제학적 피부과 조성물 및 그 용도 | |
| CN109432128A (zh) | 牙髓间充质干细胞在银屑病治疗中的应用 | |
| Vieira et al. | Re-emergence of Chorioptes bovis (Acari: Psoroptidae) in cattle in the state of Rio Grande do Sul, Brazil | |
| CN103583440A (zh) | 一种快速物理辨别太门哲罗鲑成熟卵子优劣的方法 | |
| Lara et al. | Duration of spermatogenesis and daily sperm production in the rodent Proechimys guyannensis | |
| Marvin et al. | Courtship behavior of the Cumberland Plateau woodland salamander, Plethodon kentucki (Amphibia: Plethodontidae), with a review of courtship in the genus Plethodon | |
| CN107182901B (zh) | 一种基于产蛋数最多的地方鸡生长发育规律的研究方法 | |
| CN114708975A (zh) | 非诊断目的的小鼠背部银屑病模型构建后的评估方法 | |
| Elnasharty et al. | Histogenesis of rabbit vallate papillae | |
| Mohamed et al. | Microscopic anatomy of Sertoli and Leydig cells during fetal development in baladi rabbit | |
| CN117204397A (zh) | 一种银屑病动物模型的建立方法 | |
| Randelia et al. | ‘Bare’, a new hairless mutant in the mouse—genetics and histology | |
| CN109536443A (zh) | 间充质干细胞、细胞培养基和培养方法及应用 | |
| CN115226673B (zh) | 一种银屑病动物模型的构建方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |