CN114468038B

CN114468038B - 赤霉素在抑制黄秋葵采后褐变的功效及应用

Info

Publication number: CN114468038B
Application number: CN202111554905.XA
Authority: CN
Inventors: 曹士锋; 施丽愉; 杨民杰; 董婉琪; 陈伟; 李赛赛; 冯亚斌; 杨震峰
Original assignee: Zhejiang Wanli University
Current assignee: Zhejiang Wanli University
Priority date: 2021-12-17
Filing date: 2021-12-17
Publication date: 2023-12-22
Anticipated expiration: 2041-12-17
Also published as: CN114468038A

Abstract

本发明提供了赤霉素在抑制黄秋葵采后褐变的功效及应用，并提供了赤霉素在促进黄秋葵酚类物质合成、抑制酚类物质降解、促进黄秋葵AePAL1、AePAL2、AePAL3基因的表达，抑制黄秋葵AePPO1、AePPO2、AePOD1、AePOD2、AePOD3、AePOD4、AeLAC9‑1、AeLAC9‑2、AeLAC9‑3、AeLAC9‑4、AeLAC9‑5、AeLAC12、AeLAC14基因的表达的用途，针对以赤霉素处理的黄秋葵，通过测定黄秋葵贮藏期间褐变指数及总酚含量，利用qPR‑PCR技术研究褐变有关基因在黄秋葵贮藏期间的表达情况，并分析这些基因在GA处理组与对照组间表达差异，为有效抑制黄秋葵贮藏过程中褐变的发生提供新的保鲜方法。

Description

赤霉素在抑制黄秋葵采后褐变的功效及应用

技术领域

本发明属于蔬菜保存技术领域，具体涉及赤霉素在抑制黄秋葵采后褐变的功效及应用。

背景技术

秋葵是一年生草本植物，属锦葵科，广泛生长在热带和亚热带国家。果实肉质柔嫩,口感润滑,具有独特的风味,因其特有的高维生素C、膳食纤维、钙以及低饱和脂肪酸被认为是理想的健康食品，并具有助消化、降血脂、庇护肝脏、延缓衰老、保护视力等功效。目前随着社会对于绿色、有机蔬菜关注度的不断提高，秋葵作为兼备营养与保健功能的蔬菜之一，已经获得了越来越多的重视。黄秋葵隶属于锦葵科秋葵属，是一种非呼吸跃变型果实，本身水分含量高、表面积大，极易失水、衰老、褐变及纤维化，严重影响其商品价值，并且其市场价格也高于大部分的蔬菜。成熟的黄秋葵是多酚、维生素C、类黄酮等天然抗氧化物的较好来源。因此，研究黄秋葵的贮藏保鲜具有一定的实际应用价值。

目前对于果实褐变产生原因较为接受的是酶促褐变，即多酚氧化酶催化内源性酚酸物质产生褐色醌类物质，进一步聚合产生黑色素，致使果实产生褐变。酚类物质是果蔬中重要的次生代谢物质，也是果蔬中主要的抗氧化物质之一。植物中酚类物质的产生主要通过丙二酸途径和莽草酸途径，而高等植物大多通过莽草酸途径合成次级代谢产物。来自莽草酸途径的莽草酸通过分支酸、预苯酸经转氨作用形成苯丙氨酸、络氨酸、色氨酸三种芳香族氨基酸。苯丙氨酸又作为酚类物质合成前体进入苯丙烷代谢途径进一系列酶作用下合成不同酚类物质。但酚类物质易与空气接触，被氧气氧化成醌类物质，通过聚合反应产生色素，引起组织褐变。

许多学者研究表明黄秋葵在贮藏期间酚类物质含量不断减少，果实发生褐变现象，这导致果实贮藏期间品质下降，营养物质流失严重，给果农和保鲜企业带来巨大的经济损失。赤霉素(GA)作为一种植物内源性激素也被证实能防止某些果蔬采后褐变，如CN108739996B公开了一种采用赤霉素处理防止木薯采后褐变、腐烂，延缓生理性变质的方法，但目前尚无采用赤霉素防止秋葵褐变的相关报道，更没有关于赤霉素延缓黄秋葵贮藏过程中酚类物质流失及对褐变有关酶基因在黄秋葵贮藏过程中的调控作用的相关报道。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了赤霉素在抑制黄秋葵采后褐变的功效及应用，并提供了赤霉素在促进黄秋葵酚类物质合成，抑制酚类物质降解方面的用途，提供了赤霉素在促进黄秋葵苯丙氨酸酶AePAL1、AePAL2、AePAL3基因的表达，抑制黄秋葵多酚氧化酶AePPO1和/或AePPO2基因的表达，抑制黄秋葵过氧化物酶AePOD1、AePOD2、AePOD3、AePOD4基因的表达，抑制黄秋葵漆酶AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14基因的表达的用途。本发明以赤霉素处理的黄秋葵，通过测定黄秋葵贮藏期间褐变指数及总酚含量，利用qPR-PCR技术研究褐变有关基因在黄秋葵贮藏期间的表达情况，并分析这些基因在GA处理组与对照组间表达差异，为有效抑制黄秋葵贮藏过程中褐变的发生提供新的保鲜方法。

一方面，本发明提供了赤霉素用于制备预防秋葵褐变，或促进秋葵酚类物质合成，或抑制酚类物质降解制剂的用途。

秋葵褐变的形成因素主要为：多酚氧化酶活性、酚类物质含量以及氧气的存在。

酚类物质是果蔬中重要的次生代谢物质，也是果蔬中主要的抗氧化物质之一。植物中酚类物质的产生主要通过丙二酸途径和莽草酸途径，而高等植物大多通过莽草酸途径合成次级代谢产物。来自莽草酸途径的莽草酸通过分支酸、预苯酸经转氨作用形成苯丙氨酸、络氨酸、色氨酸三种芳香族氨基酸。苯丙氨酸又作为酚类物质合成前体进入苯丙烷代谢途径进一系列酶作用下合成不同酚类物质。但酚类物质易与空气接触，被氧气氧化成醌类物质，通过聚合反应产生色素，引起组织褐变。黄秋葵在贮藏期间酚类物质含量不断减少，果实发生褐变现象，这导致果实贮藏期间品质下降，营养物质流失严重，给果农和保鲜企业带来巨大的经济损失。

本发明经大量研究发现，经赤霉素处理后的秋葵，总酚含量明显高于未处理组的情况，说明赤霉素能够促进采后秋葵在贮藏期间的酚类物质合成，并能抑制酚类物质降解。

进一步地，所述秋葵为黄秋葵，所述赤霉素的用量为0.001％～0.05％(10mg/L～500mg/L)。

可以理解，本发明提供的赤霉素对各种秋葵都具有防褐变、促进酚类物质合成和抑制酚类物质降解的用途。在一些实施方式中，所述秋葵优选采用黄秋葵。

在一些方式中，用0.001％～0.05％的赤霉素溶液浸泡处理秋葵，都具有预防秋葵褐变、促进秋葵酚类物质合成，或抑制酚类物质降解的用途。

另一方面，本发明提供了赤霉素用于制备促进秋葵AePAL1、AePAL2、AePAL3中的任意一种或多种基因表达制剂的用途。

进一步地，所述秋葵为黄秋葵，所述AePAL1、AePAL2、AePAL3的序列分别如Seq IDNO.1、Seq ID NO.2、Seq ID NO.3所示；所述赤霉素的质量百分含量为0.001％～0.05％。

秋葵的苯丙氨酸酶PAL作为苯丙烷代谢途径第一步反应的酶，与酚类、木质素等其他次生代谢产物的合成密切相关，PAL活性和表达的升高能有效促进果实酚类物质的合成，延缓褐变的发生。

本发明通过转录组测序筛选到苯丙氨酸酶PAL的相关基因，包括AePAL1、AePAL2和AePAL3。研究发现赤霉素能促进AePAL1、AePAL2和AePAL3的表达，从而促进果实酚类物质的合成，延缓褐变的发生。

在一些方式中，用0.001％～0.05％的赤霉素溶液浸泡处理秋葵，都具有促进秋葵AePAL1、AePAL2、AePAL3中的任意一种或多种基因表达制剂的用途。

再一方面，本发明提供了赤霉素用于制备抑制秋葵AePPO1和/或AePPO2基因表达制剂的用途。

进一步地，所述秋葵为黄秋葵，所述AePPO1、AePPO2的序列分别如Seq ID NO.4、Seq ID NO.5所示；所述赤霉素的质量百分含量为0.001％～0.05％。

秋葵的多酚氧化酶PPO能使酚类物质氧化，加速秋葵的组织发生褐变。

本发明通过转录组测序筛选到多酚氧化酶PPO的相关基因，包括AePPO1和AePPO2。研究证明赤霉素能抑制AePPO1、AePPO2的表达，从而抑制酚类物质的降解，延缓褐变的发生。

在一些方式中，用0.001％～0.05％的赤霉素溶液浸泡处理秋葵，都具有抑制秋葵AePPO1和/或AePPO2基因表达制剂的用途。

再一方面，本发明提供了赤霉素用于制备抑制秋葵AePOD1、AePOD2、AePOD3、AePOD4中的任意一种或多种基因表达制剂的用途。

进一步地，所述秋葵为黄秋葵，所述AePOD1、AePOD2、AePOD3、AePOD4的序列分别如Seq ID NO.6、Seq ID NO.7、Seq ID NO.8、Seq ID NO.9所示；所述赤霉素的质量百分含量为0.001％～0.05％。

秋葵的过氧化物酶POD能催化类黄酮和酚类物质致使果实组织发生褐变。

本发明通过转录组测序筛选到秋葵过氧化物酶POD的相关基因，包括AePOD1、AePOD2、AePOD3、AePOD4。研究证明赤霉素能抑制AePOD1、AePOD2、AePOD3、AePOD4的表达，从而抑制类黄酮和酚类物质的降解，延缓褐变的发生。

在一些方式中，用0.001％～0.05％的赤霉素溶液浸泡处理秋葵，都具有抑制秋葵AePOD1、AePOD2、AePOD3、AePOD4中的任意一种或多种基因表达制剂的用途。

再一方面，本发明提供了赤霉素用于制备抑制秋葵AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14中的任意一种或多种基因表达制剂的用途。

进一步地，所述秋葵为黄秋葵，所述AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14的序列分别如Seq ID NO.10、Seq ID NO.11、Seq ID NO.12、Seq ID NO.13、Seq ID NO.14、Seq ID NO.15、Seq ID NO.16所示；所述赤霉素的质量百分含量为0.001％～0.05％。

研究发现，秋葵的漆酶LAC是具有催化酚类结构物质的多酚氧化酶，经漆酶降解酚类物质，能使褐色物质在秋葵中生成并积累，促进秋葵的褐变。

本发明通过转录组测序筛选到秋葵漆酶LAC的相关基因，包括AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14。研究证明赤霉素能抑制AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14的表达，从而抑制酚类物质的降解，延缓褐变的发生。

在一些方式中，用0.001％～0.05％的赤霉素溶液浸泡处理秋葵，都具有抑制秋葵AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14中的任意一种或多种基因表达制剂的用途。

再一方面，本发明提供了一种基因用于制备促进或抑制秋葵褐变的基因的用途，所述促进秋葵褐变的基因包括AePPO1、AePPO2、AePOD1、AePOD2、AePOD3、AePOD4、AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14中的任意一种或多种；所述抑制秋葵褐变的基因包括AePAL1、AePAL2、AePAL3中的任意一种或多种；所述AePAL1、AePAL2、AePAL3、AePPO1、AePPO2、AePOD1、AePOD2、AePOD3、AePOD4、AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14的序列分别如Seq ID NO.1～Seq ID NO.16所示。

本发明先经大量转录测序工作，从秋葵的基因中筛选到与促进或抑制秋葵褐变的相关基因，明确相关基因的具体序列，并考察了秋葵贮藏期间各基因表达情况的变化趋势。

本发明提供的赤霉素在抑制黄秋葵采后褐变的应用具有以下有益效果：

1、发现了赤霉素在抑制黄秋葵采后褐变的用途，可用于制备抑制秋葵褐变制剂或秋葵保鲜制剂；

2、发现了赤霉素在促进黄秋葵酚类物质合成，抑制酚类物质降解方面的用途，可用于制备提高黄秋葵总酚含量的制剂；

3、发现了赤霉素在促进黄秋葵苯丙氨酸酶相关基因AePAL1、AePAL2、AePAL3表达的用途，可用于制备促进黄秋葵苯丙氨酸酶相关基因AePAL1、AePAL2、AePAL3表达的制剂；

4、发现了赤霉素在抑制黄秋葵多酚氧化酶相关基因AePPO1、AePPO2表达的用途，可用于制备抑制黄秋葵多酚氧化酶相关基因AePPO1、AePPO2表达的制剂；

5、发现了赤霉素在抑制黄秋葵过氧化物酶相关基因AePOD1、AePOD2、AePOD3、AePOD4表达的用途，可用于制备抑制黄秋葵过氧化物酶相关基因AePOD1、AePOD2、AePOD3、AePOD4表达的制剂；

6、发现了赤霉素在抑制黄秋葵漆酶相关基因AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14表达的用途，可用于制备抑制黄秋葵漆酶相关基因AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14表达的制剂。

附图说明

图1为实施例1中黄秋葵贮藏表观变化对比图；

图2为实施例1中赤霉素处理组与对照组对黄秋葵褐变指数影响对比图，其中*，**，***分别表示在0.05、0.01、0.001水平上差异显著；

图3为实施例2中赤霉素处理组与对照组对黄秋葵总酚含量影响对比图，其中*，**，***分别表示在0.05、0.01、0.001水平上差异显著；

图4为实施例3中AePAL1跟木槿、棉花的多聚半乳糖醛酸酶相关基因序列比对结果；

图5为实施例3中AePAL2跟木槿、棉花的多聚半乳糖醛酸酶相关基因序列比对结果；

图6为实施例3中AePAL3跟木槿、棉花、榴莲的多聚半乳糖醛酸酶相关基因序列比对结果；

图7为实施例3中赤霉素处理组与对照组对黄秋葵的AePAL1、AePAL2和AePAL3基因表达情况对比图，其中*，**，***分别表示在0.05、0.01、0.001水平上差异显著；

图8为实施例4中AePPO1跟木槿、棉花的多酚氧化酶PPO相关基因序列比对结果；

图9为实施例4中AePPO2跟木槿、棉花的多酚氧化酶PPO相关基因序列比对结果；

图10为实施例4中赤霉素处理组与对照组对黄秋葵的AePPO1和AePPO2基因表达情况对比图，其中*，**，***分别表示在0.05、0.01、0.001水平上差异显著；

图11为实施例5中AePOD1跟木槿、棉花的过氧化物酶POD相关基因序列比对结果；

图12为实施例5中AePOD2跟木槿、棉花、可可的过氧化物酶POD相关基因序列比对结果；

图13为实施例5中AePOD4跟木槿、棉花的过氧化物酶POD相关基因序列比对结果；

图14为实施例5中赤霉素处理组与对照组对黄秋葵的AePOD1、AePOD2、AePOD3和AePOD4基因表达情况对比图，其中*，**，***分别表示在0.05、0.01、0.001水平上差异显著；

图15为实施例6中AeLAC9-1跟木槿、棉花的漆酶LAC相关基因序列比对结果；

图16为实施例6中AeLAC9-2跟木槿、棉花、榴莲的漆酶LAC相关基因序列比对结果；

图17为实施例6中AeLAC9-3跟木槿、棉花、榴莲的漆酶LAC相关基因序列比对结果；

图18为实施例6中AeLAC9-4跟木槿、棉花的漆酶LAC相关基因序列比对结果；

图19为实施例6中AeLAC9-5跟木槿、棉花、榴莲的漆酶LAC相关基因序列比对结果；

图20为实施例6中AeLAC12跟木槿、棉花、可可的漆酶LAC相关基因序列比对结果；

图21为实施例6中AeLAC14跟木槿、棉花的漆酶LAC相关基因序列比对结果；

图22为实施例6中赤霉素处理组与对照组对黄秋葵的AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14基因表达情况对比图，其中*，**，***分别表示在0.05、0.01、0.001水平上差异显著。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的优选实施例作进一步详细描述，需要指出的是，以下实施例旨在便于对本发明的理解，而对其不起任何限定作用，本发明的实施例中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均能够以任何方式组合。

实施例1赤霉素处理对黄秋葵褐变指数的影响

本实施例采用新采摘的黄秋葵(购自宁波市鄞州区联心菜市场)，选择大小较为统一，个头饱满，没有黑斑及损伤的黄秋葵200根，分成2组(对照组和处理组)，每组各100根。配制质量百分比含量为0.01％(100mg/L)的赤霉素水溶液，将处理组的黄秋葵在赤霉素溶液中浸泡15min。浸泡结束后，将2组黄秋葵置于常温下自然风干，最后放置于恒温恒湿培养箱中于25±1℃，80％～90％相对湿度下贮藏12天。分别在处理前(0天)和处理后贮藏3、6、9、12天取样，测定对照组和处理组黄秋葵的褐变情况，计算褐变指数。

其中，黄秋葵褐变指数以直接评价果实表面褐变程度进行测定，并记录计算。随机取30个果实，分为三组，观察果实表面褐变程度，褐变程度采用5级评分法，0＝无(无褐变)；1＝褐变面积<15％；2＝褐变面积介于15％～45％之间；3＝褐变面积介于45％～70％之间；4＝褐变面积>70％。计算公式如下：

褐变指数＝∑[(褐变级别×该级别果实个数)/(4×测定果实个数)]*100％。

两组黄秋葵的褐变情况如图1所示，褐变指数变化情况如图2所示，其中*，**，***分别表示在0.05、0.01、0.001水平上差异显著。

试验数据采用GraphPad Prism 7软件绘图，结果以平均值±标准偏差表示。使用SPSS软件进行显著性分析(P﹤0.05)。

由图1、2可以看出黄秋葵在贮藏期间褐变指数呈现上升趋势，对照组从6d开始不断上升，处理组从9d起开始上升，整个贮藏期间处理组褐变指数最高上升至37.5％，而对照组最高上升至82.5％，处理组褐变程度显著低于对照组(P﹤0.05)，可见经赤霉素能有效延缓黄秋葵的褐变。

本实施例还采用了0.001％、0.003％、0.005％、0.007％、0.01％、0.03％、0.05％的赤霉素水溶液分别进行试验，都能起到一定的防止黄秋葵褐变的效果，因篇幅的限制，这里就不一一举例说明。

实施例2赤霉素处理对黄秋葵总酚含量的影响

本实施例采用新采摘的黄秋葵(购自宁波市鄞州区联心菜市场)，选择大小较为统一，个头饱满，没有黑斑及损伤的黄秋葵200根，分成2组(对照组和处理组)，每组各100根。配制质量百分比含量为0.01％的赤霉素水溶液，将处理组的黄秋葵在赤霉素溶液中浸泡15min。浸泡结束后，将2组黄秋葵置于常温下自然风干，最后放置于恒温恒湿培养箱中于25±1℃，80％～90％相对湿度下贮藏12天。分别在处理前(0天)和处理后贮藏3、6、9、12天取样，测定对照组和处理组黄秋葵的总酚含量变化情况。

其中，总酚含量变化情况的检测方法如下：取黄秋葵冻样在液氮下用自动研磨仪研磨成粉，用天平准确称取样品2.0g，用水-甲醇(2：8)10ml混匀，在冰水浴下萃取15min，后在12000g下于4℃离心20分钟。取上清液于10ml离心管，用于下一步测量。

称取Na₂CO₃配置0.5N的Na₂CO₃溶液，采用Folin-Ciocalteu方法制定没食子酸标准曲线。样品提取物中总酚的含量也根据Folin-Ciocalteu方法测定。将0.5ml提取物加适量水(3-5ml)与0.5ml的Folin-Ciocalteu试剂混合，反应3min，加入1mL 25％Na₂CO₃，充分混匀定容，然后在室温(25℃左右)下避光静置60min。使用分光光度计在765nm下测量ABS。总酚含量以每100g FW的没食子酸当量(GAE)毫克表示。

两组黄秋葵的总酚含量变化情况如图3所示，其中*，**，***分别表示在0.05、0.01、0.001水平上差异显著。

由图3可以看出，贮藏期间处理组和对照组黄秋葵总酚含量均呈现先上升后下降的趋势，不同的是，对照组上升至3d后开始逐渐下降，且在贮藏后期下降迅速，而处理组上升至6d达到最大值后才开始缓慢下降，可见GA处理可以更好的促进黄秋葵中酚类物质的合成；整个贮藏期间处理组总酚含量显著高于对照组(P﹤0.05)，贮藏结束以后处理组总酚含量比对照组总酚含量高46.4％。由此，可以说明GA处理不仅可以更好的增强酚类物质的合成，还能抑制酚类物质的降解，进而延缓黄秋葵在贮藏期间的褐变和衰老。

本实施例还采用了0.001％、0.003％、0.005％、0.007％、0.01％、0.03％、0.05％的赤霉素水溶液分别进行试验，都能起到一定的增强酚类物质的合成，和抑制酚类物质的降解的效果，因篇幅的限制，这里就不一一举例说明。

实施例3赤霉素处理对黄秋葵苯丙氨酸酶PAL相关基因表达的影响

本实施例采用新采摘的黄秋葵(购自宁波市鄞州区联心菜市场)，选择大小较为统一，个头饱满，没有黑斑及损伤的黄秋葵200根，分成2组(对照组和处理组)，每组各100根。配制质量百分比含量为0.01％的赤霉素水溶液，将处理组的黄秋葵在赤霉素溶液中浸泡15min。浸泡结束后，将2组黄秋葵置于常温下自然风干，最后放置于恒温恒湿培养箱中于25±1℃，80％～90％相对湿度下贮藏12天。分别在处理前(0天)和处理后贮藏3、6、9、12天取样，测定对照组和处理组黄秋葵的苯丙氨酸酶PAL相关基因AePAL1、AePAL2、AePAL3表达的变化情况。

本实施例通过转录组测序筛选到苯丙氨酸酶PAL的相关基因(委托广州基迪奥生物科技有限公司进行转录组测序)，包括AePAL1、AePAL2和AePAL3，其中AePAL1、AePAL2、AePAL3的序列分别如Seq ID NO.1、Seq ID NO.2、Seq ID NO.3所示。将AePAL1、AePAL2、AePAL3的序列在NCBI上分别跟木槿、棉花、榴莲的多聚半乳糖醛酸酶PAL相关基因序列进行比对，结果如图4～6所示，其中AePAL1的比对结果见图4，AePAL2的比对结果见图5，AePAL3的比对结果见图6，可以看出，比对结果达到高度相似，证明AePG1、AePG2、AePG3、AePG4、AePG5、AePG6基因确实为黄秋葵的多聚半乳糖醛酸酶PG相关基因。

总RNA提取和cDNA合成方法为：称取约0.2g果实冻样，用柱式植物RNA提取试剂盒2.0(北京天恩泽基因科技有限公司)提取黄秋葵的总RNA。利用核酸蛋白仪与琼脂糖电泳仪来检测提取RNA的质量。cDNA采用HiFiScript cDNA Synthesis Kit试剂盒(北京康为生物有限公司)反转录而成。

本实施例通过实时定量PCR分析秋葵中AePAL1、AePAL2、AePAL3表达的变化情况，AePAL1、AePAL2、AePAL3的特异性引物由Beacon Designer 7设计，以AeACT为内参基因，引物序列见表1。采用美国赛默飞旗下的Real-Time PCR仪，按照美国赛默飞世尔公司的DyNAmo Flash SYBR Green qPCR试剂盒说明书，进行三步法扩增。进行如下程序设置：95℃预变性7min；95℃，15S，45℃退火30s，75℃延伸15s，此步骤进行39个循环。每个样品进行4次生物学重复，相对表达量采用2^-ΔCT方法进行计算分析。

表1荧光定量PCR

两组黄秋葵的AePAL1、AePAL2和AePAL3基因表达情况如图7所示，其中*，**，***分别表示在0.05、0.01、0.001水平上差异显著。

由图7可以看出，其中，AePAL1基因在处理组和对照组中均呈不断上升的趋势，处理组在整个贮藏期间AePAL1基因的表达水平显著高于对照组(P﹤0.05)。

AePAL2基因和AePAL3基因在处理组和对照组中均呈先上升后下降的趋势，其中AePAL2基因在处理组和对照组中均在6d达到最大表达量后下调，整个贮藏期间处理组显著上调了AePAL2的表达(P﹤0.05)。

AePAL3在对照组中上升至6d时达到最大表达量，但在处理组中一直上调表达至9d，随后下调，除3d外在整个贮藏期间处理组AePAL3的表达显著高于对照组(P﹤0.05)。

因此，在整个贮藏期间，处理组对AePAL1、AePAL2和AePAL3基因的表达水平都显著高于对照组(P﹤0.05)，赤霉素处理在贮藏期间对AePAL1/2/3基因有促进表达作用，从而促进果实酚类物质的合成，延缓褐变的发生。

本实施例还采用了0.001％、0.003％、0.005％、0.007％、0.01％、0.03％、0.05％的赤霉素水溶液分别进行试验，都能起到一定的促进AePAL1、AePAL2和AePAL3基因表达的效果，因篇幅的限制，这里就不一一举例说明。

实施例4赤霉素处理对黄秋葵多酚氧化酶PPO相关基因表达的影响

本实施例采用新采摘的黄秋葵(购自宁波市鄞州区联心菜市场)，选择大小较为统一，个头饱满，没有黑斑及损伤的黄秋葵200根，分成2组(对照组和处理组)，每组各100根。配制质量百分比含量为0.01％的赤霉素水溶液，将处理组的黄秋葵在赤霉素溶液中浸泡15min。浸泡结束后，将2组黄秋葵置于常温下自然风干，最后放置于恒温恒湿培养箱中于25±1℃，80％～90％相对湿度下贮藏12天。分别在处理前(0天)和处理后贮藏3、6、9、12天取样，测定对照组和处理组黄秋葵的多酚氧化酶PPO相关基因AePPO1、AePPO2表达的变化情况。

本实施例通过转录组测序筛选到多酚氧化酶PPO的相关基因(委托广州基迪奥生物科技有限公司进行转录组测序)，包括AePPO1和AePPO2，其中AePPO1和AePPO2的序列分别如Seq ID NO.4、Seq ID NO.5所示。将AePPO1和AePPO2的序列在NCBI上分别跟木槿、棉花的多酚氧化酶PPO相关基因序列进行比对，结果如图8、9所示，其中AePPO1的比对结果见图8，AePPO2的比对结果见图9，可以看出，比对结果达到高度相似，证明AePPO1和AePPO2基因确实为黄秋葵的多酚氧化酶PPO相关基因。

本实施例通过实时定量PCR分析秋葵中AePPO1和AePPO2表达的变化情况，AePPO1和AePPO2的特异性引物由Beacon Designer 7设计，以AeACT为内参基因，引物序列见表2。采用美国赛默飞旗下的Real-Time PCR仪，按照美国赛默飞世尔公司的DyNAmo Flash SYBRGreen qPCR试剂盒说明书，进行三步法扩增。进行如下程序设置：95℃预变性7min；95℃，15S，45℃退火30s，75℃延伸15s，此步骤进行39个循环。每个样品进行4次生物学重复，相对表达量采用2^-ΔCT方法进行计算分析。

表2荧光定量PCR

两组黄秋葵的AePPO1和AePPO2基因表达情况如图10所示，其中*，**，***分别表示在0.05、0.01、0.001水平上差异显著。

由图10可见，AePPO1在处理组和对照组中都呈先上升后下降的趋势，在对照组中，AePPO1在3d时表达量急剧上升至最大值后开始下降，并在9d时急剧下降，而在处理组中AePPO1表达量逐渐上升至6d后开始急剧下降直至贮藏结束，在3d和6d时对照组中AePPO1表达水平显著高于处理组(P﹤0.05)。

AePPO2在处理组和对照组中都呈不断升高趋势，且对照组上升速率大于处理组，在整个贮藏期间对照组的AePPO2表达水平均显著高于处理组(P﹤0.05)。

因此，对照组的AePPO1和AePPO2表达水平均显著高于处理组(P﹤0.05)，赤霉素处理后的黄秋葵在贮藏期间对AePPO1和AePPO2基因都有抑制作用。

本实施例还采用了0.001％、0.003％、0.005％、0.007％、0.01％、0.03％、0.05％的赤霉素水溶液分别进行试验，都能起到一定的抑制AePPO1和AePPO2基因表达的效果，因篇幅的限制，这里就不一一举例说明。

实施例5赤霉素处理对黄秋葵过氧化物酶POD相关基因表达的影响

本实施例采用新采摘的黄秋葵(购自宁波市鄞州区联心菜市场)，选择大小较为统一，个头饱满，没有黑斑及损伤的黄秋葵200根，分成2组(对照组和处理组)，每组各100根。配制质量百分比含量为0.01％的赤霉素水溶液，将处理组的黄秋葵在赤霉素溶液中浸泡15min。浸泡结束后，将2组黄秋葵置于常温下自然风干，最后放置于恒温恒湿培养箱中于25±1℃，80％～90％相对湿度下贮藏12天。分别在处理前(0天)和处理后贮藏3、6、9、12天取样，测定对照组和处理组黄秋葵的过氧化物酶POD相关基因AePOD1、AePOD2、AePOD3、AePOD4表达的变化情况。

本实施例通过转录组测序筛选到过氧化物酶POD的相关基因(委托广州基迪奥生物科技有限公司进行转录组测序)，包括AePOD1、AePOD2、AePOD3和AePOD4，其中AePOD1、AePOD2、AePOD3和AePOD4的序列分别如Seq ID NO.6、Seq ID NO.7、Seq ID NO.8、Seq IDNO.9所示。将AePOD1、AePOD2、AePOD3和AePOD4的序列在NCBI上分别跟木槿、棉花、榴莲、可可的过氧化物酶POD相关基因序列进行比对(因篇幅有限，列举部分比对结果如图11～13所示，其中AePOD1的比对结果见图11，AePOD2的比对结果见图12，AePOD4的比对结果见图13)，比对结果达到高度相似，证明AePPO1和AePPO2基因确实为黄秋葵的多酚氧化酶PPO相关基因。

本实施例通过实时定量PCR分析秋葵中AePOD1、AePOD2、AePOD3和AePOD4表达的变化情况，AePOD1、AePOD2、AePOD3和AePOD4的特异性引物由Beacon Designer 7设计，以AeACT为内参基因，引物序列见表3。采用美国赛默飞旗下的Real-Time PCR仪，按照美国赛默飞世尔公司的DyNAmo Flash SYBR Green qPCR试剂盒说明书，进行三步法扩增。进行如下程序设置：95℃预变性7min；95℃，15S，45℃退火30s，75℃延伸15s，此步骤进行39个循环。每个样品进行4次生物学重复，相对表达量采用2^-ΔCT方法进行计算分析。

表3荧光定量PCR

两组黄秋葵的AePOD1、AePOD2、AePOD3和AePOD4基因表达情况如图14所示，其中*，**，***分别表示在0.05、0.01、0.001水平上差异显著。

由图14可见，AePOD1和AePOD2在处理组和对照组中都呈逐渐上升的趋势，AePOD1基因在对照组中9d时急剧上升而在处理组中一直缓慢上升至贮藏结束，这使得9d和12d时对照组中AePOD1基因表达水平显著高于处理组(P﹤0.05)。

AePOD2基因在处理组中的上升速率低于对照组，从6d开始至贮藏结束对照组中AePOD2基因表达水平显著高于处理组(P﹤0.05)。

AePOD3在处理组和对照组中都呈先上升后下降的趋势，AePOD3基因表达量在处理组和对照组中都不断升高至9d达到最大值后开始下降，在6d时对照组中AePOD3基因表达水平显著高于处理组(P﹤0.05)。

AePOD4在处理组和对照组中呈先上升后下降的趋势，在对照组中，AePOD4基因表达量上升至6d后下降，而处理组中则上升至9d后开始下降，且在整个贮藏期间对照组AePOD4基因表达水平显著高于处理组(P﹤0.05)。

因此，在整个贮藏期间对照组AePOD1、AePOD2、AePOD3和AePOD4基因表达水平显著高于处理组，可见赤霉素处理后的黄秋葵在贮藏期间对AePOD1/2/3/4基因有较强的抑制作用。

本实施例还采用了0.001％、0.003％、0.005％、0.007％、0.01％、0.03％、0.05％的赤霉素水溶液分别进行试验，都能起到一定的抑制AePOD1、AePOD2、AePOD3和AePOD4基因表达的效果，因篇幅的限制，这里就不一一举例说明。

实施例6赤霉素处理对黄秋葵漆酶LAC相关基因表达的影响

本实施例采用新采摘的黄秋葵(购自宁波市鄞州区联心菜市场)，选择大小较为统一，个头饱满，没有黑斑及损伤的黄秋葵200根，分成2组(对照组和处理组)，每组各100根。配制质量百分比含量为0.01％的赤霉素水溶液，将处理组的黄秋葵在赤霉素溶液中浸泡15min。浸泡结束后，将2组黄秋葵置于常温下自然风干，最后放置于恒温恒湿培养箱中于25±1℃，80％～90％相对湿度下贮藏12天。分别在处理前(0天)和处理后贮藏3、6、9、12天取样，测定对照组和处理组黄秋葵的漆酶LAC相关基因AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14表达的变化情况。

本实施例通过转录组测序筛选到漆酶LAC的相关基因(委托广州基迪奥生物科技有限公司进行转录组测序)，包括AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14的序列分别如Seq ID NO.10、Seq ID NO.11、Seq ID NO.12、Seq IDNO.13、Seq ID NO.14、Seq ID NO.15、Seq ID NO.16所示。将AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12和AeLAC14的序列在NCBI上分别跟木槿、棉花、榴莲、可可的漆酶LAC相关基因序列进行比对，结果如图15～21所示，其中AeLAC9-1的比对结果见图15，AeLAC9-2的比对结果见图16，AeLAC9-3的比对结果见图17，AeLAC9-4的比对结果见图18，AeLAC9-5的比对结果见图19，AeLAC12的比对结果见图20，AeLAC14的比对结果见图21，可以看出，比对结果达到高度相似，证明AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12和AeLAC14基因确实为黄秋葵的漆酶LAC相关基因。

本实施例通过实时定量PCR分析黄秋葵中AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14表达的变化情况，AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14的特异性引物由Beacon Designer 7设计，以AeACT为内参基因，引物序列见表4。采用美国赛默飞旗下的Real-Time PCR仪，按照美国赛默飞世尔公司的DyNAmo Flash SYBR Green qPCR试剂盒说明书，进行三步法扩增。进行如下程序设置：95℃预变性7min；95℃，15S，45℃退火30s，75℃延伸15s，此步骤进行39个循环。每个样品进行4次生物学重复，相对表达量采用2^-ΔCT方法进行计算分析。

表4荧光定量PCR

两组黄秋葵的AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14基因表达情况如图22所示，其中*，**，***分别表示在0.05、0.01、0.001水平上差异显著。

由图22可见，AeLAC9-3基因和AeLAC14基因均表现为在贮藏前中期在处理组和对照组中都几乎不表达而在9d开始在处理组和对照组中都快速上升，且对照组上升速率大于处理组，在整个贮藏期间处理组AeLAC9-3基因和AeLAC14基因表达水平都显著高于对照组(P﹤0.05)。

其余AeLACs(AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12)基因在处理组和对照组中总体上都呈逐渐升高趋势，除AeLAC9-2基因在3d时表现为处理组表达水平稍高于对照组外，在整个贮藏期间，其余AeLACs基因，对照组表达水平都高于处理组，且均在9d和12d时具有显著性(P﹤0.05)。

由此可以得知，GA处理在贮藏期间尤其是贮藏后期对AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14基因都具有抑制作用。

本实施例还采用了0.001％、0.003％、0.005％、0.007％、0.01％、0.03％、0.05％的赤霉素水溶液分别进行试验，都能起到一定的抑制AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14基因表达的效果，因篇幅的限制，这里就不一一举例说明。

本发明的应用并不局限于此。如根据其在环境保护方面的应用范围均可做扩展。任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，均可作各种更动与修改，因此本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。

序列表

<110> 浙江万里学院

<120> 赤霉素在抑制黄秋葵采后褐变的功效及应用

<160> 50

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1193

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

cttatatcac tgaacaaact cattctcgtt tcttctctca gctcttaact tcctattctc 60

taccacccaa agacctcgcc ttttgattaa catggagagt ttttgcacga ccaagggtgg 120

tgctgtggat cctttaaact ggggtgttgc agctgagtca ctgaaagggt gccatttgga 180

tgaagtgaaa cgtatggtag ccgagtatag gcggacatcg gtgaagctag atggagtgag 240

cttgacgatt tctcaggttg cagccatagg tgcaactgag ttgggggtca aggtggagct 300

ggcggaggat gcaagggctg gcgttgaggc cagcgctgat tgggtacggg atggaaggaa 360

cagaggcact gacacctatg gtgttacgac tggttttggg gatacttctc atcgaaaaac 420

caaccaagga gctgcacttc aaaaggagct aattcggttc ttaaatgctg ggatctttgg 480

aaatggaacc gagtcatgcc acagacttcc tcactcagca actcgagcag ccatgcttgt 540

tagggtcaac accctgctcc aggggtactc cgggatcagg ttcgaaattc tggaggcaat 600

caccaagctt ctcaaccaca acgtcacacc gtgtttgcca cttcgtggaa caattactgc 660

atctggtgat ctggtccctc tttcctacat tgctggattg ctcactggca ggcctaattc 720

caaagcagtt ggacccaatg gtgaatccat ggatgccctt gaagcctttc gcgtcgccgg 780

tattgatccc gagttcttcg tgctgcagcc taaagaaggt cttgctctag tcaatggaac 840

tgcagttggt tcaggcatgg cttccatggt tctctttgag gcaaacatat tggctgtttt 900

gtctgaaatt ttatctgcaa tttttgctga agtcatgaat ggtaaaccag agttcacaga 960

ccacttgaca cataaattga agcaccatcc aggacaaata gaggccgccg ctataatgga 1020

acacatactt gagggaagct cgtatgttaa agcggctaag aagttgcatg aaatggaccc 1080

tttgcagaaa ccgaaacaag atcgatatgc tctcagaaca tctccacagt ggcttggtcc 1140

acagattgaa gtgatcatat ttgcaaccaa atcaattgaa agagagatca act 1193

<210> 2

<211> 826

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

ttaaataata ctcaacaatc aataacataa aaactcagat acaaggatgt ttcagcctgc 60

aaactaacag aattcaagaa atgaaagcaa actaacaatt gtgaagaggg gagccattcc 120

attctttgag acattccagc ataggatcaa tgatactccc ttgacatata gctgtgaaaa 180

ccttgtcaaa tttctcatca ggtgacttca cacgttctcc agtaagcagt tcagttccaa 240

gctcatccct cacaaattta tacaaaggat acgatctgca atccttgatc tggttaggaa 300

tggctgcgtt tccattctca actgacaccc ttgcactctc aacctcctgt ggcaaaacag 360

cctttagttc atcttcgaaa gctgcaatca tttggaagat tgaagtgctc gtagtcttct 420

cattctcacc gtttgtcaat gcatgctcaa caagaacgtg cctcagcttt ggcatcaatg 480

gatatgtagc actgcaaggg tcatcgacat aggcgaaaac gtattcacga tccacagctt 540

tgagtaattc tttttcacag aaccaagaag gattagaatc ggtagtgaga gttttgttag 600

atatctggct aatggtgttc ttcaccgtgt tcctcaaatt ctgttctaaa tgcctcaaat 660

caatagcttg gcaaagtgcc accaagaatg tagaggacat tagcttcaag atatcaacag 720

cttctgcagt ttttctagaa gagattaatc ccaaggagtt cacatcttgg ttgtgttgtt 780

cagcactttg aacatggttg gtgactggat tagccatgta ttggag 826

<210> 3

<211> 2659

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gttttacttt gagatagaag gaagctgtcc tgccacaatg cccaccgtca gcgtcggtag 60

agatcgtctc ttcgctgctc ttggcagatc ttacactcaa gaagagtttg acgatctgtg 120

tttcagtttt gggattgaac ttgatgatgt gacaaccgag aaagcgataa tttcgaaaga 180

gaaacatttg gaagaggata aaaccagtgc tgacgatgaa atcatttaca agattgaaat 240

acctgctaac aggtacgact tgctttgttt ggaagggctt gcacaagctc ttcgcatttt 300

caatggacag gagaagatac ctagatacac agttgcagag attagtaagg aatcaatgct 360

taaaatgcat gtgaaaaaag agacatctct aatccggccc tttgttgttt gtgcggtttt 420

gaggggcata acttttgatg aagctagtta taacagcttc attgatctcc aggataagct 480

gcaccaaaat atttgcagga agcggacatt agttgctatt gggacacatg acttggatac 540

attacaagga ccttttacat atgaggccct gccaccttcg gagataaatt ttgttccatt 600

gaaacaggtg aagaacttca gagctgatga gctgatggaa ttttacaagt cagatttgaa 660

gatgaagaag gttttgcaca ttattgagaa ttcaagtgtg ttccctgtca tttatgacag 720

caacagaact gttttatctt tacctccgat tattaatggt gcacactcag caatcacttt 780

gaagacaaaa aatgtcttca ttgagtgcac agcaactgat ctaacaaagg ctaaaattgt 840

tttaaataca atggtgacca ctttttctat ctactgtaaa aggaaatttg aggtggaacc 900

agttgaagtg atatcatttg atggaaactc aagtgtttat ccagatttat cagaatataa 960

tatggaagtt ccactttcat atattactgg ttccattgga gtacctctgg aagtagatga 1020

ggtcacaaat ttattaaaac gaatgcaatt gaatgctgaa aaggctggat caggtgcctc 1080

caatatcagt gtgtctgtac ctccaaccag aagtgacatt cttcacccat gtgatgttat 1140

ggaggatgtt gcaattgctt atggctacaa taatattcca aagagaaagc tttcatcttt 1200

gaagcccctt cctttgaacc agctcagtga tcttattaga tctgagatat ccatgaatgg 1260

ttttacggag gtgttgacat ggattttatg ttctaagaaa gagaattttg agatgttaaa 1320

tcggaaggat gacaaatcca ctgcagtgat cattggaaac ccccgctcta ctgattttga 1380

ggtggtccgt acaagtctca tgcctggcat gctaaagacc attggacata acaaagacca 1440

tccaaagccg ataaagattt atgaagtggg tgatgtagta cttttggatg ataagaaaga 1500

tgttggtgca tcaaactgtc gcctacttgc tgctttatat tgtggtgcta actcgggttt 1560

tgaggtaata tttccttttc ataccctctt gtttttgtaa tttgacggct ccatgcttag 1620

acttattcta gtctttaatc gccagttctt ttaatttcct tataaagttt gttattgtaa 1680

tcttcaaatg atcagaaatg actttctggt tcacttgatg ggttatccaa cctgaagaag 1740

tttatggttt gtggctaaac atgtgcttgt ttgctctgtc ctaaaacact ggttaattat 1800

gcattgattt tgatgtttgg ttttcttaca tgaatatagt acatcgttga agatttcaca 1860

attttttgct ttgttatgga gaatgtactg atggtatggt tagtccagaa aaggaagata 1920

tggtgttctg caatctacga gtattgtcca attatttctt tggcccttat gtgttgatag 1980

aacttgatga aacaaggact ttttgtctac agctgattca tagcctggtg gacagaatca 2040

tggaagttat ggggactcct tttgttccgg ttggtgataa atcaggatac tatatagagc 2100

tttctgatga acctgaattt ctattgggta ggcaagccaa aatcatttac aaaggaagcc 2160

gcattggcat ttttggtatt gtgcaccctg aggtgttgaa caattttgat attccggatc 2220

cctgctcctt cttggaactc gacattgaaa actttttata ggtcatgttt cattcatgtc 2280

agctgaagta agttgtatct ttaccctttg catggttatt atgatttatt attctctcct 2340

atcagccttt attcaattcc caccttcaaa ttttaaatga cagaaactgt acgtccgtaa 2400

cacctatatc catctgtttg cttattgaac acaatcaggt agatcggctg cggttgtacc 2460

tggcaacttg gttgctgttc tgctaatttg ttttaggcaa cagccattga aatacttgca 2520

tgtaagatcg tttgctatag aatatgttgt tgactgtcgt ttcactttca agggaagtta 2580

tgtttttgat gatatcatat gcatttttat ttaaatcaaa gtatattatt agccgattga 2640

tttatctgat aaatatggt 2659

<210> 4

<211> 2053

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

cagaattaaa acgacaaatg acaaactgga accaaactaa acattaagtt caaacttcaa 60

agtacaaaga cgattagcta ctaagccttt tacctagtat ctgggcggaa agaagcgaac 120

cattttcact ctgcttcacc ttgtcctcaa caaaggattc tatggccagg acgagatgac 180

tttatttata acttaaaaca tagcagcaac aggtcgacga taatcaatct cggatgtagt 240

cgatcttaat gttaccaatc gaaaccagac ccttcccttc tttaggcacc aaagtcacaa 300

caatattgtc atcaccttca acgtccaaat cctccaacaa atctgatatt ggcagcgtca 360

ggctagtgtc aagcttcacc ccggctttgt tctggttatg cggtatattc gaaaagctcc 420

cggcaaactc cgaatcttcc ggtccggtcg gtatctcgtc gtcttcgtcg ttaatgtaca 480

cattgaattt cacgcccacg tctcggtcta gttgaatgtt ttgaagaacc aatacttctt 540

cttcatcttc tttttcaagc ttagtccttg atttctttgg ccttggaacc tcaacgcgca 600

ccagcttgtc tagaatgata gggaagacgt tacggatgac ggtggtggtg atgtttgttt 660

cggccgcctt tgcttgacct ttaccattgg accgaccagg ccttcgtgga gttggcttgt 720

ttttaagcca tgggatgtta actttttggt aatcgtaccc taaaaccctg gtgtcaaggg 780

catcgcggac tttggctcga accaggtttc cattctcgtc gtagaaaaga aacgaggaat 840

cgagccaatc tgtgtcggtg aaatcacgtc gcttctttcc tggtaacgac ttccagatgt 900

tccacaatcg atcaacgttg caatgatgag cgtagaacaa tgggtctcta cctgcagaat 960

agaagttccc catgtcttcc ttatatggtt gccgctggtc tccaacccac cggtgaatag 1020

cggtgtgagg gttgttctca atggagccca ttcccggact gggtttttct ccggcacggt 1080

acaccgatcc atggaaaaga gaaggcgtct tgttaggtac catctgccta tacatcacag 1140

tgagattact ctttataaga tccctcttcg acaaatcctc ctctacgcca gcgtaatcaa 1200

gatcgagcat ttggggcggc tgatggtcca cgttgcgctt ctcatcgtac agcggcgagg 1260

tggggtctac atatatctca gggataagca tgccacgtgg agcatcccag ttccaaaacg 1320

gcattgcgaa attcggatca ccaatcagat tccccaatat cctctcgtag aaatacagat 1380

acagcctatg gaacgggaaa aacagccatg agaagtgaac ctgaagttct tggttggcgt 1440

cgccattatc gtaagctccg ttgcaatacg cacaatgaac attggcttgt tgcatgaaac 1500

tacgtggatc gtcgtcggga agagctttca tcatctccat ggccttcgta aacttatcca 1560

cgtactcagg atcaaccaaa tgtgccgccg gcctgtaccg tattttggaa aactttgggg 1620

gtttgaaatc tataattttt gctgatttcg gtgggcagca agccactttt atggtgcctg 1680

cacttttcga ggtcacggtt gctttctcac aaatgtcgag attaggggag gagactggtg 1740

ctgccaatgc aaacgggtcg ctcacaaggt tggttgcacc ataaacactt cccaggccga 1800

gaaggacatc ccttctgtcg aacctattgg gagaagaaga gtgttcattg tttcggttcc 1860

cattgctggc tttgcacgac acaactttct tggacacaaa gttgaaaggc tttttcgtct 1920

tgaatatgga aagctgagat ggtttgggaa ggaatggagt ttgaacggag gaattggcaa 1980

gaacgacggg gcttgatcgg gaatggacgg tggaggccat tgccgccttg gttgatttgt 2040

ttgtgcgaag gtg 2053

<210> 5

<211> 1746

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gccggaagct cgtagctact tatcaaactc aatcttgatc ccgacaatgt tgacattacc 60

cttcccacat ttcggcacca aagtcaccat aacaccatca tcaccttcag cacccaaatc 120

ttccaacaaa tcagttaacc ctaacctcaa acatgtcttc aatgtctggt tcttcccatg 180

tttatgcttg tgtgggacat taacgaaact cccagcaaac tcagtgttgt cgggtccgat 240

attcaactca tcctcgtcgt tcacataaac atcgaatttc tcgtacgaat ctccattcaa 300

ctccacttta atcaccagta tttcctcttc gtcttccttt tcctttcggc tcctagattt 360

cttaggcctt tcaacgttta ccctcacggt tttatctaga acgaaaggga atgattcacc 420

gacggaaaca agctttggtt tgttgatctc tgctgcatgt gcgacacctg aaccaccctt 480

taatggaagt ttcctggccg gagttggctt tgcttgcagc catggaatct caacatcttg 540

gtaaacgtaa cccaaacttc gatgttcaag gcaatcacgg actttaactc gaacaagatt 600

ggcattctcg tcgtagaaaa ggaacgacga gttcagccaa tcttggtcgt tgaattcctt 660

acgattctgg ttcccgatcg tcttccaaat actccatgtc cggtcgacat tcgagtgatg 720

agcgtaaaaa ataggatctc ttgcagcaga gtaaaaggtt cccatgtttt caccgttggg 780

ttgtttatca tcaccagacc atacgtgaac gggtccatgg ggaacatttt cgatggaacc 840

ggaaccccca tatggctcat cgccggctcg aaacggtcca ccgaggaaaa gactaggcgt 900

tttgccattt gaaaccattt gtctgtacat gattctaaga ttgctttgta tttgtgcttt 960

atttgttgct gcttcttcgt tgccattgaa atcgaggtcc accattgtta gtggataatg 1020

ccttgtgttc cgtagttcat cgtataaact ggatttctta tcggtataca tacggggaat 1080

ttgcataccg gcaggtgaat cccagttcca aaatggcaag gcgaaagttg ggtcatcaat 1140

caaatgtccc aaaattctct cgaaaaagta taagtaatat ctatggaatg ggaagaaaag 1200

ccatgagaaa tgaacttgaa gctccagatt ggggaaccct acttgatcat aagcaccttc 1260

acaataagca caatggacgt tagcttgttg catgaagtta cgtgggtcgt catccggtag 1320

agctttcata agctcgatcg ccttggaata cttccttatg tactcgtcgt cgactaaatg 1380

cgccgccggc cggactcgta acggtgaatt cgaaggtgcc agtttaaagt ctacgatctt 1440

tcgtgaaacc ggagggcaac agttggtctt tcggacacct tccggtacat cagcacggcc 1500

gcatttttcc aactcgggtg ctgatattgg tgcagccatg gcatcgccga gggtggctgc 1560

tccgtaataa ataccaccga ggccaatgag aacgtctctt cggtcaaatt tgttaagatt 1620

agggttctct ttgtcaccat taaaggcttt gcatgacact gcttgctttg gggttctgat 1680

tatagaaagt ccggaccttg ttggaaagaa agaagatgtg atggacgtcg gaatggtggt 1740

ggttgg 1746

<210> 6

<211> 1256

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

tagctttcct gtgtgacatt tcttctcaac ttaactcaaa aaatggtagg agctgcagtg 60

tttagaggtg ctgctatggt gatgctgctg gccttgagct tcagcgcatg ccaagcacag 120

ctttctccta cgttttatgc tgaaacatgc ccgaatgcac tcagaaccat ccgcacatcc 180

atcagatcag ccattgcgag ggaacgtaga atggctgctt ctctgattcg gcttcatttc 240

catgattgct tcgttcaggg ttgtgatgcc tcaatcttgc tggaggattc ctctacaatc 300

acaagcgaaa ggtccgttct tcaaaatcgt aactctgtaa gagggtttga agttatcgaa 360

cgggctaaat ctgctgtcga aaacgtttgt cctggtgttg tgtcttgcgc tgacatactt 420

gcagttgctg ctagggacgc ctctgaatac gtgagtcatt actatttact acacacatac 480

tatacgtata tatatacgta tatgtacatg tatatgtata tgtattaagt ggttaaaatt 540

tcgcaggttg gtggtccatt gtggacagtg aatcttggaa gaagagactc ccccgacgca 600

tacccaactc tagctgctag agacctgcct cgtttcacag acggtcttca ggcccttatc 660

gacctgttcg aaaccaaggg gctcaatgaa agagacatgg tagctttgtc tggttcccac 720

accataggac aagctcgttg cgttacattc cgtggcagga tatacaacaa cgacagtgac 780

atcgatgccg gatttgccag cacgcgtaga cgcaactgtc cggctactgc tcccaacggt 840

gatggaaact tagcaccact cgatttggtg acaccgaacc aatttgacaa caactacttc 900

aggaatctgt tgcaaaggag gggtcttctg caatcggatc aagtgttgtt tagcggtgga 960

tcatcggata gcatagtgaa cgagtacagc aggaaccctt ctattttcag atctgatttc 1020

gcttccgcca tggttaaaat gggagatatc gagcctctaa caggttcagc tgggtcaata 1080

aggagggttt gcagccgtgt taactagttt gatggtataa ttaagaagtt tcaagtgtaa 1140

agcagctgct gtaatgcttc tttgctatac atccatggct gtactttctt gcatacctat 1200

ataaaatttt aaataaataa tttctgaaaa ataatatctc agaaactttt tttcaa 1256

<210> 7

<211> 1972

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

gtcgtatata acaaaagaga atatttaaag gcgcgtttag gaatcatgga ccccaacctg 60

tttgaaaaat gggacgctcc acaccaactc tttgatcagt tcctctcatc aaattaatgg 120

ctaatatgct tcttatggct atattatctg caccaaccaa acttgttaat ttcacgatat 180

cgaaatacca agtcatgcat ggcttagtct taaagattag gtgacctgcc agtgtcactg 240

tgccagacgc ctctatatat attgccactg atagcttatg ctaacatcat cccttcatct 300

tcgaatataa cagaatggct gctgctactg ctgttgctgc ttcgtttagc gtcgtgtacg 360

tgtttgttgt ggtggttttg gtcttgggga gcagtgcgtt tgcgcagctc tccacaaatt 420

tctactcaaa atcgtgtccg aaggtgttct cgacggtcga gtcggtggtg gaatcagcgg 480

tgtcgaagga gccccgcatg ggtgcttcac tcgtccgctt gttcttccat gactgtttcg 540

ttaatgtaat ttactatgtt tttaactgtt atacgcatgc acatgcaatc atgcatgcat 600

acatcatgat caatttaata atggagtttc acgtagaaaa attcaacccc atatatctta 660

tttagttaaa ttcatttcac ttagtaggca tcggctgccg gtctaaatac ctttcaaacc 720

atgcatgcaa cgaaattcta ttcttggact caacaactac atttgctgat ttatgacagg 780

gctgtgatgg gtcaatactc ctcgacgaca cttcttcttt cacgggggag aaaaccgcgg 840

gtccgaataa caattccgtt cgaggattcg aggttgtcga tgccattaag gccaacgttg 900

agaaagcttg tcctggtgta gtttcctgtg ctgatatctt agccattgca gctcgggact 960

ccgttgtaaa actcggaggg ccagactggg atgttaagct cggaagaagg gactcaaaga 1020

ccgccagctt atctgctgca aatagcggtg tcatcccacc tccgactgct accctcagcc 1080

aactcatcaa tagattccaa gcacgaggcc tttccgctaa agatatggtt gcattatctg 1140

gtacaatatt attttatttc tgacaaaaac tatcatcgtc tcctgagatt tacttgttat 1200

ttaacttgct tcatgttcat gcgtgctgcg gcaggggctc acacaatcgg gaaggcaagg 1260

tgcgttctct ttagagatcg gatatacaac gaaaccaaca tcgatggctc attcgccaag 1320

acaaggcaga gcagctgccc gagaaccagt ggctcgggag acaacaacct tgcaccacta 1380

gacgtgaaaa cccctaattc ttttgacttg gaatacttca aaaacctgtt aaacaaaaag 1440

ggtttgctcc actcggacca gatactcttc aatggcggat ccacggattc gttggttaaa 1500

acatacagta tcaacaagaa gacattttat tctgactttg ttactgcaat gataaagatg 1560

ggagatatta cgccactcac cggatctaat ggtgaaatca ggaagaattg caggaggccg 1620

aattaactag ttatatcctc ggaggaggaa ggaaaggaag ctaccaagaa aaaaattcta 1680

gtttccgcta gctccttatg aatccaacaa aagaaagaac aagtatttta ccaaaaataa 1740

aattcatgct taatcaattt gcatgataat gtgtgacggt gatgttccaa aagggacaat 1800

gtcgggtgtg gattttgatg caaattagtg aatgtttttt tttaattaat gaatattttc 1860

tttctaaatc tagcaataga aatacaataa ttattcggat aatatatatt atatattaat 1920

gttaaataaa cttaaatctc atagaaaacc taccagaata ttatcattgt ac 1972

<210> 8

<211> 1685

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

atgatgatat tacggtggtt gtcatctgta tagaccatga atcactcggc acgaagatgc 60

ttgcacccga gctgtctgta cgaggatttg tcgacactat tattggacca tcaaacttca 120

acagtactta tcatttgaat tcataatcac agtgggattg tgaagatgca agtttctgca 180

tgaattttta gtcttttctt cccagacaac ttctggttgt ttctgaaaaa cttttcccat 240

tacaaagcaa gaaagattaa cctcatttcc atctttcagg tgagacacaa ggagtctcat 300

agtgcatccc tgttggagta tttttgattt aattatatac aaatcaatta tgtattgaca 360

tcttttagga aaatattact tgaaaaaatt caagtggcct aagtgaagaa atgaatgtta 420

tatatctttg gaacctgttg agctttctcc tgaatccaag acaaacagga acaatccaaa 480

tccataatct tggtccaatc caaattaata attaaaccag aattccaaaa aaggtacaag 540

actgttagtt gaagtagcat aaattattca agatcttgaa aaagttcttt ctacttacga 600

agattatcta tcccctggta aaattaccat ttgctgaaac gaaacaatcc acggtttgaa 660

acttattgcc tctggattct ggaatttgaa aatttactgc agaaggactt tgaacctttg 720

aacatttccg gcatctcatg atcttttaat tgaatcaaca aaaccattgc tcagaagcct 780

ctctacatac ttgccaagaa tatcaacctc caaattcacc ttttgcccaa cttccttcaa 840

agggatcacc actttctgtt gagtgtaatc aaccaacata aaattgaaac aatgttcttc 900

gtcaaacaca tccaccacag tcaaactagt cccatccacg gcaatgaacc ctttcggcac 960

aatatatttc agcaaatcct tatcagcctt aactttaatc cacaacgaat ccttttccgc 1020

ctccttccca actatcaccc cagtcccatc aacgtgtccc tgcacgaaat ggccacccat 1080

tcgaccagtg ggctggatgg cccgctccaa attcaccaac gacccgggtt tcaattcact 1140

caacgaggtc ttcctgagag tttcaggagc caagccgacc gtgaattctc ccaaacgggt 1200

atcgaaatcc gtcacggtta ggcaagttcc attaacggca atgctgtcgc caaggtgggc 1260

atcttcgata actgttttgg cgagtatttt gagatcgaat ccgccgtgat cggccgtacc 1320

caactgcttg atttcaccca tttcttcgac gattccggtg aaaagggagc ggatcttggg 1380

ggtctggaaa gattgggttt tgggtctgag tctggatggt tgggtgaaaa gggaaagaga 1440

tgagggttta aaaatggggt tgactttgag gtgagttgtc aatgatggag ttcttagtag 1500

gttgaagatt actgggtttt tggacgggga agctttaggg attattgaga ctgaattcat 1560

agctgtggag agcgtcatct tctttacttt gctggtcttt ttcttcacta ggaaaaaagg 1620

aaagtcgaag ggttgtctga actccaaacc aacgaaactc ttaaccctcg aattgttggg 1680

aaaat 1685

<210> 9

<211> 1564

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

aatcaatctc tctgcaatca ctcaaatttc atttgaaatg gctcggttca ttgacgtttt 60

acttgtactg tcgctttctc tttgtttctg tttgctcccc gagacggcat cagctcagct 120

gagacggaat tactatgcta atacttgtcc caacgtggaa tccattgtta gaaatgccgt 180

tactgcgaaa ttcagacaaa cttttgtcac tgtccctgct accatccgtc tcttcttcca 240

tgattgcttt gtccaggggt gtgatgcttc agtaatcatt caatccaccg gcaccaataa 300

agccgagaag gatcaccccg ataacctgtc attagccggg gatgggttcg acaccgtgat 360

caaagctaaa caagcggtgg atgcggttcc ccgttgtaga aacaaggttt catgtgctga 420

tatattggca atggcaactc gggatgttat tgctctgtca ggtggaccgt cgtatcctgt 480

tgaattaggg agattggatg ggttaagctc cacagctgcc agcgtcaatg gaaagctgcc 540

tcaaccatcc ttcaacttga atcagctcaa ttctatgttt gcagccaatg gactcaccca 600

aacagacatg attgctcttt caggtgcaca caccctcgga ttctctcatt gcagcaagtt 660

ttcaaacagg atatacagct tcagcagcca aaaaccggtg gacccgactc tcaacccgac 720

gtatgcgact caactgcaac agatgtgtcc caggaatgtt gatcccagga tagccatcaa 780

catggaccca agaacaccca ggcaattcga caatgtctac ttcaagaact tgcagcaagg 840

catgggtctg ttcacctccg accaggtttt gttcacggat ggtaggtcta agcctctcgt 900

aaacgcgtgg gccaacagtt cacaggcttt taacaatgcc tttgtcactg ccattactaa 960

gctcggacgc gtaggtgtta agacagggaa gaacggtaac attcgtacaa ggtgtgatgc 1020

ttttaactga gaaggtttac caattaccat aggttcttga ggaatacacc ggtggtagac 1080

aattcttcag ggttttgaac atctattgtt ttgtttctgt ctttctgatg tggttcctgt 1140

aataagtcaa ataaagggtt ccctttacat tgccataaaa gtcataataa aagtgacagg 1200

gtaacagcag atttacgttg tttgagctta gcttggattc aatgtcaagg tgaattaatg 1260

ttcagttcag acgtcacagt caactttttc tataattctt tatggctcaa aaaaacagac 1320

aggaaatgac aagccattgt tattgttaca ggaagaagtt gacagtgtca tctccaaatg 1380

gatcttttat gagtggtttc tacagatttc cttttatggt ctataattac aagaagaaga 1440

tgattaatgc cttgacaatc ggtattaatc aaactgggtg aattgcccat gttctggatt 1500

aatgccttga cctatatgcc atccaccttc actcctacac ttcgctgtaa acgatcagtc 1560

gtca 1564

<210> 10

<211> 816

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

gttaactctt gcttgaacca ttctccaagt ataattgttt gatctgaatc aggtgtaggg 60

aaaggatagt cttcatttgc tgctggtgaa atgataaagg cgccgtggac ggttgtgcta 120

gcccatgcac tggcagcatg ccaccacaga gttcctatct cattgcctaa ttgaatctcg 180

taagtgaagt ttcttcccgg ctgaatcaaa tcgttcgaac tatcaattga ttccacaacg 240

ccttcccagc tgatagaaac agcggcgttc ccttgattgt ggacattgac ataaacagtg 300

tcccctctgc taacccgaat ctcaggcccc gggaagctgc cgtttacagt caagatgttc 360

ttggtgctgc acagctttgt aaactgggct tcttgcaaga agaagtcgta atattgatcg 420

tcagccatgg ataagagaag ggtattcata aacaaaagcg cagaaatcca gatcatccct 480

tgcttctgag aacccatctt ttccctcctg tgtagtatcc gtgttcttca gttctcccct 540

gaatttgtaa ccctttggtt tttctgatca attaattagt aatttaaaac taaaacagta 600

gagactgtaa agaaacctgc gtttctgaac tcatcatccc ccaaggaaaa ttcaaagctc 660

aaaacagttt caatagaaaa ttaccagacg cgtgagtctc agataagtat ggcaataatg 720

gagatgaact ttaccaaacc aggttgagga tgaaaatcct aggatttttt tcagttcatt 780

ttctgcgttt tcataaaaaa aattaattta agtctt 816

<210> 11

<211> 974

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

agatcaggct ttattacacc actaaaccct actcattcaa acaaccacca tcaatcggtc 60

acaacttgta aatgaaaaca catcatttgc acacctatat ccatattatt tgaacatcag 120

ccttattaca tcctgacaat agaagacaat ttaactaact tggggttgag gaccggagtc 180

ggtggtggta tatcgtaggg ttccgagggt agtatgcgtg gtgtcggagg aaggtcgagc 240

agcgatgtaa taatgtccca gattctggtt tgggcacaac agaacgtcga tcgtttcggc 300

aggggctagg gttagtgagt ttgtgaagga gcgactggtg tatgccccat tctgtccgac 360

aatggttaag gtgtggtatg caataccaaa caccattgtt cgattaacag catttataac 420

acgaacaagg taaagtcccc cgtaatttac ttggtaatcg aacgttgtat ctgcaacagc 480

gataatcatc catcatcaaa atggttggac tctaacaaca taaatagata gactgagttt 540

tgcaatactg cagacgtacc gttactgcat ccatatgttt ctccaacatt tccattgata 600

gtgtaagcat cagcttggcc aggagctatg gtttgattgg cttcggttag ctcctgcctg 660

aaccattctc ctgaaacaag catttggcaa aacaagtacg tacttaagat tcaaacaagc 720

ttaacttaca aaatatacga atcgaaacaa aaaaatctat accaagtata attattttat 780

ctgaatcagg tgtagggaaa ggatagtctt tatttgctgc tggcgaaatg acaaatgcgc 840

catggacggt tgtgctagcc catgcactgt tggcgtgcca ccacagagtt cctatctcat 900

tgcctaattg aatctcgtaa gtgaagtttc ttcccggttg aatcaaatca tctgaaccat 960

caattgattc caca 974

<210> 12

<211> 1990

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

attgaagctg cgaaccgaac aacactttta agacacaata gttttcttat tttgatctgt 60

cggggaaaaa tatgggttta tcgaagctag gtgttctgcc atggatgctt gggatcttgt 120

tcctatgtag tctttgcatg gcagatgtcc attactatga cttctttgtt cgagagtcga 180

attttacgaa gctgtgcaat acgaaaccga tgttggtcgt aaacgatagt tatccgggac 240

ctgagattcg ggttcatagg ggagacactg tgtttgttaa tgttcataat caagggtctt 300

atggatttac cattcattgg catggtgtga agcaaccgag gaatccatgg tcggatggtc 360

ccgagtttgt aacgcaatgt ccgattcgac caggaacaaa cttcacgtac gaagttgtgt 420

tatctgatga aatagggact ctttggtggc atgctcacag tgactggact cgtggctccg 480

tccatggcgc cttcgtcatt ttaccggcaa agcacgaaac ttatccgttc catcctcctc 540

atgctgaaca gacaattata ctcgaatcat ggtacaatgg agactattta caacttctcc 600

ggaattcaac atcaaccggc caagctatag acccaccgga tgcttacgct atcaatgggc 660

atttagggga caataccgga tgcaatgata caatattcga gatggaagtc aatcaaaggg 720

agacatatct cctccgcatc attaacgctg caatgaacga agacaagttc ttttccattt 780

cgaaccacac cctcatagtg attgcacaag atgcttccta cgttcaaagg tttgcaaccg 840

actatataat gatcagtcca ggacaaacca tggatgtttt ggtccatgca aaccagaaca 900

ttggccagta ttacatggtc atgaggaatt tccacgacag cgctgcttcg tcgaacaata 960

acatcactac cggtgttttc cgatataaga acagtgttgg tggattgaac actaatgctt 1020

ccttggtaaa attgccacta cctgacgact ccaacgctac aactagcttc gtgagccgaa 1080

ttaggaatgc gagagtcaga cagaacccgc ggttgaatgt gcctagactt attgatagac 1140

gagtctacat cgcgattgcc acaacctcta ttaattgcac caacccggag tgccttgagg 1200

tttctccgac gagattcgcc gcggcgatga acgatgtgat ctttcaactc ccagatgtag 1260

acattctcca agcatactac aataggagca tcaacggtgt tttcaccaaa gatttccccc 1320

ttgagccacc tcaattctat aacttcaccg gacaattgac cggtatcaat ccgaatgtca 1380

gtatggggac aagagccgtc acgctaaact acggtgaagc agtcgagatc gttttccaag 1440

caacccagtt cggtgccgga ggaagtcatc cacttcattt gcacggcttc agtttctata 1500

tggtggggac tggttcaggc aatttcaata atgtaaccga ccctaagtcg tacaacctgg 1560

tggatccgcc gctgattaac accgtgcatg ttcccgctag aggatgggtt gcactccggt 1620

tctttgcaaa caatcctggt aagctttcat taaccaaagt aaagaaatta aaacttttta 1680

aacaagtgaa tgtaactgtt tgatacggtt taatgttgaa aattatttac aatttcaggt 1740

gtttggttta tgcactgtca cttggaaagg catagtagct ggggcatgga cacagttttc 1800

atcgtgaaaa atggagccac cgccaaaaca agcatccgtc caccgccggc aaccggcatg 1860

cctgtttgtt cttgagcttg gaacaaaaaa gtagcaatca tgaatgactg actggtatcc 1920

gttatgtcaa taagattatt tcattatttg atttgtaaca caagaataaa aggaaaatgt 1980

tccttcgctg 1990

<210> 13

<211> 933

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

aaacatccat ggtttgtcca gggttgatca ttataaagtc tgtcgtaaac cgctgaacat 60

aagacgcgtc ttgagcgacg agtgtgaggg tgtggttggt gatggtgaag aatttcggtt 120

cattcattgc agcattaatg atgcggagaa ggtatgtatt cccgaattca acctgcatac 180

ggaatagtgt atcgttgacg catccgtatg tgtcacctaa atgtccattg atagcataag 240

catctggatt ggcaggactt gtacccaatt caattgaatc attaataagt tctaaatagt 300

ttccattaat gtaccatgat tctgtcgata caaagtaaag aaatcagatc aagattcata 360

aacagcacca agccaaaaac agaatgatat gcttacggag catgatcgtt tgttcggcat 420

ccggcgtggg gaacggataa gtctcattct ctgccggtaa aatgataaag gctccttgga 480

cggaaccacg agtccagtca ctgtgagcat gccaccatag tgttcctatt tcatcccata 540

gtatgacctc gtatgtgaaa ttggttcccg gtcgaattgg acattgagtt atgtactcag 600

gaccatcaga ccacggattt cttggttgct tcacaccatg ccaatgaatg gtgaaaccat 660

aatttccttg attatgaaca ttaacgaaaa cagtatcacc tctgtgaacc cgaatctcag 720

gtccaggata actatcgttt acgaccagca atgtcgtcgt gttgcatagc ttcgtaaagt 780

tagcctctcg cacaaagaat tcatagtgat gcacatctgc agcacagcca tggagaaaag 840

ttgttagaaa taataaaccc cctagaaaac ccagcttcag caaacccatt tttgttctct 900

ccgatgtgtt ttcagttcgt ccctgaactt tct 933

<210> 14

<211> 2017

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

ccaaaatata tataaacctt tttaaaaaat attttcaata atcataaata tattttttat 60

ataatgaaga aattcaataa aatccctaca actccatgaa tctttatttt gttgagaatt 120

caatgatatg atgcatatat aaggctacag tttcaaatga caatcaatct tattgaggct 180

aacaattcca aattaaatct gctccattct ggaactagtt attctgtaat agcactaatt 240

ttaggctccg gaacaaacag gcatgccaga ggccggcggc ggacggatgc ttgttttcgc 300

ggtggctcca ttcctcacaa tgaaaacggt gtccatgccc cagctactat gcctctcgaa 360

gtggcagtgc ataaaccaaa caccaggatt gtttgcaaaa aatctgagtg caacccatcc 420

tctagcagga acatgcaccg tgttgatcag gggtggatcc actaggttgt aggatctcgg 480

atcagtcaca ttattgaaat ttcctgaacc cgtcccgacc ttgtagaaac tgaagccgtg 540

tagatgaagc ggatgacttc ctccggcacc gaactgggtt gcttggaaaa caatctcgac 600

cgcttcaccg tagtttagtg tgacagccct tgtccccatg gtaacattgg tgttgacacc 660

actcaaatct ccagtgaagt tgtagaattc aggtggttct tggggaaaat ctgtggtgaa 720

aacaccgttt gtgctcctgt tgtagtatgc ttggagaatg tctacattcg ggagttcgaa 780

gctgacattg ttcaaagccg caacaaatct tctaccaggt agaggaaaac actccgggtt 840

gctgcaagga atggagtttg tagagatcgt gatgtagact cgcctatcaa tacgtctcgg 900

cacgttaaac ctcgggttct gtctgactct cgtgttcctg attcggtcga ggaagctatt 960

cgtggcattc gtatcatccg gtaggggcaa ttttaccaag gaagcattac taatcaatcc 1020

accaacactg tttttatact ggaaaatacc agtagtgatg ctattgttag atggagcacc 1080

gctgtcgtgg aaattcctcg tgaccatgta atactggccg atgttctggt ccgcgtggac 1140

cagaacatcc atggtctgtc caggacttat cattatatag tcggtttcaa acctttgaac 1200

ataagaagca tcttgggcaa ccacgatcag ggtatgattg gcaatggaga agaacttctc 1260

ttcgttcatg gcggcattga ttatacggag aaggtacgtc tcctggtact caacttccat 1320

tcggaatatc gtatcgttgc atccgtatgt gtctcctaga tgtccattaa tggcgtaagc 1380

atttggtatt cccacagcga agccagttga aagtgaattc cgtatgagtt gcaaaaagtc 1440

ttcattgtac catgattgaa gtatgattgt ctgatcggca tccggcgggt gaaacggata 1500

agtttcgttc tccgccggta gaatcacaaa ggcaccgtgg acggatccac gagtccaatc 1560

actatgcgca tgccaccaca aagtgcctat ttcgtctgac aagataactt cgtaagtgaa 1620

gttcgttccg ggctcaatcg gacactgcgt tatgtactcg ggaccatccg accatggatt 1680

tcttggttgt ttcacaccat gccaatgaat ggtgaagcca taagatcctt gattgtggac 1740

attaacaaat acagtatctc ctttatgaac tcgaatttcc ggacccggat aactatcatt 1800

tacaaccaac attgtctttg tgttacacaa cctcgtaaaa tttgcttctc ggacaaagaa 1860

gtcgtagtga tggacatctg ccatgccaag gctacataga cacaaaatgc caatcaacca 1920

tggcaaaaaa cctacctttg gtaaactcat atttctctct ctctctctct ctctctctca 1980

ataataaatt tcgtgttctt cagttctccc cttaaac 2017

<210> 15

<211> 1306

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

agctgataaa caacatttca atggcaagaa cacagctagc atggatttag tagggcattg 60

atattatcat atataacggt tttccctact gaatgtctta tttgagaaac aaacatatga 120

gtatgacgat cggaaatcca aataattaaa ctaaaccacc tgtgctggtg gtataatata 180

taattccggt ggtattaagt ctaccggagg atggccgagc agtgatataa tattgaccaa 240

cattctggtt cgcgctaagc aagatgtcga gggtctgccc tgggggtaat gtcagggaac 300

tcgagaacga gcgtcgggaa tatgtcgcgt tttgtccaac aatcgttaag ctgtgttgcg 360

cgatggcgag caccattatt tcgttggcaa cagcgtttat tatacggagg aggtataaac 420

cctggtaatc cacttgtagc tgatatgatg tatcgttaca tccatatgtt tgtccgagat 480

ggccgttgat cgtgtacgca tctgcttggc cgggaacaat gccttccgtt aattcttgtc 540

tgaaccattc tcctgaaagg agttttccaa agaattgtta agattcataa tctttaagtt 600

tatatattta acaaagataa atataattgt tggaaggatt ttagagcatg ttaccgagta 660

taattgtttg atctgaagtg ggtgcaggga aaggatattc ttcaccggcc gccggcaaaa 720

tgataaatgc gccgtggaca gttgctctag cccatgcact ccgagcgtgc caccataagg 780

ttccgatttc atcgtctaat tcaatttcgt aagtgaaatt tgcaccgggc tgaatcaact 840

catttgcacc atcaattgga tcctcaaccc cctcccagtc aaaggaaaca gcaaatcttc 900

ctcgattgtg gacattgaca taaacagtat catctcttcg gacccgaatc tccggccccg 960

gaaagcttcc attaacggtc aagatgtttt ttgttccgca aagcttggta aactctgctt 1020

cttgcaaaat gaattcgtag taaacgtcat cggcggcgga gaagatgatg gaactgaaaa 1080

agcaaagcac cgataacaac agaaagacat gtttctggga acccatttta atgatgtttg 1140

atctttgttc ttcgattgtt cccttggaat tcttctggtt tggtttcttc ttatttatat 1200

acaagtagcc atctcgatgc tgatatcact gtacgttttc aagaaattca aaatcctcgg 1260

ccaggcccag ccaactttct agacgtagga atcagatgag taaaat 1306

<210> 16

<211> 1143

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 16

ttatgggagg acataccttc tccacatagt caatgctgca atgaacgaag agaaattctt 60

cgccatcatg aaccacaccc tcaccgtcgt cgcacaagac gcctcctatg tggaaaggtt 120

tacgaccgac tacatattga taagccccgg acaaaccatg gatgttttgg tctctgccaa 180

ccaaaacgcc ggccaatatt acatggctac gaggcctttc tctgacagcg ctaatccacc 240

tgttgacaac attactactg gagtttttga atatacaaac agtgcgggtg gattgaatgc 300

ttccttgata acactgccgg gaatgacgga tacggctgct gcaaatagct tcctcagccg 360

aatcaggaac tcgaatgtca ctcagaatcc accattaaat gtgccggcgg attcggatat 420

taacagacga gtgtacattg cagtcgccac aaacaacttg ccttgcaact ccgcagagtg 480

tgtttcagca gtgagacctg ctgcaagttt aaacaacgtc agctttgttt tccctcgtaa 540

taacagcatt ctccaggcat tctacaacat gagcatcggt ggggtttaca ccgaagattt 600

tcccctgaat ccgccagaat tctacaattt cactggaaac ttgagtcatt tggacacgag 660

agctgataca gggacgaggg ctgttatgct aaattatggc gatggagttg agattgtgct 720

gcaagcaacc gagatgggtg gcggtggaag tcacccaatc catttacatg gtttcagctt 780

ttactgggta ggaagtggta ccggcaattt caacaatcag actgacccaa gcacctacaa 840

tctggtagat ccaccactca ttaacactat ccatgttcct cgtctaggat gggttaccgt 900

cagatttttc gccaacaatc ctggagtatg gtttatgcat tgccatttgg aaagacacag 960

taactgggga atggatactg ttttcatcgt caggaacgga accactaccg acactaccgt 1020

cctcccaccc ccgtccgaca tgcctctttg tacctagaag tacaaagcat gggagaagtt 1080

ggcatgtcgt gatttctgaa cctacagttt taataaacga atttatttgt gattttaaaa 1140

ata 1143

<210> 17

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 17

acttcctatt ctctacca 18

<210> 18

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 18

tatactcggc taccatac 18

<210> 19

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 19

tccagtaagc agttcagt 18

<210> 20

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 20

agccattcct aaccagat 18

<210> 21

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 21

ttgaacttga tgatgtga 18

<210> 22

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 22

tatcttctcc tgtccatt 18

<210> 23

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 23

tcggtgagaa gcacagggtg 20

<210> 24

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 24

ggttgggatg ggtcagaagg 20

<210> 25

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 25

actctgcttc accttgtc 18

<210> 26

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 26

acctgttgct gctatgtt 18

<210> 27

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 27

accataacac catcatcac 19

<210> 28

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 28

ggaagaacca gacattgaa 19

<210> 29

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 29

gacaacaact acttcagg 18

<210> 30

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 30

tactcgttca ctatgcta 18

<210> 31

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 31

gtccgcttgt tcttccat 18

<210> 32

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 32

gccgatgcct actaagtg 18

<210> 33

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 33

agactgttag ttgaagtagc ata 23

<210> 34

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 34

agaatccaga ggcaataagt t 21

<210> 35

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 35

gttacaggaa gaagttgac 19

<210> 36

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 36

aaggtggatg gcatatag 18

<210> 37

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 37

gcaagaagaa gtcgtaat 18

<210> 38

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 38

aactgaagaa cacggata 18

<210> 39

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 39

tataacacga acaaggta 18

<210> 40

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 40

atgcttacac tatcaatg 18

<210> 41

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 41

tacaatagga gcatcaac 18

<210> 42

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 42

catactgaca ttcggatt 18

<210> 43

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 43

gcggagaagg tatgtatt 18

<210> 44

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 44

atgcttatgc tatcaatgga 20

<210> 45

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 45

ctattcgtgg cattcgtat 19

<210> 46

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 46

cagtgttggt ggattgat 18

<210> 47

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 47

agaagatgat ggaactgaa 19

<210> 48

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 48

cgagatggct acttgtat 18

<210> 49

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 49

atgcttcctt gataacac 18

<210> 50

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 50

gattctgagt gacattcg 18

Claims

1.赤霉素用于制备促进秋葵AePAL1、AePAL2、AePAL3中的任意一种或多种基因表达制剂的用途，其特征在于，所述秋葵为黄秋葵，所述AePAL1、AePAL2、AePAL3的序列分别如SeqID NO.1、Seq ID NO.2、Seq ID NO.3所示；所述赤霉素的质量百分含量为0.001％～0.05％。

2.赤霉素用于制备抑制秋葵AePPO1和/或AePPO2基因表达制剂的用途，其特征在于，所述秋葵为黄秋葵，所述AePPO1、AePPO2的序列分别如Seq ID NO.4、Seq ID NO.5所示；所述赤霉素的质量百分含量为0.001％～0.05％。

3.赤霉素用于制备抑制秋葵AePOD1、AePOD2、AePOD3、AePOD4中的任意一种或多种基因表达制剂的用途，其特征在于，所述秋葵为黄秋葵，所述AePOD1、AePOD2、AePOD3、AePOD4的序列分别如Seq ID NO.6、Seq ID NO.7、Seq ID NO.8、Seq ID NO.9所示；所述赤霉素的质量百分含量为0.001％～0.05％。

4.赤霉素用于制备抑制秋葵AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14中的任意一种或多种基因表达制剂的用途，其特征在于，所述秋葵为黄秋葵，所述AeLAC9-1、AeLAC9-2、AeLAC9-3、AeLAC9-4、AeLAC9-5、AeLAC12、AeLAC14的序列分别如Seq ID NO.10、Seq ID NO.11、Seq ID NO.12、Seq ID NO.13、Seq ID NO.14、Seq IDNO.15、Seq ID NO.16所示；所述赤霉素的质量百分含量为0.001％～0.05％。