CN114375301A - 工程改造的t细胞 - Google Patents

工程改造的t细胞 Download PDF

Info

Publication number
CN114375301A
CN114375301A CN202080044323.4A CN202080044323A CN114375301A CN 114375301 A CN114375301 A CN 114375301A CN 202080044323 A CN202080044323 A CN 202080044323A CN 114375301 A CN114375301 A CN 114375301A
Authority
CN
China
Prior art keywords
polypeptide
domain
tgf
intracellular signaling
cell
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202080044323.4A
Other languages
English (en)
Inventor
贾斯迪普·曼恩
克里斯蒂安·艾灵格
丹尼尔·萨默迈耶
本杰明·博埃里纳斯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
2 Savinti Biology
Medigene Immunotherapies GmbH
Original Assignee
2 Savinti Biology
Medigene Immunotherapies GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 2 Savinti Biology, Medigene Immunotherapies GmbH filed Critical 2 Savinti Biology
Publication of CN114375301A publication Critical patent/CN114375301A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/00113—Growth factors
    • A61K39/001134—Transforming growth factor [TGF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001136—Cytokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001184—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A61K39/001186—MAGE
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4632—T-cell receptors [TCR]; antibody T-cell receptor constructs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/46443—Growth factors
    • A61K39/464434—Transforming growth factor [TGF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464436—Cytokines
    • A61K39/46444—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464484—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A61K39/464486—MAGE
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C07K14/7155—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C07K14/7156—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for interferons [IFN]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C12N15/625—DNA sequences coding for fusion proteins containing a sequence coding for a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本公开提供了用于过继性T细胞疗法的改进的组合物，用于治疗、预防癌症、传染病、自身免疫性疾病、炎性疾病和免疫缺陷或与其相关的病状或改善其至少一种症状。

Description

工程改造的T细胞
相关申请的交叉引用
本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2019年5月8日提交的美国临时申请第62/845,311号的权益，该申请以全文引用的方式并入本文。
关于序列表的声明
与本申请相关的序列表以文本格式提供，代替纸质副本，并且特此通过引用并入说明书中。含有序列表的文本文件的名称是BLBD_122_01WO_ST25。文本文件为37KB，创建于2020年5月6日，并在本说明书提交的同时，经由EFS-Web以电子方式提交。
背景技术
技术领域
本公开涉及经改进的过继性细胞疗法。更具体地，本公开涉及改进的信号传导分子、细胞及其使用方法。
发明内容
本公开总体上部分涉及改进的过继免疫疗法，并且在特定实施方案中，免疫效应细胞包含：多核苷酸，其编码结合MAGEA4的αβTCR，优选地结合MAGEA4的人配对增强αβTCR，优选地由HLA-A*02：01编码分子呈递的MAGEA4肽GVYDGREHTV(SEQ ID NO：1)；和嵌合TGFβ受体(CTBR)、组合物，以及其使用方法。
在各种实施方案中，细胞包含编码结合MAGEA4的工程改造αβTCR(MAGEA4 TCR)的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：第一多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和免疫受体细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及第二多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和免疫受体细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，细胞包含编码结合MAGEA4的人配对增强αβTCR(MAGEA4 eTCR)的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：第一多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和免疫受体细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及第二多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和免疫受体细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域分离自细胞因子受体、白细胞介素受体、模式识别受体或toll样受体。
在某些实施方案中，所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域分离自细胞因子受体、白细胞介素受体、模式识别受体或toll样受体。
在特定实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-12Rβ2细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-12Rβ1细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-12Rβ2跨膜结构域。
在另外的实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-12Rβ1跨膜结构域。
在一些实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-12Rβ1细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-12Rβ2细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-12Rβ1跨膜结构域。
在某些实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-12Rβ2跨膜结构域。
在特定实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-7Rα细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-2Rγ细胞内信号传导结构域。
在另外的实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-7Rα跨膜结构域。
在另外的实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-2Rγ跨膜结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-2Rγ细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-7Rα细胞内信号传导结构域。
在一些实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-2Rγ跨膜结构域。
在特定实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-7Rα跨膜结构域。
在某些实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-2Rβ细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-2Rγ细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-2Rβ跨膜结构域。
在另外的实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-2Rγ跨膜结构域。
在某些实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-2Rγ细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-2Rβ细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-2Rγ跨膜结构域。
在一些实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-2Rβ跨膜结构域。
在另外的实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-21R细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-2Rγ细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-21R跨膜结构域。
在某些实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-2Rγ跨膜结构域。
在特定实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-2Rγ细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-21R细胞内信号传导结构域。
在另外的实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-2Rγ跨膜结构域。
在一些实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-21R跨膜结构域。
在另外的实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-18R1细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-18RAP细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-18R1跨膜结构域。
在各种实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-18RAP跨膜结构域。
在特定实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-18RAP细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-18R1细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-18RAP跨膜结构域。
在另外的实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-18R1跨膜结构域。
在某些实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-1R1细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-1RAP细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-1R1跨膜结构域。
在一些实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-1RAP跨膜结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-1RAP细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-1R1细胞内信号传导结构域。
在一些实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-1RAP跨膜结构域。
在特定实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-1R1跨膜结构域。
在某些实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-1RAP细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-1RL2细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-1RAP跨膜结构域。
在另外的实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-1RL2跨膜结构域。
在另外的实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-1RL2细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-1RAP细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-1RL2跨膜结构域。
在特定实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-1RAP跨膜结构域。
在另外的实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IFNAR1细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IFNAR2细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IFNAR1跨膜结构域。
在某些实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IFNAR2跨膜结构域。
在特定实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IFNAR2细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IFNAR1细胞内信号传导结构域。
在一些实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IFNAR2跨膜结构域。
在各种实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IFNAR1跨膜结构域。
在另外的实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR1细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR1细胞内信号传导结构域。
在某些实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR1跨膜结构域。
在特定实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR1跨膜结构域。
在一些实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR2细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR2细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR2跨膜结构域。
在另外的实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR2跨膜结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR3细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR3细胞内信号传导结构域。
在某些实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR3跨膜结构域。
在特定实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR3跨膜结构域。
在另外的实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR4细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR4细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR4跨膜结构域。
在一些实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR4跨膜结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR5细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR5细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR5跨膜结构域。
在另外的实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR5跨膜结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR6细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR6细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR6跨膜结构域。
在某些实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR6跨膜结构域。
在特定实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR7细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR7细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR7跨膜结构域。
在另外的实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR7跨膜结构域。
在一些实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR8细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR8细胞内信号传导结构域。
在另外的实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR8跨膜结构域。
在各种实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR8跨膜结构域。
在特定实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR9细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR9细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR9跨膜结构域。
在某些实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR9跨膜结构域。
在各种实施方案中，所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR10细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR10细胞内信号传导结构域。
在一些实施方案中，所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR10跨膜结构域。
在特定实施方案中，所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR10跨膜结构域。
在某些实施方案中，多肽裂解信号是病毒自裂解多肽。
在各种实施方案中，多肽裂解信号是病毒自裂解2A多肽。
在特定实施方案中，多肽裂解信号是选自由以下项组成的组的病毒自裂解多肽：口蹄疫病毒(FMDV)(F2A)肽、马鼻炎A病毒(ERAV)(E2A)肽、明脉扁刺蛾β四体病毒(TaV)(T2A)肽、猪捷申病毒-1(PTV-1)(P2A)肽、泰勒病毒2A肽以及脑心肌炎病毒2A肽。
在各种实施方案中，所述融合多肽包括SEQ ID NO：5中列出的氨基酸序列。
在各种实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、IL-12Rβ2跨膜结构域；和IL-12Rβ2细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；IL-12Rβ1跨膜结构域和IL-12Rβ1细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、IL-12Rβ1跨膜结构域；和IL-12Rβ1细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；IL-12Rβ2跨膜结构域和IL-12Rβ2细胞内信号传导结构域。
在某些实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、IL-7Rα跨膜结构域；和IL-7Rα细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；IL-2Rγ跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域。
在一些实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、IL-2Rγ跨膜结构域；和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；IL-7Rα跨膜结构域；和IL-7Rα细胞内信号传导结构域。
在另外的实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、IL-2Rβ跨膜结构域；和IL-2Rβ细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；IL-2Rγ跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域。
在另外的实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、IL-2Rγ跨膜结构域；和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；IL-2Rβ跨膜结构域和IL-2Rβ细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、IL-21R跨膜结构域；和IL-21R细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；IL-2Rγ跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域。
在某些实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、IL-2Rγ跨膜结构域；和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；IL-21R跨膜结构域；和IL-21R细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、IL-18R1跨膜结构域；和IL-18R1细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；IL-18RAP跨膜结构域和IL-18RAP细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、IL-18RAP跨膜结构域；和IL-18RAP细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；IL-18R1跨膜结构域和IL-18R1细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、IL-1R1跨膜结构域；和IL-1R1细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；IL-1RAP跨膜结构域和IL-1RAP细胞内信号传导结构域。
在另外的实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、IL-1RAP跨膜结构域；和IL-1RAP细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；IL-1R1跨膜结构域和IL-1R1细胞内信号传导结构域。
在一些实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、IFNAR1跨膜结构域；和IFNAR1细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；IFNAR2跨膜结构域和IFNAR2细胞内信号传导结构域。
在一些实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、IFNAR2跨膜结构域；和IFNAR2细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；IFNAR1跨膜结构域和IFNAR1细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、TLR1跨膜结构域；和TLR1细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；TLR1跨膜结构域和TLR1细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、TLR2跨膜结构域；和TLR2细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；TLR2跨膜结构域和TLR2细胞内信号传导结构域。
在另外的实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、TLR3跨膜结构域；和TLR3细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；TLR3跨膜结构域和TLR3细胞内信号传导结构域。
在某些实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、TLR4跨膜结构域；和TLR4细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；TLR4跨膜结构域和TLR4细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、TLR5跨膜结构域；和TLR5细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；TLR5跨膜结构域和TLR5细胞内信号传导结构域。
在一些实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、TLR6跨膜结构域；和TLR6细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；TLR6跨膜结构域和TLR6细胞内信号传导结构域。
在另外的实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、TLR7跨膜结构域；和TLR7细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；TLR7跨膜结构域和TLR7细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、TLR8跨膜结构域；和TLR8细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；TLR8跨膜结构域和TLR8细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、TLR9跨膜结构域；和TLR9细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；TLR9跨膜结构域和TLR9细胞内信号传导结构域。
在各种实施方案中，细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：TGFβR2多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、TLR10跨膜结构域；和TLR10细胞内信号传导结构域；病毒自裂解2A肽；以及TGFβR1多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；TLR10跨膜结构域和TLR10细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，所述病毒自裂解2A多肽选自由以下项组成的组：口蹄疫病毒(FMDV)(F2A)肽、马鼻炎A病毒(ERAV)(E2A)肽、明脉扁刺蛾β四体病毒(TaV)(T2A)肽、猪捷申病毒-1(PTV-1)(P2A)肽、泰勒病毒2A肽以及脑心肌炎病毒2A肽。
在各种实施方案中，所述融合多肽包括SEQ ID NO：5中列出的氨基酸序列。
在另外的实施方案中，所述MAGEA4 TCR结合由HLA-A*02：01编码分子呈递的肽GVYDGREHTV。
在一些实施方案中，所述MAGEA4 TCR包括：包含SEQ ID NO：1中列出的氨基酸序列的α链和包含SEQ ID NO：2中列出的氨基酸序列的β链。
在各种实施方案中，所述MAGEA4 TCR包括：包含SEQ ID NO：3中列出的氨基酸序列的α链和包含SEQ ID NO：4中列出的氨基酸序列的β链。
在特定实施方案中，细胞是造血细胞。
在另外的实施方案中，细胞是T细胞。
在某些实施方案中，细胞是CD3+、CD4+和/或CD8+细胞。
在各种实施方案中，细胞是免疫效应细胞。
在一些实施方案中，细胞是细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)或辅助T细胞。
在某些实施方案中，细胞是自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞。
在特定实施方案中，细胞的来源为外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染位点的组织、腹水、胸腔积液、脾组织或肿瘤。
在各种实施方案中，组合物包含表达MAGEA4 TCR的细胞和本文所涵盖的融合多肽。
在另外的实施方案中，药物组合物包含药学上可接受的载剂和表达MAGEA4 TCR的细胞以及本文所涵盖的融合多肽。
在某些实施方案中，一种治疗有需要的受试者的方法包括向所述受试者施用有效量的本文所涵盖的组合物。
在各种实施方案中，一种治疗、预防癌症、传染病、自身免疫性疾病、炎性疾病和免疫缺陷或与其相关的病状或改善其至少一种症状的方法包括向所述受试者施用有效量的本文所涵盖的组合物。
在特定实施方案中，治疗实体癌的方法包括向所述受试者施用有效量的本文所涵盖的组合物。
在一些实施方案中，所述实体癌包括肝癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、膀胱癌、脑癌、肉瘤、头颈癌、骨癌、甲状腺癌、肾癌或皮肤癌。
在某些实施方案中，所述实体癌是胰腺癌、肺癌或乳腺癌。
在特定实施方案中，一种治疗血液恶性肿瘤的方法包括向所述受试者施用有效量的本文所涵盖的组合物。
在各种实施方案中，血液恶性肿瘤是白血病、淋巴瘤或多发性骨髓瘤。
附图说明
图1示出了在存在或不存在TGFβ1的情况下培养20分钟的未转导的(UTD)T细胞、用编码MAGEA4 TCR的LVV转导的T细胞中，以及用编码MAGEA4 TCR的LVV和编码IL-12反应性嵌合TGFβ受体(CTBR12)的LVV转导的T细胞中的STAT4和SMAD2/3磷酸化。
图2示出了在存在或不存在TGFβ1(10ng/ml)的情况下，单独培养或以1∶1的E∶T比率与A375 MAGEA4+肿瘤细胞培养24小时的UTD T细胞、MAGEA4 TCR T细胞和MAGEA4 TCR/CTBR12 T细胞的IFNγ分泌。
图3示出了用UTD T细胞、MAGEA4 TCR T细胞或MAGEA4 TCR/CTBR12 T细胞处理的NSG肿瘤异种移植小鼠模型中的A375 MAGEA4+肿瘤细胞体积。
图4示出了在存在或不存在TGFβ1的情况下培养20分钟的用编码MAGEA4配对增强TCR(eTCR)的LVV转导的T细胞中以及用编码MAGEA4 eTCR和IL-12反应性嵌合TGFβ受体(CTBR12)的LVV转导的T细胞中的STAT4和SMAD2/3磷酸化。
图5示出了在存在或不存在TGFβ1(10ng/ml)的情况下，单独培养、与TGFβ1培养或以1∶1的E∶T比率与A375 MAGEA4+肿瘤细胞培养24小时的UTD T细胞、MAGEA4 eTCR T细胞和MAGEA4 eTCR/CTBR12 T细胞的IFNγ分泌。
序列标识符简述
SEQ ID NO：1示出MAGEA4表位的氨基酸序列。
SEQ ID NO：2示出人MAGEA4 TCRα链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：3示出人MAGEA4 TCRβ链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：4示出人MAGEA4 TCR融合多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO：5示出人MAGEA4 eTCRα链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：6示出人MAGEA4 eTCRβ链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：7示出人MAGEA4 eTCR融合多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO：8示出IL-12反应性嵌合TGFβ受体(CTBR12)的氨基酸序列。
SEQ ID NO：9-19示出各种接头的氨基酸序列。
SEQ ID NO：20-44示出蛋白酶裂解位点和自裂解多肽裂解位点的氨基酸序列。
SEQ ID NO：45示出Kozak序列的核苷酸序列。
在前述序列中，如果存在X，则其是指任何氨基酸或不存在某一氨基酸。
具体实施方案
A.概述
表达T细胞的T细胞受体(TCR)已证实在实体瘤适应症中有限(如果有的话)的功效，部分是由于免疫抑制性实体瘤微环境(TME)。肿瘤细胞和肿瘤浸润性淋巴细胞过度产生包括TGFβ在内的免疫抑制细胞因子促成免疫抑制性肿瘤微环境。TGFβ通过多种机制抑制T细胞功能。TGFβ经常与肿瘤转移和侵入相关，抑制免疫细胞的功能和癌症患者的不良预后。肿瘤特异性CTL中通过TGFβR2的TGFβ信号传导减弱了其在肿瘤中的功能和频率，并且用单克隆抗体阻断CD8+T细胞上的TGFβ信号传导导致更快速的肿瘤监测和肿瘤部位处存在更多的CTL。迄今为止，在临床环境中抑制TGFβ的策略尚未产生显著的治疗益处。
本公开总体上涉及表达MAGEA4 TCR的免疫效应细胞和将免疫抑制性TGFβ信号转化为免疫刺激信号的多肽，以及涉及表达多肽的细胞。不希望受任何特定理论的束缚，本文所涵盖的多肽是嵌合TGFβ受体(CTBR)，其包含TGFβR1和TGFβR2的TGFβ结合结构域，当与免疫刺激内域连接并且在免疫效应细胞中共表达时，可以将TGFβ暴露从免疫抑制性信号转化为刺激免疫效应细胞活性和功能的免疫刺激信号。嵌合TGFβ受体多肽在免疫效应细胞中的共表达例如通过恢复或增加促炎性细胞因子分泌使细胞对TGFβ的免疫抑制作用具有抗性。在特定优选实施方案中，MAGEA4 TCR是人MAGEA4配对增强TCR(eTCR)，并且嵌合TGFβ受体是CTBR12。
在各种实施方案中，本公开部分地考虑表达MAGEA4 TCR的免疫效应细胞和将免疫抑制性TGFβ信号转化为经由或通过一种或多种免疫受体的一个或多个细胞内结构域介导的免疫刺激信号的CTBR多肽。
在各种实施方案中，本公开部分地考虑表达MAGEA4 TCR的免疫效应细胞和将免疫抑制性TGFβ信号转化为经由或通过一种或多种细胞因子受体的一个或多个细胞内结构域介导的免疫刺激信号的CTBR多肽。
在各种实施方案中，本公开部分地考虑表达MAGEA4 TCR的免疫效应细胞和将免疫抑制性TGFβ信号转化为经由或通过一种或多种白细胞介素受体的一个或多个细胞内结构域介导的免疫刺激信号的CTBR多肽。
在各种实施方案中，本公开部分地考虑表达MAGEA4 TCR的免疫效应细胞和将免疫抑制性TGFβ信号转化为经由或通过一种或多种模式识别受体的一个或多个细胞内结构域介导的免疫刺激信号的CTBR多肽。
在各种实施方案中，本公开部分地考虑表达MAGEA4 TCR的免疫效应细胞和将免疫抑制性TGFβ信号转化为经由或通过一种或多种toll样受体的一个或多个细胞内结构域介导的免疫刺激信号的CTBR多肽。
在特定实施方案中，本公开部分地考虑表达MAGEA4 TCR的免疫效应细胞和包含结合TGFβ的TGFβR1细胞外结构域、跨膜结构域和一种或多种免疫受体的一个或多个细胞内结构域的CTBR多肽；以及包含结合TGFβ的TGFβR2细胞外结构域、跨膜结构域和一种或多种免疫受体的一个或多个细胞内结构域的CTBR多肽。在一个实施方案中，多肽通过多肽裂解信号，例如2A多肽裂解信号彼此连接。
在特定实施方案中，本公开部分地考虑表达MAGEA4 TCR(例如，SEQ ID NO：2-4)，优选地MAGEA4配对增强TCR(eTCR；例如，SEQ ID NO：5-7)，优选地，结合由HLA-A*02：01编码分子呈递的MAGEA4肽GVYDGREHTV的MAGEA4配对增强TCR的免疫效应细胞，以及编码嵌合TGFβ受体(CTBR)的融合多肽，该CTBR包含结合TGFβ的TGFβR1细胞外结构域、跨膜结构域和一种或多种免疫受体的一个或多个细胞内结构域；和包含结合TGFβ的TGFβR2细胞外结构域、跨膜结构域和一种或多种免疫受体的一个或多个细胞内结构域的多肽。
在特定实施方案中，跨膜结构域和细胞内信号传导结构域分离自IL-12受体、IL-7受体、IL-15受体、IL-21受体、IL-2受体、IL-1受体、IL-18受体、IL-36受体、I型IFN受体、TLR1受体、TLR2受体、TLR3受体、TLR4受体、TLR5受体、TLR6受体、TLR7受体、TLR8受体、TLR9受体或TLR10受体。
在特定实施方案中，跨膜结构域和细胞内信号传导结构域分离自IL-12Rβ2、IL-7Rα、IL-2Rγ、IL-2Rβ、IL-21R、IL-18R1、IL-18RAP、IL-1R1、IL-1RAP、IFNAR1、IFNAR2、IL-1RL2、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9或TLR10。
在优选实施方案中，融合多肽是IL-12反应性CTBR(CTBR12；例如SEQ ID NO：8)。
用于重组(即，工程改造)DNA、肽和寡核苷酸合成的技术、免疫分析、组织培养、转化(例如电穿孔、脂质体转染)、酶促反应、纯化以及相关技术和程序一般可以如本说明书通篇引用和论述的微生物学、分子生物学、生物化学、分子遗传学、细胞生物学、病毒学及免疫学中的各种通用且更特定的参考文献中所描述来执行。参见，例如，Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第3版，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold Spring Harbor，N.Y.；Current Protocols in Molecular Biology(JohnWiley and Sons，2008年7月更新)；Short Protocols iMolecular Biology：A Compendiumof Methods from Current Protocols in Molecular Biology，Greene Pub.Associatesand Wiley-Interscience；Glover，DNA Cloning：A Practical Approach，第I&II卷(IRLPress，Oxford Univ.Press USA，1985)；Current Protocols in Immunology(编辑：JohnE.Coligan，Ada M.Kruisbeek，David H.Margulies，Ethan M.Shevach，Warren Strober2001 John Wiley&Sons，NY，NY)；Real-Time PCR：Current Technology andApplications，编辑：Julie Logan，Kirstin Edwards和Nick Saunders，2009，CaisterAcademic Press，Norfolk，UK；Anand，Techniques for the Analysis of ComplexGenomes，(Academic Press，New York，1992)；Guthrie和Fink，Guide to Yeast Geneticsand Molecular Biology(Academic Press，New York，1991)；Oligonucleotide Synthesis(N.Gait编，1984)；Nucleic Acid The Hybridization(B.Hames&S.Higgins编，1985)；Transcription and Translation(B.Hames&S.Higgins编，1984)；Animal Cell Culture(R.Freshney编，1986)；Perbal，A Practical Guide to MolecularCloning(1984)；Next-Generation Genome Sequencing(Janitz，2008 Wiley-VCH)；PCR Protocols(Methods inMolecular Biology)(Park编，第3版，2010Humana Press)；Immobilized Cells AndEnzymes(IRL Press，1986)；the treatise，Methods In Enzymology(Academic Press，Inc.，N.Y.)；Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells(J.H.Miller和M.P.Calos编，1987，Cold Spring Harbor Laboratory)；Harlow和Lane，Antibodies，(Cold SpringHarbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，1998)；Immunochemical MethodsIn Cell And Molecular Biology(Mayer和Walker编，Academic Press，London，1987)；Handbook Of Experimental Immunology，Volumes I-IV(D.M.Weir和CC Blackwell编，1986)；Roitt，Essential Immunology，第6版，(Blackwell Scientific Publications，Oxford，1988)；Current Protocols in Immunology(Q.E.Coligan，A.M.Kruisbeek，D.H.Margulies，E.M.Shevach和W.Strober编，1991)；Annual Review of Immunology；以及诸如Advances in Immunology的期刊中的专题论文。
B.定义
除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的一般技术人员通常所了解相同的含义。尽管可以使用与本文所描述的方法和材料类似或相当的任何方法和材料来实践或测试特定实施方案，但本文中描述组合物、方法和材料的优选实施方案。出于本公开的目的，下文定义以下术语。
本文使用的冠词“一(a/an)”是指一个(种)或超过一个(种)(即至少一个(种)或一个(种)或多个(种))该冠词的语法对象。作为实例，“一个元件”意思指一个元件或一个或多个元件。
替代选择(例如“或”)的使用应理解为意思指替代选择中的一种、两种或其任何组合。
术语“和/或”应理解为意思指替代选择中的一种或两种。
如本文所使用，术语“约”或“大约”是指相对于参考数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度变化高达15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度。在一个实施方案中，术语“约”或“大约”是指数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度在大致参考数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度±15％、±10％、±9％、±8％、±7％、±6％、±5％、±4％、±3％、±2％或±1％的范围内。
在本说明书通篇，除非上下文另外要求，否则“包含(comprise/comprises/comprising)”一词应理解为暗指包括所述步骤或要素或一组步骤或要素，但不排除任何其他步骤或要素或任何其他组步骤或要素。“由......组成”意图包括且限于短语“由......组成”之后的事物。因此，短语“由......组成”指示所列要素是必不可少或必需的，并且不能存在其他要素。“基本上由......组成”意图包括短语后所列的任何要素，并且限于不干扰或影响关于所列要素的公开内容中所说明的活性或作用的其他要素。因此，短语“基本上由......组成”指示所列要素是必不可少的或必需的，而且不存在实质上影响所列要素的活性或作用的其他要素。
本说明书通篇提到的“一个实施方案(one embodiment/an embodiment)”、“一个特定实施方案”、“一个相关实施方案”、“某一实施方案”、“一个另外的实施方案”或“另一实施方案”或其组合意味着，结合所述实施方案描述的特定特征、结构或特性被包括在至少一个实施方案中。因此，在本说明书通篇各处出现的前述短语未必都参考同一实施方案。此外，特定特征、结构或特性可以通过任何适合方式组合于一个或多个实施方案中。还应理解，在一个实施方案中关于一个特征的正面叙述用作一个特定实施方案中排除所述特征的基础。
“抗原(Ag)”是指可以在动物中刺激抗体产生或T细胞应答的化合物、组合物或物质，包含注射或吸收到动物内的组合物(如包含癌症特异性蛋白的组合物)。示例性抗原包括但不限于脂质、碳水化合物、多糖、糖蛋白、肽或核酸。抗原与具有特定体液或细胞免疫的产物反应，包含由如公开的抗原等异源抗原诱导的产物。
“靶抗原”或“所关注的靶抗原”是本文所涵盖的结合结构域被设计成与其结合的抗原。在特定实施方案中，靶抗原选自由以下项组成的组：α叶酸受体、5T4、αvβ6整联蛋白、BCMA、B7-H3、B7-H6、CAIX、CD16、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD37、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD70、CD79a、CD79b、CD123、CD138、CD171、CEA、CSPG4、EGFR、包括ErbB2的EGFR家族(HER2)、EGFRvIII、EGP2、EGP40、EPCAM、EphA2、EpCAM、FAP、胎AchR、FRα、GD2、GD3、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、HLA-A1+MAGE1、HLA-A2+MAGE1、HLA-A3+MAGE1、HLA-A1+NY-ESO-1、HLA-A2+NY-ESO-1、HLA-A3+NY-ESO-1、IL-11Rα、IL-13Rα2、Lambda、Lewis-Y、Kappa、间皮素、Muc1、Muc16、NCAM、NKG2D配体、NY-ESO-1、PRAME、PSCA、PSMA、ROR1、SSX、存活蛋白、STn、TAG72、TEM、VEGFR2和WT-1。在优选实施方案中，靶抗原是MAGEA4。
MAGE-A4属于所谓的癌/睾丸抗原的组。癌/睾丸抗原在各种恶性肿瘤和生殖细胞中表达，但不在其他成人组织中表达。因此，MAGE-A4是有趣的免疫治疗靶抗原。编码MAGE-A4的人基因命名为MAGEA4(ENSG00000147381)。
在一个实施方案中，抗原是MHC-肽复合物，如I类MHC-肽复合物或II类MHC-肽复合物。
“接头”是指为了分子的适当间隔和构象而添加的各个多肽结构域之间的多个氨基酸残基。
适用于本文所涵盖的特定实施方案的接头的说明性实例包括但不限于以下氨基酸序列：GGG；DGGGS(SEQ ID NO：9)；TGEKP(SEQ ID NO：10)(参见，例如，Liu等人，PNAS5525-5530(1997))；GGRR(SEQ ID NO：11)(Pomerantz等人，1995，同上)；(GGGGS)n，其中n＝1、2、3、4或5(SEQ ID NO：12)(Kim等人，PNAS 93，1156-1160(1996.)；EGKSSGSGSESKVD(SEQID NO：13)(Chaudhary等人，1990，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87：1066-1070)；KESGSVSSEQLAQFRSLD(SEQ ID NO：14)(Bird等人，1988，Science 242：423-426)，GGRRGGGS(SEQ ID NO：15)；LRQRDGERP(SEQ ID NO：16)；LRQKDGGGSERP(SEQ ID NO：17)；LRQKD(GGGS)2ERP(SEQ ID NO：18)。或者，可以使用能够对DNA结合位点和肽本身建模的计算机程序(Desjarlais&Berg，PNAS 90：2256-2260(1993)，PNAS 91：11099-11103(1994)或通过噬菌体展示方法合理地设计柔性接头。在一个实施方案中，接头包括以下氨基酸序列：GSTSGSGKPGSGEGSTKG(SEQ ID NO：19)(Cooper等人，Blood，101(4)：1637-1644(2003))。
“跨膜结构域”或“TM结构域”是将多肽与细胞的质膜锚定的结构域。TM结构域可以来源于天然、合成、半合成或重组来源。
“细胞内信号传导结构域”是指蛋白质的一部分，所述部分转导效应子功能信号并引导细胞执行专门功能。尽管通常可采用整个细胞内信号传导结构域，但在许多情况下不必使用整个结构域。就使用细胞内信号传导结构域的截短部分来说，可使用这类截短部分代替整个结构域，只要其转导效应功能信号即可。术语细胞内信号传导结构域意图包括足以转导效应功能信号的细胞内信号传导结构域的任何截短部分。
术语“效应子功能”或“效应细胞功能”是指免疫效应细胞的专门功能。效应子功能包括但不限于活化、细胞因子产生、增殖和细胞毒活性，包含细胞毒性因子的释放，或通过与免疫效应细胞上表达的受体进行抗原结合引发的其他细胞应答。
“免疫病症”是指引起免疫系统应答的疾病。在特定实施方案中，术语“免疫病症”是指癌症、自身免疫疾病或免疫缺陷。在一个实施方案中，免疫失调涵盖传染病。
如本文所使用，术语“癌症”通常涉及异常细胞在没有控制的情况下分裂并且可能侵入附近组织的一类疾病或病状。
如本文所使用，术语“恶性”是指一组肿瘤细胞显示出不受控制的生长(即，超出正常限度的分裂)、侵入(即，侵入和破坏相邻组织)和转移(即，经由淋巴或血液扩散到体内的其他位置)中的一种或多种的癌症。如本文所使用，术语“转移”是指癌症从身体的一个部位扩散到另一个部位。由已经扩散的细胞形成的肿瘤被称为“转移性肿瘤”或“转移”。转移性肿瘤含有与原始(原发性)肿瘤中的细胞相似的细胞。
如本文所使用，术语“良性”或“非恶性”是指可以长得更大但不扩散到身体的其他部位的肿瘤。良性肿瘤是自限性的并且通常不会侵入或转移。
“癌细胞”是指癌性生长或组织的单个细胞。癌细胞包含实体癌和液体癌。“肿瘤”或“肿瘤细胞”通常是指由细胞的异常生长形成的肿胀或病变，所述肿胀或病变可以是良性的、恶化前的(pre-malignant)或恶性的。大多数癌症形成肿瘤，但液体癌例如白血病不一定形成肿瘤。对于形成肿瘤的那些癌症，术语癌症(细胞)和肿瘤(细胞)可互换使用。个体中肿瘤的量是可以测量为肿瘤的数目、体积或重量的“肿瘤负荷”。
术语“复发”是指经过一段时间的改进或缓解后诊断出癌症重现或重现体征和症状。
“缓解”也被称为“临床缓解”并且包含部分缓解和完全缓解两者。在部分缓解中，一些但并非所有癌症体征和症状已经消失。在完全缓解中，所有癌症体征和症状均已消失，尽管癌可能仍在体内。
“难治”是指癌症对用特定治疗剂进行的疗法具有抗性或无应答。癌症可以在治疗开始时是难治的(即，对初始暴露于治疗剂无应答)，或者由于在第一治疗期内或在随后的治疗期期间对治疗剂产生抗性而是难治的。
“抗原阴性”是指不表达抗原或表达可忽略量的不可检测的抗原的细胞。在一个实施方案中，抗原阴性细胞不结合被引导到抗原的受体。在一个实施方案中，抗原阴性细胞基本上不结合被引导到抗原的受体。
“自身免疫疾病”是指身体对其自身组织的某个成分产生免疫原性(即，免疫系统)应答的疾病。换言之，免疫系统失去其将身体内的某个组织或系统识别为“自身”的能力并且靶向并攻击所述组织或系统，好像所述组织或系统是外来的一样。自身免疫疾病可以分类为其中主要是一个器官受影响的疾病(例如，溶血性贫血和抗免疫性甲状腺炎)以及其中自身免疫疾病过程通过许多组织弥漫的疾病(例如，系统性红斑狼疮)。例如，多发性硬化被认为是由T细胞攻击包围脑和脊髓的神经纤维的鞘而引起的。这导致协调丧失、虚弱和视力模糊。自身免疫疾病在本领域中是已知的并且包含例如桥本氏甲状腺炎(Hashimoto′sthyroiditis)、格雷夫氏病(Grave′s disease)、狼疮、多发性硬化、风湿性关节炎、溶血性贫血、抗免疫性甲状腺炎、系统性红斑狼疮、乳糜泻、克罗恩氏病(Crohn′s disease)、结肠炎、糖尿病、硬皮病、牛皮癣等。
“免疫缺陷”意指其免疫系统已经被疾病或化学品施用损害的患者的状态。这一病状使系统缺乏防御外来物质所需的数目和类型的血细胞。免疫缺陷病状或疾病在本领域中是已知的并且包含例如AIDS(获得性免疫缺陷综合征)、SCID(严重联合免疫缺陷疾病)、选择性IgA缺乏症、常见变异型免疫缺陷、X连锁无丙种球蛋白血症、慢性肉芽肿病、高IgM综合征和糖尿病。
“传染病”是指可以从人到人或从生物体到生物体传播并且由微生物或病毒剂引起的疾病(例如，普通感冒)。传染病在本领域中是已知的并且包含例如肝炎、性传播疾病(例如，衣原体、淋病)、结核病、HIV/AIDS、白喉、B型肝炎、C型肝炎、霍乱和流感。
如本文所使用，术语“个体”和“受试者”经常可互换使用并且是指展现出可以用本文别处所涵盖的组合物和方法治疗的癌症或其他免疫病症的症状的任何动物。适合的受试者(例如，患者)包含实验用动物(如小鼠、大鼠、兔或豚鼠)、农场动物和家养动物或宠物(如猫或狗)。包含非人灵长类和优选地人类患者。典型的受试者包含患有、已经被诊断为患有或有风险患有癌症或另一种免疫病状的人类患者。
如本文所使用，术语“患者”是指已经被诊断为患有可以用本文别处所公开的组合物和方法治疗的癌症或另一种免疫病症的受试者。
如本文所使用，“治疗(treatment或treating)”包含对疾病或病理状况的症状或病理的任何有益的或期望的效果并且甚至可以包含正在治疗的疾病或病症的一个或多个可测量标志物的最低限度的减少。任选地，治疗可以涉及疾病或病状减少或者疾病或病状的进展延迟，例如延迟肿瘤生长。“治疗”不一定指示完全根除或治愈疾病或病症或其相关症状。
如本文所使用，“预防(prevent)”和如“预防(prevented/preventing)”等类似词语指示用于预防、抑制或减少疾病或病症发生或复发的可能性。预防还是指延迟疾病或病症的发作或复发或者延迟疾病或病症的症状的发生或复发。如本文所使用，“预防(prevention)”和类似词语还包含在疾病或病症发作或复发之前减少疾病或病症的强度、效果、症状和/或负担。
如本文所使用，短语“减轻......的至少一种症状”是指减少正在治疗的受试者的疾病或病症的一种或多种症状。在特定实施方案中，被治疗的疾病或病状是癌症，其中所减轻的所述一种或多种症状包括但不限于虚弱、疲劳、呼吸短促、容易挫伤和出血、频繁感染、淋巴结肿大、腹部肿胀或疼痛(由于腹部器官肿大)、骨骼或关节疼痛、骨折、意外体重减轻、食欲不振、盗汗、持续性轻度发烧以及排尿减少(由于肾功能受损)。
“增强”或“促进”或者“增加”或“扩增”通常是指与由媒介物或对照分子/组合物引起的应答相比，本文所涵盖的组合物能够产生、引发或引起更大的生理应答(即，下游效应)。可测量的生理应答可以包含T细胞扩增、活化、持续、细胞因子分泌的增加和/或癌细胞杀伤能力的增加以及从本领域的理解和本文中的描述中显而易见的其他方面。“增加的”或“增强的”量通常是“统计上显著的”量并且可以包含是由媒介物或对照组合物产生的应答的1.1倍、1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍或更多倍(例如，500倍、1000倍)(包含其间且在1以上的所有整数和小数点，例如1.5、1.6、1.7、1.8等)的增加。
“减小”或“减弱”或“变少”或“减少”或“减轻”通常是指与由媒介物或对照分子/组合物引起的应答相比，本文所涵盖的组合物能够产生、引发或引起更少的应答(即，生理应答)。“减小的”或“减少的”量通常是“统计上显著”的量并且可以包含是由媒介物、对照组合物或特定细胞谱系中的应答产生的应答(参考应答)的1.1倍、1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍或更多倍(例如，500倍、1000倍)(包含其间且在1以上的所有整数和小数点，如1.5、1.6、1.7、1.8等)的减小。
“维持(maintain或maintenance)”或“保持”或“无变化”或“无实质变化”或“无实质减小”通常是指与由媒介物、对照分子/组合物或特定细胞谱系中的应答引起的应答相比，本文所涵盖的组合物能够在细胞中产生、引发或引起基本上类似的或相当的生理应答(即，下游效应)。相当的应答是与参考应答并无显著不同或可测量不同的应答。
C.MAGEA4 T细胞受体
MAGEA4 T细胞受体(TCR)在由主要组织相容性复合物(MHC)分子呈递时识别MAGEA4的肽片段。存在两种不同类型的MHC分子，MHC I和MHC II，其将肽从不同的细胞区室递送至细胞表面。TCR与抗原和MHC的接合通过由相关酶、共受体和特异性辅助分子介导的一系列生物化学事件导致免疫效应细胞活化。
本文所涵盖的TCR是包含TCR alpha(TCRα)链和TCR beta(TCRβ)链的异二聚体复合物。人TCRα基因座位于染色体14(14q11.2)上。成熟TCRα链包含衍生自可变(V)区段和连接(J)区段的重组的可变结构域和恒定(C)结构域。人TCRβ基因座位于染色体7(7q34)上。成熟TCRβ链包含衍生自可变(V)区段、多样性(D)区段和连接(J)区段的重组的可变结构域和两个恒定(C)结构域中的一个。
在特定实施方案中，TCR结合MAGEA4。
在特定实施方案中，TCR是结合MAGEA4的人TCR。
在优选实施方案中，TCR是结合MAGEA4的人配对增强TCR。
本文所涵盖的配对增强MAGEA4 TCR被工程改造以增加TCR稳定性、TCR表达、特异性TCR配对和功能性亲合力。
在特定实施方案中，MAGEA4 TCRα和MAGEA4 TCRβ链的恒定结构域被工程改造或修饰以增加TCR稳定性、TCR表达、特异性TCR配对和功能性亲合力。
为了有效地增强MAGEA4 TCR序列的正确配对并且为了避免与内源TCR链错配，本文所涵盖的MAGEA4配对增强TCR包含最低限度鼠源化的TCRα和TCRβ恒定结构域，并且还包含TCRα跨膜结构域中的疏水性氨基酸取代。
在优选实施方案中，MAGEA4配对增强TCR(eTCR)包括：包含恒定结构域的MAGEA4TCRα链，该恒定结构域包含在位置90、91、92和93处的最小鼠源化氨基酸取代，以及在恒定区的位置115、118和119处的疏水性氨基酸取代；和包含恒定结构域的MAGEA4 TCRβ链，该恒定结构域包含在位置18、22、133、136和139处的最小鼠源化氨基酸。
在优选实施方案中，MAGEA4 eTCR包括：包含恒定结构域的TCRα链，该恒定结构域包含以下最小鼠源化氨基酸取代P90S、E91D、S92V和S93P，以及恒定区的跨膜结构域中的以下疏水性氨基酸取代S115L、G118V和F119L；和包含恒定结构域的TCRβ链，该恒定结构域包含以下最小鼠源化氨基酸取代E18K、S22A、F133I、E/V136A和Q139H。
在特定优选实施方案中，MAGEA4 eTCR包括：包含SEQ ID NO：5中列出的氨基酸序列的TCRα链和包含SEQ ID NO：6中列出的氨基酸序列的TCRβ链。在其他特定优选实施方案中，MAGEA4 eTCR表达为包含SEQ ID NO：7中列出的氨基酸序列的融合多肽。
D.嵌合TGFβ受体(CTBR)
在特定实施方案中，考虑了包含编码人MAGEA4 TCR或人MAGEA4配对增强TCR(eTCR)的多核苷酸，以及在暴露于TGFβ(包括但不限于TGFβ1)时转导免疫刺激信号的嵌合TGFβ受体的细胞。
如本文所使用，术语“嵌合TGFβ受体”是指一种或多种非天然存在的多肽，所述多肽将来自肿瘤微环境的TGFβ免疫抑制性信号转化为T细胞中的免疫刺激信号，例如，刺激免疫效应细胞活性和功能，从而增加促炎性细胞因子的产生和/或分泌。在特定实施方案中，术语“嵌合TGFβ受体”与术语“CTBR”可互换使用。
在特定实施方案中，CTBR多肽包括TGFβR2的细胞外TGFβ结合结构域、跨膜结构域、免疫受体的细胞内信号传导结构域，所述免疫受体包括但不限于细胞因子受体、白细胞介素受体、模式识别受体和toll样受体；多肽裂解信号；以及TGFβR1的细胞外TGFβ结合结构域、跨膜结构域和免疫受体的细胞内信号传导结构域，所述免疫受体包括但不限于细胞因子受体、白细胞介素受体、模式识别受体和toll样受体。
在特定实施方案中，CTBR是包括以下的融合多肽：第一多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ结合结构域、跨膜结构域、免疫受体的细胞内信号传导结构域，所述免疫受体包括但不限于细胞因子受体、白细胞介素受体、模式识别受体和toll样受体；多肽裂解信号；以及第二多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ结合结构域、跨膜结构域和免疫受体的细胞内信号传导结构域，所述免疫受体包括但不限于细胞因子受体、白细胞介素受体、模式识别受体和toll样受体。
在其他特定实施方案中，CTBR是包括以下的多肽复合物：包括TGFβR2的细胞外TGFβ结合结构域、跨膜结构域和免疫受体的细胞内信号传导结构域的多肽，所述免疫受体包括但不限于细胞因子受体、白细胞介素受体、模式识别受体和toll样受体；以及包括TGFβR1的细胞外TGFβ结合结构域、跨膜结构域和免疫受体的细胞内信号传导结构域的多肽，所述免疫受体包括但不限于细胞因子受体、白细胞介素受体、模式识别受体和toll样受体。
如本文所使用，术语“免疫受体”是指在免疫细胞表面上表达的受体，所述受体在结合其同源配体时调节免疫应答。适用于特定实施方案中的免疫受体包括但不限于细胞因子受体、白细胞介素受体、模式识别受体和toll样受体，其中通过免疫受体的信号传导刺激免疫应答。
可用于本文所涵盖的特定实施方案中的免疫受体跨膜和细胞内信号传导结构域的说明性实例包括但不限于分离自IL-12受体、IL-7受体、IL-15受体、IL-21受体、IL-2受体、IL-1受体、IL-18受体、IL-36受体、I型IFN受体、TLR1受体、TLR2受体、TLR3受体、TLR4受体、TLR5受体、TLR6受体、TLR7受体、TLR8受体、TLR9受体或TLR10受体的跨膜和细胞内信号传导结构域。
可用于本文所涵盖的特定实施方案中的免疫受体跨膜和细胞内信号传导结构域的另外的说明性实例包括但不限于分离自IL-12Rβ2、IL-7Rα、IL-2Rγ、IL-2Rβ、IL-21R、IL-18R1、IL-18RAP、IL-1R1、IL-1RAP、IFNAR1、IFNAR2、IL-1RL2、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9或TLR10的跨膜和细胞内信号传导结构域。
可用于本文所涵盖的特定实施方案中的细胞因子受体跨膜和细胞内信号传导结构域的说明性实例包括但不限于分离自IL-12Rβ2、IL-7Rα、IL-2Rγ、IL-2Rβ、IL-21R、IL-18R1、IL-18RAP、IL-1R1、IL-1RAP、IFNAR1、IFNAR2和IL-1RL2的跨膜和细胞内信号传导结构域。
可用于本文所涵盖的特定实施方案中的白细胞介素受体跨膜和细胞内信号传导结构域的说明性实例包括但不限于分离自IL-12Rβ2、IL-7Rα、IL-2Rγ、IL-2Rβ、IL-21R、IL-18R1、IL-18RAP、IL-1R1、IL-1RAP和IL-1RL2的跨膜和细胞内信号传导结构域。
可用于本文所涵盖的特定实施方案中的toll样受体跨膜和细胞内信号传导结构域的说明性实例包括但不限于分离自TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9和TLR10的跨膜和细胞内信号传导结构域。
1.CTBR12多肽
白细胞介素-12(IL-12)是一种通过部分增加IFNγ表达、增加T细胞增殖和增强IL-12信号传导来促进T细胞功能和活性的细胞因子。IL-12结合白细胞介素12受体β1(IL-12Rβ1，也称为CD212)和白细胞介素12受体β2(IL-12Rβ2)。
通过IL-12Rβ1和IL-12Rβ2的IL-12信号传导导致STAT3、STAT4和STAT5磷酸化。磷酸化的STAT3/STAT4易位至细胞核并结合IFNγ启动子以增加IFNγ表达。磷酸化的STAT4还将原癌基因(c-Jun)募集到IFNγ启动子以增加IFNγ表达，并且通过增加IL-12Rβ2的转录来增强IL-12信号传导。STAT5磷酸化增加T细胞增殖。
IL-12信号传导还通过将STAT4和c-Jun募集到IL-2R的启动子来增加白细胞介素2受体α(IL-2R)的表达，从而增强T细胞增殖。
在各种实施方案中，通过引入编码一种或多种CTBR12多肽的一种或多种多核苷酸或载体来修饰一种或多种免疫效应细胞，包括表达MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR的免疫效应细胞。在各种实施方案中，通过引入编码CTBR12和MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR的一种或多种多核苷酸或载体来修饰一种或多种免疫效应细胞。
在特定实施方案中，CTBR12将免疫抑制性TGFβ信号转化为IL-12介导的免疫刺激信号。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR12包括：TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-12Rβ1细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-12Rβ2细胞内信号传导结构域。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR12包括：TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-12Rβ2细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-12Rβ1细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR12包括融合多肽，所述融合多肽包括：第一多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-12Rβ1细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及第二多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-12Rβ2细胞内信号传导结构域。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR12包括融合多肽，所述融合多肽包括：第一多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-12Rβ2细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及第二多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-12Rβ1细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，CTBR12是包括第一多肽的多肽复合物，所述第一多肽包括：包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-12Rβ1细胞内信号传导结构域的多肽；以及包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-12Rβ2细胞内信号传导结构域的多肽。在特定实施方案中，CTBR12是包括第一多肽的多肽复合物，所述第一多肽包括：包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-12Rβ2细胞内信号传导结构域的多肽；以及包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-12Rβ1细胞内信号传导结构域的多肽。
在某些实施方案中，多肽包含TGFβR1或TGFβR2的跨膜结构域。在某些实施方案中，多肽包含IL-12Rβ1或IL-12Rβ2的跨膜结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-12Rβ1跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-12Rβ2跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-12Rβ2跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-12Rβ1跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，多肽裂解信号是病毒自裂解多肽；更优选地，病毒自裂解2A多肽；以及更优选地选自由以下项组成的组的病毒自裂解多肽：口蹄疫病毒(FMDV)(F2A)肽、马鼻炎A病毒(ERAV)(E2A)肽、明脉扁刺蛾β四体病毒(TaV)(T2A)肽、猪捷申病毒-1(PTV-1)(P2A)肽、泰勒病毒2A肽以及脑心肌炎病毒2A肽。在一个实施方案中，多肽裂解信号是P2A或T2A病毒自裂解多肽。
2.CTBR7多肽
白细胞介素-7(IL-7)是一种通过部分改善T细胞前体存活和增殖来促进T细胞功能和活性的细胞因子。IL-7结合白细胞介素7受体α(IL-7Rα，也称为CD127)和白细胞介素2受体，共同的γ链(IL-2Rγ，也称为CD132和γc)。IL-7信号传导激活JAK/STAT、PI-3K和Src激酶路径，并且导致抗凋亡基因和促进T细胞前体增殖的基因的转录。
在各种实施方案中，通过引入编码一种或多种CTBR7多肽的一种或多种多核苷酸或载体来修饰一种或多种免疫效应细胞，包括表达MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR的免疫效应细胞。在各种实施方案中，通过引入编码CTBR7和MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR的一种或多种多核苷酸或载体来修饰一种或多种免疫效应细胞。
在特定实施方案中，嵌合TGFβ受体将免疫抑制性TGFβ信号转化为IL-7介导的免疫刺激信号。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR7包括：TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-7Rα细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR7包括：TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-7Rα细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR7包括融合多肽，所述融合多肽包括：第一多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-7Rα细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及第二多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR7包括融合多肽，所述融合多肽包括：第一多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及第二多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-7Rα细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，CTBR7是包括第一多肽的多肽复合物，所述第一多肽包括：包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-7Rα细胞内信号传导结构域的多肽；以及包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域的多肽。在特定实施方案中，CTBR7是包括第一多肽的多肽复合物，所述第一多肽包括：包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域的多肽；以及包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-7Rα细胞内信号传导结构域的多肽。
在某些实施方案中，多肽包含TGFβR1或TGFβR2的跨膜结构域。在某些实施方案中，多肽包含IL-7Rα或IL-2Rγ的跨膜结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-7Rα跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-2Rγ跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-2Rγ跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-7Rα跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，多肽裂解信号是病毒自裂解多肽；更优选地，病毒自裂解2A多肽；以及更优选地选自由以下项组成的组的病毒自裂解多肽：口蹄疫病毒(FMDV)(F2A)肽、马鼻炎A病毒(ERAV)(E2A)肽、明脉扁刺蛾β四体病毒(TaV)(T2A)肽、猪捷申病毒-1(PTV-1)(P2A)肽、泰勒病毒2A肽以及脑心肌炎病毒2A肽。在一个实施方案中，多肽裂解信号是P2A或T2A病毒自裂解多肽。
3.CTBR15多肽
白细胞介素-15(IL-15)是一种通过部分改善T细胞前体存活和增殖来促进T细胞功能和活性的细胞因子。IL-15以高亲和力与IL-15Rα(也称为CD215)结合，随后其与在同一细胞(顺式呈递)上或在不同细胞(反式呈递)上表达的包含IL-2Rβ(也称为IL-15Rβ和CD122)和IL-2Rγ(也称为CD132和γc)的复合物缔合。IL-15信号传导激活JAK/STAT、PI-3K和Src激酶路径，并且导致抗凋亡基因和促进T细胞前体增殖的基因的转录。
在各种实施方案中，通过引入编码一种或多种CTBR15多肽的一种或多种多核苷酸或载体，以及任选地编码IL-15Rα的多核苷酸或载体来修饰一种或多种免疫效应细胞，包括表达MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR的免疫效应细胞。在各种实施方案中，通过引入编码CTBR15和MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR的一种或多种多核苷酸或载体，以及任选地编码IL-15Rα多肽的多核苷酸或载体来修饰一种或多种免疫效应细胞。
在特定实施方案中，嵌合TGFβ受体将免疫抑制性TGFβ信号转化为IL-15介导的免疫刺激信号。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR15包括：TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rβ细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR15包括：TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rβ细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR15包括融合多肽，所述融合多肽包括：第一多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rβ细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及第二多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR15包括融合多肽，所述融合多肽包括：第一多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及第二多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rβ细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，CTBR15是包括第一多肽的多肽复合物，所述第一多肽包括：包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rβ细胞内信号传导结构域的多肽；以及包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域的多肽。在特定实施方案中，CTBR15是包括第一多肽的多肽复合物，所述第一多肽包括：包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域的多肽；以及包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rβ细胞内信号传导结构域的多肽。
在某些实施方案中，多肽包含TGFβR1或TGFβR2的跨膜结构域。在某些实施方案中，多肽包含IL-2Rβ或IL-2Rγ的跨膜结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-2Rβ跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-2Rγ跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-2Rγ跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-2Rβ跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，多肽裂解信号是病毒自裂解多肽；更优选地，病毒自裂解2A多肽；以及更优选地选自由以下项组成的组的病毒自裂解多肽：口蹄疫病毒(FMDV)(F2A)肽、马鼻炎A病毒(ERAV)(E2A)肽、明脉扁刺蛾β四体病毒(TaV)(T2A)肽、猪捷申病毒-1(PTV-1)(P2A)肽、泰勒病毒2A肽以及脑心肌炎病毒2A肽。在一个实施方案中，多肽裂解信号是P2A或T2A病毒自裂解多肽。
4.CTBR21多肽
白细胞介素-21(IL-21)是一种通过部分改善T细胞前体存活和增殖来促进T细胞功能和活性的细胞因子。IL-21与白细胞介素21受体(IL-21R，也称为CD360)和IL-2Rγ(也称为CD132和γc)结合。IL-21信号传导激活JAK/STAT、PI-3K和Src激酶路径，并且导致抗凋亡基因和促进T细胞前体增殖的基因的转录。
在各种实施方案中，通过引入编码一种或多种CTBR21多肽的一种或多种多核苷酸或载体来修饰一种或多种免疫效应细胞，包括表达MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR的免疫效应细胞。在各种实施方案中，通过引入编码CTBR21和MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR的一种或多种多核苷酸或载体来修饰一种或多种免疫效应细胞。
在特定实施方案中，嵌合TGFβ受体将免疫抑制性TGFβ信号转化为IL-21介导的免疫刺激信号。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR21包括：TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-21R细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR21包括：TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-21R细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR21包括融合多肽，所述融合多肽包括：第一多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-21R细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及第二多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR21包括融合多肽，所述融合多肽包括：第一多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及第二多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-21R细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，CTBR21是包括第一多肽的多肽复合物，所述第一多肽包括：包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-21R细胞内信号传导结构域的多肽；以及包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域的多肽。在特定实施方案中，CTBR21是包括第一多肽的多肽复合物，所述第一多肽包括：包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-2Rγ细胞内信号传导结构域的多肽；以及包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-21R细胞内信号传导结构域的多肽。
在某些实施方案中，多肽包含TGFβR1或TGFβR2的跨膜结构域。在某些实施方案中，多肽包含IL-21R或IL-2Rγ的跨膜结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-21R跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-2Rγ跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-2Rγ跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-21R跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，多肽裂解信号是病毒自裂解多肽；更优选地，病毒自裂解2A多肽；以及更优选地选自由以下项组成的组的病毒自裂解多肽：口蹄疫病毒(FMDV)(F2A)肽、马鼻炎A病毒(ERAV)(E2A)肽、明脉扁刺蛾β四体病毒(TaV)(T2A)肽、猪捷申病毒-1(PTV-1)(P2A)肽、泰勒病毒2A肽以及脑心肌炎病毒2A肽。在一个实施方案中，多肽裂解信号是P2A或T2A病毒自裂解多肽。
5.CTBR18多肽
白细胞介素-18(IL-18)是一种通过部分增加IFNγ表达、增加T细胞增殖和防止活化诱导的细胞死亡(AICD)来促进T细胞功能和活性的细胞因子。IL-1 8结合白细胞介素18受体1(IL-18R1，也称为CD218a)和白细胞介素18受体辅助蛋白(IL-18RAP，CD218b)。
通过IL-18R1和IL-18RAP的IL-18信号传导导致通过MyD88衔接蛋白的活化和IRAK4磷酸化。IRAK4的磷酸化和随后的IRAK1/2的磷酸化最终导致NF-κB和AP-1转录因子的活化，以增加IFNγ表达并增加对IL-12的敏感性。由IL-18诱导的转录程序还增加T细胞增殖并防止AICD。
在各种实施方案中，通过引入编码一种或多种CTBR18多肽的一种或多种多核苷酸或载体来修饰一种或多种免疫效应细胞，包括表达MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR的免疫效应细胞。在各种实施方案中，通过引入编码CTBR18和MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR的一种或多种多核苷酸或载体来修饰一种或多种免疫效应细胞。
在特定实施方案中，嵌合TGFβ受体将免疫抑制性TGFβ信号转化为IL-18介导的免疫刺激信号。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR18包括：TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-18RAP细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-18R1细胞内信号传导结构域。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR18包括：TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-18R1细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-18RAP细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR18包括融合多肽，所述融合多肽包括：第一多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-18R1细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及第二多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-18RAP细胞内信号传导结构域。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR18包括融合多肽，所述融合多肽包括：第一多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-18RAP细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及第二多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-18R1细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，CTBR18是包括第一多肽的多肽复合物，所述第一多肽包括：包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-18RAP细胞内信号传导结构域的多肽；以及包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-18R1细胞内信号传导结构域的多肽。在特定实施方案中，CTBR18是包括第一多肽的多肽复合物，所述第一多肽包括：包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-18R1细胞内信号传导结构域的多肽；以及包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-18RAP细胞内信号传导结构域的多肽。
在某些实施方案中，多肽包含TGFβR1或TGFβR2的跨膜结构域。在某些实施方案中，多肽包含IL-18R1或IL-18RAP的跨膜结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-18RAP跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-18R1跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-18R1跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-18RAP跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，多肽裂解信号是病毒自裂解多肽；更优选地，病毒自裂解2A多肽；以及更优选地选自由以下项组成的组的病毒自裂解多肽：口蹄疫病毒(FMDV)(F2A)肽、马鼻炎A病毒(ERAV)(E2A)肽、明脉扁刺蛾β四体病毒(TaV)(T2A)肽、猪捷申病毒-1(PTV-1)(P2A)肽、泰勒病毒2A肽以及脑心肌炎病毒2A肽。在一个实施方案中，多肽裂解信号是P2A或T2A病毒自裂解多肽。
6.CTBR1多肽
白细胞介素-1(IL-1)是一种通过部分增加IFNγ表达、增加T细胞增殖和加强防止活化诱导的细胞死亡(AICD)来促进T细胞功能和活性的细胞因子。IL-1结合白细胞介素1受体1(IL-1R1，也称为CD121a)和白细胞介素1受体辅助蛋白(IL-1RAP)。
通过IL-1R1和IL-1RAP的IL-1信号传导导致通过MyD88衔接蛋白的活化和IRAK4磷酸化。IRAK4的磷酸化和随后的IRAK1/2的磷酸化最终导致NF-κB和AP-1转录因子的活化，以增加IFNγ表达并增加对IL-12的敏感性。由IL-1诱导的转录程序还增加T细胞增殖并防止AICD。
在各种实施方案中，通过引入编码一种或多种CTBR1多肽的一种或多种多核苷酸或载体来修饰一种或多种免疫效应细胞，包括表达MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR的免疫效应细胞。在各种实施方案中，通过引入编码CTBR1和MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR的一种或多种多核苷酸或载体来修饰一种或多种免疫效应细胞。
在特定实施方案中，嵌合TGFβ受体将免疫抑制性TGFβ信号转化为IL-1介导的免疫刺激信号。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR1包括：TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-1RAP细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-1R1细胞内信号传导结构域。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR1包括：TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-1R1细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-1RAP细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR1包括融合多肽，所述融合多肽包括：第一多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-1R1细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及第二多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-1RAP细胞内信号传导结构域。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR1包括融合多肽，所述融合多肽包括：第一多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-1RAP细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及第二多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-1R1细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，CTBR1是包括第一多肽的多肽复合物，所述第一多肽包括：包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-1RAP细胞内信号传导结构域的多肽；以及包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-1R1细胞内信号传导结构域的多肽。在特定实施方案中，CTBR1是包括第一多肽的多肽复合物，所述第一多肽包括：包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-1R1细胞内信号传导结构域的多肽；以及包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和IL-1RAP细胞内信号传导结构域的多肽。
在某些实施方案中，多肽包含TGFβR1或TGFβR2的跨膜结构域。在某些实施方案中，多肽包含IL-1R1或IL-1RAP的跨膜结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-1RAP跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-1R1跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-1R1跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域和IL-1RAP跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，多肽裂解信号是病毒自裂解多肽；更优选地，病毒自裂解2A多肽；以及更优选地选自由以下项组成的组的病毒自裂解多肽：口蹄疫病毒(FMDV)(F2A)肽、马鼻炎A病毒(ERAV)(E2A)肽、明脉扁刺蛾β四体病毒(TaV)(T2A)肽、猪捷申病毒-1(PTV-1)(P2A)肽、泰勒病毒2A肽以及脑心肌炎病毒2A肽。在一个实施方案中，多肽裂解信号是P2A或T2A病毒自裂解多肽。
7.CTBR.TLR多肽
Toll样受体(TLR1至TLR10)是检测侵入病原体并激活先天性和适应性免疫应答的模式识别受体。各种配体对TLR的活化导致促炎性转录程序的诱导和多种炎性细胞因子的表达。
TLR信号传导通过TLR信号传导结构域的同源二聚化发生，导致通过MyD88衔接蛋白的活化和IRAK4磷酸化。IRAK4的磷酸化和随后的IRAK1/2的磷酸化最终导致NF-κB和AP-1转录因子的活化，以增加炎性细胞因子产生并诱导增殖。TLR活化也可以导致IRF3和IRF7转录因子的活化。
在各种实施方案中，通过引入编码一种或多种CTBR.TLR多肽的一种或多种多核苷酸或载体来修饰一种或多种免疫效应细胞，包括表达MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR的免疫效应细胞。在各种实施方案中，通过引入编码CTBR.TLR和MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR的一种或多种多核苷酸或载体来修饰一种或多种免疫效应细胞。
在特定实施方案中，嵌合TGFβ受体将免疫抑制性TGFβ信号转化为TLR介导的免疫刺激信号。在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR.TLR包括：TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和TLR细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和相同TLR信号传导结构域。
在特定实施方案中，本文所涵盖的CTBR.TLR包括融合多肽，所述融合多肽包括：第一多肽，其包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和TLR细胞内信号传导结构域；多肽裂解信号；以及第二多肽，其包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和相同TLR信号传导结构域。
在特定实施方案中，CTBR.TLR是包括第一多肽的多肽复合物，所述第一多肽包括：包括TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和TLR细胞内信号传导结构域的多肽；以及包括TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域、跨膜结构域和相同TLR细胞内信号传导结构域的多肽。
在某些实施方案中，多肽包含TGFβR1或TGFβR2的跨膜结构域。在某些实施方案中，多肽包含TLR的跨膜结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域和TLR跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，多肽包含TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域和TLR跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。
在特定实施方案中，多肽裂解信号是病毒自裂解多肽；更优选地，病毒自裂解2A多肽；以及更优选地选自由以下项组成的组的病毒自裂解多肽：口蹄疫病毒(FMDV)(F2A)肽、马鼻炎A病毒(ERAV)(E2A)肽、明脉扁刺蛾β四体病毒(TaV)(T2A)肽、猪捷申病毒-1(PTV-1)(P2A)肽、泰勒病毒2A肽以及脑心肌炎病毒2A肽。在一个实施方案中，多肽裂解信号是P2A或T2A病毒自裂解多肽。
E.多肽
本文涵盖各种多肽，包括但不限于MAGEA4 TCR、MAGEA4 eTCR、CTBR、包含前述多肽的融合蛋白及其片段。除非作相反说明，否则“多肽”、“肽”和“蛋白质”可互换使用，并且根据常规含义，即，定义为氨基酸序列。在一个实施方案中，“多肽”包括融合多肽和其他变体。多肽可使用多种众所周知的重组和/或合成技术中的任一种制备。多肽不限于特定长度，例如其可以包含全长蛋白质序列、全长蛋白质的片段、或融合蛋白，并且可以包括多肽的翻译后修饰，例如糖基化、乙酰化、磷酸化等，以及本领域中已知的天然存在的和非天然存在的其他修饰。
如本文所使用，“分离的肽”或“分离的多肽”等是指从细胞环境中以及从与细胞的其他组分的缔合中体外分离和/或纯化的肽或多肽分子，即所述肽或多肽分子未与体内物质显著缔合。
多肽包括“多肽变体”。多肽变体与天然存在的多肽的不同之处可以在于一个或多个取代、缺失、添加和/或插入。这种变体可以是天然存在的或可以通过合成生成，例如通过修饰上述多肽序列中的一个或多个。例如，在特定实施方案中，可以期望通过将一个或多个取代、缺失、添加和/或插入引入到多肽中来改进多肽的结合亲和力和/或其他生物性质。在特定实施方案中，多肽包含与本文所涵盖的参考序列中的任何一个有至少约65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、86％、97％、98％或99％氨基酸一致性的多肽，通常其中变体维持参考序列的至少一种生物活性。
多肽变体包含生物活性“多肽片段”。生物活性多肽片段的示例性实例包括DNA结合结构域、核酸酶结构域等。如本文所使用，术语“生物活性片段”或“最小生物活性片段”是指保留至少100％、至少90％、至少80％、至少70％、至少60％、至少50％、至少40％、至少30％、至少20％、至少10％、或至少5％的天然存在的多肽活性的多肽片段。在某些实施方案中，多肽片段可包含至少5个至约1700个氨基酸长的氨基酸链。应了解，在某些实施方案中，片段是至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700个或更多个氨基酸长。
在特定实施方案中，本文所述的多肽可包含一个或多个表示为“X”的氨基酸。“X”如果存在于氨基酸SEQ ID NO中，则指任何一个或多个氨基酸。在特定实施方案中，表示融合蛋白的SEQ ID NO包括累积地代表任何氨基酸序列的连续X残基的序列。
如上文所述，多肽可以通过不同方式改变，包括氨基酸取代、缺失、截短和插入。用于此类操作的方法是本领域中一般已知的。例如，参考多肽的氨基酸序列变体可以通过DNA中的突变制备。用于诱变和核苷酸序列改变的方法是本领域中众所周知的。参见，例如Kunkel(1985，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.82：488-492)，Kunkel等人，(1987，Methods inEnzymol，154：367-382)，美国专利第4,873,192号，Watson，J.D.等人(Molecular Biologyof the Gene，Fourth Edition，Benjamin/Cummings，Menlo Park，Calif.，1987)和其中引用的参考文献。关于不影响目的蛋白质的生物活性的适当氨基酸取代的指导可见于Dayhoff等人，(1978)Atlas of Protein Sequence and Structure(Natl.Biomed.Res.Found.，Washington，D.C.)的模型中。
在某些实施方案中，多肽变体包括一个或多个保守取代。“保守性取代”是氨基酸被具有类似特性的另一个氨基酸取代，使得肽化学领域的技术人员能预期多肽的二级结构和亲水性质基本上不变的取代。修饰可以针对特定实施方案中所涵盖的多核苷酸和多肽的结构进行并且仍然获得了对具有期望特性的变体或衍生多肽进行编码的功能分子。当希望改变多肽的氨基酸序列以产生等效或甚至改良的变体多肽时，本领域技术人员例如可以改变编码DNA序列的一个或多个密码子，例如根据表1。
表1-氨基酸密码子
Figure BDA0003414818760000371
可以使用本领域中公知的计算机程序如DNASTAR、DNA Strider、Geneious、MacVector或Vector NTI软件找到关于确定哪些氨基酸残基可以被取代、插入或缺失而不消除生物活性的指南。优选地，本文所公开的蛋白质变体的氨基酸改变是保守氨基酸改变，即带类似电荷或不带电荷的氨基酸的取代。保守性氨基酸变化涉及侧链相关的一组氨基酸中的一个的取代。天然存在的氨基酸一般被分成四组：酸性氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸)、碱性氨基酸(赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、非极性氨基酸(丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)和不带电极性氨基酸(甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸)。苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸有时共同归类为芳香族氨基酸。在肽或蛋白质中，适合的氨基酸保守性取代是本领域技术人员已知的且一般可以在不改变所得分子的生物活性的情况下进行。本领域技术人员应认识到，一般说来，多肽非必需区中的单一氨基酸取代基本上不会改变生物活性(参见例如Watson等人Molecular Biology ofthe Gene，第4版，1987，The Benjamin/Cummings Pub.Co.，p.224)。
在一个实施方案中，在期望表达两个或更多个多肽的情况下，如本文别处所公开的，对所述两个或多个多肽进行编码的多核苷酸序列可以通过IRES序列分开。
特定实施方案中所涵盖的多肽包括融合多肽。在特定实施方案中，提供了融合多肽和编码融合多肽的多核苷酸。融合多肽和融合蛋白是指具有至少二个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个多肽区段的多肽。
在另一个实施方案中，两个或更多个多肽可表达为融合蛋白形式，所述融合蛋白包含一个或多个如本文别处所公开的自裂解多肽序列。
融合多肽可包含一个或多个多肽结构域或区段，包括但不限于信号肽、细胞穿透肽结构域(CPP)、DNA结合结构域、核酸酶结构域等、表位标签(例如麦芽糖结合蛋白(“MBP”)、谷胱甘肽S转移酶(GST)、HIS6、MYC、FLAG、V5、VSV-G以及HA)、多肽接头以及多肽裂解信号。融合多肽典型地是C末端连接至N末端，不过它们还可以是C末端连接至C末端、N末端连接至N末端、或N末端连接至C末端。在特定实施方案中，融合蛋白的多肽可以遵循任何次序。融合多肽或融合蛋白还可以包括保守性修饰的变体、多态性变体、等位基因、突变体、子序列和种间同系物，只要保存融合多肽所希望的活性即可。融合多肽可以通过化学合成方法或通过二个部分之间的化学键联制造，或一般可以使用其他标准技术制备。构成融合多肽的连接的DNA序列可操作地连接至如本文别处所公开的适合转录或翻译控制元件。
融合多肽可任选地包含接头，所述接头可以用于连接一个或多个多肽或一个多肽内的一个或多个结构域。肽接头序列可以用于将任何两种或更多种多肽组分隔开一定距离，该距离足以确保每一多肽折叠成其适当二级结构和三级结构，从而允许多肽结构域发挥其所希望的功能。此类肽接头序列是使用本领域中的标准技术并入融合多肽中。适合肽接头序列可以基于以下因素选择：(1)其能够呈现柔性延长构象；(2)其无法呈现能与第一多肽和第二多肽上的功能性表位相互作用的二级结构；以及(3)缺乏可能与多肽功能性表位反应的疏水性或带电残基。优选的肽接头序列含有Gly、Asn和Ser残基。其他接近中性的氨基酸，如Thr和Ala，也可以用于接头序列中。可以有用地用作接头的氨基酸序列包括Maratea等人，Gene 40：39-46，1985；Murphy等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83：8258-8262，1986；美国专利第4,935,233号和美国专利第4,751,180号。当特定融合多肽区段含有可用于隔开功能性结构域并防止空间干扰的非必需N末端氨基酸区域时，不需要接头序列。优选的接头典型地是作为重组融合蛋白的一部分合成的柔性氨基酸子序列。接头多肽可以是在1个与200个氨基酸之间的长度、在1个与100个氨基酸之间的长度或在1个与50个氨基酸之间的长度，包括其间的所有整数值。
示例性多肽裂解信号包括多肽裂解识别位点，如蛋白酶裂解位点、核酸酶裂解位点(例如罕见限制酶识别位点、自裂解核酶识别位点)和自裂解病毒寡肽(参见deFelipe和Ryan，2004.Traffic，5(8)；616-26)。
合适的蛋白酶切割位点和自切割肽是技术人员已知的(参见，例如Ryan等人，1997.J.Gener.Virol.78，699-722；Scymczak等人.(2004)Nature Biotech.5，589-594)。示例性蛋白酶裂解位点包括但不限于马铃薯Y病毒(potyvirus)NIa蛋白酶(例如烟草蚀刻病毒蛋白酶)、马铃薯Y病毒HC蛋白酶、马铃薯Y病毒P1(P35)蛋白酶、大麦花叶病毒(byovirus)NIa蛋白酶、大麦花叶病毒RNA-2编码的蛋白酶、口疮病毒(aphthovirus)L蛋白酶、肠病毒2A蛋白酶、鼻病毒2A蛋白酶、细小核糖核酸3C蛋白酶、豇豆花叶病毒(comovirus)24K蛋白酶、线虫传多面体病毒(nepovirus)24K蛋白酶、水稻东格鲁球状病毒(rice tungro sphericalvirus，RTSV)3C样蛋白酶、欧防风黄点病毒(parsnip yellow fleck virus，PYVF)3C样蛋白酶、肝素、凝血酶、因子Xa以及肠激酶的裂解位点。在一个实施方案中，烟草蚀刻病毒(TEV)蛋白酶裂解位点因其较高的裂解严格度而成为优选的，例如EXXYXQ(G/S)(SEQ ID NO：20)，例如ENLYFQG(SEQ ID NO：21)和ENLYFQS(SEQ ID NO：22)，其中X表示任何氨基酸(TEV裂解发生于Q与G或Q与S之间)。
在某些实施方案中，自裂解多肽位点包括2A或2A样位点、序列或结构域(Donnelly等人，2001.J.Gen.Virol.82：1027-1041)。在特定实施方案中，病毒2A肽是口疮病毒2A肽、马铃薯Y病毒2A肽或心病毒2A肽。
在一个实施方案中，病毒2A肽选自由以下项组成的组：口蹄疫病毒(FMDV)(F2A)肽、马鼻炎A病毒(ERAV)(E2A)肽、明脉扁刺蛾β四体病毒(TaV)(T2A)肽、猪捷申病毒-1(PTV-1)(P2A)肽、泰勒病毒2A肽以及脑心肌炎病毒2A肽。
2A位点的示例性实例提供于表2中。
表2：
SEQ ID NO：23 GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP
SEQ ID NO：24 ATNFSLLKQAGDVEENPGP
SEQ ID NO：25 LLKQAGDVEENPGP
SEQ ID NO：26 GSGEGRGSLLTCGDVEENPGP
SEQ ID NO：27 EGRGSLLTCGDVEENPGP
SEQ ID NO：28 LLTCGDVEENPGP
SEQ ID NO：29 GSGQCTNYALLKLAGDVESNPGP
SEQ ID NO：30 QCTNYALLKLAGDVESNPGP
SEQ ID NO：31 LLKLAGDVESNPGP
SEQ ID NO：32 GSGVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP
SEQ ID NO：33 VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP
SEQ ID NO：34 LLKLAGDVESNPGP
SEQ ID NO：35 LLNFDLLKLAGDVESNPGP
SEQ ID NO：36 TLNFDLLKLAGDVESNPGP
SEQ ID NO：37 LLKLAGDVESNPGP
SEQ ID NO：38 NFDLLKLAGDVESNPGP
SEQ ID NO：39 QLLNFDLLKLAGDVESNPGP
SEQ ID NO：40 APVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP
SEQ ID NO：41 VTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPTEARHKQKIVAPVKQT
SEQ ID NO：42 LNFDLLKLAGDVESNPGP
SEQ ID NO：43 LLAIHPTEARHKQKIVAPVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP
SEQ ID NO：44 EARHKQKIVAPVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP
在优选实施方案中，多肽包含MAGEA4 TCR、MAGEA4 eTCR或一种或多种CTBR多肽。
F.多核苷酸
在特定实施方案中，提供了编码MAGEA4 TCR、CTBR、工程改造TCR、包含前述多肽的融合蛋白及其片段的多核苷酸。如本文所使用，术语“多核苷酸”或“核酸”是指脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)和DNA/RNA杂交体。多核苷酸可以是单链或双链的并且是重组、合成或分离的。多核苷酸包括但不限于：前信使RNA(前mRNA)、信使RNA(mRNA)、合成RNA、合成mRNA、基因组DNA(gDNA)、PCR扩增DNA、互补DNA(cDNA)、合成DNA或重组DNA。多核苷酸是指至少5个、至少10个、至少15个、至少20个、至少25个、至少30个、至少40个、至少50个、至少100个、至少200个、至少300个、至少400个、至少500个、至少1000个、至少5000个、至少10000个或至少15000个或更多个核苷酸长度，以及所有中间长度的核苷酸，即核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸或任一类型核苷酸的修饰形式的聚合形式。容易理解的是，在此情形中，“中间长度”意思指在引述值之间的任何长度，如6、7、8、9等；101、102、103等；151、152、153等；201、202、203等。在特定实施方案中，多核苷酸或变体与参考序列具有至少或约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％，76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％，85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。
在特定实施方案中，多核苷酸可以经历密码子优化。如本文所使用，术语“密码子优化的”是指取代编码多肽的多核苷酸中的密码子以便增加所述多肽的表达、稳定性和/或活性。影响密码子优化的因素包括但不限于以下一个或多个：(i)两种或更多种生物体或基因之间密码子偏好的变化或合成地构造的偏好表；(ii)生物体、基因或基因集内密码子偏好程度的变化；(iii)包括环境在内的密码子的系统性变化；(iv)根据解码tRNA得到的密码子变化；(v)根据总体或三联体一个位置中的GC％得到的密码子变化；(vi)与参考序列，例如天然存在序列相似程度的变化；(vii)密码子频率截止值的变化；(viii)由DNA序列转录的mRNA的结构特性；(ix)有关作为设计密码子取代集合的基础的DNA序列的功能的先验知识；(x)每个氨基酸的密码子集的系统性变化；和/或(xi)伪翻译起始位点的分离移除。
如本文所使用，术语“核苷酸”是指与磷酸化糖的N-糖苷键联中的杂环含氮碱基。核苷酸应理解为包括天然碱基，以及多种本领域认可的经过修饰的碱基。此类碱基一般位于核苷酸糖部分的1′位处。核苷酸一般包含碱基、糖和磷酸酯基。在核糖核酸(RNA)中，糖是核糖，并且在脱氧核糖核酸(DNA)中，糖是脱氧核糖，即，不含核糖中存在的羟基的糖。示例性天然含氮碱基包括嘌呤，即腺苷(A)和胍(G)；以及嘧啶，即胞苷(C)和胸苷(T)(或在RNA情形中是尿嘧啶(U))。脱氧核糖的C-1原子键结至嘧啶的N-1或嘌呤的N-9。核苷酸通常是单磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯。核苷酸可以是未修饰的或在糖、磷酯和/或碱基部分处经历修饰(也可互换地称为核苷酸类似物、核苷酸衍生物、经过修饰的核苷酸、非天然核苷酸和非标准核苷酸；参见例如WO 92/07065和WO 93/15187)。经过修饰的核酸碱基的实例概述于Limbach等人(1994，Nucleic Acids Res.22，2183-2196)中。
核苷酸也可被视为核苷的磷酸酯，并且酯化是在连接至糖的C-5的羟基上发生。如本文所使用，术语“核苷”是指与糖的N-糖苷键联中的杂环含氮碱基。核苷在本领域中公认为包括天然碱基，并且还包括众所周知的经过修饰的碱基。此类碱基一般位于核苷糖部分的1′位处。核苷一般包含碱基和糖基。核苷可以是未修饰的或在糖和/或碱基部分处经历修饰(也可互换地称为核苷类似物、核苷衍生物、经过修饰的核苷、非天然核苷或非标准核苷)。另外，如上文所述，经过修饰的核酸碱基的实例概述于Limbach等人(1994，NucleicAcids Res.22，2183-2196)中。
在各种示例性实施方案中，本文所涵盖的多核苷酸包括但不限于编码MAGEA4TCR、MAGEA4 eTCR、一种或多种CTBR多肽、融合多肽的多核苷酸，以及包含本文所涵盖的多核苷酸的表达载体、病毒载体和转移质粒。
如本文所使用，术语“多核苷酸变体”和“变体”等是指与参考多核苷酸序列展示相当大的序列同一性的多核苷酸或在下文所定义的严格条件下与参考序列杂交的多核苷酸。这些术语还涵盖因至少一个核苷酸的添加、缺失、取代或修饰而有别于参考多核苷酸的多核苷酸。因此，术语“多核苷酸变体”和“变体”包括一个或多个核苷酸被添加或缺失或修饰，或被置换成不同核苷酸的多核苷酸。就这一点而言，本领域中应充分理解，可以对参考多核苷酸进行包括突变、添加、缺失和取代在内的某些改变，由此使改变的多核苷酸保持参考多核苷酸的生物功能或活性。
在一个实施方案中，多核苷酸包含在严格条件下与靶核酸序列杂交的核苷酸序列。在“严格条件”下杂交描述使彼此至少60％一致的核苷酸序列保持杂交的杂交方案。一般来说，选择的严格条件比特定序列在既定离子强度和pH下的热熔点(Tm)低约5℃。Tm是在平衡时50％的与靶序列互补的探针与靶序列杂交的温度(在既定离子强度、pH和核酸浓度下)。由于靶序列在Tm下一般是过量存在，故在平衡时50％探针被占据。
如本文所使用，叙述“序列同一性”或例如包含“与......50％一致的序列”是指在核苷酸与核苷酸基础上或在氨基酸与氨基酸基础上，序列在比较窗内一致的程度。因此，“序列同一性百分比”可以通过以下方式计算：在比较窗内比较两个最佳地比对的序列，测定的一致核酸碱基(例如A、T、C、G、I)或一致氨基酸残基(例如Ala、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、Cys以及Met)在两个序列中出现的位置的数目以得到相配位置的数目，用相配位置的数目除以比较窗中的位置总数(即，窗大小)并将结果乘以100，得到序列同一性百分比。包括与本文所述的参考序列中的任何一个具有至少约50％、55％、60％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、86％、97％、98％或99％序列同一性的核苷酸和多肽，通常其中多肽变体维持参考多肽的至少一种生物活性。
用于描述两个或更多个多核苷酸或多肽之间的序列关系的术语包括“参考序列”、“比较窗”、“序列同一性”、“序列同一性百分比”和“基本同一性”。“参考序列”的长度是至少12个，但常常是15至18个且通常是至少25个单体单元，包括核苷酸和氨基酸残基在内。因为两个多核苷酸可以各自包含(1)在两个多核苷酸之间类似的序列(即，仅完整多核苷酸序列的一部分)；和(2)在两个多核苷酸之间相异的序列，两个(或更多个)多核苷酸之间的序列比较典型地通过在“比较窗”内比较该两个多核苷酸的序列以鉴别并比较序列局部区域的相似性来进行。“比较窗”是指具有至少6个、通常约50个至约100个、更通常约100个至约150个连续位置的概念性区段，其中在最佳地比对一个序列与具有相同数目连续位置的参考序列之后，比较该两个序列。为了对两条序列进行最佳比对，比较窗可以包含相较于参考序列(不包含添加或缺失的序列)，约20％或更低百分比的添加或缺失(即，空位)。用于比对比较窗的最佳序列比对可以通过计算机实施算法(GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，WisconsinGenetics Software Package Release 7.0，Genetics Computer Group，575ScienceDrive Madison，WI，USA)或通过由各种所选方法中的任一种生成的检查和最佳比对(即，在比较窗内产生最高同源性百分比)来进行。还可以参考如例如Altschul等人，1997，Nucl.Acids Res.25：3389所公开的BLAST程序家族。序列分析的详细论述可以见于Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley&Sons Inc，1994-1998，第15章的19.3单元。
如本文所使用，“分离的多核苷酸”是指已经从其两侧的处于天然存在状态的序列纯化的多核苷酸，例如，已经从通常与其相邻的序列移除的DNA片段。“分离的多核苷酸”还指互补DNA(cDNA)、重组DNA或自然中不存在且已经通过人手制造的其他多核苷酸。
在各种实施方案中，多核苷酸包括编码本文所涵盖的多肽的mRNA。在某些实施方案中，所述mRNA包含帽、一个或多个核苷酸和聚腺苷酸尾。
描述多核苷酸取向的术语包括：5′(通常是具有游离磷酸酯基的多核苷酸的末端)和3′(通常是具有游离羟基(OH)的多核苷酸的末端)。多核苷酸序列可以按5′至3′取向或3′至5′取向标注。对于DNA和mRNA，5′至3′链被命名为“有义”链、“正”链或“编码”链，因为其序列与前信使(前mRNA)的序列一致[不过在RNA中是尿嘧啶(U)，而在DNA中是胸腺嘧啶(T)]。对于DNA和mRNA，作为由RNA聚合酶转录的链的互补3′至5′链被命名为“模板”链、“反义”链、“负”链或“非编码”链。如本文所使用，术语“反向取向”是指以3′至5′取向书写的5′至3′序列或以5′至3′取向书写的3′至5′序列。
术语“互补”和“互补性”是指通过碱基配对规则相关联的多核苷酸(即，核苷酸序列)。例如，DNA序列5′A G T C A T G 3′的互补链是3′T C A G T A C 5′。后一个序列通常被写成反向互补序列，其中5′端在左侧并且3′端在右侧，即5′C A T G A C T 3′。与其反向互补序列相同的序列被称为回文序列。互补可以是“部分”的，其中仅一些核酸的碱基根据碱基配对规则匹配。或者，在核酸之间可以存在“完全”或“总体”互补性。
此外，本领域的普通技术人员应理解，由于遗传密码的简并性，存在许多对多肽或其变体片段进行编码的核苷酸序列，如本文所描述的。这些多核苷酸中有一些与任何天然基因的核苷酸序列具有最小同源性。尽管如此，在特定实施方案中特别地涵盖由于密码子使用差异而变化的多核苷酸，例如针对人类和/或灵长类动物密码子选择而优化的多核苷酸。在特定实施方案中，多核苷酸是针对表达和/或稳定性而优化的密码子。此外，还可以使用包含本文提供的多核苷酸序列的基因的等位基因。等位基因是因核苷酸的一个或多个突变，如缺失、添加和/或取代而改变的内源基因。
如本文所使用，术语“核酸盒”或“表达盒”是指载体内可以表达RNA且随后表达多肽的基因序列。在一个实施方案中，核酸盒含有目的基因，例如目的多核苷酸。在另一个实施方案中，核酸盒含有一个或多个表达控制序列，例如启动子、增强子、聚腺苷酸序列以及目的基因，例如目的多核苷酸。载体可以包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或更多个核酸盒。核酸盒在载体内是按位置依序地取向，使得盒中的核酸可以被转录成RNA，并且当需要时被翻译成蛋白质或多肽，经历被转化的细胞中的活性所需的适当翻译后修饰，并且通过靶向适当细胞内区室或分泌至细胞外区室中而易位至适当区室中以获得生物活性。优选地，所述盒的3′和5′端适合于迅速地插入载体中，例如其在每一端处具有限制性核酸内切酶位点。在一个优选实施方案中，核酸盒含有用于治疗、预防或改善遗传病症的治疗基因序列。所述盒可以作为单一单元移出并插入质粒或病毒载体中。
多核苷酸包括目的多核苷酸。如本文所使用，术语“目的多核苷酸”是指如本文所预期，编码多肽或融合多肽的多核苷酸或用作模板以转录抑制性多核苷酸的多核苷酸。
如本文其他地方所公开的或如本领域已知的，无论编码序列本身的长度如何，本文所涵盖的多核苷酸可以与其他DNA序列组合，如启动子和/或增强子、非转译区(UTR)、信号序列、Kozak序列、多腺苷酸化信号、另外的限制酶位点、多克隆位点、内部核糖体进入位点(IRES)、重组酶识别位点(例如，LoxP位点、FRT位点和Att位点)、终止密码子、转录终止信号以及对自裂解多肽、表位标记进行编码的多核苷酸，使得所述多核苷酸的总长度可以显著变化。因此，涵盖可以采用几乎任何长度的多核苷酸片段，其总长度优选地受制备的容易性和在预期的重组DNA方案中的使用的限制。
多核苷酸可以使用本领域中已知并且可用的多种公认技术中的任一种制备、操作、表达和/或递送。为了表达所希望的多肽，可将编码所述多肽的核苷酸序列插入适当载体中。
载体的示例性实例包括但不限于质粒、自主复制序列和转座元件，例如SleepingBeauty、PiggyBac。
载体的另外的说明性实例包括但不限于：质粒、噬菌粒、粘粒、人工染色体如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1源性人工染色体(PAC)、如λ噬菌体或M13噬菌体等噬菌体以及动物病毒。
可用作载体的病毒的示例性实例包括但不限于逆转录病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(例如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒以及乳多泡病毒(例如SV40)。
表达载体的示例性实例包括但不限于用于在哺乳动物细胞中表达的pClneo载体(Promega)；用于慢病毒介导的基因转移和在哺乳动物细胞中表达的pLenti4/V5-DESTTM、pLenti6/V5-DESTTM和pLenti6.2/V5-GW/lacZ(Invitrogen)。在特定实施方案中，本文所公开的多肽的编码序列可连接至此类表达载体中以在哺乳动物细胞中表达所述多肽。
在特定实施方案中，载体是游离型载体或维持在染色体外的载体。如本文所使用，术语“附加型”是指能够复制而不整合到宿主的染色体DNA中且不会从分裂的宿主细胞中逐渐丧失的载体，这还意味着所述载体在染色体外或附加地复制。
表达载体中存在的“表达控制序列”、“控制元件”或“调节序列”是载体的那些非翻译区(复制起点、选择盒、启动子、增强子、翻译起始信号(Shine Dalgarno序列或Kozak序列)内含子、多腺苷酸化序列、5′和3′非转译区)，其与宿主细胞蛋白相互作用以进行转录和翻译。这些元件在其强度和特异性方面可能有所变化。取决于所利用的载体系统和宿主，可使用多种适合的转录与翻译元件，包括遍在型启动子和诱导型启动子。
在特定实施方案中，多核苷酸包括载体，所述载体包括但不限于表达载体和病毒载体。载体可以包括一种或多种外源、内源或异源控制序列，如启动子和/或增强子。“内源控制序列”是与基因组中的给定基因天然连接的序列。“外源控制序列”是通过基因操纵(即分子生物学技术)与被放置成与基因并置使得此基因的转录由所连接的增强子/启动子引导的序列。“异源控制序列”是与被基因操纵的细胞来自不同物种的外源序列。“合成”控制序列可以包括一种或多种内源和/或外源序列和/或在体外或计算机中所确定的为特定疗法提供最佳启动子和/或增强子活性的序列的元件。
如本文所使用，术语“启动子”是指RNA聚合酶结合的多核苷酸(DNA或RNA)的识别位点。RNA聚合酶启动并转录与启动子可操作地连接的多核苷酸。在特定实施方案中，在哺乳动物细胞中起作用的启动子包括位于起始转录位点上游大约25个到30个碱基的AT富含区和/或发现距离转录起始上游70个到80个碱基的另一个序列，即N可以是任何核苷酸的CNCAAT区。
术语“增强子”是指含有能够提供增强的转录的序列并且在一些情况下可以不依赖于其相对于另一个控制序列的朝向而起作用的DNA的区段。增强子可以与启动子和/或其他增强子元件协同地或相加性地起作用。术语“启动子/增强子”是指含有能够提供启动子和增强子两者的功能的序列的DNA的区段。
术语“可操作地连接”是指所描述的组分的关系允许其以其预定方式起作用的并接。在一个实施方案中，术语是指核酸表达控制序列(如启动子和/或增强子)与第二多核苷酸序列，例如，所关注的多核苷酸之间的功能性连接，其中表达控制序列引导对应于第二序列的核酸的转录。
如本文所使用，术语“组成型表达控制序列”是指连续地或连续不断地允许可操作地连接的序列的转录的启动子、增强子或启动子/增强子。组成型表达控制序列可以是允许在各种各样的细胞和组织类型中表达的“普遍存在的”启动子、增强子或启动子/增强子或分别允许在受限种类的细胞和组织类型中表达的“细胞特异性”、“细胞类型特异性”、“细胞谱系特异性”或“组织特异性”启动子、增强子或启动子/增强子。
适合于在特定实施方案中使用的示例性普遍存在的表达控制序列包括但不限于：巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子、病毒猿猴病毒40(SV40)(例如，早期或晚期)、莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)LTR启动子、Rous肉瘤病毒(RSV)LTR、单纯疱疹病毒(HSV)(胸苷激酶)启动子、H5、来自牛痘病毒的P7.5启动子和P11启动子、延伸因子1-α(EF1a)启动子、早期生长应答1(EGR1)、铁蛋白H(FerH)、铁蛋白L(FerL)、甘油醛3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、真核翻译起始因子4A1(EIF4A1)、热休克70kDa蛋白5(HSPA5)、热休克蛋白90kDaβ成员1(HSP90B1)、热休克蛋白70kDa(HSP70)、β-驱动蛋白(β-KIN)、人ROSA 26基因座(Irions等人，NatureBiotechnology 25，1477-1482(2007))、泛素C启动子(UBC)、磷酸甘油酸激酶-1(PGK)启动子、巨细胞病毒增强子/鸡β-肌动蛋白(CAG)启动子、β-肌动蛋白启动子和骨髓增殖性肉瘤病毒增强子阴性对照区缺失并且d1587rev引物结合位点取代的(MND)U3启动子(Haas等人，Journal of Virology.2003；77(17)：9439-9450)。
在一个实施方案中，载体包括MNDU3启动子。
在一个实施方案中，载体包括包含人EF1a基因的第一内含子的EF1a启动子。
在一个实施方案中，载体包括缺少人EF1a基因的第一内含子的EF1a启动子。
在特定实施方案中，可能期望使用细胞、细胞类型、细胞谱系或组织特异性表达控制序列来实现期望的多核苷酸序列的细胞类型特异性、谱系特异性或组织特异性表达(例如，仅在细胞类型、细胞谱系或组织的亚群中或在发育的特定阶段期间表达编码多肽的特定核酸)。
在特定实施方案中，可能需要将多核苷酸表达为T细胞特异性启动子。
如本文所使用，“条件表达”可以是指任何类型的条件表达，包括但不限于：诱导型表达；可阻遏型表达；在具有特定生理、生物或疾病状态等的细胞或组织中的表达。此定义不旨在排除细胞类型或组织特异性表达。某些实施方案提供了所关注多核苷酸的条件表达，例如通过使细胞、组织、生物体等经受导致多核苷酸表达或导致由所关注多核苷酸编码的多核苷酸的表达增加或减少的治疗或病状来控制表达。
诱导型启动子/系统的说明性实例包括但不限于：类固醇诱导型启动子如编码糖皮质激素或雌激素受体的基因的启动子(通过用对应的激素处理可诱导)、金属硫蛋白启动子(通过各种重金属处理可诱导)、MX-1启动子(通过干扰素可诱导)、“基因开关(GeneSwitch)”米非司酮可调节系统(Sirin等人，2003，Gene，323：67)、cumate诱导型基因开关(WO 2002/088346)、四环素依赖性调节系统等。诱导剂包括但不限于糖皮质激素、雌激素、米非司酮(RU486)、金属、干扰素、小分子、cumate、四环素、多西环素及其变体。
如本文所使用，“内部核糖体进入位点”或“IRES”是指促进内部核糖体直接进入顺反子(蛋白编码区)的如ATG等起始密码子由此导致基因的非帽依赖性转译的元件。参见，例如，Jackson等人，1990.Trends Biochem Sci 15(12)：477-83)以及Jackson和Kaminski.1995.RNA 1(10)：985-1000。本领域的技术人员通常采用的IRES的实例包括美国专利第6,692,736号中所描述的那些。本领域已知的“IRES”的其他实例包括但不限于可从微小RNA病毒获得的IRES(Jackson等人，1990)和可从病毒或细胞mRNA来源获得的IRES，例如免疫球蛋白重链结合蛋白(BiP)、血管内皮生长因子(VEGF)(Huez等人，1998.Mol.Cell.Biol.18(11)：6178-6190)、成纤维细胞生长因子2(FGF-2)和胰岛素样生长因子(IGFII)、翻译起始因子eIF4G和酵母转录因子TFIID和HAP4、可从Novagen商购的Ephelomencycarditis病毒(EMCV)(Duke等人，1992.J.Virol 66(3)：1602-9)和VEGF IRES(Huez等人，1998.Mol Cell Biol 18(11)：6178-90)。已经报道了小核糖核酸病毒科(Picomaviridae)、二顺反子病毒科(Dicistroviridae)和黄病毒科(Flaviviridae)物种的病毒基因组中以及HCV、弗里德鼠白血病病毒(Friend murine leukemia virus，FrMLV)和莫洛尼氏鼠白血病病毒(Moloney murine leukemia virus，MoMLV)中的IRES。
在一个实施方案中，本文所涵盖的多核苷酸中使用的IRES是EMCVIRES。
在特定实施方案中，多核苷酸包含具有共有Kozak序列并且编码所需多肽的多核苷酸。如本文所使用，术语“Kozak序列”是指大大促进mRNA与核糖体的小亚基的初始结合并增加转译的短核苷酸序列。共有Kozak序列是(GCC)RCCATGG(SEQ ID NO：45)，其中R是嘌呤(A或G)(Kozak，1986.Cell.44(2)：283-92，以及Kozak，1987.NucleicAcidsRes.15(20)：8125-48)。
引导异源核酸转录物的高效终止和聚腺苷酸化的元件将增加异源基因的表达。转录终止信号一般见于聚腺苷酸化信号的下游。在特定实施方案中，载体在编码待表达多肽的多核苷酸的3′端包含聚腺苷酸化序列。如本文所使用，术语“聚腺苷酸位点(polyAsite)”或“聚腺苷酸序列(polyA sequence)”表示引导由RNA聚合酶II引起的初生RNA转录物终止和聚腺苷酸化的DNA序列。聚腺苷酸化序列可以通过在编码序列的3′端添加聚腺苷酸尾来促进mRNA稳定性，并因此促使翻译效率增加。裂解和聚腺苷酸化是由RNA中的聚腺苷酸序列引导。哺乳动物mRNA前体(pre-mRNA)的核心聚腺苷酸序列有两个识别元件侧接裂解-聚腺苷酸化位点上。典型地，几乎不变的AAUAAA六聚物位于富含U或GU残基的可变性较高的元件上游20-50个核苷酸处。初生转录物的裂解发生于这两个元件之间并偶合以将多达250个腺苷添加至5′裂解产物中。在特定实施方案中，核心聚腺苷酸序列是理想的聚腺苷酸序列(例如AATAAA、ATTAAA、AGTAAA)。在特定实施方案中，聚腺苷酸序列是SV40聚腺苷酸序列、牛生长激素聚腺苷酸序列(BGHpA)、兔β-珠蛋白聚腺苷酸序列(rβgpA)、或本领域中已知的另一种合适的异源或内源聚腺苷酸序列。
在一些实施方案中，多核苷酸或含有多核苷酸的细胞利用自杀基因，包含用于减小直接毒性和/或不受控制的增殖的风险的诱导型自杀基因。在具体实施方案中，自杀基因对含有多核苷酸或细胞的宿主不产生免疫性。可以使用的自杀基因的某个实例是半胱天冬酶-9或半胱天冬酶-8或胞嘧啶脱氨酶。可以使用特定的二聚化学诱导剂(CID)来活化半胱天冬酶-9。
在特定实施方案中，一种或多种编码MAGEA4 TCRα链和TCRβ链(包括eTCR链)的多核苷酸和/或一种或多种CTBR多肽通过非病毒或病毒载体引入到细胞(例如，免疫效应细胞)中。术语“载体”在本文中用以指能够转移或输送另一个核酸分子的核酸分子。被转移的核酸一般被连接至载体核酸分子，例如插入载体核酸分子中。载体可以包括引导在细胞中自主复制的序列，或可以包括足以允许整合至宿主细胞DNA中的序列。在特定实施方案中，使用了非病毒载体将本文所涵盖的一个或多个多核苷酸递送至T细胞中。
非病毒载体的示例性实例包括但不限于mRNA、质粒(例如DNA质粒或RNA质粒)、转座子、粘粒和细菌人工染色体。
非病毒递送特定实施方案中所涵盖的多核苷酸的示例性方法包括但不限于：电穿孔、声致穿孔、脂质体转染、显微注射、基因枪法、病毒粒子、脂质体、免疫脂质体、纳米粒子、聚阳离子或脂质：核酸偶联物、裸DNA、人工病毒粒子、DEAE-葡聚糖介导的转移、基因枪以及热休克。
适用于特定实施方案中所涵盖的特定实施方案中使用的多核苷酸递送系统的示例性实例包括但不限于由Amaxa Biosystems、Maxcyte，Inc.、BTX Molecular DeliverySystems和Copernicus Therapeutics Inc.提供的那些。脂质转染试剂是商业销售的(例如，TransfectamTM和LipofectinTM)。已经在文献中描述了适合于多核苷酸的高效受体识别脂质转染的阳离子脂质和中性脂质。参见例如Liu等人(2003)Gene Therapy.10：180-187；和Balazs等人(2011)Journal of Drug Delivery.2011：1-12。在特定实施方案中还涵盖了抗体靶向的、源自细菌的、基于无生命纳米细胞的递送。
在各种实施方案中，多核苷酸是引入细胞中以便瞬时表达所需多肽的mRNA。如本文所使用，“瞬时”是指非整合转基因在数小时、数天或数周的时间段内的表达，其中表达的时间段小于多核苷酸(如果整合到基因组中或包含在细胞中的稳定质粒复制子内)表达的时间段。
在特定实施方案中，使用了病毒载体将本文所涵盖的一个或多个多核苷酸递送至T细胞中。
适用于本文所涵盖的特定实施方案中的病毒载体系统的示例性实例包括但不限于腺相关病毒(AAV)、逆转录病毒(包括慢病毒)、单纯疱疹病毒、腺病毒和牛痘病毒载体。
在特定实施方案中，使用非病毒或病毒载体将编码包含TCRα链(SEQ ID NO：2)和TCRβ链(SEQ ID NO：3)的MAGEA4 TCR(SEQ ID NO：4)的多顺反子多核苷酸和编码CTBR(SEQID NO：8)的多顺反子多核苷酸引入到细胞中。在特定实施方案中，使用非病毒或病毒载体将编码融合蛋白的多顺反子多核苷酸和编码CTBR(SEQ ID NO：8)的多顺反子多核苷酸引入到细胞中，所述融合蛋白编码包含eTCRα链(SEQ ID NO：5)和eTCRβ链(SEQ ID NO：6)的MAGEA4 eTCR(SEQ ID NO：7)。
在特定实施方案中，使用非病毒或病毒载体将编码包含TCRα链(SEQ ID NO：2)和TCRβ链(SEQ ID NO：3)的MAGEA4 TCR(SEQ ID NO：4)和CTBR(SEQ ID NO：8)的多顺反子多核苷酸引入到细胞中。在特定实施方案中，使用非病毒或病毒载体将编码融合蛋白和CTBR(SEQ ID NO：8)的多顺反子多核苷酸引入到细胞中，所述融合蛋白编码包含eTCRα链(SEQID NO：5)和eTCRβ链(SEQ ID NO：6)的MAGEA4 eTCR(SEQ ID NO：7)。
G.经过基因修饰的细胞
在各种实施方案中，对细胞进行修饰以表达MAGEA4 TCR或MAGEA4eTCR和CTBR，用于治疗癌症。可以对细胞进行非基因修饰以表达本文所涵盖的多肽，或者在特定的优选实施方案中，可以对细胞进行基因修饰以表达本文所涵盖的多肽。如本文所使用，术语“基因工程改造”或“基因修饰”是指将额外的遗传物质以DNA或RNA的形式添加到细胞中的总遗传物质中。在特定实施方案中，术语“基因修饰细胞”、“修饰细胞”和“重新定向的细胞”可互换使用。
在特定实施方案中，本文所涵盖的MAGEA4 TCR和一种或多种CTBR多肽在免疫效应细胞中引入并表达，以提高细胞对由TGFβ介导的TME中的免疫抑制性信号的抗性。在特定实施方案中，MAGEA4 eTCR和一种或多种CTBR多肽在免疫效应细胞中引入并表达。
“免疫效应细胞”是免疫系统的任何细胞，其具有一种或多种效应功能(例如，细胞毒性细胞杀伤活性、细胞因子分泌、ADCC和/或CDC的诱导)。本文所涵盖的示例性免疫效应细胞是T淋巴细胞，尤其是细胞毒性T细胞(CTL；CD8+ T细胞)、TIL和辅助T细胞(HTL；CD4+ T细胞。在一个实施方案中，免疫效应细胞包括自然杀伤(NK)细胞。在一个实施方案中，免疫效应细胞包括自然杀伤T(NKT)细胞。免疫效应细胞可以是自体的/自身的(“自我”)或非自体的(“非自我”，例如同种异体的、同基因的或异种的)。
如本文所使用，“自体”是指来自同一受试者的细胞。如本文所使用，“同种异体”是指来自同一物种的在基因上与比较细胞不同的细胞。如本文所使用，“同基因”是指来自不同受试者的在基因上与比较细胞相同的细胞。如本文所使用，“异种”是指来自与比较细胞不同的物种的细胞。在优选实施方案中，所述细胞是自体的。
适用于引入本文所涵盖的CTBR多肽的示例性免疫效应细胞包括T淋巴细胞。术语“T细胞”或“T淋巴细胞”是本领域公认的并且旨在包含胸腺细胞、未成熟T淋巴细胞、成熟T淋巴细胞、静息T淋巴细胞或活化T淋巴细胞。T细胞可以是T辅助(Th)细胞，例如T辅助1(Th1)或T辅助2(Th2)细胞。T细胞可以是辅助T细胞(HTL；CD4+T细胞)CD4+细胞、细胞毒性T细胞(CTL；CD8+T细胞)、CD4+CD8+T细胞、CD4-CD8-T细胞或任何其他的T细胞亚群。适用于特定实施方案中的其他示例性T细胞群包括原生T细胞和记忆T细胞。
如技术人员将理解的，其他细胞也可以用作具有本文所涵盖的MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR和一种或多种CTBR多肽的免疫效应细胞。特别地，免疫效应细胞还包括NK细胞、NKT细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞。免疫效应细胞还包含效应细胞的祖细胞，其中可以在体内或体外诱导这种祖细胞分化成免疫效应细胞。因此，在特定实施方案中，免疫效应细胞包含免疫效应细胞的祖细胞，如源自脐带血、骨髓或动员的外周血的CD34+细胞群内含有的造血干细胞(HSC)，所述HSC在受试者中施用后分化为成熟免疫效应细胞，或可以在体外诱导所述HSC分化为成熟免疫效应细胞。
如本文所使用，经基因工程改造以含有特异性嵌合受体的免疫效应细胞可以称为“抗原特异性重新定向的免疫效应细胞”。
如本文所使用，术语“CD34+细胞”是指在其细胞表面上表达CD34蛋白的细胞。如本文所使用，“CD34”是指通常充当细胞-细胞粘附因子并且参与T细胞进入淋巴结的细胞表面糖蛋白(例如，唾液黏蛋白)。CD34+细胞群含有造血干细胞(HSC)，其在施用给患者时分化并促成所有造血谱系，包含T细胞、NK细胞、NKT细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞/巨噬细胞谱系的细胞。
在特定实施方案中，提供了用于制备表达本文所涵盖的MAGEA4 TCR或MAGEA4eTCR和嵌合TGFβ受体多肽的免疫效应细胞的方法。在一个实施方案中，所述方法包括转染或转导从个体分离的免疫效应细胞，使得免疫效应细胞表达如本文所涵盖的MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR和一种或多种嵌合TGFβ受体多肽。在一个实施方案中，所述方法包括转染或转导从个体分离的免疫效应细胞，使得免疫效应细胞表达MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR和一种或多种嵌合TGFβ受体多肽以及本文所涵盖的MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR。在某些实施方案中，免疫效应细胞从个体分离并经基因修饰而无需在体外进一步操纵。然后，可以将这种细胞直接再次施用到个体。在另外的实施方案中，免疫效应细胞在基因修饰之前首先在体外被活化和刺激以增殖。在这方面，可以在基因修饰之前和/或之后培养免疫效应细胞。
在特定实施方案中，在本文所述的免疫效应细胞的体外操纵或基因修饰之前，从受试者获得细胞来源。在特定实施方案中，经过修饰的免疫效应细胞包括T细胞。
T细胞可以从多种来源获得，包括但不限于周边血液单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、肋膜积液、脾组织以及肿瘤。在某些实施方案中，可以使用技术人员已知的任何数目的技术如沉降(例如，FICOLLTM分离)从采集自受试者的单位血液中获得T细胞。
在其他实施方案中，使用分离的或纯化的T细胞群。在一些实施方案中，在PBMC的分离之后，可以在活化、扩增和/或基因修饰之前或之后将细胞毒性和辅助T淋巴细胞分类为原初、记忆和效应T细胞亚群。
在一个实施方案中，分离的或纯化的T细胞群表达包括但不限于以下的标志物中的一个或多个：CD3+、CD4+、CD8+或其组合。
在某些实施方案中，T细胞从个体分离，并且在进行修饰以表达嵌合TGFβ受体多肽之前首先进行体外活化和刺激以增殖。
为了实现足够治疗剂量的T细胞组合物，通常对T细胞进行一轮或多轮刺激、活化和/或扩增。通常可以使用如例如以下美国专利中所述的方法使T细胞活化和扩增：第6,352,694号；第6,534,055号；第6,905,680号；第6,692,964号；第5,858,358号；第6,887,466号；第6,905,681号；第7,144,575号；第7,067,318号；第7,172,869号；第7,232,566号；第7,175,843号；第5,883,223号；第6,905,874号；第6,797,514号；和第6,867,041号，上述美国专利中的每一个以全文引用的方式并入本文中。在特定实施方案中，在引入编码MAGEA4TCR或MAGEA4 eTCR和嵌合TGFβ受体多肽的载体或多核苷酸之前，使T细胞活化和扩增约6小时、约12小时、约18小时或约24小时。
在一个实施方案中，T细胞在被修饰的同时被活化。
在各种实施方案中，一种产生免疫效应细胞的方法包括活化包括T细胞的细胞群以及扩增所述T细胞群。T细胞活化可以通过以下方式实现：通过T细胞TCR/CD3复合物提供初级刺激信号以及通过辅助分子(例如，CD28)提供次级共刺激信号。
可以通过使T细胞与适当的CD3结合剂(例如，CD3配体或抗CD3单克隆抗体)接触来刺激TCR/CD3复合物。CD3抗体的说明性实例包括但不限于：OKT3、G19-4、BC3和64.1。
除了通过TCR/CD3复合物提供的初级刺激信号外，T细胞应答的诱导还需要第二共刺激信号。在特定实施方案中，CD28结合剂可以用于提供共刺激信号。CD28结合剂的说明性实例包括但不限于：天然CD 28配体，例如，CD28的天然配体(例如，B7蛋白家族的成员，如B7-1(CD80)和B7-2(CD86)；以及能够交联CD28分子的抗CD28单克隆抗体或其片段，例如，单克隆抗体9.3、B-T3、XR-CD28、KOLT-2、15E8、248.23.2和EX5.3D10。
在一个实施方案中，提供初级刺激信号的分子例如通过TCR/CD3复合物提供刺激的分子以及共刺激分子偶联到同一表面。
在某些实施方案中，提供刺激和共刺激信号的结合剂定位于细胞的表面上。这可以通过以下方式实现：使用以适合于结合剂在细胞表面上的表达的形式对结合剂进行编码的核酸转染或转导细胞，或者可替代地将结合剂偶联到细胞表面。
在另一个实施方案中，提供初级刺激信号的分子例如通过TCR/CD3复合物提供刺激的分子以及共刺激分子展现在抗原呈递细胞上。
在一个实施方案中，提供初级刺激信号的分子例如通过TCR/CD3复合物提供刺激的分子以及共刺激分子提供于单独的表面上。
在某个实施方案中，所述结合剂中提供刺激信号和共刺激信号的一种结合剂是可溶的(在溶液中提供)，而另一种或其他结合剂提供于一个或多个表面上。
在特定实施方案中，提供刺激信号和共刺激信号的结合剂两者均以可溶形式(在溶液中提供)提供。
在各种实施方案中，本文所涵盖的用于制备T细胞的方法包括使用抗CD3和抗CD28抗体活化T细胞。
在一个实施方案中，扩增通过本文所涵盖的方法活化的T细胞进一步包括培养包括T细胞的细胞群若干小时(约3小时)到约7天到约28天或其间的任何小时整数值。在另一个实施方案中，可以将T细胞组合物培养14天。在特定实施方案中，将T细胞培养约21天。在另一个实施方案中，将T细胞组合物培养约2至3天。还可以期望若干刺激/活化/扩增循环，使得T细胞的培养时间可以是60天或更长。
在特定实施方案中，适合T细胞培养的条件包含适当的培养基(例如，最小必需培养基或RPMI培养基1640或X-vivo 15(Lonza))和增殖和活力所必需的一个或多个因子，包括但不限于：血清(例如，胎牛血清或人血清)、白细胞介素-2(IL-2)、胰岛素、IFN-γ、IL-4、IL-7、IL-21、GM-CSF、IL-10、IL-12、IL-15、TGFβ和TNF-α或本领域的技术人员已知的适合于细胞生长的任何其他添加剂。
细胞培养基的另外的说明性实例包括但不限于：RPMI 1640、Clicks、AIM-V、DMEM、MEM、a-MEM、F-12、X-Vivo 15和X-Vivo 20、Optimizer，其添加有氨基酸、丙酮酸钠和维生素，其无血清或补充有适量血清(或血浆)或一组限定的激素和/或足以使T细胞生长和扩增的量的一个或多个细胞因子。
抗生素(例如，青霉素和链霉素)仅在实验培养时包含，而在培养待注入受试者体内的细胞时不包含。靶细胞保持处于支持生长所需的条件下，例如适当的温度(例如，37℃)和大气(例如，空气加5％的C02)。
在特定实施方案中，在具有适当细胞因子如IL-2、IL-7和/或IL-15等培养基中使PBMC或分离的T细胞与通常附接到珠粒或其他表面的刺激剂和共刺激剂如抗CD3和抗CD28抗体接触。
在其他实施方案中，通过工程改造的K562、U937、721.221、T2和C1R细胞制备人工APC(aAPC)以引导各种共刺激分子和细胞因子的稳定表达和分泌。在特定实施方案中，K32或U32 aAPC用于引导一个或多个基于抗体的刺激分子在AAPC细胞表面上显示。T细胞群可以通过表达各种共刺激分子的aAPC扩增，包括但不限于CD137L(4-1BBL)、CD134L(OX40L)和/或CD80或CD86。最后，aAPC为扩增经过基因修饰的T细胞和维持CD8 T细胞上的CD28表达提供了高效平台。WO 03/057171和US2003/0147869中提供的aAPC以全文引用的方式并入本文中。
在特定实施方案中，将编码MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR和嵌合TGFβ受体的一种或多种多核苷酸引入到T细胞群中。在特定实施方案中，将编码嵌合TGFβ受体的多核苷酸引入到表达MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR的T细胞群中。在特定实施方案中，将编码MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR的多核苷酸引入到表达嵌合TGFβ受体的T细胞群中。在特定实施方案中，将编码MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR和嵌合TGFβ受体的多核苷酸引入到T细胞群中。在特定实施方案中，将编码MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR的多核苷酸和编码嵌合TGFβ受体的多核苷酸同时引入到T细胞群中。可以通过显微注射、转染、脂质转染、热休克、电穿孔、转导、基因枪、显微注射、DEAE-葡聚糖介导的转移等将多核苷酸引入到T细胞中。
在优选实施方案中，通过病毒转导将多核苷酸引入到T细胞中。
适合于将多核苷酸引入到免疫效应细胞或CD34--细胞中的病毒载体系统的说明性实例包括但不限于用于基因转移的腺相关病毒(AAV)、逆转录病毒、单纯疱疹病毒、腺病毒、牛痘病毒载体。
在一个实施方案中，通过AAV转导将多核苷酸引入到T细胞中。
在一个实施方案中，通过逆转录病毒转导将多核苷酸引入到T细胞中。
在一个实施方案中，通过慢病毒转导将多核苷酸引入到T细胞中。
在一个实施方案中，通过腺病毒转导将多核苷酸引入到T细胞中。
在一个实施方案中，通过单纯疱疹病毒转导将多核苷酸引入到T细胞中。
在一个实施方案中，通过牛痘病毒转导将多核苷酸引入到T细胞中。
H.组合物和配制物
本文所涵盖的组合物可以包含一种或多种MAGEA4 TCR多肽、MAGEA4 eTCR多肽、CTBR多肽、多核苷酸、包含其的载体、经过基因修饰的免疫效应细胞等，如本文所涵盖。组合物包括但不限于药物组合物。在优选实施方案中，组合物包含一种或多种被修饰以表达MAGEA4 TCR和CTBR的细胞。在优选实施方案中，组合物包含一种或多种被修饰以表达MAGEA4 eTCR和CTBR12多肽的细胞。
“药物组合物”是指单独地或与一种或多种其他治疗方式组合地施用于细胞或动物的在药学上可接受的或生理学上可接受的溶液中配制的组合物。还应理解，如果需要，组合物也可以与其他药剂组合施用，例如细胞因子、生长因子、激素、小分子、化学治疗剂、前药、药物、抗体或其他各种药学活性剂。对组合物中还可以包含的其他组分实际上不存在限制，条件是另外的药剂不会不利地影响组合物递送预期疗法的能力。在优选实施方案中，药物组合物包含药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂以及一种或多种已被修饰以表达MAGEA4 TCR和CTBR，优选地MAGEA4 eTCR和CTBR12多肽的细胞。
短语“药学上可接受的”在本文中用于指在正确医学判断的范围内适合于与人和动物的组织接触使用而不会产生过多毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症的、与合理的益处/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
如本文所使用，“药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂”包括但不限于等渗盐水；林格氏溶液(Ringer’s solution)；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；以及药物制剂中采用的任何其他相容物质。
在特定实施方案中，组合物包含一定量的表达MAGEA4 TCR和CTBR，优选地MAGEA4eTCR和CTBR12多肽的免疫效应细胞。如本文所使用，术语“量”是指实现有益或期望的预防或治疗结果，包括临床结果而经基因修饰的治疗性细胞例如T细胞的“有效的量”或“有效量”。
“预防有效量”是指有效实现期望的预防结果的经过基因修饰的治疗性细胞的量。通常，但不一定，因为预防剂量是在疾病之前或疾病早期用于受试者的，所以预防有效量小于治疗有效量。
经过基因修饰的治疗性细胞的“治疗有效量”可以根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及干细胞和祖细胞在个体中引发所需反应的能力的因素而变化。治疗有效量也是其中病毒或转导的治疗性细胞的任何毒性或有害作用被治疗有益作用所超过的剂量。术语“治疗有效量”包括有效地“治疗”受试者(例如，患者)的量。当指示治疗量时，待施用的组合物的精确量可以由内科医生考虑年龄、体重、肿瘤大小、感染程度或转移程度以及患者(受试者)的病状的个体差异来确定。
通常可以说，包括本文所述的T细胞的药物组合物可以以106至1013个细胞/kg体重，优选地108至1013个细胞/kg体重(包括那些范围内的所有整数值)的剂量施用。细胞的数目将取决于组合物的期望最终用途，其中包含的细胞的类型也是如此。对于本文所提供的用途，细胞的体积通常为一升或更少，可以为500ml或更少，甚至250ml或100ml或更少。因此，所期望细胞的密度通常大于106个细胞/ml，并且通常大于107个细胞/ml，通常108个细胞/ml或更大。临床相关数目的免疫细胞可以分配到累积等于或超过106、107、108、109、1010、1011、1012或1013个细胞的多次输注中。组合物可以这些范围内的剂量多次施用。对于接受治疗的患者，细胞可以是同种异体的、同基因的、异种的或自体的。
组合物优选配制用于肠胃外施用，例如血管内(静脉内或动脉内)、腹膜内或肌内施用。
液体药物组合物，无论它们是溶液、悬浮液或其他类似形式，可以包括以下中的一种或多种：无菌稀释剂，诸如注射用水；盐水溶液，优选生理盐水；林格氏溶液或等渗氯化钠。肠胃外制剂可以装入安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。可注射药物组合物优选是无菌的。
在一个实施方案中，本文所涵盖的T细胞组合物配制在药学上可接受的细胞培养基中。此类组合物适于施用于人类受试者。在特定实施方案中，药学上可接受的细胞培养基是无血清培养基。
无血清培养基相比于含有血清的培养基具有若干优点，包含组合物得到简化且得到更好定义、污染物程度得到减小、可能的传染剂来源得到消除以及成本降低。在各种实施方案中，无血清培养基是无动物的并且可以任选地是无蛋白质的。任选地，培养基可以含有生物药学上可接受的重组蛋白。“无动物”培养基是指组合物源自非动物来源的培养基。重组蛋白替代无动物培养基中的天然动物蛋白质，并且营养物从合成的、植物或微生物来源获得。相比之下，“无蛋白质”培养基被定义为基本上不含蛋白质。
特定实施方案中使用的无血清培养基的说明性实例包括但不限于QBSF-60(Quality Biological，Inc.)、StemPro-34(Life Technologies)和X-VIVO 10。
在一个优选实施方案中，包含本文所涵盖的免疫效应细胞的组合物配制在包含PlasmaLyte A的溶液中。
在另一个优选实施方案中，包含本文所涵盖的免疫效应细胞的组合物配制在包含低温保存介质的溶液中。例如，可以使用具有低温保存药剂的低温保存培养基在解冻后保持高细胞存活率结果。特定实施方案中使用的低温保存培养基的说明性实例包括但不限于CryoStor CS10、CryoStor CS5和CryoStor CS2。
在一个更优选的实施方案中，包含本文所涵盖的免疫效应细胞的组合物配制在包含50：50PlasmaLyte A：CryoStor CS10的溶液中。
在特定实施方案中，组合物包含单独或与一种或多种治疗剂组合的被修饰以表达MAGEA4 TCR和CTBR，优选地MAGEA4 eTCR和CTBR12多肽的有效量的基因组编辑的免疫效应细胞。因此，免疫效应细胞组合物可以单独或与其他已知的癌症治疗，诸如放射疗法、化学疗法、移植、免疫疗法、激素疗法、光动力学疗法等组合施用。所述组合物还可以与抗生素组合施用。本领域可接受这种治疗剂作为如本文所描述的如特定癌症等特定疾病状态的标准治疗。特定实施方案中所涵盖的示例性治疗剂包括细胞因子、生长因子、类固醇、NSAID、DMARD、抗炎剂、化学治疗剂、放射治疗剂、治疗性抗体或其他活性剂和辅助剂。
在某些实施方案中，包含被修饰以表达MAGEA4 TCR和CTBR，优选地MAGEA4 eTCR和CTBR12多肽的基因组编辑的免疫效应细胞的组合物可以与任何数量的化学治疗剂结合施用。
在特定实施方案中，包含被修饰以表达MAGEA4 TCR和CTBR，优选地MAGEA4 eTCR和CTBR12多肽的免疫效应的组合物与治疗性抗体一起施用。适合与特定实施方案中所涵盖的经过修饰的T细胞组合的治疗性抗体的说明性实例包括但不限于阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、巴维昔单抗(bavituximab)、贝伐珠单抗(bevacizumab)(阿瓦斯汀(avastin))、莫比伐珠单抗(bivatuzumab)、博纳吐单抗(blinatumomab)、可那木单抗(conatumumab)、克唑替尼(crizotinib)、达雷木单抗(daratumumab)、杜利他单抗(duligotumab)、达西珠单抗(dacetuzumab)、达洛珠单抗(dalotuzumab)、度伐单抗(durvalumab)、埃罗妥珠单抗(elotuzumab)(HuLuc63)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、替伊莫单抗(ibritumomab)、因达单抗(indatuximab)、奥妥珠格图单抗(inotuzumab)、伊匹单抗(ipilimumab)、罗沃单抗(lorvotuzumab)、卢卡珠单抗(lucatumumab)、米拉珠单抗(milatuzumab)、莫西姆单抗(moxetumomab)、纳武单抗(nivolumab)、奥卡鲁单抗(ocaratuzumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、利妥昔单抗(rituximab)、西妥昔单抗(siltuximab)、四丙珠单抗(teprotumumab)和乌布妥昔单抗(ublituximab)。
在特定实施方案中，对药学上可接受的载剂溶液的配制对本领域的技术人员来说是熟知的，这和开发用于将本文所描述的特定组合物用于各种治疗方案中的适合的给药和治疗方案一样，包含例如肠内和肠胃外，例如血管内、静脉内、动脉内、骨内、心室内、脑内、颅内、脊柱内、鞘内和髓内施用和配制。本领域技术人员应当理解，本文所涵盖的特定实施方案可以包括其他制剂，例如在药物领域中众所周知的那些，并且描述于例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第I卷和第II卷，第22版编著：Loyd V.AllenJr.Philadelphia，PA：Pharmaceutical Press；2012中，上述美国专利中的每一个以全文引用的方式并入本文中。
I.治疗方法
包含本文所涵盖的CTBR的免疫效应细胞(包括MAGEA4 TCR T细胞或MAGEA4 eTCRT细胞)提供了用于预防、治疗和改善癌症，或用于预防、治疗或改善与癌症相关的至少一种症状的过继免疫疗法的改进方法。
包含本文所涵盖的MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR和CTBR的免疫效应细胞提供了用于预防、治疗癌症、GVHD、传染病、自身免疫性疾病、炎性疾病或免疫缺陷或改善其的至少一种症状的改进的药物产品。如本文所使用，术语“药物产品”是指使用本文所涵盖的组合物和方法产生的经过修饰的细胞。在特定实施方案中，药物产品包含经过基因修饰的免疫效应细胞、经修饰以表达MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR，进一步修饰以表达CTBR多肽的T细胞。此外，在特定实施方案中所涵盖的经过修饰的T细胞提供了更安全和更有效的过继细胞疗法，因为它们对T细胞耗竭具有抗性，并且在肿瘤微环境中显示出增加的耐久性和持久性，这可以导致持续的疗法。
在特定实施方案中，向受试者施用有效量的包含或表达MAGEA4 TCR或MAGEA4eTCR和CTBR的经过修饰的免疫效应细胞或T细胞，以预防、治疗癌症、GVHD、传染病、自身免疫性疾病、炎性疾病或免疫缺陷或改善其的至少一种症状。
在特定实施方案中，预防、治疗癌症或改善其的至少一种症状的方法包括向受试者施用有效量的包含或表达CTBR和MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR的经过修饰的免疫效应细胞或T细胞。经过基因修饰的细胞是更耐久和持久的药物产品，因为细胞通过将免疫抑制性TGFβ信号转化为免疫刺激信号而对来自肿瘤微环境的免疫抑制性信号更具抗性。
在特定实施方案中，本文所涵盖的经过修饰的免疫效应细胞用于治疗实体瘤或癌症。
在特定实施方案中，本文所涵盖的经过修饰的免疫效应细胞用于治疗实体瘤或癌症，包括但不限于：肾上腺癌、肾上腺皮质癌、肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、非典型畸胎样/横纹肌样瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑/CNS癌、乳腺癌、支气管肿瘤、心脏肿瘤、子宫颈癌、胆管癌、软骨肉瘤、脊索瘤、结肠癌、结直肠癌、颅咽管瘤、原位导管癌(DCIS)子宫内膜癌、室管膜瘤、食管癌、鼻腔神经胶质瘤、尤文氏肉瘤、颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、眼癌、输卵管癌、纤维组织肉瘤、纤维肉瘤、胆囊癌、胃癌、胃肠道类癌、胃肠道间质瘤(GIST)、生殖细胞肿瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤、头颈癌、血管母细胞瘤、肝细胞癌、下咽癌、眼内黑色素瘤、卡波西肉瘤、肾癌、喉癌、平滑肌肉瘤、唇癌、脂肪肉瘤、肝癌、肺癌、非小细胞肺癌、肺类癌、恶性间皮瘤、髓样癌、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、黑色素瘤、梅克尔细胞癌、中线癌、口腔癌、粘膜肉瘤、骨髓增生异常综合征、骨髓增生性肿瘤、鼻腔和鼻窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、少突神经胶质瘤、口腔癌、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、胰岛细胞肿瘤、乳头状癌、副神经节瘤、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、松果体瘤、垂体瘤、胸膜肺母细胞瘤、原发性腹膜癌、前列腺癌、直肠癌、视网膜母细胞瘤、肾细胞癌、肾盂和输尿管癌、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、皮脂腺癌、皮肤癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、小细胞肺癌、小肠癌、胃癌、汗腺癌、滑膜瘤、睾丸癌、咽喉癌、胸腺癌、甲状腺癌，尿道癌症、子宫癌、子宫肉瘤、阴道癌、血管癌、外阴癌和Wilms肿瘤。
在特定实施方案中，本文所涵盖的经过修饰的免疫效应细胞用于治疗实体瘤或癌症，包含但不限于肝癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌、脑癌、骨癌、甲状腺癌、肾癌或皮肤癌。
在特定实施方案中，本文所涵盖的经过修饰的免疫效应细胞用于治疗各种癌症，包含但不限于胰腺癌、膀胱癌和肺癌。
在特定实施方案中，本文所涵盖的经过修饰的免疫效应细胞用于治疗液体癌或血液癌。
在特定实施方案中，本文所涵盖的经过修饰的免疫效应细胞用于治疗B细胞恶性肿瘤，包括但不限于：白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤。
在特定实施方案中，本文所涵盖的经过修饰的免疫效应细胞用于治疗液体癌，包括但不限于白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤：急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、成髓细胞白血病、早幼粒细胞白血病、髓单核细胞白血病、单核细胞白血病、红白血病、毛细胞白血病(HCL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)和慢性粒细胞白血病(CML)、慢性髓单核细胞白血病(CMML)和真性红细胞增多症、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)、结节性淋巴细胞为主的霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、蕈样真菌病、间变性大细胞淋巴瘤、塞扎里氏综合征(Sézary syndrome)、前体T淋巴母细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、明显多发性骨髓瘤、冒烟型多发性骨髓瘤、浆细胞白血病、非分泌性骨髓瘤、IgD骨髓瘤、骨硬化性骨髓瘤、骨的孤立性浆细胞瘤以及髓外浆细胞瘤。
在本文所涵盖的方法中使用的优选细胞包含自体/自身(“自我”)细胞、优选地造血细胞、更优选地T细胞以及更优选地免疫效应细胞。
在特定实施方案中，提供了包括将治疗有效量的本文所涵盖的经过修饰的免疫效应细胞或包含其的组合物单独或与一种或多种治疗剂组合施用于有需要的患者的方法。在某些实施方案中，细胞用于治疗处于患有癌症、GVHD、传染病、自身免疫性疾病、炎性疾病或免疫缺陷风险的患者。因此，特定实施方案包括治疗或预防癌症、传染病、自身免疫性疾病、炎性疾病或免疫缺陷或改善其的至少一种症状，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所涵盖的基因组编辑的细胞。
在一个实施方案中，治疗有需要的受试者的癌症、GVHD、传染病、自身免疫性疾病、炎性疾病或免疫缺陷的方法包括施用有效量，例如治疗有效量的包含本文所涵盖的经过修饰的免疫效应细胞的组合物。施用的数量和频率将由如患者的病状以及患者疾病的类型和严重程度等因素确定，即使适当的剂量可以通过临床试验确定。
在一个说明性实施方案中，提供给受试者的有效量的经过修饰的免疫效应细胞为至少2×106个细胞/kg、至少3×106个细胞/kg、至少4×106个细胞/kg、至少5×106个细胞/kg、至少6×106个细胞/kg、至少7×106个细胞/kg、至少8×106个细胞/kg、至少9×106个细胞/kg、或至少10×106个细胞/kg或更多个细胞/kg，包含所有中间剂量的细胞。
在另一个说明性实施方案中，提供给受试者的有效量的经过修饰的免疫效应细胞为约2×106个细胞/kg、约3×106个细胞/kg、约4×106个细胞/kg、约5×106个细胞/kg、约6×106个细胞/kg、约7×106个细胞/kg、约8×106个细胞/kg、约9×106个细胞/kg、或约10×106个细胞/kg或更多个细胞/kg，包含所有中间剂量的细胞。
在另一个说明性实施方案中，提供给受试者的有效量的经过修饰的免疫效应细胞为约2×106个细胞/kg至约10×106个细胞/kg、约3×106个细胞/kg至约10×106个细胞/kg、约4×106个细胞/kg至约10×106个细胞/kg、约5×106个细胞/kg至约10×106个细胞/kg、2×106个细胞/kg至约6×106个细胞/kg、2×106个细胞/kg至约7×106个细胞/kg、2×106个细胞/kg至约8×106个细胞/kg、3×106个细胞/kg至约6×106个细胞/kg、3×106个细胞/kg至约7×106个细胞/kg、3×106个细胞/kg至约8×106个细胞/kg、4×106个细胞/kg至约6×106个细胞/kg、4×106个细胞/kg至约7×106个细胞/kg、4×106个细胞/kg至约8×106个细胞/kg、5×106个细胞/kg至约6×106个细胞/kg、5×106个细胞/kg至约7×106个细胞/kg、5×106个细胞/kg至约8×106个细胞/kg或6×106个细胞/kg至约8×106个细胞/kg，包含所有中间剂量的细胞。
本领域普通技术人员将认识到，可能需要多次施用特定实施方案中所涵盖的组合物以实现期望的疗法。例如，组合物可以在1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、1年、2年、5年、10年或更长时间的跨度内施用1次、2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次或10次或更多次。
在某些实施方案中，可能希望向受试者施用活化的T细胞，并且随后重新抽血(或进行单采血液成分术)、从中活化T细胞并且向患者重新输注这些活化的和扩增的T细胞。可以每隔几周进行多次此过程。在某些实施方案中，可以抽取10cc到400cc的血来活化T细胞。在某些实施方案中，抽取20cc、30cc、40cc、50cc、60cc、70cc、80cc、90cc、100cc、150cc、200cc、250cc、300cc、350cc或400cc或更多量的血来活化T细胞。不受理论束缚，使用此多次抽血/多次重新输注方案可以用于选出某些T细胞群。
在一个实施方案中，治疗诊断患有癌症的受试者的方法包括：从受试者中除去免疫效应细胞；通过引入一种或多种编码MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR和嵌合TGFβ受体的载体来修饰免疫效应细胞并且产生经过修饰的免疫效应细胞群；以及向同一受试者施用经过修饰的免疫效应细胞群。在优选实施方案中，免疫效应细胞包括T细胞。
用于施用特定实施方案中所涵盖的细胞组合物的方法包括任何有效导致重新引入经过离体修饰的免疫效应细胞或重新引入免疫效应细胞的经过修饰的祖细胞的方法，所述免疫效应细胞在引入受试者时分化为成熟免疫效应细胞。一种方法包括通过引入一种或多种编码MAGEA4 TCR或MAGEA4 eTCR和嵌合TGFβ受体的载体并且将转导的细胞返回到受试者来离体修饰外周血T细胞。
本说明书中引用的所有出版物、专利申请和授权专利都以引用的方式并入本文中，其引用的程度如同特定且个别地指示每一个别出版物、专利申请或授权专利以引用的方式并入一般。
尽管已经出于清楚理解的目的，通过说明和实例相当详细地描述了前述实施方案，但根据本文所涵盖的传授内容，本领域的普通技术人员将易于了解，可以在不脱离所附权利要求书的精神或范围的情况下对其作出某些改变和修改。提供以下实施例仅作为说明并且不具有限制性。本领域的技术人员将容易认识到多种可以被改变或修改以产生基本上类似的结果的非关键参数。
实施例
实施例1
表达TGFβ信号转换器的MAGEA4 TCR T细胞转导IL-12信号并分泌响应于MAGEA4和TGFB1的增加的IFNγ
用可溶性抗CD3(50ng/ml)和抗CD28(50ng/ml)对来自健康供体的外周血单核细胞(PBMC)进行活化，并且用表达以下项的慢病毒载体(LVV)进行转导(MOI＝20)：(i)MAGEA4TCR(例如，SEQ ID NO：1和2)或(ii)在单独的载体上编码的MAGEA4 TCR和IL-12反应性嵌合TGFβ信号转换器(CTBR12)，例如，SEQ ID NO：5。在含有IL2的培养基中培养10天后，收集细胞产物用于体外分析并低温保存。
CTBR12信号传导
IL-12信号传导涉及受体二聚化和STAT4经由磷酸化的活化。评估响应于TGFβ的STAT4磷酸化。还评估Smad2/3磷酸化以验证CTBR12阻断天然TGFβ信号传导。将MAGEA4 TCRT细胞和MAGEA4 TCR/CTBR12 T细胞在无血清培养基中静置过夜，然后暴露于TGFβ1(10ng/ml)20分钟。将细胞固定，透化，并用抗磷酸-Smad2/3(pS465/467)和磷酸-STAT4(pY693)染色。CTBR12在表达MAGEA4 TCR的T细胞中阻断Smad2/3的磷酸化并使STAT4活化(图1，最右图)。这些数据表明，当与MAGEA4 TCR共表达时，CTBR12可以阻断天然TGFβ信号传导并转导IL-12信号。
MAGEA4 TCR信号传导
功能性TCR分泌响应于抗原的IFNγ，并且分泌可以通过IL-12信号传导增强。在存在或不存在TGFβ1(10ng/ml)的情况下，将未转导的(UTD)T细胞、MAGEA4 TCR T细胞和MAGEA4 TCR/CTBR12 T细胞以1∶1的E∶T比率与A375 MAGEA4+肿瘤细胞共培养24小时。在24小时后，测定分泌到培养基中的IFNγ的量。与所有其他处理或对照条件相比，MAGEA4 TCR/CTBR12 T细胞在存在TGFβ1的情况下产生显著更大量的IFNγ。图2.这些数据表明，MAGEA4TCR T细胞中的CTBR12表达在体外保护免于TGFβ免疫抑制并促进增强的效应子功能。
实施例2
CTBR12表达增强MAGEA4 TCR T细胞体内功效
使用异种移植物NOD.Cg-Prkdcscid IL2rgtm1Wjl/SzJ(NSG)小鼠模型来评估CTBR12表达是否增强MAGEA4 TCR T细胞体内功效。NSG小鼠皮下植入A375 MAGEA4+肿瘤细胞。通过卡尺每周测量肿瘤体积两次，并使用肿瘤体积公式＝长度×宽度×高度×0.52计算。当肿瘤达到50mm3的平均体积时，向小鼠静脉内注射0.625×106UTD T细胞、0.625×106GVY四聚体阳性MAGEA4 TCR T细胞或0.625×106GVY四聚体阳性MAGEA4 TCR/CTBR12 T细胞。MAGEA4 TCR/CTBR12 T细胞控制肿瘤体积显著优于MAGEA4 TCR T细胞或UTD对照T细胞。图3.这些数据显示，CTBR12表达增强了MAGEA4 TCR T细胞的体内功效。
实施例3
表达TGFβ信号转换器的增强的MAGEA4 TCR T细胞转导IL-12信号并分泌
响应于MAGEA4和TGFβ1的增加的IFNγ
用可溶性抗CD3(50ng/ml)和抗CD28(50ng/ml)对来自健康供体的外周血单核细胞(PBMC)进行活化，并且用表达以下项的慢病毒载体(LVV)进行转导(MOI＝20)：(i)MAGEA4配对增强TCR(eTCR)，例如，SEQ ID NO：3和4或(ii)在同一载体上编码的MAGEA4 eTCR和CTBR12受体(例如，SEQ ID NO：5)。在含有IL2的培养基中培养10天后，收集细胞产物用于体外分析并低温保存。
CTBR12信号传导
IL-12信号传导涉及受体二聚化和STAT4经由磷酸化的活化。评估响应于TGFβ的STAT4磷酸化。还评估Smad2/3磷酸化以验证CTBR12阻断天然TGFβ信号传导。将MAGEA4 eTCRT细胞和MAGEA4 eTCR/CTBR12 T细胞在无血清培养基中静置过夜，然后暴露于TGFβ1(10ng/ml)20分钟。将细胞固定，透化，并用抗磷酸-Smad2/3(pS465/467)和磷酸-STAT4(pY693)染色。CTBR12在表达MAGEA4 eTCR的T细胞中阻断Smad2/3的磷酸化并使STAT4活化(图4，最右图)。这些数据表明，当与MAGEA4 eTCR共表达时，CTBR12可以阻断天然TGFβ信号传导并转导IL-12信号。
MAGEA4 TCR信号传导
功能性TCR分泌响应于抗原的IFNγ，并且分泌可以通过IL-12信号传导增强。在存在或不存在TGFβ1(10ng/ml)的情况下，将未转导的(UTD)T细胞、MAGEA4 eTCR T细胞和MAGEA4 eTCR/CTBR12 T细胞以1∶1的E∶T比率与A375 MAGEA4+肿瘤细胞共培养24小时。在24小时后，测定分泌到培养基中的IFNγ的量。TGFβ1处理抑制MAGEA4 eTCR T细胞分泌IFNγ，并增强MAGEA4 eTCR/CTBR12 T细胞分泌IFNγ。图5.这些数据表明，MAGEA4 eTCR T细胞中的CTBR12表达在体外保护免于TGFβ免疫抑制并促进增强的效应子功能。
通常，在以下权利要求书中，所使用的术语不应被解释为将权利要求限制于说明书和权利要求中所公开的具体实施方案，而是应被解释为包含所有可能的实施方案连同这些权利要求所要求的等效物的全部范围。因此，权利要求书不受本公开限制。
序列表
<110> 蓝鸟生物公司(bluebird bio, Inc.)
本杰明·博埃里纳斯(Boyerinas, Benjamin)
贾斯迪普·曼恩(Mann, Jasdeep)
克里斯蒂安·艾灵格(Christian Ellinger)
丹尼尔·萨默迈耶(Daniel Sommermeyer)
<120> 工程改造的T细胞
<130> BLUE-122.PC
<150> US 62/845,311
<151> 2019-05-08
<160> 45
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Gly Val Tyr Asp Gly Arg Glu His Thr Val
1 5 10
<210> 2
<211> 277
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 2
Met Ser Leu Ser Ser Leu Leu Lys Val Val Thr Ala Ser Leu Trp Leu
1 5 10 15
Gly Pro Gly Ile Ala Gln Lys Ile Thr Gln Thr Gln Pro Gly Met Phe
20 25 30
Val Gln Glu Lys Glu Ala Val Thr Leu Asp Cys Thr Tyr Asp Thr Ser
35 40 45
Asp Pro Ser Tyr Gly Leu Phe Trp Tyr Lys Gln Pro Ser Ser Gly Glu
50 55 60
Met Ile Phe Leu Ile Tyr Gln Gly Ser Tyr Asp Gln Gln Asn Ala Thr
65 70 75 80
Glu Gly Arg Tyr Ser Leu Asn Phe Gln Lys Ala Arg Lys Ser Ala Asn
85 90 95
Leu Val Ile Ser Ala Ser Gln Leu Gly Asp Ser Ala Met Tyr Phe Cys
100 105 110
Ala Met Ser Gly Gly Tyr Thr Gly Gly Phe Lys Thr Ile Phe Gly Ala
115 120 125
Gly Thr Arg Leu Phe Val Lys Ala Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala
130 135 140
Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu
145 150 155 160
Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp
180 185 190
Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala
195 200 205
Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe
210 215 220
Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe
225 230 235 240
Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe
245 250 255
Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu
260 265 270
Arg Leu Trp Ser Ser
275
<210> 3
<211> 310
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 3
Met Gly Phe Arg Leu Leu Cys Cys Val Ala Phe Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Gly Pro Val Asp Ser Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys His Leu Ile Thr
20 25 30
Ala Thr Gly Gln Arg Val Thr Leu Arg Cys Ser Pro Arg Ser Gly Asp
35 40 45
Leu Ser Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Ser Leu Asp Gln Gly Leu Gln Phe
50 55 60
Leu Ile Gln Tyr Tyr Asn Gly Glu Glu Arg Ala Lys Gly Asn Ile Leu
65 70 75 80
Glu Arg Phe Ser Ala Gln Gln Phe Pro Asp Leu His Ser Glu Leu Asn
85 90 95
Leu Ser Ser Leu Glu Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser
100 105 110
Ser Gly Gly Asp Gly Asp Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu
115 120 125
Thr Val Leu Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val
130 135 140
Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu
145 150 155 160
Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp
165 170 175
Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln
180 185 190
Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser
195 200 205
Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His
210 215 220
Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp
225 230 235 240
Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala
245 250 255
Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln Gly
260 265 270
Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr
275 280 285
Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys
290 295 300
Arg Lys Asp Ser Arg Gly
305 310
<210> 4
<211> 613
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 实验室制造-融合蛋白
<400> 4
Met Gly Phe Arg Leu Leu Cys Cys Val Ala Phe Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Gly Pro Val Asp Ser Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys His Leu Ile Thr
20 25 30
Ala Thr Gly Gln Arg Val Thr Leu Arg Cys Ser Pro Arg Ser Gly Asp
35 40 45
Leu Ser Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Ser Leu Asp Gln Gly Leu Gln Phe
50 55 60
Leu Ile Gln Tyr Tyr Asn Gly Glu Glu Arg Ala Lys Gly Asn Ile Leu
65 70 75 80
Glu Arg Phe Ser Ala Gln Gln Phe Pro Asp Leu His Ser Glu Leu Asn
85 90 95
Leu Ser Ser Leu Glu Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser
100 105 110
Ser Gly Gly Asp Gly Asp Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu
115 120 125
Thr Val Leu Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val
130 135 140
Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu
145 150 155 160
Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp
165 170 175
Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln
180 185 190
Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser
195 200 205
Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His
210 215 220
Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp
225 230 235 240
Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala
245 250 255
Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln Gly
260 265 270
Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr
275 280 285
Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys
290 295 300
Arg Lys Asp Ser Arg Gly Arg Ala Lys Arg Gly Ser Gly Ala Thr Asn
305 310 315 320
Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro
325 330 335
Met Ser Leu Ser Ser Leu Leu Lys Val Val Thr Ala Ser Leu Trp Leu
340 345 350
Gly Pro Gly Ile Ala Gln Lys Ile Thr Gln Thr Gln Pro Gly Met Phe
355 360 365
Val Gln Glu Lys Glu Ala Val Thr Leu Asp Cys Thr Tyr Asp Thr Ser
370 375 380
Asp Pro Ser Tyr Gly Leu Phe Trp Tyr Lys Gln Pro Ser Ser Gly Glu
385 390 395 400
Met Ile Phe Leu Ile Tyr Gln Gly Ser Tyr Asp Gln Gln Asn Ala Thr
405 410 415
Glu Gly Arg Tyr Ser Leu Asn Phe Gln Lys Ala Arg Lys Ser Ala Asn
420 425 430
Leu Val Ile Ser Ala Ser Gln Leu Gly Asp Ser Ala Met Tyr Phe Cys
435 440 445
Ala Met Ser Gly Gly Tyr Thr Gly Gly Phe Lys Thr Ile Phe Gly Ala
450 455 460
Gly Thr Arg Leu Phe Val Lys Ala Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala
465 470 475 480
Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu
485 490 495
Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser
500 505 510
Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp
515 520 525
Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala
530 535 540
Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe
545 550 555 560
Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe
565 570 575
Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe
580 585 590
Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu
595 600 605
Arg Leu Trp Ser Ser
610
<210> 5
<211> 277
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 实验室制造-合成构建体
<400> 5
Met Ser Leu Ser Ser Leu Leu Lys Val Val Thr Ala Ser Leu Trp Leu
1 5 10 15
Gly Pro Gly Ile Ala Gln Lys Ile Thr Gln Thr Gln Pro Gly Met Phe
20 25 30
Val Gln Glu Lys Glu Ala Val Thr Leu Asp Cys Thr Tyr Asp Thr Ser
35 40 45
Asp Pro Ser Tyr Gly Leu Phe Trp Tyr Lys Gln Pro Ser Ser Gly Glu
50 55 60
Met Ile Phe Leu Ile Tyr Gln Gly Ser Tyr Asp Gln Gln Asn Ala Thr
65 70 75 80
Glu Gly Arg Tyr Ser Leu Asn Phe Gln Lys Ala Arg Lys Ser Ala Asn
85 90 95
Leu Val Ile Ser Ala Ser Gln Leu Gly Asp Ser Ala Met Tyr Phe Cys
100 105 110
Ala Met Ser Gly Gly Tyr Thr Gly Gly Phe Lys Thr Ile Phe Gly Ala
115 120 125
Gly Thr Arg Leu Phe Val Lys Ala Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala
130 135 140
Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu
145 150 155 160
Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp
180 185 190
Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala
195 200 205
Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe
210 215 220
Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe
225 230 235 240
Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Leu Val Ile Val Leu
245 250 255
Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu
260 265 270
Arg Leu Trp Ser Ser
275
<210> 6
<211> 310
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 实验室制造-合成构建体
<400> 6
Met Gly Phe Arg Leu Leu Cys Cys Val Ala Phe Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Gly Pro Val Asp Ser Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys His Leu Ile Thr
20 25 30
Ala Thr Gly Gln Arg Val Thr Leu Arg Cys Ser Pro Arg Ser Gly Asp
35 40 45
Leu Ser Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Ser Leu Asp Gln Gly Leu Gln Phe
50 55 60
Leu Ile Gln Tyr Tyr Asn Gly Glu Glu Arg Ala Lys Gly Asn Ile Leu
65 70 75 80
Glu Arg Phe Ser Ala Gln Gln Phe Pro Asp Leu His Ser Glu Leu Asn
85 90 95
Leu Ser Ser Leu Glu Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser
100 105 110
Ser Gly Gly Asp Gly Asp Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu
115 120 125
Thr Val Leu Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val
130 135 140
Phe Glu Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala His Thr Gln Lys Ala Thr Leu
145 150 155 160
Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp
165 170 175
Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln
180 185 190
Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser
195 200 205
Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His
210 215 220
Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp
225 230 235 240
Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala
245 250 255
Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr His Gln Gly
260 265 270
Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr
275 280 285
Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys
290 295 300
Arg Lys Asp Ser Arg Gly
305 310
<210> 7
<211> 613
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 实验室制造-融合蛋白
<400> 7
Met Gly Phe Arg Leu Leu Cys Cys Val Ala Phe Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Gly Pro Val Asp Ser Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys His Leu Ile Thr
20 25 30
Ala Thr Gly Gln Arg Val Thr Leu Arg Cys Ser Pro Arg Ser Gly Asp
35 40 45
Leu Ser Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Ser Leu Asp Gln Gly Leu Gln Phe
50 55 60
Leu Ile Gln Tyr Tyr Asn Gly Glu Glu Arg Ala Lys Gly Asn Ile Leu
65 70 75 80
Glu Arg Phe Ser Ala Gln Gln Phe Pro Asp Leu His Ser Glu Leu Asn
85 90 95
Leu Ser Ser Leu Glu Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser
100 105 110
Ser Gly Gly Asp Gly Asp Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu
115 120 125
Thr Val Leu Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val
130 135 140
Phe Glu Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala His Thr Gln Lys Ala Thr Leu
145 150 155 160
Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp
165 170 175
Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln
180 185 190
Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser
195 200 205
Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His
210 215 220
Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp
225 230 235 240
Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala
245 250 255
Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr His Gln Gly
260 265 270
Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr
275 280 285
Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys
290 295 300
Arg Lys Asp Ser Arg Gly Arg Ala Lys Arg Gly Ser Gly Ala Thr Asn
305 310 315 320
Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro
325 330 335
Met Ser Leu Ser Ser Leu Leu Lys Val Val Thr Ala Ser Leu Trp Leu
340 345 350
Gly Pro Gly Ile Ala Gln Lys Ile Thr Gln Thr Gln Pro Gly Met Phe
355 360 365
Val Gln Glu Lys Glu Ala Val Thr Leu Asp Cys Thr Tyr Asp Thr Ser
370 375 380
Asp Pro Ser Tyr Gly Leu Phe Trp Tyr Lys Gln Pro Ser Ser Gly Glu
385 390 395 400
Met Ile Phe Leu Ile Tyr Gln Gly Ser Tyr Asp Gln Gln Asn Ala Thr
405 410 415
Glu Gly Arg Tyr Ser Leu Asn Phe Gln Lys Ala Arg Lys Ser Ala Asn
420 425 430
Leu Val Ile Ser Ala Ser Gln Leu Gly Asp Ser Ala Met Tyr Phe Cys
435 440 445
Ala Met Ser Gly Gly Tyr Thr Gly Gly Phe Lys Thr Ile Phe Gly Ala
450 455 460
Gly Thr Arg Leu Phe Val Lys Ala Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala
465 470 475 480
Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu
485 490 495
Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser
500 505 510
Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp
515 520 525
Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala
530 535 540
Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe
545 550 555 560
Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe
565 570 575
Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Leu Val Ile Val Leu
580 585 590
Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu
595 600 605
Arg Leu Trp Ser Ser
610
<210> 8
<211> 671
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 实验室制造-合成构建体
<400> 8
Met Gly Arg Gly Leu Leu Arg Gly Leu Trp Pro Leu His Ile Val Leu
1 5 10 15
Trp Thr Arg Ile Ala Ser Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val
20 25 30
Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro
35 40 45
Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln
50 55 60
Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro
65 70 75 80
Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr
85 90 95
Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile
100 105 110
Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys
115 120 125
Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn
130 135 140
Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Leu
145 150 155 160
Leu Leu Val Ile Phe Gln Trp Met Ala Phe Val Ala Pro Ser Ile Cys
165 170 175
Ile Ala Ile Ile Met Val Gly Ile Phe Ser Thr His Tyr Phe Gln Gln
180 185 190
Lys Val Phe Val Leu Leu Ala Ala Leu Arg Pro Gln Trp Cys Ser Arg
195 200 205
Glu Ile Pro Asp Pro Ala Asn Ser Thr Cys Ala Lys Lys Tyr Pro Ile
210 215 220
Ala Glu Glu Lys Thr Gln Leu Pro Leu Asp Arg Leu Leu Ile Asp Trp
225 230 235 240
Pro Thr Pro Glu Asp Pro Glu Pro Leu Val Ile Ser Glu Val Leu His
245 250 255
Gln Val Thr Pro Val Phe Arg His Pro Pro Cys Ser Asn Trp Pro Gln
260 265 270
Arg Glu Lys Gly Ile Gln Gly His Gln Ala Ser Glu Lys Asp Met Met
275 280 285
His Ser Ala Ser Ser Pro Pro Pro Pro Arg Ala Leu Gln Ala Glu Ser
290 295 300
Arg Gln Leu Val Asp Leu Tyr Lys Val Leu Glu Ser Arg Gly Ser Asp
305 310 315 320
Pro Lys Pro Glu Asn Pro Ala Cys Pro Trp Thr Val Leu Pro Ala Gly
325 330 335
Asp Leu Pro Thr His Asp Gly Tyr Leu Pro Ser Asn Ile Asp Asp Leu
340 345 350
Pro Ser His Glu Ala Pro Leu Ala Asp Ser Leu Glu Glu Leu Glu Pro
355 360 365
Gln His Ile Ser Leu Ser Val Phe Pro Ser Ser Ser Leu His Pro Leu
370 375 380
Thr Phe Ser Cys Gly Asp Lys Leu Thr Leu Asp Gln Leu Lys Met Arg
385 390 395 400
Cys Asp Ser Leu Met Leu Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu
405 410 415
Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Glu Ala Ala
420 425 430
Val Ala Ala Pro Arg Pro Arg Leu Leu Leu Leu Val Leu Ala Ala Ala
435 440 445
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Leu Leu Pro Gly Ala Thr Ala Leu Gln Cys
450 455 460
Phe Cys His Leu Cys Thr Lys Asp Asn Phe Thr Cys Val Thr Asp Gly
465 470 475 480
Leu Cys Phe Val Ser Val Thr Glu Thr Thr Asp Lys Val Ile His Asn
485 490 495
Ser Met Cys Ile Ala Glu Ile Asp Leu Ile Pro Arg Asp Arg Pro Phe
500 505 510
Val Cys Ala Pro Ser Ser Lys Thr Gly Ser Val Thr Thr Thr Tyr Cys
515 520 525
Cys Asn Gln Asp His Cys Asn Lys Ile Glu Leu Pro Thr Thr Val Lys
530 535 540
Ser Ser Pro Gly Leu Gly Pro Val Glu Leu Trp Leu Ile Phe Phe Ala
545 550 555 560
Ser Leu Gly Ser Phe Leu Ser Ile Leu Leu Val Gly Val Leu Gly Tyr
565 570 575
Leu Gly Leu Asn Arg Ala Ala Arg His Leu Cys Pro Pro Leu Pro Thr
580 585 590
Pro Cys Ala Ser Ser Ala Ile Glu Phe Pro Gly Gly Lys Glu Thr Trp
595 600 605
Gln Trp Ile Asn Pro Val Asp Phe Gln Glu Glu Ala Ser Leu Gln Glu
610 615 620
Ala Leu Val Val Glu Met Ser Trp Asp Lys Gly Glu Arg Thr Glu Pro
625 630 635 640
Leu Glu Lys Thr Glu Leu Pro Glu Gly Ala Pro Glu Leu Ala Leu Asp
645 650 655
Thr Glu Leu Ser Leu Glu Asp Gly Asp Arg Cys Lys Ala Lys Met
660 665 670
<210> 9
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 示例性接头序列
<400> 9
Asp Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 10
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 示例性接头序列
<400> 10
Thr Gly Glu Lys Pro
1 5
<210> 11
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 示例性接头序列
<400> 11
Gly Gly Arg Arg
1
<210> 12
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 示例性接头序列
<400> 12
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 13
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 示例性接头序列
<400> 13
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Val Asp
1 5 10
<210> 14
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 示例性接头序列
<400> 14
Lys Glu Ser Gly Ser Val Ser Ser Glu Gln Leu Ala Gln Phe Arg Ser
1 5 10 15
Leu Asp
<210> 15
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 示例性接头序列
<400> 15
Gly Gly Arg Arg Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 示例性接头序列
<400> 16
Leu Arg Gln Arg Asp Gly Glu Arg Pro
1 5
<210> 17
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 示例性接头序列
<400> 17
Leu Arg Gln Lys Asp Gly Gly Gly Ser Glu Arg Pro
1 5 10
<210> 18
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 示例性接头序列
<400> 18
Leu Arg Gln Lys Asp Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Arg Pro
1 5 10 15
<210> 19
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 示例性接头序列
<400> 19
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 20
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TEV蛋白酶的裂解序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(3)
<223> Xaa是任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa是任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> Xaa = Gly或Ser
<400> 20
Glu Xaa Xaa Tyr Xaa Gln Xaa
1 5
<210> 21
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TEV蛋白酶的裂解序列
<400> 21
Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly
1 5
<210> 22
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TEV蛋白酶的裂解序列
<400> 22
Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser
1 5
<210> 23
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 23
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 24
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 24
Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn
1 5 10 15
Pro Gly Pro
<210> 25
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 25
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro
1 5 10
<210> 26
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 26
Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu
1 5 10 15
Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 27
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 27
Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
1 5 10 15
Gly Pro
<210> 28
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 28
Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro
1 5 10
<210> 29
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 29
Gly Ser Gly Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 30
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 30
Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Gly Pro
20
<210> 31
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 31
Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
1 5 10
<210> 32
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 32
Gly Ser Gly Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala
1 5 10 15
Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20 25
<210> 33
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 33
Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 34
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 34
Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
1 5 10
<210> 35
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 35
Leu Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn
1 5 10 15
Pro Gly Pro
<210> 36
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 36
Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn
1 5 10 15
Pro Gly Pro
<210> 37
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 37
Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
1 5 10
<210> 38
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 38
Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly
1 5 10 15
Pro
<210> 39
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 39
Gln Leu Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Gly Pro
20
<210> 40
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 40
Ala Pro Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly
1 5 10 15
Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 41
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 41
Val Thr Glu Leu Leu Tyr Arg Met Lys Arg Ala Glu Thr Tyr Cys Pro
1 5 10 15
Arg Pro Leu Leu Ala Ile His Pro Thr Glu Ala Arg His Lys Gln Lys
20 25 30
Ile Val Ala Pro Val Lys Gln Thr
35 40
<210> 42
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 42
Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro
1 5 10 15
Gly Pro
<210> 43
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 43
Leu Leu Ala Ile His Pro Thr Glu Ala Arg His Lys Gln Lys Ile Val
1 5 10 15
Ala Pro Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly
20 25 30
Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
35 40
<210> 44
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含2A位点的自裂解多肽
<400> 44
Glu Ala Arg His Lys Gln Lys Ile Val Ala Pro Val Lys Gln Thr Leu
1 5 10 15
Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly
20 25 30
Pro
<210> 45
<211> 10
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 共有Kozak序列
<400> 45
gccrccatgg 10

Claims (130)

1.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括：
(a)第一多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)跨膜结构域；以及
(iii)免疫受体细胞内信号传导结构域；
(b)多肽裂解信号；以及
(c)第二多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)跨膜结构域；以及
(iii)免疫受体细胞内信号传导结构域。
2.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域分离自细胞因子受体、白细胞介素受体、模式识别受体或toll样受体。
3.如权利要求1或权利要求2所述的细胞，其中所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域分离自细胞因子受体、白细胞介素受体、模式识别受体或toll样受体。
4.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-12Rβ2细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-12Rβ1细胞内信号传导结构域。
5.如权利要求4所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-12Rβ2跨膜结构域。
6.如权利要求4或权利要求5所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-12Rβ1跨膜结构域。
7.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-12Rβ1细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-12Rβ2细胞内信号传导结构域。
8.如权利要求7所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-12Rβ1跨膜结构域。
9.如权利要求7或权利要求8所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-12Rβ2跨膜结构域。
10.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-7Rα细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-2Rγ细胞内信号传导结构域。
11.如权利要求10所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-7Rα跨膜结构域。
12.如权利要求10或权利要求11所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-2Rγ跨膜结构域。
13.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-2Rγ细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-7Rα细胞内信号传导结构域。
14.如权利要求13所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-2Rγ跨膜结构域。
15.如权利要求13或权利要求14所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-7Rα跨膜结构域。
16.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-2Rβ细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-2Rγ细胞内信号传导结构域。
17.如权利要求16所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-2Rβ跨膜结构域。
18.如权利要求16或权利要求17所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-2Rγ跨膜结构域。
19.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-2Rγ细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-2Rβ细胞内信号传导结构域。
20.如权利要求19所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-2Rγ跨膜结构域。
21.如权利要求19或权利要求20所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-2Rβ跨膜结构域。
22.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-21R细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-2Rγ细胞内信号传导结构域。
23.如权利要求22所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-21R跨膜结构域。
24.如权利要求22或权利要求23所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-2Rγ跨膜结构域。
25.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-2Rγ细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-21R细胞内信号传导结构域。
26.如权利要求25所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-2Rγ跨膜结构域。
27.如权利要求25或权利要求26所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-21R跨膜结构域。
28.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-18R1细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-18RAP细胞内信号传导结构域。
29.如权利要求28所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-18R1跨膜结构域。
30.如权利要求28或权利要求29所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-18RAP跨膜结构域。
31.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-18RAP细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-18R1细胞内信号传导结构域。
32.如权利要求31所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-18RAP跨膜结构域。
33.如权利要求31或权利要求32所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-18R1跨膜结构域。
34.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-1R1细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-1RAP细胞内信号传导结构域。
35.如权利要求34所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-1R1跨膜结构域。
36.如权利要求34或权利要求35所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-1RAP跨膜结构域。
37.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-1RAP细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-1R1细胞内信号传导结构域。
38.如权利要求37所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-1RAP跨膜结构域。
39.如权利要求37或权利要求38所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-1R1跨膜结构域。
40.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-1RAP细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-1RL2细胞内信号传导结构域。
41.如权利要求22所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-1RAP跨膜结构域。
42.如权利要求40或权利要求41所述的融合多肽，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-1RL2跨膜结构域。
43.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-1RL2细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IL-1RAP细胞内信号传导结构域。
44.如权利要求43所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IL-1RL2跨膜结构域。
45.如权利要求43或权利要求44所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IL-1RAP跨膜结构域。
46.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IFNAR1细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IFNAR2细胞内信号传导结构域。
47.如权利要求46所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IFNAR1跨膜结构域。
48.如权利要求46或权利要求47所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IFNAR2跨膜结构域。
49.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IFNAR2细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是IFNAR1细胞内信号传导结构域。
50.如权利要求49所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括IFNAR2跨膜结构域。
51.如权利要求49或权利要求50所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括IFNAR1跨膜结构域。
52.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR1细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR1细胞内信号传导结构域。
53.如权利要求52所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR1跨膜结构域。
54.如权利要求52或权利要求53所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR1跨膜结构域。
55.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR2细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR2细胞内信号传导结构域。
56.如权利要求55所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR2跨膜结构域。
57.如权利要求55或权利要求56所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR2跨膜结构域。
58.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR3细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR3细胞内信号传导结构域。
59.如权利要求58所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR3跨膜结构域。
60.如权利要求58或权利要求59所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR3跨膜结构域。
61.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR4细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR4细胞内信号传导结构域。
62.如权利要求61所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR4跨膜结构域。
63.如权利要求61或权利要求62所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR4跨膜结构域。
64.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR5细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR5细胞内信号传导结构域。
65.如权利要求64所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR5跨膜结构域。
66.如权利要求64或权利要求65所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR5跨膜结构域。
67.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR6细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR6细胞内信号传导结构域。
68.如权利要求67所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR6跨膜结构域。
69.如权利要求67或权利要求68所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR6跨膜结构域。
70.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR7细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR7细胞内信号传导结构域。
71.如权利要求70所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR7跨膜结构域。
72.如权利要求70或权利要求71所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR7跨膜结构域。
73.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR8细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR8细胞内信号传导结构域。
74.如权利要求73所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR8跨膜结构域。
75.如权利要求73或权利要求74所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR8跨膜结构域。
76.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR9细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR9细胞内信号传导结构域。
77.如权利要求76所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR9跨膜结构域。
78.如权利要求76或权利要求77所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR9跨膜结构域。
79.如权利要求1所述的细胞，其中所述第一多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR10细胞内信号传导结构域，并且所述第二多肽的所述免疫受体细胞内信号传导结构域是TLR10细胞内信号传导结构域。
80.如权利要求79所述的细胞，其中所述第一多肽的所述跨膜结构域包括TLR10跨膜结构域。
81.如权利要求79或权利要求80所述的细胞，其中所述第二多肽的所述跨膜结构域包括TLR10跨膜结构域。
82.如权利要求1至81中任一项所述的细胞，其中所述多肽裂解信号是病毒自裂解多肽。
83.如权利要求1至82中任一项所述的细胞，其中所述多肽裂解信号是病毒自裂解2A多肽。
84.如权利要求1至83中任一项所述的细胞，其中所述多肽裂解信号是选自由以下项组成的组的病毒自裂解多肽：口蹄疫病毒(FMDV)(F2A)肽、马鼻炎A病毒(ERAV)(E2A)肽、明脉扁刺蛾β四体病毒(TaV)(T2A)肽、猪捷申病毒-1(PTV-1)(P2A)肽、泰勒病毒2A肽以及脑心肌炎病毒2A肽。
85.如权利要求1至9中任一项所述的细胞，其中所述融合多肽包括SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列。
86.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-12Rβ2跨膜结构域；以及
(iii)IL-12Rβ2细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-12Rβ1跨膜结构域；以及
(iii)IL-12Rβ1细胞内信号传导结构域。
87.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-12Rβ1跨膜结构域；以及
(iii)IL-12Rβ1细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-12Rβ2跨膜结构域；以及
(iii)IL-12Rβ2细胞内信号传导结构域。
88.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-7Rα跨膜结构域；以及
(iii)IL-7Rα细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-2Rγ跨膜结构域；以及
(iii)IL-2Rγ细胞内信号传导结构域。
89.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-2Rγ跨膜结构域；以及
(iii)IL-2Rγ细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-7Rα跨膜结构域；以及
(iii)IL-7Rα细胞内信号传导结构域。
90.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-2Rβ跨膜结构域；以及
(iii)IL-2Rβ细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-2Rγ跨膜结构域；以及
(iii)IL-2Rγ细胞内信号传导结构域。
91.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-2Rγ跨膜结构域；以及
(iii)IL-2Rγ细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-2Rβ跨膜结构域；以及
(iii)IL-2Rβ细胞内信号传导结构域。
92.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-21R跨膜结构域；以及
(iii)IL-21R细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-2Rγ跨膜结构域；以及
(iii)IL-2Rγ细胞内信号传导结构域。
93.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-2Rγ跨膜结构域；以及
(iii)IL-2Rγ细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-21R跨膜结构域；以及
(iii)IL-21R细胞内信号传导结构域。
94.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-18R1跨膜结构域；以及
(iii)IL-18R1细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-18RAP跨膜结构域；以及
(iii)IL-18RAP细胞内信号传导结构域。
95.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-18RAP跨膜结构域；以及
(iii)IL-18RAP细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-18R1跨膜结构域；以及
(iii)IL-18R1细胞内信号传导结构域。
96.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-1R1跨膜结构域；以及
(iii)IL-1R1细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-1RAP跨膜结构域；以及
(iii)IL-1RAP细胞内信号传导结构域。
97.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-1RAP跨膜结构域；以及
(iii)IL-1RAP细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IL-1R1跨膜结构域；以及
(iii)IL-1R1细胞内信号传导结构域。
98.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IFNAR1跨膜结构域；以及
(iii)IFNAR1细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IFNAR2跨膜结构域；以及
(iii)IFNAR2细胞内信号传导结构域。
99.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IFNAR2跨膜结构域；以及
(iii)IFNAR2细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)IFNAR1跨膜结构域；以及
(iii)IFNAR1细胞内信号传导结构域。
100.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR1跨膜结构域；以及
(iii)TLR1细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR1跨膜结构域；以及
(iii)TLR1细胞内信号传导结构域。
101.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR2跨膜结构域；以及
(iii)TLR2细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR2跨膜结构域；以及
(iii)TLR2细胞内信号传导结构域。
102.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR3跨膜结构域；以及
(iii)TLR3细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR3跨膜结构域；以及
(iii)TLR3细胞内信号传导结构域。
103.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR4跨膜结构域；以及
(iii)TLR4细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR4跨膜结构域；以及
(iii)TLR4细胞内信号传导结构域。
104.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR5跨膜结构域；以及
(iii)TLR5细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR5跨膜结构域；以及
(iii)TLR5细胞内信号传导结构域。
105.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR6跨膜结构域；以及
(iii)TLR6细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR6跨膜结构域；以及
(iii)TLR6细胞内信号传导结构域。
106.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR7跨膜结构域；以及
(iii)TLR7细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR7跨膜结构域；以及
(iii)TLR7细胞内信号传导结构域。
107.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR8跨膜结构域；以及
(iii)TLR8细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR8跨膜结构域；以及
(iii)TLR8细胞内信号传导结构域。
108.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR9跨膜结构域；以及
(iii)TLR9细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR9跨膜结构域；以及
(iii)TLR9细胞内信号传导结构域。
109.一种细胞，所述细胞包含编码MAGEA4 TCR的第一多核苷酸；和编码融合多肽的第二多核苷酸，所述融合多肽包括
(a)TGFβR2多肽，其包括：
(i)TGFβR2的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR10跨膜结构域；以及
(iii)TLR10细胞内信号传导结构域；
(b)病毒自裂解2A肽；以及
(c)TGFβR1多肽，其包括：
(i)TGFβR1的细胞外TGFβ1结合结构域；
(ii)TLR10跨膜结构域；以及
(iii)TLR10细胞内信号传导结构域。
110.如权利要求88至111中任一项所述的细胞，其中所述病毒自裂解2A多肽选自由以下项组成的组：口蹄疫病毒(FMDV)(F2A)肽、马鼻炎A病毒(ERAV)(E2A)肽、明脉扁刺蛾β四体病毒(TaV)(T2A)肽、猪捷申病毒-1(PTV-1)(P2A)肽、泰勒病毒2A肽以及脑心肌炎病毒2A肽。
111.如权利要求86或权利要求87所述的细胞，其中所述融合多肽包括SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列。
112.如前述权利要求中任一项所述的细胞，其中所述MAGEA4 TCR结合由HLA-A*02:01编码分子呈递的肽GVYDGREHTV。
113.如前述权利要求中任一项所述的细胞，其中所述MAGEA4 TCR包括：包含SEQ IDNO:1中列出的氨基酸序列的α链和包含SEQ ID NO:2中列出的氨基酸序列的β链。
114.如前述权利要求中任一项所述的细胞，其中所述MAGEA4 TCR包括：包含SEQ IDNO:3中列出的氨基酸序列的α链和包含SEQ ID NO:4中列出的氨基酸序列的β链。
115.如前述权利要求中任一项所述的细胞，其中所述细胞是造血细胞。
116.如前述权利要求中任一项所述的细胞，其中所述细胞是T细胞。
117.如前述权利要求中任一项所述的细胞，其中所述细胞是CD3+、CD4+和/或CD8+细胞。
118.如前述权利要求中任一项所述的细胞，其中所述细胞是免疫效应细胞。
119.如前述权利要求中任一项所述的细胞，其中所述细胞是细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)或辅助T细胞。
120.如前述权利要求中任一项所述的细胞，其中所述细胞是自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞。
121.如前述权利要求中任一项所述的细胞，其中所述细胞的来源是外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织或肿瘤。
122.一种组合物，其包含如前述权利要求中任一项所述的细胞。
123.一种药物组合物，其包含药学上可接受的载剂和如前述权利要求中任一项所述的细胞。
124.一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求123所述的组合物。
125.一种治疗、预防癌症、传染病、自身免疫性疾病、炎性疾病和免疫缺陷或与其相关的病状或改善其至少一种症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求123所述的组合物。
126.一种治疗实体癌的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求123所述的组合物。
127.如权利要求126所述的方法，其中所述实体癌包括肝癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、膀胱癌、脑癌、肉瘤、头颈癌、骨癌、甲状腺癌、肾癌或皮肤癌。
128.如权利要求126或权利要求127所述的方法，其中所述实体癌是胰腺癌、肺癌或乳腺癌。
129.一种治疗血液恶性肿瘤的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求123所述的组合物。
130.如权利要求129所述的方法，其中所述血液恶性肿瘤是白血病、淋巴瘤或多发性骨髓瘤。
CN202080044323.4A 2019-05-08 2020-05-07 工程改造的t细胞 Pending CN114375301A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962845311P 2019-05-08 2019-05-08
US62/845,311 2019-05-08
PCT/US2020/031796 WO2020227483A1 (en) 2019-05-08 2020-05-07 Engineered t cells

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114375301A true CN114375301A (zh) 2022-04-19

Family

ID=73051184

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080044323.4A Pending CN114375301A (zh) 2019-05-08 2020-05-07 工程改造的t细胞

Country Status (16)

Country Link
US (1) US20230044580A1 (zh)
EP (1) EP3966235A4 (zh)
JP (1) JP2022532557A (zh)
KR (1) KR20220030933A (zh)
CN (1) CN114375301A (zh)
AU (1) AU2020267641A1 (zh)
BR (1) BR112021022303A2 (zh)
CA (1) CA3139011A1 (zh)
CL (1) CL2021002935A1 (zh)
CO (1) CO2021016480A2 (zh)
EA (1) EA202193074A1 (zh)
IL (1) IL287777A (zh)
MA (1) MA55911A (zh)
MX (1) MX2021013588A (zh)
SG (1) SG11202111973RA (zh)
WO (1) WO2020227483A1 (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4126924A4 (en) * 2020-03-27 2024-04-24 2Seventy Bio Inc T CELL RECEPTORS
WO2023288281A2 (en) * 2021-07-15 2023-01-19 Fred Hutchinson Cancer Center Chimeric polypeptides
GB202115329D0 (en) * 2021-10-25 2021-12-08 Autolus Ltd Chimeric cytokine receptor

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017158103A1 (en) * 2016-03-16 2017-09-21 Immatics Biotechnologies Gmbh Transfected t-cells and t-cell receptors for use in immunotherapy against cancers
WO2018094244A1 (en) * 2016-11-17 2018-05-24 Bluebird Bio, Inc. TGFβ SIGNAL CONVERTOR

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3519433A1 (en) * 2016-10-03 2019-08-07 Juno Therapeutics, Inc. Hpv-specific binding molecules
EP3714941A1 (en) * 2019-03-27 2020-09-30 Medigene Immunotherapies GmbH Mage-a4 tcrs

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017158103A1 (en) * 2016-03-16 2017-09-21 Immatics Biotechnologies Gmbh Transfected t-cells and t-cell receptors for use in immunotherapy against cancers
WO2018094244A1 (en) * 2016-11-17 2018-05-24 Bluebird Bio, Inc. TGFβ SIGNAL CONVERTOR

Also Published As

Publication number Publication date
IL287777A (en) 2022-01-01
EA202193074A1 (ru) 2022-03-21
CO2021016480A2 (es) 2022-04-08
CA3139011A1 (en) 2020-11-12
EP3966235A1 (en) 2022-03-16
CL2021002935A1 (es) 2022-08-05
SG11202111973RA (en) 2021-11-29
KR20220030933A (ko) 2022-03-11
EP3966235A4 (en) 2023-08-09
BR112021022303A2 (pt) 2022-01-18
MX2021013588A (es) 2022-02-11
WO2020227483A1 (en) 2020-11-12
MA55911A (fr) 2022-03-16
US20230044580A1 (en) 2023-02-09
AU2020267641A1 (en) 2022-01-06
JP2022532557A (ja) 2022-07-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2019535275A (ja) ＴＧＦβシグナルコンバーター
JP2020507342A (ja) ドナー修復鋳型多重ゲノム編集
AU2018385694B2 (en) NKG2D DARIC receptors
US20230044580A1 (en) Engineered t cells
JP7431735B2 (ja) Ｄａｒｉｃインターロイキン受容体
CN113366479A (zh) 二聚化剂调节的免疫受体复合物
CN114206928A (zh) Cd33靶向免疫疗法
CN114502586A (zh) Cll-1靶向免疫疗法
JP2023519868A (ja) Ｔ細胞受容体
EP4038103A1 (en) Dimerizing agent regulated immunoreceptor complexes
JP2023539591A (ja) Ｂｃｍａキメラ抗原受容体
US20240034768A1 (en) Dimerizing agent regulated immunoreceptor complexes
AU2020267559A1 (en) CD123 targeted immunotherapies
JP2024503249A (ja) 部位特異的変異導入のための組成物及び方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination