CN114403100A - 一种从小菜蛾体内分离收集菜蛾盘绒茧蜂卵、幼虫的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从小菜蛾体内分离收集菜蛾盘绒茧蜂卵、幼虫的方法，包括以下步骤：（1）将一个PP杯上部剪去作为半饲养杯，放入一片定性滤纸，放入十字花科叶片以及2‑3龄小菜蛾幼虫；（2）取另一个PP杯倒置作为寄生杯，半饲养杯放入寄生杯中，在内顶部放置蘸有水和蜂蜜的棉花，并引入单只已交配的菜蛾盘绒茧雌蜂；（3）8h后将半饲养杯取出，将半饲养杯放入完整饲养杯中，放入十字花科叶片后盖上杯盖继续饲养；（4）根据需求取出并解剖对应发育阶段的小菜蛾，用1ml的一次性胶头滴管或1ml移液枪吸取菜蛾盘绒茧蜂卵或幼虫。本发明利用半饲养杯整体移动小菜蛾，减少人为机械损伤与干扰，可获得90%以上寄生率的寄主；解剖效率高，虫态完整度高。
Description
技术领域
本发明涉及昆虫饲养领域，特别是一种从小菜蛾体内分离收集菜蛾盘绒茧蜂卵、幼虫的方法。
背景技术
菜蛾盘绒茧蜂是害虫小菜蛾的寄生性天敌，其从卵到幼虫的历期在寄主小菜蛾体内发育完成，且雌蜂产卵存在假寄生现象，这种生物学特征为实验者观察和研究菜蛾盘绒茧蜂幼虫增加了难度。茧蜂卵、幼虫的收集可为寄生蜂寄生率的计算以及其在寄主小菜蛾体内的发育进程及状态提供实验材料，从而进一步推进对菜蛾盘绒茧蜂卵及幼虫虫态的研究。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的是提供一种可减少人为机械损伤与干扰，获得高寄生率寄主的从小菜蛾体内分离收集菜蛾盘绒茧蜂卵、幼虫的方法，并且解剖效率高，虫态完整度高。
本发明采用以下方案实现：一种从小菜蛾体内分离收集菜蛾盘绒茧蜂卵、幼虫的方法，包括以下步骤：（1）取一个PP杯，将其上部剪去作为半饲养杯，在半饲养杯内放入一片定性滤纸，同时放入适量十字花科叶片以及多只2-3龄小菜蛾幼虫；（2）取另一个PP杯倒置作为寄生杯，紧接着将步骤（1）中半饲养杯放入寄生杯中，并用杯盖封住寄生杯底部组成寄生蜂产卵杯，在寄生杯内顶部放置蘸有水和蜂蜜的棉花，并引入单只已交配的菜蛾盘绒茧雌蜂；（3）达到预定时间后将半饲养杯取出，取又一个PP杯正置作为完整饲养杯，将半饲养杯放入完整饲养杯中，放入适量十字花科叶片后盖上杯盖继续饲养；（4）饲养过程中根据需求取出并解剖对应发育阶段的小菜蛾，用1ml的一次性胶头滴管或1ml移液枪吸取菜蛾盘绒茧蜂卵或幼虫。
进一步的，步骤（4）中小菜蛾的解剖过程：a、将小菜蛾依次置于装有无菌水、75%酒精、无菌水的无菌培养皿中各30s进行体表消毒，最后用定性滤纸吸干小菜蛾体表残留水分；b、在体式显微镜下，将消毒后的小菜蛾单只浸入1×PBS缓冲液中，用解剖镊掐掉小菜蛾尾部和头部，固定住小菜蛾上部位置保持不动，再夹住尾部露出的小菜蛾肠道，将小菜蛾肠道拉出并弃掉；接着，用镊子从小菜蛾中部位置顺着尾部的方向轻轻挤压至尾部，此时菜蛾盘绒茧蜂卵或幼虫会随绿色的血淋巴流出。
进一步的，步骤（1）和步骤（3）中十字花科叶片用湿棉花包裹根部，外部再包一层锡箔纸进行保鲜。
进一步的，步骤（3）中完整饲养杯的杯盖中心挖空，并用纱网布遮盖住挖空处。
进一步的，所有PP杯侧壁均用尖锐物均匀地扎出若干小孔。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明先是获取已寄生状态的小菜蛾，再进行菜蛾盘绒茧蜂卵或幼虫的分离收集；该方法利用半饲养杯整体移动小菜蛾，减少人为机械损伤与干扰，可获得90%以上寄生率的寄主；在尽量不破坏寄生蜂卵、幼虫形态结构的前提下，可在1min内快速收集菜蛾盘绒茧蜂的卵及幼虫，解剖效率高，虫态完整度高。
为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下将通过具体实施例和相关附图，对本发明作进一步详细说明。
附图说明
图1是本发明实施例步骤（1）示意图；
图2是本发明实施例步骤（2）示意图；
图3是本发明实施例步骤（3）示意图；
图4是本发明实施例步骤（3）中完整饲养杯的杯盖示意图；
图5是本发明实施例步骤（4）获得的菜蛾盘绒茧蜂卵显微镜下示意图；
图6是本发明实施例步骤（4）获得的小体型菜蛾盘绒茧蜂卵显微镜下示意图。
图7是本发明实施例步骤（4）获得的大体型菜蛾盘绒茧蜂卵显微镜下示意图。
图中标号说明：1-半饲养杯、2-寄生杯、3-完整饲养杯、4-定性滤纸、5-十字花科叶片、6-完整饲养杯的杯盖、7-纱网布。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
如图1~7所示，一种从小菜蛾体内分离收集菜蛾盘绒茧蜂卵、幼虫的方法，包括以下步骤：（1）取一个PP杯，将其上部剪去作为半饲养杯1，在半饲养杯1内放入一片定性滤纸4，同时放入适量十字花科叶片5以及多只2-3龄小菜蛾幼虫，小菜蛾幼虫数量为20只左右；（2）取另一个PP杯倒置作为寄生杯2，紧接着将步骤（1）中半饲养杯放入寄生杯2中，并用杯盖封住寄生杯底部组成寄生蜂产卵杯，在寄生杯内顶部放置蘸有水和蜂蜜的棉花，并引入单只已交配的菜蛾盘绒茧雌蜂；（3）达到预定时间（约8h）后将半饲养杯取出，取又一个PP杯正置作为完整饲养杯3，将半饲养杯放入完整饲养杯3中，放入适量十字花科叶片后盖上杯盖继续饲养；同时在寄生杯中菜蛾盘绒茧雌蜂存活的前提下，可以在寄生杯内继续放入步骤（1）中的半饲养杯，可持续获得已寄生的小菜蛾幼虫，直至该菜蛾盘绒茧雌蜂死亡；（4）饲养过程中根据需求取出并解剖对应发育阶段的小菜蛾，用1ml的一次性胶头滴管或1ml移液枪吸取菜蛾盘绒茧蜂卵或幼虫。
在本实施例中，步骤（4）中小菜蛾的解剖过程：a、将小菜蛾依次置于装有无菌水、75%酒精、无菌水的无菌培养皿中各30s进行体表消毒，最后用定性滤纸吸干小菜蛾体表残留水分；b、在体式显微镜下，将消毒后的小菜蛾单只浸入1×PBS缓冲液中，用解剖镊掐掉小菜蛾尾部和头部，固定住小菜蛾上部位置保持不动，再夹住尾部露出的小菜蛾肠道，将小菜蛾肠道拉出并弃掉；接着，用镊子从小菜蛾中部位置顺着尾部的方向轻轻挤压至尾部，此时菜蛾盘绒茧蜂卵或幼虫会随绿色的血淋巴流出。
本方法分为两步，一是获取已寄生状态的小菜蛾（即步骤（1）~（3）），该方法优势在于寄生后替换新的未寄生小菜蛾的半饲养杯，尽可能利用寄生蜂的寄生潜能，同时利用半饲养杯整体移动小菜蛾，减少人为机械损伤与干扰，该方法可获得90%以上寄生率的寄主；二是寄生蜂卵、幼虫的分离收集（即步骤（4））；分离过程在尽量不破坏寄生蜂卵、幼虫形态结构的前提下，可在1min内快速收集菜蛾盘绒茧蜂的卵及幼虫，解剖效率高，虫态完整度高。
在本实施例中，步骤（1）和步骤（3）中十字花科叶片用湿棉花包裹根部，外部再包一层锡箔纸进行保鲜。
在本实施例中，步骤（3）中完整饲养杯的杯盖6中心挖空，并用纱网布7遮盖住挖空处。
在本实施例中，所有PP杯侧壁均用尖锐物均匀地扎出若干小孔。
在本实施例中，步骤（2）中棉花可以利用胶带固定在寄生杯内顶部，也可以在寄生杯内顶部挖空将棉花塞在孔中。
在本实施例中，步骤（2）中已交配菜蛾盘绒茧雌蜂是利用菜蛾盘绒茧蜂的雌雄虫以1:1比例置于养虫笼内24h来获得的。
在本实施例中，所有PP杯均为带盖透明PP杯，上口径为12.0cm，下口径为8.0cm，杯高为15.5cm，容量为1000ml；步骤（1）半饲养杯不需要使用杯盖，将PP杯底部以上5cm处剪开，保留下半部分，即为半饲养杯。
上述本发明所公开的任一技术方案除另有声明外，如果其公开了数值范围，那么公开的数值范围均为优选的数值范围，任何本领域的技术人员应该理解：优选的数值范围仅仅是诸多可实施的数值中技术效果比较明显或具有代表性的数值。由于数值较多，无法穷举，所以本发明才公开部分数值以举例说明本发明的技术方案，并且，上述列举的数值不应构成对本发明创造保护范围的限制。
本发明如果公开或涉及了互相固定连接的零部件或结构件，那么，除另有声明外，固定连接可以理解为：能够拆卸地固定连接( 例如使用螺栓或螺钉连接)，也可以理解为：不可拆卸的固定连接(例如铆接、焊接)，当然，互相固定连接也可以为一体式结构( 例如使用铸造工艺一体成形制造出来) 所取代(明显无法采用一体成形工艺除外)。
另外，上述本发明公开的任一技术方案中所应用的用于表示位置关系或形状的术语除另有声明外其含义包括与其近似、类似或接近的状态或形状。
本发明提供的任一部件既可以是由多个单独的组成部分组装而成，也可以为一体成形工艺制造出来的单独部件。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (5)
1.一种从小菜蛾体内分离收集菜蛾盘绒茧蜂卵、幼虫的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）取一个PP杯，将其上部剪去作为半饲养杯，在半饲养杯内放入一片定性滤纸，同时放入适量十字花科叶片以及多只2-3龄小菜蛾幼虫；（2）取另一个PP杯倒置作为寄生杯，紧接着将步骤（1）中半饲养杯放入的寄生杯中，并用杯盖封住寄生杯底部组成寄生蜂产卵杯，在寄生杯内顶部放置蘸有水和蜂蜜的棉花，并引入单只已交配的菜蛾盘绒茧雌蜂；（3）达到预定时间后将半饲养杯取出，取又一个PP杯正置作为完整饲养杯，将半饲养杯放入完整饲养杯中，放入适量十字花科叶片后盖上杯盖继续饲养；（4）饲养过程中根据需求取出并解剖对应发育阶段的小菜蛾，用1ml的一次性胶头滴管或1ml移液枪吸取菜蛾盘绒茧蜂卵或幼虫。
2.根据权利要求1所述的从小菜蛾体内分离收集菜蛾盘绒茧蜂卵、幼虫的方法，其特征在于：步骤（4）中小菜蛾的解剖过程：a、将小菜蛾依次置于装有无菌水、75%酒精、无菌水的无菌培养皿中各30s进行体表消毒，最后用定性滤纸吸干小菜蛾体表残留水分；b、在体式显微镜下，将消毒后的小菜蛾单只浸入1×PBS缓冲液中，用解剖镊掐掉小菜蛾尾部和头部，固定住小菜蛾上部位置保持不动，再夹住尾部露出的小菜蛾肠道，将小菜蛾肠道拉出并弃掉；接着，用镊子从小菜蛾中部位置顺着尾部的方向轻轻挤压至尾部，此时菜蛾盘绒茧蜂卵或幼虫会随绿色的血淋巴流出。
3.根据权利要求1所述的从小菜蛾体内分离收集菜蛾盘绒茧蜂卵、幼虫的方法，其特征在于：步骤（1）和步骤（3）中十字花科叶片用湿棉花包裹根部，外部再包一层锡箔纸进行保鲜。
4.根据权利要求1所述的从小菜蛾体内分离收集菜蛾盘绒茧蜂卵、幼虫的方法，其特征在于：步骤（3）中完整饲养杯的杯盖中心挖空，并用纱网布遮盖住挖空处。
5.根据权利要求1所述的从小菜蛾体内分离收集菜蛾盘绒茧蜂卵、幼虫的方法，其特征在于：所有PP杯侧壁均用尖锐物均匀地扎出若干小孔。
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