CN114395625B - Copa在制备子宫颈癌诊断生物标记物和/或子宫颈癌药物开发中的应用 - Google Patents

Copa在制备子宫颈癌诊断生物标记物和/或子宫颈癌药物开发中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了COPA在制备子宫颈癌诊断生物标记物和/或子宫颈癌药物开发中的应用。本发明是基于发明人采用综合蛋白组学分析策略(基于LC‑MS的非靶向蛋白质组学结合基于PRM的靶向蛋白质组学)，首次鉴定COPA是子宫颈癌的生物标志物，并经过IHC染色的再次验证；并且，肿瘤组织中COPA染色强度与患者的FIGO分期有关，COPA呈中‑强阳性染色者预后差。将COPA应用于制备子宫颈癌诊断生物标记物，可对患者进行精准分类。发明人还首次观察到靶向下调子宫颈癌细胞内COPA蛋白显著抑制癌细胞的侵袭性，确定COPA是子宫颈癌的干预靶点。将COPA应用于子宫颈癌药物开发，对高危患者实施分子靶向治疗，可改善预后。

Description

COPA在制备子宫颈癌诊断生物标记物和/或子宫颈癌药物开 发中的应用
技术领域
本发明属于医学生物技术领域，特别涉及COPA在制备子宫颈癌诊断生物标记物和/或子宫颈癌药物开发中的应用。
背景技术
子宫颈癌是全球发病率第四的妇科肿瘤，在20-39岁妇女常见肿瘤中子宫颈癌已位列第二。子宫颈腺癌(Adenocarcinoma，AC)和子宫颈鳞状细胞癌(Squamous cellcarcinoma，SCC)是子宫颈癌的两种主要病理类型。世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)公布的数据显示：2020年子宫颈癌全球新发病例数约为60万，死亡人数约为34万，其中我国的子宫颈癌的新发病例数约为11万，死亡人数约为6万，均居妇科肿瘤之首。虽然，子宫颈液基薄层细胞学检查和高危型人乳头瘤病毒DNA检测已应用于子宫颈癌的早期筛查，但是发展中国家和欠发达地区的子宫颈癌发病率仍然惊人地上升。令人担忧的是，子宫颈癌的病理类型和年龄构成也在发生显著的变化，表现为更具侵袭性的子宫颈腺癌较子宫颈鳞状细胞癌发病率增加更为明显，且近一半的子宫颈癌新发病例为小于50岁的妇女。今年1月10日在北京发布的中国首次多中心大样本子宫颈癌筛查随机对照临床研究结果显示：我国宫颈癌死亡率已占到全球的20％。因此，提高子宫颈癌的早期诊断率及治疗效率迫在眉睫。
一直以来，子宫颈癌的FIGO(International Federation of Gynecology andObstetrics)分期是基于妇科检查辅以影像学评估的方法，临床医生在术前难以准确预测患者复发的病理危险因素。近几十年来子宫颈癌的治疗研究进展缓慢，目前的子宫颈癌治疗仍然以手术治疗为主、辅以放化疗，分子靶向治疗将对原有的子宫颈癌治疗模式产生巨大的影响。理想的生物标记物不仅有助于肿瘤的早期诊断和预后判断，对于制定肿瘤的精准治疗方案也至关重要。用高效的诊断生物标志物对预后不同的子宫颈癌患者进行准确分类，实施个体化的分子靶向治疗将使更多的子宫颈癌患者从中受益。迄今为止，子宫颈癌尚无基于生物标记物的早期诊断和预后判断方法。因此，制备子宫颈癌诊断生物标记物以及研发子宫颈癌的分子靶向药物是全球健康治理中亟待解决的问题，该问题的解决具有重要的临床价值和深远的社会意义。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供衣被蛋白亚单位α(coatomer protein subunit alpha，COPA)在制备子宫颈癌诊断生物标记物和/或子宫颈癌药物开发中的应用。
本发明的另一目的在于提供一种用于诊断子宫颈癌的试剂盒。
本发明的目的通过下述技术方案实现：COPA在制备子宫颈癌诊断生物标记物和/或子宫颈癌药物开发中的应用，是基于本发明发明人首次采用基于液相色谱-质谱联用(Liquid chromatography–mass spectrometry,LC-MS)的定量蛋白质组学全面分析子宫颈癌组织蛋白表达谱，结合基于平行反应监测(Parallel Reaction Monitoring,PRM)的靶向蛋白质组学精准分析的策略，发现并验证了COPA为子宫颈癌的生物标记物，继而在大量临床样本中用免疫组织化学染色(immunohistochemistry，IHC)的方法再次验证了蛋白组学分析的结果。同时，还发现了子宫颈癌患者的肿瘤组织中COPA的IHC染色强度与患者的FIGO分期有关，肿瘤组织中COPA呈中-强阳性染色的患者预后差。最后，本发明发明人首次在体外观察到靶向下调子宫颈癌细胞(SiHa细胞和HeLa细胞)内COPA蛋白能显著抑制子宫颈癌细胞的侵袭性，所提出的技术方案。将COPA应用于制备子宫颈癌诊断生物标记物和/或子宫颈癌药物开发中，可实现对子宫颈癌患者的早期诊断和精准分类，促进子宫颈癌患者的精准个体化分子靶向治疗。
一种用于诊断子宫颈癌的试剂盒，包括用于定量检测待测样本中COPA的试剂。
所述的试剂优选包括用于COPA实时荧光定量PCR的引物对和探针，或是用于COPA免疫检测的抗体。
所述的引物对和探针用于对COPA mRNA进行定量，从而能依据衣被蛋白亚单位α表达量对子宫颈癌进行早期诊断和预后判断。
所述的用于免疫检测的抗体可与COPA特异性结合，对COPA进行准确定量。
所述的子宫颈癌药物是能用于预防子宫颈癌和/或能用于治疗子宫颈癌的药物。
所述的子宫颈癌药物是能特异性靶点抑制COPA基因转录或者蛋白表达的药物，或是能特异性靶点抑制COPA基因或者蛋白发挥活性的药物。
所述的能特异性靶点抑制COPA基因转录或者蛋白表达的药物为干扰COPA转录和翻译过程中的抑制剂。
所述的能特异性靶点抑制COPA基因或者蛋白发挥活性的药物为针对COPA的特异性抑制剂抗体和抑制剂，以及和针对COPA作用机制的信号通道下游底物的抗体或抑制剂。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
PRM是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术，能够对目标蛋白质、目标肽段进行选择性检测，从而实现对目标蛋白质/肽段的高质量精度定量。我们首次采用综合蛋白组学分析策略(基于LC-MS的非靶向蛋白质组学结合基于PRM的靶向蛋白质组学)研究子宫颈癌组织的蛋白质表达谱。我们在两阶段的定量蛋白质组学研究中，首次鉴定出COPA是子宫颈癌的生物标志物。为促进临床转化，我们又在大量子宫颈癌临床样本中进行了免疫组织化学染色，再次验证了定量蛋白质组学获得的结果。因此，COPA是子宫颈癌的生物标志物这一新发现已得到了双重验证，同时我们还发现子宫颈癌患者的肿瘤组织中COPA的IHC染色强度与FIGO分期有关，将COPA应用于制备子宫颈癌诊断生物标记物可将预后不同的患者进行准确分类。更重要的是，我们还采用子宫颈鳞癌细胞系SiHa细胞和子宫颈腺癌细胞系HeLa细胞，首次在体外观察到靶向下调子宫颈癌细胞内的COPA蛋白可显著抑制子宫颈癌细胞的侵袭性。因此，首次确认了COPA是子宫颈癌的干预靶点，COPA可应用于子宫颈癌药物开发。针对COPA的分子靶向药物可抑制子宫颈癌细胞的生长，可能对子宫颈癌的两种主要病理类型(SCC和AC)均有治疗效果。对高危子宫颈患者实施个体化分子靶向治疗，可改善患者的预后。
综上所述，本发明采用的多种实施方式，一致性地提供了COPA在制备子宫颈癌诊断生物标记物和/或子宫颈癌药物开发中的应用，将推动子宫颈癌的精准诊疗。
附图说明
图1是手术采集新鲜组织样本的定量蛋白质组学分析结果图；其中，A为韦恩图显示三组中定量蛋白质的数量；B为三组定量蛋白的二维主成分分析图；AC代表子宫颈腺癌组，SCC代表子宫颈鳞状细胞癌组，H代表正常宫颈对照组；C为反映子宫颈癌总体蛋白表达情况的火山图，横坐标代表差异倍数(Fold Change)log2,纵坐标表示显著性P值(-log10)，利用一定的筛选条件(Fold Change>1.2，P<0.05)，符合条件的为差异蛋白，位于图片上方，不符合条件的为无差异蛋白，位于图片下方；同时，图片上方左边散点为下调蛋白，图片上方右边散点为上调蛋白，COPA是上调蛋白之一。
图2是使用独特肽GITGVDLFGTTDAVVK对COPA蛋白进行靶向验证的质谱定量谱图。
图3是使用独特肽CPLSGACYSPEFK对COPA蛋白进行靶向验证的质谱定量谱图。
图4是子宫颈腺癌组的肿瘤组织、子宫颈鳞状细胞癌组的肿瘤组织和正常对照组的正常子宫颈组织中COPA蛋白相对表达水平的箱式图。
图5是大量子宫颈癌肿瘤组织石蜡样本切片中COPA蛋白免疫组化染色分析结果图；其中，A为子宫颈腺癌肿瘤组织中COPA蛋白各表达水平(评分0-3)的百分率；B为子宫颈鳞癌肿瘤组织中COPA蛋白各表达水平的百分率；C为I-III期子宫颈腺癌肿瘤组织中COPA蛋白各表达水平(评分0-3)的百分率；D为I-III期子宫颈鳞癌肿瘤组织中COPA蛋白各表达水平(评分0-3)的百分率；E为子宫颈癌患者的肿瘤组织中COPA呈中-强阳性染色者与肿瘤组织中COPA免疫组化呈弱阳性染色者的总生存率比较；F为用ROC曲线下的面积评价子宫颈癌患者的肿瘤组织中COPA呈中-强阳性染色对患者的预后有预测价值。
图6是通过RNAi技术特异性负性调控子宫颈癌SiHa细胞中COPA mRNA表达，靶向下调子宫颈癌细胞内COPA蛋白的蛋白条带图。
图7是通过RNAi技术特异性负性调控子宫颈癌HeLa细胞中COPA mRNA表达，靶向下调HeLa细胞内COPA蛋白的蛋白条带图。
图8是靶向下调子宫颈癌SiHa细胞内COPA蛋白后，细胞生长活力的统计结果图。
图9是靶向下调子宫颈癌HeLa细胞中COPA蛋白后，细胞生长活力结果统计图。
图10是靶向下调子宫颈癌SiHa细胞内COPA蛋白后，细胞克隆形成照片和统计结果图。
图11是靶向下调子宫颈癌HeLa细胞内COPA蛋白后，细胞克隆形成照片和统计结果图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述。应理解，这些实施例是用于说明本发明而不限于限制本发明的范围。实施例中采用的实施条件可以根据具体应用要求的条件做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。
具体实施方式可分为四大步骤：(一)基于LC-MS/MS的非靶向定量蛋白质组学对子宫颈癌进行全面蛋白质组学分析，筛选出子宫颈癌的候选生物标记物COPA；(二)基于PRM靶向定量蛋白质组学验证COPA为子宫颈癌的生物标记物；(三)用IHC方法在大量子宫颈癌样本中再次验证蛋白组学结果，并分析子宫颈癌组织中COPA的IHC染色强度与患者FIGO分期之间的关系；(四)体外观察靶向下调子宫颈癌细胞(SiHa细胞和HeLa细胞)内COPA蛋白显著抑制子宫颈癌细胞的侵袭性。
实施例1：
基于LC-MS/MS的非靶向定量蛋白质组学对子宫颈癌进行全面蛋白质组学分析，筛选出子宫颈癌的候选生物标记物COPA，包括以下操作步骤：
(1)随机选取2020-1-1至2020-5-31就医于广东省人民医院妇科，因子宫颈癌行手术治疗的患者，以同期就医于广东省人民医院妇科，因子宫平滑肌瘤行全子宫切除的患者为对照(术前子宫颈液基薄层细胞学检查和高危型人乳头瘤病毒DNA检测均为阴性)。AC代表子宫颈腺癌组，SCC代表子宫颈鳞状细胞癌组，H代表正常宫颈对照组(AC组n＝11、SCC组n＝12和H组n＝5)。手术中采集新鲜组织样本(子宫颈癌的肿瘤组织或正常宫颈组织)，所有的组织样本留取两份，一份立即置于液氮中送实验室保存，另一份立即置于10％福尔马林中保存送病理学检查。进行非靶向定量蛋白组学分析时，取出液氮中保存的新鲜冰冻组织样本，碾磨并提取组织蛋白，利用LC-MS/MS分析平台采用非标记定量方法对组织蛋白进行检测。
(2)对AC、SCC和H三组的所有定量蛋白质进行了二维主成分分析，揭示不同组间蛋白质丰度变化的一般模式。
结果如图1所示，图1A显示三组的新鲜组织样本中共鉴定出7685个蛋白质。在已鉴定的蛋白质中，AC组包含6982种蛋白质，SCC组中包含7178种蛋白质，H组包含5442种蛋白质。我们对6602个蛋白质进行了定量，图1B显示三组所有定量蛋白质二维主成分分析结果，使用每个样本与所有样本平均值的log2比率，观察到子宫颈癌组(包括AC和SCC)和正常对照组完全分离，提示子宫颈癌组织的蛋白表达谱和正常子宫颈组织的蛋白表达谱不同，可在子宫颈癌的特异性蛋白中发现候选生物标记物。图1C显示COPA是子宫颈癌组织与正常宫颈组织的差异蛋白之一，且COPA是子宫颈癌组织中的上调蛋白。因此，COPA可作为子宫颈癌的候选生物标记物。我们在实施例2中继续扩大临床样本，基于PRM靶向定量蛋白质组学对上述结果加以验证。
实施例2：
基于PRM的靶向定量蛋白质组学验证COPA为子宫颈癌的生物标记物，包括以下分析步骤：
基于PRM的靶向定量蛋白质组学，在手术采集的另外45例新鲜冰冻组织样本(AC组n＝19，SCC组n＝18，H组n＝8)中，分别基于GITGVDLFGTTDAVVK和CPLSGACYSPEFK独特肽靶向定量了COPA。通过比较COPA蛋白在三组中的表达水平，我们发现：COPA在AC组中的表达水平较H组中显著上调2.8倍(P＝0.000253)，COPA在SCC组中的表达水平较H组中显著上调2.07倍(P＝0.004)，COPA在AC组中的表达水平较SCC组中显著上调1.35倍(P＝0.0295)，说明COPA不仅可作为子宫颈癌的生物标记物，而且适用于子宫颈癌的两种病理类型(AC和SCC)。
结果如图2～4所示：图2和图3分别为使用独特肽GITGVDLFGTTDAVVK和CPLSGACYSPEFK对COPA进行靶向验证的质谱定量谱图；图4是子宫颈腺癌组的肿瘤组织、子宫颈鳞状细胞癌组的肿瘤组织和正常对照组的正常子宫颈组织中COPA蛋白相对表达水平的箱式图。
实施例3：
用IHC方法在大量子宫颈癌样本中再次验证蛋白组学结果，并分析子宫颈癌组织中COPA的IHC染色强度与患者FIGO分期之间的关系，包括以下分析步骤：
(1)馆藏子宫颈癌的肿瘤组织石蜡样本切片：随机选取2015-1-1至2020-12-31广东省人民医院病理科的馆藏子宫颈癌组织石蜡样本(AC组n＝85，SCC组n＝55)，切成5μm厚的薄片，贴在玻璃片上后置入切片漂烘温控仪中烤片15-30分钟。
(2)COPA免疫组织化学染色：COPA免疫组织化学染色所采用的兔COPA单克隆抗体购自Abcam公司(货号ab181224)，抗体浓度为1：100，按照免疫组化试剂盒(上海研谨生物科技有限公司)说明书进行染色。
(3)COPA免疫组化染色评分：所有染色切片均由三名经验丰富的病理学家在光学显微镜下观察，对子宫颈癌的肿瘤组织样本中的COPA染色强度进行评分，可分为阴性(Score 0)、弱阳性染色(Score 1)、中等阳性染色(Score 2)和强阳性染色(Score 3)。
(4)分析子宫颈癌肿瘤组织中COPA蛋白免疫组化染色强度与FIGO分期(2018FIGO子宫颈癌分期)的关系：
COPA在AC组的染色阳性率为98.8％。在I期中仅1.7％的为COPA阴性染色(评分0)，12.1％的为COPA弱阳性染色(评分1)，86.2％的为COPA中-强阳性染色(评分2-3)；全部II期及以上的子宫颈腺癌的肿瘤组织中COPA为中-强阳性染色(评分2-3)。
COPA在SCC组的染色阳性率为96.4％。在SCC患者中，I期者4.3％的为COPA阴性染色(评分0)，38.3％的为COPA弱阳性染色(评分1)，47.4％的为COPA中-强阳性染色(评分2-3)；II期均为COPA染色阳性，其中16.7％的为COPA弱阳性染色(评分1)，83.3％的为COPA中-强阳性染色(评分2-3)；III期患者均为COPA中-强阳性染色(评分2-3)。
上述实验结果如图5所示。图5A为COPA在AC组的染色分布情况：阴性、弱阳性、中等阳性和强阳性表达的百分率分别为1.2％、8.2％、52.9％和37.6％；图5B为COPA在SCC组的染色分布情况：阴性、弱阳性、中等阳性和强阳性表达的百分率分别为3.6％、34.5％、45.5％和16.4％；图5C为COPA在各期AC患者的肿瘤组织中的染色情况：I期患者肿瘤组织中COPA阴性、弱阳性、中-强阳性表达的百分率分别为1.7％、12.1％、86.2％，全部II期和III期患者的肿瘤组织中COPA均为阳性表达，且100％为中-强阳性表达；图5D为COPA在各期SCC患者肿瘤组织中的染色情况：I期患者肿瘤组织中COPA阴性、弱阳性、中-强阳性表达的百分率分别为4.3％、38.3％、57.4％，全部II期和III期患者肿瘤组织中COPA均为阳性表达，且II期中仅有16.7％的为COPA弱阳性染色，而83.3％的为COPA中-强阳性染色，全部III期患者肿瘤组织中COPA均为阳性表达，且100％为COPA中-强阳性染色；图5E为子宫颈癌组织中COPA染色强度与患者的生存分析，显示肿瘤组织中COPA为中-强阳性染色的子宫颈患者预后显著差于肿瘤组织中COPA为弱阳性染色的子宫颈癌患者(P＝0.0033)；图5F显示受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve，ROC曲线)下的面积(AreaUnder Curve,AUC)为0.626，提示子宫颈癌患者的肿瘤组织中COPA呈中-强阳性染色对子宫颈癌患者的不良预后有预测价值。
因此，我们通过免疫组织化学染色的方法，再次验证了定量蛋白质组学获得的结果，证实COPA可作为子宫颈癌的生物标记物并且有临床应用价值。
(5)子宫颈癌肿瘤组织中COPA呈中-强阳性染色是预测子宫颈癌预后不良的独立危险因素，包括以下操作步骤：
我们通过单变量Cox回归分析，结果表明：子宫颈癌患者的肿瘤组织中COPA呈中-强阳性(评分2-3)染色、FIGO分期和淋巴结转移是预测子宫颈癌患者预后的不利因素。然后，我们进行多变量Cox回归分析，子宫颈癌肿瘤组织中COPA呈中-强阳性(评分2-3)染色(HR＝8.946；95％可信区间：1.218-65.714，P＝0.031)和FIGO分期是预测子宫颈癌预后不良的独立危险因素。
实施例4：
体外观察靶向下调子宫颈癌细胞(SiHa细胞和HeLa细胞)内COPA蛋白显著抑制子宫颈癌细胞的侵袭性，包括以下操作步骤：
(1)细胞培养：SiHa细胞和HeLa细胞来自美国类型培养物收集保藏中心(ATCC)。SiHa细胞培养在添加有10％胎牛血清、100U/mL青霉素和100mg/L链霉素(Invitrogen)的MEM培养基(Gibco)中。HeLa细胞培养在添加10％胎牛血清、100U/mL青霉素和100mg/L链霉素(Invitrogen)的DMEM培养基(Gibco)中培养。
(2)RNA干扰(RNA interference，RNAi)：预先设计的针对COPA的特异性小干扰RNA(siRNA)(货号4390824)和对照siRNA的(货号4390846)均购自ThermoFisher Scientific公司。当细胞达到30％汇合度时，使用Lipofectamine 3000试剂(ThermoFisher Scientific)按照说明书将COPA siRNA(si-COPA)或对照siRNA(si-NC)导入SiHa细胞和HeLa细胞。我们通过蛋白质印迹法(Western blotting)观察两种子宫颈癌细胞中的COPA蛋白水平显著下调。
(3)蛋白质印迹法(Western blotting)：收集细胞，加入细胞裂解液后提取细胞蛋白，用Bradford Assay法定量蛋白质浓度。按《分子克隆实验指南》操作步骤进行Westernblotting。兔COPA单克隆抗体购自Abcam公司(货号ab181224),稀释度为1:1000，兔β-肌动蛋白多克隆抗体购自Abcam公司(货号ab8227),稀释度为1:2000。二抗为山羊抗兔IgG购自Abcam公司(货号ab6721)，稀释度为1:2000。使用Image J软件(NIH)对使用SuperSignalWest Pico化学发光底物(Thermo Fisher Scientific)产生的膜图像进行定量分析。
(4)细胞活性检测：CCK8试剂盒购自碧云天公司(货号C0042)，根据说明书测定细胞的生长活力，体外观察靶向下调子宫颈癌细胞内COPA蛋白水平对子宫颈癌细胞生长活力的影响
(5)克隆形成实验：按《分子克隆实验指南》操作步骤进行克隆形成实验，体外观察靶向下调子宫颈癌细胞内COPA蛋白对子宫颈癌细胞肿瘤生成能力的影响。
结果如图6-11所示，靶向下调两种子宫颈癌细胞内的COPA蛋白水平(SiHa细胞的结果见图6，HeLa细胞的结果见图7)，体外观察到两种子宫颈癌细胞生长活力和肿瘤形成能力均受到显著抑制(SiHa细胞的结果见图8和图9，HeLa细胞的结果见图10和图11)。
因此，这些结果确定了子宫颈癌细胞内的COPA蛋白是子宫颈癌的干预靶点，并且适用于子宫颈癌的两种主要病理类型。
实施例1～4的结果一致性地表明：COPA是子宫颈癌的生物标记物和干预靶点。子宫颈患者的肿瘤组织中COPA的IHC染色强度与FIGO分期有关，COPA呈中-强阳性染色为子宫颈癌预后不良的独立危险因素，靶向下调子宫颈癌细胞内COPA蛋白水平可显著抑制子宫颈癌细胞的侵袭性。因此，我们提出将COPA应用于制备子宫颈癌诊断生物标记物，可对子宫颈癌患者进行早期诊断和准确地预后判断，实现对预后不同的子宫颈癌患者的精准分类。更重要的是，靶向下调子宫颈癌细胞中的COPA蛋白，可显著抑制肿瘤生长。因此，将COPA应用于子宫颈癌的药物开发，对高危子宫颈癌患者进行个体化的分子靶向治疗，可遏制肿瘤生长，改善患者的预后。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
<110> 广东省人民医院
<120> COPA在制备子宫颈癌诊断生物标记物和/或子宫颈癌药物开发中的应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 独特肽
<400> 1
Gly Ile Thr Gly Val Asp Leu Phe Gly Thr Thr Asp Ala Val Val Lys
1 5 10 15
<210> 2
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 独特肽
<400> 2
Cys Pro Leu Ser Gly Ala Cys Tyr Ser Pro Glu Phe Lys
1 5 10

Claims (3)

1.COPA 抑制剂在制备治疗子宫颈癌药物中的应用，其特征在于：所述的COPA 抑制剂为siRNA。
2.检测COPA表达量的试剂在制备子宫颈癌诊断试剂盒中的应用。
3.根据权利要求2所述的检测COPA表达量的试剂在制备子宫颈癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于：所述的试剂包括用于COPA实时荧光定量PCR的引物对和探针，或是用于COPA免疫检测的抗体。
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