CN114317471A - 使霉菌毒素解毒的手段和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及能够修饰脱氧雪腐镰刀菌烯醇的C8原子的多肽和基于其的方法(如用于使霉菌毒素解毒的方法)。本发明进一步涉及包含一种或多种能够修饰脱氧雪腐镰刀菌烯醇的C8原子的多肽的组合物、试剂盒、转基因植物、转基因种子、转基因花粉粒、食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物‑、草料‑或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物‑、草料‑或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元和/或其混合物。

Description

使霉菌毒素解毒的手段和方法
本申请包含计算机可读形式的序列表，其通过引用并入本文。
技术领域
本发明涉及能够修饰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和/或DON衍生物的 C8-原子的多肽及基于其(如用于使霉菌毒素解毒)的方法。本发明进一步涉及包含所述能够修饰脱氧雪腐镰刀菌烯醇和/或DON衍生物的C8-原子的多肽中的一种或多种的组合物、试剂盒、转基因植物、转基因种子、转基因花粉粒、食物(foodstuff)、中间食物；草料(fodder)、中间草料；饲料(feed)、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂、益生元、中间益生元和/或它们的混合物。本发明还涉及各种合适的转基因(例如重组)生产宿主(如细菌细胞、酵母细胞、哺乳动物细胞、昆虫细胞和/或植物细胞)以及采用如本发明的多肽进行所述生物转化(如其中在所述酶促生物转化期间，相应单端孢霉烯化合物(如 DON或DON衍生物)的碳链的C7-原子处的羟基(-OH)保持不变)，将单端孢霉烯(如DON或DON衍生物)生物转化为一种毒性低于初始相应单端孢霉烯化合物(如DON或DON衍生物)的分子的方法。
背景技术
霉菌毒素是由丝状真菌产生的次级代谢产物。这些真菌尤其生长在各种类型的谷粒和谷物上。通常，作物在收获前被真菌侵染，并且在收获之前和之后以及储存期间会产生霉菌毒素。根据粮食和农业组织称，约25％的农产品被霉菌毒素污染，这造成了相当大的经济损失。在自2004年1 月至2011年12月分析的19,757个样本中，72％的样本测试为至少一种霉菌毒素阳性，39％是共污染的(Schatzmayr和Streit.2013.World Mycotoxin Journal6(3)：213-222)。已知霉菌毒素会对人和动物造成严重的不利健康影响，包括致突变、致癌、神经毒性、免疫抑制或致畸作用。一类特别大的真菌毒素群组是单端孢霉烯霉菌毒素或单端孢霉烯。单端孢霉烯是一类倍半萜烯，其尤其由镰孢菌属(Fusarium)、漆斑菌属(Myrothecium)、肉座壳属(Podostroma)、木霉属(Trichoderma)或单端孢属(Trichothecium)种产生并可包含12，13-环氧环(在本文中可将其可互换地称为“12，13-环氧单端孢霉烯-9-烯”或“单端孢霉烯-环”)作为共同的结构特征：
Figure BDA0003289467840000021
单端孢霉烯霉菌毒素家族包含脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON、CAS no. 51481-10-8)、T-2毒素(CAS no.21259-20-1)、HT-2毒素(CAS no. 26934-87-2)、雪腐镰刀菌烯醇(nivalenol)(CAS no.23282-20-4)、fuseranon-X (CAS no.23255-69-8)、藨镰刀菌烯三醇(scripentriol)、15-乙酰氧基藨镰刀菌烯醇(15-acetoxyscirpenol)(CAS no.2623-22-5)、4，15-二乙酰氧基藨镰刀菌烯醇(4，15-diacetoxyscirpenol)(CAS no.2270-40-8)、木霉醇(trichodermol) (CAS no.2198-93-8)、疣疱菌素A(verrucarin A)(CAS no.3148-09-2)、疣疱菌素J(verrucarin J)(CAS no.4643-58-7)、异木霉菌素(isotrichodermin) (CASno.91423-90-4)、羟基异木霉素(hydroxyisotrichodermin)(CAS no. 344781-02-8)、calonectrin(CAS no.38818-51-8)、T-2四醇(CAS no. 34114-99-3)、脱乙酰新茄醇(deacetylneosolaniol)(CAS no.74833-39-9)、新茄醇(neosolaniol)(CAS no.36519-25-2)、乙酰新茄醇(acetylneosolaniol) (CAS no.65041-92-1)、sporotrichiol(CASno.101401-89-2)、trichotriol(CAS no.109890-37-1)、接骨木镰菌素(sambucinol)(CASno.90044-33-0)和大镰刀孢菌素(culmorin)(CAS no.18374-83-9)。
本文提及的B型单端孢霉烯可指在碳链的位置8处具有羰基(C＝O)(或换言之，具有双键键合到碳链的C8原子上的氧原子(＝O))并可包含DON- 衍生物的单端孢霉烯化合物。本文提及的DON-衍生物可指在碳链的位置8 处具有羰基(C＝O)(或换言之，具有双键键合到碳链的C8原子上的氧原子 (＝O))并在碳链的C7原子上具有羟基(-OH)的单端孢霉烯化合物。本文提及的示例性DON-衍生物(或B型单端孢霉烯)可包括：
Figure BDA0003289467840000031
Figure BDA0003289467840000041
在动物中，单端孢霉烯霉菌毒素的消耗导致饲料摄入减少、营养吸收受损和生长减慢、呕吐、腹泻、免疫功能障碍和牛奶产量减少。在人中，不利健康影响包括恶心、呕吐、腹泻、腹痛、头痛和发烧。特别是在世界各地都能发现DON(IUPAC名称(3α，7α)-3，7，15-三羟基-12，13-环氧单端孢霉-9-烯-8-酮)污染的作物并且描述了一些另外的毒性DON衍生物，如乙酰化的DON(比如15-乙酰基-DON、15-ADON)、糖基化的DON、DON 磺酸盐(比如DONS-1或DONS-2)或DON硫酸盐(比如DON-15-硫酸盐)。因此，国家和地区当局已经制定了食品(ECno.1881/2006，EC no. 1126/2007)或饲料(2006/576/EC)中DON的最高水平，以避免人和动物摄入 DON后发生霉菌毒素中毒，导致如抑制蛋白质生物合成、与血清素和多巴胺受体相互作用或使促炎细胞因子上调等不良影响(EFSA Journal 2004， 73，1-41)。
可以通过实施“良好的农业规范”来降低一些霉菌毒素污染的风险。尽管采取了这些预防措施，但仍无法避免DON污染，因此需要采取另外的策略来避免DON霉菌毒素中毒。一种防止霉菌毒素中毒的常规策略是向饲料中添加诸如黏土、酵母或酵母产品等粘合剂。然而，由于DON的亲水性特性，其不与常规采用的粘合剂相互作用并由此不能通过该种策略移除。类似地，不能通过化学或物理处理从食品或饲料中移除DON。
作为避免霉菌毒素中毒的替代策略，可以通过将DON转化为毒性较小的分子来使DON解毒。
EP 1042449A1或US2012/0263827A1涉及能够分别通过剪切在C12 和C13原子上的环氧环或通过生物转化为3-epi-DON和3-酮-DON来使单端孢霉烯解毒的微生物。本领域已知采用微生物基于C3原子的DON解毒策略。一般而言，此类微生物的使用经常受到这些微生物的特定培养要求的挑战，使它们的生产在经济上不利。此外，在许多食品或饲料加工过程中，将微生物混合到饲料或食品中是不可行的。因此，需要通过不含微生物的酶制剂的DON的生物转化，以作为使DON解毒的快速且安全的手段。对此，WO2016/154640 A1描述了一种含有金属离子和醌辅助因子的醇脱氢酶，以用于转化在C3原子上具有羟基的单端孢霉烯。CN 107916266 A 描述了一种用于将DON生物转化为3-epi-DON的多酶加工工艺。2012年，描述了一种包含衍生自鞘胺醇单胞菌属(Sphingomonas sp.)KSM1的细胞色素P450酶DdnA的三酶系统，以将DON羟基化为16-羟基-DON(Ito 等，2012.Appl Environ Microbiol 79(5)：1619-1628)。
类似地，描述了另一鞘胺醇单胞菌菌株S3-4将DON转化为3-氧代-DON和3-epi-DON(He等，2017.Scientific Reports.27：9549)。在研究过程中，尽管是在可逆的氧化还原反应中，但仍将来自S3-4菌株的醛酮还原酶Akr18A1描述为能够将DON转化为3-氧代-DON。
醛酮还原酶蛋白家族的酶具有共同的蛋白质折叠，(α/β)8-桶，也称为 TIM桶结构，由氨基酸天冬氨酸、酪氨酸、赖氨酸和组氨酸组成的催化四联体(Mindnich和Penning.2009.Hum Genomics 3(4)：362-370)。此外，来自Devosia mutans 17-2-E-8的PQQ依赖性脱氢酶DepA被描述为将DON 转化为3-酮-DON(Carere等，2017.Microb Biotechnol，DOI： 10.1111/1751-7915.12874)。
本发明是鉴于上述现有技术而做出的。尤其可以将本发明的目的表述为提供用于使脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON和/或DON衍生物)解毒为比 DON毒性低的分子的手段和方法，所述分子未转化回DON。本发明的解决方案描述于下文，在实施例中示例，在附图中说明并在权利要求中反映。
该目的已经通过提供一种用于将DON生物转化为一种毒性小于DON 的分子的方法，所述方法包括提供一种多肽，使所述多肽与DON和水性液体接触并在DON上进行生化反应的步骤，其中所述生化反应为DON的 C8原子的修饰。
DON是一种在碳链的位置8处具有羰基(C＝O)(或换言之，具有双键键合到碳链的C8原子上的氧原子(＝O))并在碳链的C7原子上具有羟基(-OH) 的单端孢霉烯霉菌毒素，其具有以下结构式，其中表明了C8原子：
Figure BDA0003289467840000061
发明内容
本发明涉及一种能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或其衍生物的 C8原子的多肽，其中所述多肽选自：(i)与SEQ ID NO：1(如“Akr I”)、 SEQ ID NO：2(如“Akr II”)、SEQ IDNO：3(如“Akr III”)、SEQ ID NO： 4(如“ADH-Lk”)或SEQ ID NO：5(如“TAM-Ac”)的多肽具有至少70％ (如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少 89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；(ii)SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5的多肽的变体，其中所述变体在一个或多个位置处包含置换、缺失或插入；(iii)能够修饰DON和/或DON衍生物的C-8原子的(a)或(b)的多肽的片段。
本发明进一步涉及一种(如在底物(substrate)或样品中/用于底物或样品，如种子)用于以下一种或多种的方法：(i)用于修饰DON的C8原子； (ii)用于改变DON水平(如降低DON水平)和/或使DON解毒；(iii)用于生物转化(如酶促转化、加工和/或转变)DON，优选地所述生物转化为酶促的；(iv)用于检测和/或评估DON水平；和/或(v)用于抑制DON 毒性和/或用于处理种子；所述方法包括：(a)向所述底物或样品提供以下的一种或多种：根据本发明所述的多肽、化合物、中间体、多核苷酸、核酸构建体、表达载体、重组宿主细胞、食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元或其混合物、组合物或试剂盒；(b)将 (a)应用于底物或样品(如种子、食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料)；(c)优选地，检测和/或定量一种或多种根据本发明所述的化合物或中间体。
本发明通过提供下文所述的、在权利要求中表征并通过所附的实施例和附图说明的变体来满足这一需求。
序列表概述
如本文所述，可以参考UniProtKB登录号(http：//www.uniprot.org/，如可在2020年6月17日发布的UniProtKB release 202003中获得)。
SEQ ID NO：1为野生型醛酮还原酶的“Akr I”变体的人工氨基酸序列。
SEQ ID NO：2为野生型醛酮还原酶的“Akr II”变体的人工氨基酸序列。
SEQ ID NO：3为野生型醛酮还原酶的“Akr III”变体的人工氨基酸序列。
SEQ ID NO：4为野生型乙醇脱氢酶的“ADH-Lk”变体的人工氨基酸序列。
SEQ ID NO：5为野生型转氨酶的“TAM-Ac”变体的人工氨基酸序列。
附图说明
图1：醛酮还原酶的Akr I(SEQ ID NO：1)、Akr II(SEQ ID NO：2)和 Akr III(SEQID NO：3)变体的比对。
图2：DON转化实验中DON和epi-THS的浓度。x-轴以min示出了时间，y-轴以ng/mL示出了DON和epi-THS的浓度。
图3：Akr I(SEQ ID NO：1)、Akr II(SEQ ID NO：2)和Akr III(SEQ ID NO：3)在不同pH值下的DON降解活性。将相应的最大活性设定为100％。 x-轴示出了pH值，y-轴以％示出了相对DON降解活性。
图4：Akr I(SEQ ID NO：1)、Akr II(SEQ ID NO：2)和Akr III(SEQ ID NO：3)在不同温度下的DON降解活性。将相应的最大活性设定为100％。 x-轴以℃示出了温度，y-轴以％示出了相对DON降解活性。
图5：Akr的拟合DON生物转化数据的非线性曲线。x-轴以μM示出了DON浓度，y-轴以单位每mg蛋白(U/mg)示出了DON降解速率，其中一个单位是指1分钟内转化1μmol DON的酶量。
图6：在体外转录/翻译分析中测量为萤火虫荧光素酶翻译的抑制的本发明的化合物/中间体的代谢物毒性(如实施例7所述)。将观察的最大抑制设定为100％。x-轴以μM示出了DON、epi-THS和THS的浓度，y-轴以％示出了翻译抑制。
图7：由本发明的变体催化的示例性DON转化反应。
发明详述
定义
如本文所述，根据2020年2月26日公布的酶命名数据库(如可在https：// enzyme.expasy.org/获得)，“EC编号”(酶学委员会编号)可用于指酶活性。EC编号是指来自NC-IUBMB，Academic Press，San Diego，Calif. 的酶命名法1992，包括分别在Eur.J.Biochem.1994，223，1-5；Eur.J. Biochem.1995，232，1-6；Eur.J.Biochem.1996，237，1-5；Eur.J.Biochem. 1997，250，1-6；和Eur.J.Biochem.1999，264，610-650中发表的增刊1-5。
术语“多肽”在本文中与术语“蛋白质”等同地使用。蛋白质(包括其片段、优选生物活性片段，和肽，其通常具有小于30个氨基酸)包含一个或多个彼此通过共价肽键偶联的氨基酸(产生氨基酸链)。如本文所用，术语“多肽”描述一类分子，例如，其由大于30个氨基酸组成。多肽还可以形成多聚体，例如二聚体、三聚体和更高的低聚体，即，由大于 1个多肽分子组成。形成此类二聚体、三聚体等的多肽分子可以是相同的或不同的。相应的这些多聚体更高级的结构因此称作同-或异二聚体、同- 或异三聚体等。一种异多聚体的实例是以其天然存在形式由两个相同的轻多肽链和两个相同的重多肽链组成的抗体分子。术语“多肽”和“蛋白质”也指天然修饰的多肽/蛋白质，其中所述修饰受如翻译后修饰(如糖基化、酰基化、磷酸化等)的影响。此类修饰是本领域熟知的。
序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性由参数“序列同一性”描述。出于本发明的目的，使用在EMBOSS软件包 (EMBOSS：The EuropeanMolecular Biology Open Software Suite，Rice等， 2000，Trends Genet.16：276-277)的Needle程序、优选5.0.0版或更新版本中执行的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch，1970，J.Mol.Biol. 48：443-453)确定两个氨基酸序列之间的序列同一性。所使用的参数可以是空位开放罚分10，空位延伸罚分0.5，以及EBLOSUM62(BLOSUM62的 EMBOSS版)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的Needle输出(使用非简化(no-brief)选项获得)用作百分比同一性并且是如下计算的：
(相同的残基×100)/(比对长度-比对中的空位总数)。
替代地，所使用的参数可以是空位开放罚分10，空位延伸罚分0.5，以及EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的Needle输出(使用非简化(no-brief)选项获得)用作百分比同一性并且是如下计算的：
(相同的脱氧核糖核苷酸×100)/(比对长度-比对中的空位总数)。
表达：术语“表达”包括涉及于变体(多肽)产生的任何步骤，其包括、但不限于，转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰和分泌。
表达载体：术语“表达载体”可以指线性或环状DNA分子，其包含编码变体(多肽)的多核苷酸并可操作地连接至控制序列，以提供其表达，特别是提供其转录。
片段：术语“片段”可以指一种自成熟多肽的氨基和/或羧基末端缺失一个或多个(例如若干个)氨基酸的多肽；其中所述片段具有本文其它地方所述的活性。
宿主细胞：术语“宿主细胞”可以指易于用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不相同的亲本细胞的任何子代。
核酸构建体：术语“核酸构建体”可以指单-链或双链的核酸分子，该核酸分子是从天然存在的基因中分离的，或者以一种本来不存在于自然界中的方式被修饰成含有核酸的区段，或者是合成的，该核酸分子包含一个或多个控制序列。
可操作地连接：术语“可操作地连接”可以指这样一种构造，其中，将控制序列相对于多核苷酸的编码序列安置在适当位置处，使得该控制序列指导该编码序列的表达。
控制序列：如本文所用的术语“控制序列”可以指对于表达编码本发明的变体(多核苷酸)的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该变体的多核苷酸来说可以是同源(native)的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或相对于彼此是同源(native)的或外源的。此类控制序列包括、但不限于前导子、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列以及转录终止子。至少，控制序列包括启动子，以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将这些控制序列与本发明的多核苷酸的编码区连接的特异性限制位点的目的，可以提供具有接头的控制序列。
如本文所用，术语“对应于”可以是指确定序列中的特定氨基酸(其中参考了特定氨基酸序列(如US2020071638))的方式。例如出于本发明的目的，当参考特定氨基酸位置时，技术人员将能够将另一氨基酸序列与所述已经被参考的氨基酸序列进行比对，从而确定哪一个特定氨基酸可能是在所述另一氨基酸序列中所关注的。已经在本文其它地方描述了另一氨基酸序列与例如如在SEQ ID NOs：1、2、3、4或5所示的序列或本文列出的任何其它序列的比对。可使用替代性比对方法，并且这些比对方法是本领域技术人员熟知的。
当根据本发明使用时，术语“位置”可以是指本文所描绘的氨基酸序列中氨基酸的位置。在本上下文中术语“对应于”可包括位置不仅由前面的核苷酸/氨基酸的数量决定的情况。
如本文所用，“沉默”突变意指核酸序列中的碱基置换，该种置换不会改变由该核酸序列编码的氨基酸序列。“保守性或等价”置换(或突变) 意指如下表1中作为“示例性置换”列出的置换。如本文所用的“高度保守性”置换意指如下表I中标题“优选置换”下示出的置换。
表I氨基酸置换
原始 示例性置换 优选置换
Ala(A) val；leu；ile Val
Arg(R) lys；gln；asn lys
Asn(N) gln；his；asp，lys；arg gln
Asp(D) glu；asn glu
Cys(C) ser；ala ser
Gln(Q) asn；glu asn
Glu(E) asp；gln asp
Gly(G) ala ala
His(H) asn；gln；lys；arg arg
Ile(I) leu；val；met；ala；phe； leu
Leu(L) norleucine；ile；val；met；ala； ile
Lys(K) arg；gm；asn arg
Met(M) leu；phe；ile leu
Phe(F) leu；val；ile；ala；tyr tyr
Pro(P) ala ala
Ser(S) thr thr
Thr(T) ser ser
Trp(W) tyr；phe tyr
Tyr(Y) trp；phe；thr；ser Phe
Val(V) ile；leu；met；phe；ala； leu
变体：术语“变体”可以指在一个或多个(如，若干个)位置处包含改变(即，置换、插入和/或缺失)的如本文所述的具有特异性活性的多肽。置换意指用一个不同氨基酸替换占据一个位置的氨基酸；缺失意指移除占据一个位置的氨基酸；并且插入意指在邻接并且紧随占据一个位置的氨基酸之后添加一个氨基酸。
如本文所用，术语“转基因(的)”可以指一种如通过转化或重组引入异源基因材料或同源基因材料的另外拷贝而使其基因组得到改变的生物体(如US7410800B2)。转基因生物体可以是植物、哺乳动物、真菌、细菌或病毒。如本文所用，“转基因植物、种子或花粉粒”可以指植物、种子或花粉粒或衍生自它们的任何后代的子代植物、种子或花粉粒，其中所述植物、种子或花粉粒或其子代的DNA包含相同植株的非转基因植物、种子或花粉粒中初始不存在的引入的外源DNA。转基因植物、种子或花粉粒可另外地包含对被转化的植物而言为天然的序列，但是其中为了改变编码序列的表达水平或模式改变了外源DNA。
术语“食物”可以指具有食用价值的物质。
术语“草料”可以指喂养家畜的物质。
术语“饲料”可以指用作牲畜食物的物质。
术语“添加剂”可以指如以小量添加至另一产品或物质中以影响期望的性质或特性的化合物或物质。
术语“益生元”可以指能够诱导有益微生物的生长和/或活性的化合物或物质。
术语“解毒剂”可以指能够降低和/或抑制毒性的化合物或物质。
术语“营养补充剂”可以指能够支持膳食中营养成分的化合物或物质，如维生素和矿物质。
术语“中间(体)(intermediate)”可以指在获得本发明的终产物的过程(如在该过程的中间阶段)中产生的化合物或物质，所述终产物如本发明的食物、草料、草料；饲料、添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、解毒剂、营养补充剂或益生元。
注意如本文所用，单数形式“一个/一种”和“所述/该”包括复数指代，除非上下文另有明确指示。因此，例如，提及“试剂”包括一种或多种这样的不同试剂，提及“方法”包括提及本领域普通技术人员已知的等同步骤和方法，其可以被修饰或替代本文所述的方法。
除非另有说明，在一系列要素之前的术语“至少”应理解为是指该系列中的每个要素。本领域技术人员将认识到或能够使用不超过常规实验确定本文所述的本发明的具体实施方案的许多等同方案。这些等同方案也意在被本发明涵盖。
术语“和/或”无论在本文何处使用都包括“和”、“或”和“由所述术语连接的要素的全部或任何其它组合”的含义。
当在本文使用时，术语“约”或“大约”意指在给定值或范围的20％内，优选地在10％内和更优选地在5％内。
在整个说明书和随后的权利要求书中，除非上下文另有要求，词语“包含(comprise)”及其诸如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”的变形应理解为暗示包括所述的整数或步骤或者整数或步骤的组，但不排除任何其它整数或步骤或者整数或步骤的组。当在本文使用时，术语“包含”可以用术语“含有”或“包括”代替，或者有时当在本文使用时用术语“具有”代替。
当在本文使用时，“由…组成”排除未在请求保护的要素中指定的任何要素、步骤或成分。当在本文使用时，“基本上由…组成”不排除对请求保护的基本特征和新特征没有实质性影响的材料或步骤。
在本文的每个实例中，术语“包括”、“基本上由…组成”和“由…组成”中的任何一个都可以被其他两个术语中的任何一个代替。
本发明的目的通过提供如本文所述的手段和方法实现，所述手段和方法包括如下步骤：提供本发明的一种或多种多肽，(如在水相中)使所述一种或多种多肽与本发明的B型单端孢霉烯(优选DON和/或DON衍生物)接触，并在本发明的B型单端孢霉烯(优选DON和/或DON衍生物) 上进行生物反应，其中所述生物反应为本发明的B型单端孢霉烯(优选 DON和/或DON衍生物)的C8原子的修饰。优选地，其中(i)所述修饰是本发明的B型单端孢霉烯(优选DON和/或DON衍生物)的C8原子的官能团的化学形态(chemical species)(如羰基-、酮基-和/或氧代部分(＝O)) 向不同官能团(如羟基(-OH)或氨基(-NH2)部分)的转化(如置换或改变)；和/或(ii)所述修饰为仅本发明的B型单端孢霉烯(优选DON和/或DON 衍生物)的C8原子的修饰；和/或(iii)所述修饰由修饰本发明的B型单端孢霉烯(优选DON和/或DON衍生物)的C8原子组成；和/或(iv)所述修饰不包含分子重排，如不包含这样的改变：在该改变中存在原子或键的键迁移和/或伴随键迁移，进入基团占据了与离去基团不同的位置；和/或(v)所述修饰不包含本发明的B型单端孢霉烯(优选DON和/或DON衍生物)的C7原子的修饰；和/或(vi)所述修饰不包含本发明的B型单端孢霉烯(优选DON和/或DON衍生物)的异构化(如分子内异构化)，如其中所述修饰的产物与相应的反应物(如本发明的B型单端孢霉烯(优选 DON和/或DON衍生物))是同分异构的。
通过提供如上所述的方法，发明人发现所述分子，即本发明的B型单端孢霉烯(优选DON)在其C8原子处的生物转化的产物，与相应的初始本发明的B型单端孢霉烯(优选DON)相比毒性更小，并且该产物分子不会在逆反应中转化回相应的初始本发明的B型单端孢霉烯(优选DON)。由此可以消除或至少降低本发明的B型单端孢霉烯(优选DON)的不利健康影响。通过提供一种方法，该方法得到此类本发明的B型单端孢霉烯 (优选DON)的生物转化产物，且该产物不会恢复为相应的初始本发明的B型单端孢霉烯(优选DON)，本发明的B型单端孢霉烯(优选DON) 的解毒是持久的且可以开发可靠的DON解毒过程(如图7)。
通过提供如本文所述的手段和方法，优选地其中本发明的多肽(如， Akr变体)是一种辅助因子依赖性氧化还原酶，发现在DON的C8原子处使DON向毒性低于DON的分子的生物转化特别有效地进行。辅助因子可以是如NADPH或NADH或本领域技术人员已知的其他典型酶辅助因子。
在一些方面，在用Akr I-III变体(多肽)进行的DON转化分析的整个时间过程中的DON和epi-THS的浓度如下文所述，并示例性地显示在图2中。通过如下文实施例3中所述，如在pH 2至pH 10的范围内的pH 值下，应用DON转化，可以确定Akr I-III(SEQ ID NOs：1-3)的DON降解的最佳pH值。优选地，可以在pH 6下活化本发明的Akr I和Akr II变体，而在pH6.5下活化Akr III变体。例如，在pH值4.5和5.0直至pH 9.5和 pH 9.0时Akr I-III显示出其各自最大活性的50％或更多。对于Akr I变体，在pH 4.0时，反应进行得更慢，但仍然可以如在30分钟后实现降解DON。在其它方面，通过如实施例3所述，但在14.9℃至55.7℃的范围内的不同温度下应用本发明的DON转化分析，可以确定Akr I-III的DON降解活性的最佳温度。Akr I变体的最大活性为在约35℃下，Akr II在约31℃下，和Akr III在约28℃至33℃的温度下(如图4)。在约20℃至48℃的温度下Akr I-III显示出其最大活性的多于50％。对于Akr I，即使在20℃以下 (如14.9℃)的温度下，也可以如在温育20分钟后实现DON完全降解。在进一步的方面，下文表4-6中提供了本发明的Akr变体在30℃下、在不同pH值下储存4h期间的示例性相对DON转化活性。在一些另外的方面，下文表7-9中提供了Akr变体在不同温度下在储存缓冲液中温育60min期间的示例性相对DON转化活性。
在一些方面，本发明的Akr I多肽(变体)在对应于SEQ ID NO：1的 G18、A19、G20、D54、Y59、K84、H125、D126、A160、G161、Y182、 A209、G210、P211、Y212、A213、S214、G215、R255、V272、V273、 G274、L275、R280、A283、L284，特别优选地D54、Y59、K84和/或H125 位置的一个或多个位置处包含一个或多个等价(或相同)的氨基酸。
在一些方面，本发明的Akr II多肽(变体)在对应于SEQ ID NO：2 的G18、A19、G20、D54、Y59、K84、H125、D126、A160、G161、Y182、 A209、G210、P211、Y212、A213、S214、G215、R255、V272、V273、 G274、L275、R280、A283、L284，特别优选地D54、Y59、K84和/或H125 位置的一个或多个位置处包含一个或多个等价(或相同)的氨基酸。
在一些方面，本发明的Akr III多肽(变体)在对应于SEQ ID NO：3 的G18、A19、G20、D54、Y59、K84、H125、D126、A160、G161、Y182、 A209、G210、P211、Y212、A213、S214、G215、R255、V272、V273、 G274、L275、R280、A283、L284，特别优选地D54、Y59、K84和/或H125 位置的一个或多个位置处包含一个或多个等价(或相同)的氨基酸。
DON的生物转化效率以及反应产物的质量会受到转化催化剂的选择的影响。通过应用如上所述的方法，其中本发明的Akr I-III和Akr变体包含(α/β)8-桶蛋白结构，可以确保生物催化剂的结构完整性，从而确保生物转化反应的特别良好的连续性。(α/β)8-桶蛋白结构，也称为TIM桶，是一种包含8个α螺旋和8个β折叠的蛋白质结构，如Mindnich和Penning(2009. Hum Genomics3(4)：362-370)所述。在本文中，术语多肽、蛋白质或酶可互换使用。
在一些方面，本发明进一步涉及采用本发明的ADH-Lk变体(多肽) 实施的DON转化分析(如下文所述，如在实施例6中，如图7)。特别地，本发明涉及由本发明的ADH-Lk变体(如SEQ ID NO.4)催化将DON还原为3，7，8R，15-四羟基藨草孢菌烯(THS)。在一些方面，采用本发明的 ADH-Lk变体使DON转化为THS在如30℃、如下文表10所示下进行3.5 至22个小时。在优选的方面，由本发明的ADH-Lk变体催化将DON和/ 或其衍生物还原为3，7，8R，15-四羟基藨草孢菌烯(THS)。在一些方面，本发明的ADH-Lk多肽(变体)在对应于SEQ ID NO：4的N114、S143、Y156 和/或K160位置；和/或SEQ ID NO：4的G14、H17、G18、I19、G20、G38、 R39、R40、H62、D63、V64、N90、A91、G92、I93、V113、M141、S142、 S143、Y156、K160、P188、G189、P190、I191、T193、P194和/或L195 位置；和/或SEQ ID NO：4的E67、V99、E100、T102、T104、W107、R108、 L111、L115、D116、F119、F120、T122、R123、I126、Q127、K130、G146、 Q147、G149、D150、P151、G154、S157、A158、G161、A162、R164、 I165、M166、K168、S169、A170、L172、L173和/或C174位置；和/或 SEQ ID NO：4的R4、E67、V99、E100、T102、T104、W107、R108、L111、 L115、D116、F119、F120、T122、R123、I126、Q127、K130、G146、Q147、 V148、G149、D150、P151、G154、S157、A158、G161、A162、R164、 I165、M166、K168、S169、A170、A171、L172、L173、C174、A175、P190、T212、P213、M214、G215、H216、I217、G218、E219、D222、 W225、V226、Y229、E234、K236、F237、A238、T239、G240、A241、 E242、F243、V244、V245、D246、G247、G248、Y249、T250、A251和/或Q252位置的一个或多个位置处包含一个或多个等价(或相同)的氨基酸。在一些方面，与DON相比，代谢物(如，本发明的化合物或中间体)、 epi-THS和THS在该分析中的毒性比DON低约25-30倍，如，图6所示。
在一些方面，本发明进一步涉及DON的转氨(如图7)。转氨酶(EC 2.6.1.-)催化氨基从胺到羰基化合物(接受体)的可逆转移。在一些方面，具有另外的羰基的DON和/或其衍生物(如3-酮DON)向胺化代谢物(如本发明的化合物或中间体，比如例如8-氨基-3-酮DON)的转氨由如SEQ ID NO.5(TAM-Ac，如下文所述，如在下文实施例8中所述)催化。在一些方面，本发明的TAM-Ac多肽(变体)在对应于SEQ ID NO：5的K188、 Y67、R86、K188、E221、I246、T247、T283、R86、K188、E221、G59、 F60、T62、S63、A65、Y67、S93、T124、T126、Y148、F190、D194、I196、 Q200和/或D214位置的一个或多个位置处包含一个或多个等价(相同) 的氨基酸。
尽管酶通常由大量氨基酸组成，但这些氨基酸中只有相对少量直接参与催化化学反应的情况并不少见。例如，经常在水解酶中发现由三个氨基酸组成的催化三联体。催化三联体的实例是蛋白酶胰凝乳蛋白酶中的氨基酸三联体丝氨酸-组氨酸-天冬氨酸。在其它酶中，由四个氨基酸组成的催化四联体负责催化酶促反应。因此，这些具有催化活性的氨基酸的化学特性和结构特别重要，并显著影响反应的关键方面，比如如反应速度甚至待形成的产物。因此，本发明的优选实施方案提供一种本文所述的方法，其中多肽包含由天冬氨酸、酪氨酸、赖氨酸和组氨酸或等价氨基酸组成的催化四联体。等价氨基酸是指化学性质相似并因此能够催化相同化学反应的氨基酸。本领域技术人员知道哪些氨基酸是化学性质相似的。本文将任何能够置换另一氨基酸在酶促反应中的角色的氨基酸看作等价氨基酸，如本文，如表I所公开的。例如，谷氨酸与天冬氨酸化学性质相似，因为这两种氨基酸都具有酸性侧链。因此，谷氨酸可以是天冬氨酸的等价氨基酸。酪氨酸在其侧链中包含一个羟基，该羟基可以如通过形成氢键参与催化反应。因此，与酪氨酸等价的氨基酸可以是丝氨酸和苏氨酸。赖氨酸和组氨酸是碱性氨基酸。赖氨酸、组氨酸和精氨酸可以为彼此的等价氨基酸。此外，已知组氨酸经常作为质子供体和/或质子接受体参与酶催化。因此，任何能够替代组氨酸作为质子供体和/或质子接受体的角色的氨基酸都可以是组氨酸的等价氨基酸。通过选择包含这种催化四联体的酶，发现DON 在其C8原子上的生物转化以特别高的速率进行。
在本发明进一步优选的实施方案中，提供了如本文所公开的手段和方法，其中所述催化四联体由基于SEQ ID NO：1的序列的D54、Y59、K84 和H125组成。因此，发明人发现DON在其C8原子处的生物转化效果最佳。D54是指SEQ ID NO：1的氨基酸序列中位置编号为54的天冬氨酸氨基酸残基。Y59是指SEQ ID NO：1的氨基酸序列中位置编号为59的酪氨酸氨基酸残基。K84是指SEQ ID NO：1的氨基酸序列中位置编号为84的赖氨酸氨基酸残基。H125是指SEQ ID NO：1的氨基酸序列中位置编号为 125的组氨酸氨基酸残基。可以认为，除SEQID NO：1的多肽之外的多肽可以具有更多或更少的氨基酸，从而导致催化四联体的D54、Y59、K84 和H125的位置编号发生改变。例如，与SEQ ID NO：1的多肽相比缺少四个N-末端氨基酸的多肽可包含由D50、Y55、K80和H121组成的催化四联体。此外，催化四联体的两个或更多个氨基酸之间的氨基酸缺失或插入可能导致催化四联体中氨基酸的位置编号发生改变。此外，催化四联体的氨基酸中的两个或更多个氨基酸可以交换位置。一旦将包含由天冬氨酸、酪氨酸、赖氨酸和组氨酸组成的催化四联体的多肽应用于本文所述的方法中，就应认为其被本发明所涵盖。
发明人发现，可以通过应用如上所述的方法实现经由在C8原子处转化DON，将DON生物转化为毒性比DON低的分子，其中所述生物转化通过与SEQ ID NO：1的序列具有至少90％序列同一性的多肽进行。
为了减少或优选消除在摄入受DON污染的饲料或食品时观察到的不利健康影响，需要降低饲料或食品中DON的浓度。饲料或食品的物理或化学处理对于降低这些基质(matrix)中的DON浓度是不可行的。替代地，可将DON转化为另一分子，该分子具有比DON更低的毒性。通过提供如本文所述的方法，其中比脱氧雪腐镰刀菌烯醇的毒性低的分子为比脱氧雪腐镰刀菌烯醇的毒性低至少5倍，从而可以降低在摄入受影响的饲料或食品时的不利健康影响。
除了要求DON生物转化产物分子的毒性比DON低之外，产物分子保持稳定，即其不会转化回初始分子DON也是至关重要的。因此，需要一种允许将DON生物转化为这样一种分子的方法，该分子一方面比DON的毒性小，并且在逆反应中抵挡转化回DON。该目标是通过提供如本文所述的方法来实现的，其中比脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒性小的分子为例如3，7，8，15-四羟基藨草孢菌烯(也称为epi-THS)、3，7，8R，15-四羟基藨草孢菌烯(THS)或8-氨基-DON。发明人发现分子epi-THS、THS和8-氨基-DON 的毒性比DON小，并惊奇地发现抵挡回到DON的逆生物转化反应。
为了使DON生物转化为本发明意义上的毒性较小的分子的方法适用于工业应用，催化反应必须足够快地发生。在本发明的优选实施方案中，在标准酶活性测定中，本文所述方法的多肽(如Akr多肽，)(该多肽与 DON接触)具有至少1次/s，优选至少2次/s，更优选至少3次/s，最优选至少5次/s的转化数(turnover number，kcat)(如，Akr多肽)。术语“转化数(kcat)”是指在给定条件下，单个催化位点每秒进行的底物向产物分子的最大生物转化反应次数。kcat的单位为“每秒”，也写为“s-1”或“/s”。术语“标准酶活性测定”指以200μL的终体积在pH6.0的Teorell Stenhagen (TS)缓冲液(
Figure BDA0003289467840000191
和Virtama，Acta PhysiologicaScandinavica，1946，11：4， 289-293)中含有200nM Akr酶、1mM NADPH和饱和浓度的DON(如至少2mM)的测定反应。该测定反应在30℃下进行。可以通过添加Akr酶开始该反应。在反应开始前取样并在反应开始后2、5、10、15和20分钟取样。通过以1∶2的比例与无水甲醇混合来停止这些样品中的DON转化反应。使用40％甲醇进行另外的1∶100稀释。可以通过采用Sciex5500三重四极杆质谱仪与Agilent 1290系列UHPLC系统联用的色谱-质谱联用 (LC-MS)，采用以下MS参数：采集持续时间：4分钟；扫描类型：MRM (MRM)；极性：负极；离子源：涡轮喷雾，来确定样品中DON和epi-THS 的浓度。DON的分析物参数Q1 mass、Q2 mass为355.086、59.0、20。epi-THS 的分析物参数Q1 mass、Q2 mass为357.058、297.2、20。和epi-THS QL (定性离子)的分析物参数Q1 mass、Q2 mass为357.058、177.1、20。对于LC，洗脱液A为5％甲醇、94.9％水(超纯)、0.1％乙酸，洗脱液B为 99.9％甲醇、0.1％乙酸，使用PhenomenexKinetex2.6μm联苯150x2.1mm 色谱柱，1μL的进样体积和流速为500μL/min的以下混合方案：在0.00min 时，95％洗脱液A和5％洗脱液B；在0.10min时，95％洗脱液A和5％洗脱液B；在3.00min时，30％洗脱液A和70％洗脱液B％；在3.01min时， 0％洗脱液A和100％洗脱液B；在3.30min时，0％洗脱液A和100％洗脱液B；在3.31min时，95％洗脱液A和5％洗脱液B。基于在整个反应的采样点处确定的DON和/或epi-THS的浓度，可以通过应用标准生化方法和计算来计算诸如转化数的动力学参数。
另一目的是提供一种本文提及的用于DON的生物转化的方法，该方法可以应用于广泛的环境中。例如，该方法应适合用于不同pH或不同温度的环境中的应用。在本发明的进一步实施方案中，由此如上所述提供了一种方法，其中多肽在至少pH 4.0至pH 7.0、优选至少pH 5.0至pH 7.0 的pH范围内具有pH稳定性。因此，该方法可以应用于广泛的环境中。在本文中，当多肽在pH 5.0至pH 7.0的TS缓冲溶液中温育4小时后保留其初始活性的至少50％时，则认为该多肽在至少pH 5.0至pH 7.0的pH范围内具有pH稳定性。
此外，通过提供一种如本文所述的方法，其中多肽在至少30℃至40℃的温度范围内具有温度稳定性，本发明意义上的DON的生物转化可以在最相关的温度范围中进行。在本文中，当多肽在30℃至40℃的温度下在 pH6.0的TS缓冲液中温育35min后保留其初始活性的至少10％时，则认为该多肽在至少30℃至40℃的温度范围内具有温度稳定性。
在本发明的实施方案中，与脱氧雪腐镰刀菌烯醇接触的多肽可以是辅助因子-依赖性氧化还原酶。对于能够进行靶分子的生物转化反应的辅助因子-依赖性氧化还原酶，该辅助因子-依赖性氧化还原酶还需要转化辅助因子分子。因此，辅助因子分子将被消耗并且不能用于随后的生物转化反应。在本发明的此类实施方案中，将辅助因子以足以允许通过辅助因子-依赖性氧化还原酶生物转化本发明的DON的量存在看作是至关重要的。通过提供本文所述的方法，其中使适合辅助因子再循环的另外的多肽与进行DON 的C8原子上的DON生物转化的多肽接触，发现可以确保该辅助因子以足以允许通过辅助因子-依赖性氧化还原酶生物转化本发明的DON的量保持可用。因此，发明人发现在DON生物转化反应过程中辅助因子依赖性氧化还原酶对辅助因子的消耗是可以避免的。在本文中，当一种多肽能够将消耗的辅助因子分子(其在DON的C8原子上的DON生物转化过程中被辅助因子-依赖性氧化还原酶消耗)转化回该辅助因子的初始分子结构时(其中该辅助因子的初始分子结构可以在随后的DON生物转化反应中被辅助因子-依赖性氧化还原酶消耗)，则将该多肽看作适合用于辅助因子再循环。例如，辅助因子-依赖性氧化还原酶可以依赖作为辅助因子的NADPH的消耗以能够进行DON的生物转化反应。NADPH被此类辅助因子-依赖性氧化还原酶的消耗导致形成了消耗的辅助因子分子NADP+。另外的多肽可以是酶葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6P-DH)。G6P-DH将NADP+转化回 NADPH，该NADPH可用在另一通过辅助因子-依赖性氧化还原酶的DON 的生物转化反应中。使适合用于辅助因子再循环的另外的多肽与进行DON 生物转化的多肽接触可以如通过向进行DON生物转化的多肽中添加第二多肽，或通过重组产生两种多肽的融合蛋白(其中适合用于辅助因子再循环的多肽和进行DON生物转化的多肽彼此共价连接并形成单一分子)来实现。本领域技术人员已知用于生产融合蛋白的方法。
由于DON的摄入会导致许多不利的健康影响，因此食品或饲料中 DON的存在是主要关注的问题。发明人发现，通过将本文所述的多肽用于实施在脱氧雪腐镰刀菌烯醇的C8原子上的脱氧雪腐镰刀菌烯醇向比食品或饲料中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的毒性更低的分子的生物转化，可以获得食物或饲料，其可以被摄入而不会导致在不按本文所述使用多肽时将出现的不利健康影响。
通过提供包含与SEQ ID NO：1的序列具有至少90％序列同一性的多肽的食品或饲料添加剂，可以使用有助于降低甚至消除DON毒性的手段来制备食物或饲料，其中所述多肽能够进行脱氧雪腐镰刀菌烯醇向比脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒性更低的分子的生物转化，和其中所述生物转化通过多肽在脱氧雪腐镰刀菌烯醇的C8原子上进行。因此，可以在摄入饲料或食品之前、之中和/或之后降低DON的毒性。此外，通常包含在食品或饲料添加剂中的其他成分可使本文所述的食品或饲料添加剂的有益效果最大化。所述其他成分可以是，如其他酶、维生素、氨基酸、抗氧化剂、矿物质、抗菌化合物、益生元和/或益生菌。
在一些实施方案中，本发明涉及一种能够修饰B型单端孢霉烯(优选 DON或DON衍生物)的C8原子的多肽，其中所述多肽选自：(a)与SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示的多肽具有至少94.1％(如至少94.2％、至少94.3％、至少94.4％、至少94.5％、至少94.6％、至少94.7％、至少94.8％、至少94.9％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；(b)与SEQ ID NO：4所示的多肽具有至少91.1％ (如至少91.2％、至少91.3％、至少91.4％、至少91.5％、至少91.6％、至少91.7％、至少91.8％、至少91.9％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；(c)与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO： 4或SEQ ID NO：5的成熟多肽具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少 85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性的多肽；(d)SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4或SEQ IDNO：5的多肽的变体，其中所述变体在一个或多个位置处包含置换、缺失或插入，其中所述变体与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少 86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少95.5％、至少96％、至少96.5％、至少97％、至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％)但小于100％的序列同一性；(e)(a)-(d)的多肽的片段，该片段能够修饰B型单端孢霉烯 (优选DON或DON衍生物)的C8原子。
在一些实施方案中，本发明的B型单端孢霉烯、优选DON和DON衍生物，为在碳链的位置8处具有羰基(C＝O)(或换言之，具有双键键合到碳链的C8原子上的氧原子(＝O))并在碳链的C7原子上具有羟基(-OH)的单端孢霉烯化合物。
在一些实施方案中，在本发明的修饰(或转化)期间，本发明的B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C7原子上的羟基(-OH)保持不变。有利地，通过使C7原子保持不变，产物分子/化合物/中间体(如与具有修饰的C7的产物分子相比)更稳定。
在一些实施方案中，(i)所述修饰是本发明的B型单端孢霉烯(优选 DON和/或DON衍生物)的C8原子的官能团的化学形态(如氧代部分(＝O)) 向不同官能团(如羟基(-OH)或氨基(-NH2)部分)的转化(如置换或改变)；和/或(ii)所述修饰为仅本发明的B型单端孢霉烯(优选DON和/或DON 衍生物)的C8原子的修饰；和/或(iii)所述修饰由修饰本发明的B型单端孢霉烯(优选DON和/或DON衍生物)的C8原子组成；和/或(iv)所述修饰不包含分子重排，如不包含这样的改变：在该改变中存在原子或键的键迁移和/或伴随键迁移，进入基团占据了与离去基团不同的位置；和/或 (v)所述修饰不包含本发明的B型单端孢霉烯(优选DON和/或DON衍生物)的C7原子的修饰；和/或(vi)所述修饰不包含本发明的B型单端孢霉烯(优选DON和/或DON衍生物)的异构化(如分子内异构化)，如其中所述修饰的产物与相应的反应物(如本发明的B型单端孢霉烯(优选 DON和/或DON衍生物))是同分异构的。
在一些实施方案中，本发明的B型单端孢霉烯(优选DON和/或DON 衍生物)选自：3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、雪腐镰刀菌烯醇、4-乙酰基雪腐镰刀菌烯醇、3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇。
在本发明的一些实施方案中，(i)所述修饰C8原子包括以下的一种或多种：还原酮基部分(优选地将所述酮基部分还原为羟基部分)，使酮基部分转氨，使本发明的B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物解毒和/或降低B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的毒性。
在本发明的一些实施方案中，所述修饰C8原子为得到以下的一种或多种的C8原子的还原和/或转氨：3，7，8，15-四羟基藨草孢菌烯(epi-THS)、 3，7,8R，15-四羟基藨草孢菌烯(THS)、8-氨基-DON、8-氨基-3-酮DON、8- 羟基-3-酮脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、 8-羟基-雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-镰刀菌烯酮-X、8-羟基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-酮脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-镰刀菌烯酮-X和/或8- 氨基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇。
在一些实施方案中，本发明的多肽包含：在对应于SEQ ID NO：1的位置54的位置处的氨基酸D或等价氨基酸；在对应于SEQ ID NO：1的位置59的位置处的Y或等价氨基酸；在对应于SEQ ID NO：1的位置84的位置处的K或等价氨基酸；和在对应于SEQ ID NO：1的位置125的位置处的H或等价氨基酸，优选地采用SEQ ID NO：1的编号。
在一些实施方案中，本发明的多肽包含(α/β)8-桶结构(如SEQ ID NOs： 1-3)。
在一些实施方案中，本发明的多肽具有脱氢酶和/或转氨酶活性。
在本发明的一些实施方案中，所述脱氢酶活性为具有EC：1.1.1.-活性的脱氢酶活性；和/或所述转氨酶活性为具有EC：2.6.1.-活性的转氨酶活性。
在本发明的一些实施方案中，所述脱氢酶活性包含具有EC：1.1.1.2活性的乙醇脱氢酶(NADP(+))活性，或由其组成。
在一些实施方案中，本发明的多肽能够改变本发明的B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的水平，优选地降低该水平；和/或使本发明的B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物解毒。
在一些实施方案中，如在酶活性测定中，本发明的多肽具有至少1次 /s，优选至少2次/s，更优选至少3次/s，最优选至少5次/s的转化数(kcat)。
在一些实施方案中，本发明的多肽在5.0至约7.0，优选地4.0至约7.0 的pH范围内是稳定的。
在一些实施方案中，本发明的多肽在约30℃至约40℃的温度范围内是稳定的。
在一些实施方案中，本发明涉及一种编码本发明的多肽的多核苷酸。
在一些实施方案中，本发明涉及能够表达本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体，其中所述核酸构建体或所述表达载体包含本发明的多核苷酸，优选地所述多核苷酸可操作地连接至一个或多个指导表达宿主中所述多肽的产生的控制序列。
在一些实施方案中，本发明涉及一种重组宿主细胞(如分离的重组宿主细胞)，其包含以下的一种或多种：(i)一种或多种本发明的多肽；(ii)一种或多种本发明的多核苷酸；(iii)一种或多种本发明的核酸构建体和/或表达载体。
在一些实施方案中，本发明的重组宿主细胞选自细菌细胞、酵母细胞、哺乳动物细胞、昆虫细胞和植物细胞，优选选自细菌细胞和酵母细胞。
在一些实施方案中，本发明的重组宿主细胞包含在重组植物种子中。
在一些实施方案中，本发明的重组植物宿主细胞对所述(ii)和/或(iii)而言是纯合的。
在一些实施方案中，本发明涉及转基因植物、转基因种子或转基因花粉粒，其包含以下的一种或多种(如多种)：(i)一种或多种本发明的多肽； (ii)一种或多种本发明的多核苷酸；(iii)一种或多种本发明的核酸构建体和/或表达载体；和/或(iv)一种或多种本发明的重组宿主细胞。
在一些实施方案中，本发明的转基因植物、转基因种子或转基因花粉粒能够产生一种或多种本发明的多肽，优选地所述转基因植物、转基因种子或转基因花粉粒被基因修饰以产生一种或多种本发明的多肽。
在本发明的一些实施方案中，所述转基因植物、转基因种子或转基因花粉粒对所述(ii)和/或(iii)而言是纯合的。
在一些实施方案中，本发明涉及食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元和/或其混合物，其包含以下的一种或多种：本发明的多肽、多核苷酸、核酸构建体、表达载体、重组宿主细胞、转基因植物、转基因种子和/或转基因花粉粒。
在一些实施方案中，本发明涉及一种组合物或试剂盒，其包含以下的一种或多种：本发明的多肽、多核苷酸、核酸构建体、表达载体、重组宿主细胞、转基因植物、转基因种子、转基因花粉粒，食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元和/或其混合物。
在本发明的一些实施方案中，所述组合物或试剂盒为以下的一种或多种：药物-、兽医-、诊断-、解毒-、种子处理-、监测-和/或筛选组合物或试剂盒。
在本发明的一些实施方案中，所述组合物或试剂盒包含：辅助因子再循环系统，优选地所述辅助因子再循环系统包含第二多肽，其中所述第二多肽适合用于将NADP+转换为NADPH或将NAD+转换为NADH，进一步优选地，所述辅助因子再循环系统进一步包含选自葡萄糖-6-磷酸的分子。
本发明的一些实施方案涉及选自以下的化合物或中间体(在C8-原子处修饰的本发明的B型单端孢霉烯)：epi-THS、THS、8-氨基-DON、8- 氨基-3-酮-DON、8-氨基-3-酮DON、8-羟基-3-酮脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8- 羟基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、 8-羟基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基- 镰刀菌烯酮-X、8-羟基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-酮脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-镰刀菌烯酮-X和/或8-氨基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇。
本发明的一些实施方案涉及一种用于生产所述化合物或中间体(在 C8-原子处修饰的本发明的B型单端孢霉烯)的方法，所述化合物或中间体选自：epi-THS、THS、8-氨基-DON、8-氨基-3-酮-DON、8-羟基-3-酮脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-镰刀菌烯酮-X、8-羟基-3-氨基-脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、 8-氨基-镰刀菌烯酮-X和/或8-氨基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇，所述方法包括：向本发明的B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物应用一种或多种本发明的多肽、重组细胞、组合物和/或试剂盒。
在一些实施方案中，本发明的化合物或中间体(在C8-原子处修饰的本发明的B型单端孢霉烯)选自：由所述生产本发明的化合物或中间体的方法生产的epi-THS、THS、8-氨基-DON、8-氨基-3-酮-DON、8-羟基-3- 酮脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基 -雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-镰刀菌烯酮-X、8-羟基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、 8-氨基-镰刀菌烯酮-X和/或8-氨基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇。
在一些实施方案中，本发明涉及一种用于以下的一种或多种的方法，所述方法在含有本发明的B型单端孢霉烯(优选DON和/或DON衍生物) 的底物或样品中实施(或适合在其中实施)：(i)用于修饰本发明的B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的C8原子的方法；(ii)用于改变本发明的B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的水平(如降低该水平)；和/或使本发明的B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物解毒的方法；(iii)用于生物转化(如酶促修饰)本发明的B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的方法，优选地所述生物转化为酶促的； (iv)用于检测和/或评估霉菌毒素的水平的方法；和(v)用于降低本发明的 B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的毒性和/或用于处理种子的方法；所述方法包括：(a)提供以下的一种或多种：本发明的多肽、化合物、中间体、多核苷酸、核酸构建体、表达载体、重组宿主细胞、转基因植物、转基因种子、转基因花粉粒，食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元或其混合物、组合物或试剂盒；(b)将 (a)应用至所述底物或样品；(c)优选地，检测和/或定量一种或多种本发明的化合物或中间体(如在C8-原子处修饰的本发明的B型单端孢霉烯)。
在一些实施方案中，所述修饰C8原子是使本发明的B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物还原、转氨、解毒和/或使其毒性降低。
在一些实施方案中，所述修饰C8原子为生产以下的一种或多种： epi-THS、THS、8-氨基-DON、8-氨基-3-酮-DON、8-羟基-3-酮脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-镰刀菌烯酮-X、8-羟基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基 -3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-镰刀菌烯酮-X和/或8-氨基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇。
在一些实施方案中，所述方法是一种优选地从甘蔗或甜菜制造生物气、生物乙醇、青贮饲料或糖的方法。
在一些实施方案中，所述底物选自：农业产品、作物、含可溶物的干全酒糟(DDGS)、玉米、甘蔗或甜菜。
在一些实施方案中，本发明涉及一种用于治疗、缓解、预防和/或诊断 (如受试者或动物中)霉菌毒素中毒的方法，所述方法包括：(i)提供：治疗有效量的以下的一种或多种：本发明的多肽、多核苷酸、核酸构建体、表达载体、重组宿主细胞、转基因植物、转基因种子、转基因花粉粒、组合物或试剂盒；(ii)(如向所述受试者或动物)施用如(i)中所定义的所述治疗有效量。
在一些实施方案中，所述方法产生一种或多种选自以下的分子、化合物或中间体(如在C8-原子处修饰的本发明的B型单端孢霉烯)：epi-THS、 THS、氨基-DON和/或8-氨基-3-酮-DON、8-羟基-3-酮脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-雪腐镰刀菌烯醇、 8-羟基-镰刀菌烯酮-X、8-羟基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-epi 脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-15- 乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-镰刀菌烯酮 -X和/或8-氨基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇。在一些进一步的实施方案中，可以将所述一种或多种分子、化合物和/或中间体用作如参考标准，如以评估根据本发明的用于使相应霉菌毒素解毒的方法的成功性/进步性。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括：提供辅助因子再循环系统，优选地所述辅助因子再循环系统包含第二多肽，其中所述第二多肽适合用于将NADP+转换为NADPH或将NAD+转换为NADH，进一步优选地，所述辅助因子再循环系统进一步包含选自葡萄糖-6-磷酸的分子。
在一些实施方案中，本发明的多肽、化合物、中间体、多核苷酸、核酸构建体、表达载体、重组宿主细胞、转基因植物、转基因种子、转基因花粉粒，食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元或其混合物、组合物或试剂盒，其适合用在治疗、预防中和/ 或作为药物(如用于兽医用途)。
在一些实施方案中，本发明的多肽、化合物、中间体、多核苷酸、核酸构建体、表达载体、重组宿主细胞、转基因植物、转基因种子、转基因花粉粒，食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元或其混合物、组合物或试剂盒，适合用在以下方法的一种或多种中：(i)用于修饰本发明的B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的C8原子的方法；(ii)用于使在C8原子处具有酮基部分(C＝O)的本发明的B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物解毒的方法；(iii)用于生物转化在C8原子处具有酮基部分(C＝O)的本发明的B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的方法，优选地所述生物转化为酶促的；(iv) 用于治疗、缓解、预防和/或诊断B型单端孢霉烯霉菌毒素中毒、优选DON 霉菌毒素中毒的方法；(v)用于监测霉菌毒素中毒发展和/或评估B型单端孢霉烯霉菌毒素中毒预防和/或治疗、优选DON霉菌毒素中毒预防和/或治疗的疗效的方法；(vi)用于筛选具有B型单端孢霉烯解毒活性、优选DON 解毒活性的候选化合物的方法；(vii)用于检测和/或评估B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的水平的方法；(viii)用于降低B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的毒性的方法；(ix)用于改变、优选降低B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的水平的方法；(x)生产以下的一种或多种：食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元；药物、兽医、诊断、解毒、监测和/或筛选组合物或试剂盒；(xi)本发明的任意方法；(xii)根据(i)-(xi)所述的方法的任意组合；(xiii)(i)-(xii)的任一项的方法，其中所述方法为体外、离体或体内方法。
在一些实施方案中，本发明涉及本发明的一种或多种多肽、化合物、中间体、多核苷酸、核酸构建体、表达载体、重组宿主细胞、转基因植物、转基因种子、转基因花粉粒，食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物 -、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元或其混合物、组合物或试剂盒用于以下的一种或多种/在以下的一种或多种中的用途：(i)用于修饰DON和/或DON 衍生物的C8原子；(ii)用于使B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物解毒；(iii)用于生物转化在C8原子处具有酮基部分(C＝O)的B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物，优选地所述生物转化为酶促的； (iv)用于治疗、缓解、预防和/或诊断B型单端孢霉烯霉菌毒素中毒、优选DON霉菌毒素中毒；(v)用于监测霉菌毒素中毒发展和/或评估B型单端孢霉烯霉菌毒素中毒预防和/或治疗、优选DON霉菌毒素中毒预防和/ 或治疗的疗效；(vi)用于筛选具有抗-霉菌毒素中毒活性的候选化合物；(vii) 用于检测和/或评估B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的水平； (viii)用于抑制B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的毒性；(ix) 用于改变、优选降低B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的水平；(x)用于生产以下的一种或多种：食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元；和/或药物-、诊断-、解毒-、监测- 和/或筛选组合物或试剂盒；(xi)在本发明的的任意方法中；(xii)(i)-(xi)的任意组合；(xiii)根据(i)-(xii)中任一项所述的用途，其中所述用途为体外、离体或体内用途。
在一些实施方案中，降低B型单端孢霉烯霉菌毒素(如DON或DON 衍生物)的毒性意指包括将所述霉菌毒素向反应产物的转化(或修饰)，所述反应产物比所述霉菌毒素(如DON或DON衍生物)的毒性低。
在一些实施方案中，本发明涉及一种本发明的Akr I多肽(变体)，其在对应于SEQID NO：1的G18、A19、G20、D54、Y59、K84、H125、 D126、A160、G161、Y182、A209、G210、P211、Y212、A213、S214、 G215、R255、V272、V273、G274、L275、R280、A283和/或L284，优选地D54、Y59、K84和/或H125位置的一个或多个位置处包含一个或多个等价(或相同)的氨基酸。
在一些实施方案中，本发明涉及一种本发明的Akr II多肽(变体)，其在对应于SEQID NO：2的G18、A19、G20、D54、Y59、K84、H125、 D126、A160、G161、Y182、A209、G210、P211、Y212、A213、S214、 G215、R255、V272、V273、G274、L275、R280、A283和/或L284，优选地D54、Y59、K84和/或H125位置的一个或多个位置处包含一个或多个等价(或相同)的氨基酸。
在一些实施方案中，本发明涉及一种本发明的Akr III多肽(变体)，其在对应于SEQ ID NO：3的G18、A19、G20、D54、Y59、K84、H125、 D126、A160、G161、Y182、A209、G210、P211、Y212、A213、S214、 G215、R255、V272、V273、G274、L275、R280、A283和/或L284，优选地D54、Y59、K84和/或H125位置的一个或多个位置处包含一个或多个等价(或相同)的氨基酸。
在一些实施方案中，本发明涉及一种本发明的ADH-Lk多肽(变体)，其在对应于SEQID NO：4的N114、S143、Y156和/或K160位置；和/或 SEQ ID NO：4的G14、H17、G18、I19、G20、G38、R39、R40、H62、D63、V64、N90、A91、G92、193、V113、M141、S142、S143、Y156、 K160、P188、G189、P190、1191、T193、P194和/或L195位置；和/或SEQ ID NO：4的E67、V99、E100、T102、T104、W107、R108、L111、L115、 D116、F119、F120、T122、R123、I126、Q127、K130、G146、Q147、G149、D150、P151、G154、S157、A158、G161、A162、R164、I165、 M166、K168、S169、A170、L172、L173和/或C174位置；和/或SEQ ID NO：4的R4、E67、V99、E100、T102、T104、W107、R108、L111、L115、 D116、F119、F120、T122、R123、I126、Q127、K130、G146、Q147、 V148、G149、D150、P151、G154、S157、A158、G161、A162、R164、 I165、M166、K168、S169、A170、A171、L172、L173、C174、A175、 P190、T212、P213、M214、G215、H216、I217、G218、E219、D222、 W225、V226、Y229、E234、K236、F237、A238、T239、G240、A241、 E242、F243、V244、V245、D246、G247、G248、Y249、T250、A251和 /或Q252位置的一个或多个位置处包含一个或多个等价(或相同)的氨基酸。
在一些实施方案中，本发明涉及一种本发明的TAM-Ac多肽(变体)，其在对应于SEQID NO：5的K188、Y67、R86、K188、E221、I246、T247、 T283、R86、K188、E221、G59、F60、T62、S63、A65、Y67、S93、T124、 T126、Y148、F190、D194、I196、Q200和/或D214位置的一个或多个位置处包含一个或多个等价(或相同)的氨基酸。
应当理解，本发明不限于本文所述的特定方法、方案和试剂等，因此可以变化。本文所用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，而非旨在限制本发明的范围，本发明的范围仅由权利要求书限定。
本说明书全文中引用的所有出版物和专利(包括所有专利、专利申请、科学出版物、制造商的说明书、指导书等)，无论在上文还是下文，均以其全文通过引用并入本文。本文中没有任何内容被解释为承认本发明无权凭借在先发明而早于这种公开。在通过引用并入的材料与本说明书矛盾或不一致的程度上，本说明书将取代任何这样的材料。
本发明的特征还在于以下项目：
1、一种能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8 原子的多肽，进一步优选地其中在所述修饰期间所述B型单端孢霉烯(如 DON或DON衍生物)的C7原子上的羟基(-OH)保持不变；其中所述多肽为以下的一种或多种：
a)与SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示的多肽具有至少94.1％(如至少94.2％、至少94.3％、至少94.4％、至少94.5％、至少94.6％、至少 94.7％、至少94.8％、至少94.9％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
b)与SEQ ID NO：4所示的多肽具有至少91.1％(如至少91.2％、至少91.3％、至少91.4％、至少91.5％、至少91.6％、至少91.7％、至少91.8％、至少91.9％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
c)与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4 或SEQ ID NO：5的成熟多肽具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少 79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少 98％、至少99％或100％)的序列同一性的多肽；
d)SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5的多肽的变体，其中所述变体在一个或多个位置处包含置换、缺失和/或插入，其中所述变体与SEQID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO： 3、SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少 77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少 95.5％、至少96％、至少96.5％、至少97％、至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％)但是小于100％的序列同一性；
e)能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的(a)-(d)的多肽的片段。
2、根据前述项目中任一项所述的多肽，其中所述多肽在对应于SEQ ID NO：1的G18、A19、G20、D54、Y59、K84、H125、D126、A160、G161、 Y182、A209、G210、P211、Y212、A213、S214、G215、R255、V272、 V273、G274、L275、R280、A283、L284、D54、Y59、K84和/或H125 位置(优选地采用SEQ ID NO：1的编号)的一个或多个位置处包含一个或多个等价(如相同)的氨基酸。
3、根据前述项目中任一项所述的多肽，其中所述多肽在对应于SEQ ID NO：2的G18、A19、G20、D54、Y59、K84、H125、D126、A160、G161、 Y182、A209、G210、P211、Y212、A213、S214、G215、R255、V272、 V273、G274、L275、R280、A283、L284、D54、Y59、K84和/或H125 位置(优选地采用SEQ ID NO：1的编号)的一个或多个位置处包含一个或多个等价(如相同)的氨基酸。
4、根据前述项目中任一项所述的多肽，其中所述多肽在对应于SEQ ID NO：3的G18、A19、G20、D54、Y59、K84、H125、D126、A160、G161、Y182、A209、G210、P211、Y212、A213、S214、G215、R255、V272、 V273、G274、L275、R280、A283、L284、D54、Y59、K84和/或H125 位置(优选地采用SEQ ID NO：1的编号)的一个或多个位置处包含一个或多个等价(如相同)的氨基酸。
5、根据前述项目中任一项所述的多肽，其中所述多肽在对应于SEQ ID NO：4的N114、S143、Y156和/或K160位置；和/或SEQ ID NO：4的G14、 H17、G18、I19、G20、G38、R39、R40、H62、D63、V64、N90、A91、 G92、I93、V113、M141、S142、S143、Y156、K160、P188、G189、P190、 I191、T193、P194和/或L195位置；和/或SEQ ID NO：4的E67、V99、 E100、T102、T104、W107、R108、L111、L115、D116、F119、F120、T122、 R123、I126、Q127、K130、G146、Q147、G149、D150、P151、G154、 S157、A158、G161、A162、R164、I165、M166、K168、S169、A170、 L172、L173和/或C174位置；和/或SEQ ID NO：4的R4、E67、V99、E100、T102、T104、W107、R108、L111、L115、D116、F119、F120、T122、 R123、I126、Q127、K130、G146、Q147、V148、G149、D150、P151、G154、S157、A158、G161、A162、R164、I165、M166、K168、S169、 A170、A171、L172、L173、C174、A175、P190、T212、P213、M214、 G215、H216、I217、G218、E219、D222、W225、V226、Y229、E234、K236、F237、A238、T239、G240、A241、E242、F243、V244、V245、 D246、G247、G248、Y249、T250、A251和/或Q252位置(优选地采用 SEQ ID NO：4的编号)的一个或多个位置处包含一个或多个等价(如相同) 的氨基酸。
6、根据前述项目中任一项所述的多肽，其中所述多肽在对应于SEQ ID NO：5的K188、Y67、R86、K188、E221、I246、T247、T283、R86、K188、 E221、G59、F60、T62、S63、A65、Y67、S93、T124、T126、Y148、F190、 D194、I196、Q200和/或D214位置(优选地采用SEQ ID NO：5的编号) 的一个或多个位置处包含一个或多个等价(如相同)的氨基酸。
7、根据前述项目中任一项所述的多肽，其中：(i)所述C8原子的修饰为以下的一种或多种：还原羰基部分(如酮基部分)(优选地将所述酮基部分还原为羟基部分)，使羰基部分(如酮基部分)转氨，使B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物解毒和/或降低B型单端孢霉烯、优选 DON或DON衍生物的毒性；和/或(ii)所述B型单端孢霉烯、优选DON 或DON衍生物选自：3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、雪腐镰刀菌烯醇、4-乙酰基雪腐镰刀菌烯醇、3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇。
8、根据前述项目中任一项所述的多肽，其中所述修饰C8原子为得到以下的一种或多种的C8原子的还原和/或转氨：epi-THS、THS、8-氨基 -DON、8-氨基-3-酮-DON、8-羟基-3-酮脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-epi 脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-15- 乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-镰刀菌烯酮 -X、8-羟基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-镰刀菌烯酮-X和/或8-氨基-3- 氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇。
9、根据前述项目中任一项所述的多肽，其包含：在对应于SEQ ID NO： 1的位置54的位置处的氨基酸D或等价氨基酸；在对应于SEQ ID NO：1 的位置59的位置处的Y或等价氨基酸；在对应于SEQ ID NO：1的位置84 的位置处的K或等价氨基酸；和在对应于SEQ ID NO：1的位置125的位置处的H或等价氨基酸，优选地采用SEQ ID NO：1的编号。
10、根据前述项目中任一项所述的多肽，其包含(α/β)8-桶结构(如SEQ ID NOs：1-3)。
11、根据前述项目中任一项所述的多肽，其中所述多肽具有脱氢酶和 /或转氨酶活性。
12、根据前述项目中任一项所述的多肽，其中所述脱氢酶活性为具有 EC：1.1.1.-活性的脱氢酶活性；和/或所述转氨酶活性为具有EC：2.6.1.-活性的转氨酶活性。
13、根据前述项目中任一项所述的多肽，其中所述脱氢酶活性包含具有EC：1.1.1.2活性的乙醇脱氢酶(NADP(+))活性，或由其组成。
14、根据前述项目中任一项所述的多肽，其中所述多肽能够改变B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的水平，优选地降低所述水平；和/或使B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物解毒。
15、根据前述项目中任一项所述的多肽，其中如在酶活性测定中，所述多肽具有至少1次/s、优选至少2次/s、更优选至少3次/s、最优选至少 5次/s的转化数(kcat)。
16、根据前述项目中任一项所述的多肽，其中所述多肽在5.0至约7.0、优选4.0至约7.0的pH范围内是稳定的。
17、根据前述项目中任一项所述的多肽，其中所述多肽在约30℃至约 40℃的温度范围内是稳定的。
18、一种编码前述项目中任一项所述的多肽的多核苷酸。
19、一种能够表达前述项目中任一项所述的多核苷酸的核酸构建体或表达载体，其中所述核酸构建体或所述表达载体包含前述项目中任一项所述的多核苷酸，优选地所述多核苷酸可操作地连接至一个或多个指导表达宿主中所述多肽的产生的控制序列。
20、一种重组宿主细胞(如分离的重组宿主细胞)，其包含以下的一种或多种：
(i)一种或多种根据前述项目中任一项所述的多肽；
(ii)一种或多种根据前述项目中任一项所述的多核苷酸；
(iii)一种或多种根据前述项目中任一项所述的核酸构建体和/或表达载体。
21、根据前述项目中任一项所述的重组宿主细胞，其中所述重组宿主细胞选自细菌细胞、酵母细胞、哺乳动物细胞、昆虫细胞和植物细胞，优选选自细菌细胞和酵母细胞。
22、根据前述项目中任一项所述的重组宿主细胞，其中所述重组宿主细胞包含在重组植物种子中。
23、根据前述项目中任一项所述的重组植物宿主细胞，其中所述重组植物宿主细胞对所述(ii)和/或(iii)而言是纯合的。
24、一种转基因植物、转基因种子或转基因花粉粒，其包含以下的一种或多种(如多种)：
(i)一种或多种根据前述项目中任一项所述的多肽；
(ii)一种或多种根据前述项目中任一项所述的多核苷酸；
(iii)一种或多种根据前述项目中任一项所述的核酸构建体和/或表达载体；和/或
(iv)一种或多种根据前述项目中任一项所述的重组宿主细胞。
25、根据前述项目中任一项所述的转基因植物、转基因种子或转基因花粉粒，其能够产生一种或多种根据前述项目中任一项所述的多肽，优选地所述转基因植物、转基因种子或转基因花粉粒被基因修饰以产生一种或多种根据前述项目中任一项所述的多肽。
26、根据前述项目中任一项所述的转基因植物、转基因种子或转基因花粉粒，其中所述转基因植物、转基因种子或转基因花粉粒对所述(ii)和/ 或(iii)而言是纯合的。
27、一种食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元和/或其混合物，其包含以下的一种或多种：根据前述项目中任一项所述的多肽、多核苷酸、核酸构建体、表达载体和/或重组宿主细胞、转基因植物、转基因种子和/或转基因花粉粒。
28、一种组合物或试剂盒，其包含以下的一种或多种：根据前述项目中任一项所述的多肽、多核苷酸、核酸构建体、表达载体和/或重组宿主细胞、转基因植物、转基因种子、转基因花粉粒，食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元和/或其混合物。
29、根据前述项目中任一项所述的组合物或试剂盒，其中所述组合物或试剂盒为以下的一种或多种：药物-、兽医-、诊断-、解毒-、种子处理-、监测-和/或筛选组合物或试剂盒。
30、根据前述项目中任一项所述的组合物或试剂盒，其包含：辅助因子再循环系统，优选地所述辅助因子再循环系统包含第二多肽，其中所述第二多肽适合用于将NADP+转换为NADPH或将NAD+转换为NADH，进一步优选地，所述辅助因子再循环系统进一步包含选自葡萄糖-6-磷酸的分子。
31、一种选自以下的化合物或中间体(如在C8-原子处修饰的B型单端孢霉烯)：3，7，8，15-四羟基藨草孢菌烯(epi-THS)、3,7,8R，15-四羟基藨草孢菌烯(THS)、8-氨基-DON、8-氨基-3-酮-DON、8-羟基-3-酮脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-镰刀菌烯酮-X、8-羟基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基 -3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-镰刀菌烯酮-X和8-氨基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇。
32、一种用于生产所述化合物或中间体(如在C8-原子处修饰的B型单端孢霉烯)的方法，所述化合物或中间体选自：epi-THS、THS、8-氨基 -DON和/或8-氨基-3-酮-DON，所述方法包括：向B型单端孢霉烯、优选 DON和/或DON衍生物应用一种或多种前述项目中任一项所述的多肽、重组细胞、组合物和/或试剂盒；优选地，其中在修饰期间DON或DON衍生物的C7原子处的羟基(-OH)保持不变。
33、一种化合物或中间体(如在C8-原子处修饰的B型单端孢霉烯)，其选自：由根据前述项目中任一项所述的生产所述化合物或中间体的方法生产的epi-THS、THS、8-氨基-DON、8-氨基-3-酮-DON、8-羟基-3-酮脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-镰刀菌烯酮-X、8-羟基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、 88-氨基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、 8-氨基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基- 镰刀菌烯酮-X和8-氨基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇。
34、一种用于以下的一种或多种的方法，所述方法在含有B型单端孢霉烯(优选DON和/或DON衍生物)的底物或样品中实施：
(i)用于修饰B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的C8原子；
(ii)用于改变B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的水平 (如降低所述水平)；和/或使B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物解毒；
(iii)用于生物转化(如酶促修饰)B型单端孢霉烯、优选DON和/或 DON衍生物，优选地所述生物转化为酶促的；
(iv)用于检测和/或评估霉菌毒素的水平；和/或
(v)用于降低B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的毒性和/或用于处理种子；
所述方法包括：
(a)提供以下的一种或多种：根据前述项目中任一项所述的多肽、化合物、中间体、多核苷酸、核酸构建体、表达载体、重组宿主细胞、转基因植物、转基因种子、转基因花粉粒，食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元或其混合物、组合物或试剂盒；
(b)将(a)应用至所述底物或样品；
(c)优选地，检测和/或定量一种或多种根据前述项目中任一项所述的化合物或中间体。
35、根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述修饰C8原子是使 B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物解毒和/或使其毒性降低；优选地其中在修饰期间B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C7 原子处的羟基(-OH)保持不变。
36、根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述修饰C8原子为生产以下的一种或多种：epi-THS、THS、8-氨基-DON、8-氨基-3-酮DON、 8-氨基-3-酮DON、8-羟基-3-酮脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-镰刀菌烯酮-X、 8-羟基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-酮脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8- 氨基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、 8-氨基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基- 镰刀菌烯酮-X和/或8-氨基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇。
37、根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述方法是一种优选地从甘蔗或甜菜制造生物气、生物乙醇、青贮饲料或糖的方法。
38、根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述底物选自：农业产品、作物、含可溶物的干全酒糟(DDGS)、玉米、甘蔗或甜菜。
39、一种用于治疗、缓解、预防和/或诊断(如受试者或动物中的)霉菌毒素中毒的方法，所述方法包括：
(i)提供治疗有效量的以下的一种或多种：根据前述项目中任一项所述的多肽、多核苷酸、核酸构建体、表达载体、重组宿主细胞、转基因植物、转基因种子、转基因花粉粒、组合物或试剂盒；
(ii)(如向所述受试者或动物)施用如(i)中所定义的所述治疗有效量。
40、根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述方法产生一种或多种选自以下的分子、化合物或中间体(比如如在C8-原子处修饰的B型单端孢霉烯)：epi-THS、THS、8-氨基-DON、8-氨基-3-酮-DON、8-羟基-3- 酮脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-镰刀菌烯酮-X、8-羟基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、 8-氨基-镰刀菌烯酮-X和8-氨基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇。
41、根据前述项目中任一项所述的方法，其进一步包括提供辅助因子再循环系统，优选地所述辅助因子再循环系统包含第二多肽，其中所述第二多肽适合用于将NADP+转换为NADPH或将NAD+转换为NADH，进一步优选地，所述辅助因子再循环系统进一步包含选自葡萄糖-6-磷酸的分子。
42、根据前述项目中任一项所述的多肽、化合物、中间体、多核苷酸、核酸构建体、表达载体、重组宿主细胞、转基因植物、转基因种子、转基因花粉粒，食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂 (如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元或其混合物、组合物或试剂盒，其用在治疗、预防中和/ 或作为药物(如用于兽医用途)。
43、根据前述项目中任一项所述的多肽、化合物、中间体、多核苷酸、核酸构建体、表达载体、重组宿主细胞、转基因植物、转基因种子、转基因花粉粒，食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂 (如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元或其混合物、组合物或试剂盒，其用在以下方法的一种或多种中：
i)用于修饰B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的C8原子的方法；
ii)用于使在C8原子处具有羰基部分(如酮基部分)(C＝O)的B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物解毒的方法；
iii)用于生物转化在C8原子处具有羰基部分(如酮基部分)(C＝O)的 B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的方法，优选地所述生物转化为酶促的；
iv)用于治疗、缓解、预防和/或诊断B型单端孢霉烯霉菌毒素中毒、优选DON霉菌毒素中毒的方法；
v)用于监测霉菌毒素中毒发展和/或评估B型单端孢霉烯霉菌毒素中毒预防和/或治疗、优选DON霉菌毒素中毒预防和/或治疗的疗效的方法；
vi)用于筛选具有B型单端孢霉烯解毒活性、优选DON解毒活性的候选化合物的方法；
vii)用于检测和/或评估B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的水平的方法；
viii)用于降低B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的毒性的方法；
ix)用于改变、优选降低B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的水平的方法；
x)生产以下的一种或多种：食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物 -、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元；药物、兽医、诊断、解毒、监测和/或筛选组合物或试剂盒；
xi)根据前述项目中任一项所述的方法，优选地其中在所述修饰期间， B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的C7原子上的羟基(-OH) 保持不变；
xii)根据(i)-(xi)所述的方法的任意组合；
xiii)(i)-(xii)的任一项的方法，其中所述方法为体外、离体或体内方法。
44、根据前述项目中任一项所述的一种或多种多肽、化合物、中间体、多核苷酸、核酸构建体、表达载体、重组宿主细胞、转基因植物、转基因种子、转基因花粉粒，食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元或其混合物、组合物或试剂盒用于以下的一种或多种/在以下的一种或多种中的用途：
i)用于修饰B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的C8原子；
ii)用于使B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物解毒；
iii)用于生物转化在C8原子处具有羰基部分(如酮基部分)(C＝O)的 B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物，优选地所述生物转化为酶促的；
iv)用于治疗、缓解、预防和/或诊断B型单端孢霉烯霉菌毒素中毒、优选DON霉菌毒素中毒；
v)用于监测霉菌毒素中毒发展和/或评估B型单端孢霉烯霉菌毒素中毒预防和/或治疗、优选DON霉菌毒素中毒预防和/或治疗的疗效；
vi)用于筛选具有抗-霉菌毒素中毒活性的候选化合物；
vii)用于检测和/或评估B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的水平；
viii)用于抑制B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的毒性；
ix)用于改变、优选降低B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的水平；
x)用于生产以下的一种或多种：食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元；和/或药物-、诊断-、解毒-、监测- 和/或筛选组合物或试剂盒；
xi)用在根据前述项目中任一项所述的方法中；优选地其中在所述修饰期间，B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的C7原子上的羟基(-OH)保持不变；
xii)(i)-(xi)的任意组合；
xiii)根据(i)-(xii)中任一项所述的用途，其中所述用途为体外、离体或体内用途。
通过以下实施例进一步阐述了本发明，然而本发明不限于所述实施例或受所述实施例的任何具体实施方案的限制。
本发明的实施例
实施例1：比较能够转化B型单端孢霉烯(如将DON转化为epi-THS) 的醛酮还原酶
应用BLASTP算法(Altschul等，1990.J Mol Biol 215(3)：403-410) 将三种醛酮还原酶Akr I、Akr II和Akr III(分别为SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3)彼此对齐以使用如下的默认设置比对两个序列：即期望阈值：10；字长：3；查询范围内的最大匹配数：0；矩阵：BLOSUM62；间隙成本：存在：11，扩展：1；成分调整：条件成分分数矩阵调整；无过滤器，无掩码。获得的序列同一性百分比值示于表1。发现Akrs包含由 D54、Y59、K84和H125组成的催化四联体，见图1。
表1：采用BLASTP，用默认设置(期望阈值：10；字长：3；查询范围内的最大匹配数：0；矩阵：BLOSUM62；间隙成本：存在：11，扩展： 1；成分调整：条件成分分数矩阵调整；无过滤器，无掩码)测定的序列同一性(％)
Figure BDA0003289467840000441
通过应用实施例3中所述的测定，如图7的小图a所示，发现所有三种Akrs，在将NADPH氧化为NADP+的同时，催化DON在C8原子向3，7，8，15-四羟基藨草孢菌烯(epi-THS)的生物转化。未观察到epi-THS返回DON的逆反应。
实施例2：重组酶制剂的产生
对于所有候选酶的表达和蛋白质纯化，将编码酶SEQ ID NOs：1-5的多肽的核苷酸序列整合到限定的质粒中以在合适的宿主生物体(比如大肠杆菌DH10B)中表达。根据相应手册中描述的标准程序组装含有相应编码序列的重组载体。
将编码SEQ ID NO.1-3(Akr I-III)、SEQ ID NO.4(ADH-Lk)和SEQ ID NO：5(TAM-Ac)的核苷酸序列扩增并亚克隆到商购表达载体pET3a或相关载体中(在5′端具有限制性位点NdeI并在3′端具有BamHI或XhoI，以及在C-末端具有6xHis标签)，或表达载体pASK-IBA5Plus(在5′端和3′端具有限制性位点BsaI(Eco31I)，以及在N-末端具有Strep标签)。
对于具有SEQ ID NOs：1-5的酶的生产，将相应的重组载体转移至大肠杆菌BL21(DE3)或任何其它合适的大肠杆菌表达菌株。用IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)或AHTC(无水四环素)诱导细胞培养物中的蛋白质表达。通气培养细胞过夜后，通过离心收获细胞，并将其重悬于KPi缓冲液(50mM pH 7.0.5)、Tris缓冲液(100mM pH8，150mM NaCl，1mMEDTA)或任何其他类似的裂解缓冲液中。通过超声、弗氏压碎器或任何其他合适的方法将细胞破碎以打开细菌细胞并产生粗细胞裂解液。通过离心使细胞裂解液从细胞碎片中澄清，使用镍-琼脂糖凝胶或任何其他选择的基质对所得澄清的裂解液进行亲和层析，以从澄清的裂解液中选择性纯化重组酶。
为了测定重组酶的纯度，将重组酶在SDS PAGE蛋白凝胶上分离以用标准考马斯蓝染色使蛋白显现。使用Bradford试剂(Sigma#B6916)采用595 nm的波长和/或使用采用Qubit蛋白质测定法的荧光测量(Thermofischer Life technologies#Q33211)在平板读数仪(Biotek，Synergy HT)中光度测量地确定不同蛋白质的浓度。对于Bradford测定，以0μgml-1至最大1500μg ml-1的浓度测量的牛血清白蛋白(BSA，Sigma#A4919)的标准曲线为蛋白质浓度测量奠定了基础。对于Qubit分析，通过测量提供的从0μg ml-1到400 μg ml-1的标准品建立标准曲线，然后用于确定样品的蛋白质浓度。
实施例3：采用Akr I-III的DON生物转化分析
如本文所述，为了测定通过Akr I-III使DON向epi-THS的生物转化，进行以下分析。制备在pH 6.0的Teorell Stenhagen(TS)缓冲液(
Figure BDA0003289467840000451
和 Virtama，ActaPhysiologica Scandinavica，1946，11：4，289-293)中含有40ppm DON、1mM NADPH的分析缓冲液。将含有该分析缓冲液的试管转移到 30℃的加热块中。通过添加Akr I-III至最终反应体积200μL中最终浓度为200nM开始反应。在反应开始前和反应开始后2、5、10、15和20min时取样。通过与无水甲醇以1∶2的比例混合来终止这些样品中的DON转化反应，然后用40％甲醇以1∶100稀释。通过采用Sciex 5500三重四极杆质谱仪与Agilent 1290系列UHPLC系统联用的液相色谱-质谱联用 (LC-MS)，采用以下MS参数：采集持续时间：4分钟；扫描类型：MRM (MRM)；极性：负极；离子源：涡轮喷雾，来确定样品中DON和epi-THS 的浓度。分析物参数示于表2中。
表2：MS分析物参数。Q1和Q3是指定性离子，当它们以相对于给定化合物的目标离子特征的正确数量存在时能够识别目标分子。
分析物 Q1 mass Q3 mass
DON 355.086 59.0
DON QL 355.086 265.0
epi-THS 357.058 297.2
epi-THS QL 357.058 177.1
对于LC，洗脱液A为5％甲醇、94.9％水(超纯)、0.1％乙酸，洗脱液B为99.9％甲醇、0.1％乙酸，使用Phenomenex Kinetex 2.6μm联苯150 x2.1mm色谱柱，1μL的进样体积和表3所示的方案。
表3：LC洗脱液混合方案
时间min 流速μL/min 洗脱液A％ 洗脱液B％
0.00 500 95 5
0.10 500 95 5
3.00 500 30 70
3.01 500 0 100
3.30 500 0 100
3.31 500 95 5
图2示例性地示出了在上述DON转化分析的整个时间过程中DON和epi-THS的浓度。
实施例4：Akr I-III的表征
对于Akr I-III的进一步表征，在不同pH值和不同温度下进行了DON 转化分析，并测试不同pH值下和对不同温度的酶稳定性。
通过应用基本上如实施例3中所述的DON转化分析，但在pH 2至pH 10的pH值下，测定Akr I-III(SEQ ID NOs：1-3)的DON降解的pH最佳。Akr I和Akr II在pH 6.0时达到最大活性，Akr III在pH 6.5时达到最大活性。Akr I-III在pH值4.5、5.0至pH 9.0和pH 9.5下显示出其各自最大活性的50％或更多。对于pH 4.0下的Akr I，反应进行得较慢，但仍在30分钟后实现了完全降解DON。
通过应用基本上如实施例3中所述的DON转化分析，但在14.9℃至 55.7℃的不同温度下，测定Akr I-III的DON降解活性的温度最佳。Akr I 在约35℃下，Akr II在约31℃下和Akr III在约28℃至33℃下显示最大活性(参见图4)。Akr I-III在约20℃至48℃的温度下显示出其各自最大活性的50％或更多。对于Akr I，即使在20℃以下(如14.9℃)的温度下，仍然在温育20分钟后实现了完全DON降解。
通过进行基本上如实施例3所述的DON转化分析来测定动力学参数。在进一步包含1mM NADPH和浓度为3.38μM、33.78μM、135.14μM、 270.27μM或1182.43μM的DON的pH 6.0的Teorell Stenhagen(TS)缓冲液(
Figure BDA0003289467840000471
和Virtama，Acta Physiologica Scandinavica，1946，11：4，289-293) 中以200nM的终浓度使用Akr I-III。将观察到的反应速率和相应的DON 浓度拟合至用于描述酶动力学的Michaelis-Menten函数。该拟合采用程序 SigmaPlot(Systat Software Inc.)进行以计算分析中Akr I-III的最大DON转化率(Vmax)、米氏常数(KM)和转化数(kcat)。对于Akr I，测定得到8471 U/mg 的Vmax，143μM的KM和5.08次/s的kcat。图5示出了非线性曲线拟合的实例。
通过在30℃下在标准1.5ml Eppendorf管中的具有pH 3.0-10.0的TS 缓冲溶液中温育1μM酶达4h来测试不同pH值下Akr I-III的储存稳定性。如实施例3所述，每小时进行一次DON转化分析。将0min时的起始活性设置为100％，并在整个温育过程中测定相对残留活性。对于DON转化分析，将80μl储存溶液添加到最终体积为400μl的分析反应中，这对应于储存溶液的1∶5稀释度。在30℃、pH4.0-10.0下，在4小时期间Akr I 保留了大于93％的活性。在30℃、pH 4.0-9.0下，在4小时期间Akr II 保留了30％至93％的活性。在30℃、pH4.0-9.0下，在4小时期间Akr III 保留了27％至85％的活性。在30℃、pH 4.0-8.0下，Akr I-III保留了其活性的至少40％达4小时。如表4、5和6中所展示的，在30℃、pH 4.0- 7.0下，Akr I-III保留了其活性的至少55％达4小时。
表4：在不同的pH值下，在30℃下储存4h期间Akr I的相对DON- 转化活性
时间h pH 3.0 pH 4.0 pH 5.0 pH 6.0 pH 7.0.0 pH 8.0 pH 9.0.0 pH 10.0
0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0
1 0.0 100.6 101.0 100.6 99.6 101.5 100.9 100.5
2 0.0 102.8 101.6 101.9 101.4 102.4 101.0 101.4
3 0.0 101.5 100.8 101.1 99.7 101.1 100.8 99.8
4 0.0 93.8 97.9 100.7 96.1 101.2 96.6 96.0
表5：在不同的pH值下，在30℃下储存4h期间Akr II的相对DON- 转化活性
时间h pH 3.0 pH4.0 pH 5.0 pH 6.0 pH 7.0.0 pH 8.0 pH 9.0.0 pH 10.0
0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0
1 34.5 99.3 100.1 77.3 79.6 85.1 76.5 54.4
2 1.1 96.6 99.8 85.1 64.5 68.3 54.7 37.7
3 0.0 87.1 99.3 77.6 56.9 53.2 36.1 13.9
4 0.0 89.0 92.4 61.8 57.4 40.9 29.9 7.2
表6：在不同的pH值下，在30℃下储存4h期间Akr III的相对DON- 转化活性
Figure BDA0003289467840000481
Figure BDA0003289467840000491
在设置30℃至50℃的梯度模式的热循环仪(Mastercycler，Eppendorf) 中通过在储存缓冲液(50mM Tris pH 9.0，0.5M NaCl，50％甘油)中温育5 μM酶溶液达60min来测试Akr I-III的储存稳定性。在整个温育过程中，将样品移出并放置在冰上直至进行如实施例3所述的DON转化分析来测定酶活性。将0min时的起始活性设置为100％，并在整个温育过程中测定相对残留活性。在29.9℃至46.0℃的温度、pH 6下，在60min期间Akr I 保留了大于33％的活性。在29.9℃至40.7℃的温度、pH 6下，在20min 期间Akr II保留了15％至90％的活性。在29.9℃至46.0℃的温度、pH 6 下，在60min期间Akr III保留了大于50％的活性，如表7、8和9所展示。
表7：在不同的温度下，在储存缓冲液中温育60min期间Akr I的相对DON转化活性
Figure BDA0003289467840000492
Figure BDA0003289467840000501
表8：在不同的温度下，在储存缓冲液中温育60min期间Akr II的相对DON转化活性
Figure BDA0003289467840000502
表9：在不同的温度下，在储存缓冲液中温育60min期间Akr III的相对DON转化活性
Figure BDA0003289467840000503
Figure BDA0003289467840000511
实施例5：在复合基质中的Akr活性
在复合基质中测试Akr I-III的DON转化活性以证实酶作为饲料添加剂的实用性。作为饲料基质，使用仔猪饲料(FAF1，Waxenecker KG)。仔猪饲料由10％的小麦和90％的KON(
Figure BDA0003289467840000512
AG)组成。将Akr I、Akr II 或Akr III与300mg仔猪饲料和NADPH混合，以在最终体积为3mL去离子水中达到200nM酶的最终浓度、1 mM NADPH的最终浓度和40ppm DON的最终浓度。15min后，Akr I-III将DON转化为低于检测水平的浓度。
作为另一种复合基质，测试未处理以及热处理(在99℃下煮沸15min) 的瘤胃液。再次，使用200nM的Akr I或Akr II或Akr III、40ppm DON 和1mM NADPH测试DON转化。发现Akr I-III是有活性的且将DON转化为epi-THS。在未经处理的瘤胃液中，15min后约50％的DON发生转化，而在经过热处理的瘤胃液中，15min后大于95％的DON发生转化。
实施例6：采用ADH-Lk的DON转化分析
为了通过SEQ ID NO.4(ADH-Lk)的催化将DON还原为3，7，8R，15-四羟基藨草孢菌烯(THS)，建立由如下组成的降解分析：pH 7.0.5的50mM Tris缓冲液，含有1mM NADP+、5％v/v异丙醇(IPA)、100ppm DON和 200nM酶。在冰上将除异丙醇和NADP+外的所有反应成分混合并取出0 分钟样品(将样品与100％甲醇1∶1(v/v)混合以停止任何反应)。之后，迅速将反应混合物转移至加热块并通过添加NADP+和IPA开始反应。该反应在30℃下进行22小时。平行设置具有相同设置但缺少酶的对照反应。定期取出样品以监测反应进程，并立即与100％甲醇以1∶1(v/v)混合以停止反应。随后使用下文所述的HPLC-MS/MS方法对样品进行分析。
对于HPLC-MS/MS分析，将DON和THS在粒径为2.6μm的150mm x 2.1mm PhenomenexKinetex联苯色谱柱上进行分离。流动相由甲醇和超纯水和0.1％(v/v)乙酸的混合物组成。离子是在负电离模式下使用电喷雾电离(ESI)产生的。使用QTrap和/或三重四极杆质谱检测器进行定量。样品需要稀释以落入该方法的线性范围内，该范围为在注射样品中的分析物浓度1ppb至500ppb。表10中描绘了结果。反应中ADH-Lk的存在导致由DON产生THS。
表10：在30℃下3.5小时和22小时后，ADH-Lk将DON转化为THS
反应类型 时间(h) DON(μg/L) THS[峰面积]
对照 0 395.0 nd
对照 3.5 397.3 nd
对照 22 371.0 nd
ADH-Lk 0 399.9 nd
ADH-Lk 3.5 387.1 7.88E+03
ADH-Lk 22 296.6 1.13E+05
实施例7：代谢毒性测试
为了确定，如上文所述，DON通过Akr I-III向epi-THS的转化和DON 通过ADH-Lk向THS的转化是否导致了毒性降低，进行两个分析。将体外
Figure BDA0003289467840000521
快速偶联转录/翻译系统(Promega)用于测量代谢物抑制蛋白质合成的效果如何，并将CellToxTM Green细胞毒性分析(Promega；G8741)用于比较代谢物对源自虹鳟鱼的原代上皮细胞的毒性作用。
对于体外转录/翻译分析，将40μl的TNT T7快速预混物(quick master mix)与2μl萤火虫荧光素酶编码DNA和4μl代谢物混合，获得反应中0.01 μM-150μM的终浓度。将缺乏代谢物的反应作为最大发光输出的参考。将反应在30℃下温育90min以允许荧光素酶基因的转录和随后的翻译。在不透明(白色)96-孔板(Greiner Bio One)中，将100μl荧光素酶试剂与4μl 反应物混合并立即放入Synergy HT读板器(Biotek)中，以2秒和10秒测量延迟读取发光。与参考相比，发光输出越低，所分析的代谢物的毒性越大。如图6所示，在该分析中，代谢物epi-THS和THS的毒性比DON低约25-30 倍。
对于细胞毒性，将细胞接种在不透明96-孔板(Greiner Bio One)中并使其生长至次汇合。在补充有10％胎牛血清(FBS)的Leibovitz L15培养基中将目标代谢物稀释至0-30μM并将其添加至细胞中，然后在21℃下温育 24h。然后将100μl celltox绿染料添加至细胞中并将所述板在室温下于黑暗中温育15min。在使用以下参数：温度30℃、激发485nm，发射528nm，增益设置为100的Synergy HT读板器(Biotek)上测量荧光。荧光输出越高，受影响的细胞越多且测试化合物的毒性越大。
原代细胞系表明epi-THS和THS两者的毒性比DON低至少10倍。对于估计的LC50(50％细胞死亡的浓度)值，DON为0-1μM，epi-THS 和THS为～15μM，参见表10。
表10：DON、epi-THS和THS对上皮细胞的毒性。将采用最高的DON 浓度测量的荧光作为100％毒性且所有其他测量均与该值相关。
[c]/代谢物 DON Epi-THS THS
30μM 100 87.4 72.4
15μM 87.8 58.1 42.8
10μM 85.6 37.6 40.0
3μM 64.2 38.5 33.5
1μM 59.0 34.5 35.8
实施例8：DON的转氨
使用转氨酶研究DON的转氨。转氨酶(EC 2.6.1.-)催化氨基从胺到羰基化合物(接受体)的可逆转移。我们的研究使用过量的异丙胺IPA作为胺供体并作为用于辅助因子5’-磷酸吡哆醛(PLP)再循环的化合物。过量的异丙胺IPA还具有将不利平衡推向胺形成的功能(Cassimjee等，Chem. Commun.2010，46，5569-5571.)对于PLP再生，L-丙氨酸脱氢酶(Koszelewski等，Chem.Int.Ed.2008，47，9337-9340)或乳酸脱氢酶(Shin 和Kim，Biotechnol′.Bioeng.1999，65，206-211)再循环系统也是合适的，因为不是所有的转氨酶均接受共底物异丙胺(特别是在平衡驱动力所需的高浓度下)。
对于具有另外羰基基团的DON及其衍生物的胺化，比如由SEQ ID NO. 5(TAM-Ac)催化使3-酮DON-向胺化代谢物转化，建立由以下组成的转氨分析：pH8的100mM异丙胺/H3PO4，含有1mM5’-磷酸吡哆醛一水合物 (PLP)、200ppm DON或200ppm DON衍生物和200nM酶。在冰上将所有反应成分混合并取出0分钟样品并将其与pH 8的60％MeOH/KPi以1∶1 (v/v)混合。之后，迅速将反应混合物转移至加热块并使该反应在30℃下进行24小时。对照反应具有相同的设置，只是缺少酶。定期取出样品以监测反应进程。将样品立即与pH 8的60％MeOH/KPi以1∶1(v/v)混合以停止反应。随后使用下文所述的QTOF-MS方法对样品进行分析。
对于QTOF-MS分析(1290infinity II LC联合MS X500R QTOF)，将 DON、3-酮-DON、8-氨基-DON和8-氨基-3-酮DON在粒径为2.7μm的 100mm x 2.1mm Restek Raptor联苯色谱柱上进行分离。流动相由甲醇或乙腈与超纯水的混合物组成。离子是在正电离模式下使用电喷雾电离(ESI) 产生的。使用TOF和/或三重四极杆质谱检测器进行定量。样品需要稀释以落入该方法的线性范围内，该范围为在注射样品中的分析物浓度1ppb 至500ppb。表11中描绘了结果。反应中SEQ ID NO.5的存在导致胺化的 DON和DON衍生物，比如8-氨基DON和8-氨基-3-酮DON的产生。
表11：DON和3-酮DON的QTOF分析结果。NC前缀是指缺乏酶的相应底物的阴性对照。
Figure BDA0003289467840000541
Figure BDA0003289467840000551
为了测定8-氨基DON的毒性，如实施例8所述进行体外转录/翻译分析，其中不同之处在于8-氨基-DON与DON进行比较并对发光输出具有弱5-10倍的影响。
Figure BDA0003289467840000561
Figure BDA0003289467840000571
Figure BDA0003289467840000581
Figure BDA0003289467840000591
Figure BDA0003289467840000601
Figure BDA0003289467840000611
Figure BDA0003289467840000621
Figure BDA0003289467840000631
序列表
<110> 艾尔柏股份公司
<120> 使霉菌毒素解毒的手段和方法
<130> LC21310013
<150> EP 20199475.3
<151> 2020-09-30
<160> 5
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 312
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ArkI
<400> 1
Met Arg Thr Thr Glu Ile Ser Gln Gly Leu Lys Val Ser Asn Leu Cys
1 5 10 15
Ile Gly Ala Gly Pro Leu Gly Gly Met Pro Thr Ala Phe Gly Tyr Asp
20 25 30
Val Ser Glu Glu Arg Gly Ile Ala Thr Val Gln Ala Val Phe Asp Ser
35 40 45
Pro Ile Asn Phe Met Asp Thr Ser Ser Glu Tyr Gly Asp Ser Glu Val
50 55 60
Arg Ile Gly Lys Val Ile Arg Glu Gly Arg Met Pro Lys Gly Phe Val
65 70 75 80
Ile Ala Thr Lys Ala Asp Ala Glu Gly Asp Gly Thr Ala Arg Arg Gly
85 90 95
Asp Phe Ser Ala Lys Gln Val Arg Ala Ser Phe Glu Leu Ser Leu Glu
100 105 110
Arg Leu Gly Leu Thr His Ile Asp Val Tyr Phe Leu His Asp Pro Glu
115 120 125
Lys Phe Pro Phe Glu His Val Met Ala Arg Gly Gly Ala Met Glu Glu
130 135 140
Leu Leu Arg Leu Lys Asp Glu Gly Leu Val Gly Leu Val Gly Val Ala
145 150 155 160
Gly Gly Asp Val Val Glu Met Ala Arg Tyr Val Asp Thr Gly Asn Leu
165 170 175
Asp Ile Leu Leu Asn Tyr Gly Arg Tyr Thr Leu Leu Asp Arg Ser Ala
180 185 190
Asp Ser Leu Ile Asp Lys Ala Ser Asp Ala Gly Met Ala Phe Leu Asn
195 200 205
Ala Gly Pro Tyr Ala Ser Gly Leu Leu Ala Ala Pro Arg Gly Gly Ser
210 215 220
Ala Trp Tyr Gln Tyr Ala Pro Pro Asn Ala Asp Ala Leu Gln Ala Val
225 230 235 240
Asp Gln Leu His Glu Leu Cys Glu Ser Phe Asp Val Ser Leu Arg Ser
245 250 255
Val Ala Leu Gln Phe Ser Met Arg Asp Pro Arg Ile Thr Ser Thr Val
260 265 270
Val Gly Leu Ser Arg Pro Glu Arg Val Arg Ala Leu Leu Asp Asp Ala
275 280 285
Ala Ala Glu Ile Pro Ala Glu Leu Trp Asp Gln Leu Pro Ala Pro Leu
290 295 300
Asn Leu Pro Trp Asn Ser Leu Ala
305 310
<210> 2
<211> 312
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ArkII
<400> 2
Met Arg Thr Thr Glu Ile Ala Gln Gly Leu Lys Val Ser Asn Leu Cys
1 5 10 15
Ile Gly Ala Gly Pro Leu Gly Gly Met Pro Thr Ala Phe Gly Tyr Asp
20 25 30
Val Ser Glu Glu Arg Gly Ile Ala Thr Val Gln Ala Val Phe Asp Ser
35 40 45
Pro Ile Asn Phe Met Asp Thr Ser Ser Glu Tyr Gly Gly Ser Glu Ala
50 55 60
Arg Ile Gly Lys Val Ile Arg Glu Gly Leu Met Pro Lys Gly Phe Val
65 70 75 80
Ile Ser Ser Lys Ala Asp Ala Glu Gly Glu Gly Val Gly Arg Arg Gly
85 90 95
Asp Phe Ser Ala Lys Gln Val Arg Ala Ser Phe Glu Leu Ser Leu Glu
100 105 110
Arg Leu Gly Leu Thr His Leu Asp Val Tyr Phe Leu His Asp Pro Glu
115 120 125
Lys Phe Pro Phe Glu Gln Val Met Ala Arg Gly Gly Ala Met Glu Glu
130 135 140
Leu Leu Arg Leu Lys Asp Glu Gly Leu Val Gly Leu Val Gly Val Ala
145 150 155 160
Gly Gly Asp Val Leu Glu Met Ala Arg Tyr Val Asp Thr Gly Ser Leu
165 170 175
Asp Ile Leu Leu Asn Tyr Gly Arg Tyr Thr Leu Leu Asp Arg Ser Ala
180 185 190
Asp Ser Leu Ile Thr Lys Val Ser Asp Ala Gly Met Ala Phe Leu Asn
195 200 205
Ala Gly Pro Tyr Ala Ser Gly Leu Leu Ala Ala Pro Arg Gly Gly Ser
210 215 220
Ala Trp Tyr Gln Tyr Ala Pro Pro Asp Ala Thr Ala Leu Gln Ala Val
225 230 235 240
Asp Gln Leu His Glu Leu Cys Glu Ser Phe Asp Val Ser Leu Arg Ser
245 250 255
Val Ala Leu Gln Phe Ser Met Arg Asp Pro Arg Ile Thr Ser Thr Val
260 265 270
Val Gly Leu Ser Arg Pro Glu Arg Val Arg Ala Leu Leu Asp Asp Glu
275 280 285
Ala Ala Glu Ile Pro Ala Glu Leu Trp Glu Gln Leu Pro Ala Pro Leu
290 295 300
Asn Gly Asp Ile Val Leu Pro Gly
305 310
<210> 3
<211> 312
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ArkIII
<400> 3
Met Arg Thr Thr Glu Ile Ala Gln Gly Leu Lys Val Ser Asn Leu Cys
1 5 10 15
Ile Gly Ala Gly Pro Leu Gly Gly Met Pro Thr Ala Phe Gly Tyr Asp
20 25 30
Val Ser Glu Glu Arg Gly Ile Ala Thr Val Gln Ala Val Phe Asp Ser
35 40 45
Pro Ile Asn Phe Met Asp Thr Ser Ser Glu Tyr Gly Gly Ser Glu Ala
50 55 60
Arg Ile Gly Lys Val Ile Arg Glu Gly Arg Met Pro Lys Gly Phe Val
65 70 75 80
Ile Ser Ser Lys Ala Asp Ala Glu Gly Glu Gly Val Gly Arg Arg Gly
85 90 95
Asp Phe Ser Ala Lys Gln Val Arg Ala Ser Phe Glu Leu Ser Leu Glu
100 105 110
Arg Leu Gly Leu Thr His Leu Asp Val Tyr Phe Leu His Asp Pro Glu
115 120 125
Lys Phe Pro Phe Glu Gln Val Met Ala Arg Gly Gly Ala Met Glu Glu
130 135 140
Leu Leu Arg Leu Lys Asp Glu Gly Leu Val Gly Leu Val Gly Val Ala
145 150 155 160
Gly Gly Asp Val Leu Glu Met Ala Arg Tyr Val Asp Thr Gly Ser Leu
165 170 175
Asp Ile Leu Leu Asn Tyr Gly Arg Tyr Thr Ile Leu Asp Arg Ser Ala
180 185 190
Asp Ser Leu Ile Thr Lys Val Ser Asp Ala Gly Met Ala Phe Leu Asn
195 200 205
Ala Gly Pro Tyr Ala Ser Gly Leu Leu Ala Ala Pro Arg Gly Gly Ser
210 215 220
Ala Trp Tyr Gln Tyr Ala Pro Pro Asp Ala Thr Ala Leu Gln Ala Val
225 230 235 240
Asp Gln Leu His Glu Leu Cys Glu Ser Phe Asp Val Ser Leu Arg Ser
245 250 255
Val Ala Leu Gln Phe Ser Met Arg Asp Pro Arg Ile Thr Ser Thr Val
260 265 270
Val Gly Leu Ser Arg Pro Glu Arg Val Arg Ala Leu Leu Asp Asp Glu
275 280 285
Ala Ala Glu Ile Pro Ala Glu Leu Trp Glu Gln Leu Pro Ala Pro Leu
290 295 300
Asn Gly Asp Ile Val Leu Pro Arg
305 310
<210> 4
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ADH-Lk
<400> 4
Met Thr Asp Arg Leu Lys Gly Lys Val Ala Ile Val Thr Gly Gly Thr
1 5 10 15
His Gly Ile Gly Leu Ala Ile Ala Thr Lys Phe Val Thr Glu Gly Ala
20 25 30
Lys Val Val Ile Thr Gly Arg Arg Ala Asp Val Gly Glu Lys Ala Ala
35 40 45
Lys Ser Ile Gly Gly Thr Asp Val Ile Arg Phe Val Gln His Asp Val
50 55 60
Ser Asp Glu Ala Gly Trp Gly Lys Leu Phe Asp Thr Thr Glu Glu Thr
65 70 75 80
Phe Gly Pro Val Thr Thr Leu Val Asn Asn Ala Gly Ile Gly Tyr Arg
85 90 95
Lys Ser Val Glu Asp Thr Thr Thr Glu Glu Trp Arg Lys Leu Leu Ser
100 105 110
Val Asn Leu Asp Gly Val Phe Phe Gly Thr Arg Leu Gly Ile Gln Arg
115 120 125
Met Lys Cys Lys Gly Leu Gly Ala Ser Ile Ile Asn Met Ser Ser Ile
130 135 140
Leu Gly Gln Val Gly Asp Pro Ala Thr Gly Ala Tyr Ser Ala Ser Lys
145 150 155 160
Gly Ala Val Arg Ile Met Ser Lys Ser Ala Ala Leu Leu Cys Ala Leu
165 170 175
Lys Asp Tyr Asp Val Arg Val Asn Thr Val His Pro Gly Pro Ile Lys
180 185 190
Thr Pro Leu Met Asp Asp Met Pro Gly Ala Glu Glu Met Met Ser Gln
195 200 205
Arg Thr Lys Thr Pro Met Gly His Ile Gly Glu Pro Asn Asp Ile Ala
210 215 220
Trp Val Cys Val Tyr Leu Ala Ser Asp Glu Ser Lys Phe Ala Thr Gly
225 230 235 240
Ala Glu Phe Val Val Asp Gly Gly Tyr Thr Ala Gln
245 250
<210> 5
<211> 333
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TAM-Ac
<400> 5
Met Ala Phe Ser Ala Asp Thr Pro Glu Ile Val Tyr Thr His Asp Thr
1 5 10 15
Gly Leu Asp Tyr Ile Thr Tyr Ser Asp Tyr Glu Leu Asp Pro Ala Asn
20 25 30
Pro Leu Ala Gly Gly Ala Ala Trp Ile Glu Gly Ala Phe Val Pro Pro
35 40 45
Ser Glu Ala Arg Ile Ser Ile Phe Asp Gln Gly Phe Tyr Thr Ser Asp
50 55 60
Ala Thr Tyr Thr Thr Phe His Val Trp Asn Gly Asn Ala Phe Arg Leu
65 70 75 80
Gly Asp His Ile Glu Arg Leu Phe Ser Asn Ala Glu Ser Ile Arg Leu
85 90 95
Ile Pro Pro Leu Thr Gln Asp Glu Val Lys Glu Ile Ala Leu Glu Leu
100 105 110
Val Ala Lys Thr Glu Leu Arg Glu Ala Met Val Thr Val Thr Ile Thr
115 120 125
Arg Gly Tyr Ser Ser Thr Pro Phe Glu Arg Asp Ile Thr Lys His Arg
130 135 140
Pro Gln Val Tyr Met Ser Ala Cys Pro Tyr Gln Trp Ile Val Pro Phe
145 150 155 160
Asp Arg Ile Arg Asp Gly Val His Leu Met Val Ala Gln Ser Val Arg
165 170 175
Arg Thr Pro Arg Ser Ser Ile Asp Pro Gln Val Lys Asn Phe Gln Trp
180 185 190
Gly Asp Leu Ile Arg Ala Ile Gln Glu Thr His Asp Arg Gly Phe Glu
195 200 205
Leu Pro Leu Leu Leu Asp Cys Asp Asn Leu Leu Ala Glu Gly Pro Gly
210 215 220
Phe Asn Val Val Val Ile Lys Asp Gly Val Val Arg Ser Pro Gly Arg
225 230 235 240
Ala Ala Leu Pro Gly Ile Thr Arg Lys Thr Val Leu Glu Ile Ala Glu
245 250 255
Ser Leu Gly His Glu Ala Ile Leu Ala Asp Ile Thr Pro Ala Glu Leu
260 265 270
Tyr Asp Ala Asp Glu Val Leu Gly Cys Ser Thr Gly Gly Gly Val Trp
275 280 285
Pro Phe Val Ser Val Asp Gly Asn Ser Ile Ser Asp Gly Val Pro Gly
290 295 300
Pro Val Thr Gln Ser Ile Ile Arg Arg Tyr Trp Glu Leu Asn Val Glu
305 310 315 320
Pro Ser Ser Leu Leu Thr Pro Val Gln Tyr Ala Leu Glu
325 330

Claims (15)

1.一种能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的多肽，其中所述多肽为以下的一种或多种：
a)与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的多肽具有至少94.1％(如至少94.2％、至少94.3％、至少94.4％、至少94.5％、至少94.6％、至少94.7％、至少94.8％、至少94.9％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
b)SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的多肽的变体，其中所述变体在一个或多个位置处包含置换、缺失或插入，其中所述变体与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列具有至少95％但是小于100％的序列同一性；
c)能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的(a)-(b)的多肽的片段。
2.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中：(i)所述C8原子的修饰为以下的一种或多种：还原酮基部分(优选地将所述酮基部分还原为羟基部分)，使酮基部分转氨，使B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物解毒和/或降低B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的毒性；和/或(ii)所述B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物选自：3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、雪腐镰刀菌烯醇、4-乙酰基雪腐镰刀菌烯醇、3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇。
3.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述修饰C8原子为得到以下的一种或多种的C8原子的还原或转氨：3,7,8,15-四羟基藨草孢菌烯(epi-THS)、3,7,8R,15-四羟基藨草孢菌烯(THS)、8-氨基-DON、8-氨基-3-酮-DON、8-羟基-3-酮脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-镰刀菌烯酮-X、8-羟基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-镰刀菌烯酮-X和/或8-氨基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇。
4.一种重组宿主细胞(如分离的重组宿主细胞)、转基因植物、转基因种子或转基因花粉粒，其包含以下的一种或多种：
i)能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的一种或多种多肽，其中所述多肽为以下的一种或多种：
a)与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的多肽具有至少94.1％(如至少94.2％、至少94.3％、至少94.4％、至少94.5％、至少94.6％、至少94.7％、至少94.8％、至少94.9％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
b)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的多肽具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性的多肽；
c)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的多肽的变体，其中所述变体在一个或多个位置处包含置换、缺失或插入，其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少95.5％、至少96％、至少96.5％、至少97％、至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％)但是小于100％的序列同一性；
d)能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的(a)-(c)的多肽的片段；
ii)一种或多种多核苷酸，其编码一种或多种根据(i)的所述多肽；
iii)一种或多种核酸构建体和/或表达载体，其能够表达一种或多种编码一种或多种根据(i)的所述多肽的多核苷酸。
5.一种食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元和/或其混合物，其包含以下的一种或多种：
i)能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的多肽，其中所述多肽为以下的一种或多种：
a)与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的多肽具有至少94.1％(如至少94.2％、至少94.3％、至少94.4％、至少94.5％、至少94.6％、至少94.7％、至少94.8％、至少94.9％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
b)与SEQ ID NO:4所示的多肽具有至少91.1％(如至少91.2％、至少91.3％、至少91.4％、至少91.5％、至少91.6％、至少91.7％、至少91.8％、至少91.9％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
c)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的多肽具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性的多肽；
d)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的多肽的变体，其中所述变体在一个或多个位置处包含置换、缺失或插入，其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少95.5％、至少96％、至少96.5％、至少97％、至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％)但是小于100％的序列同一性；
e)能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的(a)-(d)的多肽的片段；
ii)编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸；
iii)能够表达一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸的核酸构建体；
iv)能够表达一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸的表达载体；
v)重组宿主细胞(如分离的重组宿主细胞)、转基因植物、转基因种子和/或转基因花粉粒，其包含以下的一种或多种：根据(i)的所述一种或多种多肽；一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸；一种或多种能够表达一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸的核酸构建体和/或表达载体。
6.一种组合物或试剂盒，其包含以下的一种或多种：
i)能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的多肽，其中所述多肽为以下的一种或多种：
a)与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的多肽具有至少94.1％(如至少94.2％、至少94.3％、至少94.4％、至少94.5％、至少94.6％、至少94.7％、至少94.8％、至少94.9％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
b)与SEQ ID NO:4所示的多肽具有至少91.1％(如至少91.2％、至少91.3％、至少91.4％、至少91.5％、至少91.6％、至少91.7％、至少91.8％、至少91.9％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
c)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的多肽具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性的多肽；
d)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的多肽的变体，其中所述变体在一个或多个位置处包含置换、缺失或插入，其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少95.5％、至少96％、至少96.5％、至少97％、至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％)但是小于100％的序列同一性；
e)能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的(a)-(d)的多肽的片段；
ii)编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸；
iii)能够表达一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸的核酸构建体；
iv)能够表达一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸的表达载体；
v)重组宿主细胞(如分离的重组宿主细胞)、转基因植物、转基因种子和/或转基因花粉粒，其包含以下的一种或多种：根据(i)的所述一种或多种多肽；一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸；一种或多种能够表达一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸的核酸构建体和/或表达载体；
vi)根据前述权利要求中任一项所述的食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元和/或其混合物。
7.一种在C8原子处修饰的B型单端孢霉烯化合物或中间体，其中所述化合物或中间体选自：8-氨基-DON、8-氨基-3-酮-DON、8-氨基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-镰刀菌烯酮-X和8-氨基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇。
8.一种用于生产在C8原子处修饰的B型单端孢霉烯化合物或中间体的方法，所述化合物或中间体选自：3,7,8,15-四羟基藨草孢菌烯(epi-THS)、3,7,8R,15-四羟基藨草孢菌烯(THS)、8-氨基-DON、8-氨基-3-酮-DON、8-羟基-3-酮脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-镰刀菌烯酮-X、8-羟基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-镰刀菌烯酮-X和8-氨基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇，所述方法包括：向相应的B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物应用：
i)能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的一种或多种多肽，其中所述多肽为以下的一种或多种：
a)与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的多肽具有至少94.1％(如至少94.2％、至少94.3％、至少94.4％、至少94.5％、至少94.6％、至少94.7％、至少94.8％、至少94.9％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
b)与SEQ ID NO:4所示的多肽具有至少91.1％(如至少91.2％、至少91.3％、至少91.4％、至少91.5％、至少91.6％、至少91.7％、至少91.8％、至少91.9％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
c)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的多肽具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性的多肽；
d)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的多肽的变体，其中所述变体在一个或多个位置处包含置换、缺失或插入，其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少95.5％、至少96％、至少96.5％、至少97％、至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％)但是小于100％的序列同一性；
e)能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的(a)-(d)的多肽的片段；
ii)重组宿主细胞(如分离的重组宿主细胞)，其包含以下的一种或多种：根据(i)的所述一种或多种多肽；一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸；一种或多种能够表达一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸的核酸构建体和/或表达载体；和/或
iii)一种或多种前述权利要求中任一项所述的组合物和/或试剂盒。
9.一种由前述权利要求中任一项所述的生产所述化合物或中间体的方法生产的在C8原子处修饰的B型单端孢霉烯化合物或中间体，其中所述化合物或中间体选自：8-氨基-DON、8-氨基-3-酮-DON、8-氨基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-镰刀菌烯酮-X和8-氨基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇。
10.一种在包含B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的底物或样品中用于以下的一种或多种的方法：
i’)用于修饰B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的C8原子；
ii’)用于改变B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的水平(如降低所述水平)；和/或使B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物解毒；
iii’)用于生物转化(如酶促修饰)B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物，优选地所述生物转化为酶促的；
iv’)用于检测和/或评估B型单端孢霉烯霉菌毒素、优选DON和/或DON衍生物的水平；和/或
v’)用于降低B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的毒性和/或用于处理种子；
所述方法包括：
(a’)提供以下的一种或多种：
i)能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的多肽，其中所述多肽为以下的一种或多种：
a)与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的多肽具有至少94.1％(如至少94.2％、至少94.3％、至少94.4％、至少94.5％、至少94.6％、至少94.7％、至少94.8％、至少94.9％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
b)与SEQ ID NO:4所示的多肽具有至少91.1％(如至少91.2％、至少91.3％、至少91.4％、至少91.5％、至少91.6％、至少91.7％、至少91.8％、至少91.9％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
c)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的多肽具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性的多肽；
d)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的多肽的变体，其中所述变体在一个或多个位置处包含置换、缺失或插入，其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少95.5％、至少96％、至少96.5％、至少97％、至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％)但是小于100％的序列同一性；
e)能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的(a)-(d)的多肽的片段；
ii)在C8原子处修饰的化合物或中间体，所述化合物或中间体选自：3,7,8,15-四羟基藨草孢菌烯(epi-THS)、3,7,8R,15-四羟基藨草孢菌烯(THS)、8-氨基-DON、8-氨基-3-酮-DON、8-羟基-3-酮脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-雪腐镰刀菌烯醇、8-羟基-镰刀菌烯酮-X、8-羟基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-镰刀菌烯酮-X和8-氨基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇；
iii)编码根据(i)的一种或多种多肽的多核苷酸；
iv)能够表达一种或多种编码根据(i)的一种或多种多肽的多核苷酸的核酸构建体；
v)能够表达一种或多种编码根据(i)的一种或多种多肽的多核苷酸的表达载体；
vi)重组宿主细胞(如分离的重组宿主细胞)、转基因植物、转基因种子和/或转基因花粉粒，其包含以下的一种或多种：根据(i)的所述一种或多种多肽；一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸；一种或多种能够表达一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸的核酸构建体和/或表达载体；
vii)根据前述权利要求中任一项所述的食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元或其混合物、组合物或试剂盒；
(b’)将(a’)应用至所述底物或样品；
(c’)优选地：检测和/或定量一种或多种前述权利要求中任一项所述的B型单端孢霉烯化合物或中间体。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中：(i)所述修饰C8原子包括以下的一种或多种：还原酮基部分(优选地将所述酮基部分还原为羟基部分)，使酮基部分转氨，使B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物解毒和/或降低B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的毒性；和/或(ii)所述B型单端孢霉烯、优选DON衍生物选自：3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、雪腐镰刀菌烯醇、4-乙酰基雪腐镰刀菌烯醇、3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇。
12.一种用于治疗、缓解、预防和/或诊断(如受试者或动物中的)霉菌毒素中毒的方法，所述方法包括：
a’)提供：治疗有效量的以下的一种或多种：
i)能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的多肽，其中所述多肽为以下的一种或多种：
a)与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的多肽具有至少94.1％(如至少94.2％、至少94.3％、至少94.4％、至少94.5％、至少94.6％、至少94.7％、至少94.8％、至少94.9％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
b)与SEQ ID NO:4所示的多肽具有至少91.1％(如至少91.2％、至少91.3％、至少91.4％、至少91.5％、至少91.6％、至少91.7％、至少91.8％、至少91.9％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
c)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的多肽具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性的多肽；
d)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的多肽的变体，其中所述变体在一个或多个位置处包含置换、缺失或插入，其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少95.5％、至少96％、至少96.5％、至少97％、至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％)但是小于100％的序列同一性；
e)能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的(a)-(d)的多肽的片段；
ii)编码根据(i)的一种或多种多肽的多核苷酸；
iii)能够表达一种或多种编码根据(i)的一种或多种多肽的多核苷酸的核酸构建体；
iv)能够表达一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸的表达载体；
v)重组宿主细胞(如分离的重组宿主细胞)，其包含以下的一种或多种：根据(i)的所述一种或多种多肽；一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸；一种或多种能够表达一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸的核酸构建体和/或表达载体；
vi)根据前述权利要求中任一项所述的组合物或试剂盒；
b’)(如向所述受试者或动物)施用如(a’)中所定义的所述治疗有效量。
13.根据前述权利要求中任一项所述的能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的多肽，其中所述多肽为以下的一种或多种：
a)与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的多肽具有至少94.1％(如至少94.2％、至少94.3％、至少94.4％、至少94.5％、至少94.6％、至少94.7％、至少94.8％、至少94.9％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
b)与SEQ ID NO:4所示的多肽具有至少91.1％(如至少91.2％、至少91.3％、至少91.4％、至少91.5％、至少91.6％、至少91.7％、至少91.8％、至少91.9％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
c)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的多肽具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性的多肽；
d)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的多肽的变体，其中所述变体在一个或多个位置处包含置换、缺失或插入，其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少95.5％、至少96％、至少96.5％、至少97％、至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％)但是小于100％的序列同一性；
e)能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的(a)-(d)的多肽的片段；
或在C8原子处修饰的化合物或中间体，其中所述化合物或中间体选自：8-氨基-DON、8-氨基-3-酮-DON、8-氨基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-镰刀菌烯酮-X和8-氨基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇；或
编码所述一种或多种多肽的多核苷酸、能够表达一种或多种编码一种或多种多肽的多核苷酸的核酸构建体、能够表达一种或多种编码一种或多种多肽的多核苷酸的表达载体；或
重组宿主细胞、转基因植物、转基因种子或转基因花粉粒，其包含以下的一种或多种：所述一种或多种多肽、一种或多种编码所述一种或多种多肽的多核苷酸、一种或多种能够表达一种或多种编码所述一种或多种多肽的多核苷酸的核酸构建体和/或表达载体；或
食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元或其混合物、组合物或试剂盒；
其用在治疗、预防中和/或作为药物(如用于兽医用途)。
14.根据前述权利要求中任一项所述的能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的多肽，其中所述多肽为以下的一种或多种：
a)与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的多肽具有至少94.1％(如至少94.2％、至少94.3％、至少94.4％、至少94.5％、至少94.6％、至少94.7％、至少94.8％、至少94.9％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
b)与SEQ ID NO:4所示的多肽具有至少91.1％(如至少91.2％、至少91.3％、至少91.4％、至少91.5％、至少91.6％、至少91.7％、至少91.8％、至少91.9％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
c)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的多肽具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性的多肽；
d)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的多肽的变体，其中所述变体在一个或多个位置处包含置换、缺失或插入，其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少95.5％、至少96％、至少96.5％、至少97％、至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％)但是小于100％的序列同一性；
e)能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的(a)-(d)的多肽的片段；
或在C8原子处修饰的化合物或中间体，其中所述化合物或中间体选自：8-氨基-DON、8-氨基-3-酮-DON、8-氨基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-镰刀菌烯酮-X和8-氨基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇；或
编码所述一种或多种多肽的多核苷酸、能够表达一种或多种编码所述一种或多种多肽的多核苷酸的核酸构建体、能够表达一种或多种编码所述一种或多种多肽的多核苷酸的表达载体；或
重组宿主细胞、转基因植物、转基因种子或转基因花粉粒，其包含以下的一种或多种：所述一种或多种多肽、一种或多种编码所述一种或多种多肽的多核苷酸、一种或多种能够表达一种或多种编码所述一种或多种多肽的多核苷酸的核酸构建体和/或表达载体；或
食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元或其混合物、组合物或试剂盒，
其用在以下方法的一种或多种中：
i)用于修饰B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的C8原子的方法；
ii)用于使在C8原子处具有酮基部分(C＝O)的B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物解毒的方法；
iii)用于生物转化在C8原子处具有酮基部分(C＝O)的B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的方法，优选地所述生物转化为酶促的；
iv)用于治疗、缓解、预防和/或诊断B型单端孢霉烯霉菌毒素中毒、优选DON霉菌毒素中毒的方法；
v)用于监测霉菌毒素中毒发展和/或评估B型单端孢霉烯霉菌毒素中毒预防和/或治疗、优选DON霉菌毒素中毒预防和/或治疗的疗效的方法；
vi)用于筛选具有B型单端孢霉烯霉菌毒素中毒解毒活性、优选DON解毒活性的候选化合物的方法；
vii)用于检测和/或评估B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的水平的方法；
viii)用于降低B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的毒性的方法；
ix)用于改变、优选降低B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的水平的方法；
x)生产以下的一种或多种：食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元；药物、兽医、诊断、解毒、监测和/或筛选组合物或试剂盒；
xi)根据前述权利要求中任一项所述的方法；
xii)根据(i)-(xi)所述的方法的任意组合；
xiii)(i)-(xii)的任一项的方法，其中所述方法为体外、离体或体内方法。
15.根据前述权利要求中任一项所述的以下的一种或多种：
i’)能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的多肽，其中所述多肽为以下的一种或多种：
a)与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的多肽具有至少94.1％(如至少94.2％、至少94.3％、至少94.4％、至少94.5％、至少94.6％、至少94.7％、至少94.8％、至少94.9％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
b)与SEQ ID NO:4所示的多肽具有至少91.1％(如至少91.2％、至少91.3％、至少91.4％、至少91.5％、至少91.6％、至少91.7％、至少91.8％、至少91.9％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽；
c)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的多肽具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性的多肽；
d)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的多肽的变体，其中所述变体在一个或多个位置处包含置换、缺失或插入，其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少70％(如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少95.5％、至少96％、至少96.5％、至少97％、至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％)但是小于100％的序列同一性；
e)能够修饰B型单端孢霉烯、优选DON或DON衍生物的C8原子的(a)-(d)的多肽的片段；
ii’)在C8原子处修饰的化合物或中间体，其中所述化合物或中间体选自：8-氨基-DON、8-氨基-3-酮-DON、8-氨基-3-epi脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-雪腐镰刀菌烯醇、8-氨基-镰刀菌烯酮-X和8-氨基-3-氨基脱氧雪腐镰刀菌烯醇；
iii’)编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸；
iv’)能够表达一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸的核酸构建体；
v’)能够表达一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸的表达载体；
vi’)重组宿主细胞、转基因植物、转基因种子或转基因花粉粒，其包含以下的一种或多种：根据(i)的所述一种或多种多肽、一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸、一种或多种能够表达一种或多种编码根据(i)的所述一种或多种多肽的多核苷酸的核酸构建体和/或表达载体；
vii’)食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元或其混合物、组合物或试剂盒；
用于以下的一种或多种/在以下的一种或多种中的用途：
i)用于修饰B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的C8原子；
ii)用于使B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物解毒；
iii)用于生物转化在C8原子处具有酮基部分(C＝O)的B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物，优选地所述生物转化为酶促的；
iv)用于治疗、缓解、预防和/或诊断B型单端孢霉烯霉菌毒素中毒、优选DON霉菌毒素中毒；
v)用于监测霉菌毒素中毒发展和/或评估B型单端孢霉烯霉菌毒素中毒预防和/或治疗、优选DON霉菌毒素中毒预防和/或治疗的疗效；
vi)用于筛选具有抗-霉菌毒素中毒活性的候选化合物；
vii)用于检测和/或评估B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的水平；
viii)用于抑制B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的毒性；
ix)用于改变、优选降低B型单端孢霉烯、优选DON和/或DON衍生物的水平；
x)用于生产以下的一种或多种：食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(如食物-、草料-或饲料添加剂)、中间添加剂(如食物-、草料-或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元；和/或药物-、诊断-、解毒-、监测-和/或筛选组合物或试剂盒；
xi)在根据前述权利要求中任一项所述的方法中；
xii)(i)-(xi)的任意组合；
xiii)根据(i)-(xii)中任一项所述的用途，其中所述用途为体外、离体或体内用途。
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