CN114502241A - 抗半乳凝素-9抗体和化疗剂的联合癌症疗法 - Google Patents

Abstract

用于实体瘤的联合疗法，包括结合人半乳凝素‑9的抗体(抗‑Gal9抗体，如G9.2‑17)和一种或多种化疗剂(如，吉西他滨、紫杉醇或其组合)。

Description

抗半乳凝素-9抗体和化疗剂的联合癌症疗法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2019年8月1日提交的美国临时申请号62/881,894和于2020年5月1日提交的PCT申请号PCT/US2020/031181的权益，其整体内容通过引用并入本文。

发明背景

半乳凝素-9是串联重复凝集素，由两个碳水化合物识别结构域(CRD)组成，1997年首次发现和描述于霍奇金淋巴瘤(HL)患者中(Tureci等人,J.Biol.Chem.1997,272,6416-6422)。存在三种同等型，可位于细胞内或细胞外。已在许多各种不同癌症中观测到升高的半乳凝素-9水平，包括黑素瘤、霍奇金淋巴瘤、肝细胞癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌和透明细胞肾细胞癌(Wdowiak等人Int.J.Mol.Sci.2018,19,210)。在肾癌中，具有高半乳凝素-9表达的患者表现出更晚期的疾病进展和更大的肿瘤尺寸(Kawashima等人；BJU Int.2014；113:320-332)。在黑素瘤中，半乳凝素-9在57％的肿瘤中表达，并且与健康对照相比，在晚期黑素瘤患者的血浆中显著增加(Enninga等人,Melanoma Res.2016 Oct；26(5):429-441)。大量研究表明半乳凝素-9作为预后标志物的效用，以及最近作为潜在的新药靶点的效用(Enninga等人,2016；Kawashima等人BJU Int 2014；113:320–332；Kageshita等人,Int JCancer.2002 Jun 20；99(6):809-16,以及其中的参考文献)。

已描述半乳凝素-9在许多细胞过程中发挥重要作用，如粘附、癌细胞聚集、细胞凋亡和趋化性。最近研究表明，半乳凝素-9在支持肿瘤的免疫调节中发挥作用，例如，通过负调节Th1型应答、Th2极化和巨噬细胞向M2表型的极化。这项工作还包括表明半乳凝素-9通过与T细胞免疫球蛋白和粘蛋白3(TIM-3)受体相互作用参与T细胞直接失活的研究(Dardalhon等人,J Immunol.,2010,185,1383-1392；Sanchez-Fueyo等人,Nat Immunol.,2003,4,1093-1101)。

还发现半乳凝素-9在将极化T细胞分化为肿瘤抑制性表型，以及促进耐受原性巨噬细胞编程和适应性免疫抑制方面发挥作用(Daley等人,Nat Med.,2017,23,556-567)。在胰腺导管腺癌(PDA)的小鼠模型中，已表明阻断肿瘤微环境(TME)中先天免疫细胞上存在的半乳凝素-9和受体Dectin-1之间的检查点相互作用可增加TME中的抗肿瘤免疫反应并减缓肿瘤进展(Daley等人,Nat Med.,2017,23,556-567)。还发现半乳凝素-9还与M2型巨噬细胞的表面标志物CD206结合，导致巨噬细胞衍生趋化因子CVL22(MDC)的分泌减少，其与肺癌更长的生存期和更低的复发风险相关(Enninga等人,J Pathol.2018Aug；245(4):468-477)。

发明概述

本公开基于观测到动物模型中涉及示例性抗半乳凝素-9抗体(如，G9.2-17(IgG4))和化疗剂(如，吉西他滨和紫杉醇，例如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇或nab-紫杉醇)的联合疗法的协同效应的意外发现。

因此，本文提供了治疗实体瘤的方法，涉及共同使用抗半乳凝素-9抗体(如，G9.2-17或其功能性变体)和一种或多种化疗剂(如，吉西他滨、紫杉醇如蛋白结合型紫杉醇(如，nab-紫杉醇或

)，或其组合)。

在一些实施方案中，本文公开的用于治疗实体瘤的方法可包括向有需要的受试者施用有效量的结合人半乳凝素-9的抗体(抗-Gal9抗体)。抗半乳凝素-9抗体可具有与抗体G9.2-17相同的重链互补决定区(CDR)和相同的轻链CDR。受试者可能正在接受包含一种或多种化疗剂的抗癌疗法。

在一些实施方案中，本文公开的治疗实体瘤的方法可包括向有需要的受试者施用有效量的结合人半乳凝素-9的抗体(抗-Gal9抗体)和有效量的一种或多种化疗剂。抗-Gal9抗体可具有与抗体G9.2-17相同的重链互补决定区(CDR)和相同的轻链CDR。

在一些实施方案中，本文公开的治疗实体瘤的方法可包括向有需要的受试者施用有效量的一种或多种化疗剂。受试者可能正在接受包括结合人半乳凝素-9的抗体(抗-Gal9抗体)的疗法，该抗体具有与抗体G9.2-17相同的重链互补决定区(CDR)和相同的轻链CDR。

本文公开的任何方法都可用于治疗转移性实体瘤。在一些示例中，实体瘤是胰腺导管腺癌(PDAC)，如转移性PDAC。

在一些实施方案中，本文公开的任何方法中涉及的一种或多种化疗剂可包括抗代谢物(如，核苷类似物)、微管抑制剂、或其组合。在一些示例中，核苷类似物是吉西他滨和/或微管蛋白抑制剂是紫杉醇，例如纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇(如，

)。

在一些实施方案中，将抗半乳凝素-9抗体以约0.5mg/kg至约32mg/kg(如，约0.5mg/kg至约16mg/kg、约2mg/kg至约32mg/kg或约2mg/kg至约16mg/kg)的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，将抗半乳凝素-9抗体每周一次施用于受试者。在一些实施方案中，将抗半乳凝素-9抗体每2或3周一次施用于受试者。在一些实施方案中，将抗半乳凝素-9抗体以选自2mg/kg、4mg/kg、8mg/kg、12mg/kg或16mg/kg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，抗体每2周一次施用。在一些实施方案中，将抗半乳凝素-9抗体以选自2mg/kg、4mg/kg、8mg/kg、12mg/kg或16mg/kg的剂量每2周一次施用于受试者。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体每2周一次施用1个周期，每2周一次施用2个周期，每2周一次施用3个周期，每2周一次施用4个周期，或每2周一次施用超过4个周期。在一些实施方案中，治疗持续时间为0至3个月、0至6个月、3至6个月、6至12个月、12至24个月或更久。在一些实施方案中，治疗持续时间为12至24个月或更久。在一些实施方案中，周期延长3个月至6个月、或6个月至12个月、或12个月至24个月或更久的持续时间。在一些实施方案中，周期长度被修改，例如，暂时或永久地修改为更长的持续时间，如3周或4周。在任何这些实施方案中，将抗半乳凝素-9抗体每周一次、每2周一次、每3周一次或每4周一次施用于受试者。在一些实施方案中，将抗半乳凝素-9抗体通过静脉内输注施用于受试者。在一些实施方案中，癌症是PDA。在一些实施方案中，癌症是转移性癌症。

在一些实施方案中，可将抗-Gal9抗体以约0.5mg/kg至约32mg/kg的剂量每2周一次通过静脉内注射施用于受试者。在一些示例中，将抗-Gal9抗体以约0.5mg/kg的剂量每2周一次通过静脉内注射施用于受试者。在一些实施方案中，可将抗-Gal9抗体以约2mg/kg至约16mg/kg的剂量每2周一次通过静脉内注射施用于受试者。在一些示例中，将抗-Gal9抗体以约2mg/kg的剂量每2周一次通过静脉内注射施用于受试者。在一些示例中，将抗-Gal9抗体以约4mg/kg的剂量每2周一次通过静脉内注射施用于受试者。在一些示例中，将抗-Gal9抗体以约8mg/kg的剂量每2周一次通过静脉内注射施用于受试者。在一些示例中，将抗-Gal9抗体以约12mg/kg的剂量每2周一次通过静脉内注射施用于受试者。在一些示例中，将抗-Gal9抗体以约16mg/kg的剂量每2周一次通过静脉内注射施用于受试者。在一些示例中，将抗-Gal9抗体以约32mg/kg的剂量每2周一次通过静脉内注射施用于受试者。

在一些实施方案中，该方法包括28天的周期，其中将抗-Gal9抗体在第1天和第15天施用于受试者，以及将吉西他滨和紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天施用于受试者。在一些示例中，将紫杉醇以125mg/m²静脉内施用于受试者。在一些示例中，将吉西他滨以1000mg/m²施用于受试者。

在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含如SEQ ID NO:1所示的轻链互补决定区1(CDR1)、如SEQ ID NO:2所示的轻链互补决定区2(CDR2)、和如SEQ ID NO:3所示的轻链互补决定区3(CDR3)，和/或包含如SEQ ID NO:4所示的重链互补决定区1(CDR1)、如SEQ IDNO:5所示的重链互补决定区2(CDR2)、和如SEQ ID NO:6所示的重链互补决定区3(CDR3)。

在一些实施方案中，抗-Gal9抗体可包含：包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的重链可变区(V_H)，和包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)。在一些示例中，抗-Gal9抗体可以是IgG分子，如IgG4分子。在具体示例中，抗-Gal9抗体可包含：包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链。

在一些实施方案中，待通过本文公开的任何方法治疗的受试者可以是人类患者。在一些示例中，受试者具有半乳凝素-9阳性癌细胞或免疫细胞。可在源自受试者的肿瘤类器官中检测到这样的半乳凝素-9阳性癌细胞或免疫细胞。在一些示例中，受试者可具有相对于对照值升高的半乳凝素-9水平。例如，受试者可能具有相对于对照值升高的半乳凝素-9的血清或血浆水平。

在一些实施方案中，受试者可能已接受至少一种(line)系统性抗癌疗法。可选择地或另外地，受试者可能没有涉及吉西他滨和/或紫杉醇的先前疗法。在一些示例中，受试者可能在施用抗-Gal9抗体之前至少6个月已接受涉及吉西他滨和/或紫杉醇的先前疗法。

在本文公开的任何方法中，在治疗之前、期间和/或之后检测受试者中以下特征中的一项或多项：(a)来自受试者的血液样品中的一种或多种肿瘤标志物，任选地其中所述一种或多肿瘤标志物包括CA15-3、CA-125、CEA、CA19-9和/或甲胎蛋白，以及任何其他肿瘤类型特异性肿瘤标志物；(b)细胞因子谱；和(c)半乳凝素-9血清/血浆水平，(d)外周血单核细胞免疫表型分析，(e)肿瘤组织活检/切除标本多重免疫表型分析，(f)肿瘤组织活检/切除标本半乳凝素-9表达水平和模式，(g)任何其他免疫评分测试，如：PDL-1免疫组化、肿瘤突变负荷(TMB)、肿瘤微卫星不稳定状态，以及系列(panels)，如：

-HalioDx、ImmunoSeq-Adaptive Biotechnologies、在NanoString

基因表达系统上开发的TIS、18基因签名、PanCancer IO 360^TM assay(NanoString Technologies)等。还可检测对靶肿瘤特异的其他合适的生物标志物。

本文公开的任何方法还可包括监测受试者中一种或多种不良反应的发生。示例性不良反应包括但不限于肝损伤、血液毒性、神经毒性、皮肤毒性、胃肠道毒性或其组合。当观测到一种或多种不良反应时，本文公开的方法还可进一步包括减少抗-Gal9抗体的剂量、一种或多种化疗剂的剂量、或两者。例如，当在受试者中观测到适度至严重肝损伤时，该方法可进一步包括减少抗-Gal9抗体的剂量、吉西他滨的剂量、紫杉醇的剂量、或其组合。

在一些示例中，当受试者具有的天冬氨酸转氨酶(AST)水平高于10倍的正常上限(ULN)、胆红素水平高于5倍的ULN、或两者时，停止施用紫杉醇。在一些实施方案中，该方法可进一步包括当观测到严重的血液毒性、神经毒性、皮肤毒性和/或胃肠道毒性时，减少抗-Gal9抗体、吉西他滨、紫杉醇、或其组合的施用剂量或终止施用抗-Gal9抗体、吉西他滨、紫杉醇、或其组合。

在一些示例中，紫杉醇的剂量可减少到100mg/m²至75mg/m²。可选择地或另外地，吉西他滨的剂量减少到800mg/m²至600mg/m²。

在本公开的范围内还包括用于治疗实体瘤(如，PDAC)的包含任何抗-Gal9抗体和一种或多种化疗剂的药物组合物，以及抗-Gal9抗体和一种或多种化疗剂的组合在制备用于治疗实体瘤的药物中的用途。

本发明的一个或多个实施方案的细节在以下描述中阐述。本发明的其他特征或优点从以下附图和几个实施方案的详细描述以及从所附权利要求中将是明显的。

附图简述

以下附图构成本说明书的一部分并被包括在内以进一步说明本公开的某些方面，通过参考附图并结合本文所述具体实施方案的详细描述可更好地理解这些方面。

图1A至图1D包括显示按治疗方案分组的原位mPA6115胰腺癌异种移植小鼠模型的Kaplan-Meier生存曲线和对数秩(log rank)检验的图。组1＝未治疗；组2＝化疗剂媒介物对照，盐水；组3＝同种型IgG1小鼠；组4＝抗-Gal9 mAb；组5＝吉西他滨/Abraxane；以及组6＝抗-Gal9 mAb和吉西他滨/Abraxane。图1A显示所有6组的生存曲线。图1B显示组1、5和6的生存曲线。图1C显示组1、4和6的生存曲线。图1D显示组1、4、5和6的生存曲线。

图2包括显示从cox回归分析计算的组4至6分别相对组1、组2和组3的风险比(HR)及其95％置信区间(％95CI)的图，其中组1＝未治疗的原位mPA6115小鼠；组2＝化疗剂媒介物对照，盐水治疗的原位mPA6115小鼠；组3＝同种型IgG1小鼠治疗的原位mPA6115小鼠；组4＝抗-Gal9 mAb治疗的原位mPA6115小鼠；组5＝吉西他滨/Abraxane治疗的原位mPA6115小鼠；以及组6＝抗-Gal9mAb和吉西他滨/Abraxane治疗的原位mPA6115小鼠。

图3包括在研究期间每周2次测量的每个治疗组的平均体重图，其中组1＝未治疗的原位mPA6115小鼠；组2＝化疗剂媒介物对照，盐水治疗的原位mPA6115小鼠；组3＝同种型IgG1小鼠治疗的原位mPA6115小鼠；组4＝抗-Gal9mAb治疗的原位mPA6115小鼠；组5＝吉西他滨/Abraxane治疗的原位mPA6115小鼠；以及组6＝抗-Gal9 mAb和吉西他滨/Abraxane治疗的原位mPA6115小鼠。

发明详述

本文提供了共同使用抗半乳凝素-9抗体(如，G9.2-17)和化疗剂(如，吉西他滨和紫杉醇，例如蛋白结合型紫杉醇，如纳米颗粒白蛋白缀合型紫杉醇，例如

)治疗实体瘤(如，胰腺癌(PDA))的方法。在一些实施方案中，实体瘤是转移性的。在一些实施方案中，本文公开的方法提供特定剂量和/或给药时间表。在一些情况下，本文公开的方法针对特定患者群体，例如，已接受过先前治疗并在先前治疗中显示疾病进展的患者，或对先前治疗有抗性(从头或获得性)的患者。

半乳凝素-9是串联重复凝集素，一种β-半乳糖苷结合蛋白，已被证明在调节细胞-细胞和细胞-基质相互作用中发挥作用。发现它在霍奇金病组织和其他病理状态中强烈过表达。在某些情况下，还发现它在肿瘤微环境(TME)中循环。

半乳凝素-9与Dectin-1相互作用，Dectin-1是先天免疫受体，高度表达于PDA中的巨噬细胞上以及癌细胞上(Daley,等人Nat Med.2017；23(5):556-6)。无论半乳凝素-9的来源如何，已证明破坏其与Dectin-1的相互作用会导致CD4⁺和CD8⁺细胞重编程为抗肿瘤免疫必不可少的介导物。因此，半乳凝素-9可用作有价值的治疗靶点，用于阻断由Dectin-1介导的信号传导。因此，在一些实施方案中，本文所述抗半乳凝素-9抗体破坏半乳凝素-9和Dectin-1之间的相互作用。

半乳凝素-9还与TIM-3相互作用，TIM-3是I型细胞表面糖蛋白，表达于所有种类的急性髓性白血病(M3(急性早幼粒细胞白血病)除外)的白血病干细胞表面上，但在正常人造血干细胞(HSC)中不表达。已发现由半乳凝素-9连接产生的TIM-3信号传导对免疫细胞具有多重效应，诱导Th1细胞凋亡(Zhu等人,Nat Immunol.,2005,6:1245-1252)并刺激分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，导致单核细胞成熟为树突细胞，由先天免疫引起炎症(Kuchroo等人,Nat Rev Immunol.,2008,8:577-580)。已发现进一步的半乳凝素-9/TIM-3信号传导可共同激活NF-κB和β-连环蛋白信号传导，这两种途径促进LSC自我更新(Kikushige等人,CellStem Cell,2015,17(3):341-352)。干扰半乳凝素-9/TIM-3结合的抗半乳凝素-9抗体可能具有治疗效果，特别是对于白血病和其他血液恶性肿瘤。因此，在一些实施方案中，本文所述抗半乳凝素-9抗体破坏半乳凝素-9和TIM-3之间的相互作用。

此外，半乳凝素-9与CD206相互作用从而促进肿瘤生存(Enninga等人,JPathol.2018 Aug；245(4):468-477)，CD206是高度表达于M2极化巨噬细胞上的甘露糖受体。表达CD206的肿瘤相关巨噬细胞是肿瘤免疫抑制、血管生成、转移和复发的介导物(参见，例如Scodeller等人,Sci Rep.2017 Nov 7；7(1):14655，以及其中的参考文献)。具体地，M1(又被称为经典活化巨噬细胞)由Th1相关的细胞因子和细菌产物触发，表达高水平的IL-12，并且具有杀肿瘤作用。相比之下，M2(所谓替代活化巨噬细胞)被Th2相关因子激活，表达高水平的抗炎细胞因子如IL-10，并促进肿瘤进展((Biswas和Mantovani；NatImmunol.2010 Oct；11(10):889-96)。M2的促肿瘤作用包括促进血管生成、促进侵袭和转移，以及保护肿瘤细胞免受化疗诱导的细胞凋亡(Hu等人,Tumour Biol.2015 Dec；36(12):9119–9126,以及其中的参考资料)。认为肿瘤相关巨噬细胞具有M2样表型并具有促肿瘤作用。已表明半乳凝素-9可介导骨髓细胞朝向M2表型分化(Enninga等人,Melanoma Res.2016Oct；26(5):429-41)。半乳凝素-9结合CD206可能导致TAM向M2表型重编程，与之前对于Dectin所显示的情况类似。不希望受理论束缚，阻断半乳凝素-9与CD206的相互作用可提供一种机制，通过该机制，抗半乳凝素-9抗体(如，G9.2-17抗体)可在治疗上有益。因此，在一些实施方案中，本文所述抗半乳凝素-9抗体破坏半乳凝素-9和CD206之间的相互作用。

还表明半乳凝素-9与蛋白二硫键异构酶(PDI)和4-1BB相互作用(Bi S,等人ProcNatl Acad Sci U S A.2011；108(26):10650-5；Madireddi等人J Exp Med.2014；211(7):1433-48)。

抗半乳凝素-9抗体可用作治疗剂用于治疗与半乳凝素-9相关的疾病(如，半乳凝素-9信号传导起作用的疾病)。不受理论束缚，抗半乳凝素-9抗体可阻断由半乳凝素-9介导的信号传导通路。例如，所述抗体可能会干扰半乳凝素-9与其结合伴侣(如，Dectin-1、TIM-3或CD206)之间的相互作用，从而阻断由半乳凝素-9/配体相互作用触发的信号传导。可选择地或另外地，抗半乳凝素-9抗体也可通过诱导阻断和/或细胞毒性发挥其治疗作用，例如针对表达半乳凝素-9的病理性细胞的ADCC、CDC或ADCP。病理性细胞是指直接或间接促成疾病启动和/或发展的细胞。

本文公开的抗半乳凝素-9抗体能够抑制由半乳凝素-9介导的信号传导(如，由半乳凝素-9/Dectin-1或半乳凝素-9/Tim-3介导的信号传导途径)或通过如ADCC消除表达半乳凝素-9的病理性细胞。因此，本文所述抗半乳凝素-9抗体可用于抑制任何的半乳凝素-9信号传导和/或消除半乳凝素-9阳性病理性细胞，从而有益于治疗与半乳凝素-9相关的疾病。参见，例如，WO2019/084553、PCT/US2020/024767和PCT/US2020/031181，为了本文所引用的目的和主题，各个相关公开内容通过引用并入。

如本文所报告，在本文公开的动物模型中代表性抗-Gal9抗体(G9.2-17)和化疗剂(吉西他滨和nab-紫杉醇)的联合疗法成功地延长了生存期。在动物模型中观测到代表性抗-Gal9抗体与吉西他滨和nab-紫杉醇对生存时间的协同作用。这些结果表明本文公开的抗肿瘤方法，涉及抗半乳凝素-9抗体和化疗剂(如本文公开的那些)的组合，针对靶实体瘤将实现比单独的抗体或化学疗法更优越的治疗功效。

因此，本文描述了抗半乳凝素-9抗体和化疗剂用于治疗本文公开的某些实体瘤的治疗用途。

与半乳凝素-9结合的抗体

本公开提供了用于本文公开治疗方法的抗半乳凝素-9抗体G9.2-17及其功能性变体。

抗体(复数形式可互换使用)是免疫球蛋白分子，能够通过位于免疫球蛋白分子可变区的至少一个抗原识别位点特异性结合靶标，如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等。如本文所用，术语“抗体”，如抗半乳凝素-9抗体，不仅包括完整(如，全长)多克隆或单克隆抗体，还包括其抗原结合片段(如，Fab、Fab'、F(ab')2、Fv)、单链(scFv)、其突变体、包含抗体部分的融合蛋白、人源化抗体、嵌合抗体、双抗体、纳米抗体、线性抗体、单链抗体、多特异性抗体(如，双特异性抗体)和包含所需特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其他修饰构型，包括抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体和共价修饰的抗体。抗体，如抗半乳凝素-9抗体，包括任何种类的抗体，如IgD、IgE、IgG、IgA或IgM(或其亚类)，并且抗体不必是任何特定种类的。根据抗体重链恒定结构域的氨基酸序列，免疫球蛋白可分为不同的类别。免疫球蛋白有五种主要类别：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中一些可进一步分为亚类(同种型)，如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同类别免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的。

典型的抗体分子包含重链可变区(V_H)和轻链可变区(V_L)，它们通常参与抗原结合。V_H和V_L区可进一步细分为高变区，又被称为“互补决定区”(“CDR”)，其中散布着更保守的区域，被称为“框架区”(“FR”)。每个V_H和V_L通常由三个CDR和四个FR组成，从氨基末端到羧基末端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。框架区和CDR的范围可使用本领域已知的方法来精确识别，例如通过Kabat定义、Chothia定义、AbM定义、EU定义、“Contact”编号方案、“IMGT”编号方案、“AHo”编号方案和/或Contact定义，所有这些都是本领域公知的。参见，例如Kabat,E.A.,等人(1991)Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,Fifth Edition,U.S.Department of Health and Human Services,NIHPublication No.91-3242,Chothia等人,(1989)Nature 342:877；Chothia,C.等人(1987)J.Mol.Biol.196:901-917,Al-lazikani等人(1997)J.Molec.Biol.273:927-948；Edelman等人,Proc Natl Acad Sci U S A.1969 May；63(1):78-85；和Almagro,J.Mol.Recognit.17:132-143(2004)；MacCallum等人,J.Mol.Biol.262:732-745(1996),Lefranc M P等人,Dev Comp Immunol,2003 January；27(1):55-77；以及Honegger A和Pluckthun A,J Mol Biol,2001 Jun.8；309(3):657-70.还参见hgmp.mrc.ac.uk andbioinf.org.uk/abs)。

在一些实施方案中，本文所述抗半乳凝素-9抗体是全长抗体，其包含两条重链和两条轻链，每条包括可变结构域和恒定结构域。可选择地，抗半乳凝素-9抗体可以是全长抗体的抗原结合片段。包含在全长抗体的术语“抗原结合片段”内的结合片段的示例包括(i)Fab片段，由V_L、V_H、C_L和C_H1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')₂片段，包括在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由V_H和C_H1结构域组成的Fd片段；(iv)Fv片段，由抗体单臂的V_L和V_H结构域组成；(v)dAb片段(Ward等人,(1989)Nature 341:544-546)，由V_H结构域组成；以及(vi)保留功能的分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个结构域V_L和V_H由不同基因编码，但它们可使用重组方法通过合成接头连接，从而使它们能够形成单一蛋白链，其中V_L和V_H区配对形成被称为单链Fv(scFv)的单价分子。参见，例如Bird等人(1988)Science 242:423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883。

本文所述任何抗体，如抗半乳凝素-9抗体，可以是单克隆或多克隆的。“单克隆抗体”是指均质性的抗体群，“多克隆抗体”是指异质性的抗体群。这两个术语不限制抗体的来源或其制备方式。

参考抗体G9.2-17是指能够与人半乳凝素-9结合的抗体，包含SEQ ID NO:7的重链可变区和SEQ ID NO:8的轻链可变区，二者均在以下提供。在一些实施方案中，用于本文公开方法的抗半乳凝素-9抗体为G9.2-17抗体。在一些实施方案中，用于本文公开方法的抗半乳凝素-9抗体为具有与参考抗体G9.2-17相同的重链互补决定区(CDR)和/或与参考抗体G9.2-17相同的轻链互补决定区的抗体。具有相同V_H和/或V_L CDR的两种抗体意味着当通过相同方法(如，本领域已知的Kabat方法、Chothia方法、AbM方法、Contact方法或IMGT方法。参见，例如bioinf.org.uk/abs/)确定时，它们的CDR是相同的。

参考抗体G9.2-17的重链和轻链CDR在下表1中提供(使用Kabat方法确定)：

表1.G9.2-17的重链和轻链CDR

在一些示例中，用于本文所公开方法的抗半乳凝素-9抗体可包含(按照Kabat方案)如SEQ ID NO：4所示的重链互补决定区1(CDR1)，如SEQ ID NO:5所示的重链互补决定区2(CDR2)和如SEQ ID NO:6所示的重链互补决定区3(CDR3)和/或可包含如SEQ ID NO:1所示的轻链互补决定区1(CDR1)，如SEQ ID NO:2所示的轻链互补决定区2(CDR2)，如SEQ ID NO:3所示的轻链互补决定区3(CDR3)。抗半乳凝素-9抗体，包括参考抗体G9.2-17，可以是本文公开的任何形式，如全长抗体或Fab。本文使用的术语“G9.2-17(Ig4)”是指作为IgG4分子的G9.2-17抗体。同样，术语“G9.2-17(Fab)”是指作为Fab分子的G9.2-17抗体。

在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体或其结合部分包含重链和轻链可变区，其中轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列分别与如SEQ ID NO:1、2和3所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列具有至少80％(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％及其中的任何增量)的序列同一性。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体或其结合部分包含重链和轻链可变区，其中重链可变区CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列分别与如SEQ ID NO：4、5和6所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列具有至少80％(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％和其中的任何增量)的序列同一性。

在共同拥有的共同未决美国专利申请16/173,970和共同拥有的共同未决国际专利申请PCT/US18/58028和PCT/US2020/024767中描述了其他半乳凝素-9抗体，如与半乳凝素-9的CRD1和/或CRD2区结合，这些申请的各自内容通过引用以其整体并入本文。

在一些实施方案中，本文公开的抗半乳凝素-9抗体包含与参考抗体G9.2-17的相应V_L CDR相比单独或总体上具有至少80％(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％以及其中的任何增量)的序列同一性。可选择地或另外地，在一些实施方案中，抗半凝集素9抗体包含与参考抗体G9.2-17的相应V_H CDR相比单独或总体上具有至少80％(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％以及其中的任何增量)的序列同一性。

两个氨基酸序列的“同一性百分比”使用以下的算法确定：Karlin和AltschulProc.Natl.Acad.Sci.USA 87:2264-68,1990,改进于Karlin和AltschulProc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-77,1993。这种算法被纳入Altschul,等人J.Mol.Biol.215:403-10,1990的NBLAST和XBLAST程序(2.0版)。BLAST蛋白质搜索可用XBLAST程序进行，得分＝50，字长＝3，以获得与本发明的蛋白质分子同源的氨基酸序列。在两个序列之间存在缺口的情况下，可使用Altschul等人,Nucleic Acids Res.25(17):3389-3402,1997所述的Gapped BLAST。当使用BLAST和Gapped BLAST程序时，可使用各个程序(如，XBLAST和NBLAST)的默认参数。

在其他实施方案中，本文所述抗半乳凝素-9抗体包含：包含HC CDR1、HC CDR2和HCCDR3的V_H，它们相对于参考抗体G9.2-17的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3总体上包含多达8个氨基酸残基变异(8、7、6、5、4、3、2或1个变异，包括添加、缺失和/或替代)。可选择地或另外地，在一些实施方案中，本文所述抗半乳凝素-9抗体包含：包含LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3的V_H，它们相对于参考抗体G9.2-17的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3总体上包含多达8个氨基酸残基变异(8、7、6、5、4、3、2或1个变异，包括添加、缺失和/或取代)。

在一个示例中，氨基酸残基变异是保守氨基酸残基取代。如本文所用，“保守氨基酸取代”是指不改变进行氨基酸取代的蛋白质的相对电荷或大小特征的氨基酸取代。可根据本领域普通技术人员已知的改变多肽序列的方法来制备变体，例如见于汇编此类方法的参考文献，例如，Molecular Cloning:A Laboratory Manual,J.Sambrook,等人编,SecondEdition,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York,1989,或Current Protocols in Molecular Biology,F.M.Ausubel,等人编,John Wiley&Sons,Inc.,New York。氨基酸的保守置换包括在以下组内的氨基酸之间进行的取代：(a)M,I,L,V；(b)F,Y,W；(c)K,R,H；(d)A,G；(e)S,T；(f)Q,N；和(g)E,D。

在一些实施方案中，具有本文公开的重链CDR的本文公开的抗半乳凝素-9抗体，包含来源自种系V_H片段的亚类的框架区。这种种系V_H区在本领域中是众所周知的。例如，参见IMGT数据库(www.imgt.org)或www.vbase2.org/vbstat.php。示例包括IGHV1亚家族(如，IGHV1-2、IGHV1-3、IGHV1-8、IGHV1-18、IGHV1-24、IGHV1-45、IGHV1-46、IGHV1-58和IGHV1-69)、IGHV2亚家族(如，IGHV2-5、IGHV2-26和IGHV2-70)、IGHV3亚家族(如，IGHV3-7、IGHV3-9、IGHV3-11、IGHV3-13、IGHV3-15、IGHV3-20、IGHV3-21、IGHV3-23、IGHV3-30、IGHV3-33、IGHV3-43、IGHV3-48、IGHV3-49、IGHV3-53、IGHV3-64、IGHV3-66、IGHV3-72和IGHV3-73、IGHV3-74)、IGHV4亚家族(如，IGHV4-4、IGHV4-28、IGHV4-31、IGHV4-34、IGHV4-39、IGHV4-59、IGHV4-61和IGHV4-B)、IGHV亚家族(如，IGHV5-51或IGHV6-1)、以及IGHV7亚家族(如，IGHV7-4-1)。

可选择地或另外地，在一些实施方案中，具有本文公开的轻链CDR的抗半乳凝素-9抗体，包含来源自种系Vκ片段的框架区。示例包括IGKV1框架(如，IGKV1-05、IGKV1-12、IGKV1-27、IGKV1-33或IGKV1-39)、IGKV2框架(如，IGKV2-28)、IGKV3框架(如，IGKV3-11、IGKV3-15或IGKV3-20)和IGKV4框架(如，IGKV4-1)。在其他情况下，抗半乳凝素-9抗体包含轻链可变区，该轻链可变区包含来源自种系Vλ片段的框架。示例包括IGλ1框架(如，IGλV1-36、IGλV1-40、IGλV1-44、IGλV1-47、IGλV1-51)、IGλ2框架(如，IGλV2-8、IGλV2-11、IGλV2-14、IGλV2-18、IGλV2-23)、IGλ3框架(如，IGλV3-1、IGλV3-9、IGλV3-10、IGλV3-12、IGλV3-16、IGλV3-19、IGλV3-21、IGλV3-25、IGλV3-27)、IGλ4框架(如，IGλV4-3、IGλV4-60、IGλV4-69)、IGλ5框架(如，IGλV5-39、IGλV5-45)、IGλ6框架(如，IGλV6-57)、IGλ7框架(如，IGλV7-43、IGλV7-46)、IGλ8框架(如，IGλV8-61)、IGλ9框架(如，IGλV9-49)、或IGλ10框架(如，IGλV10-54)。

在一些实施方案中，用于本文公开的方法的抗半乳凝素-9抗体可以是具有与参考抗体G9.2-17相同的重链可变区(V_H)和/或相同的轻链可变区(V_L)的抗体，所述V_H和V_L区氨基酸序列如下：

V_H:

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSSSIHWVRQAPGKGLEWVAYISSSSGYTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYWSYPSWWPYRGMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:7)

V_L:

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSSTDPITFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:8)

在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体与SEQ ID NO:7的重链可变区具有至少80％的序列同一性(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性)。可选择地或另外地，抗半乳凝素-9抗体与SEQ ID NO:8的轻链可变区具有至少80％的序列同一性(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性)。

在一些情况下，本文公开的抗半乳凝素-9抗体是参考抗体G9.2-17的功能性变体。功能性变体可在结构上与参考抗体相似(如，在如本文公开的G9.2-17的一个或多个重链和/或轻链CDR中，或相对于G9.2-17的重链和/或轻链CDR的序列同一性，或在如本文公开的G9.2-17的VH和/或VL中，包含有限数量的氨基酸残基变异)，具有对人抗半乳凝素-9的基本相似的结合亲和力(如，具有相同量级的KD值)。

在一些实施方案中，如本文所述的抗半乳凝素-9抗体可结合半乳凝素-9并抑制半乳凝素-9的活性至少20％(如，31％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、或更高，包括其中的任何增量)。表观抑制常数(Ki^app或K_i,app)提供了对抑制剂效力的度量，其与降低酶活性所需的抑制剂浓度有关，与酶浓度无关。本文所述抗半乳凝素-9抗体的抑制活性可通过本领域已知的常规方法确定。

抗体的Ki^app值可通过测量不同浓度的抗体对反应程度(如，酶活性)的抑制作用来确定；将伪一级速率常数(v)的变化作为抑制剂浓度的函数拟合到改进的莫里森(Morrison)方程(方程1)产生表观Ki值的估计值。对于竞争性抑制剂，Ki^app可从Ki^app对底物浓度图的线性回归分析中提取的y截距获得。

其中A等于v_o/E，在没有抑制剂(I)的情况下酶促反应的初始速度(v_o)除以总酶浓度(E)。在一些实施方案中，本文所述抗半乳凝素-9抗体对于靶抗原或抗原表位的Ki^app值为1000、900、800、700、600、500、400、300、200、100、50、40、30、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5pM或更少。在一些实施方案中，相对于第二靶标(如，半乳凝素-9的CRD1)，抗半乳凝素-9抗体对第一靶标(如，半乳凝素-9的CRD2)具有较低的Ki^app。Ki^app的差异(如，为了特异性或其他比较)可以是至少1.5、2、3、4、5、10、15、20、37.5、50、70、80、91、100、500、1000、10,000或10⁵倍。在一些示例中，抗半乳凝素-9抗体相对于第二抗原(如，同一第一蛋白质的第二构象或其模拟物；或第二种蛋白质)更多地抑制第一抗原(如，第一蛋白质的第一构象或其模拟物)。在一些实施方案中，任何抗半乳凝素-9抗体进一步亲和成熟以降低抗体对靶抗原或其抗原表位的Ki^app。

在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体抑制Dectin-1信号传导，例如在肿瘤浸润性免疫细胞如巨噬细胞中。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体抑制由半乳凝素-9触发的Dectin-1信号传导至少30％(如，31％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更高，包括其中的任何增量)。这种抑制活性可通过常规方法确定，如常规测定法。可选择地或另外地，抗半乳凝素-9抗体抑制由半乳凝素-9启动的T细胞免疫球蛋白粘蛋白3(TIM-3)信号传导。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体抑制T细胞免疫球蛋白粘蛋白3(TIM-3)信号传导，如在肿瘤浸润性免疫细胞中，例如，在一些实施方案中抑制至少30％(如，31％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更高，包括其中的任何增量)。这种抑制活性可通过常规方法确定，如常规测定法。

在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体抑制CD206信号传导，例如在肿瘤浸润性免疫细胞中。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体抑制由半乳凝素-9触发的CD206信号传导至少30％(如，31％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更高，包括其中的任何增量)。这种抑制活性可通过常规方法确定，如常规测定法。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体将半乳凝素-9与CD206的结合阻断或阻止至少30％(如，31％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更高，包括其中的任何增量)。这种抑制活性可通过常规方法确定，如常规测定法。

在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体在表达半乳凝素-9的靶细胞中诱导细胞细胞毒性如ADCC，例如，其中靶细胞是癌细胞或免疫抑制性免疫细胞。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体在免疫细胞(如，T细胞)或癌细胞中诱导细胞凋亡至少30％(如，31％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更大，包括其中的任何增量)。这种抑制活性可通过常规方法确定，如常规测定法。在一些实施方案中，本文所述任何抗半乳凝素-9抗体诱导细胞毒性，如针对表达半乳凝素-9的靶细胞的补体依赖性细胞毒性(CDC)。

抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)是抗体通过吞噬作用介导其部分或全部作用的重要作用机制。在这种情况下，抗体介导抗原呈递细胞对特定抗原的摄取。ADCP可由单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和树突细胞通过FcγRIIa、FcγRI和FcγRIIIa介导，其中巨噬细胞上的FcγRIIa(CD32a)是主要途径。

在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体诱导靶细胞，例如表达半乳凝素-9的癌细胞或免疫抑制性免疫细胞的细胞吞噬作用(ADCP)。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体使靶细胞(如，癌细胞或免疫抑制性免疫细胞)的吞噬作用增加至少30％(如，31％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更高，包括其中的任何增量)。

在一些实施方案中，本文所述抗半乳凝素-9抗体诱导针对靶细胞，如癌细胞或免疫抑制性免疫细胞的细胞毒性，如补体依赖性细胞毒性(CDC)。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体使针对靶细胞的CDC增加至少30％(例如，31％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更高，包括其中的任何增量)。

在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体诱导T细胞活化，如在肿瘤浸润性T细胞中，即直接或间接阻抑半乳凝素-9介导的T细胞活化抑制。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体促进T细胞活化至少30％(如，31％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更高，包括其中的任何增量)。T细胞活化可通过常规方法确定，如测定法(如，测量CD44、TNFα、IFNγ和/或PD-1)。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体促进CD4+细胞活化至少30％(如，31％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、或更高，包括其中的任何增量)。在非限制性示例中，抗半乳凝素抗体诱导CD4+细胞中的CD44表达。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体使CD4+细胞中的CD44表达增加至少30％(如，31％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更高，包括其中的任何增量)。在非限制性示例中，抗半乳凝素抗体诱导CD4+细胞中的IFNγ表达。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体使CD4+细胞中的IFNγ表达增加至少30％(如，31％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更高，包括其中的任何增量)。在非限制性示例中，抗半乳凝素抗体诱导CD4+细胞中的TNFα表达。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体使CD4+细胞中的TNFα表达增加至少30％(如，31％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更高，包括其中的任何增量)。

在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体促进CD8+细胞活化至少30％(如，31％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更高，包括其中的任何增量)。在非限制性示例中，抗半乳凝素抗体诱导CD8+细胞中的CD44表达。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体使CD8+细胞中的CD44表达增加至少30％(如，31％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更高，包括其中的任何增量)。在非限制性示例中，抗半乳凝素抗体诱导CD8+细胞中的IFNγ表达。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体使CD8+细胞中的IFNγ表达增加至少30％(如，31％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更高，包括其中的任何增量)。在非限制性示例中，抗半乳凝素抗体诱导CD8+细胞中的TNFα表达。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体使CD8+细胞中的TNFα表达增加至少30％(如，31％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更高，包括其中的任何增量)。

在一些实施方案中，本文所述抗-半乳凝素-9抗体对靶抗原(如，半乳凝素-9)或其抗原表位具有合适的结合亲和力。如本文所用，“结合亲和力”是指表观结合常数或K_A。K_A是解离常数(K_D)的倒数。本文所述抗半乳凝素-9抗体对靶抗原或抗原表位可具有至少10^-5、10^-6、10^-7、10^-8、10^-9、10^-10M或更低的结合亲和力(K_D)。增加的结合亲和力对应于减少的K_D。结合亲和力(或结合特异性)可通过多种方法确定，包括平衡透析、平衡结合、凝胶过滤、ELISA、表面等离子体共振或光谱学(如，使用荧光测定)。用于评估结合亲和力的示例性条件是在HBS-P缓冲液(10mM HEPES pH7.4、150mM NaCl、0.005％(v/v)表面活性剂P20)中。

这些技术可用于测量结合的结合蛋白的浓度作为靶蛋白浓度的函数。在某些条件下，结合的结合蛋白的分数浓度([结合的]/[总的])通常与总靶蛋白浓度([靶标])相关，公式如下：

[结合的]/[总的]＝[靶标]/(Kd+[靶标])

然而，并不总是需要精确测定K_A，因为有时获得亲和力的定量测量值就足够了，例如，使用诸如ELISA或FACS分析的方法确定的亲和力与K_A成正比，因此可用于比较，例如确定较高的亲和力是否例如高2倍，以获得亲和力的定性测量，或获得亲和力的推断，例如，通过在功能测定法如体外或体测定中的活性。在一些情况下，体外结合测定表明体内活性。在其他情况下，体外结合测定不一定表明体内活性。在某些情况下，紧密结合是有益的，但在其他情况下，在体内并不期望紧密结合，而是更期望结合亲和力较低的抗体。

在一些实施方案中，本文所述任何抗半乳凝素-9抗体的重链进一步包含重链恒定区(CH)或其部分(如，CH1、CH2、CH3或其组合)。重链恒定区可以是任何合适的来源，如人、小鼠、大鼠或兔。在一个具体示例中，重链恒定区来自本文所述任何IgG亚家族的人IgG(γ重链)。

在一些实施方案中，本文所述抗体的重链恒定区包含恒定区(如，SEQ ID NO:10、12-14和21)的单结构域(如，CH1、CH2或CH3)或任何单结构域的组合。在一些实施方案中，本文所述抗体的轻链恒定区包含恒定区的单结构域(如，CL)。下面列出示例性的轻链和重链序列。下面列出示例性的轻链和重链序列。hIgG1 LALA序列包括两个突变，L234A和L235A(EU编号)，它们阻抑FcgR结合，以及P329G突变(EU编号)以消除补体C1q结合，从而消除所有免疫效应功能。hIgG4Fab臂交换突变序列包括阻抑Fab臂交换的突变(S228P；EU编号)。IL2信号序列(MYRMQLLSCIALSLALVTNS；SEQ ID NO:9)可位于可变区的N端。它用于表达载体中，在分泌过程中被切割，因此在成熟的抗体分子中没有。成熟蛋白质(分泌后)对于重链以“EVQ”开始，对于轻链以“DIM”开始。以下提供了示例性重链恒定区的氨基酸序列：

hIgG1重链恒定区(SEQ ID NO:10)

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK*

hIgG1 LALA重链恒定区(SEQ ID NO:12)

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK*

hIgG4重链恒定区(SEQ ID NO:13)

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK*

hIgG4重链恒定区(SEQ ID NO:20)

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*

hIgG4 mut重链恒定区(SEQ ID NO:14)

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK*

hIgG4 mut重链恒定区(SEQ ID NO:21)

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*

在一些实施方案中，具有以上任何重链恒定区的抗半乳凝素-9抗体与具有以下轻链恒定区的轻链配对：

轻链恒定区(SEQ ID NO:11)

TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

示例性全长抗半乳凝素-9抗体提供如下：

G9.2-17 hIgG1重链(SEQ ID NO:16)

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSSSIHWVRQAPGKGLEWVAYISSSSGYTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYWSYPSWWPYRGMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK*

G9.2-17 hIgG1 LALA重链(SEQ ID NO:17)

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSSSIHWVRQAPGKGLEWVAYISSSSGYTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYWSYPSWWPYRGMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK*

G9.2-17 hIgG4重链(SEQ ID NO:18)

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSSSIHWVRQAPGKGLEWVAYISSSSGYTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYWSYPSWWPYRGMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK*

G9.2-17 hIgG4重链(SEQ ID NO:22)

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSSSIHWVRQAPGKGLEWVAYISSSSGYTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYWSYPSWWPYRGMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*

G9.2-17 hIgG4 Fab臂交换mut重链(SEQ ID NO:19)

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSSSIHWVRQAPGKGLEWVAYISSSSGYTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYWSYPSWWPYRGMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK*

G9.2-17 hIgG4 Fab臂交换mut重链(SEQ ID NO:23)

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSSSIHWVRQAPGKGLEWVAYISSSSGYTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYWSYPSWWPYRGMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*

以上任何重链可与以下所示(SEQ ID NO:15)的轻链配对：

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSSTDPITFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*

在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含重链IgG1恒定区，其与SEQ ID NO:10具有至少80％(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％及其中的任何增量)的序列同一性。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体的恒定区包含含有SEQ ID NO:13的重链IgG1恒定区。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体的恒定区包含由SEQ ID NO:10组成的重链IgG4恒定区。

在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含重链IgG4恒定区，其与SEQ ID NO:13具有至少80％(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％及其中的任何增量)的序列同一性。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含含有SEQ IDNO:13的重链IgG4恒定区。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含由SEQ ID NO:13组成的重链IgG4恒定区。

在一些实施方案中，恒定区来自人IgG4。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含重链IgG4恒定区，其与SEQ ID NO:20具有至少80％(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％及其中的任何增量)的序列同一性。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含含有SEQ ID NO:20的重链IgG4恒定区。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含由SEQ ID NO:20组成的重链IgG4恒定区。

在任何这些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含与SEQ ID NO:11具有至少80％(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％及其中的任何增量)的序列同一性的轻链恒定区。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含含有SEQ IDNO:11的轻链恒定区。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含由SEQ ID NO:11组成的轻链恒定区。

在一些实施方案中，IgG是具有最小Fc受体接合的突变体。在一个示例中，恒定区来自人IgG1 LALA。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含重链IgG1恒定区，其与SEQID NO:12具有至少80％(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％及其中的任何增量)的序列同一性。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含含有SEQ ID NO:12的重链IgG1恒定区。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含由SEQID NO:12组成的重链IgG1恒定区。

在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含经修饰的恒定区。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含免疫惰性的经修饰的恒定区，例如，不触发补体介导的裂解，或不刺激抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。ADCC活性可使用美国专利号5,500,362中公开的方法进行评估。在其他实施方案中，恒定区如Eur.J.Immunol.(1999)29:2613-2624；PCT申请号PCT/GB99/01441；和/或UK专利申请号9809951.8中所述进行修饰。在一些实施方案中，IgG4恒定区是具有减少的重链交换的突变体。在一些实施方案中，恒定区来自人IgG4Fab臂交换突变体S228P。

在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体的恒定区包含重链IgG4恒定区，其与SEQID NO:14具有至少80％(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％及其中的任何增量)的序列同一性。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体的恒定区包含含有SEQ ID NO:14的重链IgG4恒定区。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体的恒定区包含由SEQ ID NO:14组成的重链IgG4恒定区。

在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含重链IgG4恒定区，其与SEQ ID NO:21具有至少80％(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％及其中的任何增量)的序列同一性。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含含有SEQ IDNO:21的重链IgG4恒定区。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含由SEQ ID NO:21组成的重链IgG4恒定区。

在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体具有对应于SEQ ID NO:15的轻链的链；并且示例性重链的氨基酸序列对应于SEQ ID NO:10(hIgG1)；12(hIgG1 LALA)；13(hIgG4)；20(hIgG4)；14(hIgG4 mut)；和21(hIgG4 mut)。

在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体具有包含SEQ ID NO:15、基本上由SEQ IDNO:15组成或由SEQ ID NO:15组成的轻链。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体具有包含选自SEQ ID NO:16-19、22和23的任何一种序列、基本上由选自SEQ ID NO:16-19、22和23的任何一种序列组成或由选自SEQ ID NO:16-19、22和23的任何一种序列组成的重链。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体具有包含SEQ ID NO:15、基本上由SEQ ID NO:15组成或由SEQ ID NO:15组成的轻链，以及包含选自SEQ ID NO:16-19的任何一种序列、基本上由选自SEQ ID NO:16-19的任何一种序列组成或由选自SEQ ID NO:16-19的任何一种序列组成的重链。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体具有包含SEQ ID NO:15的轻链和包含选自SEQID NO:16-19、22和23的任何一种序列的重链。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体具有基本上由SEQ ID NO:15组成的轻链和基本上由选自SEQ ID NO:16-19、22和23的任何一种序列组成的重链。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体具有由SEQ ID NO:15组成的轻链和由选自SEQ ID NO:16-19、22和23的任何一种序列组成的重链。在一个具体实施方案中，抗半乳凝素-9抗体具有基本上由SEQ ID NO:15组成的轻链和基本上由SEQ ID NO:19组成的重链。在另一具体实施方案中，抗半乳凝素-9抗体具有基本上由SEQ ID NO:15组成的轻链和基本上由SEQ ID NO:20组成的重链。

在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含与SEQ ID NO:16具有至少80％(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％及其中的任何增量)的序列同一性的重链序列。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含含有SEQ ID NO:16的重链序列。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含由SEQ ID NO:16组成的重链序列。

在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含与SEQ ID NO:17具有至少80％(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％及其中的任何增量)的序列同一性的重链序列。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含含有SEQ ID NO:17的重链序列。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含由SEQ ID NO:17组成的重链序列。

在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含与SEQ ID NO:18具有至少80％(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％及其中的任何增量)的序列同一性的重链序列。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含含有SEQ ID NO:18的重链序列。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含由SEQ ID NO:18组成的重链序列。

在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含与SEQ ID NO:22具有至少80％(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％及其中的任何增量)的序列同一性的重链序列。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含含有SEQ ID NO:22的重链序列。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含由SEQ ID NO:22组成的重链序列。

在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含与SEQ ID NO:19具有至少80％(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％及其中的任何增量)的序列同一性的重链序列。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含含有SEQ ID NO:19的重链序列。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含由SEQ ID NO:19组成的重链序列。

在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含与SEQ ID NO:23具有至少80％(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％及其中的任何增量)的序列同一性的重链序列。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含含有SEQ ID NO:23的重链序列。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含由SEQ ID NO:23组成的重链序列。

在任何这些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含与SEQ ID NO:15具有至少80％(如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％和其中的任何增量)的序列同一性的轻链序列。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含含有SEQ IDNO:15的轻链序列。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体包含由SEQ ID NO:15组成的轻链序列。

在具体示例中，在本文公开的治疗方法中使用的抗半乳凝素-9抗体具有SEQ IDNO:19的重链和SEQ ID NO:15的轻链。在一些实施方案中，在本文公开的治疗方法中使用的抗半乳凝素-9抗体是G9.2-17 IgG4。

抗半乳凝素-9抗体的制备

本文所述能够结合半乳凝素-9的抗体可通过本领域已知的任何方法制备，包括但不限于重组技术。下面提供了一个示例。

可将编码本文所述抗半乳凝素-9抗体的重链和轻链的核酸克隆到同一表达载体中，每个核苷酸序列与合适的启动子可操作地连接。在一个示例中，编码重链和轻链的每个核苷酸序列与不同的启动子可操作地连接。可选择地，编码重链和轻链的核苷酸序列可与单一启动子可操作地连接，使得重链和轻链都由同一启动子表达。必要时，可在重链和轻链编码序列之间插入内部核糖体进入位点(IRES)。

在一些示例中，将编码抗体两条链的核苷酸序列克隆到两个载体中，这两个载体可被引入相同或不同的细胞中。当两条链在不同细胞中表达时，它们中的每一条都可从表达它们的宿主细胞中分离出来，并且可将分离的重链和轻链混合并在允许形成抗体的合适条件下温育。

通常，可使用本领域已知的方法将编码抗体的一条或所有链的核酸序列克隆到合适的表达载体中，并与合适的启动子可操作地连接。例如，核苷酸序列和载体可在合适的条件下与限制性酶接触，以在每个分子上产生互补末端，这些末端可互相配对并通过连接酶连接在一起。可选择地，合成的核酸接头可连接到基因的末端。这些合成接头包含对应于载体中特定限制位点的核酸序列。表达载体/启动子的选择将取决于用于产生抗体的宿主细胞的类型。

多种启动子可用于表达本文所述的抗体，包括但不限于巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子、病毒LTR如劳斯肉瘤(Rous sarcoma)病毒LTR、HIV-LTR、HTLV-1 LTR、猿猴病毒40(SV40)早期启动子、大肠杆菌lac UV5启动子和单纯疱疹tk病毒启动子。

还可使用可调控的启动子。此类可调控启动子包括使用来自大肠杆菌的lac阻遏物作为转录调节剂来调节从带有lac操纵基因的哺乳动物细胞启动子的转录的那些启动子[Brown,M.等人,Cell,49:603-612(1987)]，使用四环素阻遏物(tetR)的那些启动子[Gossen,M.,and Bujard,H.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:5547-5551(1992)；Yao,F.等人,Human Gene Therapy,9:1939-1950(1998)；Shockelt,P.,等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,92:6522-6526(1995)]。其他系统包括FK506二聚体、使用雌二醇(astradiol)的VP16或p65、RU486、二酚米乐甾酮(diphenol murislerone)或雷帕霉素(rapamycin)。诱导型系统可获自Invitrogen、Clontech和Ariad。

可使用包括操纵子的阻遏物的可调控启动子。在一个实施方案中，来自大肠杆菌的lac阻遏物可充当转录调节剂来调控从携带lac操纵基因的哺乳动物细胞启动子的转录(M.Brown等人,Cell,49:603-612(1987)；Gossen and Bujard(1992)；M.Gossen等人,Natl.Acad.Sci.USA,89:5547-5551(1992))，结合四环素阻遏物(tetR)与转录激活物(VP16)来产生tetR-哺乳动物细胞转录激活因子融合蛋白tTa(tetR-VP 16)，使用源自人巨细胞病毒(hCMV)主要立即早期启动子的带有tetO的最小启动子，以形成tetR-tet操纵基因系统来控制哺乳动物细胞中的基因表达。在一个实施方案中，使用四环素诱导型开关。当四环素操纵基因正确位于CMVIE启动子的TATA元件下游时，单独的四环素阻遏物(tetR)而非tetR-哺乳动物细胞转录因子融合衍生物可充当有效的反式调节剂来调控哺乳动物细胞中的基因表达(Yao等人,Human Gene Therapy,10(16):1392-1399(2003))。这种四环素诱导型开关的一个特别优势是它不需要使用在某些情况下可能对细胞有毒的四环素阻遏物-哺乳动物细胞反式激活因子或阻遏物融合蛋白(Gossen等人,Natl.Acad.Sci.USA,89:5547-5551(1992)；Shockett等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,92:6522-6526(1995))，以实现其可调控的效果。

此外，载体可包含例如以下部分或全部：可选择的标志物基因，例如用于在哺乳动物细胞中选择稳定或瞬时转染子的新霉素基因；用于高水平转录的来自人CMV立即早期基因的增强子/启动子序列；用于使mRNA稳定的来自SV40的转录终止和RNA加工信号；用于适当附加体复制的SV40多瘤复制起点和ColE1；内部核糖体结合位点(IRES)，多功能多克隆位点；以及用于有义和反义RNA体外转录的T7和SP6RNA启动子。合适的载体和产生含有转基因的载体的方法是本领域所熟知的且可利用的。

可用于实施本文所述方法的多腺苷酸化信号的示例包括但不限于人胶原蛋白I多腺苷酸化信号、人胶原蛋白II多腺苷酸化信号和SV40多腺苷酸化信号。

可将包含编码任何抗体的核酸的一种或多种载体(如，表达载体)引入合适的宿主细胞以产生抗体。宿主细胞可在适合表达抗体或其任何多肽链的条件下培养。此类抗体或其多肽链可通过常规方法如亲和纯化由培养细胞(如，从细胞或培养上清液中)回收。如有必要，抗体的多肽链可在合适的条件下温育合适的一段时间，以产生抗体。

在一些实施方案中，用于制备本文所述抗体的方法涉及重组表达载体，其编码抗半乳凝素-9抗体的重链和轻链，这也在本文描述。可通过常规方法，如磷酸钙介导的转染，将重组表达载体引入合适的宿主细胞(如，dhfr-CHO细胞)。可选择阳性转化株宿主细胞并在允许表达形成抗体的两条多肽链的合适条件下培养，抗体可从细胞或从培养基中回收。必要时，从宿主细胞中回收的两条链可在适合形成抗体的条件下温育。

在一个示例中，提供了两种重组表达载体，一种编码抗半乳凝素-9抗体的重链，另一种编码抗半乳凝素-9抗体的轻链。两种重组表达载体都可通过常规方法如磷酸钙介导的转染引入合适的宿主细胞(如，dhfr-CHO细胞)中。可选择地，可将每种表达载体引入合适的宿主细胞中。可选择阳性转化株并在允许抗体多肽链表达的合适条件下培养。将两种表达载体引入同一宿主细胞时，其中产生的抗体可从宿主细胞或从培养基中回收。如果需要，可从宿主细胞或培养基中回收多肽链，然后在允许形成抗体的合适条件下温育。当将两种表达载体引入不同的宿主细胞时，其各自都可从相应的宿主细胞或从相应的培养基中回收。然后可在合适的条件下温育两条多肽链以形成抗体。

使用标准分子生物学技术来制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化体、培养宿主细胞和从培养基中回收抗体。例如，一些抗体可通过亲和层析使用蛋白A或蛋白G偶联基质分离。

编码如本文所述抗半乳凝素-9抗体的重链、轻链或两者的任何核酸，包含这些的载体(如，表达载体)；和包含该载体的宿主细胞在本公开的范围内。

可使用本领域已知的方法表征如此制备的抗半乳凝素-9抗体，由此检测和/或测量半乳凝素-9生物活性的降低、改善或中和。例如，在一些实施方案中，ELISA型测定法适用于定性或定量测量半乳凝素-9对Dectin-1或TIM-3信号传导的抑制。

抗半乳凝素-9抗体的生物活性可通过将候选抗体与Dectin-1和半乳凝素-9一起温育，并监测以下任何一个或多个特征来验证：(a)Dectin-1与半乳凝素-9之间的结合和抑制由结合介导的信号转导；(b)预防、改善或治疗实体瘤的任何方面；(c)阻断或减少Dectin-1活化；(d)抑制(减少)半乳凝素-9的合成、产生或释放。可选择地，TIM-3可用于使用上述方案验证抗半乳凝素-9抗体的生物活性。可选择地，CD206可用于使用上述方案验证抗半乳凝素-9抗体的生物活性。

在一些实施方案中，在受试者中评估生物活性或功效，例如，通过测量外周和肿瘤内T细胞比率、T细胞活化，或通过巨噬细胞表型分析。

确定抗半乳凝素-9抗体的生物活性的其他测定法包括测量CD8+和CD4+(常规)T细胞活化(在体外或体内测定中，例如通过测量炎性细胞因子水平，如IFNγ、TNFα、CD44、ICOS颗粒酶B、穿孔素、IL2(上调)；CD26L和IL-10(下调))；测量巨噬细胞的重编程(体外或体内)，如，从M2至M1表型(如，增加的MHCII、减少的CD206、增加的TNF-α和iNOS)。可选择地，可评估ADCC的水平，例如在体外测定中，如本文所述。

药物组合物

如本文所述的抗半乳凝素-9抗体以及编码核酸或核酸组、包含这类的载体或包含所述载体的宿主细胞，可与药学上可接受的载体(赋形剂)混合以形成用于治疗目标疾病的药物组合物。“可接受的”是指载体必须与组合物的活性成分相容(并且优选地，能够使活性成分稳定)并且对待治疗的受试者无害。药学上可接受的赋形剂(载体)，包括本领域熟知的缓冲剂。参见，例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed.(2000)Lippincott Areiams和Wilkins,Ed.K.E.Hoover。

本方法中使用的药物组合物可包含冻干制剂或水溶液形式的药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂(Remington:The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed.(2000)Lippincott Areiams和Wilkins,Ed.K.E.Hoover)。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在使用的剂量和浓度下对接受者无毒，并且包含缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(如，十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或葡聚糖；螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；形成盐的反离子，如钠；金属络合物(如，锌-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，如TWEEN^TM、PLURONICS^TM或聚乙二醇(PEG)。在一些示例中，本文所述药物组合物包含含有抗体(或编码核酸)的脂质体，其可通过本领域已知的方法制备，例如Epstein,等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:3688(1985)；Hwang,等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4030(1980)；以及美国专利号4,485,045和4,544,545中描述的。具有增强循环时间的脂质体公开于美国专利号5,013,556。特别有用的脂质体可通过反相蒸发法用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物产生。脂质体通过限定孔径的过滤器挤出，以产生具有所需直径的脂质体。

在一些实施方案中，将抗半乳凝素-9抗体或编码核酸分别包埋在如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微囊中，例如羟甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微囊，在胶体药物递送系统(如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)中或在粗乳状液中。这类技术在本领域中是已知的，参见，例如Remington,The Science andPractice of Pharmacy 20th Ed.Mack Publishing(2000)。

在其他示例中，本文所述的药物组合物可配制成缓释形式。缓释制备物的合适示例包括含有抗体的固体疏水聚合物的半渗透性基质，该基质为成型制品的形式，例如薄膜或微囊。缓释基质的示例包括聚酯、水凝胶(如，聚(甲基丙烯酸2-羟乙酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美国专利号3,773,919)、L-谷氨酸和7乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-醋酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物如LUPRON DEPOT^TM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球)、醋酸异丁酸蔗糖酯和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。

用于体内施用的药物组合物必须是无菌的。这很容易通过如经由无菌过滤膜过滤来实现。治疗性抗体组合物通常置于具有无菌进入孔的容器中，例如，具有可被皮下注射针刺穿的塞子的静脉输液袋或小瓶。

本文所述的药物组合物可为单位剂型，例如用于口服、胃肠外或直肠施用、或通过吸入或吹入施用的片剂、丸剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、溶液剂或混悬剂、或栓剂。

为了制备固体组合物如片剂，可将主要活性成分与药物载体混合，例如常规压片成分，如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸二钙或树胶，以及其他药物稀释剂如水，以形成含有本发明化合物或其无毒药学上可接受的盐的均质混合物的固体预制剂组合物。将这些预制剂组合物称为均质时，意味着活性成分均匀地分散在整个组合物中，使得组合物可容易地细分成同样有效的单位剂型，如片剂、丸剂和胶囊。然后将该固体预制剂组合物细分为上述类型的单位剂型，其含有0.1至约500mg本发明的活性成分。新的组合物的片剂或丸剂可被包衣或以其他方式复合以提供具有持续作用优势的剂型。例如，片剂或丸剂可包含内部剂量和外部剂量成分，后者以包封形式位于前者之上。这两种成分可通过肠溶层隔开，肠溶层用于抵抗在胃中的分解，并允许内部成分完整地进入十二指肠或延迟释放。可将多种材料用于此类肠溶层或包衣，这类材料包括多种聚合酸以及聚合酸与诸如虫胶、鲸蜡醇和醋酸纤维素等材料的混合物。合适的表面活性试剂(表面活性剂)尤其包括非离子试剂，如聚氧乙烯山梨糖醇酐(如，Tween^TM20、40、60、80或85)和其他山梨糖醇酐(如，Span^TM20、40、60、80或85)。具有表面活性剂的组合物方便地包含0.05至5％并且可为0.1至2.5％的表面活性剂。可以理解，如果需要可添加其他成分，如甘露醇或其他药学上可接受的媒介物。

合适的乳剂可使用市售的脂肪乳剂制备，例如Intralipid^TM、Liposyn^TM、Infonutrol^TM、Lipofundin^TM和Lipiphysan^TM。活性成分可溶解在预混合的乳液组合物中，或可选择地，其可溶解在油(如，大豆油、红花油、棉籽油、芝麻油、玉米油或杏仁油)中，并且与磷脂(如，蛋磷脂、大豆磷脂或大豆卵磷脂)和水混合后形成乳液。可以理解，可添加其他成分(如，甘油或葡萄糖)来调节乳液的张力。合适的乳液通常含有高达20％的油，如5至20％。脂肪乳剂可包含0.1至1.0.im，特别是0.1至0.5.im的脂肪滴，并且具有pH值范围为5.5至8.0。

乳液组合物可以是通过将抗体与Intralipid^TM或其组分(大豆油、蛋磷脂、甘油和水)混合而制备的那些。

用于吸入或吹入的药物组合物包括在药学上可接受的水性或有机溶剂或其混合物中的溶液和悬浮液，以及粉末。液体或固体组合物可包含如上文所述的合适的药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，组合物通过经口或经鼻呼吸途径施用以产生局部或全身作用。

优选地无菌的药学上可接受的溶剂中的组合物可通过使用气体来雾化。雾化溶液可直接从雾化装置吸入，或者雾化装置可连接到面罩、帐篷或间歇式正压呼吸机。溶液、悬浮液或粉末组合物可从以适当方式递送制剂的装置施用，优选口服或经鼻施用。

联合癌症疗法

本公开提供了使用任何抗半乳凝素抗体如G9.2-17(如，G9.2-17(IgG4))联合一种或多种化疗剂如吉西他滨和/或紫杉醇(如，

)用于治疗实体瘤如PDAC、结直肠癌(CRC)、肝细胞癌(HCC)或胆管癌(CAA)的方法。

不受理论的束缚，认为抗半乳凝素-9抗体通过其对Dectin-1的抑制，来重新编程针对肿瘤细胞的免疫应答，这经由例如抑制浸润到肿瘤微环境中的γδT细胞活性和/或通过例如激活CD4+和/或CD8+T细胞增强针对肿瘤细胞的免疫监视。因此，抗半乳凝素-9抗体与一种或多种化疗剂如本文所述的那些的联合使用将预期显著增强抗肿瘤功效。

胰腺导管腺癌(PDA)是一种破坏性疾病，很少有长期幸存者(Yadav等人,Gastroenterology,2013,144,1252-1261)。炎症在PDA进展中至关重要，因为在没有伴随炎症的情况下，单独的致癌突变不足以导致肿瘤发生(Guerra等人,Cancer Cell,2007,11,291-302)。先天性和适应性免疫协同促进PDA中的肿瘤进展。特别地，肿瘤微环境(TME)内的特定先天免疫亚群易于将适应性免疫效应细胞培养成允许肿瘤的表型。抗原呈递细胞(APC)群，包括M2极化的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)和髓样树突细胞(DC)，诱导有利于肿瘤保护性Th1细胞的免疫抑制性Th2细胞的产生(Ochi等人,J of Exp Med.,2012,209,1671-1687；Zhu等人,Cancer Res.,2014,74,5057-5069)。类似地，已显示髓系来源的抑制细胞(MDSC)可消除PDA中的抗肿瘤CD8⁺细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答并促进转移的进展(Connolly等人,J Leuk Biol.,2010,87,713-725；Pylayeva-Gupta等人,Cancer Cell,2012,21,836-847；Bayne等人,Cancer Cell,2012,21,822-835)。

结直肠癌(CRC)，又被称为肠癌、结肠癌或直肠癌，是影响结肠和直肠的任何癌症。已知CRC是由肿瘤细胞的基因改变驱动的，并且还受到肿瘤-宿主相互作用的影响。最近的报道表明，某些T淋巴细胞亚群的密度与CRC的良好临床结果之间存在直接相关性，这支持了T细胞介导的免疫在抑制CRC肿瘤进展中的主要作用。

肝细胞癌(HCC)是最常见的原发性肝癌类型。肝细胞癌最常发生在患有慢性肝病的人中，例如由乙型肝炎或丙型肝炎感染引起的肝硬化。HCC通常伴随着具有由于慢性病毒感染引起的广泛淋巴细胞浸润的肝硬化。许多研究表明，肿瘤浸润性效应CD8+T细胞和T辅助17(Th17)细胞与手术切除肿瘤后的存活改善相关。然而，肿瘤浸润性效应T细胞不能控制肿瘤生长和转移(Pang等人,Cancer Immunol Immunother 2009；58:877-886)。

胆管癌是一组起源于胆管的癌症。胆管癌通常根据其相对于肝脏的位置进行分类。例如，占所有胆管癌病例不到10％的肝内胆管癌始于肝脏内的小胆管。在另一个示例中，占胆管癌病例超过一半的肝门部胆管癌(又被称为Klatskin肿瘤)始于肝门，两个主要胆管在肝门处连接并离开肝脏。其他被归类为远端胆管癌，其开始于肝脏外的胆管。

在一些方面，本公开提供治疗实体瘤的方法，如本文公开的那些。在一些实施方案中，本公开提供用于减少、改善或消除与实体瘤相关的一种或多种症状的方法。本文公开的治疗方法涉及抗-Gal9抗体如G9.2-17和一种或多种化疗剂的联合疗法。在一些示例中，将有效量的抗-Gal9抗体给予患有实体瘤(如，PDAC)的受试者，其中受试者正在进行涉及一种或多种化疗剂的治疗。在一些示例中，将有效量的一种或多种化疗剂给予患有实体瘤(如，PDAC)的受试者，其中受试者正在进行涉及抗-Gal9抗体的治疗。在其他示例中，将有效量的抗-Gal9抗体和有效量的一种或多种化疗剂同时或序贯地给予受试者。

在一些实施方案中，与治疗前或对照受试者水平相比，本公开的方法使抗肿瘤活性(如，随着时间推移减少细胞增殖、肿瘤生长、肿瘤体积和/或肿瘤负载或负荷或者减少转移性病灶数量)增加至少约10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高。在一些实施方案中，通过比较在施用药物组合物之前和之后受试者中的细胞增殖、肿瘤生长和/或肿瘤体积来测量减少。在一些实施方案中，治疗或改善受试者中癌症的方法允许癌症的一种或多种症状改善至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更高。在一些实施方案中，在施用药物组合物之前、期间和之后，受试者中的癌细胞和/或生物标志物在生物样品中测量，例如血液、血清、血浆、尿、腹膜液和/或来自组织或器官的活检。在一些实施方案中，所述方法包括施用本发明的组合物以将受试者的肿瘤体积、大小、负载或负荷减少至不可检测的大小，或减少至小于治疗前受试者的肿瘤体积、大小、负载或负荷的约1％、2％、5％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％或90％。在其他实施方案中，所述方法包括施用本发明的组合物以将受试者中的细胞增殖速率或肿瘤生长速率减少至不可检测的速率，或小于治疗前速率的约1％、2％、5％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％或90％。在其他实施方案中，所述方法包括施用本发明的组合物以将受试者中转移性病灶的发展或者数量或大小减少至不可检测的比率/速率，或减少至小于治疗前比率/速率的约1％、2％、5％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％或90％。

术语“约”或“大约”是指在由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围内，这部分取决于如何测量或确定该值，即，测量系统的限制。例如，根据本领域的实践，“约”可表示在可接受的标准差内。可选择地，“约”可表示给定值的多达±20％，优选多达±10％，更优选多达±5％，并且更优选多达±1％的范围。可选择地，特别是关于生物系统或过程，该术语可表示在值的一个数量级内，优选在2倍内。在本申请和权利要求书中描述了特定值的情况下，除非另有说明，术语“约”是隐含的，并且在本文中意味着在特定值的可接受误差范围内。

如本文所用，术语“治疗/处理”是指将包含一种或多种活性剂的组合物应用或施用于具有目标疾病或病症、疾病/病症的症状或易患疾病/病症的受试者，目的是治愈、康复、缓解、减轻、改变、补救、改善、改进或影响病症、疾病或病症的症状，或对疾病/病症的易感性。

缓解目标疾病/病症包括延缓疾病的发展或进展，或者降低疾病严重程度或延长生存期。缓解疾病或延长生存期并不一定需要治愈性结果。如本文所用，“延迟”目标疾病或病症的发展是指延迟、阻碍、减缓、延缓、稳定和/或推迟疾病的进展。这种延迟可能有不同的时间长度，这取决于疾病的病史和/或正在接受治疗的个体。“延迟”或减轻疾病发展或延迟疾病发作的方法是与不使用该方法相比时，降低在给定时间范围内发展疾病的一种或多种症状的可能性和/或降低在给定的时间范围内症状程度的方法。这种比较通常基于临床研究，使用的受试者数量足以给出统计学上有意义的结果。

疾病的“发展”或“进展”是指疾病的初始表现和/或随后的进展。可使用本领域所熟知的标准临床技术检测和评估疾病的发展。然而，发展也指可能不可检测的进展。为了本公开的目的，发展或进展是指症状的生物学过程。“发展”包括发生、复发和发作。如本文所用，目标疾病或病症的“发作”或“发生”包括初始发作和/或复发。

在一些实施方案中，本文所述的抗体，如G9.2-17，例如其IgG4形式，以足以在体内将肿瘤的免疫抑制性免疫细胞中半乳凝素-9(和/或Dectin-1或TIM-3或CD206)活性抑制至少20％(如，30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更高)的量施用于需要治疗的受试者。在其他实施方案中，本文所述的抗体，如G9.2-17，以有效减少肿瘤的免疫抑制性免疫细胞中半乳凝素-9(和/或Dectin-1或TIM-3或CD206)的活性水平至少20％(如，30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更高)(与治疗之前或对照受试者中的水平相比)的量施用。在一些实施方案中，本文所述的抗体，如G9.2-17，以足以在体内促进TAM中的M1样编程至少20％(如，30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更高)(与治疗前或对照受试者中的水平相比)的量施用于需要治疗的受试者。

取决于待治疗的疾病类型或疾病部位，可使用医学领域普通技术人员已知的常规方法将药物组合物施用于受试者。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体可通过静脉内输注施用于受试者。

可注射组合物可包含各种载体，如植物油、二甲基乳酰胺、二甲基甲酰胺、乳酸乙酯、碳酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、乙醇和多元醇(甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)。对于静脉内注射，可通过滴注法施用水溶性抗体，由此输注含有抗体和生理学上可接受的赋形剂的药物制剂。生理上可接受的赋形剂可包括，例如，5％葡萄糖、0.9％盐水、林格(Ringer’s)溶液或其他合适的赋形剂。肌肉内制备物，例如抗体的合适可溶盐形式的无菌制剂，可在药物赋形剂(例如注射用水、0.9％盐水或5％葡萄糖溶液)中溶解和施用。

在一些实施方案中，提供了抗半乳凝素-9抗体与一种或多种化疗剂同时施用的方法。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体在一种或多种化疗剂之前或之后施用。在一些实施方案中，全身施用一种或多种化疗剂。在一些实施方案中，局部施用一种或多种化疗剂。在一些实施方案中，一种或多种化疗剂通过以下施用：静脉内施用，例如推注或通过在一段时间内连续输注，通过肌肉内、腹膜内、脑脊髓内、皮下、动脉内、关节内、滑膜内、鞘内、瘤内、口服、吸入或局部途径。在一个实施方案中，一种或多种化疗剂通过静脉内输注施用于受试者。

有效量的本文所述的药物组合物可通过合适的途径全身或局部施用于需要治疗的受试者(如，人)。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体通过静脉内施用，例如推注或通过在一段时间内连续输注，通过肌肉内、腹膜内、脑脊髓内、皮下、动脉内、关节内、滑膜内、鞘内、瘤内、口服、吸入或局部途径。在一个实施方案中，抗半乳凝素-9抗体通过静脉内输注施用于受试者。

如本文所用，“有效量”是指单独或与一种或多种其他活性剂组合赋予受试者治疗效果所需的每种活性剂的量。在一些实施方案中，治疗效果是降低半乳凝素-9活性和/或量/表达、降低Dectin-1信号传导、降低TIM-3信号传导、降低CD206信号传导或增加肿瘤微环境中的抗肿瘤免疫应答。增加的抗肿瘤应答的非限制性示例包括增加的效应T细胞的活化水平，或TAM从M2至M1表型的转换。在某些情况下，抗肿瘤应答包括增加的ADCC应答。确定一定量的抗体是否达到治疗效果对于本领域技术人员来说是显而易见的。如本领域技术人员所认可的，有效量随着所治疗的具体病况、病况的严重程度、包括年龄、身体状况、大小、性别和体重在内的个体患者参数、治疗的持续时间、同步疗法的性质(如果有的话)、具体施用途径以及医疗从业人员的知识和专长范围内的类似因素而变化。这些因素对于本领域普通技术人员来说是众所周知的并且可仅利用常规实验来解决。通常优选使用单个组分或其组合的最大剂量，即根据合理的医学判断的最高安全剂量。

经验考虑，如半衰期，通常有助于确定剂量。例如，与人类免疫系统相容的抗体，如人源化抗体或完整的人抗体，在某些情况下用于延长抗体的半衰期并防止抗体被宿主免疫系统攻击。施用频率可在治疗过程中确定和调整，并且通常但不必需基于目标疾病/病症的治疗和/或抑制和/或改善和/或延迟。可选择地，抗体的持续连续释放制剂可能是合适的。用于实现持续释放的各种制剂和装置是本领域已知的。

在一个示例中，如本文所述的抗体的剂量在已给予一次或多次抗体施用的个体中凭经验确定。给予个体递增剂量的拮抗剂。为了评估拮抗剂的功效，可追踪疾病/病症的指标。

本文所述的任何抗半乳凝素-9抗体可用于本文所述的任何方法中。在一些实施方案中，抗半乳凝素-9抗体是G9.2-17。G9.2-17抗体可以是如本文公开的IgG4分子(G9.2-17(IgG4)。在具体示例中，本文使用的抗半乳凝素-9抗体(G9.2-17)具有SEQ ID NO:19的重链和SEQ ID NO:15的轻链。抗-Gal9抗体可按本文所公开配制并通过合适的途径给予需要治疗的受试者，如静脉内输注。

在一些情况下，如本文所公开的抗半乳凝素-9抗体(如，G9.2-17)可以合适的剂量如约0.5至约32mg/kg施用于受试者。示例包括0.5mg/kg至1mg/kg、1mg/kg至2mg/kg、2mg/kg至3mg/kg、3mg/kg至4mg/kg、4mg/kg至8mg/kg、8mg/kg至12mg/kg、12mg/kg至16mg/kg、16mg/kg至20mg/kg、20mg/kg至24mg/kg、24mg/kg至28mg/kg、或28mg/kg至32mg/kg(如，0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg、20mg/kg、21mg/kg、22mg/kg、23mg/kg、24mg/kg、25mg/kg、26mg/kg、27mg/kg、28mg/kg、29mg/kg、30mg/kg、31mg/kg或32mg/kg)或这些范围内的任何递增剂量。在一些实施方案中，抗体以以下剂量施用：约0.5mg/kg至1mg/kg、约1mg/kg至2mg/kg、约2mg/kg至4mg/kg、约4mg/kg至8mg/kg、约8mg/kg至12mg/kg、约12mg/kg至16mg/kg、约16mg/kg至20mg/kg、约20mg/kg至24mg/kg、约24mg/kg至28mg/kg、或约28mg/kg至32mg/kg(例如，约0.5mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg，约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、约20mg/kg、约21mg/kg、约22mg/kg、约23mg/kg、约24mg/kg、约25mg/kg、约26mg/kg、约27mg/kg、约28mg/kg、约29mg/kg、约30mg/kg、约31mg/kg或约32mg/kg)或这些范围内的任何递增剂量。

在一些实施方案中，半乳凝素-9抗体以2mg/kg施用。在一些实施方案中，半乳凝素-9抗体以4mg/kg施用。在一些实施方案中，半乳凝素-9抗体以8mg/kg施用。在一些实施方案中，半乳凝素-9抗体以12mg/kg施用。在一些实施方案中，半乳凝素-9抗体以16mg/kg施用。在一些情况下，可以以合适的间隔或周期向受试者施用多个剂量的抗半乳凝素-9抗体，例如每周一次、每2至4周一次(如，每2、3或4周)。治疗可持续适当的时间，例如长达3个月、长达6个月、或长达12个月或长达24个月或更久。

在一些示例中，抗半乳凝素-9抗体通过静脉内输注以约3mg/kg的剂量每2周一次施用于患有本文公开的实体瘤(如，PDA)的人类患者。在其他示例中，抗半乳凝素-9抗体通过静脉内输注以约15mg/kg的剂量每2周一次施用于患有靶实体瘤的人类患者。

在一些示例中，可将约2mg/kg至16mg/kg的抗-Gal9抗体(如，IgG4形式的G9.2-17)每2周一次施用于需要治疗的受试者。在一些示例中，抗-Gal9抗体(如，本文公开的IgG4形式的G9.2-17，具有SEQ ID NO:19的重链和SEQ ID NO:15的轻链)以以下剂量每2周一次通过静脉内注射施用于受试者：约0.5mg/kg、1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、或约20mg/kg或其中的任何增量。

在一些示例中，抗-Gal9抗体(如，如本文所公开的IgG4形式的G9.2-17，具有SEQID NO:19的重链和SEQ ID NO:15的轻链)以约2mg/kg的剂量每2周一次通过静脉内注射施用于受试者。在一些示例中，抗-Gal9抗体以约4mg/kg的剂量每2周一次通过静脉内注射施用于受试者。在一些示例中，抗-Gal9抗体以约8mg/kg的剂量每2周一次通过静脉内注射施用于受试者。在一些示例中，抗-Gal9抗体以约12mg/kg的剂量每2周一次通过静脉内注射施用于受试者。在一些示例中，抗-Gal9抗体以约16mg/kg的剂量每2周一次通过静脉内注射施用于受试者。

在一些示例中，将抗-Gal9抗体(如，本文公开的IgG4形式的G9.2-17，具有SEQ IDNO:19的重链和SEQ ID NO:15的轻链)以以下剂量每周一次通过静脉内注射施用于受试者：0.5mg/kg至1mg/kg、约1mg/kg至2mg/kg、约3mg/kg至4mg/kg、约4mg/kg至8mg/kg、约8mg/kg至12mg/kg、约12mg/kg至16mg/kg、约16mg/kg至20mg/kg、约20mg/kg至24mg/kg、约24mg/kg至28mg/kg、或约28mg/kg至32mg/kg(如，约0.5mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、约20mg/kg、约21mg/kg、约22mg/kg、约23mg/kg、约24mg/kg、约25mg/kg、约26mg/kg、约27mg/kg、约28mg/kg、约29mg/kg、约30mg/kg、约31mg/kg、或约32mg/kg)或其中的任何增量。

在一些示例中，将抗-Gal9抗体(如，本文公开的IgG4形式的G9.2-17，具有SEQ IDNO:19的重链和SEQ ID NO:15的轻链)以以下剂量每周一次通过静脉内注射施用于受试者：0.5mg/kg至1mg/kg、1mg/kg至2mg/kg、3mg/kg至4mg/kg、4mg/kg至8mg/kg、8mg/kg至12mg/kg、12mg/kg至16mg/kg、16mg/kg至20mg/kg、20mg/kg至24mg/kg、24mg/kg至28mg/kg、或28mg/kg至32mg/kg(如，0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg、20mg/kg、21mg/kg、22mg/kg、23mg/kg、24mg/kg、25mg/kg、26mg/kg、27mg/kg、28mg/kg、29mg/kg、30mg/kg、31mg/kg、或32mg/kg)或这些范围内的任何增量或这些范围内的任何增加剂量。

在一些示例中，将抗-Gal9抗体(如，本文公开的IgG4形式的G9.2-17，具有SEQ IDNO:19的重链和SEQ ID NO:15的轻链)以以下剂量每周一次通过静脉内注射施用于受试者：0.5mg/kg、1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、或约20mg/kg或其中的任何增量。

在具体实施方案中，间隔或周期为1周。在具体实施方案中，间隔或周期为2周。在一些实施方案中，方案是每2周一次持续1个周期，每2周一次持续2个周期，每2周一次持续3个周期，每2周一次持续4个周期，或每2周一次持续超过4个周期。在一些实施方案中，治疗是每2周一次持续1至3个月，每2周一次持续3至6个月，每2周一次持续6至12个月，或每2周一次持续12至24个月或更久。

在具体实施方案中，间隔或周期为3周。在一些实施方案中，方案是每3周一次持续1个周期，每3周一次持续2个周期，每3周一次持续3个周期，每3周一次持续4个周期，或每3周一次持续超过4个周期。在一些实施方案中，治疗是每3周一次持续1至3个月，每3周一次持续3至6个月，每3周一次持续6至12个月，或每3周一次持续12至24个月或更久。

在具体实施方案中，间隔或周期为4周或更多周。在一些实施方案中，方案是每4周或更多周一次持续1个周期，每4周或更多周一次持续2个周期，每4周或更多周一次持续3个周期，每4周或更多周一次持续4个周期，或每4周或更多周一次持续超过4个周期。在一些实施方案中，治疗是每4周或更多周一次持续1至3个月，每4周或更多周一次持续3至6个月，每4周或更多周一次持续6至12个月，或每4周或更多周一次12至24个月或更久。在一些实施方案中，治疗是在不同时间治疗的组合，例如2周、3周、4周或超过4周的组合。在一些实施方案中，治疗间隔根据患者对治疗的应答进行调整。在一些实施方案中，根据患者对治疗的应答调整剂量。在一些实施方案中，在治疗间隔之间剂量会变化。在一些实施方案中，可暂时停止治疗。在一些实施方案中，暂时停止抗半乳凝素-9疗法。在一些实施方案中，暂时停止化疗。在一些实施方案中，暂时停止二者。在任何这些实施方案中，抗-Gal9抗体可以是如本文公开的IgG4形式的G9.2-17，具有SEQ ID NO:19的重链和SEQ ID NO:15的轻链。

一种或多种化疗剂可包含抗代谢物、微管抑制剂或其组合。抗代谢物包括例如叶酸拮抗剂(如，甲氨蝶呤)和核苷酸类似物，例如嘧啶拮抗剂(如，5-氟尿嘧啶、氟尿苷(foxuridine)、阿糖胞苷、卡培他滨和吉西他滨)、嘌呤拮抗剂(如，6-巯基嘌呤和6-硫鸟嘌呤)，以及腺苷脱氨酶抑制剂(如，克拉屈滨、氟达拉滨和喷司他丁)。

在一些示例中，本文公开的方法中使用的抗代谢物是吉西他滨，其可通过静脉内输注给予。给予受试者的吉西他滨的量取决于许多因素，包括身高和体重、总体健康或其他健康问题，以及待治疗的癌症类型，这根据食品和药物管理局(Food and DrugAdministration)提供的指南(如，参见经批准的吉西他滨产品的药物标签)在医疗从业者的知识范围内。在一些示例中，可通过静脉内输注以1000mg/m²的剂量向受试者施用吉西他滨，任选地在30分钟内每周一次持续长达7周的时间然后从治疗中休息一周。随后的周期可能包括每4周中每周输注一次连续三周。如果发生一种或多种不良反应，可减少吉西他滨的剂量或停止治疗。下面的实施例2中提供了管理与吉西他滨治疗相关的不良反应的更多细节。

微管抑制剂是一类抑制细胞微管形成从而阻断细胞增殖的化合物。在一些示例中，微管抑制剂是促进微管聚合的稳定剂。示例包括紫杉烷和埃博霉素(epothilone)。在其他示例中，微管抑制剂是促进微管解聚的去稳定剂。示例包括长春花生物碱。在一些示例中，本文公开的方法中使用的微管抑制剂是紫杉醇。在一些情况下，紫杉醇是游离形式。在其他情况下，紫杉醇与蛋白质如白蛋白缀合。在具体示例中，紫杉醇是

它是纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇。

给予受试者的紫杉醇(如，蛋白结合型紫杉醇，例如nab-紫杉醇)的量取决于许多因素，包括身高和体重、总体健康或其他健康问题，以及待治疗的癌症类型，这根据食品和药物管理局提供的指南(如，参见经批准的紫杉醇产品的药物标签)在医疗从业者的知识范围内。例如，当纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇(nab-紫杉醇，如

)时，它可通过每3周在30分钟内以260mg/m²通过静脉内注射给予受试者。如果观测到严重的不良反应(如，中性粒细胞减少症或严重的感觉神经病变)，可以减少紫杉醇的剂量。在某些情况下，nab-紫杉醇的剂量可减少至180mg/m²。当与抗-Gal9抗体组合时，紫杉醇的剂量可以是125mg/m²。如果需要，紫杉醇的剂量可减少至100mg/m²或75mg/m²。以下实施例2中提供了管理与紫杉醇相关的不良反应的更多细节。

在一些具体示例中，可按以下实施例2中提供的治疗方案和给药方案将抗-Gal9抗体(如，IgG4形式的G9.2-17)、吉西他滨和紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白缀合型紫杉醇或

)施用于需要治疗的受试者。例如，治疗可包括一个或多个周期，每个周期由28天组成。在每个周期中，将抗-Gal9抗体(如，G9.2-17(IgG4))以约2mg/kg至16mg/mg(如，约2mg/kg、约4mg/kg、约8mg/kg、约12mg/kg或约16mg/kg)的剂量每2周一次(如，在第1天和第15天)通过静脉内输注施用于受试者(如，患有PDAC的人类患者)。使用FDA批准的剂量和给药方案，可将吉西他滨和紫杉醇(如，蛋白结合型紫杉醇，例如

)每周一次施用于受试者持续3周，随后1周不治疗(如，在28天周期中的第1天、第8天和第15天)。例如，在每个周期中，吉西他滨可以1000mg/m²每周一次通过静脉内注射给予受试者，紫杉醇可以125mg/m²每周一次给予受试者。需要时，吉西他滨的剂量可减少至800mg/m²或600mg/m²。可选择地或另外地，紫杉醇的剂量可减少至100mg/m²或75mg/m²。

在一些实施方案中，本文所述的用于治疗实体瘤(如，PDA)的方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中抗-Gal9抗体在第1天和第15天(即，每2周一次(q2w))以约0.5mg/kg至约32mg/kg的剂量通过静脉内输注施用于受试者，以及吉西他滨和紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天施用于受试者。在一些示例中，紫杉醇以125mg/m²静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。在一些示例中，吉西他滨以1000mg/m²静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。需要时，吉西他滨的剂量可减少至800mg/m²或600mg/m²。可选择地或另外地，紫杉醇的剂量可减少至100mg/m²或75mg/m²。

在一些实施方案中，本文所述的用于治疗实体瘤(如，PDA)的方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中抗-Gal9抗体在第1天和第15天(即，每2周一次(q2w))以包括以下的剂量通过静脉内输注施用于受试者：约0.5mg/kg至1mg/kg，约1mg/kg至2mg/kg，约3mg/kg至4mg/kg，约4mg/kg至8mg/kg，约8mg/kg至12mg/kg，约12mg/kg至16mg/kg，约16mg/kg至20mg/kg，约20mg/kg至24mg/kg，约24mg/kg至28mg/kg，或约28mg/kg至32mg/kg(例如，约0.5mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、约20mg/kg、约21mg/kg、约22mg/kg、约23mg/kg、约24mg/kg、约25mg/kg、约26mg/kg、约27mg/kg、约28mg/kg、约29mg/kg、约30mg/kg、约31mg/kg或约32mg/kg)，以及吉西他滨和紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天施用于受试者。在一些示例中，紫杉醇以125mg/m²静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。在一些示例中，吉西他滨以1000mg/m²静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。需要时，吉西他滨的剂量可减少至800mg/m²或600mg/m²。可选择地或另外地，紫杉醇的剂量可减少至100mg/m²或75mg/m²。

在一些实施方案中，本文所述的用于治疗实体瘤(如，PDA)的方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中抗-Gal9抗体在第1天和第15天(即，每2周一次(q2w))以包括以下的剂量通过静脉内输注施用于受试者：0.5mg/kg至1mg/kg、1mg/kg至2mg/kg、3mg/kg至4mg/kg、4mg/kg至8mg/kg、8mg/kg至12mg/kg、12mg/kg至16mg/kg、16mg/kg至20mg/kg、20mg/kg至24mg/kg、24mg/kg至28mg/kg、或28mg/kg至32mg/kg(如，0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg、20mg/kg、21mg/kg、22mg/kg、23mg/kg、24mg/kg、25mg/kg、26mg/kg、27mg/kg、28mg/kg、29mg/kg、30mg/kg、31mg/kg、或32mg/kg)或在这些范围内的任何增加剂量，以及吉西他滨和紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天施用于受试者。在一些示例中，紫杉醇以125mg/m²静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。在一些示例中，吉西他滨以1000mg/m²静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。需要时，吉西他滨的剂量可减少至800mg/m²或600mg/m²。可选择地或另外地，紫杉醇的剂量可减少至100mg/m²或75mg/m²。

在一些实施方案中，本文所述的用于治疗实体瘤(如，PDA)的方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中抗-Gal9抗体在第1天和第15天(即，每2周一次(q2w))以约2mg/kg至约16mg/kg的剂量通过静脉内输注施用于受试者，以及吉西他滨和紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天施用于受试者。在一些示例中，紫杉醇以125mg/m²静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。在一些示例中，吉西他滨以1000mg/m²静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。需要时，吉西他滨的剂量可减少至800mg/m²或600mg/m²。可选择地或另外地，紫杉醇的剂量可减少至100mg/m²或75mg/m²。

在一些实施方案中，本文所述的用于治疗实体瘤(如，PDA)的方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中抗-Gal9抗体在第1天和第15天(即，每2周一次(q2w))以以下剂量通过静脉内输注施用于受试者：约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg或约20mg/kg或其中的任何增量，以及吉西他滨和紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天施用于受试者。在一些示例中，紫杉醇以125mg/m²静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。在一些示例中，吉西他滨以1000mg/m²静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。需要时，吉西他滨的剂量可减少至800mg/m²或600mg/m²。可选择地或另外地，紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)的剂量可减少至100mg/m²或75mg/m²。

在一些实施方案中，该方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中

(1)抗-Gal9抗体在第1天和第15天(即，每2周一次(q2w))以以下剂量通过静脉内输注施用于受试者：约0.5mg/kg至1mg/kg、约1mg/kg至2mg/kg、约3mg/kg至4mg/kg、约4mg/kg至8mg/kg、约8mg/kg至12mg/kg、约12mg/kg至16mg/kg、约16mg/kg至20mg/kg、约20mg/kg至24mg/kg、约24mg/kg至28mg/kg、或约28mg/kg至32mg/kg(如，约0.5mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg,约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、约20mg/kg、约21mg/kg、约22mg/kg、约23mg/kg、约24mg/kg、约25mg/kg、约26mg/kg、约27mg/kg、约28mg/kg、约29mg/kg、约30mg/kg、约31mg/kg、或约32mg/kg)或其中的任何增量，

(2)吉西他滨在第1天、第8天和第15天以1000mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者，

(3)紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天以125mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。

在一些实施方案中，该方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中

(1)抗-Gal9抗体在第1天和第15天(即每2周一次(q2w))以以下剂量通过静脉内输注施用于受试者：0.5mg/kg至1mg/kg、1mg/kg至2mg/kg、3mg/kg至4mg/kg、4mg/kg至8mg/kg、8mg/kg至12mg/kg、12mg/kg至16mg/kg、16mg/kg至20mg/kg、20mg/kg至24mg/kg、24mg/kg至28mg/kg、或28mg/kg至32mg/kg(如，0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg、20mg/kg、21mg/kg、22mg/kg、23mg/kg、24mg/kg、25mg/kg、26mg/kg、27mg/kg、28mg/kg、29mg/kg、30mg/kg、31mg/kg、或32mg/kg)或其中的任何增量，

(2)吉西他滨在第1天、第8天和第15天以1000mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者施用，

(3)紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天以125mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。

在一些实施方案中，该方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中

(1)抗-Gal9抗体在第1天和第15天(即，每2周一次(q2w))以以下剂量通过静脉内输注施用于受试者：约0.5mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、约20mg/kg、约21mg/kg、约22mg/kg、约23mg/kg、约24mg/kg、约25mg/kg、约26mg/kg、约27mg/kg、约28mg/kg、约29mg/kg、约30mg/kg、约31mg/kg、或约32mg/kg)或其中的任何增量，

(2)吉西他滨在第1天、第8天和第15天以1000mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者，

(3)紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天以125mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。

在一些实施方案中，该方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中

(1)抗-Gal9抗体在第1天和第15天(即，每2周一次(q2w))以以下剂量通过静脉内输注施用于受试者：约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、或约20mg/kg或其中的任何增量，

(2)吉西他滨在第1天、第8天和第15天以1000mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者，

(3)紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天以125mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。

在一些实施方案中，该方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中

(1)抗-Gal9抗体在第1天和第15天(即，每2周一次(q2w))以约2mg/kg的剂量通过静脉内输注施用于受试者，

(2)吉西他滨在第1天、第8天和第15天以1000mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者，

(3)紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天以125mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。

在一些实施方案中，该方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中

(1)抗-Gal9抗体在第1天和第15天(即，每2周一次(q2w))以约4mg/kg的剂量通过静脉内输注施用于受试者，

(2)吉西他滨在第1天、第8天和第15天以1000mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者，

(3)紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天以125mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。

在一些实施方案中，该方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中

(1)抗-Gal9抗体在第1天和第15天(即，每2周一次(q2w))以约8mg/kg的剂量通过静脉内输注施用于受试者，

(2)吉西他滨在第1天、第8天和第15天以1000mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者，

(3)紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天以125mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。

在一些实施方案中，该方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中

(1)抗-Gal9抗体在第1天和第15天(即，每2周一次(q2w))以约12mg/kg的剂量通过静脉内输注施用于受试者，

(2)吉西他滨在第1天、第8天和第15天以1000mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者，

(3)紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天以125mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。

在一些实施方案中，该方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中

(1)抗-Gal9抗体在第1天和第15天(即，每2周一次(q2w))以约16mg/kg的剂量通过静脉内输注施用于受试者，

(2)吉西他滨在第1天、第8天和第15天以1000mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者，

(3)紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天以125mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。

在一些实施方案中，该方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中

(1)抗-Gal9抗体在第1天和第15天(即，每2周一次(q2w))以约32mg/kg的剂量通过静脉内输注施用于受试者，

(2)吉西他滨在第1天、第8天和第15天以1000mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者，

(3)紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天以125mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。

在任何上述施用方法实施方案中，当需要时，吉西他滨的剂量可减少至800mg/m²或600mg/m²，并且可选择地或另外地，紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)的剂量可减少至100mg/m²或75mg/m²。

在一些实施方案中，该方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中

(1)抗-Gal9抗体在第1天和第15天(即，每2周一次(q2w))以以下剂量通过静脉内输注施用于受试者：约0.5mg/kg至1mg/kg、约1mg/kg至2mg/kg、约3mg/kg至4mg/kg、约4mg/kg至8mg/kg、约8mg/kg至12mg/kg、约12mg/kg至16mg/kg、约16mg/kg至20mg/kg、约20mg/kg至24mg/kg、约24mg/kg至28mg/kg、或约28mg/kg至32mg/kg(如，约0.5mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、约20mg/kg、约21mg/kg、约22mg/kg、约23mg/kg、约24mg/kg、约25mg/kg、约26mg/kg、约27mg/kg、约28mg/kg、约29mg/kg、约30mg/kg、约31mg/kg、或约32mg/kg)或其中的任何增量，

(2)吉西他滨在第1天、第8天和第15天以800mg/m²、600mg/m²或1000mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者，

(3)紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天以100mg/m²、75mg/m²或125mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。

在一些实施方案中，该方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中

(1)抗-Gal9抗体在第1天和第15天(即，每2周一次(q2w))以以下剂量通过静脉内输注施用于受试者：0.5mg/kg至1mg/kg、1mg/kg至2mg/kg、3mg/kg至4mg/kg、4mg/kg至8mg/kg、8mg/kg至12mg/kg、12mg/kg至16mg/kg、16mg/kg至20mg/kg、20mg/kg至24mg/kg、24mg/kg至28mg/kg、或28mg/kg至32mg/kg(如，0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg、20mg/kg、21mg/kg、22mg/kg、23mg/kg、24mg/kg、25mg/kg、26mg/kg、27mg/kg、28mg/kg、29mg/kg、30mg/kg、31mg/kg、或32mg/kg)或这些范围内的任何增量剂量或其中的任何增量，

(2)吉西他滨在第1天、第8天和第15天以800mg/m²、600mg/m²或1000mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者，

(3)紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天以100mg/m²、75mg/m²或125mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。

在一些实施方案中，该方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中

(1)抗-Gal9抗体在第1天和第15天(即，每2周一次(q2w))以以下剂量通过静脉内输注施用于受试者：约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、或约20mg/kg或其中的任何增量，

(2)吉西他滨在第1天、第8天和第15天以800mg/m²、600mg/m²或1000mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者，

(3)紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天以100mg/m²、75mg/m²或125mg/m²的剂量静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。

在上述任何施用方法中，治疗周期可持续12至24个月。

在本文所述的任何方法实施方案中，抗半乳凝素-9抗体可(单独或与一种或多种化疗剂如吉西他滨和nab-紫杉醇联合，例如，以本文所述的剂量)如下施用：每周一次、每2周一次持续一个周期、每2周一次持续2个周期、每2周一次持续3个周期、每2周一次持续4个周期、或每2周一次持续超过4个周期。在一些实施方案中，治疗为1至3个月、3至6个月、6至12个月、12至24个月或更久。在一些实施方案中，治疗是每2周一次持续1至3个月，每2周一次持续3至6个月，每2周一次持续6至12个月，或每2周一次持续12至24个月或更久。

在一些实施方案中，本文所述的用于治疗实体瘤(如，PDA)的方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中抗-Gal9抗体在第1天、第7天、第15天和第21天(即，每周一次(q1w))以以下剂量通过静脉内输注施用于受试者：约0.5mg/kg至1mg/kg、约1mg/kg至2mg/kg、约3mg/kg至4mg/kg、约4mg/kg至8mg/kg、约8mg/kg至12mg/kg、约12mg/kg至16mg/kg、约16mg/kg至20mg/kg、约20mg/kg至24mg/kg、约24mg/kg至28mg/kg、或约28mg/kg至32mg/kg(例如，约0.5mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、约20mg/kg、约21mg/kg、约22mg/kg、约23mg/kg、约24mg/kg、约25mg/kg、约26mg/kg、约27mg/kg、约28mg/kg、约29mg/kg、约30mg/kg、约31mg/kg、或约32mg/kg)或其中的任何增量，以及吉西他滨和紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天施用于受试者。在一些示例中，紫杉醇以125mg/m²静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。在一些示例中，吉西他滨以1000mg/m²静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。需要时，吉西他滨的剂量可减少至800mg/m²或600mg/m²。可选择地或另外地，紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)的剂量可减少至100mg/m²或75mg/m²。

在一些实施方案中，本文所述的用于治疗实体瘤(如，PDA)的方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中抗-Gal9抗体在第1天、第7天、第15天和第21天(即，每周一次(q1w))以以下剂量通过静脉内输注施用于受试者：0.5mg/kg至1mg/kg、1mg/kg至2mg/kg、3mg/kg至4mg/kg、4mg/kg至8mg/kg、8mg/kg至12mg/kg、12mg/kg至16mg/kg、16mg/kg至20mg/kg、20mg/kg至24mg/kg、24mg/kg至28mg/kg、或28mg/kg至32mg/kg(例如0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg、20mg/kg、21mg/kg、22mg/kg、23mg/kg、24mg/kg、25mg/kg、26mg/kg、27mg/kg、28mg/kg、29mg/kg、30mg/kg、31mg/kg或32mg/kg)或这些范围内的任何增量剂量或这些范围内的任何增量，以及吉西他滨和紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天施用于受试者。在一些示例中，紫杉醇以125mg/m²静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。在一些示例中，吉西他滨以1000mg/m²静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。需要时，吉西他滨的剂量可减少至800mg/m²或600mg/m²。可选择地或另外地，紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)的剂量可减少至100mg/m²或75mg/m²。

在一些实施方案中，本文所述治疗实体瘤(如，PDA)的方法包括一个或多个28天的治疗周期，其中抗-Gal9抗体在第1天、第7天、第15天和第21天(即，每周一次(q1w))以以下剂量通过静脉内输注施用于受试者：约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、或约20mg/kg或其中的任何增量，以及吉西他滨和紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)在第1天、第8天和第15天施用于受试者。在一些示例中，紫杉醇以125mg/m²静脉内(如，静脉内注射)施用于受试者。在一些示例中，吉西他滨以1000mg/m²静脉内施用(如，静脉内注射)施用于受试者。需要时，吉西他滨的剂量可减少至800mg/m²或600mg/m²。可选择地或另外地，紫杉醇(如，纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇)的剂量可减少至100mg/m²或75mg/m²。

在某些情况下，Gal-9抗体治疗可与化疗(如，吉西他滨和nab-紫杉醇)共同启动。可选择地，Gal-9抗体治疗可在化疗方案(如，吉西他滨和nab-紫杉醇)已经开始后启动。在某些情况下，Gal-9抗体治疗与化疗(如，吉西他滨和nab-紫杉醇)共同施用，随后停止化疗。在停止化疗的一些情况下，可继续施用抗Gal-9抗体治疗方案。

在任何上述实施方案中，间隔或周期可以是每周一次。在任何上述实施方案中，间隔或周期可以是每2周一次。在一些实施方案中，该方案可以是每2周一次持续1个周期，每2周一次持续2个周期，每2周一次持续3个周期，每2周一次持续4个周期，或每2周一次持续超过4个周期。在一些实施方案中，治疗可以是每2周一次持续1至3个月，每2周一次持续3至6个月，每2周一次持续6至12个月，或每2周一次持续12至24个月或更久。

在任何上述实施方案中，间隔或周期可以是3周。在一些实施方案中，该方案可以是每3周一次持续1个周期，每3周一次持续2个周期，每3周一次持续3个周期，每3周一次持续4个周期，或每3周一次持续超过4个周期。在一些实施方案中，治疗可以是每3周一次持续1至3个月，每3周一次持续3至6个月，每3周一次持续6至12个月，或每3周一次持续12至24个月或更久。

在任何上述实施方案中，间隔或周期可以是4周或更多周。在一些实施方案中，该方案是每4周或更多周一次持续1个周期，每4周或更多周一次持续2个周期，每4周或更多周一次持续3个周期，每4周或更多周一次持续4个周期，或每4周或更多周一次持续超过4个周期。在一些实施方案中，治疗可以是每4周或更多周一次持续1至3个月，每4周或更多周一次持续3至6个月，每4周或更多周一次持续6至12个月，或每4周或更多周一次持续12到24个月或更久。在一些实施方案中，治疗可以是在不同时间治疗的组合，如2周、3周、4周或超过4周的组合。在一些实施方案中，可根据患者对治疗的应答调整治疗间隔。在一些实施方案中，根据患者对治疗的应答调整剂量。在一些实施方案中，在治疗间隔之间剂量会变化。在一些实施方案中，可暂时停止治疗。在一些实施方案中，暂时停止抗半乳凝素-9疗法。在一些实施方案中，暂时停止化疗。在一些实施方案中，暂时停止二者。在任何这些实施方案中，抗-Gal9抗体可以是如本文公开的IgG4形式的G9.2-17，具有SEQ ID NO:19的重链和SEQ IDNO:15的轻链。

对治疗的应答还可通过以下表征：血液和肿瘤中的一种或多种免疫表型、细胞因子谱(血清)、血液(血清或血浆)中的可溶性半乳凝素-9水平、半乳凝素-9肿瘤组织表达水平和免疫组化表达模式(肿瘤、基质、免疫细胞)、肿瘤突变负荷(TMB)、PDL-1表达(如，通过免疫组化)、错配修复状态或与疾病相关的肿瘤标志物(如，在3个月、6个月或12个月或更晚的时间测量)。这类肿瘤标志物的非限制性示例包括Ca15-3、CA-125、CEA、CA19-9、甲胎蛋白。这些参数可与治疗开始前的基线水平进行比较，或者可与本文所述的对照组进行比较。

在本文公开的任何方法中，可在治疗之前、期间和/或之后检测受试者以下特征中的一项或多项：(a)来自受试者的血液样品中的一种或多种肿瘤标志物，任选地其中一种或多肿瘤标志物包括CA15-3、CA-125、CEA、CA19-9和/或甲胎蛋白，以及任何其他肿瘤类型特异性肿瘤标志物；(b)细胞因子谱；和(c)半乳凝素-9血清/血浆水平，(d)外周血单核细胞免疫表型分析，(e)肿瘤组织活检/切除标本多重免疫表型分析，(f)肿瘤组织活检/切除标本半乳凝素-9表达水平和模式，(g)任何其他免疫评分测试，如：PDL-1免疫组化、肿瘤突变负荷(TMB)、肿瘤微卫星不稳定状态，以及以下系列例如：

-HalioDx、ImmunoSeq-Adaptive Biotechnologies、在NanoString

基因表达系统上开发的TIS、18-基因签名、PanCancer IO 360^TM测定(NanoString Technologies)等。也可使用对靶肿瘤如PDAC特异的其他合适的生物标志物。

在一些实施方案中，本文所述方法(其中Gal-9抗体与化学疗法(如，吉西他滨和nab-紫杉醇)一起施用)可调节血液或肿瘤中免疫细胞和免疫细胞标志物的水平。可使用本领域已知的方法，如多重流式细胞术和多重免疫组织化学，在患者血液和组织样品中测量此类变化。例如，可在治疗开始前的基线和治疗期间的不同时间点评估一组表型和功能性PBMC免疫标志物。表A列出了可用于这些评估方法的标志物的非限制性示例。流式细胞术(FC)是分析细胞表型和功能的快速且高信息量的选择技术方法，并在免疫表型监测中占有重要地位。它允许对复杂混合物(如，血液)中的许多细胞亚群(包括稀有亚群)进行表征，并代表快速获取大量数据的方法。FC的优点是速度快、灵敏度高和特异性强。可将标准化抗体系列和程序用于分析和分类免疫细胞亚型。多重IHC是强大的研究工具，提供客观的定量数据，描述了肿瘤免疫背景的免疫亚群数量和位置，并允许在单个组织切片上评估多个标志物。可将计算机算法用于从患者活检的全载片图像中定量基于IHC的生物标志物含量，将显色IHC方法和染色与数字病理学方法相结合。

表A.PBMC表型分析标志物

因此，在一些实施方案中，本文所述的抗-gal9抗体与化学疗法联合施用的方法可调节免疫激活标志物，如表A中的那些。这些标志物可与开始治疗之前的基线水平进行比较，或可与仅接受化疗的对照组进行比较(如，在某些间隔时间，例如3个月、6个月或12个月时)。在一些实施方案中，调节了细胞因子谱。

在一些实施方案中，本公开提供了调节受试者的免疫应答的方法。免疫应答可以是T细胞介导的和/或B细胞介导的免疫应答，其受免疫细胞活性例如T细胞活化的调节的影响。在本公开的一个实施方案中，免疫应答是T细胞介导的。如本文所用，术语“调节”是指改变或更改，并且包括上调和下调。例如，“调节免疫应答”是指改变或更改一种或多种免疫应答参数的状态。T细胞介导的免疫应答的示例性参数包括T细胞水平(如，效应T细胞的增加或减少)和T细胞活化水平(如，某些细胞因子产生的增加或减少)。B细胞介导的免疫应答的示例性参数包括B细胞水平的增加、B细胞活化和B细胞介导的抗体产生。

当免疫应答受到调节时，一些免疫应答参数可能会降低，而另一些可能会增加。例如，在某些情况下，调节免疫应答导致一种或多种免疫应答参数增加(或上调)和一种或多种其他免疫应答参数减少(或下调)，结果是免疫应答的整体增加，如炎症免疫应答的整体增加。在另一个示例中，调节免疫应答导致一种或多种免疫应答参数增加(或上调)和一种或多种其他免疫应答参数减少(或下调)，结果是免疫应答的整体下降，例如，炎症应答的整体下降。

在一些实施方案中，本文所述的抗-gal9抗体与化学疗法联合施用的方法在受试者中可调节血液(血清或血浆)中的可溶性半乳凝素-9水平，或调节半乳凝素-9肿瘤组织表达水平和表达模式(通过免疫组化(肿瘤、基质、免疫细胞))(如，在3个月、6个月或12个月或更晚的时间所测量)。可将受试者中的半乳凝素-9水平与开始治疗之前的基线水平进行比较，或可将其与如单独接受化疗的对照组进行比较。

在一些实施方案中，本文所述的方法可降低血液(血清或血浆)中的一种或多种可溶性半乳凝素-9水平，或降低半乳凝素-9肿瘤组织表达水平和表达模式(通过免疫组化(肿瘤、基质、免疫细胞))(如，在3个月、6个月或12个月或更晚的时间所测量)。

在一些实施方案中，本文所述的抗-gal9抗体与化学疗法联合施用的方法可调节与疾病相关的一种或多种肿瘤标志物(增加或减少)(如，如在3个月、6个月或12个月或更晚的时间所测量)。这类肿瘤标志物的非限制性示例包括Ca15-3、CA-125、CEA、CA19-9、甲胎蛋白。这些参数可与开始治疗前的基线水平进行比较，或可与如单独接受化疗的对照组进行比较。

在一些实施方案中，本文提供的抗-gal-9抗体与化学疗法(如，吉西他滨和nab-紫杉醇)联合施用的方法，例如与开始治疗前的基线水平或与单独接受化疗的对照组相比，可改善总体应答(如，在3、6或12个月时)。在一些实施方案中，本文提供的方法可导致完全应答、部分应答或疾病稳定(如，在3个月、6个月或12个月时所测量，根据RECIST或iRECIST标准)。在一些实施方案中，例如与单独接受化疗的对照组相比，该方法可提高完全应答、部分应答或疾病稳定的可能性(如，在3个月、6个月或12个月所测量)。在一些实施方案中，治疗可导致更长的生存期或更大的生存可能性，例如在某个时间，如在6或12个月或在更晚的时间点。

在本文所述的任何方法中，部分应答、稳定疾病、完全应答、部分应答、稳定疾病、进展性疾病、疾病进展(如，在3个月、6个月或12个月或更晚的时间点测量)，可根据RECIST标准或iRECIST标准进行评估。

在一些实施方案中，本文提供的抗gal-9抗体与化学疗法(如，吉西他滨和nab-紫杉醇)联合施用的方法，与对照组(如，单独接受化疗)相比，可增加疾病进展前时间或增加无进展生存期(如，在6个月时所测量)。在一些实施方案中，与对照组相比，治疗可导致更大的无进展生存可能性(如，在治疗开始后3个月、6个月或12个月或更晚的时间点所测量)。

在一些实施方案中，本文提供的抗-gal-9抗体与化学疗法(如，吉西他滨和nab-紫杉醇)联合施用的方法，与对照组(如，单独接受化疗)相比，可改善根据RECIST 1.1标准的应答的持续时间和深度(如，在治疗开始后3个月、6个月或12个月或更晚的时间点所测量)。

在一些实施方案中，本文提供的抗-gal-9抗体与化学疗法(如，吉西他滨和nab-紫杉醇)联合施用的方法，与开始治疗前的基线相比或与对照组相比，可改善生活质量和/或改善症状控制(如，使用ECOG量表在1个月、3个月、6个月或12个月或更晚的时间点所测量)。

患有如本文公开的目标实体瘤(如，PDAC)的受试者可通过常规医学检查，例如实验室测试、器官功能测试、基因测试、介入程序(活检、手术)任何和所有相关成像模式来确定。在一些实施方案中，待通过本文所述方法治疗的受试者是已经接受或正在接受抗癌疗法如化学疗法、放射疗法、免疫疗法或手术的人类癌症患者。在一些实施方案中，受试者已经接受了在前的免疫调节性抗肿瘤剂。这类免疫调节剂的非限制性示例包括但不限于抗PD1、抗PD-L1、抗CTLA-4、抗OX40、抗CD137等。在一些实施方案中，受试者在治疗过程中显示疾病进展。在其他实施方案中，受试者对治疗有抗性(先天性或获得性的)。在一些实施方案中，此类受试者显示患有晚期恶性肿瘤(如，不可手术或转移性的)。可选择地或另外地，在一些实施方案中，受试者没有标准治疗选项可用或不适合标准治疗选项，标准治疗选项是指临床环境中常用的治疗相应实体瘤的疗法。

在一些情况下，受试者可以是患有难治性疾病(如，难治性PDAC)的人类患者。如本文所用，“难治性”是指对治疗无应答或对治疗产生抗性的肿瘤。在一些情况下，受试者可以是患有复发性疾病例如复发性PDAC的人类患者。如本文所用，“复发性”或“复发的”是指肿瘤在经过一段时间的治疗改善(如，部分或完全应答)后回复或进展。

在一些实施方案中，待通过本文公开的方法治疗的人类患者可满足以下实施例2中公开的一种或多种入选和排除标准。例如，人类患者可能年满18岁并且患有组织学证实的不可切除的转移性癌症(如，腺癌和鳞状细胞癌)。患者可能患有根据RECIST v.1.1可测量的疾病。在某些情况下，人类患者可能具有可用于生物标志物分析(如，可通过IHC评估的半乳凝素-9肿瘤组织表达)的近期归档肿瘤样本(如，在5年内获得)。在一些情况下，人类患者是在转移性癌症环境中已接受至少一种系统性疗法的PDAC患者。此类患者可能是未接受过含吉西他滨方案的患者，也可能是使用含吉西他滨方案治疗后脱离了至少6个月。患者可能具有美国东部肿瘤协作组(ECOG)表现状态0-1和/或Karnofsky评分>70。患者还可能具有足够的血液学和终末器官功能，例如，中性粒细胞计数≥1x10⁹/L，血小板计数≥100x10⁹/L，对于HCC在第1部分中≥50x10⁹/L；前一周未输血情况下的血红蛋白≥8.5g/dL，肌酸酐≤1.5xULN，AST(SGOT)≤3 x ULN(存在HCC或肝转移时≤5 x ULN)，ALT(SGPT)≤3 x ULN(存在HCC或肝转移时≤5 x ULN)，胆红素≤1.5 x ULN(已知吉尔伯特(Gilbert's)病患者的胆红素≤3.0 x ULN)，白蛋白≥3.0g/dL，INR和PTT≤1.5 x ULN；和/或淀粉酶和脂肪酶≤1.5x ULN。在某些情况下，人类患者没有表现出活性感染或需要胃肠外抗生素的感染的证据，并且在治疗开始前4周内没有严重感染。胰瘘、胆瘘或肠瘘是允许的，只要它们受适当的非感染和开放的(patent)引流管控制。

可选择地或另外地，接受本文公开的任何治疗的人类患者可以没有：(i)原发不明的转移性癌症，(ii)临床显著的不受控制的活性出血，任何出血体质(如，活动性消化性溃疡病)；(iii)首剂治疗后4周内进行放射疗法；(iv)蕈状肿瘤块或局部晚期PDAC；(v)由于先前的癌症治疗，≥CTCAE 3级毒性(脱发和白癜风除外)；(v)二次恶性肿瘤病史，(vi)严重或不受控制的全身性疾病的证据，充血性心力衰竭>纽约心脏协会(NYHA)2级，或6个月内心肌梗塞(MI)，(vii)严重未愈合的伤口、活性溃疡或未经治疗的骨折；(viii)不受控制的胸腔积液、心包积液，或需要反复引流手术的腹水；(ix)对嵌合或人源化抗体或融合蛋白严重过敏、过敏或其他超敏应答史；(x)治疗后6个月内有重大血管疾病(如，需要手术修复的主动脉瘤或近期动脉血栓形成)，治疗前3个月内有肺栓塞、中风或短暂性脑缺血发作史，和/或治疗前6个月内有腹瘘或胃肠道穿孔史；(xi)活动性自身免疫性病症(除I型糖尿病、仅需要激素替代的甲状腺功能减退、白癜风、银屑病或脱发之外)；(xii)需要全身免疫抑制治疗；(xii)肿瘤相关疼痛(>3级)，对广泛的镇痛干预(口服和/或贴片)无应答；(xiii)尽管使用了双膦酸盐仍未控制的高钙血症；(xiv)接受器官移植。

在一些情况下，受试者是相对于对照水平具有升高的半乳凝素-9水平的人类患者。半乳凝素-9水平可以是人类患者中半乳凝素-9的血浆或血清水平。在其他示例中，半乳凝素-9水平可以是细胞表面半乳凝素-9水平，例如癌细胞上半乳凝素-9水平。在一个示例中，半乳凝素-9水平可以是在患者来源的器官型肿瘤球体(PDOT)中的癌细胞上表达的表面半乳凝素-9水平，该PDOT可通过例如以下实施例中公开的方法制备。对照水平可指没有实体瘤的相同物种(如，人类)受试者的匹配样品中的半乳凝素-9水平。在一些示例中，对照水平代表健康受试者中的半乳凝素-9水平。

为了鉴别这样的受试者，使用常规方法(如，ELISA或FACS)，可从怀疑患有实体瘤的受试者获得合适的生物样品，并且可分析生物样品以确定其中包含的半乳凝素-9水平(如，游离的、细胞表面表达的或全部)。在一些实施方案中，制备类器官培养物，例如如本文所述，并用于评估受试者中的半乳凝素-9水平。作为类器官制备过程的一部分，从某些部分获得的单细胞也适用于评估受试者中的半乳凝素-9水平。在一些情况下，用于测量游离形式或在细胞表面表达的半乳凝素-9水平的测定法涉及使用特异性结合半乳凝素-9(如，特异性结合人半乳凝素-9)的抗体。本领域已知的任何抗半乳凝素-9抗体都可在上述任何测定法中进行适用性测试，然后以常规方式用于此类测定。在一些实施方案中，本文所述抗体(如，G9.2-17抗体)可用于此类测定中。在一些实施方案中，在共同未决的美国专利申请号16/173,970和共同拥有的共同未决的国际专利申请PCT/US18/58028中描述了抗体，其各自的相关公开内容为本文所提及的目的和主题而通过引用并入。在一些示例中，所述抗半乳凝素-9抗体是Fab分子。如本文公开的用于确定半乳凝素-9水平的测定方法也在本公开的范围内。

用于实体瘤联合疗法的试剂盒

本公开还提供了用于治疗或减轻实体瘤例如PDA、CRC、HCC或胆管癌以及本文所述的其他实体瘤的试剂盒。此类试剂盒可包括一个或多个容器，容器包含抗半乳凝素-9抗体，例如任何本文所述的那些(如，G9.2-17(IgG4))，以及任选地待与抗半乳凝素-9抗体共同使用的一种或多种化疗剂(如，吉西他滨和/或紫杉醇)，这也在本文中描述。

在一些实施方案中，试剂盒可包括根据本文所述的任何方法使用的说明书。所包含的说明书可包括施用抗半乳凝素-9抗体和一种或多种化疗剂来治疗、延迟发作或减轻如本文所述的那些目标疾病的说明。在一些实施方案中，试剂盒还包括基于鉴定个体是否患有目标疾病(例如，应用如本文所述的诊断方法)来选择适合治疗的个体的说明。在其他实施方案中，说明书包括对有患有目标疾病风险的个体施用抗体的说明。

与使用抗半乳凝素-9抗体和一种或多种化疗剂有关的说明书通常包括有关预期治疗的剂量、给药方案和给药途径的信息。容器可以是单位剂量、散装包装(如，多剂量包装)或亚单位剂量。本发明的试剂盒中提供的说明书通常是标签或包装插页(如，试剂盒中包含的纸张)上的书面说明书，但机器可读指令(如，磁盘或光存储盘上携带的指令)也是可接受的。

标签或包装插页表明该组合物用于治疗、延缓发作和/或减轻实体瘤。在一些实施方案中，提供了用于实施本文所述任何方法的说明书。

本发明的试剂盒采用合适的包装。合适的包装包括但不限于小瓶、瓶子、罐子、软包装(如，密封的聚酯薄膜或塑料袋)等。还考虑了与特定装置组合使用的包装，如吸入器、鼻腔给药装置(如，喷雾器)或输液装置如微型泵。在一些实施方案中，试剂盒具有无菌进入口(如，容器可以是具有可被皮下注射针刺穿的塞子的静脉内注射溶液袋或小瓶)。在一些实施方案中，容器还具有无菌进入口(如，容器为具有可被皮下注射针刺穿的塞子的静脉内注射溶液袋或小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是如本文所述那些的抗半乳凝素-9抗体。

试剂盒可任选地提供额外的组件，例如缓冲液和解释信息。通常，试剂盒包括容器和在容器上或与容器相连的标签或包装插页。在一些实施方案中，本发明提供了包含上述试剂盒内容物的制品。

一般技术

除非另有说明，本发明的实践采用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，这些技术在本领域的技术范围内。此类技术在文献中有充分解释，例如Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第2版(Sambrook,等人,1989)Cold Spring Harbor Press；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait,编,1984)；Methods in Molecular Biology,Humana Press；Cell Biology:A Laboratory Notebook(J.E.Cellis,编,1998)Academic Press；Animal Cell Culture(R.I.Freshney,编,1987)；Introduction to Cell and Tissue Culture(J.P.Mather和P.E.Roberts,1998)PlenumPress；Cell and Tissue Culture:Laboratory Procedures(A.Doyle,J.B.Griffiths和D.G.Newell,编,1993-8)J.Wiley and Sons；Methods in Enzymology(Academic Press,Inc.)；Handbook of Experimental Immunology(D.M.Weir和C.C.Blackwell,编)；GeneTransfer Vectors for Mammalian Cells(J.M.Miller和M.P.Calos,编,1987)；CurrentProtocols in Molecular Biology(F.M.Ausubel,等人,编,1987)；PCR:The PolymeraseChain Reaction,(Mullis,等人,编,1994)；Current Protocols in Immunology(J.E.Coligan等人,编,1991)；Short Protocols in Molecular Biology(Wiley andSons,1999)；Immunobiology(C.A.Janeway和P.Travers,1997)；Antibodies(P.Finch,1997)；Antibodies:a practical approach(D.Catty.,编,IRL Press,1988-1989)；Monoclonal antibodies:a practical approach(P.Shepherd和C.Dean,编,OxfordUniversity Press,2000)；Using antibodies:a laboratory manual(E.Harlow和D.Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999)；The Antibodies(M.Zanetti和J.D.Capra,编,Harwood Academic Publishers,1995)。

无需进一步详述，认为本领域技术人员可基于以上描述充分利用本发明。因此，以下具体实施方案应当被解释为仅仅是说明性的，而不以任何方式限制本公开的其余部分。出于本文所引用的目的或主题，本文引用的所有出版物均通过引用并入本文。

实施例

尽管已参考其特定实施方案描述了本公开，但是本领域技术人员应当理解，在不背离本公开的真实精神和范围的情况下，可做出各种改变并且可以替换等效物。此外，可进行许多修改以使特定情况、材料、物质组成、工艺、工艺步骤或步骤适应本公开的目的、精神和范围。所有这些修改都旨在落入本公开的范围内。

实施例1.抗半乳凝素-9抗体与化疗剂联合用于胰腺癌小鼠模型中癌症治疗的体内研究

在胰腺癌小鼠模型中进行抗半乳凝素-9IgG4全人抗体(G9.2-17(IgG4))用于治疗难以治疗的实体瘤的临床前评估——作为单一药物或与其他全身化疗抗癌方式联合使用。

使用的特定动物是雌性C57BL/6小鼠的原位mPA6115胰腺癌异种移植模型。为了生成这个模型，首先，肿瘤来源于mPA6115小鼠，这是胰腺导管腺癌(PDAC)的小鼠同种移植模型，它保留了与人PDAC的形态相似性。mPA6115小鼠染色携带条件突变Kras(Kras^LSL-G12D/WT)、Trp53的组成性缺失(P53KO/KO)和由Pdx1基因启动子驱动的Cre，并在8周龄时发展为严重的PDAC肿瘤。

此时，处死具有可触知的肿瘤的mPA6115小鼠，收集其胰腺肿瘤。将收集的肿瘤组织切成小块(～2mm³)并皮下(SC)移植到同系接受者C57BL/6小鼠。这些种子肿瘤在C57BL/6小鼠的皮下维持，直到种子肿瘤的体积达到700～1000mm³。一旦种子肿瘤达到所需体积，就收集肿瘤并将其切成直径约2mm³的块。然后用冰冷的Roswell Park Memorial Institute(RPMI)1640培养基(不含血清)清洗肿瘤以去除相邻的非肿瘤组织。然后将肿瘤块置于冰冷的RPMI 1640培养基中直至原位植入。在收集种子肿瘤的同一天，对6-7周大的雌性C57BL/6小鼠进行胰腺原位植入。具体地，动物完全麻醉后，在左下胸腔切开小的纵向切口，以暴露脾脏和脾脏下方的胰腺。用6-0缝合丝线向每只小鼠的胰腺缝入一个种子肿瘤块。接着用缝合6-0丝线缝合肿瘤块周围的组织，用胰腺组织包裹肿瘤块。然后用4-0缝合丝线缝合腹部。肿瘤植入后，将动物关在温暖的笼子里，随后在麻醉完全恢复后返回动物室。

在进行植入当天，实施的小鼠根据其体重随机分成6组，其中基于“匹配分布”法(StudyDirector^TM软件，3.1.399.19版)进行随机化。随机化日期表示为第0天。植入后3天，动物根据组号开始给药方案。下表2中提供了每组的给药方案。

表2.研究给药计划

i.p.＝腹膜内；i.v.＝静脉内；QW＝每周一次；Q4D＝每4天一次

对于这些研究，使用了抗半乳凝素-9小鼠IgG1。这种抗体被称为抗-Gal9mAb，是人G9.2-17抗体的小鼠IgG1版本，它结合与G9.2-17相同的半乳凝素-9的碳水化合物结合域2(CRD2)，并具有与G9.2-17相同的VH和VL区。因此，使用抗-Gal9 mAb得到的数据与G9.2-17的人类功效相关。除了仅用抗-Gal9mAb(组4)治疗小鼠外，组5和组6的植入小鼠还接受了标准护理化疗(吉西他滨/abraxane方案)，或抗-Gal9 mAb和化疗的组合。

在胰腺原位植入后，每天检查组1-7的小鼠的发病率和死亡率。在常规监测期间，检查动物的肿瘤生长和治疗对行为的任何影响，例如活动能力、食物和水消耗、体重增加/减少、眼睛/毛发无光和任何其他异常。使用StudyDirector^TM软件(3.1.399.19版)随机化后每周两次测量体重和肿瘤体积。如所述的在第0天至第66天(发现最后一只小鼠死亡时)收集测量值并监测。在每只小鼠生命结束时收集血液、血浆、脾脏和肿瘤。下表3显示了按实验组的小鼠的平均寿命。所有对照组(组1、2和3)中最长的生存期为33天，而组4(抗半乳凝素-9IgG1)、组5(吉西他滨/abraxane)、组6(联合疗法)中最后一只小鼠分别在第55、41和66天死亡。

表3.每组小鼠的平均寿命

采用Kaplan-Meier法通过分别考虑地估计每个组的生存曲线来评估移植有原位KPC肿瘤的动物的主要生存终点，并采用对数秩检验进行统计学比较。具体地，采用Kaplan-Meier生存曲线/对数秩检验(SPSS 18)。Kaplan-Meier生存曲线和对数秩检验如图1A至1D所示。表4提供了对数秩检验结果。

表4.对数秩检验

*,p<0.05；**,p<0.01；***,p<0.001；ns,p≥0.05

采用cox-回归分析(生存R软件包的coxph函数(coxph function of survival Rpackage))计算组4-6分别相对于组1、组2和组3的风险比(HR)及其95％置信区间(％95CI)。我们还使用cox回归分析来计算组5和组6相对于组4的风险比(HR)及其95％置信区(％95CI)。最后，我们使用cox回归分析计算组6对组5的风险比(HR)及其95％置信区间(％95CI)。Cox回归分析结果如图2和表5所示。

表5.Cox回归分析

*,p<0.05；**,p<0.01；***,p<0.001；ns,p≥0.05

对于以组1为参考的cox回归分析，组4和组6的风险比显著低于组1，而组2和组3与组1的风险比没有显著差异。在使用组2作为参考的cox回归分析中，组6的风险比显著低于组2；然而，组3与组2没有显著差异的风险比。对于使用组3作为参考的cox回归分析，组4、组5和组6与组3没有显著差异的风险比。以组4为参考的cox回归分析中，组5和组6与组4的风险比没有显著差异。最后，以组5作为参考的cox回归分析表明，组6与组5的风险比没有显著差异。

这些数据表明，抗半乳凝素-9抗体和吉西他滨/abraxane的组合耐受性良好，可长时间施用(抗半乳凝素-9IgG1抗体(小鼠IgG1版本)最多施用16个剂量，以及吉西他滨/abraxane最多施用10个剂量)，并且与未治疗的动物相比带来了生存益处(组6相比组1：Cox分析，HR＝0.336，HR(95％CI)＝(0.14,0.806)，p＝0.015；以及p＝0.051，对数秩检验平均生存期)。与未治疗的动物相比，单独的抗半乳凝素-9IgG1提供了生存益处(组4相比组1：Cox分析，HR＝0.348，HR(95％CI)＝(0.146，0.83)，p＝0.017)。

在第66天发现小鼠死亡结束研究时，组6中最后一只小鼠的胰腺中未发现肿瘤。根据历史数据，媒介物组中原位mPA6115模型的转换率(take rate)为100％。因此，组6中的最后一只小鼠是抗半乳凝素-9/吉西他滨/abraxane联合方案的完全应答者。

在植入/随机化(第0天)后每周两次测量植入原位KPC肿瘤的小鼠体重，直到所有小鼠被安乐死或死亡。图3显示使用StudyDirector^TM软件(3.1.399.19版)测量的研究期间收集的体重测量值。组4的最后一只小鼠在第55天垂死而进行安乐死，肿瘤重量为2544.6mg(TV＝1877.07mm³)。从第51天至第55天，与治疗第一天的体重相比，组4只有最后一只小鼠有从12.36％到-2.25％的体重变化。体重减轻很可能与肿瘤生长引起的状况有关。

总体而言，本实施例中的数据证实了抗半乳凝素-9方案和抗半乳凝素9/吉西他滨/abraxane联合方案在原位胰腺癌异种移植模型mPA6115中的安全性和有效性。

实施例2：转移性实体瘤受试者中G9.2-17(IgG4)单独和联合化疗的安全性、药代动力学和抗肿瘤活性的1a/1b期开放标签、多中心研究

半乳凝素-9是被许多实体瘤过表达的分子，包括胰腺癌、结直肠癌和肝细胞癌。此外，半乳凝素-9在肿瘤相关巨噬细胞以及肿瘤内免疫抑制性γδT细胞上表达，从而充当癌症相关免疫抑制的有效介导物。如本文所述，已经开发了靶向半乳凝素-9的单克隆抗体(如，G9.2-17)。数据表明，G9.2-17在原位KPC模型中使胰腺肿瘤的生长停止50％，并使KPC动物的生存期延长超过两倍。此外，在动物研究中，抗半乳凝素-9抗体显示与化疗剂协同治疗的信号。

该I/II期多中心研究的目标是确定在具有转移性实体瘤(如，胰腺癌(PDA)、结直肠癌(CRC)、肝细胞癌(HCC)或胆管癌(CCA))的受试者中治疗12至24个月后的安全性、耐受性、最大耐受剂量(MTD)和客观肿瘤应答。该研究还检测了无进展生存期(PFS)、应答持续时间(根据RESIST)、疾病稳定、存活受试者比例、以及药代动力学(PK)和药效学(PD)参数。受试者在治疗前和治疗后进行活检，以及研究前和研究期间每8周一次进行PET-CT成像。此外，还检测了免疫学终点，如外周和肿瘤内T细胞比率、T细胞活化、巨噬细胞表型分析、血清中的细胞因子谱分析、肿瘤免疫组化和半乳凝素-9血清水平。该研究在主研究方案下进行，并且研究持续12至24个月。

受试者、疾病以及所有临床和安全性数据以均值、中位数或比例描述性地呈现，并采用适当的方差度量(如，95％置信区间范围)。将Waterfall和Swimmers作图用于以图形方式呈现每个研究组的受试者每个疾病部位内的ORR和应答持续时间，如下所述。还进行了探索性相关性分析，以确定可能与ORR相关的潜在生物标志物。所有统计分析均使用SAS，9.2版(SAS，Cary，NC)进行。

(A)研究设计

基于小鼠模型KPC004数据，当前估计的最低预期药理学活性剂量(PAD)为2mg/kg，其中50mcg/小鼠(2mg/kg；人体等效剂量HED＝0.16mg/kg)确定为活性剂量。替代模型在200或400mcg/小鼠剂量范围(8-16mg/kg；HED＝0.65-1.3mg/kg)内起作用。

下表7显示建议的临床起始剂量水平，该水平取决于100和200mg/kg G9.2-17的建议剂量水平下符合GLP的重复给药毒性研究的结果。估计的起始剂量使用未观测到不良作用水平(NOAEL)的1/10或最高非严重毒性剂量(HNSTD)的1/6作为起始点，然后将该剂量(mg/kg)转换为HED(mg/kg)。

表7 建议的临床起始剂量

本研究包括G9.2-17(IgG4)的单一疗法和包括G9.2-17和吉西他滨/Abraxane((用于可注射混悬液的紫杉醇蛋白结合颗粒；白蛋白结合型)的联合疗法。该研究分为两部分：第1部分(第1a期)和第2部分(第1b期)。

第1部分

本研究第1部分是使用连续重新评估方法(CRM)(O'Quigley等人,1990)的剂量探索研究，这是基于模型的设计，基于过去试验数据告知应当如何为下一个患者队列调整G9.2-17的剂量。一次给两名患者单独服用G9.2-17，最大可用样本量为24。患者每2周接受5个剂量水平，直到疾病进展、不可接受的毒性、或出现剂量限制性毒性(DLT)退出研究。剂量水平为：

·剂量水平1＝2mg/kg；

·剂量水平2＝4mg/kg；

·剂量水平3＝8mg/kg；

·剂量水平4＝12mg/kg；和

·剂量水平5＝16mg/kg。

给药方案是通过静脉内(IV)施用每2周一次(Q2W)。需要时可采用高达25％的剂量减少。

作为安全预防措施，在每次剂量增加时，只有在每个队列的第一名患者已用G9.2-17治疗并且在治疗后已过去至少7天后才加入和治疗新患者。第1部分在连续6名患者接受相同剂量且该剂量被确定为最佳生物剂量(OBD)后完成。

第2部分

本研究第2部分是Simon二阶段优化设计(六组：胰腺导管腺癌(PDA)、CRC和胆管癌)。该研究调查了单独使用G9.2-17(研究的单药组)和与吉西他滨/Abraxane联合使用。使用的抗半乳凝素-9抗体的剂量低于第1部分中发现的显示毒性的水平。

优化的二阶段设计用于检验单药剂组内ORR≤5％的零假设相比ORR≥15％的备选。在第一阶段对23名患者进行药物测试后，若≤1名患者应答，则使相应的试验组终止。若试验继续进行至Simon优化设计的第二部分，每个单药剂组共入选56名患者。若应答患者的总数≤5，则该组中的研究药物被否决。若≥6名患者在3个月时有ORR，则激活该组的扩展队列。上述方法适用于研究的单药剂组。

用G9.2-17和吉西他滨/Abraxane联合治疗

在转移性PDAC患者中评估G9.2-17和吉西他滨/Abraxane的联合治疗。本研究的主要目标是6个月时的无进展生存(PFS)。次要目标包括改善客观应答率(ORR)、6个月和12个月疾病控制率(DCR)、6个月和12个月患者生存、应答前时间、应答持续时间和深度(根据RECIST1.1标准)、安全性和耐受性。在联合组的情况下，G9.2-17的起始剂量以比第1部分中确定的OBD更低的一个剂量(如，第1部分中确定的RP2D剂量水平)施用。吉西他滨/Abraxane的剂量遵循FDA批准的标签剂量，并且可鉴于治疗方案的特定副作用(如果有的话)进行调整(如，2周施用，1周休息)。若3名或更多名患者出现DLT，则G9.2-17的剂量逐步减少，不超过剂量3的量，除非低剂量继续提供临床益处。

在由转移性PDAC患者组成的患者队列中，主要功效终点是6个月时的PFS。在使用吉西他滨/Abraxane的一线转移性环境中，据报道6个月时的PFS为50％(Von Hoff等人,2013)。在第一阶段的前11名患者中测试G9.2-17/化疗组合后，若6名或更少的患者显示PFS≥6个月，则终止试验。在试验的第二阶段，共研究25名患者。若PFS≥6个月的应答患者总数≤16，则该研究组被否决。

在检测到早期功效性信号的情况下实施队列扩展。一旦在五个试验组之一确定了可归因于肿瘤类型的有希望的功效性信号，就会启动扩展队列以验证该发现。每个扩展组的样本量基于第2部分中确定的点估计值并结合ORR/患者生存期周围的95％置信区间(95％CI)的预定精度水平来确定。

第3部分

第3部分包括已检测到早期功效性信号的扩展队列。如果在一个试验组中确定可归因于肿瘤类型的有希望的功效性信号，则启动扩展队列以验证该发现。每个扩展组的样本大小基于第2部分中确定的点估计值并结合ORR周围的95％置信区间(95％CI)的预定精度水平来确定。

研究时间为12至24个月。

(B)患者群体

患有复发/难治性转移性癌症的患者，无论肿瘤类型，都符合使用O'Quigley(1990)所述的持续重新评估方法(CRM)进行剂量探索研究的条件。设想了PDAC中的扩展，其中在第1部分中获得作用模式和/或早期功效性信号。

第1部分和第2部分的患者入选和排除标准相同。

患者入选标准：

1.书面知情同意书

2.年龄≥18岁，男性或未怀孕女性

3.组织学证实不可切除的转移癌(腺癌和鳞状细胞癌)

4.能够遵守研究方案

5.预期寿命>3个月

6.可用于生物标志物分析的近期存档肿瘤样本(5年内获得)。

7.患者能够并愿意接受治疗前和治疗期间/治疗后的活检。

8.根据RECISTv1.1可测量的疾病。注意，活检病灶不应是靶病灶。

9.预期生存期>3个月

10.对于第1部分：没有可用的护理标准选择，或患者拒绝了可用和指定的护理标准疗法，或不符合可用和指定的护理标准治疗的条件。对于第2部分：PDAC扩展队列——在转移性癌症环境中接受至少一种(line)系统性疗法，且针对未接受过含吉西他滨方案或使用含吉西他滨的方案治疗并脱离至少6个月的患者。CCR和CCA扩展队列——在转移性环境中接受至少一种既往疗法。

11.允许在研究期间之前或期间接种COVID-19疫苗。必须记录有关疫苗接种时间和类型的信息。

12.东部肿瘤协作组(ECOG)表现状态0-1/Karnofsky评分>70。

13.研究的第1部分允许高微卫星不稳定性(MSI-H)和微卫星稳定性(MSS)患者。

14.足够的血液学和终末器官功能，定义为中性粒细胞计数≥1x10⁹/L，血小板计数≥100x10⁹/L，对于HCC在第1部分中≥50x10⁹/L；前一周未输血情况下的血红蛋白≥8.5g/dL，肌酸酐≤1.5xULN，AST(SGOT)≤3xULN(存在HCC或肝转移时≤5xULN)，ALT(SGPT)≤3xULN(存在HCC或肝转移时≤5xULN)，胆红素≤1.5xULN(已知吉尔伯特病患者的胆红素≤3.0xULN)，白蛋白≥3.0g/dL，INR和PTT≤1.5xULN；淀粉酶和脂肪酶≤1.5xULN

15.研究开始前4周内没有活性感染或需要胃肠外抗生素的感染的证据，并且没有严重感染。

16.有生育能力的女性在进入研究之前必须进行阴性妊娠试验。

17.有生育能力的女性和有生育能力伴侣的男性必须愿意在试验期间和治疗完成后的3个月内采取高效避孕措施。

18.在第一次G9.2-17施用前自最后一剂抗癌治疗起四(4)周或5个半衰期(以较短者为准)。

19.对于在C1D1之前已经稳定至少6个月的骨转移瘤，允许继续使用双膦酸盐治疗(唑来膦酸)或地诺单抗。

20.对于CCR和CCA扩展队列，需要转移性环境中的至少一种既往疗法。

21.对于第1部分：肝细胞癌在接受至少一种既往系统性疗法(包括索拉非尼、乐伐替尼、纳武单抗、阿特珠单抗和贝伐单抗)时出现进展，或在标准疗法(包括手术和/或局部区域疗法)出现进展后不耐受或拒绝索拉非尼治疗，或标准疗法被认为无效、无法耐受或不合适，或没有有效的标准疗法可用。

22.允许胆道或胃出口梗阻，只要通过内窥镜、手术或介入手段有效引流。

23.允许胰瘘、胆瘘或肠瘘，只要它们用适当的无感染且开放引流管进行控制(若在原位有任何引流管或支架，则需要在研究开始前确认开放性)。

患者排除标准：

1.被诊断患有原发灶不明的转移性癌症的患者。

2.患者不愿意或不能遵守方案要求。

3.先前或当前的非法药物成瘾(医用和娱乐性大麻/CBD/THC不被视为“非法”)。

4.临床显著的活性不受控制的出血，以及任何具有出血体质的患者(如，活动性消化性溃疡病)。允许预防性或治疗性使用抗凝血剂。

5.哺乳期女性。

6.在研究给药前的4周或施用药物的5个半衰期(以较短者为准)内接受任何其他研究药物或参与任何其他涉及其他研究药物治疗实体瘤的临床试验。

7.首次给药研究药物后4周内的放疗，除了对有限区域的姑息性放疗，如用于治疗骨痛或病灶性疼痛的肿瘤块。

8.具有蕈状肿瘤块的患者。

9.具有局部晚期PDAC的患者。

10.由于先前的癌症治疗≥CTCAE 3级毒性(脱发和白癜风除外)。使用先前检查点抑制剂的4级免疫介导毒性。2级或3级肺炎或导致免疫疗法治疗中止的任何其他3级检查点抑制剂相关毒性。允许低级别(<3级)毒性，如先前治疗引起的神经病变、可控制的电解质异常和淋巴细胞减少。

11.二次恶性肿瘤史，之前超过5年的以治愈性目的治疗且没有复发或复发可能性低的那些除外(如，非黑色素皮肤癌、宫颈原位癌、前列腺癌或浅表性膀胱癌)。

12.严重或不受控制的全身性疾病、充血性心力衰竭>纽约心脏协会(NYHA)2级、6个月内心肌梗塞(MI)的证据，或鉴于研究者根据实验室发现认为患者不适合参加试验。

13.研究者认为严重损害患者安全或损害G9.2-17毒性评估解释的任何医疗状况。

14.严重未愈合伤口、活动性溃疡或未经治疗的骨折

15.需要反复引流手术的不受控制的胸腔积液、心包积液或腹水

16.对嵌合或人源化抗体或融合蛋白严重过敏、过敏性反应或其他超敏反应史

17.第1周期第1天的6个月内出现重大血管疾病(如，需要手术修复的主动脉瘤或近期的动脉血栓形成)

18.第1周期第1天前3个月内有肺栓塞、中风或短暂性缺血发作史

19.第1周期第1天前6个月内有腹腔瘘或胃肠道穿孔史

20.活动性自身免疫性病症(除I型糖尿病、仅需要激素替代的甲状腺功能减退、白癜风、银屑病或脱发之外)

21.需要系统性免疫抑制治疗，包括但不限于环磷酰胺、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、沙利度胺和抗肿瘤坏死因子[抗-TNF]药剂。可入选接受过或正在接受急性、低剂量系统性免疫抑制剂药物(如，地塞米松4mg)的患者。替代疗法(如，针对肾上腺或垂体功能不全的甲状腺素、胰岛素、生理性皮质类固醇替代疗法[如，泼尼松当量≤10mg/天])不被视为系统性治疗形式。允许使用吸入性皮质类固醇和盐皮质激素(如，氟氢可的松)、局部类固醇、鼻内类固醇、关节内类固醇和眼用类固醇。

23.对广泛镇痛干预(口服和/或贴片)无应答的肿瘤相关疼痛(>3级)。

24.尽管使用了双膦酸盐仍不受控制的高钙血症。

25.任何其他疾病、代谢功能障碍、体检结果或临床实验室结果使得合理怀疑有疾病或病况，其禁止使用研究药物或可能影响对结果的解释或使患者处于高风险治疗并发症。

26.接受了器官移植。

27.正在进行透析。

28.对于第1部分，允许继续对患有转移性去势抵抗性胰腺癌的受试者进行激素雄激素剥夺疗法。

患有(肝)胆道癌(HCC)的受试者的额外排除标准：

1.进入试验前<6周有针对HCC的任何消融疗法(射频消融或经皮乙醇注射)

2.肝性脑病或严重肝腺瘤

3.Child-Pugh评分≥7

4.转移性肝细胞癌在接受至少一种既往系统性疗法(包括索拉非尼)时出现进展，或者在标准疗法(包括手术和/或局部区域治疗)出现进展后不耐受或拒绝索拉非尼治疗，或标准治疗被认为无效、无法耐受或不适当，或无可用的有效标准疗法

5.允许胆道或胃出口梗阻，只要通过内窥镜、手术或介入手段有效引流

6.允许胰瘘、胆瘘或肠瘘，只要它们用适当的无感染且开放引流管进行控制(如果在原位有任何引流管或支架，则需要在研究开始前确认开放性)。

如果出现以下一种或多种情况，患者应当停止治疗：

·怀孕

·无法管理的毒性

·由研究者在综合评估放射学数据、活检结果和临床状态后确定的归因于疾病进展的症状恶化

·与G9.2-17相关的不可耐受的毒性，包括由于个体患者对疗法的可能应答和事件的严重性而被研究者确定为不可接受的irAE发展

·如果患者继续接受研究治疗，可能会危及患者安全的任何医疗状况

·使用另一种非方案的抗癌疗法(C)目标

第1部分(第1a期)

主要目标：安全性、耐受性、最佳生物剂量(OBD)或最大施用剂量(MAD)、推荐的第2期剂量(RP2D)

次要目标：药代动力学(PK)、药效学(PD)参数、免疫原性

探索性目标：除下列探索性终点外，第1部分的探索性终点：客观应答率(ORR)，疾病控制率(DCR)，无进展生存(PFS)，3个月(第1部分)、6个月和12个月(第1部分和第2部分)的患者存活。

CRC和CCA中的第2部分(第1b期)

主要目标：客观应答率(ORR)

次要目标：无进展生存(PFS)、疾病控制率(DCR)、根据RECIST1.1的应答持续时间和深度、6个月和12个月时的患者存活、应答前时间、安全性和耐受性

PDAC中的第2部分(第1b期)

主要目标：6个月时的无进展生存(PFS)

次要目标：客观应答率(ORR)、6个月和12个月时的疾病控制率(DCR)、6个月和12个月时的患者存活、应答前时间、根据RECIST1.1标准的应答持续时间和深度、安全性和耐受性

所有研究部分的探索性终点：

iRECIST标准，来自血液和肿瘤的免疫表型分析、细胞因子谱(血清)、血液(血清或血浆)中可溶性半乳凝素-9水平、半乳凝素-9肿瘤组织表达水平和免疫组化表达模式(肿瘤、基质、免疫细胞)、肿瘤突变负荷(TMB)、免疫组化PDL-1表达、错配修复状态、与疾病相关的肿瘤标志物、ctDNA以及这些参数与应答的相关性。应答前时间(TTR)。生活质量和症状控制。

(D)研究程序

(i)评估时间表

评估时间表在给药前1个周期1次筛选(这可发生在治疗开始之前长达4周)之后分为4周周期。表8列出了给药前筛选评估和测试，以及示出在治疗周期中要进行的那些。如果有医学指征，在每个周期期间允许任选的访问，在此期间可进行任何研究评估。

(ii)筛选和评估程序

必须在开始治疗的4周内进行以下程序(表8.评估时间表中概述)：

·书面知情同意书

·核实入选和排除标准

·先前COVID-19感染记录和最新RT PCR和/或SARS CoV2IgG/IgM检测结果(如果进行)

·记录患者接种COVID-19疫苗的意图(如果可用)

·记录季节性流感的疫苗接种状态

·优选有或无造影剂的肿瘤影像评估CT，如果需要基于研究者的判断进行有或无造影剂的MRI，如果需要基于研究者的判断进行PET-CT(诊断性CT)

·肿瘤活检(第一次给药前和重复活检)——根据扫描安排

·对于通过免疫组化预筛选评估半乳凝素-9表达，可使用存档肿瘤组织(如果可用)，只要是在5年的时间范围内获得的，并且组织获得后施用的治疗细节是已知且有记录的。这不是入选的先决条件，研究者将尽可能提供存档标本。

·按肿瘤类型的相关肿瘤标志物，如CA15-3、CA-125、CEA、CA19-9、甲胎蛋白等，将在每个周期给药前进行评估(可能会在治疗6个月后减少到每3个周期进行评估，按照与重新分期扫描相同的时间表)，视情况而定

·患者人口统计资料

·个人病史，包括先前治疗/手术、任何原位植入物或过去植入物的记录、先前和/或当前使用的医疗器械、伴随用药(名称、适应证、剂量、途径、剂量调整(如果有的话)开始和结束日期和原因、先前存在的症状和不良事件)、基于家族史和患者最了解的完整家族史的有风险的遗传性疾病

·先前获得的任何和所有其他测试结果(下一代和/或全外显子组测序结果、循环肿瘤DNA测试、种系测序结果、DPD测试结果、G6PD测试结果、Oncotype Dx和/或Endopredict测试结果、共有分子亚型(CMS)分类、DXA扫描(如果有)。这些不是入选的先决条件。

·过去12个月进行的任何牙科手术/根管或眼科手术的记录

·下颌骨或上颌骨坏死史

·任何先前需要静脉内抗生素和/或抗真菌剂、port-a-cath替换的port-a-cath感染史。

·如果根据研究者的评估认为患者脱水，允许并在任何周期给药之前建议口服和/或静脉内补液。研究者可决定在给药当天进行BUN测试以指导决策。

·体检和视觉体征记录

·ECHO，射血分数(EF)

·12导联ECG

·任何瘢痕疙瘩疤痕的部位和状态/尺寸的记录

·在具有稳定且预先治疗过的脑转移患者中进行神经系统检查

·任何饮食要求或偏好的记录(如，实行特定饮食方案：间歇性禁食、生酮饮食等)

·补充剂的使用(当前和过去12个月)、使用类型持续时间、剂量和频率

·ECOG和/或卡氏(Karnofsky)状态

·仰卧5分钟后的生命体征(体温、HR、BP、RR，包括体重)

·如果是育龄女性，妊娠试验。如果双侧输卵管-卵巢切除术和/或子宫切除术的既往史则不需要，但记录这些手术程序。

·过去和/或当前的过敏史(过敏原、严重程度)

·全血细胞计数(CBC)、伴分类、血小板、血红蛋白

·血液化学(葡萄糖、总蛋白、白蛋白、电解质[钠、钾、氯化物、总CO₂]、钙、磷、镁、尿酸、胆红素(总胆红素、直接胆红素)、SGPT(ALT)或SGOT(AST)、碱性磷酸酶、胆红素、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸酐、血尿素氮、CPK、TSH、fT4、脂肪酶、淀粉酶、PTH、FSH、LH、CRP、和/或肌钙蛋白

·凝血(PT、PTT、APTT)

·尿分析

·PD血液–生物标志物分析

·PD肿瘤——治疗前活检的生物标志物分析

(iii)在研程序

确保每次抽血时进行PD血液生物标志物分析；在研究前和期间/后活检中进行肿瘤生物标志物分析。筛查过程必须涉及并记录神经系统检查。任何>2级irAE将被转交给相关专家并相应记录。irAE的管理将根据免疫治疗相关毒性管理(NCCN指南版本1.2020)进行。在研究治疗期间进行的研究相关程序和评估详述如下和表8(评估时间表)。

对于在治疗期间诊断出的COVID-19感染，调查人员和申办者将遵循FDA指南和当地政策，调查人员应联系医疗监察员以讨论最佳行动方案。

第1周期程序

(a)第1周期第1天程序

完成所有先前的筛选和基线程序后，第1天将进行以下程序。

·12导联ECG

·体格检查

·ECOG

·仰卧5分钟后的生命体征(体温、HR、BP、RR，包括体重和/或BSA)

·伴随用药(名称、适应证、剂量、途径、开始和结束日期、任何和所有剂量调整及其时间安排和原因)

·不良事件

·全血细胞计数(CBC)、伴分类、血小板、血红蛋白

·C1D1的7天内的所有：血液化学(葡萄糖、Hgb A1c(如果有DM1或DM2史)、总蛋白、白蛋白、电解质[钠、钾、氯化物、总CO2]、钙、磷、镁、尿酸、胆红素(总胆红素、直接胆红素)、SGPT(ALT)或SGOT(AST)、碱性磷酸酶、胆红素、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸酐、血尿素氮、CPK)-空腹葡萄糖仅在有临床指征的情况下才会在给药前进行。TSH、fT4、脂肪酶、淀粉酶、PTH、FSH、LH、CRP、肌钙蛋白

·相关肿瘤标志物，如CA15-3、CA-125、CEA、CA19-9、甲胎蛋白等，将在每个周期给药前进行评估(治疗6个月后可减至每3个周期进行评估，安装与重新分期扫描相同的时间表)，视情况而定

·凝血(PT、PTT、APTT)

·尿分析(包括蛋白质和培养物/抗菌谱)

·PD血液–生物标志物分析(可溶性半乳凝素9、来自治疗前活检和免疫表型分析的半乳凝素-9的组织IHC)

·表8中注释时间点的PK血液样品

(b)第1周期第2天程序

第1周期的第2天将进行以下程序。

·伴随用药(名称、适应证、剂量、途径、开始和结束日期)

·不良事件

·PD血液–生物标志物分析

·PK血液样品

(c)第1周期第4天程序

第1周期的第4天将进行以下程序。

·伴随用药(名称、适应证、剂量、途径、开始和结束日期)

·不良事件

·PD血液–生物标志物分析

·PK血液样品

(d)第1周期第7天程序

第1周期的第7天将进行以下程序。

·仰卧5分钟后的生命体征(体温、HR、BP、RR，包括体重)

·伴随用药

·不良事件

·全血细胞计数(CBC)、分类、血小板、血红蛋白

·血液化学(葡萄糖、总蛋白、白蛋白、电解质[钠、钾、氯化物、总CO2]、钙、磷、镁、尿酸、胆红素(总胆红素、直接胆红素)、SGPT(ALT)或SGOT(AST)、碱性磷酸酶、胆红素、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸酐、血尿素氮、CPK)

·PD肿瘤——生物标志物分析

·PK血液样品

(e)第1周期第15天程序

第1周期的第15天进行以下程序。

·全血细胞计数(CBC)、分类、血小板、血红蛋白

·血液化学(葡萄糖、总蛋白、白蛋白、电解质[钠、钾、氯化物、总CO2]、钙、磷、镁、尿酸、胆红素(总胆红素、直接胆红素)、SGPT(ALT)或SGOT(AST)、碱性磷酸酶、胆红素、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸酐、血尿素氮、CPK)ECOG

·仰卧5分钟后的生命体征(体温、HR、BP、RR，包括体重)

·不良事件

·PD血液–生物标志物分析

·PK血液样品

第2周期程序

(a)第2周期第1天程序

第2周期的第1天进行以下程序。

·全血细胞计数(CBC)、分类、血小板、血红蛋白

·血液化学(葡萄糖、总蛋白、白蛋白、电解质[钠、钾、氯化物、总CO2]、钙、磷、镁、尿酸、胆红素(总胆红素、直接胆红素)、SGPT(ALT)或SGOT(AST)、碱性磷酸酶、胆红素、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸酐、血尿素氮、CPK)、TSH、fT4

·相关肿瘤标志物，如CA15-3、CA-125、CEA、CA19-9、甲胎蛋白等，将在每个周期给药前进行评估(治疗6个月后可减至每3个周期进行评估，按照与重新分期扫描相同的时间表)，视情况而定

·体格检查

·不良事件

·ECOG

·仰卧5分钟后的生命体征(体温、HR、BP、RR，包括体重)

·PK血液样品

·PD血液–生物标志物分析

·伴随用药(名称、适应证、剂量、途径、开始和结束日期、任何和所有剂量调整及其时间安排和原因)

(b)第2周期第7天程序

第2周期的第7天将进行以下程序。

·12导联ECG

·仰卧5分钟后的生命体征(体温、HR、BP、RR，包括体重)

·伴随用药(名称、适应证、剂量、途径、开始和结束日期)

·不良事件

·全血细胞计数(CBC)、分类、血小板、血红蛋白

·血液化学(葡萄糖、总蛋白、白蛋白、电解质[钠、钾、氯化物、总CO2]、钙、磷、镁、尿酸、胆红素(总胆红素、直接胆红素)、SGPT(ALT)或SGOT(AST)、碱性磷酸酶、胆红素、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸酐、血尿素氮、CPK)

·PD血液–生物标志物分析

·PK血液样品

·妊娠试验，如果是育龄且卵巢和子宫在原位的女性

(c)第2周期第15天程序

第2周期的第15天进行以下程序。

·重新分期扫描(有造影剂的CT、MRI、PET-CT或X射线)——可在研究药物施用开始后6至8周进行，安排为额外的单独访问

·肿瘤活检-3/+12天，如果可行并安排为单独访问/可与扫描同时进行，因为可能需要影像学引导以促进获取组织样品(不应对靶病灶进行活检)

·PD肿瘤-生物标志物分析

·ECOG

·仰卧5分钟后的生命体征(体温、HR、BP、RR，包括体重)

·不良事件

·PK血液样品

·PD血液–生物标志物分析

第3周期程序

(a)第3周期第1天程序

第3周期的第1天进行以下程序。

·全血细胞计数(CBC)、分类、血小板、血红蛋白

·血液化学(葡萄糖、总蛋白、白蛋白、电解质[钠、钾、氯化物、总CO2]、钙、磷、镁、尿酸、胆红素(总胆红素、直接胆红素)、SGPT(ALT)或SGOT(AST)、碱性磷酸酶、胆红素、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸酐、血尿素氮、CPK)、TSH、fT4

·相关肿瘤标志物，如CA15-3、CA-125、CEA、CA19-9、甲胎蛋白等，将在每个周期给药前进行评估(治疗6个月后可减至每3个周期进行评估，按照与重新分期扫描相同的时间表)，视情况而定。

·体格检查

·ECOG

·仰卧5分钟后的生命体征(体温、HR、BP、RR，包括体重)

·伴随用药(名称、适应证、剂量、途径、开始和结束日期)

·不良事件

·PD血液–生物标志物分析

·PK血液样品

·怀孕测试，如果是育龄女性

(b)第3周期第7天程序

第3周期的第7天进行以下程序。

·ECHO

·仰卧5分钟后的生命体征(体温、HR、BP、RR，包括体重)

·伴随用药(名称、适应证、剂量、途径、开始和结束日期)

·不良事件

·全血细胞计数(CBC)、分类、血小板、血红蛋白

·血液化学(葡萄糖、总蛋白、白蛋白、电解质[钠、钾、氯化物、总CO2]、钙、磷、镁、尿酸、胆红素(总胆红素、直接胆红素)、SGPT(ALT)或SGOT(AST)、碱性磷酸酶、胆红素、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸酐、血尿素氮、CPK)

·PD血液–生物标志物分析

·PK血液样品

(c)第3周期第15天程序

第3周期的第15天进行以下程序。

·ECOG

·仰卧5分钟后的生命体征(体温、HR、BP、RR，包括体重)

·不良事件

·PK血液样品

·PD血液–生物标志物分析

第4周期及以后的程序

(a)第4周期第1天程序

第4周期的第1天和随后周期进行以下程序。

·全血细胞计数(CBC)、分类、血小板、血红蛋白

·血液化学(葡萄糖、总蛋白、白蛋白、电解质[钠、钾、氯化物、总CO2]、钙、磷、镁、尿酸、胆红素(总胆红素、直接胆红素)、SGPT(ALT)或SGOT(AST)、碱性磷酸酶、胆红素、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸酐、血尿素氮、CPK)、TSH、fT4、脂肪酶、淀粉酶、PTH、肌钙蛋白、FSH、LH、CRP

·重新分期扫描(用造影剂的CT、MRI、PET-CT或X射线)——可在研究药物施用开始后6至8周完成

·相关肿瘤标志物，如CA15-3、CA-125、CEA、CA19-9、甲胎蛋白等，将在每个周期给药前进行评估(治疗6个月后可减至每3个周期进行评估，按照与重新分期扫描相同的时间表)，视情况而定

·体格检查

·ECOG

·不良事件

·PK血液样品

·PD血液–生物标志物分析

·怀孕测试，如果是育龄女性

(b)第4周期第7天程序(与C3D7相同)

第4周期的第7天将进行以下程序

(c)第4周期第15天程序(与C3D15相同)

第4周期的第15天将进行以下程序

(iv)研究结束或提前终止程序

以下程序在第59天或最后一次给药后30天进行，包括提前停止治疗的患者。

·重新分期扫描(优选有或无造影剂的CT，有或无造影剂的MRI，如果研究者需要进行PET-CT)——如果最后一个周期后>6至8周研究结束且间隔更短，则由研究者决定重复

·相关肿瘤标志物，如Ca15-3、CA-125、CEA、CA19-9、甲胎蛋白等，将在每个周期给药前进行评估(治疗6个月后可减为每3个周期进行评估，按照与重新分期扫描相同的时间表)，视情况而定

·12导联ECG

·体格检查

·ECOG

·仰卧5分钟后的生命体征(体温、HR、BP、RR，包括体重)

·伴随用药(名称、适应证、剂量、途径、开始和结束日期)

·不良事件

·妊娠试验，如果是女性且卵巢和子宫在原位

·全血细胞计数(CBC)、分类、血小板、血红蛋白

·血液化学(葡萄糖、总蛋白、白蛋白、电解质[钠、钾、氯化物、总CO2]、钙、磷、镁、尿酸、胆红素(总胆红素、直接胆红素)、SGPT(ALT)或SGOT(AST)、碱性磷酸酶、胆红素、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸酐、血尿素氮、CPK)、TSH、fT4、PTH、雌二醇、促乳素、睾酮、FSH、LH

·凝血(PT、PTT)

·尿分析

·PD血液–生物标志物分析

·PK血液样品

(v)长期随访

一旦患者完成治疗期，将每3个月进行一次总生存期随访，持续长达2年。对于因临床进展而退出的患者，在可能的情况下继续进行放射学评估。

大约每3个月收集一次生存数据以及在疾病进展后开始的任何新抗癌治疗的信息。随访可通过电话访问或病例回顾进行，并报告于病例报告表上。在随访期间，在发现或事件通告24小时内收集并报告被认为与研究治疗相关的死亡(无论其因果关系如何)和严重不良事件。

(vi)研究评估

(a)体格检查

医学和体格检查必须由合格的医师、执业护士或医师助理进行，并且应包括在筛选、治疗期间和研究结束时对全身系统进行彻底检查。体格检查包括乳房检查(如果有临床指征)以及生命体征——体温、心率(HR)、血压(BP)、呼吸频率(RR)，在仰卧位休息5分钟后测量。还测量和记录患者体重。

(b)医疗史

医疗史包括肿瘤史、放射治疗史、手术史、当前和过去用药史。

·个人医疗史，包括先前的治疗/手术、任何原位植入物或过去植入物的记录、先前和/或当前使用的医疗器械、伴随用药(名称、适应证、剂量、途径、开始和结束日期、剂量修改(如果有的话)以及原因)、先前存在的症状和不良事件)、基于家族史和患者最了解的完整家族史的有风险的遗传性疾病

·先前获得的任何和所有其他测试结果(下一代和/或全外显子组测序结果、循环肿瘤游离DNA测试、种系测序结果、DPD测试结果、G6PD测试结果、Oncotype Dx和/或Endopredict测试结果)

·过去12个月进行的任何牙科治疗记录

·任何瘢痕疙瘩伤痕的部位和状态/尺寸记录

·对于先前已切除过胰腺腺癌的患者，记录原发肿瘤是否位于胰头、胰体或胰尾。

·排便习惯/典型频率和一致性

(c)临床实验室评估

根据评估时间表，采集患者血液样品用于常规临床实验室检测。临床实验室参数在现场的当地实验室分析。待完成的实验室评估包括血液学和血清化学，定义如下：

·血清化学：包括葡萄糖、总蛋白、白蛋白、电解质[钠、钾、氯化物、总CO2]、钙、磷、镁、尿酸、胆红素(总胆红素、直接胆红素)、SGPT(ALT)或SGOT(AST)、碱性磷酸酶、胆红素、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸酐、HgbA1c、血尿素氮、CPK、TSH、fT4、脂肪酶、淀粉酶、PTH、睾酮、雌二醇、促乳素、FSH、LH和CRP。在C1D1、C2D1、C3D1、C4D1和其他天数(只有在有临床指征的情况下)给药前进行空腹葡萄糖。

·血液学：包括全血细胞计数、分类、血小板和血红蛋白。

·凝血：包括凝血酶原时间(PT)和部分促凝血酶原激酶时间(PTT)、活化部分促凝血酶原激酶时间(APTT)。

·生物标志物分析(PD血液)：包括患者血清/血浆中的半乳凝素-9水平、外周血免疫表型分析、细胞因子测量。

·药代动力学(PK)血液采样：如果研究者确定应中断研究药物的给药，则在研究药物给药前(给药2小时内)&给药后4小时+/-30分钟收集另外的PK和安全性评估。由于COVID-19限制无法在给药后容纳患者超过2小时的中心将仅在给药后2小时时提供样品。

如果施用因任何原因中断然后重新开始，则在中断期间可根据研究者的判断进行额外的PK评估。如果在恢复施用后减少研究药物的剂量，则将在恢复施用前和给药完成后2小时+/-15分钟收集额外的PK评估。如果根据研究者的判断有临床指征，可进行额外的PK和其他血液评估。

在可能的情况下，在终止研究的患者最后一次研究药物施用后长达4周，可大约每7至14天获得血液用于额外的PK或PD评估。在给药前、给药完成后2小时+/-15分钟和研究药物施用后4小时(+/-15分钟)收集用于PK评估的血液。

(d)尿分析

收集患者尿液样本进行常规尿分析。尿分析包括颜色、外观和比重试纸、蛋白质、白细胞酯酶、葡萄糖、酮、尿胆素原、亚硝酸盐、WBC、RBC和pH值，以及筛选时的尿培养物。

(e)心电图(ECG)

评估来自12导联心电图的以下参数：心率、PR间期、QRS持续时间、QT间期和QTcF间期。

(f)肿瘤影像评估

用造影剂的CT是优选方式(考虑到疾病的位置，如果CT不可行或不合适，用MRI、PET-CT和/或其他成像方式代替或补充CT扫描)。评估应至少包括颈部/胸部/腹部/骨盆，并且应包括基于患者的肿瘤类型和病史所示的其他解剖区域。成像扫描必须去识别，并以原始DICOM格式作为患者研究文件的一部分存档。虽然获得的扫描类型由研究者酌情决定是否适合疾病，但在研究期间应使用相同的方法。每6至8周+/-1周进行一次评估，如果在过去4至6周内未进行评估，则在治疗结束时进行。

(g)肿瘤活检

收集治疗前和治疗期间/治疗后的活检。在第1次剂量施用之前收集治疗前样品。治疗期间的收集可在第1周期后活检可行的任何治疗日进行。优选的下一次活检在第一次研究扫描之前。如果无法在方案指定的时间范围内进行该程序，则可能允许使用替代方案，但必须与研究主任/医疗监督员讨论。一般认为多种临床因素可能会导致难以获得足够的标本。决定在治疗期间不完成活检应与医疗监察员讨论。

(h)肿瘤标志物

探索性标志物，如CA15-3、CA-125、CEA、CA19-9、甲胎蛋白等，在每个周期给药前进行评估(在治疗6个月后可减少至每3个周期进行评估，按照与重新分期扫描相同的时间表)，视情况而定。

(i)不良事件

记录研究药物施用后开始或恶化的不良事件(AE)。应跟踪AE，直到消退至基线、稳定或被认为不可逆。必须从患者书面同意之日起至给药停止或患者参与研究停止后30天(如果最后一次预定访问发生在较晚的时间)收集所有严重AE(SAE)。

^D相关肿瘤标志物：探索性标志物，如CA15-3、CA-125、CEA、CA19-9、甲胎蛋白等，在每个周期给药前进行评估(治疗6个月后可减少至每3个周期进行评估，按照与重新分期扫描相同的时间表)，视情况而定。

^E人口统计资料：包括出生日期、性别、身高、种族、民族。

^F医疗史：包括肿瘤史、放射治疗史、手术史、当前和既往药物史

^GMUGA/ECHO：只有在研究期间有临床指征时，才会收集重复测试。

^H体格检查：如果有临床指征，包括乳房检查

^I伴随用药：收集名称、适应证、剂量、途径、开始和结束日期。

^J不良事件：记录研究药物施用后的开始或恶化。应跟踪AE，直到消退至基线、稳定或被认为不可逆。必须从患者书面同意之日起至给药停止或患者参与研究停止后30天(如果最后一次预定访问发生在较晚的时间)收集所有严重AE(SAE)。

^K妊娠试验：必须具有HCG敏感性≤IU/L或HCG的等效单位，并且在第一个治疗周期的24小时内

^L血液学：全血细胞计数、分类、血小板、血红蛋白

^M生物化学：葡萄糖、总蛋白、白蛋白、电解质[钠、钾、氯化物、总CO2]、钙、磷、镁、尿酸、胆红素(总胆红素、直接胆红素)、SGPT(ALT)或SGOT(AST)、碱性磷酸酶、胆红素、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸酐、血尿素氮、CPK

^N凝血、葡萄糖和尿分析：收集PT、PTT、葡萄糖和UA。*第3周期及其以后的收集只有在有临床指征(如，出血迹象，尤其是胃肠道出血)时才会进行。**在C1D1、C3D1和有临床指征的其他天数的情况下才进行空腹葡萄糖

^OPD血液-生物标志物分析：基因表达、代谢物、耗氧率(OCR)、其他生物标志物分析和PDX形成。按与重新分期扫描相同的时间表进行另外的周期。

^PPK血液样品：如果研究者决定应中断研究药物的剂量，则在给药前(给药2小时内)和给药恢复下研究药物施用后4小时+/-30分钟收集额外的PK和安全性评估；研究者酌情可在中断期间进行额外的PK评估。如果减少研究药物的剂量，在给药前(给药2小时内)&开始减少的研究药物剂量后收集额外的PK评估。如果有临床指征，研究者酌情可进行额外的PK和其他血液评估。在可能的情况下，在停止研究的患者最后一次研究药物施用后长达4周，可约每7至14天获得PK血液样品血液用于额外的PK或PD评估。除评估时间表中所示的时间点外，研究者可酌情获取用于额外PK评估的血液。

^@在每个周期内允许任选的访问(如果有医学指征)，在此期间可进行任何研究评估。

§LYT-200每两周施用一次

给药：在第1周期第1天和第1周期第15天施用剂量；之后将按此时间表进行。

¹给药前（给药2小时内)和研究药物施用后4小时(+/-30分钟内)收集

²给药前（给药2小时内)和研究药物施用后2、4、6、8和12小时(+/-15分钟内)收集

³给药前(给药2小时内)收集

(E)安全性评估

所有观测到的或主动提供的不良事件，无论治疗组或与研究药物的因果关系如何，都记录于病例报告表(CRF)的不良事件页。不良事件使用MedDRA编码系统进行编码，并且所有AE根据美国国家癌症研究所(National Cancer Institute)不良事件通用术语标准5.0版(NCI-CTCAE)[NCI，2017]进行分级。

不良事件

不良事件在国际协调会议(International Conference on Harmonisation，ICH)良好临床实践指南中定义为“施用药物产品的患者或临床研究受试者发生的任何不利的医学事件，且不一定与该治疗有因果关系。”

本研究中对不良事件的定义进行了扩展，以包括从受试者签署知情同意书的时间至研究药物开始使用的时间的任何此类事件(如，体征、症状或诊断)的发生或先前存在的医疗状况的恶化。恶化表明先前存在的医疗状况(如，糖尿病、偏头痛、痛风、高血压等)的严重程度、频率或状况持续时间增加，或者与明显更差的结果相关。

对于所有不良事件，研究者必须寻求并获得足够的信息，以确定不良事件的结果并评估其是否符合分类为严重不良事件的标准，从而需要立即通知赞助者或其指定代表。对于所有不良事件，研究者应获得足够的信息以确定不良事件的因果关系。研究者需要评估因果关系。对于与研究产品有因果关系的不良事件，需要研究者进行随访，直到事件消退或稳定在研究者和赞助者临床监测员或其指定代表可接受的水平。

严重不良事件

严重不良事件(SAE)定义为以下不良事件：

·导致死亡；

·危及生命(使受试者面临直接死亡风险)；

·需要住院或延长现有住院时间；

·导致持续或严重的残疾/丧失能力；或

·先天性异常/出生缺陷

如果根据适当的医疗判断，可能不会导致死亡、危及生命或需要住院的重要医疗事件可能会危害患者并且可能需要医疗或手术干预以防止出现在该定义中所列结果之一时，则该事件可能被视为SAE。此类医疗事件的示例包括需要在急诊室或家中进行强化治疗的过敏性支气管痉挛、血液恶液质或抽搐，但不会导致住院治疗。符合“严重”定义的住院治疗是指任何住院病人入院，其包括至少在医疗保健机构过夜。

住院病人入院不包括：康复设施、临终关怀设施、专业护理设施、疗养院、常规急诊室进入、当天手术(作为门诊/日间/非住院手术)或社会入院(如，受试者没有睡觉的地方)。

安全性将由合格的医师、医师助理或护理人员在整个研究过程中进行评估。用于评估安全性的测量包括病史、体格检查、生命体征、临床实验室检查、尿分析、12导联ECG和AE监测。

可重复在临床上显著偏离先前测量值的实验室测量(由研究者确定)。如果有必要，应进行比方案中规定的额外或更频繁的测试，以提供足够的AE记录和AE解析。

对于所有不良事件，研究者应获得足够的信息以确定不良事件的因果关系(如，研究药物或其他疾病)。按以下定义评估不良事件与研究治疗的关系：

不相关：任何不符合研究药物施用的合理时间顺序、且可能由患者的临床状态或给予患者的其他治疗模式产生的事件。

不太可能：任何不符合研究药物施用的合理时间顺序、或可能由患者的临床状态或给予患者的其他治疗模式产生的事件。

可能：符合研究药物施用的合理时间顺序、或符合对可疑药物的已知应答模式、且无法通过患者临床状态的已知特征或给予患者的其他治疗模式合理解释的任何反应。

相关：符合研究药物施用的合理时间顺序，且符合对可疑药物的已知应答模式，且随着再次挑战而复发，和/或通过停止药物或减少剂量而改善的任何反应。

(a)不良事件管理的剂量减少程序

如果将剂量减少用于AE管理，则允许两次剂量减少。每次剂量减少基线剂量的30％。当预期临床益处并可能继续获得时，会寻求减少剂量。

(b)停止研究治疗的标准

患者通常应维持研究治疗，直到经验证的放射影像进展。如果患者有放射影像学进展但没有明确的临床进展并且没有开始替代治疗，则患者可继续接受研究治疗，由研究者判断。然而，如果患者有明确的临床进展而没有放射影像学进展，则应停止研究治疗，并向患者建议可用的治疗方案。

(c)持续的安全性评审

如果发生严重或危及生命的免疫相关不良反应(IMAR)或提示开始系统性类固醇治疗，则应停止G9.2-17，但可能允许特定例外情况(如，临床稳定患者的某些内分泌病)。

提供详细的监测计划，以限制在联合药物开发过程中发生的IMAR的严重程度和持续时间。

在每个28天周期第1、8和15天，以125mg/m²在30至40分钟以静脉内给予Abraxane。吉西他滨紧接Abraxane之后在每个28天周期第1、8和15天施用。

基于患者潜在不良事件的发展，可进行以下一项或多项：

·轻度肝功能受损患者无需调整。

·如果AST>10x ULN或胆红素>5x ULN，停止Abraxane。

·减少中度至重度肝功能受损患者中的起始剂量。

·基于严重的血液、神经、皮肤或胃肠道毒性，可能需要剂量减少或停止。

禁忌证：

·中性粒细胞计数<1,500个细胞/mm³

·对Abraxane的严重超敏反应。已知对吉西他滨有超敏性的患者。

下面的表9至表12提供了关于Abraxane和吉西他滨的推荐剂量和减少剂量的示例性指导。另见Abraxane monograph:Abraxis BioScience,LLC.Highlights ofPrescribing Information[Internet].Summit(NJ):Celgene Corporation；2019Dec[2020年5月7日引用]。

表9.肝损伤患者中建议的Abraxane起始剂量

^a胆红素水平高于正常上限的患者被排除在胰腺癌或肺癌的临床试验之外。

表10.胰腺腺癌患者中的Abraxane和吉西他滨剂量水平降低

表11.胰腺腺癌患者中周期开始时或周期内对于中性粒细胞减少和/或血小板减少的Abraxane和吉西他滨剂量建议和调整ⁱ

ANC＝嗜中性细胞绝对计数

表12.胰腺腺癌患者中对于其他不良药物反应的Abraxane和吉西他滨剂量修改

考虑到外渗的可能性，建议在药物施用期间密切监测输注部位可能的渗透。按照指示将Abraxane的输注限制在30分钟，可降低输注相关反应的可能性。

(d)识别潜在的安全性问题

剂量限制性毒性(DLT)期：一(1)个周期。

一个周期包括C1D1(第1周期第1天)和C1D15(第1周期第15天)。

监测计划

在第1部分剂量扩大阶段中，在对每个队列的第1周期进行复查后，将剂量扩大到下一个队列。由SMC将安全性和可用的PK数据用于评估每个队列中所有患者的DLT。作为安全预防措施，在剂量扩大期间，只有在每个队列的第一名患者接受G9.2-17治疗并且治疗后过去至少7至14天，新患者才被纳入并治疗。在第1周期完成后进行每名患者的选择DLT安全性分析。在扩展阶段，毒性由SMC监测，其将在每次剂量扩大之前召开会议审查总毒性率。SMC会议的频率随着毒性率的增加而增加。SMC有权在任何时间建议终止或更改本临床研究的研究设计，包括但不限于测试中间剂量水平或启动间歇给药方案。

(e)剂量限制性毒性标准

剂量限制性毒性(DLT)定义为临床重要的非血液学不良事件或异常实验室值，评估为与转移性肿瘤疾病进展、间发疾病或伴随用药无关，并且与研究药物相关且发生在研究的第1周期，符合以下任何标准：

·任何持续时间的所有4级非血液学毒性

·所有3级非血液学毒性。例外情况是：

o3级恶心、呕吐和腹泻，不需要住院或TPN支持并且可在48小时内通过支持性护理控制至≤2级。

o3级电解质异常，24小时内纠正为≤2级。

o其他3级无症状实验室异常

DLT周期包括一(1)个周期，即，四(4)周。一个周期包括第1天和第15天(C1D1和C1D15；分别为第1周期第1天和第1周期第15天)施用G9.2-17。

(f)剂量延迟和减少

可能、很可能或确定与一种或多种研究药物相关的任何AE≥3级将在继续给药前与医学监督员讨论，以下情况除外，无需与医学监察员讨论：

·局部注射部位反应持续<72小时，包括疼痛、发红、肿胀、硬结或瘙痒

·全身性注射反应持续<72小时的发热、肌痛、头痛或疲劳

如果研究者认为合适(在与医学监察员讨论后)，对于≥3级的不良事件可能需要延迟给药，直到毒性消退(至1级或更低)。

在方案的第2部分中，如果超过3名患者发生DLT，则G9.2-17的剂量减少至比建议的第2期剂量(RP2D)低1个剂量

(F)肿瘤评估的RECIST标准

在基线肿瘤评估中，将肿瘤病灶/淋巴结分类为可测量或不可测量，可测量的肿瘤病灶根据测量平面上的最长直径记录(病理淋巴结除外，其在最短轴上测量)。当基线处存在多于一个可测量病灶时，代表所有受累器官的所有病灶总共最多5个病灶(且每个器官最多2个病灶)应被确定为靶病灶。应基于其大小(直径最长的病灶)选择靶病灶。计算所有靶病灶的直径总和并报告为基线总直径。

包括病理淋巴结在内的所有其他病灶(或疾病部位)应确定为非靶病灶，并也应在基线时记录。无需测量，这些病灶应按“存在”、“不存在”或“明确进展”进行跟踪。

疾病应答(完全应答(CR)、部分应答(PR)、疾病稳定(SD)和疾病进展(PD))按照附录4中的概述进行评估。

疾病应答测量允许计算包括CR、PR和SD的总体疾病控制率(DCR)，包括CR和PR的客观应答率(ORR)，无进展生存(PFS)、以及进展前时间(TTP)。

(G)患者完成或退出

患者完成

第1部分-剂量探索：

患者每2周接受5种剂量水平之一的研究药物，直至出现疾病进展、不可接受的毒性、或形成剂量限制性毒性(DLT)退出研究。

向2名患者给药，最大可用样本量为24个。只有接到SMC的批准时才开始剂量扩大。在每次剂量扩大时，只有在前一个队列中的2名患者接受G9.2-17治疗并且治疗后过去至少7天，才纳入和治疗新患者。

第1部分在6名连续患者接受相同剂量且该剂量被确定为OBD时完成。

第2部分–肿瘤类型特异性治疗：

转移性PDAC患者的扩展队列需要G9.2-17和吉西他滨/Abraxane的联合治疗。研究的完成取决于3个月时患者应答和12个月时应答患者的存活。

第2部分-扩展：

如果在5个试验组之一确定可归因于肿瘤类型的有希望的功效性信号，则将启动扩展队列以确认该发现。完成如第2部分所述。

中止研究治疗

由于以下任何原因，可能会在完成研究治疗之前使患者停止：

·剂量限制性毒性-定义为临床上显著的非血液学不良事件或异常实验室值，评估为与转移性肿瘤疾病进展、间发疾病或伴随用药无关，并且与研究药物相关且在研究的第1周期内发生，满足以下任一条件：

o任何持续时间的所有4级非血液学毒性

o所有3级非血液学毒性。例外情况如下：

·3级恶心、呕吐和腹泻，不需要住院或TPN支持，可在48小时内通过支持性护理控制至≤2级。

·3级电解质异常，24小时内纠正为≤2级。

·根据RESIST标准的进展性疾病或在更早时间点的显著临床进展(如果研究者判断为符合患者的最佳利益)

·妨碍进一步施用治疗的间发疾病

实施例3.在雄性Sprague Dawley大鼠中给药后1周和3周观察期的非GLP单剂量、范围探索性静脉内毒性研究

本研究评估了单次静脉内推注施用于Sprague Dawley大鼠后G9.2-17IgG4的解剖学终点，接着第8天和第22天进行1周(终末)和3周(恢复)尸检。所有动物均存活至预定的尸检时间。在这项研究中，在终末或恢复尸检动物中没有与测试品相关的宏观发现、器官重量变化或微观发现。

该非GLP探索性、单剂量、范围探索、静脉内毒性研究的目标是静脉内推注2分钟施用于Sprague Dawley大鼠，随后1周(终末)和3周(恢复)给药后观察期来识别和表征G9.2-17 IgG4的急性毒性。

该非GLP单剂量毒性研究在24只Sprague Dawley雄性大鼠中进行，以确定单次施用中不同剂量的G9.2-17 IgG4的毒代动力学和潜在毒性。第1天通过缓慢推注静脉内注射至少2分钟分别向动物施用媒介物或10mg/kg、30mg/kg或70mg/kg G9.2-17 IgG4，接着给药之后1周(终止，第8天)或3周(恢复，第22天)时间。研究终点包括死亡、临床观察、体重和食物消耗、临床病理学(血液学、凝血、临床化学和尿分析)、毒代动力学参数、ADA评估和解剖病理学(肉眼尸检、器官重量和组织病理学)。下表13提供了实验设计的概要。

表13.实验设计

组号	治疗	剂量水平(mg/kg)	雄性数目<sup>a</sup>
				1	媒介物<sup>b</sup>	0	6
2	G9.2-17 IgG4	10	6
				3	G9.2-17 IgG4	30	6
4	G9.2-17 IgG4	70	6

^a第8天终末尸检时使3只动物/性别/组安乐死；在第22天恢复尸检时使剩余的3只动物/性别/组安乐死。

^b媒介物为配方缓冲液(20mM Tris,150mM NaCl,pH 8.0±0.05)。

第8天或第22天提交所有存活动物进行尸检。进行完整的验尸检查并收集器官重量。在终末和恢复时对所有动物的器官进行称重。对显微镜评估所需的组织进行修剪、常规处理、石蜡包埋并用苏木精和伊红染色。

在本研究过程中没有计划外死亡。所有动物都存活至终末或恢复尸检。注意到的组织学变化被认为是偶然发现或与实验操作的某些方面有关，而不是测试品的施用。那些偶然组织改变的患病率、严重程度或组织学特征没有与测试品相关。在临床观察、体重、食物消耗、临床病理学或解剖病理学中未发现与G9.2-17 IgG4相关的结果。总之，SpragueDawley大鼠对单次静脉内施用10、30和70mg/kg G9.2-17 IgG4是耐受的，没有发现不良结果。因此，在本研究条件下NOEL为70mg/kg。

实施例4.在食蟹猴中给药后3周观察期的G9.2-17 IgG4的非GLP单剂量、范围探索静脉内输注毒性研究

本非GLP单剂量毒性研究在8只食蟹猴中进行，以鉴定和表征以不同剂量作为单剂量施用的G9.2-17 IgG4的急性毒性。通过30分钟静脉内(IV)输注向动物(1只雄性[M]/1只雌性[F]/组)施用媒介物或30mg/kg、100mg/kg或200mg/kg G9.2-17 IgG4后，接着是3周给药后观察期。研究终点包括：死亡率、临床观察、体重和定性食物消耗；临床病理学(血液学、凝血、临床化学、免疫表型分析和白细胞亚群的半乳凝素9表达，以及细胞因子分析)；毒代动力学参数；用于可能的抗药物抗体评估(ADA)的血清收集；以及可溶性半乳凝素-9分析；以及解剖病理学(肉眼尸检、器官重量和组织病理学)。

在临床观察、体重、食物消耗、临床病理学(血液学、临床化学、凝血或细胞因子分析)、免疫表型分析、白细胞亚群上的半乳凝素-9表达、可溶性半乳凝素-9或解剖病理学中未注意到G9.2-17 IgG4相关的发现。

总之，食蟹猴对单次静脉内输注施用30、100和200mg/kg G9.2-17 IgG4是耐受的，无不良结果。因此，在本研究条件下，未观察到不良作用的水平(NOAEL)为200mg/kg，这是评估的最高剂量水平。研究设计如表14所示。

表14.实验设计

^a组4在组1至组3施用后1周施用

^a组4在组1至组3施用后1周施用

在研究期间经由经皮放置在隐静脉内中的导管通过IV输注30分钟一次施用媒介物和测试品。剂量水平为30、100和200mg/kg，并以20mL/kg的剂量体积施用。对照组以与治疗组相同的方式接受媒介物。

在给药期间将动物置于吊索限制(sling restraint)中。媒介物或测试品基于最近的体重并使用输液泵和无菌一次性注射器施用。给药注射器填充适当体积的媒介物或测试品(20mL/kg，额外2mL)。在给药完成时，将动物从输注系统中取出。在每次输注开始和结束之前记录每个给药注射器的重量以确定剂量衡算计量(accountability)。

详细的临床观测

将动物从笼子中取出，在第1天开始输注(SOI)后1小时和4.5小时对每只动物进行详细的临床检查，之后在研究期间每天进行一次。将动物从笼子中取出，在第1天开始输注(SOI)后1小时和4.5小时对每只动物进行详细的临床检查，之后在研究期间每天进行一次。在转移时、随机化前、第-1天和研究期间每周测量并记录所有动物的体重。

在测试前和第1天(给药前)、第3天、第8天和第21天对所有动物进行临床病理学评估(血液学、凝血和临床化学)。用于确定血液学参数和外周血淋巴细胞和细胞因子分析的其他样品在SOI后30分钟(输注结束后立即)和4.5、8.5、24.5和72.5小时(相对于第1天)收集。收集并保存骨髓涂片。

经由股静脉收集所有动物的血液样品(约0.5mL)，用于测定测试品的血清浓度(见表15)(对于偏差，见附录1)。动物在采血前不禁食，例外是与用于临床病理采集的禁食一致的时间间隔。

表15.生物分析样品采集时间表

X＝采集样品.

^a:仅对第1组动物SOI后0.583hr的时间点进行试验品含量分析。其他时间点可根据研究主任判断进行分析。

为了处理，将血液样品采集于无添加剂无屏障微管中，并在收集后1小时内于受控室温下离心。将得到的血清在预先标记的冷冻管中分成2份大致相等的等分试样。所有等分试样在采集2小时内于-60℃至-90℃冷冻保存。

对在预定尸检时实施安乐死的所有动物进行死后研究评估。

在兽医病理学家批准的程序下进行尸检检查。仔细检查动物的外部异常，包括可触及的肿块。皮肤从腹侧中线切口显示，确定任何皮下肿块并与死前检查结果相关联。检查腹腔、胸腔和颅腔是否有异常。器官被取出、检查，并在需要时放入固定剂中。除眼(包括视神经)和睾丸外，将所有指定的组织固定于中性缓冲福尔马林(NBF)中。将眼(包括视神经)和睾丸置于改良的Davidson’s固定剂中，然后在最终放入NBF之前转移至70％乙醇中长达三天。福尔马林经由气管注入肺部。采集所有动物的全部完整组织和器官。

在预定的尸检时记录所有动物的体重和方案指定的器官重量，并计算适当的器官重量比(相对于体重和脑重)。成对的器官一起称重。收集甲状腺和甲状旁腺的总重量。

结果

所有动物都存活至第22天的预定尸检。在治疗的动物中未发现与测试品相关的临床或兽医观察结果。在治疗或恢复期间，在治疗动物中未观测到与测试品相关的对体重的影响。任何性别在任何时间间隔、任何剂量水平下，都无G9.2-17 IgG4相关的对血液学终点的影响。

任何性别在任何剂量水平、任何时间间隔下都无G9.2-17 IgG4相关的对凝血时间(即，活化部分促凝血酶原激酶时间[APTT]和凝血酶原时间)或纤维蛋白原浓度的影响。个体凝血值中的所有波动都被认为是偶发的，与生物学和程序相关的变化一致，和/或幅度可忽略不计，并且与G9.2-17 IgG4施用无关。

任何性别在任何剂量水平、任何时间间隔下都无G9.2-17 IgG4相关的对临床化学终点的影响。个体临床化学值中的所有波动都被认为是偶发的，与生物学和程序相关的变化一致，和/或幅度可忽略不计，并且与G9.2-17 IgG4施用无关。

任何性别在任何时间间隔、任何剂量水平下都无G9.2-17 IgG4相关的对细胞因子终点的影响。个体细胞因子值中的所有波动都被认为是偶发的，与生物学和程序相关的变化一致，和/或幅度可忽略不计，并且与G9.2-17 IgG4施用无关。

对肉眼尸检观察结果的审查显示没有被认为与测试品相关的发现。没有被认为与测试品相关的器官重量变化。没有与测试品相关的变化。

总之，食蟹猴对单次静脉内输注施用30、100和200mg/kg G9.2-17 IgG4是耐受的，无不良结果。因此，在本研究条件下未观察到不良作用的水平(NOAEL)为200mg/kg，这是评估的最高剂量水平。

将动物从笼子中取出，在第1天开始输注(SOI)后1小时和4.5小时对每只动物进行详细的临床检查，之后在研究期间每天进行一次。

实施例5.食蟹猴中G9.2-17的静脉内输注研究

本研究的目标是在食蟹猴中每周一次30分钟静脉内(IV)输注5周后，进一步表征不同剂量的测试品G9.2-17(与半乳凝素-9结合的hIgG4单克隆抗体)的毒性和毒代动力学，并评估在3周恢复期后任何观察到的变化的可逆性、进展或延迟出现。

实验设计

表16总结了研究设计。

表16.实验设计

^a基于最新的实际体重测量。

本研究中使用的动物(食蟹猴)按照标准，按体重以旨在实现相似的组平均体重的随机化程序分配研究组。雄性和雌性分别随机化。分配研究的动物的体重在每个性别平均体重的±20％内。

将缺乏G9.2-17(“媒介物”)或包含G9.2-17(“测试品”)的制剂每周一次施用于动物，持续5周(第1、8、15、22和29天)，研究期间经由30分钟IV输注。剂量水平为0、100和300mg/kg/剂，并以10mL/kg的剂量体积施用。对照动物组以与治疗组相同的方式接受媒介物。剂量经由经皮放置的导管通过隐静脉内施用，每次给药使用新的无菌一次性注射器。在毒代动力学样品采集日(第1、15和29天)测量并记录在给药前和给药结束时的剂量衡算计量，以确保施用±10％的靶剂量。个体剂量基于最近的体重。标记最后一次给药部位用于在终末和恢复尸检时收集。所有剂量均在测试品准备后8小时内施用。

如下示例，对动物进行生存期(in-life)程序、观察和测量。

对所有动物进行心电图检查。尽可能在记录心电图(ECG)之前注意避免引起动物过度兴奋，以尽量减少这些测量值中的极端波动或假象。以50mm/秒记录标准ECG(10导联)。使用适当的导联，测量RR、PR和QT间期以及QRS持续时间并确定心率。使用基于Bazett(1920)所述方法的程序计算校正的QT(QTc)间期。所有迹线均由咨询兽医心脏病专家评估和报告。

为了帮助提高连续性和可靠性，功能观察组合(FOB)评估由两名独立评估者针对所有情况进行，由详细的家庭笼和开放区神经行为评估组成(Gauvin和Baird,2008)。每名技术人员独立地对每个家庭笼和笼外观察的猴子进行评分(不相互分享结果)，然后在测试完成后评估个人评分是否与其同伴的评分一致。在对每只动物给药前(第-9天或第8天)进行FOB评估以确定基线差异，并在第1天和第15天开始输注后2至4小时以及终末和恢复尸检之前进行FOB评估。观察包括但不限于评估活动水平、姿势、流泪、流涎、震颤、抽搐、肌束震颤、刻板行为、面部肌肉运动、眼睑闭合、瞳孔应答、对刺激(视觉、听觉和食物)的应答、体温、Chaddock和Babinski反射、本体感受、麻痹、共济失调、辨距障碍和坡度评估、运动和步态。

测量并记录每只动物的血压，由收缩压、舒张压和平均动脉压组成。使用平均动脉压(MAP)20mmHg内的三个读数报告血压测量值。

通过按测试设施SOP的视觉评估，以3次/动物/收集间隔测量并记录每只动物的呼吸速率。3个收集的平均值为报告值。

以预定时间间隔对所有动物进行临床病理学评估(如，免疫表型分析和细胞因子评估)。收集并保存骨髓涂片。经由股静脉从所有动物采集血液样品(约0.5mL)用于测定测试品的血清浓度。动物在采血前不禁食，除了与用于临床病理采集的禁食一致的时间间隔。在研究结束时(第36天或第50天)，使动物安乐死并收集组织用于组织学处理和显微术评估。

可溶性半乳糖凝素-9如下评估。给药前和第1、8、15和29天开始输注24小时以及终末和/或恢复尸检之前经由股静脉从所有动物采集血液样品(约1mL)用于测定血清的可溶性半乳凝素-9。动物在采血前不禁食，除了与用于临床病理采集的禁食一致的时间间隔。

可溶性半乳凝素9样品如下处理。将血液样品收集在无添加剂无屏障管中，使其在环境温度凝结，并在环境温度离心。将所得血清在预先标记的冷冻管中分成2个等分试样(100μL在等分试样1中，剩余在等分试样2中)。所有等分试样在收集2小时内于干冰上快速冷冻，并于-60℃至90℃冷冻保存。

报告表格中显示的所有结果均使用非舍入值按原始数据舍入程序计算，可能不能从所提供的单个数据中精确再现。

结果

·死亡率

所有动物存活至第36天预定的终末尸检和第50天的恢复尸检。

·详细的临床和兽医观察

在治疗或恢复期间，治疗动物中未发现与测试品相关的临床或兽医观察。

·功能观测组合

在治疗或恢复期间，治疗动物中未发现与测试品相关的FOB观察。

·体重和体重增加

在治疗或恢复期间，治疗动物中未发现与测试品相关的对体重和体重增加的影响。

·眼科检查

在治疗或恢复期间，治疗动物中未发现与测试品相关的对眼科检查的影响。

·血压值

在治疗或恢复期间，治疗动物中未发现与测试品相关的对血压值的影响。

·呼吸速率值

在治疗或恢复期间，治疗动物中未发现与测试品相关的对呼吸速率值的影响。

·心电学

在治疗或恢复期间，治疗动物中未发现与测试品相关的对心电图评估的影响。

·血液学

在任何剂量水平、任何时间点，任何性别中无G9.2-17相关的在血液学参数中的影响。

·凝血

在任何剂量水平、任何时间点，任何性别中无G9.2-17相关的在凝血参数中的影响。

·临床化学

在任何剂量水平、任何时间点，任何性别中无G9.2-17相关的在临床化学参数中的影响。

·尿分析

在13周的中间期在任何剂量水平下，任何性别中无G9.2-17相关的在尿分析参数中的变化。

·细胞因子

在任何剂量水平或时间点均未观察到明确的G9.2-17相关的对细胞因子的影响。

·外周血白细胞分析(PBLA)

在任何时间点、任何剂量水平，任何性别中无G9.2-17相关的对PBLA终点的影响。

·生物分析、半乳凝素-9和毒代动力学评估

来自剂量施用后的所有给药G9.2-17动物的所有食蟹猴样品中可定量G9.2-17。在对照食蟹猴样品中未检测到可测量量的G9.2-17。在来自所有动物的所有食蟹猴样品中可定量可溶性半乳凝素-9。在第1天给药前从大多数G9.2-17治疗动物以及第1天和第29天从对照动物获得的所有血清样品中，G9.2-17血清浓度低于生物分析定量限(LLOQ<0.04ug/mL)。

·肉眼病理学和器官重量

在主要研究或恢复动物中无明确的与测试品相关的宏观观测结果。主要研究或恢复动物也没有与测试品相关的器官重量变化。

·组织病理学

无明确的与测试品相关的显微术观测结果。

总之，食蟹猴可耐受每周一次静脉内输注施用100和300mg/kg的G9.2-17，持续5周，未发现不良结果。

实施例6.Sprague Dawley大鼠中G9.2-17的静脉内输注研究

本研究的目标是评估不同剂量的G9.2-17(针对半乳凝素-9的IgG4人单克隆抗体)的潜在毒性，通过静脉内注射每周一次施用于Sprague Dawley大鼠，连续4周，随后是3周的给药后恢复期。此外，测定G9.2-17的毒代动力学特征。

实验设计

表17总结研究设计。

表17：研究设计

^a个体剂量体积基于最近的体重计算

^bSSD动物：3只动物/性别/组，仅在第1天单剂量施用后进行TK采集

186只动物(Sprague Dawley大鼠)按体重随机分配治疗组。对照品/媒介物(用于测试品的配方缓冲液)和测试品G9.2-17在第1、8、15、22和29天以0、100和300mg/kg的剂量水平在尾静脉中经由单次IV注射施用一次。测试品在第1天以100和300mg/kg的剂量水平施用于分配到SSD亚组的动物。

从适应的第二天开始，每天早上清洁房间之前进行一次临床观察。每天进行两次死亡率检查，以评估总体动物健康状况。通过每周一次称量容器中的食物供应量和剩余量来估计食物消耗量。由每周食物消耗计算平均克(g)/动物/天。在随机化之前、第-1天、然后在整个研究期间每周一次以及在每次尸检当天测量体重。在第1、35和49天剂量施用后约24小时，记录SSB动物的功能观察组合(FOB)观察结果。使用代谢笼过夜收集尿液。在第36天和第50天获得样品。

在包括血清化学样本的每个系列收集之前，使动物禁食过夜。在这些情况下，相关的临床病理学评估来自禁食动物。在终止时从受约束的、有意识的动物的颈静脉内或从麻醉动物的腔静脉内采集血液。

在研究的生存期检查期间评估的参数包括临床观察、食物消耗、体重、功能观察组合。在选定的时间点采集血液样品用于临床病理学(血液学、凝血和血清化学)分析。收集尿样用于尿分析。还在选定时间点采集血液样品用于毒代动力学(TK)、免疫原性(如，抗药物抗体或ADA)和细胞因子分析。在第36天和第50天对动物进行尸检。每次尸检时，记录总体观察结果和器官重量，并收集组织用于显微术检查。

结果

生存期检查

死亡率：研究期间未发现该动物的异常临床观察或体重变化。

临床观察：研究期间未发现与G9.2-17相关的临床观察。

食物消耗/体重：研究期间未发现与G9.2-17相关的食物消耗、体重或体重增加的变化。

临床病理学：未发现与G9.2-17相关的临床病理学参数的变化。

细胞因子分析：无与G9.2-17相关的IL-2、IL-4、IFN-γ、IL-5、IL-6、IL-10和/或TNF-α、MCP-1和MIP-1b的血清浓度变化。

总体病理学：无与G9.2-17相关的肉眼观察。此外，无与G9.2-17相关的绝对或相对器官重量的变化。

组织病理学：无G9.2-17相关的组织学发现。

总之，每周一次静脉内G9.2-17施用于Sprague Dawley大鼠，共5个剂量，通常耐受性良好。无G9.2-17相关的临床观察、食物消耗、体重、FOB参数、临床病理学、细胞因子、总体观察或器官重量的变化。

等同内容

通过以上描述，本领域技术人员可以很容易地确定本发明的本质特征，并且在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可对本发明进行各种变化和修改以使其适应各种用途和条件。因此，其他实施方案也在权利要求范围内。

尽管本文已描述和说明了几种发明实施方案，但是本领域的普通技术人员很容易想到用于执行本文所述功能和/或获得结果和/或一个或多个优点的各种其他手段和/或结构，并且每个这样的变化和/或修改被认为是在本文所述发明实施方案的范围内。更一般地，本领域技术人员容易理解，本文所述的所有参数、尺寸、材料和配置都是示例性的，并且实际参数、尺寸、材料和/或配置取决于使用发明教导的具体应用。本领域技术人员仅使用常规实验即可认识到或能够确定本文所述具体发明实施方案的许多等同物。因此，应当理解，前述实施方案仅以示例的方式呈现，并且在所附权利要求及其等同物的范围内，可以不同于具体描述和要求保护的方式实施本发明实施方案。本公开的发明实施方案针对本文所述的每个单独的特征、系统、物品、材料、试剂盒和/或方法。此外，两个或更多个此类特征、系统、物品、材料、试剂盒和/或方法的任何组合，如果此类特征、系统、物品、材料、试剂盒和/或方法不相互矛盾，则包括在本公开的发明范围内。

如本文所定义和使用的所有定义，应理解为优先于字典定义、通过引用并入的文件中的定义和/或所定义术语的普通含义。

本文公开的所有参考文献、专利和专利申请均通过引用的方式并入每一个所引用的主题，在某些情况下，可涵盖整个文件。

在说明书和权利要求书中使用的不定冠词“一种”和“一个”，除非明确指出相反，应理解为“至少一个(种)”。

如本文在说明书和权利要求书中使用的短语“和/或”应理解为表示如此结合的要素中的“任一个(种)或两个(种)”，即，在某些情况下结合存在而在其他情况下分离存在的要素。用“和/或”列出的多个要素应当以相同的方式解释，即“一个(种)或多个(种)”这样结合的要素。除了由“和/或”分句具体标识的要素外，可以可选地存在其他要素，无论是否与那些具体标识的要素相关或不相关。因此，作为非限制性示例，当与诸如“包括/包含”的开放式语言结合使用时，对“A和/或B”的引用在一个实施方案中可仅指A(任选地包括除B外的要素)；在另一个实施方案中，仅指B(任选地包括除A外的要素)；在又一个实施方案中，指A和B两者(任选地包括其他要素)；等等。

如本文在说明书和权利要求书中使用的，“或”应理解为与如上定义的“和/或”具有相同的含义。例如，当分隔列表中的项目时，“或”或“和/或”应解释为具有包容性，即包括至少一个(种)，但也包括多个要素或要素列表，以及(任选)其他未列出的项目。只有明确指出相反的术语，例如“仅一个(种)”或“恰好一个(种)”，或在权利要求中使用时“由……组成”，是指正好包含一个数字或要素列表中的一个要素。一般地，本文使用的术语“或”仅应解释为表示排他性替代方案(即，“一个或另一个但不是两者”)，如果前面带有排他性术语，例如“任一”、“其中一个”、“只有一个”或“正好一个”。权利要求中使用的“基本上由……组成”，应具有专利法领域所使用的一般含义。

如本文在说明书和权利要求书中使用的，短语“至少一个(种)”在提及一个(种)或多个(种)要素的列表时，应理解为意指选自要素列表的任何一个(种)或多个(种)要素中的至少一个(种)要素，但不一定包括要素列表中具体列出的每个(种)要素中的至少一个(种)，并且不排除要素列表中要素的任何组合。这个定义还允许除了在短语“至少一个(种)”所指的要素列表中具体标识的要素之外的要素可以任选地存在，无论是否与那些具体标识的要素相关或不相关。因此，作为非限制性示例，“A和B中的至少一个(种)”(或等同地，“A或B中的至少一个(种)”，或等同地“A和/或B中的至少一个(种)”)，在一个实施方案中，可指至少一个(种)，任选地包括多于一个(种)A，不存在B(并且任选地包括除B外的要素)；在另一个实施方案中，可指至少一个(种)，任选地包括多于一个(种)B，不存在A(并且任选地包括除A外的要素)；在又一个实施方案中，可指至少一个(种)，任选地包括多于一个(种)A，和至少一个(种)，任选地包括多于一个(种)B(并且任选地包括其它要素)；等等。

还应该理解的是，除非有明确的相反指示，在本文要求保护的任何包括超过一个步骤或行为的方法中，该方法的步骤或行为的顺序不一定限于所记载的方法的步骤或行为的顺序。

Claims (34)

1.一种用于治疗实体瘤的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的结合人半乳凝素-9的抗体(抗-Gal9抗体)，其中所述抗-Gal9抗体具有与抗体G9.2-17相同的重链互补决定区(CDR)和相同的轻链CDR；并且其中所述受试者正在接受包括一种或多种化疗剂的抗癌疗法。

2.一种用于治疗实体瘤的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的结合人半乳凝素-9的抗体(抗-Gal9抗体)和有效量的一种或多种化疗剂；其中所述抗-Gal9抗体具有与抗体G9.2-17相同的重链互补决定区(CDR)和相同的轻链CDR。

3.一种用于治疗实体瘤的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的一种或多种化疗剂；其中所述受试者正在接受包括结合人半乳凝素-9的抗体(抗-Gal9抗体)的疗法，该抗体具有与抗体G9.2-17相同的重链互补决定区(CDR)和相同的轻链CDR。

4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述实体瘤是转移性实体瘤。

5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述实体瘤是胰腺导管腺癌(PDAC)。

6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述一种或多种化疗剂包括抗代谢物、微管抑制剂或其组合。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述抗代谢物是吉西他滨和/或所述微管抑制剂是紫杉醇。

8.如权利要求1、2和4-7中任一项所述的方法，其中将所述抗-Gal9抗体以约0.5mg/kg至约32mg/kg的剂量每2周一次通过静脉内注射施用于受试者。

9.如权利要求1、2和4-8中任一项所述的方法，其中将所述抗-Gal9抗体以约2mg/kg至约16mg/kg的剂量每2周一次通过静脉内注射施用于受试者。

10.如权利要求9所述的方法，其中将所述抗-Gal9抗体以约2mg/kg、约4mg/kg、约8mg/kg、约12mg/kg、或约16mg/kg的剂量每2周一次通过静脉内注射施用于受试者。

11.如权利要求7-10中任一项所述的方法，其中所述方法包括28天的周期，其中在第1天和第15天将所述抗-Gal9抗体施用于所述受试者，并且在第1天、第8天和第15天将吉西他滨和紫杉醇施用于所述受试者。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述紫杉醇为蛋白结合型紫杉醇，优选为纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇。

13.如权利要求11或12所述的方法，其中将所述紫杉醇以125mg/m²静脉内施用于受试者。

14.如权利要求7至13中任一项所述的方法，其中将吉西他滨以1000mg/m²施用于受试者。

15.如权利要求7至14中任一项所述的方法，其中所述抗半乳凝素-9抗体包含如SEQ IDNO:1所示的轻链互补决定区1(CDR1)，如SEQ ID NO:2所示的轻链互补决定区2(CDR2)，和如SEQ ID NO:3所示的轻链互补决定区3(CDR3)，和/或包含如SEQ ID NO:4所示的重链互补决定区1(CDR1)，如SEQ ID NO:5所示的重链互补决定区2(CDR2)，和如SEQ ID NO:6所示的重链互补决定区3(CDR3)。

16.如权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述抗-Gal9抗体包含：包含SEQ IDNO:7的氨基酸序列的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)。

17.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述抗-Gal9抗体为IgG4分子。

18.如权利要求17所述的方法，其中所述抗-Gal9抗体包含：包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链。

19.如权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述受试者是人类患者。

20.如权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述受试者包含半乳凝素-9阳性癌细胞或免疫细胞。

21.如权利要求20所述的方法，其中在源自所述受试者的肿瘤类器官中检测到半乳凝素-9阳性癌细胞或免疫细胞。

22.如权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述受试者具有相对于对照值升高的半乳凝素-9水平。

23.如权利要求22所述的方法，其中所述受试者具有相对于对照值升高的半乳凝素-9的血清或血浆水平。

24.如权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述受试者接受了至少一种系统性抗癌疗法。

25.如权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述受试者未进行涉及吉西他滨和/或紫杉醇的先前疗法或在施用抗-Gal9抗体前至少6个月接受过涉及吉西他滨和/或紫杉醇的先前疗法。

26.如权利要求1至25中任一项所述的方法，其中在所述治疗之前、期间和/或之后检查所述受试者中以下特征中的一项或多项：

(a)来自所述受试者的肿瘤活检样品中的一种或多种肿瘤标志物，任选地其中所述一种或多种肿瘤标志物包括CA15-3、CA-125、CEA、CA19-9和/或甲胎蛋白；

(b)细胞因子谱；和

(c)半乳凝素-9水平。

27.如权利要求1至26中任一项所述的方法，其中所述方法还包括监测所述受试者中一种或多种不良反应的发生。

28.如权利要求27所述的方法，其中所述一种或多种不良反应包括肝损伤、血液毒性、神经毒性、皮肤毒性、胃肠道毒性或其组合。

29.如权利要求27或28所述的方法，其还包括当观测到不良反应时减少所述抗-Gal9抗体的剂量、所述一种或多种化疗剂的剂量、或两者。

30.如权利要求29所述的方法，其中当所述受试者具有的天冬氨酸转氨酶(AST)水平高于正常上限(ULN)10倍、胆红素水平高于ULN 5倍、或二者时，停止施用紫杉醇。

31.如权利要求30所述的方法，其中所述方法还包括当观测到中度至重度肝损伤时，减少所述抗-Gal9抗体的剂量、吉西他滨的剂量、紫杉醇的剂量、或其组合。

32.如权利要求31所述的方法，其中所述方法还包括当观测到严重的血液毒性、神经毒性、皮肤毒性、和/或胃肠道毒性时，减少抗-Gal9抗体、吉西他滨、紫杉醇、或其组合的剂量，或终止施用抗-Gal9抗体、吉西他滨、紫杉醇、或其组合。

33.如权利要求31或32所述的方法，其中所述紫杉醇的剂量减少到100mg/m²至75mg/m²。

34.如权利要求31至33中任一项所述的方法，其中吉西他滨的剂量减少到800mg/m²至600mg/m²。

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