CN114324877A - 一种兼具低值精密度以及抗hook能力的胶乳免疫比浊试剂 - Google Patents
一种兼具低值精密度以及抗hook能力的胶乳免疫比浊试剂 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种兼具低值精密度以及抗HOOK能力的胶乳免疫比浊试剂，包括试剂R1以及试剂R2，其特征在于，所述试剂R2包括三种及以上包被特定抗体的胶乳微球，所述三种及以上包被特定抗体的胶乳微球至少由两种及以上粒径显著不同的胶乳微球、两种及以上识别表位不同的单克隆抗体制备而成。本发明制备的试剂能同时提高抗HOOK能力及低值反应度，最终达到显著提高低值精密度、避免假低值或假阴性的技术效果，对我国现代医疗快速诊断、精准诊断、智能化诊断等宗旨的落实以及诊断事业的发展具有指导意义。
Description
技术领域
本发明涉及医学检验领域，具体涉及一种兼具低值精密度以及抗HOOK能力的胶乳免疫比浊试剂。
背景技术
随着普及全民医疗的需求及生物医药技术的发展，精准医疗已成为国家战略性新兴产业的重要组成部分。胶乳增强免疫比浊法是一种较为稳定、准确、高效的体液蛋白均相免疫比浊检测方法，近年来被广泛用于特种蛋白、肿瘤标志物等体外诊断试剂的开发中。其具体原理是：将特定的抗体包被在高分子胶乳微球表面，当加入待检抗原时，抗体能在短时间内识别并捕捉抗原，迅速聚集形成抗原-抗体-微球交联复合物，从而引起溶液吸光度的变化。胶乳增强免疫比浊法主要具有以下优点：(1)线性相关性较高，免疫复合物形成的浊度与待测抗原的含量密切相关，且胶乳微球的添加可显著提高检测试剂的灵敏度；(2)检测时间短，一般为5～20min；(3)应用范围广，操作简单，适配于各类普通生化分析仪，可在各级基层医疗机构推广使用。
胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒主要由试剂R1、试剂R2、校准品、质控品等多个部分组成，其中试剂R2通常为包被特定抗体的纳米微球，在试剂的性能中起决定性作用。在临床应用中，部分患者体液中的待测蛋白或标志物含量较高(即抗原过剩)引起的后带效应，极易导致假阴性的出现(即HOOK效应)，最终引发医生误诊。为了避免或延迟HOOK效应的出现，试剂开发人员会采用样品倍比稀释、降低促凝剂的用量及回加游离抗体等方式，然而上述做法均会导致低值样本(抗原较少)反应度的显著下降。然而，低值样本反应度偏低势必导致低值的赋值精密度降低，这是由于仪器噪音、试剂或样本均一性、外界环境气压及温湿度等因素导致较为明显的误差，甚至影响临床决定水平的判断。因此，在常规技术手段中同时提高低值反应度及抗HOOK能力是无法实现的。需要指出的是，在人体体液中很多具有临床判断意义的待测蛋白或标志物如SAA、NGAL、mALB、PCT等均存在较宽的含量分布范围，对相应诊断试剂均提出了低值精密度及高值抗HOOK能力的需求，因此开发一种同时提高抗HOOK能力及低值反应度的胶乳免疫比浊试剂的制备方法具有重要意义。
发明内容
本发明提供一种兼具低值精密度以及抗HOOK能力的胶乳免疫比浊试剂，包括试剂R1以及试剂R2，其特征在于，所述试剂R2包括三种及以上包被特定抗体的胶乳微球。
优选地，所述三种及以上包被特定抗体的胶乳微球包括抗体1与胶乳微球1交联而成的微球抗体复合物1、抗体2与胶乳微球2交联而成的微球抗体复合物2，其中，胶乳微球1的粒径小于胶乳微球2的粒径。
优选地，所述三种及以上包被特定抗体的胶乳微球还包括抗体1与胶乳微球2交联而成的微球抗体复合物3，优选地，所述胶乳微球1的粒径为15-200nm，优选为30-100nm，所述胶乳微球2的粒径为60-400nm，优选为120-300nm，优选的胶乳微球组合为：粒径为30nm的胶乳微球1及100nm的胶乳微球2；粒径为30nm的胶乳微球1及110nm的胶乳微球2；粒径为30nm的胶乳微球1及120nm的胶乳微球2；粒径为30nm的胶乳微球1及130nm的胶乳微球2；粒径为30nm的胶乳微球1及140nm的胶乳微球2；粒径为30nm的胶乳微球1及150nm的胶乳微球2；粒径为30nm的胶乳微球1及160nm的胶乳微球2；粒径为30nm的胶乳微球1及170nm的胶乳微球2；粒径为30nm的胶乳微球1及180nm的胶乳微球2；粒径为30nm的胶乳微球1及190nm的胶乳微球2；粒径为30nm的胶乳微球1及200nm的胶乳微球2；粒径为40nm的胶乳微球1及100nm的胶乳微球2；粒径为40nm的胶乳微球1及110nm的胶乳微球2；粒径为40nm的胶乳微球1及120nm的胶乳微球2；粒径为40nm的胶乳微球1及130nm的胶乳微球2；粒径为40nm的胶乳微球1及140nm的胶乳微球2；粒径为40nm的胶乳微球1及150nm的胶乳微球2；粒径为40nm的胶乳微球1及160nm的胶乳微球2；粒径为40nm的胶乳微球1及170nm的胶乳微球2；粒径为40nm的胶乳微球1及180nm的胶乳微球2；粒径为40nm的胶乳微球1及190nm的胶乳微球2；粒径为40nm的胶乳微球1及200nm的胶乳微球2；粒径为45nm的胶乳微球1及100nm的胶乳微球2；粒径为45nm的胶乳微球1及110nm的胶乳微球2；粒径为45nm的胶乳微球1及120nm的胶乳微球2；粒径为45nm的胶乳微球1及130nm的胶乳微球2；粒径为45nm的胶乳微球1及140nm的胶乳微球2；粒径为45nm的胶乳微球1及150nm的胶乳微球2；粒径为45nm的胶乳微球1及160nm的胶乳微球2；粒径为45nm的胶乳微球1及170nm的胶乳微球2；粒径为45nm的胶乳微球1及180nm的胶乳微球2；粒径为45nm的胶乳微球1及190nm的胶乳微球2；粒径为45nm的胶乳微球1及200nm的胶乳微球2；粒径为50nm的胶乳微球1及100nm的胶乳微球2；粒径为50nm的胶乳微球1及110nm的胶乳微球2；粒径为50nm的胶乳微球1及120nm的胶乳微球2；粒径为50nm的胶乳微球1及130nm的胶乳微球2；粒径为50nm的胶乳微球1及140nm的胶乳微球2；粒径为50nm的胶乳微球1及150nm的胶乳微球2；粒径为50nm的胶乳微球1及160nm的胶乳微球2；粒径为50nm的胶乳微球1及170nm的胶乳微球2；粒径为50nm的胶乳微球1及180nm的胶乳微球2；粒径为50nm的胶乳微球1及190nm的胶乳微球2；粒径为50nm的胶乳微球1及200nm的胶乳微球2；粒径为55nm的胶乳微球1及100nm的胶乳微球2；粒径为55nm的胶乳微球1及110nm的胶乳微球2；粒径为55nm的胶乳微球1及120nm的胶乳微球2；粒径为55nm的胶乳微球1及130nm的胶乳微球2；粒径为55nm的胶乳微球1及140nm的胶乳微球2；粒径为55nm的胶乳微球1及150nm的胶乳微球2；粒径为55nm的胶乳微球1及160nm的胶乳微球2；粒径为55nm的胶乳微球1及170nm的胶乳微球2；粒径为55nm的胶乳微球1及180nm的胶乳微球2；粒径为55nm的胶乳微球1及190nm的胶乳微球2；粒径为55nm的胶乳微球1及200nm的胶乳微球2；粒径为60nm的胶乳微球1及100nm的胶乳微球2；粒径为60nm的胶乳微球1及110nm的胶乳微球2；粒径为60nm的胶乳微球1及120nm的胶乳微球2；粒径为60nm的胶乳微球1及130nm的胶乳微球2；粒径为60nm的胶乳微球1及140nm的胶乳微球2；粒径为60nm的胶乳微球1及150nm的胶乳微球2；粒径为60nm的胶乳微球1及160nm的胶乳微球2；粒径为60nm的胶乳微球1及170nm的胶乳微球2；粒径为60nm的胶乳微球1及180nm的胶乳微球2；粒径为60nm的胶乳微球1及190nm的胶乳微球2；粒径为60nm的胶乳微球1及200nm的胶乳微球2；粒径为65nm的胶乳微球1及100nm的胶乳微球2；粒径为65nm的胶乳微球1及110nm的胶乳微球2；粒径为65nm的胶乳微球1及120nm的胶乳微球2；粒径为65nm的胶乳微球1及130nm的胶乳微球2；粒径为65nm的胶乳微球1及140nm的胶乳微球2；粒径为65nm的胶乳微球1及150nm的胶乳微球2；粒径为65nm的胶乳微球1及160nm的胶乳微球2；粒径为65nm的胶乳微球1及170nm的胶乳微球2；粒径为65nm的胶乳微球1及180nm的胶乳微球2；粒径为65nm的胶乳微球1及190nm的胶乳微球2；粒径为65nm的胶乳微球1及200nm的胶乳微球2；粒径为70nm的胶乳微球1及100nm的胶乳微球2；粒径为70nm的胶乳微球1及110nm的胶乳微球2；粒径为70nm的胶乳微球1及120nm的胶乳微球2；粒径为70nm的胶乳微球1及130nm的胶乳微球2；粒径为70nm的胶乳微球1及140nm的胶乳微球2；粒径为70nm的胶乳微球1及150nm的胶乳微球2；粒径为70nm的胶乳微球1及160nm的胶乳微球2；粒径为70nm的胶乳微球1及170nm的胶乳微球2；粒径为70nm的胶乳微球1及180nm的胶乳微球2；粒径为70nm的胶乳微球1及190nm的胶乳微球2；粒径为70nm的胶乳微球1及200nm的胶乳微球2；粒径为75nm的胶乳微球1及100nm的胶乳微球2；粒径为75nm的胶乳微球1及110nm的胶乳微球2；粒径为75nm的胶乳微球1及120nm的胶乳微球2；粒径为75nm的胶乳微球1及130nm的胶乳微球2；粒径为75nm的胶乳微球1及140nm的胶乳微球2；粒径为75nm的胶乳微球1及150nm的胶乳微球2；粒径为75nm的胶乳微球1及160nm的胶乳微球2；粒径为75nm的胶乳微球1及170nm的胶乳微球2；粒径为75nm的胶乳微球1及180nm的胶乳微球2；粒径为75nm的胶乳微球1及190nm的胶乳微球2；粒径为75nm的胶乳微球1及200nm的胶乳微球2；粒径为80nm的胶乳微球1及100nm的胶乳微球2；粒径为80nm的胶乳微球1及110nm的胶乳微球2；粒径为80nm的胶乳微球1及120nm的胶乳微球2；粒径为80nm的胶乳微球1及130nm的胶乳微球2；粒径为80nm的胶乳微球1及140nm的胶乳微球2；粒径为80nm的胶乳微球1及150nm的胶乳微球2；粒径为80nm的胶乳微球1及160nm的胶乳微球2；粒径为80nm的胶乳微球1及170nm的胶乳微球2；粒径为80nm的胶乳微球1及180nm的胶乳微球2；粒径为80nm的胶乳微球1及190nm的胶乳微球2；粒径为80nm的胶乳微球1及200nm的胶乳微球2；粒径为85nm的胶乳微球1及100nm的胶乳微球2；粒径为85nm的胶乳微球1及110nm的胶乳微球2；粒径为85nm的胶乳微球1及120nm的胶乳微球2；粒径为85nm的胶乳微球1及130nm的胶乳微球2；粒径为85nm的胶乳微球1及140nm的胶乳微球2；粒径为85nm的胶乳微球1及150nm的胶乳微球2；粒径为85nm的胶乳微球1及160nm的胶乳微球2；粒径为85nm的胶乳微球1及170nm的胶乳微球2；粒径为85nm的胶乳微球1及180nm的胶乳微球2；粒径为85nm的胶乳微球1及190nm的胶乳微球2；粒径为85nm的胶乳微球1及200nm的胶乳微球2；粒径为90nm的胶乳微球1及100nm的胶乳微球2；粒径为90nm的胶乳微球1及150nm的胶乳微球2；粒径为90nm的胶乳微球1及160nm的胶乳微球2；粒径为90nm的胶乳微球1及170nm的胶乳微球2；粒径为90nm的胶乳微球1及180nm的胶乳微球2；粒径为90nm的胶乳微球1及190nm的胶乳微球2；粒径为90nm的胶乳微球1及200nm的胶乳微球2；粒径为90nm的胶乳微球1及210nm的胶乳微球2；粒径为90nm的胶乳微球1及220nm的胶乳微球2；粒径为90nm的胶乳微球1及230nm的胶乳微球2；粒径为90nm的胶乳微球1及240nm的胶乳微球2；粒径为90nm的胶乳微球1及250nm的胶乳微球2；粒径为90nm的胶乳微球1及260nm的胶乳微球2；粒径为90nm的胶乳微球1及270nm的胶乳微球2；粒径为90nm的胶乳微球1及280nm的胶乳微球2；粒径为90nm的胶乳微球1及290nm的胶乳微球2；
优选地，所述三种及以上包被特定抗体的胶乳微球还包括抗体1与胶乳微球3交联的微球抗体复合物4，其中胶乳微球3的粒径大于胶乳微球1。
优选地，所述胶乳微球1的粒径为15-200nm，优选为30-100nm；所述胶乳微球2的粒径为60-400nm，优选为120-300nm；所述胶乳微球3的粒径为60-400nm，优选为120-300nm。优选的胶乳微球组合为：粒径为30nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、120nm的胶乳微球3；粒径为30nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、140nm的胶乳微球3；粒径为30nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、150nm的胶乳微球3；粒径为30nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、160nm的胶乳微球3；粒径为30nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、170nm的胶乳微球3；粒径为30nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为30nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为30nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、200nm的胶乳微球3；粒径为30nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、220nm的胶乳微球3；粒径为30nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、250nm的胶乳微球3；粒径为40nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、120nm的胶乳微球3；粒径为40nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、140nm的胶乳微球3；粒径为40nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、150nm的胶乳微球3；粒径为40nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、160nm的胶乳微球3；粒径为40nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、170nm的胶乳微球3；粒径为40nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为40nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为40nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、200nm的胶乳微球3；粒径为40nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、220nm的胶乳微球3；粒径为40nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、250nm的胶乳微球3；粒径为50nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、120nm的胶乳微球3；粒径为50nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、150nm的胶乳微球3；粒径为50nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、150nm的胶乳微球3；粒径为50nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、160nm的胶乳微球3；粒径为50nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、170nm的胶乳微球3；粒径为50nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为50nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为50nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、200nm的胶乳微球3；粒径为50nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、220nm的胶乳微球3；粒径为50nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、250nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、120nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、170nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、170nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、160nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、170nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、200nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、220nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、270nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、120nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、170nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、170nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、160nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、170nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、200nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、220nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、270nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、130nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、170nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、170nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、160nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、170nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、200nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、220nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、270nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、140nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、170nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、170nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、160nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、170nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、200nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、220nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、270nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、150nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、170nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、170nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、160nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、170nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、200nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、220nm的胶乳微球3；粒径为70nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、270nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、120nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、160nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、200nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、220nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、280nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、120nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、160nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、200nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、220nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、280nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、130nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、160nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、200nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、220nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、280nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、140nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、160nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、200nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、220nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、280nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、150nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、160nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、180nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、200nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、220nm的胶乳微球3；粒径为80nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、280nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、120nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、160nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、200nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、220nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、100nm的胶乳微球2、290nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、120nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、160nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、200nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、220nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、120nm的胶乳微球2、290nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、130nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、160nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、200nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、220nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、130nm的胶乳微球2、290nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、140nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、160nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、200nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、220nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、140nm的胶乳微球2、290nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、150nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、160nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、190nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、200nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、220nm的胶乳微球3；粒径为90nm的胶乳微球1、150nm的胶乳微球2、290nm的胶乳微球3；
优选地，所述微球抗体复合物1、微球抗体复合物2以及微球抗体复合物3的质量配比为1：(0.5-1.5)：(0.2-1.0)。
优选地，所述微球抗体复合物1、微球抗体复合物2以及微球抗体复合物4的配比为1：(0.5-1.5)：(0.2-1.0)。
优选地，所述抗体1以及抗体2为识别表位不同的单克隆抗体。
优选地，所述试剂盒可用于定量检测SAA、PCT或NGAL中的至少一种。
本发明的有益效果在于：相比于其他以常规技术、相同的单克隆抗体及相同粒径微球制备的胶乳增强免疫比浊法试剂，本发明在试剂R2中利用三种包被特定抗体的胶乳微球，其中至少由两种及以上粒径显著不同的胶乳微球以及两种及以上识别表位不同的单克隆抗体组合制备得到，所述技术方案制备得到的检测试剂在保证常规检测性能的基础上，可以显著提高对于高值样本的抗HOOK能力以及对于低值样本的反应度，最终达到显著提高低值精密度、避免假低值或假阴性的技术效果，充分满足临床检测需求。
附图说明
图1为本发明实施例2所述的A组以及B组试剂盒检测值与样本理论值的线性相关性分析图；
图2为本发明实施例3所述的A、B、C、D以及E组试剂盒检测值与样本理论值的线性相关性分析图；
图3为本发明实施例4所述的A、B、C以及D组试剂盒检测值与样本理论值的线性相关性分析图；
图4为本发明实施例5所述的A组以及B组试剂盒检测值与样本理论值的线性相关性分析图；
图5为本发明实施例6所述的A组以及B组试剂盒检测值与样本理论值的线性相关性分析图。
具体实施例
本文包括以下的实施例，用于以例证的方式更清楚、明确地阐述本发明的技术方案。本领域技术人员根据本文的公开应当理解，可以在所公开的特定的实施方式中进行许多改变但是仍然获得相似或类似的结果，而不偏离本发明的思想和范围。本发明的具体实施方式仅用于解释本发明，而非意图通过任何方式限制本发明。
实施例1 SAA检测试剂盒的制备
本发明的淀粉样蛋白A检测试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分。
1.试剂R1的制备
按照下述配方进行配制，充分搅拌混匀后，放于2-8℃保存。
其余溶剂为水
pH 8.0
2.试剂R2的制备
(1)胶乳微球悬浊液1制备：
①量取1.0mL柠檬酸缓冲液，加入50μL粒径70nm的胶乳微球1(固含量10％)；
②加入10μL 1％EDC活化剂，快速混匀后，孵育30min，活化胶乳微球1；
③加入标记终浓度为0.3mg/mL的SAA单克隆抗体1(购自Medix)，快速混匀后，置于摇床上进行交联反应(大于6h)；
④加入800μL 40g/L BSA，封闭1h；
⑤超声分散，即得胶乳微球悬浊液1。
(2)胶乳微球悬浊液2的制备：
①量取1.0mL柠檬酸缓冲液，加入50μL粒径为150nm胶乳微球2(固含量10％)；
②加入10μL 1％EDC活化剂，快速混匀后，孵育30min，活化胶乳微球2；
③加入标记终浓度为0.3mg/mL的SAA单克隆抗体2(购自Medix)，快速混匀后，置于摇床上进行交联反应(大于6h)；
④加入800μL 40g/L BSA，封闭1h；
⑤超声分散，即得胶乳微球悬浊液2。
(3)胶乳微球悬浊液3的制备：
⑥量取1.0mL柠檬酸缓冲液，加入50μL粒径150nm的胶乳微球3(固含量10％)；
⑦加入10μL 1％EDC活化剂，快速混匀后，孵育30min，活化胶乳微球3；
⑧加入标记终浓度为0.3mg/mL的SAA单克隆抗体1(购自Medix)，快速混匀后，置于摇床上进行交联反应(大于6h)；
⑨加入800μL 40g/L BSA，封闭1h；
⑩超声分散，即得胶乳微球悬浊液3。
(4)R2试剂后处理
将上述胶乳微球悬浊液1-3按体积比8:7:5(微球抗体复合物的质量配比为1:0.875:0.625)混合均匀后，37℃老化12h。
实施例2 SAA检测试剂盒性能测试
为了验证本发明试剂盒的各项性能，共设置两组试剂盒进行性能验证：
A组：本发明实施例1制备得到的试剂盒。
B组：市售试剂盒
使用上述两组试剂盒分别对SAA定标品进行测试，通过全自动生化分析仪(贝克曼AU5800)读取信号，三组试剂盒的准确度检测结果如下表所示：
表1准确度
使用上述两组试剂盒分别对SAA低值、中值以及高值临床样本进行测试，通过全自动生化分析仪(贝克曼AU5800)读取信号，两组试剂盒的检测结果如下表所示：
表2精密度
使用上述两组试剂盒分别对SAA临床赋值后按浓度梯度稀释样本进行测试，通过全自动生化分析仪(贝克曼AU5800)读取信号，两组试剂盒的检测结果如下表所示：
表3线性范围
血清淀粉样蛋白A(SAA)在临床上主要用于非特异性炎症的指标，在人体血清或血浆中临床决定水平通常为10mg/L，但部分严重患者血液中可达到1000mg/L以上，因此SAA胶乳免疫比浊试剂应同时具备较高的低值精密度(10mg/L)及抗HOOK能力(2000mg/L或以上)。由上述实验结果可知，A组试剂盒的检测准确度可控制在1％以内，而B组试剂盒仅能控制在4％以内，两组试剂盒在低值样本检测时的变异系数分别0.69％以及6.70％、中值样本检测时的变异系数分别为1.39％以及5.31％，高值样本检测时的变异系数分别为0.94％以及1.81％，其中A组试剂盒的低值精密度显著优于B组。同时将两组试剂盒对临床样本的检测结果与样本浓度理论值进行比对分析(如附图1所示)，结果显示，A组检测值与理论值的相关性显著优于B组，其中A组检测值与理论值的相关性R2为0.9999，B组R2为0.9966，实验结果说明本发明实施例1制备得到的试剂盒较B组试剂盒具有更好的线性范围，尤其是针对浓度高于600mg/L的高值样本，根据实验结果，推测本发明实施例制备得到的试剂盒针对高值样本而言具有更好的抗HOOK能力。
实施例3胶乳微球与抗体标记工艺对试剂盒性能的影响
为验证胶乳微球与抗体标记工艺对试剂盒性能的影响，共设置以下五组试剂盒：
A组：本发明实施例1所述试剂盒
B组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别仅在于，仅包含两种标记特定抗体的胶乳微球，分别为包被SAA单克隆抗体1的粒径为120nm的胶乳微球以及包被SAA单克隆抗体2的粒径为120nm的胶乳微球，两种标记特定抗体的胶乳微球质量配比为1：1；
C组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别仅在于，包含两种标记特定抗体的胶乳微球，分别为包被有SAA单克隆抗体1的粒径为70nm的胶乳微球，以及包被有SAA单克隆抗体2的粒径为150nm的胶乳微球，两种标记特定抗体的胶乳微球质量配比为1:1；
D组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别仅在于，包含三种标记特定抗体的胶乳微球，分别为包被有SAA单克隆抗体1粒径为70nm的胶乳微球、包被有SAA单克隆抗2体粒径为70nm的胶乳微球以及包被有SAA单克隆抗体1粒径为150nm的胶乳微球，三种标记特定抗体的胶乳微球质量配比为1:1:1；
E组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别在于，包含三种标记特定抗体的胶乳微球，分别为包被有SAA单克隆抗体1粒径为70nm的胶乳微球、包被有SAA单克隆抗体1的粒径为150nm的胶乳微球以及包被有单克隆抗体2的粒径为200nm的胶乳微球，三种标记特定抗体的胶乳微球质量配比为1:1:1；
使用上述五组试剂盒分别对SAA定标品进行测试，通过全自动生化分析仪(贝克曼AU5800)读取信号，五组试剂盒的反应度结果如下表所示：
表4反应度
使用上述五组试剂盒分别对SAA低值临床样本进行测试，通过全自动生化分析仪(贝克曼AU5800)读取信号，五组试剂盒的赋值结果如下表所示：
表5低值精密度
| 样本 | A组 | B组 | C组 | D组 | E组 |
| 1 | 10.54 | 11.02 | 10.03 | 9.87 | 10.23 |
| 2 | 10.39 | 12.23 | 10.56 | 10.34 | 10.21 |
| 3 | 10.44 | 10.45 | 10.23 | 10.87 | 10.34 |
| 4 | 10.28 | 11.34 | 11.02 | 10.24 | 10.34 |
| 5 | 10.42 | 11.72 | 10.22 | 10.54 | 10.26 |
| 6 | 10.51 | 10.67 | 10.98 | 9.87 | 10.33 |
| 7 | 10.38 | 10.98 | 11.45 | 9.76 | 10.35 |
| 8 | 10.39 | 10.02 | 10.34 | 10.04 | 10.41 |
| 9 | 10.35 | 9.87 | 11.73 | 10.34 | 10.48 |
| 10 | 10.42 | 10.32 | 10.04 | 11.34 | 10.35 |
| 均值 | 10.41 | 10.86 | 10.66 | 10.32 | 10.33 |
| SD | 0.07 | 0.75 | 0.60 | 0.49 | 0.08 |
| CV | 0.72％ | 6.91％ | 5.66％ | 4.79％ | 0.79％ |
使用上述五组试剂盒分别对SAA高值赋值样本进行测试，通过全自动生化分析仪(贝克曼AU5800)读取信号，五组试剂盒的赋值结果如下表所示：
表6抗HOOK
| 理论值(mg/L) | A组 | B组 | C组 | D组 | E组 |
| 200 | 202.42 | 201.35 | 198.67 | 199.56 | 201.14 |
| 400 | 400.12 | 391.68 | 398.28 | 401.37 | 402.88 |
| 600 | 582.87 | 502.34 | 552.48 | 542.86 | 587.03 |
| 800 | 742.76 | 421.23 | 592.63 | 604.82 | 729.54 |
| 1000 | 800.51 | 380.87 | 632.49 | 642.80 | 792.68 |
| 1200 | 831.76 | 343.25 | 520.74 | 542.66 | 827.69 |
| 1500 | 864.02 | 301.76 | 473.74 | 487.39 | 857.23 |
| 2000 | 903.98 | 242.88 | 418.38 | 447.84 | 892.38 |
由上述实验结果可知，五组试剂盒在低值样本检测时的变异系数分别0.72％、6.91％、5.66％、4.79％以及0.79％、其中A组试剂盒以及E组试剂盒的低值精密度均在1.0％以内。同时将六组试剂盒对高值样本的检测结果与样本浓度理论值进行比对分析(如附图2所示)，结果显示，A组以及E组试剂盒的抗HOOK能力显著优于B、C以及D组试剂盒。
实施例4包被特定抗体的胶乳微球配比对试剂盒性能的影响
为验证包被特定抗体胶乳微球的配比对试剂盒性能的影响，共设置以下4组试剂盒：
A组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别仅在于，微球抗体复合物1、微球抗体复合物2以及微球抗体复合物3的质量配比为1：1：1；
B组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别仅在于，微球抗体复合物1、微球抗体复合物2以及微球抗体复合物3的质量配比为1：0.5：0.2；
C组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别仅在于，微球抗体复合物1、微球抗体复合物2以及微球抗体复合物3的质量配比为1：1.5：1；
D组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别仅在于，微球抗体复合物1、微球抗体复合物2以及微球抗体复合物3的质量配比为1：2：1.5。
使用上述四组试剂盒分别对SAA定标品进行测试，通过全自动生化分析仪(贝克曼AU5800)读取信号，四组试剂盒的反应度结果如下表所示：
表7反应度
| 标准品(mg/L) | A组 | B组 | C组 | D组 |
| S1(0) | -4 | 6 | 3 | -8 |
| S2(10) | 427 | 304 | 504 | 517 |
| S3(40) | 1835 | 1095 | 1927 | 2185 |
| S4(125) | 3733 | 2860 | 4017 | 5250 |
| S5(250) | 5482 | 4738 | 6004 | 8721 |
| S6(500) | 7605 | 6843 | 8803 | 8901 |
使用上述四组试剂盒分别对SAA低值临床样本进行测试，通过全自动生化分析仪(贝克曼AU5800)读取信号，四组试剂盒的赋值结果如下表所示：
表8精密度
使用上述四组试剂盒分别对SAA高值赋值样本进行测试，通过全自动生化分析仪(贝克曼AU5800)读取信号，四组试剂盒的赋值结果如下表所示：
表9抗HOOK
| 理论值(mg/L) | A组 | B组 | C组 | D组 |
| 200 | 204.35 | 196.81 | 200.76 | 199.69 |
| 400 | 402.45 | 397.28 | 399.39 | 400.73 |
| 600 | 579.23 | 562.97 | 592.75 | 586.45 |
| 800 | 735.34 | 624.97 | 647.86 | 621.88 |
| 1000 | 834.49 | 688.24 | 673.19 | 517.83 |
| 1200 | 898.34 | 716.87 | 679.25 | 437.66 |
| 1500 | 903.34 | 729.76 | 682.72 | 429.51 |
| 2000 | 890.23 | 741.73 | 685.29 | 401.70 |
由上述实验结果可知，四组试剂盒在低值样本检测时的变异系数分别1.15％、2.45％、1.99％以及6.24％、其中A、B以及C组试剂盒的低值精密度均可以控制在3％以内。同时将四组试剂盒对高值样本的检测结果与样本浓度理论值进行比对分析(如附图3所示)，结果显示，A、B以及C组试剂盒的抗HOOK能力显著优于D组。
因此，当血清淀粉样蛋白A检测试剂盒采用本发明实施例1所述技术方案，即试剂R2中包含由三种包被特定抗体的微球组成，分别为由单克隆抗体1与小粒径胶乳微球交联而成的微球抗体复合物1、由单克隆抗体1与大粒径胶乳微球交联而成微球抗体复合物2以及由单克隆抗体2与大粒径胶乳微球交联而成的微球抗体复合物3组成时，且三种微球抗体复合物的质量配比在1：(0.5-1.5)：(0.2-1.0)范围内时，试剂盒具有较好的抗HOOK能力以及低值精密度。
本发明的具体原理：
(1)减弱前带效应
抗原抗体特异性反应时，生成结合物的量与反应物的浓度有关。然而，抗原抗体的结合效率并非是始终如一的。
当待测抗原含量较低时(又称抗体过量)，抗原抗体的结合效率较低，会导致明显的前带效应，使得检测得到的低值反应度偏低，最终影响到低值检测的精密度下降。虽然采用较大粒径的胶乳微球对提高低值反应度有一定裨益，然而极易导致高值样本的反应度超出可检测范围，且对抗HOOK性能不能起到任何促进作用，甚至更容易提前出现HOOK效应，因此并非灵丹妙药；提高促凝剂的浓度、增大样本量等常规手段虽然也可以提高低值反应度，但试剂的抗HOOK能力将显著降低。
(2)减弱后带效应
当待测抗原含量较高时(又称抗原过量)，抗原与单克隆抗体的竞争性结合将导致抗原-抗体-微球交联复合物的形成效率显著下降，会导致明显的后带效应，使得高值检测得到的反应度反而下降，最终导致假低值甚至假阴性。虽然通过降低促凝剂的浓度、添加游离的抗体等常规手段可以延迟或减弱HOOK效应，但低值检测的反应度、精密度将显著下降。
本发明制备的试剂中由三种及以上包被特定抗体的微球抗体复合物悬浊液混合而成，其中至少由两种及以上粒径显著不同的胶乳微球、两种及以上识别表位不同的单克隆抗体。当待测抗原含量较低时，在空间分布上大型胶乳微球之间更易于形成交联复合物，从而显著提高低值检测的反应度；当待测抗原含量较高时，抗体复合物的种类增多使得其在交联时具备更多的可选择性，因此可以减弱HOOK效应；此外，在满足相同S2反应度(低值)条件下，本发明制备的试剂可以添加更多的游离抗体，这同样可以起到显著延迟HOOK效应的效果。综上，本发明制备的试剂能同时提高抗HOOK能力及低值反应度，最终达到显著提高低值精密度、避免假低值或假阴性的技术效果。
实施例5NGAL检测试剂盒
1.NGAL检测试剂盒的制备
本发明的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分。
1.试剂R1的制备
按照下述配方进行配制，充分搅拌混匀后，放于2-8℃保存。
其余溶剂为水
pH 7.5
2.试剂R2的制备
(1)胶乳微球悬浊液1制备：
①量取1.0mL硼酸缓冲液，加入50μL粒径50nm的胶乳微球1(固含量10％)；
②加入8μL 1％EDC和20μL 1％NHS活化剂，快速混匀后，孵育30min，活化胶乳微球1；
③加入标记终浓度为0.5mg/mL的NGAL单克隆抗体1(购自菲鹏生物)，快速混匀后，置于摇床上进行交联反应(大于6h)；
④加入1000μL 40g/L BSA，封闭1h；
⑤超声分散，即得胶乳微球悬浊液1。
(2)胶乳微球悬浊液2制备：
①量取1.0mL硼酸缓冲液，加入50μL粒径170nm的胶乳微球2(固含量10％)；
②加入8μL 1％EDC和20μL 1％NHS活化剂，快速混匀后，孵育30min，活化胶乳微球2；
③加入标记终浓度为0.3mg/mL的NGAL单克隆抗体2(购自菲鹏生物)，快速混匀后，置于摇床上进行交联反应(大于6h)；
④加入1000μL 40g/L BSA，封闭1h；
⑤超声分散，即得胶乳微球悬浊液2。
(3)胶乳微球悬浊液3制备：
①量取1.0mL硼酸缓冲液，加入50μL粒径170nm的胶乳微球2(固含量10％)；
②加入8μL 1％EDC和20μL 1％NHS活化剂，快速混匀后，孵育30min，活化胶乳微球2；
③加入标记终浓度为0.3mg/mL的NGAL单克隆抗体1(购自菲鹏生物)，快速混匀后，置于摇床上进行交联反应(大于6h)；
④加入1000μL 40g/L BSA，封闭1h；
⑤超声分散，即得胶乳微球悬浊液3。
(4)R2试剂后处理
将上述胶乳微球悬浊液1-3按体积比9:6:5(微球抗体复合物的比例为1:0.667:0.556)混合均匀后，37℃老化2d。
3.NGAL检测试剂盒的性能测试
为了验证本发明试剂盒的各项性能，共设置两组试剂盒进行性能验证：
A组：上述制备方法的得到的NGAL检测试剂盒
B组：市售试剂盒。
使用上述两种试剂盒针对NGAL定标品进行测试，通过全自动生化分析仪(贝克曼AU5800)读取信号，反应度结果如下表所示：
表10反应度
| 标准品浓度(ng/mL) | A组(△Abs) | B组(△Abs) |
| S1(0) | 11 | -3 |
| S2(50) | 380 | 154 |
| S3(150) | 907 | 512 |
| S4(600) | 3116 | 3042 |
| S5(3000) | 12252 | 9150 |
| S1(0) | 11 | -3 |
使用上述两组试剂盒分别对NGAL低值临床样本进行测试，通过全自动生化分析仪(贝克曼AU5800)读取信号，赋值结果如下表所示：
表11低值精密度
使用上述试剂盒对NGAL高值赋值样本进行测试，通过全自动生化分析仪(贝克曼AU5800)读取信号，三组试剂盒的赋值结果如下表所示：
表12抗HOOK
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白NGAL，在临床上主要用于辅助诊断肾功能损伤，在人体血清或血浆中临床决定水平通常为145ng/mL，尿液中临床决定水平通常为45ng/mL，但部分严重患者尿液中可达到3000ng/mL以上，因此NGAL胶乳免疫比浊试剂应同时具备较高的低值精密度(45ng/mL)及抗HOOK能力(5000ng/mL或以上)。由上述实验结果可知，采用本发明所述方法制备得到的试剂盒，不仅具有较好的低值精密度(CV值可控制在1％)，同时将两组试剂盒的检测结果与样本浓度理论值进行比对分析(如附图4所示)发现，本发明制备得到的试剂盒A相较于B组试剂盒对于高值样本具有更好的抗HOOK能力，可充分满足临床检测需求。
实施例6PCT检测试剂盒
1.PCT检测试剂盒的制备
本发明的降钙素原检测试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分。
1.试剂R1的制备
按照下述配方进行配制，充分搅拌混匀后，放于2-8℃保存。
Tris 100mmoL/L
PEG6000 15g/L
其余溶剂为水
pH 7.8
2.试剂R2的制备
(1)胶乳微球悬浊液1制备：
①量取1.0mL甘氨酸缓冲液，加入50μL粒径为45nm胶乳微球1(固含量10％)；
②加入10μL 1％EDC和30μL 1％NHS活化剂，快速混匀后，孵育30min，活化胶乳微球1；
③加入标记终浓度为0.5mg/mL的PCT单克隆抗体1(购自Medix)，快速混匀后，置于摇床上进行交联反应(大于6h)；
④加入600μL 40g/L BSA，封闭1h；
⑤超声分散，即得胶乳微球悬浊液1。
(2)胶乳微球悬浊液2制备：
①量取1.0mL甘氨酸缓冲液，加入50μL粒径为120nm胶乳微球2(固含量10％)；
②加入10μL 1％EDC和30μL 1％NHS活化剂，快速混匀后，孵育30min，活化胶乳微球2；
③加入标记终浓度为0.35mg/mL的PCT单克隆抗体2(购自Medix)，快速混匀后，置于摇床上进行交联反应(大于6h)；
④加入600μL 40g/L BSA，封闭1h；
⑤超声分散，即得胶乳微球悬浊液2。
(3)胶乳微球悬浊液3制备：
①量取1.0mL甘氨酸缓冲液，加入50μL粒径为120nm胶乳微球2(固含量10％)；
②加入10μL 1％EDC和30μL 1％NHS活化剂，快速混匀后，孵育30min，活化胶乳微球2；
③加入标记终浓度为0.35mg/mL的PCT单克隆抗体1(购自Medix)，快速混匀后，置于摇床上进行交联反应(大于6h)；
④加入600μL 40g/L BSA，封闭1h；
⑥超声分散，即得胶乳微球悬浊液3。
(4)R2试剂后处理
将上述胶乳微球悬浊液1-3按体积比10:6:4(微球抗体复合物的比例为1:0.6:0.4)混合均匀后，37℃老化1d。
3.PCT检测试剂盒的性能测试
为了验证本发明试剂盒的各项性能，共设置两组试剂盒进行性能验证：
A组：上述制备方法的得到的PCT检测试剂盒
B组：市售试剂盒。
使用上述两组试剂盒针对PCT定标品进行测试，通过全自动生化分析仪(贝克曼AU5800)读取信号，反应度结果如下表所示：
表13反应度
| 标准品浓度(ng/mL) | A组(△Abs) | B组(△Abs) |
| S1(0) | 2 | -11 |
| S2(0.5) | 409 | 167 |
| S3(2) | 1264 | 621 |
| S4(10) | 4019 | 2854 |
| S5(50) | 13673 | 9340 |
使用上述两组PCT试剂盒分别对PCT低值临床样本进行测试，通过全自动生化分析仪(贝克曼AU5800)读取信号，赋值结果如下表所示：
表14低值精密度
| 样本 | A组 | B组 |
| 1 | 0.61 | 0.52 |
| 2 | 0.61 | 0.51 |
| 3 | 0.59 | 0.48 |
| 4 | 0.59 | 0.59 |
| 5 | 0.62 | 0.64 |
| 6 | 0.62 | 0.42 |
| 7 | 0.59 | 0.57 |
| 8 | 0.60 | 0.55 |
| 9 | 0.58 | 0.61 |
| 10 | 0.61 | 0.42 |
| 均值 | 0.60 | 0.53 |
| SD | 0.01 | 0.08 |
| CV | 2.32％ | 14.2％ |
使用上述试剂盒对PCT高值赋值样本进行测试，通过全自动生化分析仪(贝克曼AU5800)读取信号，三组试剂盒的赋值结果如下表所示：
表15抗HOOK
降钙素原PCT在临床上主要用于细菌感染性疾病的辅助诊断，在人体血清或血浆中临床决定水平通常为0.5ng/mL，但部分严重患者血液中可达到100ng/mL以上，因此PCT胶乳免疫比浊试剂应同时具备较高的低值精密度(0.5ng/mL)及抗HOOK能力(100ng/mL或以上)。由上述实验结果可知，采用本发明所述方法制备得到的试剂盒，不仅具有较好的低值精密度(可控制在3％以内)，同时将两组试剂盒的检测结果与样本浓度理论值进行比对分析(如附图5所示)发现本发明所述试剂盒A组较B组试剂盒对于高值样本具有更好的抗HOOK能力，可充分满足临床检测需求。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变形。
Claims (10)
1.一种兼具低值精密度以及抗HOOK能力的胶乳免疫比浊试剂，包括试剂R1以及试剂R2，其特征在于，所述试剂R2包括三种及以上包被特定抗体的胶乳微球。
2.根据权利要求1所述的一种兼具低值精密度以及抗HOOK能力的胶乳免疫比浊试剂，其特征在于，所述三种及以上包被特定抗体的胶乳微球包括抗体1与胶乳微球1交联而成的微球抗体复合物1、抗体2与胶乳微球2交联而成的微球抗体复合物2，其中，胶乳微球1的粒径小于胶乳微球2的粒径。
3.根据权利要求2所述的一种兼具低值精密度以及抗HOOK能力的胶乳免疫比浊试剂，其特征在于，所述三种及以上包被特定抗体的胶乳微球还包括抗体1与胶乳微球2交联而成的微球抗体复合物3。
4.根据权利要求3所述的一种兼具低值精密度以及抗HOOK能力的胶乳免疫比浊试剂，其特征在于，所述胶乳微球1的粒径为15-200nm，优选为30-100nm，所述胶乳微球2的粒径为60-400nm，优选为120-300nm。
5.根据权利要求2所述的一种兼具低值精密度以及抗HOOK能力的胶乳免疫比浊试剂，其特征在于，所述三种及以上包被特定抗体的胶乳微球还包括抗体1与胶乳微球3交联的微球抗体复合物4，其中胶乳微球3的粒径大于胶乳微球1。
6.根据权利要求5所述的一种兼具低值精密度以及抗HOOK能力的胶乳免疫比浊试剂，其特征在于，所述胶乳微球1的粒径为15-200nm，优选为30-100nm；所述胶乳微球2的粒径为60-400nm，优选为120-300nm；所述胶乳微球3的粒径为60-400nm，优选为120-300nm。
7.根据权利要求4所述的一种兼具低值精密度以及抗HOOK能力的胶乳免疫比浊试剂，其特征在于，所述微球抗体复合物1、微球抗体复合物2以及微球抗体复合物3的质量配比为1：(0.5-1.5)：(0.2-1.0)。
8.根据权利要求6所述的一种兼具低值精密度以及抗HOOK能力的胶乳免疫比浊试剂，其特征在于，所述微球抗体复合物1、微球抗体复合物2以及微球抗体复合物4的配比为1：(0.5-1.5)：(0.2-1.0)。
9.根据权利要求1-8任一项所述的一种兼具低值精密度以及抗HOOK能力的胶乳免疫比浊试剂，其特征在于，所述抗体1以及抗体2为识别表位不同的单克隆抗体。
10.根据权利要求1-8任一项所述的一种兼具低值精密度以及抗HOOK能力的胶乳免疫比浊试剂，其特征在于，所述试剂盒可用于定量检测SAA、PCT或NGAL中的至少一种。
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