CN114395510B - 一株绿针假单胞菌对十字花科作物根肿病的防控应用 - Google Patents

一株绿针假单胞菌对十字花科作物根肿病的防控应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株绿针假单胞菌对十字花科作物根肿病的防控应用，属于微生物领域。本发明提供一种生防菌MCNB07405，其已在中国普通微生物菌种保藏与管理中心保藏，分类命名为绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)，保藏编号为CGMCC NO：24326，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路一号院三号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2022年1月17日。本发明经实验检测该生防菌具有磷酸酯酶、纤维素酶活性，证明其具备生防菌剂的潜力，并且该菌剂可以防治白菜根肿病，防治效果56.8％，表明该菌株或生防菌剂在十字花科作物根肿病的防治领域具有良好的市场应用前景。

Description

一株绿针假单胞菌对十字花科作物根肿病的防控应用
技术领域
本发明涉及微生物领域，特别是涉及一株绿针假单胞菌对十字花科作物根肿病的防控应用。
背景技术
十字花科是一个拥有模式植物(拟南芥)且具有重要经济价值的大科。十字花科作物根肿病是由芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassicae)引起的一种广泛发生的植物病害，可导致十字花科作物产量严重下降，甚至绝收；而且受到根肿菌污染的田间土壤将长期带菌，严重威胁着十字花科作物的可持续生产与产业发展。近年来，根肿病在欧洲、北美和亚洲等地区已经成为重要病害，在我国根肿病危害也日趋严重。根肿病主要危害寄主植物根部，发生初期地上部分的症状不明显，以后生长逐渐迟缓，且叶色逐渐淡绿，叶边变黄，植株矮化并表现缺水。随着病情发展，受感染的植株地下部主根、侧根和须根上形成数目和大小不等、呈指状、短棒状或球形的肿瘤。后期会出现龟裂、粗糙、变黄，最后整个受害根部组织出现腐烂，易被真菌、细菌等植物病原菌侵染。地上部分变黄萎蔫，严重时全株枯死。
化学防治是目前最常用的防治根肿病的方法，主要是通过土壤消毒和化学药剂的使用来达到防治目的。常用的化学药剂包括多菌灵、百菌清、五氯硝基苯、氟啶胺、氰霜唑等。但由于化学药剂价格昂贵，且施用方式不科学等出现化学药剂防效不稳定等缺点，未能有效降低根肿病的危害。此外，随着化学药剂的大量施用，也引起了环境、食品安全、药害、农药残留等多种问题。因此，许多研究更加关注根肿病的生物防治资源的发掘与利用，其中真核微生物有球状茎点霉(Phoma glomerata)、海洋中异参孢属真菌(Heteroconiumchaetospira)、原核微生物有枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)以及放线菌灰略红链霉菌(Streptomyces griseorube)及玫瑰小双孢菌(Microbispora rosea)等。但目前对于防治根肿病的微生物资源挖掘及菌剂开发等相关报道甚少，且利用绿针假单胞菌用于十字花科作物根肿病防治的尚未见国内外报道。
发明内容
本发明的目的是提供一株绿针假单胞菌对十字花科作物根肿病的防控应用，以解决上述现有技术存在的问题，该菌株制备的生防菌剂对根肿病的防治具有显著效果，为十字花科作物根肿病的防控提供了新的解决方案。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供一种生防菌MCNB07405，其已在中国普通微生物菌种保藏与管理中心保藏，分类命名为绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)，保藏编号为CGMCC NO：24326，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路一号院三号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2022年1月17日。
本发明还提供一种含有上述生防菌MCNB07405的生防菌剂。
本发明还提供一种制备上述生防菌剂的方法，将所述生防菌MCNB07405活化、培养后，所得菌液即为生防菌剂。
进一步地，所述活化条件为采用LB液体培养基，28℃震荡培养过夜。
进一步地，所述培养条件为采用改良的基本培养基，在28℃培养48h。
进一步地，所述改良的基本培养基包括：10.5g/L K2HPO4，4.5g/L KH2PO4，0.5g/L二水柠檬酸钠，1.0g/L酵母提取物，0.25g/L七水硫酸镁，2.0g/L蔗糖。
进一步地，所述菌液为利用PBS缓冲液将其制成OD600nm＝0.8的菌液。
本发明还提供一种上述生防菌MCNB07405或上述生防菌剂在防治十字花科作物根肿病中的应用。
进一步地，所述十字花科作物根肿病包括白菜根肿病。
本发明公开了以下技术效果：
本发明从健康白菜根内分离得到一株绿针假单胞菌：生防菌MCNB07405，实验检测该生防菌具有磷酸酯酶、纤维素酶活性，证明其具备生防菌剂的潜力。
本发明将制得的生防菌剂与根肿菌休眠孢子共培养，试验结果表明该生防菌剂对根肿菌休眠孢子的萌发具有显著抑制作用，抑制率达到60.2％，并且该菌剂能够防治十字花科作物根肿病，将白菜根肿病的病情指数由60.6下降至26.2，防治效果56.8％，与化学药剂对照组氟啶胺防效无显著差异。由此可见，本发明公开的生防菌MCNB07405制备的生防菌剂对十字花科根肿病的防治提供了新的解决方案，具有良好的市场应用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明的生防菌MCNB07405电镜菌体形态图；
图2为本发明的生防菌MCNB07405光谱抑菌谱实验结果；
图3为本发明的生防菌MCNB07405磷酸酯酶活性检测结果；
图4为本发明的生防菌MCNB07405纤维素酶活性检测结果；
图5为本发明的白菜根肿病的病情等级结果，其中左图为生防菌MCNB07405处理组，右图为PBS缓冲液对照组；
图6为本发明的生防菌MCNB07405对向日葵安全性检测结果，其中左图为生防菌MCNB07405处理组，右图为灭菌生理盐水对照组。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
一、菌株的分离、鉴定和保藏
1.菌株的分离鉴定
该菌采自辽宁新民发生根肿病的田间健康白菜根内分离获得。具体方法如下：取自成熟期但未显根肿病症状的白菜根去表皮后加入1.5mL无菌水研磨，稀释10倍。取100μL上述研磨液在LB培养基(胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl 10g/L，琼脂16g/L)平板上均匀涂板，超净工作台内吹干，重复三次，25℃恒温培养24h，用无菌牙签挑取细菌单菌落点在新的培养基中，以灰葡萄孢、核盘菌等植物病原真菌为靶标菌，利用平板对峙法进行初步筛选；进一步对获得的具有拮抗作用的细菌进行温室防效测定，最终筛选出具有显著降低根肿病的生防菌。
综合假单胞属细菌的形态学特征、生理生化特性、16s rDNA序列和特异性引物分析的结果，将其鉴定为绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)。具体鉴定结果如下：
1.1菌体的形态特征
革兰氏染色阴性，在PDA培养基上产生黄绿色可溶性非荧光色素，菌落兰绿色；在LB培养基上呈现为黄色圆形菌落。电子显微镜观察，菌体长椭圆形，大小0.5×2.3μm，极生鞭毛(见图1)。
1.2生理生化特性
生防菌MCNB07405生理生化特性如表1所示。
表1生防菌MCNB07405生理生化特性
Figure BDA0003502985730000061
注：+，阳性反应；–，阴性反应
1.3 16s rDNA序列分析
方法是：提取生防菌MCNB07405的基因组DNA，用16s扩增通用引物27F 5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’和1492R 5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’，在如下PCR体系中扩增：50μL扩增体系，10pmol引物，0.2mM dNTP，1.5mM MgCl2，2.5U Taq DNA聚合酶(TaKaRa)，1×PCR buffer(TaKaRa)，25ng基因组DNA作模板。PCR反应条件为：94℃预变性5min，95℃变性30s，58℃退火45s，72℃延伸90s，30个循环后72℃充分延伸10min。PCR扩增产物用1％的琼脂糖凝胶电泳分析，在生工生物工程公司用ABI 3730 DNA测序仪进行测序，测序结果如下(SEQ ID No.1)：
GGCATGGCGGCAGCTACACATGCAGTCGAGCGGTAGAGAGGTGCTTGCACCTCTTGAGAGCGGCGGACGGGTGAGTAAAGCCTAGGAATCTGCCTGGTAGTGGGGGATAACGCTCGGAAACGGACGCTAATACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAGCAGGGGACCTTCGGGCCTTGCGCTATCAGATGAGCCTAGGTCGGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGATCCGTAACTGGTCTGAGAGGATGATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAAGCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCATTAACCTAATACGTTAGTGTTTTGACGTTACCGACAGAATAAGCACCGGCTAACTCTGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACAGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTCGTTAAGTTGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTCAAAACTGTCGAGCTAGAGTATGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCAACTAGCCGTTGGGAGCCTTGAGCTCTTAGTGGCGCAGCTAACGCATTAAGTTGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGCCTTGACATCCAATGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACATTGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTACCAGCACGTAATGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAGAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGTGGAGCTAATCCCACAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGAATCAGAATGTCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCACCAGAAGTAGCTAGTCTAACCTTCGGGGGGACGGTACCACGTGATCTTTTG；
基因序列已经提交GenBank，基因收录号为：OM302451。
1.4特异性基因扩增分析利用常见用于鉴定假单胞菌属管家基因atpD(F：5’-CTGGGCCGSATCATGGACG-3’，R：5’-GTCCATGCCCAGGATSGCG-3’)、carA(F：5’-TTCAAGACCGCCATGACCGG-3’，R：5’-TGATGRCCSAGGCAGATRCC-3’)、rpoB(F：5’-CAGTTCATGGACCAGAACAACCCGCT-3’，R：5’-CCCATCAACGCACGGTTGGCGTC-3’)引物扩增，退火温度为55℃-60℃。PCR体系以及测序同16SrDNA，结合生理生化鉴定及保守的管家基因分析，将生防菌MCNB07405确定为绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)。
2.生防菌MCNB07405的保藏
生防菌MCNB07405的分类命名为绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis),已于2022年1月17日保藏于中国普通微生物菌种保藏与管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路一号院三号中国科学院微生物研究所，保藏编号：CGMCC NO：24326。
二、抑菌谱分析
以核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、灰葡萄孢(Botrytis cinera)、核果链核盘菌(Monilinia laxa)、小长喙霉(Ceratocystis fimbriata)、立枯丝核菌(Rhizoconiasolani)、茄链格孢(Alternaria solani)、禾谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis)、芹菜壳针孢菌(Septoria apiicola)、串珠镰孢菌(Fusarium monififorme)、尖孢镰孢菌西瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)和尖孢镰孢菌百合专化型(Fusarium oxysporumf.sp.lili)作为供试病原菌。
使用液体LB培养基过夜摇培生防菌MCNB07405，并用0.01mol/L PBS缓冲液将其制成OD600nm＝0.8菌液，将活化的供试病原菌制成直径为5mm的菌饼放在PDA培养基中心点，距中心点30mm处呈180°使用细菌菌液划线，封口膜密封。以不接种细菌菌液作为对照。每株供试病原菌重复3次，25℃倒置培养直至对照皿中真菌菌丝刚好长满。测量菌落半径，结果见图2，由图2可知，生防菌MCNB07405能够显著抑制核盘菌、灰葡萄孢菌、核果链核盘菌、小长喙霉、立枯丝核菌、茄链格孢、禾谷丝核菌、芹菜壳针孢菌、串珠镰孢菌、尖孢镰孢菌西瓜专化型和尖孢镰孢菌百合专化型的活性，证明该菌株具有广谱抑菌活性。
三、生防相关性状检测
磷酸酯酶活性：使用Pikovskaya’s平板(0.5g/L酵母提取物，10g/L葡萄糖，5g/L磷酸钙，0.5g/L硫酸铵，0.2g/L氯化钾，0.1g/L氯化镁，0.0001g/L硫酸锰，0.0001g/L硫酸亚铁，15g/L琼脂)检测磷酸酯酶活性。将生防菌MCNB07405接种于平板中央，28℃培养7d，在细菌菌落周围出现透明圈，这表明生防菌MCNB07405具有磷酸酯酶活性(图3)。
纤维素酶活性：使用纤维素酶检测平板(0.25g/L七水硫酸镁，0.25g/L磷酸氢二钾，1.88g/L羧甲基纤维素，15g/L琼脂)检测纤维素酶活性。将生防菌MCNB07405接种于平板中央，28℃培养7d，在培养基中加入5mL0.2mg/mL刚果红染液，染色1h，弃去刚果红染液后，加入5mL 1M NaCl洗涤1h，弃去洗涤液，菌落周围出现水解圈，表明生防菌MCNB07405具有纤维素酶活性(图4)。
四、生防菌剂的制备
将生防菌MCNB07405在LB液体培养基(10g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，10g/LNaCl)28℃震荡培养过夜，进行活化。用0.01mol/L PBS缓冲液将活化培养后的菌株培养液制成OD600nm＝0.8菌液，即为生防菌剂。
五、生防菌培养条件优化
将活化后的生防菌MCNB07405接种到改良基本培养基，培养基成分：10.5g/LK2HPO4，4.5g/L KH2PO4，0.5g/L二水柠檬酸钠，1.0g/L酵母提取物，0.25g/L七水硫酸镁，2.0g/L蔗糖。置于28℃培养2天。
六、根肿菌休眠孢子萌发及根肿病防效
生防菌剂对根肿菌休眠孢子萌发的影响
1.根肿菌休眠孢子的提取
用水冲洗50g新鲜白菜根肿病根，洗去表面泥土后用无菌水冲洗。70％酒精，1min浸泡清洗后的菌根，3次无菌水冲洗。菌根与300mL无菌水加入到榨汁机中榨汁。将混合物使用8层灭菌纱布过滤后，每50mL离心管中加入35mL过滤液。4℃，2000×g离心15min，弃上清。每管加入5mL 40％蔗糖溶液，涡旋仪震荡至沉淀完全溶解。4℃，4000×g离心10min，上清液置入灭菌的50mL离心管。加入30mL无菌水，混匀后，4℃，4000×g离心10min，弃去上清液。加入10mL无菌水，混匀后，4℃，4000×g离心10min，弃去上清液。加入10mL无菌水，混匀后，4℃，4000×g离心10min，弃去上清液。4℃冰箱保存。显微镜下将10μL混合液滴入血球计数板中观察，计算根肿菌孢子数量。
2.白菜根系分泌液的收集
将白菜种子均匀铺在使用无菌水浸湿的无菌纸上，置于空的培养皿中，28℃催芽2d，期间进行补水保持无菌纸湿润。种子发芽后，将其放在纱布空隙中与Hoagland’s营养液接触进行培养，每棵白菜10mL营养液。营养液培养7天后，使用0.22μm细菌滤器过滤，收集白菜根系分泌液。放于4℃冰箱中备用。
3.细菌与根肿菌休眠孢子共培养
将1mL 1×106个孢子/mL根肿菌休眠孢子与10mL白菜根系分泌液混合后加入1mL生防菌剂在25℃恒温培养箱中黑暗处理培养5天后进行孢子染色，以PBS代替菌液作为对照。
4.孢子染色
取20μL培养液滴在载玻片上烤干，滴上50μL 1％地衣红染液覆盖染色3min，95％乙醇冲去染料，加入10μL 10％甘油，覆盖玻片置于显微镜下观察，染色(呈黑色或红色)为未萌发孢子，未染色(呈透明)为已萌发孢子。
按照以下公式计算根肿菌休眠孢子萌发抑制率。
孢子萌发抑制率＝(对照孢子萌发率-处理孢子萌发率)/对照孢子萌发率×100％
表2各组孢子萌发抑制结果
组别 孢子萌发数 孢子萌发率 孢子萌发抑制率
对照组 132±8 66.0％ -
处理组 52±8 26.0％ 60.6％
实验结果表明，生防菌MCNB07405对根肿菌休眠孢子的萌发具有显著抑制效果，抑制率达到60.6％。
5.根肿病防效评估
按照比例使用根肿菌休眠孢子将营养土浓度调节至1×105个孢子/g土，均匀铺在72孔穴盘中，每穴盘1.5kg土，每孔1粒白菜种子，加入1mL生防菌剂作为生防菌剂处理组，以PBS代替生防菌剂作为生防对照组，以氟啶胺作为化学药剂对照组，按照0-3级分类法对根肿病严重程度进行分级(0级：主根与侧根均无肿瘤；1级：仅侧根有肿瘤；2级：仅主根有肿瘤；3级：主根侧根均有肿瘤)(图5)。按照以下公式计算病情指数以及根肿病防效。
病情指数＝Σ(发病等级×对应植株数)/(最高发病等级×调查总株数)
防效＝(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数×100％
表3各组菌剂对根肿病的防效情况
组别 病情指数 防效(％)
对照组 60.6 -
生防菌剂对照组 26.2 56.8
化学药剂对照组 18.8 69.0
实验结果如下，对照组根肿病的病情指数为60.6，生防菌剂处理组的病情指数为26.2，化学药剂对照组氟啶胺处理的白菜白菜根肿病病情指数为18.8，生防菌剂对白菜根肿病的防治效果达到56.8％，与氟啶胺药剂防效69％相比无显著差异，证明该生防菌剂具有良好的白菜根肿病防治效果。
六、生防菌安全性检测
采用针刺接种法检测生防菌MCNB07405对向日葵等作物的致病性，以灭菌生理盐水作为对照。结果表明，指示生防菌MCNB07405处理组与灭菌生理盐水对照组的植物外观间无明显区别，没有任何病害症状出现(图6)。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
序列表
<110> 沈阳农业大学
<120> 一株绿针假单胞菌对十字花科作物根肿病的防控应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1438
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ggcatggcgg cagctacaca tgcagtcgag cggtagagag gtgcttgcac ctcttgagag 60
cggcggacgg gtgagtaaag cctaggaatc tgcctggtag tgggggataa cgctcggaaa 120
cggacgctaa taccgcatac gtcctacggg agaaagcagg ggaccttcgg gccttgcgct 180
atcagatgag cctaggtcgg attagctagt tggtgaggta atggctcacc aaggcgacga 240
tccgtaactg gtctgagagg atgatcagtc acactggaac tgagacacgg tccagactcc 300
tacgggaggc agcagtgggg aatattggac aatgggcgaa agcctgatcc agccatgccg 360
cgtgtgtgaa gaaggtcttc ggattgtaaa gcactttaag ttgggaggaa gggcattaac 420
ctaatacgtt agtgttttga cgttaccgac agaataagca ccggctaact ctgtgccagc 480
agccgcggta atacagaggg tgcaagcgtt aatcggaatt actgggcgta aagcgcgcgt 540
aggtggttcg ttaagttgga tgtgaaatcc ccgggctcaa cctgggaact gcattcaaaa 600
ctgtcgagct agagtatggt agagggtggt ggaatttcct gtgtagcggt gaaatgcgta 660
gatataggaa ggaacaccag tggcgaaggc gaccacctgg actgatactg acactgaggt 720
gcgaaagcgt ggggagcaaa caggattaga taccctggta gtccacgccg taaacgatgt 780
caactagccg ttgggagcct tgagctctta gtggcgcagc taacgcatta agttgaccgc 840
ctggggagta cggccgcaag gttaaaactc aaatgaattg acgggggccc gcacaagcgg 900
tggagcatgt ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt accaggcctt gacatccaat 960
gaactttcca gagatggatt ggtgccttcg ggaacattga gacaggtgct gcatggctgt 1020
cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgtaa cgagcgcaac ccttgtcctt 1080
agttaccagc acgtaatggt gggcactcta aggagactgc cggtgacaaa ccggaggaag 1140
gtggggatga cgtcaagtca tcatggccct tacggcctgg gctacacacg tgctacaatg 1200
gtcggtacag agggttgcca agccgcgagg tggagctaat cccacaaaac cgatcgtagt 1260
ccggatcgca gtctgcaact cgactgcgtg aagtcggaat cgctagtaat cgcgaatcag 1320
aatgtcgcgg tgaatacgtt cccgggcctt gtacacaccg cccgtcacac catgggagtg 1380
ggttgcacca gaagtagcta gtctaacctt cggggggacg gtaccacgtg atcttttg 1438

Claims (8)

1.一种生防菌MCNB07405，其特征在于，其已在中国普通微生物菌种保藏与管理中心保藏，分类命名为绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)，保藏编号为CGMCC NO：24326，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路一号院三号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2022年1月17日。
2.一种含有权利要求1所述生防菌MCNB07405的生防菌剂。
3.一种制备权利要求2所述生防菌剂的方法，其特征在于，将所述生防菌MCNB07405活化、培养后，所得菌液即为生防菌剂。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述活化条件为采用LB液体培养基，28℃震荡培养过夜。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述培养条件为采用改良的基本培养基，在28℃培养48h；
所述改良的基本培养基为：10.5g/L K2HPO4，4.5g/L KH2PO4，0.5g/L二水柠檬酸钠，1.0g/L酵母提取物，0.25g/L七水硫酸镁，2.0g/L蔗糖。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述菌液为利用PBS缓冲液将其制成OD600nm＝0.8的菌液。
7.一种权利要求1所述生防菌MCNB07405或权利要求2所述生防菌剂在防治十字花科作物根肿病中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述十字花科作物根肿病包括白菜根肿病。
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