CN114315689A - 二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物、其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一类二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）及其药学上可接受的盐、其制备方法、药物组合物和在制备治疗和/或预防神经系统相关疾病药物中的用途，包括但不限于血管性痴呆、阿尔茨海默氏病、帕金森氏症、亨廷顿氏症、HIV相关痴呆症、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化症、神经性疼痛、青光眼、缺血性脑卒中、出血性脑卒中、以及脑外伤引起的神经损伤等疾病；

Description

二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物、其制备方法和用途

技术领域

本发明属药物化学领域，涉及一类二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）、其制备方法、药物组合物和在制备治疗和/或预防神经系统相关疾病药物中的用途，包括但不限于血管性痴呆、阿尔茨海默氏病、帕金森氏症、亨廷顿氏症、HIV相关痴呆症、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化症、神经性疼痛、青光眼、缺血性脑卒中、出血性脑卒中、以及脑外伤引起的神经损伤等疾病。

背景技术

神经退行性疾病是指由慢性进行性中枢神经组织退行性变性而产生的疾病总称，包括阿尔茨海默氏病（Alzheimer’s disease, AD）、帕金森氏病（Parkinson’s disease,PD）、亨廷顿氏病（Huntington disease, HD）、肌萎缩侧索硬化症（Amyotrophic lateralsclerosis, ALS）和多发性硬化症（Multiple sclerosis, MS）等，其发病机制与氧化应激、神经炎症及相应的损伤密切相关。氧化应激是由活性氧（Reactive oxygen species, ROS）自由基介导的，包括超氧阴离子、过氧化氢和羟基自由基等。在正常生理条件下，ROS生成水平与机体抗氧化能力处于动态平衡状态，当ROS的产生超过细胞抗氧化能力则会发生氧化应激（Oxidative stress），而大脑对氧化应激尤为敏感，从而诱发多种神经系统疾病。另有研究发现，血管性痴呆、HIV相关痴呆病、神经性疼痛、青光眼、缺血性脑卒中、出血性脑卒中以及脑外伤引起的神经损伤等也与机体的氧化应激和神经炎症相关。

血管性痴呆（Vascular Dementia, VD）是由各种类型的脑血管疾病（包括缺血性脑血管病、出血性脑血管疾病、急性和慢性缺氧性脑血管疾病等）所致的智能及认知功能障碍的临床综合征。血管性痴呆由于发病机制复杂，目前尚无能够阻滞疾病发展的药物，临床治疗以改善脑部血液循环和脑代谢，加强脑部营养为主。近年来的研究表明，在VD患者表现认知功能损伤的同时也经常伴有胆碱能系统的异常。VD患者海马区ChAT阳性神经元及纤维密度减低，脑内不同部位的ChAT活性下降，在VD患者脑脊液中的乙酰胆碱浓度明显低于正常水平，并且其浓度降低的程度与痴呆的严重程度呈正相关；而脑缺血可以导致脑内乙酰胆碱酯酶活性上升；同时也发现一些乙酰胆碱酯酶抑制剂可以保护缺血造成的神经元损伤，且可以促进脑缺血后神经损伤和脑功能的恢复。

阿尔茨海默症（老年痴呆症, AD）是一种以进行性认知障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病，其发病率呈逐年上升趋势，成为仅次于心血管病和癌症的高发性疾病，在欧美等发达国家已上升为死亡原因的第四位。随着全球人口老龄化进程的加快，其发病率呈明显上升趋势，据Alzheimer's Disease International组织最新公布的《World Alzheimer Report 2019》报告中指出，AD将成为未来几十年全球面临的最大健康挑战，估计2018年全球有超过5000万人患痴呆症，到2050年将会增加到1.52亿，其治疗护理费用总额在2018年已超过1万亿美元。由于AD临床表现为记忆能力、定向能力、思维和判断能力减退，以及日常生活能力降低，甚至出现异常精神行为症状等，使患者护理难度较大，给社会和家庭带来沉重负担。目前已批准用于治疗轻/中度AD的药物有乙酰胆碱酯酶（AChE）抑制剂，以及用于重度AD治疗的N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体拮抗剂。但临床使用表明，这些药物可通过提高患者体内乙酰胆碱水平或者抑制兴奋性氨基酸的兴奋毒性来缓解AD症状，但不能有效阻止或逆转病程，而且还会引起幻觉、意识混沌、头晕、头痛、恶心、肝脏毒性、食欲不振以及大便频繁等严重毒副作用，因而长期疗效不甚理想。因此，临床上迫切需要研发兼具AD症状改善和病程改变的新型AD治疗药物。

AD属多种因素引起的疾病，发病机理复杂，其发病机制至今还未完全阐明。但研究表明，患者脑内乙酰胆碱水平的下降、β-淀粉样蛋白的过度生成与沉积、脑血管内的血小板聚集、金属离子代谢紊乱、Ca²⁺平衡失调、tau-蛋白过度磷酸化导致的神经纤维缠结、谷氨酸受体活性过高、氧化应激产生大量活性氧（ROS）和自由基以及神经炎症反应等多种因素在AD的发病过程中扮演重要角色。针对上述发病因素，研究人员采用传统“一药一靶”药物设计策略，发现了大量对某一靶点具有高活性和高选择性的药物，如：胆碱酯酶抑制剂和N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂等。但这些药物存在作用靶点单一、临床使用毒副作用较多、对AD患者的长期疗效欠佳等问题。

近年来，随着对AD致病机理的不断阐明，发现AD的发生和发展具有多机制、多因素作用的特点，不同机制之间又相互关联相互影响，构成了AD发生和发展过程中复杂的网络调控系统。显然，研发可同时作用于AD病理过程中多个环节的治疗药物是目前的必然选择。基于上述结果，研究人员提出了“多靶点药物”策略来研发抗神经退行性疾病药物。所谓“多靶点药物”是指单一化学实体可作用于该类疾病网络中与治疗密切相关的多个靶点，对各靶点的作用可产生协同效应，使总效应大于各单效应之和，此类化合物也称为“Multifunctional”或“Multipotential”药物。多靶点药物与多药联合应用以及复方药物的主要区别在于：可减少服药量、提高治疗效果、避免药物之间的相互作用及由此带来的毒副作用，均一的药代动力学特性，便于使用等。因此，研究开发具有新型化学结构、新型作用机制，且具有多靶点作用、低毒副作用的抗神经退行性疾病治疗药物不仅符合社会老龄化进程的迫切需求，而且具有良好的市场前景。大量临床研究已证实，AChE抑制剂能有效缓解痴呆患者症状，短期治疗疗效肯定；因此，在设计多靶点抗痴呆药物时通常需保留化合物的AChE抑制活性（抑制该酶对改善痴呆患者症状至关重要），并在此基础上增加一个或多个具有药理协同作用的其它靶标或功能，以达到多靶点抗痴呆治疗作用。显然，设计并发现同时具有抑制乙酰胆碱酯酶、抑制β-淀粉样蛋白的过度生成与沉积、抗氧化应激以及抗神经炎症的多靶点抗痴呆药物仍是目前重要的研究方向。

发明内容

本发明目的在于公开一类二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）及其药学上可接受的盐。

本发明另一目的在于公开该类二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）及其药学上可接受的盐的制备方法。

本发明的又一目的在于公开包含该类二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）及其药学上可接受的盐的药物组合物。

本发明再一目的在于公开该类二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）及其药学上可接受的盐具有多靶点作用，可用于制备治疗和/或预防神经系统相关疾病药物中的用途，包括但不限于血管性痴呆、阿尔茨海默氏病、帕金森氏症、亨廷顿氏症、HIV相关痴呆症、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化症、神经性疼痛、青光眼、缺血性脑卒中、出血性脑卒中、以及脑外伤引起的神经损伤等疾病。

本发明所提供的二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）的化学结构通式为：

式中：m表示1-4；n表示1-5；R₁表示H、C₁~C₁₂烷基；R₂表示C₁~C₁₂烷基、苄基或取代苄基；NR₁R₂也表示四氢吡咯基、吗啉基、哌啶基、4-位被C₁~C₁₂烷基所取代的哌啶基、4-位被苄基或取代苄基所取代的哌啶基、哌嗪基、4-位被C₁~C₁₂烷基所取代的哌嗪基、4-位被羟乙基所取代的哌嗪基、4-位被苄基或取代苄基所取代的哌嗪基；R₃和R₄各自独立地表示H、OH、SH、C₁~C₁₂烷基、C₁~C₁₂烷氧基、CN、卤素、NR₅R₆或C₁~C₁₂烷硫基；R₅和R₆各自独立地表示H、C₁~C₁₂烷基；NR₅R₆也表示四氢吡咯基、吗啉基或哌啶基；R₃和R₄在其苯环上任意可能的位置；

也表示

或

；上述术语“卤素”是指F、Cl、Br、或I；“取代苄基”是指苯环上被1-4个选自下面的基团所取代的苄基：F、Cl、Br、I、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、NR₇R₈、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、羧基、羟基、氰基，R₇和R₈各自独立地表示H或C₁~C₁₂烷基，NR₇R₈也表示四氢吡咯基、吗啉基或哌啶基，这些取代基在苯环的任意可能位置。

本发明所提出的二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）可通过以下方法制备得到：

以相应邻苯二甲酰亚胺烷基硫醇类化合物（1）为起始原料，在溶剂中与2,2-二硫二吡啶（2）反应，得到邻苯二甲酰亚胺烷基二硫吡啶类化合物（3），然后再与胺烷基硫醇类化合物（4）反应，得相应的二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）；其反应式如下：

式中：R₁、R₂、R₃、R₄、m和n的定义与二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）的化学结构通式相同。

对于上述合成路线，其具体制备方法描述如下：

步骤A)：邻苯二甲酰亚胺烷基硫醇类化合物（1）在溶剂中与2,2-二硫二吡啶（2）反应，得到邻苯二甲酰亚胺烷基二硫吡啶类化合物（3）；其中，反应所用溶剂为：C_1-8脂肪醇、C_3-8脂肪酮、二氯甲烷、氯仿、N,N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醚、苯、甲苯、乙腈、1,4-二氧六环、乙二醇二甲醚或C_5-8烷烃，优选溶剂为甲醇、二氯甲烷、2-甲基四氢呋喃、乙酸乙酯、乙腈、甲苯、或1,4-二氧六环；邻苯二甲酰亚胺烷基硫醇类化合物（1）：2,2-二硫二吡啶（2）的摩尔投料比为1.0：1.0~10.0，优选摩尔投料比为1.0：1.0~5.0；反应温度为0~100℃，优选反应温度为20~80℃；反应时间为1~120小时，优选反应时间为2~72小时。

步骤B)：由步骤A)得到的邻苯二甲酰亚胺烷基二硫吡啶类化合物（3）在溶剂中与胺烷基硫醇类化合物（4）反应，得相应的二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）；其中，反应所用溶剂为：C_1-8脂肪醇、C_3-8脂肪酮、乙醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二氯甲烷、氯仿、1,4-二氧六环、苯、甲苯、乙腈或C_5-8烷烃，优选溶剂为：氯仿、二氯甲烷、丙酮、乙腈、四氢呋喃或甲苯；化合物（3）：化合物（4）的摩尔投料比为1.0：1.0~5.0，优选摩尔投料比为1.0：1.0~3.0；反应温度为0~100℃，优选反应温度为室温~80℃；反应时间为20分钟~48小时，优选反应时间为1~24小时。

按照上述方法所得之二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）分子中含有氨基，该氨基呈碱性，可与任何合适的酸通过药学上常规的成盐方法制得其药物学上可接受的盐，所述的酸为：盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、胺基磺酸、C_1-6脂肪羧酸（如：甲酸、乙酸、丙酸等）、三氟乙酸、硬脂酸、扑酸、草酸、苯甲酸、苯乙酸、水杨酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、羟基马来酸、丙酮酸、谷氨酸、抗坏血酸、硫辛酸、C_1-6烷基磺酸（如：甲基磺酸、乙基磺酸等）、樟脑磺酸、萘磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸或1,4-丁二磺酸。

本发明的起始原料——邻苯二甲酰亚胺烷基硫醇类化合物（1）可用本领域常见的技术制得，包括但不局限于以下文献中所公开的方法：Simona Sestito. et al. European Journal of Medicinal Chemistry 2019, 184, 111745。

本发明所公开的药物组合物包括治疗有效量的一种或多种二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）或其药学上可接受的盐，该药物组合物可进一步含有一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。所述“治疗有效量”是指引起研究者或医生所针对的组织、系统或动物的生物或医药反应的药物或药剂的量；所述“组合物”是指通过将一种以上物质或组份混和而成的产品；所述“药学上可接受的载体”是指药学上可接受的物质、组合物或载体，如：液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包囊物质，它们携带或转运某种化学物质。本发明所提供的药物组合物其理想的比例是，二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）或其药学上可接受的盐作为活性成分占总重量比2%～99.5%。

本发明所公开的二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）及其药学上可接受的盐进行了如下的生物活性筛选：

（1）二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）对乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶的抑制活性

向96孔板中依次加入1.0mmol/L碘化硫代乙酰胆碱或碘化硫代丁酰胆碱（均购自Sigma公司）30μL、pH7.4的PBS缓冲液40μL、待测化合物溶液20μL（DMSO含量小于1%）和10μL乙酰胆碱酯酶（大鼠脑皮层5%匀浆上清液，pH7.4的磷酸缓冲液作匀浆介质）或丁酰胆碱酯酶（大鼠血清25%上清液，pH7.4磷酸缓冲液作匀浆介质）溶液，加毕混匀后，37℃孵育15min，向各孔中加入0.2%的5,5’-二硫代-双(2-硝基苯甲酸)（DTNB, 购自Sigma公司）溶液30μL显色，用酶标仪测定405nm处各孔的光密度（OD值），与不加待测样品的空白孔比较，计算化合物对酶的抑制率（酶抑制率(%)=(1-样品组OD值/空白组OD值)×100%）；选择化合物的五至六个浓度，测定其酶抑制率，并以该化合物摩尔浓度的负对数与酶的抑制率线性回归，求得50%抑制率时的摩尔浓度即为该化合物的IC₅₀。测定结果表明，本发明实施例中所公开的二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）对乙酰胆碱酯酶均具有显著抑制作用，其IC₅₀为1.2 nM~10.0µM（例如：化合物1-2-20为330 nM, 化合物1-2-22为190 nM, 化合物1-2-28为13.0 nM, 化合物1-2-32为97.0 nM）。进一步构效关系研究发现，将二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）分子中的二硫键用-CH₂CH₂-替换，在其他取代基保持不变的条件下，所得相应化合物对乙酰胆碱酯酶仍具有抑制活性，但活性降低，表明在分子中引入二硫键可增强化合物的乙酰胆碱酯酶抑制活性。测定结果还显示，二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）对乙酰胆碱酯酶的抑制活性显著高于对丁酰胆碱酯酶的抑制活性（选择性大于100倍以上），说明本发明所公开的化合物对乙酰胆碱酯酶具有选择性抑制作用，表明该类化合物对外周系统的毒性较小。另外，测定结果还显示，在临床上使用的卡巴拉汀对AChE抑制的IC₅₀为10.5 µM，对丁酰胆碱酯酶抑制的IC₅₀为2.6 µM；并且所使用的邻苯二甲酰亚胺烷基硫醇类化合物（1）对乙酰胆碱酯酶几乎无抑制活性（对乙酰胆碱酯酶抑制的IC₅₀大于100µM）。

（2）二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）的抗氧化活性（ORAC-FL方法）

参照文献（Qiang, X.M. et al.Eur. J Med. Chem.2014, 76, 314-331）所报道的方法进行测定，即：6-羟基-2,5,7,8-四甲基色烷-2-羧酸（Trolox）用pH7.4的PBS缓冲液配成10-80 μmol/L的溶液，荧光素（fluorescein）用pH7.4的PBS缓冲液配成250 nmol/L的溶液，2,2’-偶氮二异丁基脒二盐酸盐（AAPH）使用前用pH7.4的PBS缓冲液配成40 mmol/L的溶液。向96孔板中加入50-10 μmol/L的化合物溶液和荧光素溶液，混匀，37°C孵育15min，加入AAPH溶液，使每孔总体积为200 μL，混匀，立即置于Varioskan Flash Multimode Reader(Thermo Scientific)仪中，在485 nm激发波长和535 nm发射波长下连续测定90 min。计算出荧光衰减曲线下面积AUC，其中以1-8μmol/L的Trolox作为标准，以不加待测样品为空白，化合物的抗氧化活性结果表达为Trolox的当量，其计算公式为：[(AUC Sample-AUCblank)/(AUC Trolox-AUC blank)] ×[(concentration of Trolox/concentration ofsample)]，每个化合物每次测定3个复孔，每组实验独立重复三次。测定结果表明，本发明实施例中所公开的二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）的抗氧化活性为Trolox的0.4～2.6倍，说明该类化合物具有较强抗氧化活性；进一步构效关系研究发现，将二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）分子中的二硫键用-CH₂CH₂-替换，在其他取代基保持不变的条件下，所得相应化合物的抗氧化活性均显著降低，其抗氧化活性至少降低2-5倍。该研究表明，分子中的二硫键对增强化合物的抗氧化活性较重要。

（3）二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）对Aβ _1-42自身聚集的抑制活性

参照文献（Qiang, X.M. et al.Eur. J Med. Chem.2014, 76, 314-331）所报道的方法进行测定，即：预处理后的Aβ _1-42用DMSO配成储备液，使用前用pH7.4的PBS缓冲液稀释至50μM；待测化合物用DMSO配成2.5mM储备液，使用前用pH7.4的PBS缓冲液稀释至相应浓度，取20μL的Aβ _1-42溶液+20μL的待测化合物溶液、20μL的Aβ _1-42溶液+20μL的PBS缓冲液（含2%DMSO）于96孔板中，37℃孵育24h，然后加入160μL含有5μM硫黄素T的50mM的甘氨酸-NaOH缓冲液（pH=8.5），振摇5s后立即用多功能酶标仪在446 nm激发波长和490 nm发射波长下测定荧光值；Aβ _1-42+待测化合物的荧光值记为IF_i，Aβ _1-42+PBS缓冲液的荧光值记为IF_c，只含有PBS缓冲液的荧光值记为IF₀，化合物抑制Aβ _1-42自身聚集的抑制率为：100-(IF_i-IF₀)/(IF_c-IF₀)*100；选择化合物的五至六个浓度，测定其抑制率；每个化合物每个浓度复测三次，以姜黄素为阳性对照。测定结果表明，本发明实施例中所公开的二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）对Aβ _1-42自身聚集均具有显著抑制活性，在25.0 µM浓度下对Aβ _1-42自身聚集的抑制率在24.8%～65.0%之间；而临床上广泛使用的抗AD药物：多奈哌齐、卡巴拉汀、盐酸美金刚胺、以及邻苯二甲酰亚胺烷基硫醇类化合物（1）在25.0 µM浓度下对Aβ _1-42自身聚集的抑制率均小于10%。进一步研究还发现，将二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）分子中的二硫键用-CH₂CH₂-替换，在其他取代基保持不变的条件下，所得相应化合物对Aβ _1-42自身聚集的抑制活性显著降低，其抑制率均小于20.0%。

（4）二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）对神经炎症的抑制活性

（a）化合物和脂多糖（LPS）对BV-2细胞活性的影响

取对数生长期的BV-2细胞配成细胞悬液接种于96孔板，置37℃，5%CO₂细胞培养箱内培养24h待细胞贴壁后换为无血清的新鲜培养液90μL，分别加入各浓度待测化合物10μL预孵育30 min，每个浓度3个平行孔，同时设空白对照组；然后加或不加LPS，置37℃，5%CO₂细胞培养箱内继续培养24h，加入MTT溶液，37℃孵育4h，弃去上清液，每孔加入200μLDMSO溶液，轻微振荡10min后，用酶标仪在490nm处测定OD值，计算各受试样品不同浓度所测得OD值的均值，并按下列公司计算细胞存活率：细胞存活率（%）= 给药组OD均值/对照组OD均值×100%。测试结果表明，本发明实施例中所公开的所有二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）和LPS在不超过25μM浓度下均未显示出细胞毒性（抑制率小于<5%）。

（b）二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）对LPS诱导的BV-2细胞释放NO的影响

取对数生长期的BV-2细胞配成细胞悬液接种于96孔板，置37℃，5%CO₂细胞培养箱内培养24 h待细胞贴壁后换为无血清的新鲜培养液90 μL，分别加入各浓度待测化合物10 μL预孵育30 min，每个浓度3个平行孔，同时设空白对照组；然后加入LPS刺激，置37℃，5%CO₂细胞培养箱内继续培养24 h，取不同处理组细胞培养上清液，加入等体积的Griess试剂I和等体积的Griess试剂II，室温避光反应10 min，在540 nm处测定吸光度以检测细胞上清液中NO水平（具体操作按照NO检测试剂盒说明书进行）。测试结果表明，本发明实施例中所公开的所有二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）在0.5 μM至25 μM浓度范围内均显示出较强的抑制LPS诱导的BV-2细胞NO生成作用（在2.5 μM浓度下的抑制率均超过35.0%），并具有明显的量效关系；且它们的抑制活性较相同浓度下的对照化合物（分子中的二硫键用-CH₂CH₂-替换，其他取代基保持不变）显著增强（对照化合物在2.5 μM浓度下的抑制率均小于15.0%），表明本发明实施例中所公开的二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）具有显著的抗神经炎症活性。

（5）二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）对东莨菪碱所致小鼠记忆获得障碍的影响

SPF级ICR雄性小鼠，25-30g，随机分为：正常组、模型组、阳性对照组、受试药高低剂量组（15.0mg/kg、2.5mg/kg），每组10只动物。一次性灌胃给予受试药物，空白组和模型组给予溶媒0.5%CMC-Na，给药体积均为0.1ml/10g；给药后45 min，正常组小鼠腹腔注射生理盐水，其余各组动物均注射东莨菪碱（3.0mg/kg），给药体积均为0.1ml/10g；造模30 min后，将小鼠放入非电刺激Y迷宫进行行为学测试。测试时将小鼠放于一臂末端，让其在迷宫内自由穿行8分钟，记录其进入各臂的次数和交替次数，按照以下公式计算交替率：交替率%=[交替次数/(总进入次数-2)]×100，结果以均数±标准差表示，组间差异采用单因素方差分析。测定结果表明，在该实验条件下，所测试的二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）（实施例化合物1-2-27、化合物1-2-28和化合物1-2-32）对东莨菪碱致小鼠获得性记忆障碍具有剂量依赖性的改善作用，与模型组比较均有统计学差异（p<0.001），且活性显著高于相同摩尔浓度下的临床用药物卡巴拉汀（p<0.01），也强于相同摩尔浓度下的临床用药物多奈哌齐（p<0.01）。

具体实施方式

通过下面的实施例可对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。

实施例1 邻苯二甲酰亚胺烷基二硫吡啶类化合物（3）的制备通法

将相应的邻苯二甲酰亚胺烷基硫醇类化合物（1）2.0 mmol、2,2-二硫二吡啶（2）4.0mmol和二氯甲烷15 ml加入反应瓶中，室温搅拌反应5～36小时（反应进程用TLC跟踪）；反应结束后，减压蒸除溶剂，残余物用硅胶柱层析分离纯化，得相应的邻苯二甲酰亚胺烷基二硫吡啶类化合物（3），收率66.5%-95.0%，其化学结构均经¹H-NMR和ESI-MS确证。

实施例2 二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）的制备通法

依次将按照实施例1方法所制备得到的邻苯二甲酰亚胺烷基二硫吡啶类化合物（3）1.0mmol、胺烷基硫醇类化合物（4）1.2 mmol和四氢呋喃25 ml加入反应瓶中，室温搅拌反应3～12小时（反应进程用TLC跟踪）；反应结束后，减压蒸除溶剂，残余物用硅胶柱层析分离纯化，得相应的二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I），收率52.0%-83.2%，其化学结构均经¹H-NMR、¹³C-NMR和ESI-MS确证；所得目标物的纯度经HPLC测定均大于97.0%。采用上述通法制备得到的目标物结构如下：

部分化合物的NMR数据如下：

¹H NMR (CDCl₃): 7.31 (s, 2H), 4.00 (s, 6H), 3.96 (t, 2H, J = 6.8 Hz),2.97 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 2.79 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 2.75-2.78 (m, 6H), 1.98-2.00 (m, 2H), 1.16 (t, 6H, J = 6.4 Hz); ¹³C NMR (CDCl₃): 168.2, 153.8, 125.3,105.3, 56.6, 50.5, 46.6, 37.0, 36.1, 36.0, 24.9, 10.4；

¹H NMR (CDCl₃): 7.31 (s, 2H), 4.00 (s, 6H), 3.96 (t, 2H, J = 6.8 Hz),2.96 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 2.80 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 2.68-2.74 (m, 6H), 2.02-2.06 (m, 2H), 1.86-1.90 (m, 4H); ¹³C NMR (CDCl₃):168.2, 153.8, 125.3, 105.3,56.6, 54.6, 54.0, 37.0, 36.4, 36.1, 27.4, 23.4；

¹H NMR (CDCl₃): 7.31 (s, 2H), 4.00 (s, 6H), 3.96 (t, 2H, J = 7.2 Hz),2.96 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 2.76 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 2.40-2.48 (m, 6H), 1.92-1.96 (m, 2H), 1.61-1.64 (m, 4H), 1.45 (brs, 2H); ¹³C NMR (CDCl₃):168.2, 153.8,125.3, 105.3, 57.5, 56.6, 54.3, 37.0, 36.8, 36.1, 26.0, 25.5, 24.1；

¹H NMR (CDCl₃): 7.31 (s, 2H), 4.01 (s, 6H), 3.97 (t, 2H, J = 6.8 Hz),3.36 (brs, 2H), 3.05 (brs, 2H), 2.93-2.97 (m, 7H), 2.82 (t, 2H, J = 6.8 Hz),2.68-2.74 (brs, 4H), 1.87-1.90 (m, 2H); ¹³C NMR (CDCl₃):168.2, 153.8, 125.3,105.3, 56.6, 56.3, 54.4, 51.9, 45.2, 37.0, 36.6, 36.0, 26.0；

¹H NMR (CDCl₃): 7.31 (s, 2H), 3.98 (s, 6H), 3.96 (t, 2H, J = 6.8 Hz),3.64 (t, 2H, J = 4.2 Hz), 3.15 (s, 1H), 2.95 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 2.77 (t,2H, J = 6.8 Hz), 2.60-2.48 (m, 8H,), 2.46 (t, 4H, J = 7.2 Hz), 1.93-1.85 (m,2H); ¹³C NMR (CDCl₃):168.2, 153.8, 125.3, 105.3, 59.2, 57.6, 56.7, 56.6, 52.8,52.7, 37.0, 36.7, 36.1, 26.2；

¹H NMR (CDCl₃): 7.32-7.30 (m, 4H), 7.29 (s, 2H), 7.22-7.25 (m, 1H), 3.99(s, 6H), 3.96 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 3.58 (s, 2H), 2.93 (t, 2H, J = 7.2 Hz),2.75 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 2.56-2.48 (m, 4H), 1.92-1.82 (m, 2H), 1.05 (t, 3H,J = 6.8 Hz); ¹³C NMR (CDCl₃):168.2, 153.8, 138.6, 128.8, 128.1, 126.8, 125.3,105.3, 57.9, 56.6, 51.4, 47.2, 37.0, 36.6, 36.1, 26.6, 11.6；

¹H NMR (CDCl₃): 7.41 (d, 1H, J = 8.0 Hz), 7.30 (s, 2H), 7.22 (t, 1H, J =8.0 Hz), 6.94 (t, 1H, J = 8.0 Hz), 6.85 (d, 1H, J = 8.0 Hz), 3.99 (s, 6H),3.94 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 3.82 (s, 3H), 3.65 (s, 2H), 2.94 (t, 2H, J = 6.8Hz), 2.77 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 2.60 (brs, 4H), 1.92 (brs, 2H), 1.08 (brs,3H); ¹³C NMR (CDCl₃):168.2, 157.6, 153.8, 134.3, 130.4, 128.0, 125.3, 120.3,110.2, 105.3, 56.5, 55.3, 51.5, 51.1, 47.5, 37.0, 36.6, 36.1, 26.3, 11.4。

实施例3 二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）与酸成盐制备通法

在反应瓶中加入按照上述实施例1和实施例2所得之二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）1.0 mmol和丙酮25 ml，搅拌均匀后加入2.5 mmol相应的酸，升温回流搅拌反应20分钟，反应结束后冷却至室温，减压蒸除溶剂，经常规方法分离纯化即得二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）的盐，其化学结构经¹H NMR和ESI-MS确证。

Claims (9)

1.一类二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于该类化合物的化学结构通式如（I）所示：

式中：m表示1-4；n表示1-5；R₁表示H、C₁~C₁₂烷基；R₂表示C₁~C₁₂烷基、苄基或取代苄基；NR₁R₂也表示四氢吡咯基、吗啉基、哌啶基、4-位被C₁~C₁₂烷基所取代的哌啶基、4-位被苄基或取代苄基所取代的哌啶基、哌嗪基、4-位被C₁~C₁₂烷基所取代的哌嗪基、4-位被羟乙基所取代的哌嗪基、4-位被苄基或取代苄基所取代的哌嗪基；R₃和R₄各自独立地表示H、OH、SH、C₁~C₁₂烷基、C₁~C₁₂烷氧基、CN、卤素、NR₅R₆或C₁~C₁₂烷硫基；R₅和R₆各自独立地表示H、C₁~C₁₂烷基；NR₅R₆也表示四氢吡咯基、吗啉基或哌啶基；R₃和R₄在其苯环上任意可能的位置；

也表示

或

；上述术语“卤素”是指F、Cl、Br、或I；“取代苄基”是指苯环上被1-4个选自下面的基团所取代的苄基：F、Cl、Br、I、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、NR₇R₈、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、羧基、羟基、氰基，R₇和R₈各自独立地表示H或C₁~C₁₂烷基，NR₇R₈也表示四氢吡咯基、吗啉基或哌啶基，这些取代基在苯环的任意可能位置。

2.如权利要求1所述的二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于R₃和R₄优选自H、OH、甲基、甲氧基、Cl、二甲氨基、四氢吡咯基或甲硫基。

3.如权利要求1所述的二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于R₁优选自甲基或乙基；R₂优选自甲基、乙基、苄基、2-(甲氧基)苄基、2-(三氟甲氧基)苄基、2-(甲基)苄基、2-(三氟甲基)苄基、2-氯苄基、3-氟苄基、3-溴苄基、2-(二甲氨基)苄基、4-(二甲氨基)苄基；NR₁R₂优选自哌嗪基、4-甲基哌嗪基、4-苄基哌嗪基、4-(2-甲氧基苄基)哌嗪基、4-羟乙基哌嗪基、哌啶基、吗啉基、4-乙基哌啶基、4-苄基哌啶基、四氢吡咯基。

4.如权利要求1-3任一项所述的二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述的药学上可接受的盐为此类二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物与盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、胺基磺酸、C_1-6脂肪羧酸、三氟乙酸、硬脂酸、扑酸、草酸、苯甲酸、苯乙酸、水杨酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、羟基马来酸、丙酮酸、谷氨酸、抗坏血酸、硫辛酸、C_1-6烷基磺酸、樟脑磺酸、萘磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸或1,4-丁二磺酸的盐。

5.如权利要求1-4任一项所述二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于所述化合物可通过以下方法制备得到：

式中：R₁、R₂、R₃、R₄、m和n的定义与二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）的化学结构通式相同；

步骤A)：邻苯二甲酰亚胺烷基硫醇类化合物（1）在溶剂中与2,2-二硫二吡啶（2）反应，得到相应的邻苯二甲酰亚胺烷基二硫吡啶类化合物（3）；

步骤B)：由步骤A)得到的邻苯二甲酰亚胺烷基二硫吡啶类化合物（3）在适当溶剂中与胺烷基硫醇类化合物（4）反应，得相应的二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）；

按照上述方法所得之二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物（I）分子中含有氨基，该氨基呈碱性，与任何合适的酸通过药学上常规的成盐方法制得其药物学上可接受的盐。

6.如权利要求5所述二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于步骤A)中，反应所用溶剂为：C_1-8脂肪醇、C_3-8脂肪酮、二氯甲烷、氯仿、N,N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醚、苯、甲苯、乙腈、1,4-二氧六环、乙二醇二甲醚或C_5-8烷烃；邻苯二甲酰亚胺烷基硫醇类化合物（1）：2,2-二硫二吡啶（2）的摩尔投料比为1.0：1.0~10.0；反应温度为0~100℃；反应时间为1~120小时。

7.如权利要求5所述二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于步骤B)中，反应所用溶剂为：C_1-8脂肪醇、C_3-8脂肪酮、乙醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二氯甲烷、氯仿、1,4-二氧六环、苯、甲苯、乙腈或C_5-8烷烃；化合物（3）：化合物（4）的摩尔投料比为1.0：1.0~5.0；反应温度为0~100℃；反应时间为20分钟~48小时。

8.一类药物组合物，其特征在于包含如权利要求1-4任一项所述的二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。

9.如权利要求1-4任一项所述的二硫烷基邻苯二甲酰亚胺类化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防神经系统相关疾病药物中的用途，这类神经系统相关疾病为：血管性痴呆、阿尔茨海默氏病、帕金森氏症、亨廷顿氏症、HIV相关痴呆症、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化症、神经性疼痛、青光眼、缺血性脑卒中、出血性脑卒中、以及脑外伤引起的神经损伤。