CN114181698B - 一种双发射碳点及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于荧光材料技术领域,具体涉及一种双发射碳点及其制备方法和用途。本发明的双发射碳点以健那绿B为碳源,以磷酸氢二铵((NH4)2HPO4)为氮源,以超纯水为溶剂,合成得到。本发明的碳点可用作ClO‑检测的探针,具有良好的选择性、抗干扰能力、时间稳定性和较低的细胞毒性。
Description
技术领域
本发明属于荧光材料技术领域,具体涉及一种双发射碳点及其制备方法和用途。
背景技术
荧光分析法不仅具有灵敏度高、选择性好等优点,相较于高效液相色谱法、化学发光法和质谱法等需要昂贵仪器的方法,还具有操作简单、价格低廉等优势,在分析检测中具有更大的应用潜力。此外,荧光信号变化还可以用肉眼直接观察,进行半定量分析检测,为实际样品的便捷检测提供了可能。
次氯酸(HClO)是一种广泛存在于生物系统中的内源性活性氧,在生理条件下主要由髓过氧化物酶产生。它与生物体的正常生命活动和免疫系统正常运行密切相关。过量的HClO 会引起各种疾病,如肾脏疾病、肺损伤、动脉粥样硬化和组织损伤等,甚至还会导致癌症。此外,它还被用作常见的水系统的消毒剂和漂白剂,广泛存在于自来水、游泳池水和其他日常生活用水中。因此,有必要建立一种可靠的测定HClO的方法。通常设计的传感HClO的分子探针是基于其与探针之间发生的氧化还原反应。但是分子探针存在合成过程复杂、产率低等缺点,限制了其大规模合成应用。一锅法合成碳点(CDs)大大简化了合成过程,可一次性获得大量探针。此外,由于CDs良好的生物相容性、光稳定性等,能够在生物体内具有更广泛的应用价值。在生化分析领域,不同的CDs表面具有不同的官能团,在测定中往往对待测物表现出特定的响应信号。然而,单发射CDs易受到环境因素的干扰,存在检测值不够准确的问题。相较而言,多发射CDs在检测过程中能够提供比率荧光信号,不仅可以提高检测的灵敏度和结果的可靠性,还能提供肉眼可见的荧光颜色变化。联合比色法,不仅可以提升测量的准确度,还能在实际分析应用中具有更加广阔的前景。
发明内容
本发明要解决的技术问题是为ClO-检测提供一种新选择。
本发明的技术方案是一种双发射碳点,以健那绿B为碳源,以磷酸氢二铵((NH4)2HPO4) 为氮源,以超纯水为溶剂,合成得到。
具体的,所述碳点在270nm的激发波长下具有470nm和579nm的双发射峰。
本发明还提供了所述碳点的制备方法,包括如下步骤:将健那绿B和(NH4)2HPO4溶解在溶剂中,在反应釜中加热反应,冷却至室温,加入乙醇,离心纯化,取上清液,用微孔滤膜去除大颗粒,真空干燥;所述溶剂为超纯水。
其中,所述溶剂与原料的用量比例为:每10.22mg的健纳绿B使用184.9~237.7g的(NH4)2HPO4和5mL溶剂。
优选的,每10.22mg的健纳绿B使用237.7g的(NH4)2HPO4。
其中,所述反应时间为3~5h,反应温度为170~190℃。
优选的,所述反应时间为5h,反应温度为170℃。
具体的,所述上清液过0.22μm微孔滤膜去除大颗粒。
本发明还提供了所述方法制备得到的碳点。
本发明还提供了所述碳点在检测ClO-中的用途。
本发明还提供了所述碳点在制备检测ClO-的探针中的用途。
进一步的,所述检测为荧光检测或紫外吸收检测。
本发明还提供了检测ClO-的方法,包括如下步骤:将碳点溶解在含MES的Tris-HCl缓冲液中;加入待测样本;孵育;
以270nm的激发波长,记录溶液的在470nm和579nm处荧光光谱,根据标准曲线获得待测样本中ClO-的检测结果;或,在536nm处测紫外吸收,根据标准曲线获得待测样本中ClO-的检测结果。
具体的,荧光检测中,标准曲线方程为(F'470/F'579)/(F470/F579)=0.5095×exp([ClO-]/1.694) +0.4866),R2=0.9945。
进一步的,在荧光检测中,检测的线性范围为0.05~4.00μmol/L,检测限为12.3nmol/L。
具体的,在紫外吸收检测中,标准曲线方程为A=-0.0135[ClO-]+0.159,R2=0.9970。
进一步的,在紫外吸收检测中,检测的线性范围为0.50~7.00μmol/L,检测限为0.16 μmol/L。
具体的,所述MES的浓度为20mmol/L;所述Tris-HCl缓冲液pH7.42;所述孵育时间为 40min。
本发明的有益效果:本发明开发了N、P共掺杂双发射CDs(N,P-CDs)作为传感ClO-的比率荧光-比色探针。N,P-CDs是由健那绿B和磷酸氢二铵((NH4)2HPO4)一锅水热合成得到的,在270nm的激发波长下具有470nm和579nm的双发射峰。在4-吗啉乙磺酸(MES) 的存在下,N,P-CDs作为传感ClO-的比率荧光探针,线性范围为0.05~4.00μmol/L,检测限可达12.3nmol/L,能够用于水体中ClO-的检测。在比色法中,通过紫外-可见吸收光谱在0.50~7.00μmol/L范围内检测到了ClO-,随着ClO-浓度增加,N,P-CDs的吸收由玫红色变为无色,检测限为0.16μmol/L。HeLa细胞成像实验进一步证实N,P-CDs能捕获活细胞中内源性/外源性ClO-。可见,本发明为ClO-的检测提供了可靠的探针,具有良好的选择性、抗干扰能力、时间稳定性和较低的细胞毒性。
附图说明
图1、(A)N,P-CDs的紫外-可见吸收光谱(黑)和在激发波长为270nm(红)和发射波长为579nm(蓝)下的荧光光谱,插图:N,P-CDs在日光和254nm紫外线灯下的照片; (B)N,P-CDs的2D荧光光谱;(C)TEM图像和(D)粒径分布;wavelength:波长;Excitation:激发;Emission:发射;Size:尺寸。
图2、(A)N,P-CDs的FTIR光谱;(B)XPS全谱以及(C)C 1s;(D)O 1s;(E)N 1s; (F)P2p的高分辨窄扫光谱;Binding Energy:结合能,Counts:强度,Species:元素,Content:含量,Measured:测量的,Fitting:拟合的。
图3、(A)四种CDs加入和ClO-前后的荧光光谱;(B)CDs-1、CDs-2、CDs-3和N,P-CDs在日光(Daylight)和254nm紫外灯(UV lamp)下的照片。
图4、柱分离成分1-6的TEM图像。
图5、(A-F)依次为1-6的2D荧光光谱图,Zaxis:Z轴,Low:低,High:高。
图6、组分1-6的(A)紫外-可见吸收光谱图,插图:从左到右分别为组分1-6在日光下的照片;(B)1-6在365nm和254nm紫外灯下的照片以及其(C)FTIR光谱。
图7、(A)不同条件下N,P-CDs的荧光光谱;(B)在不同浓度的(0-60mmol/L) MES/HEPES/MOPS中N,P-CDs对ClO-的传感。
图8、(A)添加ClO-后N,P-CDs的荧光光谱图;(B)(F'470/F'579)/(F470/F579)与ClO-浓度的指数关系;(C)在254nm紫外灯下,ClO-引起的荧光颜色变化及其(D)CIE色度图。
图9、(A-B)N,P-CDs荧光传感ClO-的选择性和(C-D)抗干扰能力测试。
图10、(A-B)选择性(10μmol/L ClO-,20μmol/L Pb2+,其他物质为100μmol/L)和(C-D) 干扰(10μmol/L ClO-和I-,50μmol/L GSH和Br-,其他物质浓度均为100μmol/L)。
图11、(A)N,P-CDs的时间稳定性;(B)细胞毒性测试。
图12、N,P-CDs应用于细胞成像时的荧光显微镜图像及其相应的亮场图像,BrightFiled:亮场,Green Channel:绿通道,Red Channel:红通道,Merged:合并的。
具体实施方式
实施例中用到的主要试剂:健那绿B、4-吗啉乙磺酸(MES)、次氯酸钠(NaClO)、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸(HEPES)、3-(N-吗啉基)丙磺酸钠盐(MOPS)和牛磺酸均来自上海阿拉丁试剂有限公司(上海,中国)。磷酸氢二铵((NH4)2HPO4)购自重庆川东化工(集团)有限公司。全部试剂未经纯化直接使用;实验均采用超纯水(18.2mΩ·cm,Milli-Q)。实施例中用到的主要仪器:在电热恒温干燥箱(DHG-9036A,上海景洪,中国)中加热聚四氟乙烯内衬合成CDs。用狭缝宽度为10nm的荧光光谱仪F-7000(日立,日本)记录了N,P-CDs 的荧光光谱。此外,用UV-2600分光光度计(岛津,日本)记录了N,P-CDs的吸收光谱。用美国赛默飞世尔科技的Thermo Scientific Escalab 250Xi的X射线光电子能谱仪和傅立叶变换红外光谱仪(岛津-8400S,日本)分析了N,P-CDs的元素组成和官能团类别。
实施例1N,P-CDs的合成条件的筛选
以健那绿B为碳源,采用一锅水热法制备N,P-CDs。将健那绿B、(NH4)2HPO4溶解在超纯水中,在反应釜中加热反应。自然冷却至室温,所得N,P-CDs加入乙醇后,离心纯化,然后上清液过0.22μm微孔滤膜去除大颗粒,真空干燥。
在三因素三水平分析的基础上,以N,P-CDs对ClO-的响应信号——(F'470/F'579)/(F470/F579)(F'和F分别是N,P-CDs在加入ClO-前后的荧光强度)为指标,通过实验确定了最佳合成条件(表1)。根据响应信号,每10.22mg的健纳绿B使用184.9~237.7g的 (NH4)2HPO4;反应时间为3~5h,反应温度为170~190℃。选择10.22mg的健纳绿B、237.7 mg的(NH4)2HPO4、5mL超纯水、170℃加热5h作为最终合成条件。
表1合成条件优化结果
实施例2N,P-CDs的光学性质
用紫外-可见吸收光谱和荧光光谱研究N,P-CDs的光学性质。如图1A所示,N,P-CDs的吸收光谱在约270nm处的吸收带可归因于C=C/C=O产生的π-π*跃迁,位于540nm处的吸收峰为C=O/C=N的n-π*跃迁。固定发射波长为579nm,扫描N,P-CDs的激发光谱,所得的激发光谱中有两个激发峰,其中最大激发峰为270nm,另一个激发峰约在540nm处,与N,P-CDs的吸收峰一致。当激发波长为270nm时,N,P-CDs在470nm和579nm处有两个发射峰,成功得获得了双发射碳点。N,P-CDs溶液在日光和254nm紫外灯下分别为玫红色和橙色(图 1A的插图)。由于在270nm的激发波长下可以获得双发射(图1B),选择了270nm作为后续分析研究的激发波长。根据N,P-CDs的TEM图像(图1C)可知,N,P-CDs具有良好的分散性,平均粒径为2.44nm(图1D),HRTEM显示其晶格间距为0.21nm,与石墨碳(100) 面的晶格间距一致。
实施例3N,P-CDs的表征
用FTIR研究N,P-CDs的表面官能团。如图2A所示,光谱中3400-3000cm-1的宽峰与N-H和O-H基团的拉伸振动有关。3128cm-1处的振动吸收波数低于普通的O-H键,表明氢键发生了缔合。1384cm-1处的特征带归因于C-N/C-H的振动吸收。675cm-1、1045cm-1和2997 cm-1处的吸收峰分别对应于P-O/P=O、C-O-C和C-H键的振动吸收。此外,在1640cm-1处的弱峰表明,N,P-CDs含有少量C=O基团。XPS光谱(图2B)证明N和P元素的成功掺杂,其含量分别为22.39%和2.39%。C 1s光谱(图2C)具有位于284.5eV、285eV、285.6eV和287.8 eV处的结合能,分别是C-C/C=C、C-O、C-N/C-O和C=O产生的。如图2D所示,C-O、C=O 和C-O-C的O1s结合能分别位于531.14eV、531.6eV和533.1eV处。N 1s光谱(图2E)在 399.4eV、400.8eV、401.98eV和407.01eV处的四个峰,分别对应于C-N、携带氢的氨基((C) 2–NH)或-N3,N-O和N=O(-NO3)键。FTIR和XPS光谱表明,N,P-CDs具有丰富的表面官能团。
从合成的原料来看,(NH4)2HPO4可视为NH3·H2O和H3PO4的混合物。因此设计了以下实验方案,详见表2,其中CDs-2和CDs-3原料中所含的N和P摩尔量与(NH4)2HPO4中N、 P的摩尔量相同,用来研究原料对N,P-CDs多发射的影响。CDs-1、CDs-2、CDs-3和N,P-CDs 的荧光光谱和照片如图3所示。显然只有掺杂了外来N元素的CDs-2和N,P-CDs在580nm 处有发射,表明N的掺杂对红发射十分重要,N掺杂能够增大CDs的sp2结构域,产生长波长发射。在270nm的激发波长下,CDs-1和CDs-3仅表现出低荧光强度的蓝发射,且峰型与 N,P-CDs存在显著差异,证明仅以健那绿B为原料不能产生良好的荧光性质。CDs-3的荧光强度高于CDs-1,N,P-CDs高于CDs-2,表明P掺杂可以提高碳点的荧光强度。其主要表现 P掺杂可提升前体的成核、生长过程,使合成的CDs表面官能团种类更为丰富,从而达到提高FLQY的效果。在270nm激发波长下,测量了CDs-1、CDs-2、CDs-3和N,P-CDs传感 ClO-的能力。发现N,P-CDs在579nm处的荧光强度猝灭程度最大,说明N、P掺杂有利于 ClO-的检测。综上所述,氮、磷掺杂不仅提供了双发射,还是高灵敏度的关键。
表2 CDs-1,CDs-2,CDs-3和N,P-CDs的合成
实施例4N,P-CDs的分离纯化
以乙酸乙酯和甲醇3:1为洗脱剂,采用干法上柱的方式进行洗脱,对N,P-CDs进行了分离纯化,得到了六个不同的CDs,将其分别命名为1、2、3、4、5、6。六种CDs的TEM图像如图4所示。其中1、2、3、5有明显的晶格条纹,尺寸分布不均匀,形态不明显。组分4、 6主要以非晶形式存在,无明显的形状和晶格。N,P-CDs透析后,截获成分较少。因此,我们认为N,P-CDs在合成过程中,健那绿B经高温分解成小分子,然后部分小分子在高温高压下进一步碳化形成CDs,所以在N,P-CDs溶液中,仍有许多分子团聚物存在。
用F-7000荧光分光光度计研究了六种CDs的荧光性质。它们的荧光2D光谱如图5所示,其中只有组分2、3、4在单一的激发波长下具有多个发射中心,并且三种组分产生的双发射中心均位于400~500nm的蓝发射和580~620nm的红发射范围内,表现出与N,P-CDs相似的光学性质。而1、5、6组分在单一激发时只有一个位于450~550nm范围内的宽发射峰,此发射峰与N,P-CDs在470nm处的发射中心有关。
同时,根据它们的紫外-可见吸收光谱可知,六种CDs在可见光区均有吸收。在520~550nm 范围内的吸收,主要与C=O/C=N键的n-π*跃迁相关,是吸收为红色的主要原因(插图6A)。此外,组分5和6具有约373nm的吸收,这属于C-O-C、C-OH或C-N的n-σ*跃迁,表明组分5、6氧相关官能团种类高于其他组分。组分6在254nm处吸收可归因于碳核中共轭C=C单元的π-π*跃迁。此外,六种CDs在270nm处都有吸收峰,这是C=O/C=C的π-π*跃迁。这些组分在365nm和254nm紫外光灯下的照片如图6B所示,与其2D荧光光谱匹配良好。同时,测量了六种组分的FTIR光谱(图6C),以研究它们的表面官能团差异。相似的FTIR光谱表明,它们具有相似的官能团,只是含量有所不同。1384cm-1处的峰是由C-N的拉伸振动引起的,在1、2、3、4组分中较常见。而1、2、3、4组分的2D荧光光谱显示,四者不仅具有蓝绿发射峰,还在600nm附近出现了红发射中心,进一步说明N含量增多能够产生长波长发射。综上所述,N,P-CDs中含有多个不同的CDs,其中N元素的掺杂使CDs内C-N 键的含量增加,增大了CDs内部的sp2杂化域,使CDs能够发出波长更长的荧光。
实施例5ClO-的分析测定
N,P-CDs可以作为检测ClO-的荧光探针。在检测过程中,依次向2mL EP管中加入200μL N,P-CDs(0.63mg/mL)、100μL Tris-HCl(50mmol/L,7.42)和100μL MES溶液(0.20mol/L)。然后向混合液中加入不同体积的ClO-溶液和超纯水,混合均匀,使ClO-的终浓度为0~4.00 μmol/L。孵育40min后,以270nm的激发波长记录溶液的荧光光谱。
在检测ClO-的过程中,只有在MES存在的情况下,N,P-CDs的荧光强度猝灭程度最大。如图7A所示,仅将ClO-加入到N,P-CDs的溶液中,N,P-CDs在579nm处的荧光强度不发生改变,而当将ClO-加入MES/HEPES/MOPS与N,P-CDs混合溶液中时,N,P-CDs在579nm 处的荧光强度迅速降低。为了获得最佳的灵敏度,图7B中探讨了MES、HEPES、MOPS的浓度对检测ClO-的影响。随着三种物质浓度的增加,N,P-CDs对ClO-的响应信号先增加,然后达到平衡。虽然40mmol/L的MOPS可以得到最好的响应信号,但分析误差大,且离子强度过大,因此选择了20mmol/L的MES用于后续的分析检测。
从图8A的荧光光谱可知,随着ClO-浓度的增加,N,P-CDs位于579nm处的荧光峰强度逐渐降低,而位于470nm处的荧光强度则保持不变,构成了比率荧光检测ClO-的条件。如图8B所示,(F'470/F'579)/(F470/F579)的值与ClO-浓度在0.01-4.00μmol/L(R2=0.9945)的范围内呈指数关系,方程为(F'470/F'579)/(F470/F579)=0.5095*exp([ClO-]/1.694)+0.4866)。根据3δ/K计算出检出限为12.3nmol/L[δ为空白的标准偏差(SD)(n=11)]。图8C显示了在254nm紫外灯光照射下用N,P-CDs传感ClO-的照片,随着ClO-的浓度逐渐增大,荧光颜色由橙色变为蓝色,基于荧光数据的CIE色度图与也表现出类似的颜色变化(图8D),表明 N,P-CDs+MES可用于可视化传感ClO-。
由于ClO-在水体和人体中分布广泛,选择了大量的阴阳离子、氨基酸、和小分子物质对 N,P-CDs传感ClO-的选择性以及抗干扰能力进行了测试。其中包括浓度均为100μmol/L的离子(Ca2+、Cr2O7 2-、Cu2+、Fe3+、Fe2+、Co2+、Ni2+、K+、Pb2+、Gd2+、Ba2+、Zn2+、Al3+、 Mn2+、Ag+、Mg2 +、I-、BrO3 -、Ac-、SO4 2、H2PO4 -、S2O8 2-、IO3 -、F-、Br-、CO3 2-、Cl-)、氨基酸(精氨酸、组氨酸、赖氨酸)、以及谷胱甘肽(GSH)、异烟肼、H2O2和D-葡萄糖(D-Glu) 等小分子物质。从图9A,9B可知,只有ClO-会猝灭N,P-CDs的红色荧光,荧光颜色由橙色变为蓝色。N,P-CDs在检测ClO-时也具有良好的抗干扰能力(图9C,9D)。其结果表明,N, P-CDs可用于比率荧光检测ClO-。
此外,加入的ClO-还引起了N,P-CDs吸收的变化。N,P-CDs在536nm处的吸收随着ClO-浓度的增加,吸收值变小,并且吸收峰有轻微红移。N,P-CDs在可见光区的最大吸收强度和 ClO-的浓度具有良好的线性关系,随着ClO-浓度的增加,最大吸收的吸光度下降,线性范围为0.50-7.00μmol/L,检测限为0.16μmol/L。线性关系为A=-0.0135[ClO-]+0.159,R2=0.9970。如图10A~D所示,该方法还表现出良好的选择性和抗干扰能力(A0和A分别为加入ClO-前后的吸收值)。与之前的方法进行比较,发现此方法不仅具有良好的传感ClO-的能力,还为 ClO-的分析检测提供了比率荧光-比色双通道(表3)。
从西南大学(重庆)游泳池取水样,另一水样取自实验室自来水。对水样进行前处理,以10000rpm离心10min,然后用0.22μm微孔膜过滤,除去大颗粒。在检测过程中,除加入200μL实际样品外,ClO-的测定过程与上述实验相同。通过对自来水和游泳池水中的实际样品进行分析,ClO-的回收率在93.78~108.9%之间(表4),表明该探针可用于实际水样的检测。
表3本发明与已报道的ClO-探针对比
表4实际水样的检测
实施例6活细胞中ClO-的荧光成像
对N,P-CDs的时间稳定性进行了测试,如图11A所示,将N,P-CDs避光保存8个月后,再测量其荧光光谱,发现其荧光光谱相较于8个月之前的荧光强度基本不变,表明N,P-CDs具有良好的时间稳定性。此外,为达成在活细胞中监测ClO-的目的,对N,P-CDs的细胞毒性进行了研究(图11B)。随着N,P-CDs的浓度从0.05mg/mL增加至0.25mg/mL,细胞存活率保持在100%附近,基本不受N,P-CDs浓度的影响,表明N,P-CDs具有较低的细胞毒性,可用于细胞成像。
对N,P-CDs进行了细胞成像分析,结果如图12所示,N,P-CDs成功地进入HeLa细胞中。用激发为470nm的绿色通道和557nm的红色通道检测了活细胞中的ClO-,和预期结果相同,单独添加MES或ClO-对两个通道的荧光强度没有影响;当MES和ClO-共同存在时, N,P-CDs的荧光强度明显降低。以上结果表明,在本申请中,MES是检测ClO-必备的物质,并且N,P-CDs在两个不同的通道中监测了细胞内源性/外源性ClO-。
综上所述,本发明合成了在270nm的激发波长下具有双发射的N,P-CDs,其发射中心分别位于470nm和579nm处。N、P元素掺杂不仅提供了N,P-CDs的红发射中心,还丰富了N,P-CDs的表面官能团,提高了量子产率。同时,N,P-CDs+MES可以作为测定ClO-的比率荧光-比色探针。对实际样品的分析结果表明,本工作无需复杂的处理即可用于测定环境样品中的ClO-。同时,细胞成像实验证实N,P-CDs+MES有望成为细胞内实时监测ClO-的荧光探针,有助于研究与细胞内氧化还原稳态相关的疾病。
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Claims (10)
1.一种双发射碳点,其特征在于,以健那绿B为碳源,以磷酸氢二铵((NH4)2HPO4)为氮源,以超纯水为溶剂,合成得到。
2.如权利要求1所述的双发射碳点,其特征在于,所述碳点在270 nm的激发波长下具有470 nm和579 nm的双发射峰。
3.双发射碳点的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:将健那绿B和(NH4)2HPO4溶解在溶剂中,在反应釜中加热反应,冷却至室温,加入乙醇,离心纯化,取上清液,用微孔滤膜去除大颗粒,真空干燥;所述溶剂为超纯水;所述溶剂与原料的用量比例为:每10.22 mg的健那绿B使用184.9~237.7mg的(NH4)2HPO4和5 mL溶剂;所述反应时间为3~5h,反应温度为170~190℃。
4.如权利要求3所述的制备方法,其特征在于,每10.22 mg的健那绿B使用237.7mg的(NH4)2HPO4。
5.如权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述反应时间为5 h,反应温度为170℃。
6.权利要求3~5任一项所述方法制备得到的碳点。
7.权利要求1、2或6所述碳点在检测ClO中的用途。
8.如权利要求7所述的用途,其特征在于,所述用途为所述碳点在制备检测ClO-的探针中的用途。
9.如权利要求7或8所述的用途,其特征在于,所述检测为荧光检测或紫外吸收检测;在荧光检测中,检测的线性范围为0.05~4.00 μmol/L,检测限为12.3 nmol/L;在紫外吸收检测中,检测的线性范围为0.50~7.00 μmol/L,检测限为0.16 μmol/L。
10.检测ClO-的方法,其特征在于,包括如下步骤:将权利要求1、2或6所述碳点溶解在含20 mmol/L 4-吗啉乙磺酸的pH7.42的Tris-HCl缓冲液中;加入待测样本;孵育40 min;
以270 nm的激发波长,记录溶液的在470 nm和579 nm处荧光光谱,根据标准曲线获得待测样本中ClO-的检测结果;或,在536 nm处测紫外吸收,根据标准曲线获得待测样本中ClO-的检测结果。
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