CN114317397A - 一种纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法 - Google Patents
一种纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114317397A CN114317397A CN202111456708.4A CN202111456708A CN114317397A CN 114317397 A CN114317397 A CN 114317397A CN 202111456708 A CN202111456708 A CN 202111456708A CN 114317397 A CN114317397 A CN 114317397A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fixed bed
- screen plate
- reaction tank
- tank
- paper sheet
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 230000003321 amplification Effects 0.000 title claims abstract description 34
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 title claims description 7
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims abstract description 11
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims abstract description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 57
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 55
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 25
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 25
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims description 21
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 13
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 11
- 238000007599 discharging Methods 0.000 claims description 11
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 10
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 10
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 claims description 9
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims description 9
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 7
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 6
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 6
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 claims description 6
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 6
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 claims description 3
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000017166 Bambusa arundinacea Nutrition 0.000 description 1
- 235000017491 Bambusa tulda Nutrition 0.000 description 1
- 241001330002 Bambuseae Species 0.000 description 1
- 235000015334 Phyllostachys viridis Nutrition 0.000 description 1
- 239000011425 bamboo Substances 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
本发明公开了一种纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法，是基于纸片载体固定床反应器实现的细胞传代放大方法；所述纸片载体固定床反应器包含反应罐及设置在反应罐内的纸片载体固定床，所述纸片载体固定床包含一个环形上网板、一个可向下折叠式环形下网板、一个中间筒及两个固定床下网板操作杆，环形上网板及可向下折叠式环形下网板分设在中间筒的上下部，两个固定床下网板操作杆分设在中间筒的左右侧，用于控制纸片载体固定床的可向下折叠式环形下网板向下开启，使装载在纸片载体固定床中的纸片载体落入到反应罐底进行细胞在线消化，从而实现细胞传代罐传罐放大培养。本发明优点是：工艺简单可控，耗时短，效率高，污染风险低，细胞质量可控。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，具体的说是涉及一种纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法。
背景技术
随着生物技术的不断发展,大规模动物细胞生物反应器培养技术正逐步取代玻璃瓶静置培养和旋转培养技术,因为它能及时地给所培养对象提供最佳的生存环境，从而最高效率的提高产品的产量和质量，应该说这是动物细胞培养史上的一次质的飞跃,也是生物制药技术的重大突破,它不仅简化了工艺,更重要的是它可以生产出高质量的产品。但是纸片固定床培养生物反应器之间细胞放大培养无法用现有的生物反应器实现，只能用转瓶或细胞工厂培养，然后消化收集上反应器，不仅工作量大，还容易污染，且细胞质量还不可控。
发明内容
本发明的目的在于提供一种工艺简单可控、耗时短、效率高、污染风险小、安全高效的纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法，用以解决背景技术中存在的问题。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
一种纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法，是基于纸片载体固定床反应器实现的细胞传代放大方法；所述纸片载体固定床反应器包含反应罐及设置在所述反应罐内的纸片载体固定床，所述纸片载体固定床包含一个环形上网板、一个可向下折叠式环形下网板、一个中间筒及两个固定床下网板操作杆，所述环形上网板及可向下折叠式环形下网板分设在所述中间筒的上、下部，所述的两个固定床下网板操作杆分设在所述中间筒的左、右侧，并均与所述环形上网板及可向下折叠式环形下网板呈可转动式卡接配合；
其中，可向下折叠式环形下网板由两个可向下开启的半环形下网板通过两个固定合页拼接而成，且每个固定合页均与中间筒下部固定连接，每个可向下开启的半环形下网板均与一个固定床下网板操作杆的下端呈可转动式卡接配合，每个固定床下网板操作杆的上端均与环形上网板呈可转动式卡接配合。
进一步，在所述的两个可向下开启的半环形下网板相互远离的一侧上均还开设有至少一个用于与固定床下网板操作杆呈可转动式卡接配合的下网板卡口；
在所述的环形上网板上还开设有至少两个用于与固定床下网板操作杆呈可转动式卡接配合的上网板卡口；
每个所述固定床下网板操作杆上端均对应穿过环形上网板上的一个上网板卡口并延伸至反应罐外部，下端均对应穿过一个与之相对应半环形下网板上的下网板卡口并延伸至半环形下网板下部。
进一步，每个所述固定床下网板操作杆包含一个转动手柄、一个转动杆及一个转动勾,所述转动手柄设置在所述转动杆上端，所述转动勾设置在所述转动杆下端，用于与半环形下网板上的下网板卡口相卡接配合；
当每个固定床下网板操作杆的转动勾转动到与相对应半环形下网板上的下网板卡口垂直时，每个固定床下网板操作杆的转动勾会同与之相对应的半环形下网板的下网板卡口相卡紧；
当每个固定床下网板操作杆的转动勾转动到与相对应半环形下网板上的下网板卡口平行时，每个固定床下网板操作杆的转动勾能在与之相对应的半环形下网板的下网板卡口中进行上下自由穿梭。
进一步，在所述反应罐上还设置有DO溶氧电极、PH电极、温度探头、深层通气管、进液管、出液管、加碱管、取样阀、罐底阀、CIP清洗球、磁力搅拌器、呼吸器及在线细胞计数器；
所述DO溶氧电极、PH电极、温度探头及取样阀均设置反应罐的罐体下部；
所述进液管、出液管及加碱管均设置反应罐的罐体上部；
所述罐底阀设置在反应罐的罐体底部；
所述深层通气管一端伸出反应罐的罐体上部外壁，另一端伸入到应罐的罐体内、并穿过纸片载体固定床且延伸至反应罐的罐体内底壁上方与一个底部通气盘相连通；
所述CIP清洗球、磁力搅拌器、呼吸器及在线细胞计数器均设置在反应罐的罐盖上，且一端均穿过反应罐的罐盖并延伸至反应罐的罐体内，另一端均露设在反应罐的罐盖外部；
在所述纸片载体固定床内填充有纸片载体，所述纸片载体用于为细胞生长提供贴壁依俯支撑；
所述DO溶氧电极、PH电极、温度探头、取样阀、罐底阀、磁力搅拌器、呼吸器及在线细胞计数器均与设置在反应罐旁的纸片载体固定床反应器控制器电连接。
进一步，所述纸片载体固定床反应器还包含有罐盖提升装置及罐体支架，所述罐盖提升装置用于提升纸片载体固定床反应器反应罐的罐盖，进而实现反应罐的罐盖与罐体的开合，所述罐体支架用于支承纸片载体固定床反应器反应罐的罐体。
进一步，所述纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法通过纸片载体固定床反应器实现的细胞传代放大方法具体包含如下步骤：
S1、向纸片载体固定床反应器的反应罐内加入PBS缓冲液到指定位置，并保压30分钟；
S2、当纸片载体固定床反应器的反应罐在保压30分钟不掉压后，打开纸片载体固定床反应器自带的灭菌程序，进行灭菌操作，待灭菌完成后，将纸片载体固定床反应器自然降温至常温备用；
S3、打开纸片载体固定床反应器的罐底阀，将反应罐内的PBS缓冲液排出，并通过进液管向反应罐中加入细胞生长液，与此同时，在纸片载体固定床反应器控制器中设置好相应的参数进行预培养；
S4、待预培养合格后，先将反应罐内进行预培养的细胞生长液通过罐底阀排出，然后通过进液管向反应罐中加入新的细胞生长液和细胞悬液，接着启动磁力搅拌器工作，通过磁力搅拌器将新加入的细胞生长液和细胞悬液混匀及细胞接种，与此同时，启动在线细胞计数器工作和在纸片载体固定床反应器控制器中设置好相应的参数进行细胞正式培养；
S5、当在线细胞计数器计量到反应罐内细胞数达到工艺要求时，先将反应罐内温度降至常温并排掉细胞生长液，然后再向反应罐内底部加入消化液，接着再旋转两个固定床下网板操作杆使填充在纸片载体固定床内的纸片载体落入到反应罐罐底消化液中进行细胞消化处理；
S6、待消化完成后，先通过罐底阀将反应罐罐底的消化液排出，然后通过进液管向反应罐中加入新的细胞生长液，接着再启动磁力搅拌器工作，通过磁力搅拌器搅拌落入到反应罐罐底的纸片载体及液体，使依附在纸片载体上的细胞从纸片载体上脱离，最后将从纸片载体上脱离的细胞收集到下一级生物反应器中进行传代放大培养。
进一步，在步骤S3中，在进行细胞正式培养过程中，通过DO溶氧电极实时监测反应罐内液体的溶氧量，通过PH电极实时监测反应罐内液体的PH值，通过温度探头实时监测反应罐内液体的温度；
当DO溶氧电极监测到反应罐内液体的溶氧量偏低时，通过深层通气管向反应罐内通入氧气；
当PH电极监测到反应罐内液体PH值偏低时，通过加碱管向反应罐内加入碱料；
当PH电极监测到反应罐内液体PH值偏高时，通过深层通气管向反应罐内通入二氧化碳。
与现有技术相比，本发明的优点是：工艺简单可控，耗时短，效率高，污染风险低，细胞质量可控。
附图说明
图1为实现本发明纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法所采用的纸片载体固定床反应器的主视图；
图2为实现本发明纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法所采用的纸片载体固定床反应器未装载有纸片载体时的内部结构示意图；
图3为实现本发明纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法所采用的纸片载体固定床反应器装载有纸片载体时的使用状态图一；
图4为实现本发明纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法所采用的纸片载体固定床反应器装载有纸片载体时的使用状态图二；
图5为图3中纸片载体固定床的结构示意图；
图6为图4中纸片载体固定床的结构示意图；
图7为图2中纸片载体固定床与反应罐连接的局部放大图；
图8为图5中纸片载体固定床的环形上网板俯视图；
图9为图5中纸片载体固定床的可向下折叠式环形下网板俯视图；
附图标记说明：1、纸片载体固定床反应器；1.1、反应罐；1.2、纸片载体固定床；1.2.1、环形上网板；1.2.1a、上网板卡口；1.2.2、可向下折叠式环形下网板；1.2.2a、半环形下网板；1.2.2b、固定合页；1.2.2c、下网板卡口；1.2.3、中间筒；1.2.4、固定床下网板操作杆；1.2.5、卡盘；1.3、DO溶氧电极；1.4、PH电极；1.5、温度探头；1.6、深层通气管；1.7、进液管；1.8、出液管；1.9、加碱管；1.10、取样阀；1.11、罐底阀；1.12、底部通气盘；1.13、CIP清洗球；1.14、磁力搅拌器；1.15、呼吸器；1.16、在线细胞计数器；1.17、纸片载体固定床反应器控制器；1.18、罐盖提升装置；1.19、罐体支架；2、纸片载体。
具体实施方式
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合附图和具体实施方式，进一步阐述本发明是如何实施的。
本发明提供的一种纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法，是基于纸片载体固定床反应器1实现的细胞传代放大方法；参阅图1至图4所示，该纸片载体固定床反应器1包含反应罐1.1及设置在反应罐1.1内的纸片载体固定床1.2，纸片载体固定床1.2包含一个环形上网板1.2.1、一个可向下折叠式环形下网板1.2.2、一个中间筒1.2.3及两个固定床下网板操作杆1.2.4，环形上网板1.2.1及可向下折叠式环形下网板1.2.2分设在中间筒1.2.3的上、下部，两个固定床下网板操作杆1.2.4分设在中间筒1.2.3的左、右侧，并均与环形上网板1.2.1及可向下折叠式环形下网板1.2.2呈可转动式卡接配合；
其中，参阅图5和图6所示，可向下折叠式环形下网板1.2.2由两个可向下开启的半环形下网板1.2.2a通过两个固定合页1.2.2b拼接而成，且每个固定合页1.2.2b均与中间筒1.2.3下部固定连接，每个可向下开启的半环形下网板1.2.2a均与一个固定床下网板操作杆1.2.4的下端呈可转动式卡接配合，每个固定床下网板操作杆1.2.4的上端均与环形上网板1.2.1呈可转动式卡接配合。
具体的说，本发明细胞传代罐传罐放大方法采用的纸片载体固定床反应器1，参阅图8所示，在两个可向下开启的半环形下网板1.2.2a相互远离的一侧上均还开设有至少一个用于与固定床下网板操作杆1.2.4呈可转动式卡接配合的下网板卡口1.2.2c；参阅图9所示，在环形上网板1.21上还开设有至少两个用于与固定床下网板操作杆1.2.4呈可转动式卡接配合的上网板卡口1.2.1a；装配时，参阅图7所示，每个固定床下网板操作杆1.2.4上端均对应穿过环形上网板1.2.1上的一个上网板卡口1.2.1a并延伸至反应罐1.1外部，下端均对应穿过一个与之相对应半环形下网板1.2.2a上的下网板卡口1.2.3c并延伸至半环形下网板1.2.2a下部，且每个固定床下网板操作杆1.2.4均还与设置在反应罐1.1内壁上的卡盘1.2.5相卡接配合。
具体的说，本发明细胞传代罐传罐放大方法采用的纸片载体固定床反应器1，参阅图7所示，每个固定床下网板操作杆1.2.4均包含一个转动手柄1.2.4a、一个转动杆1.2.4b及一个转动勾1.2.4c,其中，转动手柄1.2.4a设置在转动杆1.2.4b上端，转动勾1.2.4c设置在转动杆1.2.4b下端，用于与半环形下网板1.2.2a上的下网板卡口1.2.2c相卡接配合。
使用时，当每个固定床下网板操作杆1.2.4的转动勾1.2.4c转动到与相对应半环形下网板1.2.2a上的下网板卡口1.2.2c垂直时，每个固定床下网板操作杆1.2.4的转动勾1.2.4c会同与之相对应的半环形下网板1.2.2a的下网板卡口1.2.2c相卡紧，此时的半环形下网板1.2.2a会被固定床下网板操作杆1.2.4托着，不至于受重力影响而向下开启，参阅图5所示。
当每个固定床下网板操作杆1.2.4的转动勾1.2.4c转动到与相对应半环形下网板1.2.2a上的下网板卡口1.2.2c平行时，每个固定床下网板操作杆1.2.4的转动勾1.2.4c能在与之相对应的半环形下网板1.2.2a的下网板卡口1.2.2c中进行上下自由穿梭，此时的半环形下网板1.2.2a会失去固定床下网板操作杆1.2.4托举作用，并在自重下向下开启，参阅图6所示。
具体的说，本发明细胞传代罐传罐放大方法采用的纸片载体固定床反应器1，参阅图1至图4所示，在反应罐1.1上还设置有DO溶氧电极1.3、PH电极1.4、温度探头1.5、深层通气管1.6、进液管1.7、出液管1.8、加碱管1.9、取样阀1.10、罐底阀1.11、CIP清洗球1.13、磁力搅拌器1.14、呼吸器1.15及在线细胞计数器1.16；
其中，DO溶氧电极1.3、PH电极1.4、温度探头1.5及取样阀1.10均设置反应罐1.1的罐体下部；进液管1.7、出液管1.8及加碱管1.9均设置反应罐1.1的罐体上部；罐底阀1.11设置在反应罐1.1的罐体底部；深层通气管1.6一端伸出反应罐1.1的罐体上部外壁，另一端伸入到应罐1.1的罐体内、并穿过纸片载体固定床1.2且延伸至反应罐1.1的罐体内底壁上方与一个底部通气盘1.12相连通；CIP清洗球1.13、磁力搅拌器1.14、呼吸器1.15及在线细胞计数器1.16均设置在反应罐1.1的罐盖上，且一端均穿过反应罐1.1的罐盖并延伸至反应罐1.1的罐体内，另一端均露设在反应罐1.1的罐盖外部；在纸片载体固定床1.2内填充有纸片载体2，纸片载体2用于为细胞生长提供贴壁依俯支撑；DO溶氧电极1.3、PH电极1.4、温度探头1.5、取样阀1.10、罐底阀1.11、磁力搅拌器1.14、呼吸器1.15及在线细胞计数器1.16均与设置在反应罐1.1旁的纸片载体固定床反应器控制器1.17电连接。
具体的说，本发明细胞传代罐传罐放大方法采用的纸片载体固定床反应器1还包含有罐盖提升装置1.18及罐体支架1.19，其中，罐盖提升装置1.18用于提升纸片载体固定床反应器1反应罐1.1的罐盖，进而实现反应罐1.1的罐盖与罐体的开合，罐体支架1.19用于支承纸片载体固定床反应器1反应罐1.1的罐体。其中，罐盖提升装置1.18为现有技术，例如：可以由一个提升气缸、提升臂及支承架组成；该罐体支架1.19同样为现有技术，例如：由若干方管拼接而成。
具体的说，纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法通过纸片载体固定床反应器1实现的细胞传代放大方法具体包含有如下步骤：
S1、向纸片载体固定床反应器1的反应罐1.1内加入PBS缓冲液到指定位置，并保压30分钟；
S2、当纸片载体固定床反应器1的反应罐1.1在保压30分钟不掉压后，打开纸片载体固定床反应器1自带的灭菌程序，进行灭菌操作，待灭菌完成后，将纸片载体固定床反应器1自然降温至常温备用；
S3、打开纸片载体固定床反应器1的罐底阀1.11，将反应罐1.1内的PBS缓冲液排出，并通过进液管1.7向反应罐1.1中加入细胞生长液，与此同时，在纸片载体固定床反应器控制器1.17中设置好相应的参数进行预培养；
S4、待预培养合格后，先将反应罐1.1内进行预培养的细胞生长液通过罐底阀1.11排出，然后通过进液管1.7向反应罐1.1中加入新的细胞生长液和细胞悬液，接着启动磁力搅拌器1.14工作，通过磁力搅拌器1.14将新加入的细胞生长液和细胞悬液进行混匀及细胞接种，与此同时，启动在线细胞计数器1.16工作和在纸片载体固定床反应器控制器1.17中设置好相应的参数进行细胞正式培养；
S5、当在线细胞计数器1.16计量到反应罐1.1内细胞数达到工艺要求时，先将反应罐1.1内温度降至常温并排掉细胞生长液，然后再向反应罐1.1内底部加入消化液，接着再旋转两个固定床下网板操作杆1.2.4使填充在纸片载体固定床1.2内的纸片载体2落入到反应罐1.1罐底消化液中进行细胞消化处理；
S6、待消化完成后，先通过罐底阀1.11将反应罐1.1罐底的消化液排出，然后通过进液管1.7向反应罐1.1中加入新的细胞生长液，接着再启动磁力搅拌器1.14工作，通过磁力搅拌器1.14搅拌落入到反应罐1.1罐底的纸片载体2及液体，使依附在纸片载体2上的细胞从纸片载体2上脱离，最后将从纸片载体2上脱离的细胞收集到下一级生物反应器中进行传代放大培养。
在步骤S3中，在进行细胞正式培养过程中，通过DO溶氧电极1.3实时监测反应罐1.1内液体的溶氧量，通过PH电极1.4实时监测反应罐1.1内液体的PH值，通过温度探头1.5实时监测反应罐1.1内液体的温度。
工作时，当DO溶氧电极1.3监测到反应罐1.1内液体的溶氧量偏低时，通过深层通气管1.6向反应罐1.1内通入氧气；当PH电极1.4监测到反应罐1.1内液体PH值偏低时，通过加碱管1.9向反应罐1.1内加入碱料(例如：NaOH)；当PH电极1.4监测到反应罐1.1内液体PH值偏高时，通过深层通气管1.6向反应罐1.1内通入二氧化碳。
最后说明，以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (7)
1.一种纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法，其特征在于，所述细胞传代罐传罐放大方法是基于纸片载体固定床反应器(1)实现的细胞传代放大方法；所述纸片载体固定床反应器(1)包含反应罐(1.1)及设置在所述反应罐(1.1)内的纸片载体固定床(1.2)，所述纸片载体固定床(1.2)包含一个环形上网板(1.2.1)、一个可向下折叠式环形下网板(1.2.2)、一个中间筒(1.2.3)及两个固定床下网板操作杆(1.2.4)，所述环形上网板(1.2.1)及可向下折叠式环形下网板(1.2.2)分设在所述中间筒(1.2.3)的上、下部，所述的两个固定床下网板操作杆(1.2.4)分设在所述中间筒(1.2.3)的左、右侧，并均与所述环形上网板(1.2.1)及可向下折叠式环形下网板(1.2.2)呈可转动式卡接配合；
其中，可向下折叠式环形下网板(1.2.2)由两个可向下开启的半环形下网板(1.2.2a)通过两个固定合页(1.2.2b)拼接而成，且每个固定合页(1.2.2b)均与中间筒(1.2.3)下部固定连接，每个可向下开启的半环形下网板(1.2.2a)均与一个固定床下网板操作杆(1.2.4)的下端呈可转动式卡接配合，每个固定床下网板操作杆(1.2.4)的上端均与环形上网板(1.2.1)呈可转动式卡接配合。
2.根据权利要求1所述的纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法，其特征在于，在所述的两个可向下开启的半环形下网板(1.2.2a)相互远离的一侧上均还开设有至少一个用于与固定床下网板操作杆(1.2.4)呈可转动式卡接配合的下网板卡口(1.2.2c)；
在所述的环形上网板(1.2.1)上还开设有至少两个用于与固定床下网板操作杆(1.2.4)呈可转动式卡接配合的上网板卡口(1.2.1a)；
每个所述固定床下网板操作杆(1.2.4)上端均对应穿过环形上网板(1.2.1)上的一个上网板卡口(1.2.1a)并延伸至反应罐(1.1)外部，下端均对应穿过一个与之相对应半环形下网板(1.2.2a)上的下网板卡口(1.2.3c)并延伸至半环形下网板(1.2.2a)下部。
3.根据权利要求2所述的纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法，其特征在于，每个所述固定床下网板操作杆(1.2.4)包含一个转动手柄(1.2.4a)、一个转动杆(1.2.4b)及一个转动勾(1.2.4c),所述转动手柄(1.2.4a)设置在所述转动杆(1.2.4b)上端，所述转动勾(1.2.4c)设置在所述转动杆(1.2.4b)下端，用于与半环形下网板(1.2.2a)上的下网板卡口(1.2.2c)相卡接配合；
当每个固定床下网板操作杆(1.2.4)的转动勾(1.2.4c)转动到与相对应半环形下网板(1.2.2a)上的下网板卡口(1.2.2c)垂直时，每个固定床下网板操作杆(1.2.4)的转动勾(1.2.4c)会同与之相对应的半环形下网板(1.2.2a)的下网板卡口(1.2.2c)相卡紧；
当每个固定床下网板操作杆(1.2.4)的转动勾(1.2.4c)转动到与相对应半环形下网板(1.2.2a)上的下网板卡口(1.2.2c)平行时，每个固定床下网板操作杆(1.2.4)的转动勾(1.2.4c)能在与之相对应的半环形下网板(1.2.2a)的下网板卡口(1.2.2c)中进行自由穿梭。
4.根据权利要求1所述的纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法，其特征在于，在所述反应罐(1.1)上还设置有DO溶氧电极(1.3)、PH电极(1.4)、温度探头(1.5)、深层通气管(1.6)、进液管(1.7)、出液管(1.8)、加碱管(1.9)、取样阀(1.10)、罐底阀(1.11)、CIP清洗球(1.13)、磁力搅拌器(1.14)、呼吸器(1.15)及在线细胞计数器(1.16)；
所述DO溶氧电极(1.3)、PH电极(1.4)、温度探头(1.5)及取样阀(1.10)均设置反应罐(1.1)的罐体下部；
所述进液管(1.7)、出液管(1.8)及加碱管(1.9)均设置反应罐(1.1)的罐体上部；
所述罐底阀(1.11)设置在反应罐(1.1)的罐体底部；
所述深层通气管(1.6)一端伸出反应罐(1.1)的罐体上部外壁，另一端伸入到应罐(1.1)的罐体内、并穿过纸片载体固定床(1.2)且延伸至反应罐(1.1)的罐体内底壁上方与一个底部通气盘(1.12)相连通；
所述CIP清洗球(1.13)、磁力搅拌器(1.14)、呼吸器(1.15)及在线细胞计数器(1.16)均设置在反应罐(1.1)的罐盖上，且一端均穿过反应罐(1.1)的罐盖并延伸至反应罐(1.1)的罐体内，另一端均露设在反应罐(1.1)的罐盖外部；
在所述纸片载体固定床(1.2)内填充有纸片载体(2)，所述纸片载体(2)用于为细胞生长提供贴壁依俯支撑；
所述DO溶氧电极(1.3)、PH电极(1.4)、温度探头(1.5)、取样阀(1.10)、罐底阀(1.11)、磁力搅拌器(1.14)、呼吸器(1.15)及在线细胞计数器(1.16)均与设置在反应罐(1.1)旁的纸片载体固定床反应器控制器(1.17)电连接。
5.根据权利要求4所述的纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法，其特征在于，所述纸片载体固定床反应器(1)还包含有罐盖提升装置(1.18)及罐体支架(1.19)，所述罐盖提升装置(1.18)用于提升纸片载体固定床反应器(1)反应罐(1.1)的罐盖，进而实现反应罐(1.1)的罐盖与罐体的开合，所述罐体支架(1.19)用于支承纸片载体固定床反应器(1)反应罐(1.1)的罐体。
6.根据权利要求4所述的纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法，其特征在于，所述纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法通过纸片载体固定床反应器(1)实现的细胞传代放大方法具体包含有如下步骤：
S1、向纸片载体固定床反应器(1)的反应罐(1.1)内加入PBS缓冲液到指定位置，并保压30分钟；
S2、当纸片载体固定床反应器(1)的反应罐(1.1)在保压30分钟不掉压后，打开纸片载体固定床反应器(1)自带的灭菌程序，进行灭菌操作，待灭菌完成后，将纸片载体固定床反应器(1)自然降温至常温备用；
S3、打开纸片载体固定床反应器(1)的罐底阀(1.11)，将反应罐(1.1)内的PBS缓冲液排出，并通过进液管(1.7)向反应罐(1.1)中加入细胞生长液，与此同时，在纸片载体固定床反应器控制器(1.17)中设置好相应的参数进行预培养；
S4、待预培养合格后，先将反应罐(1.1)内进行预培养的细胞生长液通过罐底阀(1.11)排出，然后通过进液管(1.7)向反应罐(1.1)中加入新的细胞生长液和细胞悬液，接着启动磁力搅拌器(1.14)工作，通过磁力搅拌器(1.14)将新加入的细胞生长液和细胞悬液混匀及细胞接种，与此同时，启动在线细胞计数器(1.16)工作和在纸片载体固定床反应器控制器(1.17)中设置好相应的参数进行细胞正式培养；
S5、当在线细胞计数器(1.16)计量到反应罐(1.1)内细胞数达到工艺要求时，先将反应罐(1.1)内温度降至常温并排掉细胞生长液，然后再向反应罐(1.1)内底部加入消化液，接着再旋转两个固定床下网板操作杆(1.2.4)使填充在纸片载体固定床(1.2)内的纸片载体(2)落入到反应罐(1.1)罐底消化液中进行细胞消化处理；
S6、待消化完成后，先通过罐底阀(1.11)将反应罐(1.1)罐底的消化液排出，然后通过进液管(1.7)向反应罐(1.1)中加入新的细胞生长液，接着再启动磁力搅拌器(1.14)工作，通过磁力搅拌器(1.14)搅拌落入到反应罐(1.1)罐底的纸片载体(2)及液体，使依附在纸片载体(2)上的细胞从纸片载体(2)上脱离，最后将从纸片载体(2)上脱离的细胞收集到下一级生物反应器中进行传代放大培养。
7.根据权利要求6所述的纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法，其特征在于，在步骤S3中，在进行细胞正式培养过程中，通过DO溶氧电极(1.3)实时监测反应罐(1.1)内液体的溶氧量，通过PH电极(1.4)实时监测反应罐(1.1)内液体的PH值，通过温度探头(1.5)实时监测反应罐(1.1)内液体的温度；
当DO溶氧电极(1.3)监测到反应罐(1.1)内液体的溶氧量偏低时，通过深层通气管(1.6)向反应罐(1.1)内通入氧气；
当PH电极(1.4)监测到反应罐(1.1)内液体PH值偏低时，通过加碱管(1.9)向反应罐(1.1)内加入碱料；
当PH电极(1.4)监测到反应罐(1.1)内液体PH值偏高时，通过深层通气管(1.6)向反应罐(1.1)内通入二氧化碳。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111456708.4A CN114317397A (zh) | 2021-12-02 | 2021-12-02 | 一种纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111456708.4A CN114317397A (zh) | 2021-12-02 | 2021-12-02 | 一种纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114317397A true CN114317397A (zh) | 2022-04-12 |
Family
ID=81048468
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111456708.4A Pending CN114317397A (zh) | 2021-12-02 | 2021-12-02 | 一种纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114317397A (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109182123A (zh) * | 2018-07-27 | 2019-01-11 | 安徽细胞之星生物科技有限公司 | 一种用于生物反应器的细胞培养床 |
| US20190211297A1 (en) * | 2016-09-27 | 2019-07-11 | Ni HUI | Large circulating fluidized bed cell bioreactor and method for culturing animal cells |
| WO2019214465A1 (zh) * | 2018-05-09 | 2019-11-14 | 武汉赛科成科技有限公司 | 一种填充片状载体的流化床细胞培养一次性膜装置 |
| WO2020181709A1 (zh) * | 2019-03-12 | 2020-09-17 | 华道(上海)生物医药有限公司 | 全封闭细胞培养系统 |
| CN112708562A (zh) * | 2021-01-11 | 2021-04-27 | 昆明柏特生物科技有限公司 | 一种固定床式生物反应器 |
| CN112980649A (zh) * | 2021-03-04 | 2021-06-18 | 江南大学 | 一种哺乳细胞贴壁培养的中空管束式固定床生物反应器 |
-
2021
- 2021-12-02 CN CN202111456708.4A patent/CN114317397A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20190211297A1 (en) * | 2016-09-27 | 2019-07-11 | Ni HUI | Large circulating fluidized bed cell bioreactor and method for culturing animal cells |
| WO2019214465A1 (zh) * | 2018-05-09 | 2019-11-14 | 武汉赛科成科技有限公司 | 一种填充片状载体的流化床细胞培养一次性膜装置 |
| CN109182123A (zh) * | 2018-07-27 | 2019-01-11 | 安徽细胞之星生物科技有限公司 | 一种用于生物反应器的细胞培养床 |
| WO2020181709A1 (zh) * | 2019-03-12 | 2020-09-17 | 华道(上海)生物医药有限公司 | 全封闭细胞培养系统 |
| CN112708562A (zh) * | 2021-01-11 | 2021-04-27 | 昆明柏特生物科技有限公司 | 一种固定床式生物反应器 |
| CN112980649A (zh) * | 2021-03-04 | 2021-06-18 | 江南大学 | 一种哺乳细胞贴壁培养的中空管束式固定床生物反应器 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106701563A (zh) | 全自动控制多功能固态发酵罐 | |
| CN106520552B (zh) | 一种细胞培养生物反应器 | |
| CN214193233U (zh) | 一种一体式自动化原代细胞分离提取装置 | |
| CN101130751A (zh) | 植物细胞搅拌式生物反应器连续灌注培养装置 | |
| CN206843495U (zh) | 酶生物反应器及智能酶反应工作站 | |
| CN114317397A (zh) | 一种纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法 | |
| CN108641909A (zh) | 一种适于兼养培养的微藻无菌培养装置及培养方法 | |
| CN217052262U (zh) | 一种纸片载体固定床培养在线消化细胞传代生物反应器 | |
| CN108977358A (zh) | 一种封闭式生物反应器及其细胞培养方法 | |
| CN206828515U (zh) | 一种微生物固定化发酵反应器 | |
| CN207062270U (zh) | 一种微生物培养用蓝光光照发酵罐 | |
| CN106834117B (zh) | 用于解除动物细胞贴附的酶反应器及智能酶反应工作站 | |
| WO2011006285A1 (zh) | 食用菌菌种的接种与菌丝培养方法及其装置 | |
| CN108424855A (zh) | 一种植物细胞、器官液体培养装置 | |
| CN114106954A (zh) | 一种适用于多种微生物混合发酵的装置 | |
| CN107475112A (zh) | 一种用于微载体与动物细胞分离的全自动消化设备 | |
| CN114107057A (zh) | 一种分离细胞外囊泡反应器 | |
| CN208857314U (zh) | 一种植物细胞、器官液体培养装置 | |
| CN110106138A (zh) | 一种进行篮式反应器内细胞消化的方法 | |
| CN110791431A (zh) | 一种在线超声剥离破碎细胞生物反应器及收获病毒的方法 | |
| CN206692629U (zh) | 酵母乳酸混合菌连续发酵罐 | |
| CN107603870B (zh) | 一种用于微载体细胞培养的消化过滤装置 | |
| CN214655007U (zh) | 一种细胞培养装置 | |
| CN211595675U (zh) | 一种在线超声剥离破碎细胞生物反应器 | |
| CN210340843U (zh) | 贴壁细胞微载体培养装置 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |