CN114432360A - 清脂康在制备用于治疗、预防、缓解或抵抗骨丢失的药物或组合物中的应用 - Google Patents

清脂康在制备用于治疗、预防、缓解或抵抗骨丢失的药物或组合物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及清脂康在制备用于治疗、预防、缓解或抵抗骨丢失的药物或组合物中的应用，本发明的清脂康能够治疗、预防、缓解或抵抗骨丢失，能够显著增加去卵巢小鼠的骨小梁面积百分比、骨小梁厚度和骨小梁数量，且骨小梁分离度明显降低，可以预防、缓解或和抵抗卵巢切除或雌性激素不足引起的骨丢失，本发明的清脂康是一种有天然原材料制备得到的食品级组合物，疗效显著，成本低廉，无毒副作用的治疗、预防、缓解或抵抗骨丢失的天然组合物，开发后可以是一种治疗、预防、缓解或抵抗骨丢失的试剂、药物、保健品或食品。

Description

清脂康在制备用于治疗、预防、缓解或抵抗骨丢失的药物或组 合物中的应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及清脂康在制备用于治疗、预防、缓解或抵抗骨丢失的药物或组合物中的应用。
背景技术
骨作为运动系统的重要组成部分，为机体提供结构依托及保护作用，参与体内造血、钙代谢、内分泌调节等生理过程。骨重建贯穿人的一生，并且大部分骨代谢相关疾病均影响骨重建过程。正常机体的骨重建依赖于破骨细胞(Osteoclast)介导的骨吸收与成骨细胞(Osteoblast)介导的骨形成直接的动态平衡，两者之间失平衡将引起骨过度形成、硬化相关疾病或骨形成不全、过度吸收相关疾病。
骨丢失是造成骨质疏松症的重要原因之一，骨质疏松症造成的严重后果是骨质疏松性骨折的发生，其危害巨大，是老年患者致残和致死的主要原因之一。基于影像学的流行病学调查显示，我国50岁以上女性椎体骨折患病率约为15％，50岁以后椎体骨折的患病率随增龄而渐增，80岁以上的老年女性骨质疏松性椎体骨折发生率可高达36.6％；而髋部骨折是最严重的骨质疏松性骨折，研究显示发生髋部骨折后1年之内，20％患者会死于各种并发症，约50％患者致残，生活质量明显下降，给家庭和社会造成沉重的负担。此外，破骨细胞及其介导的骨吸收不仅在骨质疏松症发生发展过程中发挥着重要作用，而且在诸如假体周围骨溶解、风湿性骨关节炎、肿瘤骨转移等骨量丢失疾病中也至关重要，是防治该类疾病的重要靶点。
目前骨丢失的预防主要为调整生活方式、钙剂、维生素D，其治疗主要集中在抑制破骨细胞介导的骨吸收或(和)促进成骨细胞介导的骨形成。双膦酸盐类药物是目前临床上应用最为广泛的抗骨质疏松症药物，与骨骼羟磷灰石的亲和力高，能够特异性结合到骨重建活跃的骨表面，抑制破骨细胞功能从而抑制骨吸收。然而，双膦酸盐类药物的应用存在胃肠道不良反应、一过性“流感样”症状、肾脏毒性及发生下颌骨坏死、非典型股骨骨折的危险。降钙素、雌激素受体调节剂(雷洛昔芬)、绝经激素治疗、甲状旁腺素类似物(特立帕肽)以及RANKL单抗(狄诺塞麦)等抗骨质疏松药物都有不同的适应症、用法、用量、副作用，且部分药物价格较高而难以被广泛应用。因此，一种新的无副作用的能够抵抗骨丢失的新药物显得尤为重要，是有效减少骨丢失，降低骨质疏松发生率的有效手段。
发明内容
为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供清脂康在制备用于治疗、预防、缓解或抵抗骨丢失的药物或组合物中的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一、本发明提供了清脂康在制备用于治疗、预防、缓解或抵抗骨丢失的药物或组合物中的应用。
二、本发明提供了清脂康在制备用于缓解或抵抗骨丢失的保健品中的应用。
三、本发明提供了清脂康在制备用于缓解或抵抗骨丢失的功能食品中的应用。
优选的，所述清脂康包含以下原料：紫苏油，维生素E，明胶，甘油，纯化水。
更为优选的，所述清脂康包含以下重量份的原料：紫苏油450-550份，维生素E0.1-0.2份，明胶220-240份，甘油85-95份，纯化水220-240份。
所述的药物或组合物的剂型为胶囊剂、口服制剂或微囊制剂，包含清脂康。
所述的药物或组合物的给药剂量为1-200mg/kg每天。
本发明的有益效果在于：本发明的清脂康能够治疗、预防、缓解或抵抗骨丢失，能够显著增加去卵巢小鼠的骨小梁面积百分比、骨小梁厚度和骨小梁数量，且骨小梁分离度明显降低，可以预防、缓解或和抵抗卵巢切除或雌性激素不足引起的骨丢失，从而降低骨质疏松的发生率，本发明的清脂康是一种有天然原材料制备得到的食品级组合物，疗效显著，成本低廉，无毒副作用的治疗、预防、缓解或抵抗骨丢失的天然组合物，开发后可以是一种治疗、预防、缓解或抵抗骨丢失的试剂、药物、保健品或食品。
下面结合附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
附图说明
图1是本发明的假手术对照+蒸馏水组小鼠胫骨上段骨切片(4μm×12.5)计量学表象图；
图2是本发明的去卵巢模型+蒸馏水组小鼠胫骨上段骨切片(4μm×12.5)计量学表象图；
图3是本发明的去卵巢模型+雌二醇(大豆油溶)组小鼠胫骨上段骨切片(4μm×12.5)计量学表象图；
图4是本发明的去卵巢模型+大豆油组小鼠胫骨上段骨切片(4μm×12.5)计量学表象图；
图5是本发明的去卵巢模型+紫苏籽油组小鼠胫骨上段骨切片(4μm×12.5)计量学表象图；
图6是本发明的去卵巢模型+清脂康组小鼠胫骨上段骨切片(4μm×12.5)计量学表象图。
具体实施方式
为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例及附图1-图6对本发明作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。
本申请采用小鼠进行对比实验。
实验小鼠及其饲养条件：清洁级白色昆明小鼠60只，雌性，体重25-30g，鼠龄17周，在普通级动物饲养房内饲养，动物于实验前适应环境1周，普通颗粒饲料喂养，饮清洁自来水，每笼10只。动物来源于南方医科大学动物中心，合格证号SYXK(粤)2015-0147，实验时做去卵巢手术，建立动物模型。
将60只实验小鼠随机分为六组，每组10只，分别为：
(1)、假手术对照组(CON)：做假手术，术后小鼠按0.1ml/10g灌胃蒸馏水给药，对应附图1计量学表象图。
(2)、去卵巢模型组(MOD)：做双侧去卵巢手术，术后小鼠按0.1ml/10g灌胃蒸馏水给药，对应附图2计量学表象图。
(3)、去卵巢模型+雌二醇组(E2)：做双侧去卵巢手术，术后小鼠按0.1ml/10g灌胃大豆油雌二醇(溶解于大豆油，每千克大豆油含雌二醇0.15mg)给药，对应附图3计量学表象图。
(4)、去卵巢模型+大豆油组(S-Oil)：做双侧去卵巢手术，术后每天给予大豆油0.1ml/10g，对应附图4计量学表象图。
(5)、去卵巢模型+紫苏籽油组(P-Oil)：做双侧去卵巢手术，术后小鼠按0.1ml/10g灌胃紫苏籽油给药，对应附图5计量学表象图。
(6)、去卵巢模型+清脂康高剂量组(Q-cap)：做双侧去卵巢手术，术后每天给予清脂康原药0.1ml/10g，对应附图6计量学表象图。
各组小鼠自由饮水和摄食，并连续灌胃给药10周。所有小鼠在处死前第13、14天和第3、4天皮下注射钙黄绿素(7mg·kg-1)各一次，进行体内荧光标记。动物每周称体重一次，并按照体重的变化来调整给药的剂量。实验结束，取右侧胫骨上段制成不脱钙骨切片，用于骨组织形态计量学研究。
小鼠体重观察：每周称小鼠体重一次，在实验结束前停止供应饲料喂养12h，称重，作为实验结束的最后体重。
六组小鼠胫骨上段骨切片骨组织形态计量学检测方法：
实验结束时，摘眼球取血以处死小鼠。取出右侧胫骨，置4％多聚甲醛中，24h后右侧胫骨用慢速据沿额状面锯开干骺端，暴露骨髓腔，于胫骨上端1/3处横行锯断胫骨，为胫骨上段。右侧胫骨上段进行脱水、透明、渗透，包埋，切片，染色，封片，制成不脱钙骨切片，以生长板下1mm到4mm为观察范围，测量松质骨骨组织形态计量学参数。用半自动的图象数字化仪直接测量出的参数后，根据国际通用公式进行计算分析，包括松质骨静态参数：骨小梁面积百分数(％Tb.Ar)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp)，动态参数：荧光周长百分率(％L.Pm)、骨矿化沉积率(MAR)及三种骨形成率指标(BFR/BS、BFR/BV、BFR/TV)的检测，并评价实验药物的疗效。
统计方法：实验结果用均数±标准差()表示，采用统计软件SPSS 24.0进行分析，组间比较用one-way ANOVA，P<0.05为差异有统计学意义。方差齐性时，采用Fisher leastsignificant difference(LSD)方法进行组间多重比较；方差不齐时，采用Dunnett T3进行组间多重比较。
体重观察：
以下为各组小鼠第0周、2周、4周、6周、8周、10周和11周体重的变化见表1：
Figure BDA0003510580960000051
Figure BDA0003510580960000061
表1
如上表所示，开始实验时，假手术对照+蒸馏水组(CON)，去卵巢模型+蒸馏水组(MOD)，去卵巢模型+雌二醇(大豆油溶解)组(E2)，去卵巢模型+大豆油组(S-Oil)，去卵巢模型+紫苏籽油组(P-Oil)，去卵巢模型+清脂康组(Q-cap)，各组间大鼠体重的组间差异无统计学意义。随着时间的增加，各组大鼠的体重而逐渐增加。实验结束时，假手术对照+蒸馏水组(CON)小鼠平均体重比实验前增加68.70％，去卵巢模型+蒸馏水组(MOD)小鼠平均体重比实验前增加54.32％，去卵巢模型+雌二醇(大豆油溶解)(E2)组小鼠平均体重比实验前增加70.47％，去卵巢模型+大豆油组(S-Oil)小鼠平均体重比实验前增加61.74％，去卵巢模型+紫苏籽油组(P-Oil)小鼠平均体重比实验前增加77.24％，去卵巢模型+清脂康组(Q-cap)小鼠平均体重比实验前增加62.33％。
小鼠胫骨上段骨切片骨组织形态计量学观察：
见图1：假手术对照+蒸馏水组(CON)，该组的动物骨小梁结构紧密、连续性好、粗细较均匀。
见图2：去卵巢模型+蒸馏水组(MOD)，该组动物骨小梁结构明显细小、稀疏，个别呈结节状或钮扣状，出现了大片无骨小梁的骨髓区，由此可见，与假手术对照+蒸馏水组(CON)对比，双卵巢切除对于小鼠骨骼的骨流失影响较大，小鼠双卵巢切除后，雌性激素不足引起的骨丢失严重。
见图3：去卵巢模型+雌二醇组(E2)，该组动物的骨小梁较去卵巢模型+蒸馏水组增粗，增多，连续性有一定的恢复，由此可以看出去卵巢小鼠在进行卵巢切除手术后补充适量的雌性激素可以在一定程度上缓解或去卵巢小鼠的骨丢失情况。
见图4：去卵巢模型+大豆油组(S-Oil)，该组动物骨小梁结构明显细小、稀疏，个别呈结节状或钮扣状，出现了大片无骨小梁的骨髓区，因此，可以看出大豆油对于抵抗去卵巢小鼠骨流失无明显作用。
见图5：去卵巢模型+紫苏籽油组(P-Oil)，该组动物骨小梁结构明显细小、稀疏，个别呈结节状或钮扣状，出现了大片无骨小梁的骨髓区，但在小梁骨的数量、厚度、以及分布上均去卵巢模型+大豆油组(S-Oil)有一定的改善。
见图6：去卵巢模型+清脂康高剂量组(Q-cap)，该组动物的骨小梁分布较均匀，排列有序，连续性比较好，在小梁骨的数量、厚度、以及分布上均较去卵巢模型+紫苏籽油组(P-Oil)有一定的改善。
小鼠胫骨上段形态计量学静态参数如下：
各实验组大鼠胫骨上段形态计量学静态参数％Tb.Ar(骨小梁面积百分数)、Tb.Th(骨小梁厚度μm)、Tb.N(骨小梁数量#/mm)和Tb.Sp(骨小梁分离度μm)的变化见下表2：
Group ％Tb.Ar(％) Tb.Th(μm) Tb.N(#/mm) Tb.Sp(μm)
CON 21.34±8.72 49.06±11.25 4.21±0.95 201.48±71.34
MOD 4.94±2.95<sup>aa</sup> 35.84±9.03<sup>aa</sup> 1.35±0.64<sup>aa</sup> 874.16±438.02<sup>aa</sup>
E2 12.58±7.27<sup>ab</sup> 42.65±8.90 2.78±1.12<sup>aabb</sup> 379.56±186.86<sup>aabb</sup>
S-Oil 4.05±2.39<sup>aac</sup> 38.88±7.13<sup>a</sup> 1.12±0.72<sup>aacc</sup> 1303.82±900.05<sup>aac</sup>
P-Oil 5.75±3.35<sup>aac</sup> 38.92±7.27<sup>a</sup> 1.55±0.97<sup>aac</sup> 942.67±674.54<sup>aac</sup>
Q-Cap 7.33±6.24<sup>aa</sup> 38.69±9.94<sup>a</sup> 1.79±1.15<sup>aa</sup> 705.39±376.99<sup>aac</sup>
由表2可知，与假手术对照+蒸馏水组(CON)相比，去卵巢模型+蒸馏水组(MOD)％Tb.Ar、Tb.Th、Tb.N分别降低了76.85％(P<0.01)、26.95％(P<0.01)和67.93％(P<0.01)，Tb.Sp增加了333.87％(P<0.01)。
与去卵巢模型+大豆油组(S-Oil)相比，去卵巢模型+雌二醇(大豆油溶解)组(E2)的％Tb.Ar、Tb.N分别增加了210.62％(P<0.05)和148.21％(P<0.01)，Tb.Sp增加了70.89％(P<0.05)。
与去卵巢模型+蒸馏水组(MOD)相比，去卵巢模型+清脂康组(Q-cap)的％Tb.Ar、Tb.Th、Tb.N分别增加了48.38％(P＞0.05)、7.95％(P＞0.05)和32.59％(P＞0.05)，Tb.Sp降低了19.31％(P＞0.05)。
由实验结果可知，去卵巢模型+蒸馏水组(MOD)骨小梁面积百分数、骨小梁厚度、骨小梁数量和骨形成率均显著降低，骨小梁分离度显著增加了，说明卵巢模型+蒸馏水组(MOD)小鼠骨丢失严重，出现典型的骨质疏松症状。
去卵巢模型+雌二醇组(E2)骨小梁数量显著增加，说明阳性药物雌二醇对去卵巢小鼠的骨丢失有明显的预防作用。
去卵巢模型+清脂康组(Q-cap)骨小梁面积百分数、骨小梁厚度、骨小梁数量均明显增加，骨小梁分离度明显降低；说明清脂康对去卵巢小鼠骨丢失有一定的抵抗作用，可以应用于治疗、预防、缓解或抵抗骨丢失的药物或组合物，能够有效抵抗骨丢失，从而有效降低骨质疏松的发生率。
上述实施例为本发明较佳的实现方案，除此之外，本发明还可以其它方式实现，在不脱离本发明构思的前提下任何显而易见的替换均在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.清脂康在制备用于治疗、预防、缓解或抵抗骨丢失的药物或组合物中的应用。
2.清脂康在制备用于缓解或抵抗骨丢失的保健品中的应用。
3.清脂康在制备用于缓解或抵抗骨丢失的功能食品中的应用。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述清脂康包含以下原料：紫苏油，维生素E，明胶，甘油，纯化水。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述清脂康包含以下重量份的原料：紫苏油450-550份，维生素E 0.1-0.2份，明胶220-240份，甘油85-95份，纯化水220-240份。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的药物或组合物的剂型为胶囊剂、口服制剂或微囊制剂。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的药物或组合物的给药剂量为1-200mg/kg每天。
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