CN114129762A - 一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜及其制备方法和应用 - Google Patents

一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜及其制备方法和应用。通过静电纺丝技术，将水溶性高分子材料和积雪草总苷纺于核层、水不溶性高分子材料和磷脂纺于壳层，形成具有核壳结构的静电纺丝纳米纤维膜。在创伤早期阶段，水溶性材料吸收组织渗出液暴露原料药，磷脂将游离药物包裹，形成泡囊结构以促进药物吸收，最终促进血管内皮细胞及胶原纤维的生成、加速创伤愈合。本发明将材料领域研究热点创造性地应用于药物制剂递送系统，所制备的静电纺丝纳米纤维膜用于组织再生和修复，动物实验取得较好效果。本发明弥补了现有创伤领域依赖传统治疗手段的缺陷，为现有工业化生产提供依据，也为临床医师和患者治疗提供一种新的选择。

Description

一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜及其制 备方法和应用
技术领域
本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜及其制备方法和应用。
背景技术
皮肤作为人体最大最外部的器官极易遭受创伤，各种急、慢性创伤千百年来一直困扰着人们，因此也一直是医学领域的研究热点，患者往往由于体液丢失、感染导致休克甚至死亡。
目前皮肤创伤主要分为急性创伤和烧烫伤，在伤口自然愈合不加干预的情况下，常会伴有疤痕留下，给患者留下巨大的心理障碍，现阶段治疗创伤的依据主要为：加速伤口愈合、减少或抑制疤痕、减轻患者疼痛以及减少感染。目前常用的治疗手段仍为创伤敷料，因此急需寻找一种能够促进伤口愈合、保护创面的新型治疗方案，加速创伤愈合过程，代替传统治疗手段，为患者减轻痛苦。
静电纺丝技术在多领域具有重要应用，包括生物医学和医疗产品、光电和光催化材料、智能机器人、光学和化学传感器以及抗菌过滤器等。目前常见的同轴电纺技术，能够制备具有核壳结构的复杂纳米级纤维，将活性成分载入到核层中，通过合理的制剂手段进行设计，可以保证其完整的活性且不受外部环境的影响，并提高药物的生物利用度。
积雪草提取物、单独的三萜化合物以及积雪草中三萜化合物的混合物可以促进伤口愈合以及抑制疤痕生成。但是积雪草总苷中主要活性成份具有较大的分子量、难电离、渗透吸收性差，限制了其临床应用。由于需要高剂量在皮肤创伤病变部位使用积雪草总苷来达到治疗效应，这会导致过敏反应，同时高剂量时，其促血管生成活性很可能会增大细胞毒性并造成血管破裂，造成二次创伤，也可能加大肿瘤形成风险，市售积雪草总苷通常是片剂，给药量大，需多次服药，患者顺应性较差。市售软膏不能有效的保护创面，需多次给药且用药时易沾染于衣物。
现有公开专利中，CN1833650A公开了一种制备积雪草苷分散片的制备方法，CN100589808C公开了一种凝胶剂制备方法，CN110548018 A公开了一种载有积雪草酸的一种电纺纤维膜的制备方法，选用溶剂为甲酸或乙酸。目前分散片不能有效的保护创面，需要增加额外的治疗手段，增加治疗难度。凝胶制剂由于其透气性差、易引起伤口感染等情况。甲酸、乙酸等溶剂，均具有较强的腐蚀性，易损坏针头且工业生产时难以除去，增加生产成本且安全性无法保证。
发明内容
为解决当前创伤治疗领域采用的如片剂，软膏剂，凝胶剂等剂型存在的自身不足，本发明的目的在于提供一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜及其制备方法及在组织创伤修复中的应用。
本发明采用的技术方案是：一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜，由壳层和核层构成。所述壳层包含水不溶性高分子材料和磷脂，所述核层包含水溶性高分子材料和中药成分，经静电纺丝技术制成；所述中药成分为积雪草总苷。
优选的，上述的一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜，所述水不溶性高分子材料为聚己内酯。
优选的，上述的一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜，所述水溶性高分子材料为聚乙烯吡咯烷酮。
一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜的制备方法，包括如下步骤：
1)避光下，将聚己内酯(PCL)和磷脂(PC)溶解于溶剂中，搅拌均匀后，超声除去气泡，得壳层溶液；
优选的，所述溶剂为二氯甲烷(CH2CL2)、六氟异丙醇和N-N二甲基甲酰胺(DMF)的一种或二种以上的混合。
优选的，所述壳层溶液，按质量体积百分比，聚己内酯含量为20～40％；磷脂含量为4～12％。
2)将聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和积雪草总苷(CTG)溶解于无水乙醇中，搅拌均匀后，超声除去气泡，得核层溶液；
优选的，所述核层溶液，按质量体积百分比，聚乙烯吡咯烷酮含量为8～12％，积雪草总苷含量为1.5～2.5％。
3)将壳层溶液和核层溶液分别装入不同注射器中，以同轴针头相连，以滚筒作为接收装置，控制高压直流电源、纺丝距离、喷液速度等参数，通过静电纺丝技术，制得具有核壳结构的负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜；
优选的，核层溶液和壳层溶液的体积比为1:1～4。
优选的，所述静电纺丝技术的条件为：电压12～16KV，针尖距接收装置距离为10～12cm，环境温度为5～32℃，环境湿度为20～50％，壳层溶液流速为0.8～1.2ml/h，核层溶液流速为0.4～0.6ml/h。
4)将获得的负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜避光真空干燥，除去残留溶剂。
本发明提供的一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜作为创伤敷料的应用。
本发明具有如下有益效果：
1、本发明中，DMF的主要作用为调节溶液沸点，防止出现因二氯甲烷挥发过快而堵塞针头的现象。聚己内酯作用主要提供纺丝主体材料，控制纤维形态，保证纤维结构。磷脂作用为调节纺丝连续性，同时自发组装成泡囊结构，控制药物释放行为，提高药物生物利用度。
2、本发明所制备的静电纺丝纳米纤维膜具有相比于传统的制剂手段制备的剂型，能够克服各种弊端，相比于片剂、散剂等能够更加有针对性的起效，降低给药剂量。相比于软膏剂、凝胶剂等，能够形成有效屏障，保护组织创面，又能保证药物活性成分不受影响且能控制其释放，提高生物利用度，同时能够保证患处相对湿润环境，加速组织修复细胞生长。
3、本发明采用的聚己内酯具有优良的生物学性能和成丝性能，而且该材料无毒无害且无刺激性。采用的磷脂为常见的两亲性物质，生物相容性好，用做脂质体载体，同时也具有表面活性剂的作用，可以降低同轴纺丝过程壳层与核层溶液相接触界面表面张力，使得纺丝能够连续进行，避免壳层与核层单独纺丝现象的出现。同时磷脂的加入弥补了聚己内酯降解缓慢的缺点，且增加了静电纺丝纳米纤维膜的柔韧性，使得纤维膜能够更好的贴合于患处。
4、本发明中，磷脂弥补了聚己内酯的强疏水特性，使得静电纺丝纳米纤维膜能够吸收患处多余的组织渗出液，保证患处的相对湿润环境。在药物释放方面，磷脂能够将游离药物包裹形成泡囊，增强药物的透膜能力，即增强药物利用度，降低给药剂量，进一步降低可能发生的毒性反应。
5、本发明中，静电纺丝纳米纤维膜具有较好的保水能力，得益于磷脂的增益效用，同时静电纺丝纳米纤维膜可以提供三维细胞支架，为细胞的迁移、生长提供支持，使得更多的细胞生长、黏附因子被释放，加速组织愈合进程。
6、本发明中，采用PVP与积雪草总苷共同作为核层溶液，PVP吸水膨胀，逐步使得纤维与患处接触部分API能够游离出来并被外壳中磷脂所包裹，共同到达患处发挥其效用。而纤维与外界接触部分能够保持结构的完整性，对外界细菌起到屏障作用，减少感染。因纤维均为纳米级结构，使得药物能够顺利分散均匀，可避免局部药物浓度过高而引起的不良反应。
7、本发明所制备的静电纺丝纳米纤维膜，能够保证药物顺利起效，其可以作为一种新型的用于组织创伤的药物递送系统，降低药物突释，载药均匀，释放可控，保证伤口患处的药物能够持续的起效，加速愈合进程。
8、本发明，通过静电纺丝技术制备连续的纳米纤维，通过将水溶性高分子材料和积雪草总苷纺于纤维核层，成壳材料和磷脂纺于壳层，借助静电纺丝纳米纤维膜较高的比表面积和孔隙率，形成网状空间结构，有助渗出液的吸收，保持伤口部位的相对湿润环境，同时模仿细胞外基质结构，促进创伤修复所需细胞的增值和迁移。通过合理的制剂设计，磷脂的加入增强纤维的柔韧性，且磷脂自身促进药物活性成分吸收，同时能够将活性成分自发包裹形成泡囊形式，促进其吸收起效。本发明提高了以积雪草总苷为代表的中药治疗创伤类药物的生物利用度，减少给药剂量。本发明所制备的静电纺丝纳米纤维膜，解决并革新了现有创伤治疗手段，具有优秀的创伤治疗能力且药物释放可控，能够促进伤口愈合，加速新生血管生成，减少疤痕的作用。
附图说明
图1为实施例1、2、3和对比例1、2、3制备的静电纺丝纳米纤维膜的SEM图。
图2为实施例2所制备的静电纺丝纳米纤维膜的TEM图。
图3a为实施例1、2、3对比例1、2、3制备的静电纺丝纳米纤维膜的释放曲线。
图3b为实施例2制备的静电纺丝纳米纤维膜释放24h前后SEM图。
图4a为实施例2浸出液所得泡囊zeta-电位分布图。
图4b为实施例2浸出液所得泡囊粒径分布图。
图4c为实施例2浸出液泡囊SEM电镜信息。
图5为实施例2和对比例1所制备静电纺丝纳米纤维膜保水能力图。
图6a为实施例2、对比例1和对照组在不同时间伤口愈合情况图。
图6b为实施例2、对比例1和对照组在伤口愈合后Masson染色图。
图6c为实施例2、对照组VEGF和CD31免疫组化结果图。
具体实施方式
实施例1
一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜，制备方法包括如下步骤：
1、避光下，将聚己内酯(PCL)和磷脂(PC)缓慢加入到混合溶剂中，避光密闭搅拌直至完全溶解后，再连续搅拌3h，最后超声除去气泡，所得混合溶液作为纺丝材料的壳层溶液。
混合溶剂配制：将二氯甲烷(CH2CL2)与N-N二甲基甲酰胺(DMF)，按体积比5:1混合，搅拌混合均匀，制得混合溶剂。
所得壳层溶液中，按质量体积百分比，聚己内酯(PCL)的浓度为30％(w/v％)，磷脂(PC)的浓度为4％(w/v％)。
2、将聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和积雪草总苷(CTG)加入到无水乙醇中，搅拌溶解后，再连续搅拌1h，最后超声除去气泡，所得混合溶液作为纺丝材料的核层溶液。
所得核层溶液中，按质量体积百分比，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度为12％(w/v％)，积雪草总苷(CTG)浓度为2％(w/v％)。
3、按体积比1:2，将核层溶液和壳层溶液分别装入不同注射器中，以同轴针头相连，以滚筒作为接收装置，控制高压直流电源、纺丝距离、喷液速度等参数，通过静电纺丝技术，制得具有核壳结构的负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜。
静电纺丝技术的条件为：高压直流电源电压14KV，针尖距接收装置距离为10cm，环境温度为30℃，环境湿度为45％，壳层溶液流速为1.2ml/h，核层溶液流速为0.6ml/h。
4、将获得的负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜避光真空干燥24h，除去残留溶剂，经灭菌后密封避光保存。
实施例2
一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜，制备方法包括如下步骤：
1、避光下，将聚己内酯(PCL)和磷脂(PC)缓慢加入到混合溶剂中，避光密闭搅拌直至完全溶解后，再连续搅拌3h，最后超声除去气泡，所得混合溶液作为纺丝材料的壳层溶液。
混合溶剂配制：将二氯甲烷(CH2CL2)与N-N二甲基甲酰胺(DMF)，按体积比5:1混合，搅拌混合均匀，制得混合溶剂。
所得壳层溶液中，按质量体积百分比，聚己内酯(PCL)的浓度为30％(w/v％)，磷脂(PC)的浓度为8％(w/v％)。
2、将聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和积雪草总苷(CTG)加入到无水乙醇中，搅拌溶解后，再连续搅拌1h，最后超声除去气泡，所得混合溶液作为纺丝材料的核层溶液。
所得核层溶液中，按质量体积百分比，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度为12％(w/v％)，积雪草总苷(CTG)浓度为2％(w/v％)。
3、按体积比1:2，将核层溶液和壳层溶液分别装入不同注射器中，以同轴针头相连，以滚筒作为接收装置，控制高压直流电源、纺丝距离、喷液速度等参数，通过静电纺丝技术，制得具有核壳结构的负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜。
静电纺丝技术的条件为：高压直流电源电压14KV，针尖距接收装置距离为10cm，环境温度为30℃，环境湿度为45％，壳层溶液流速为1.2ml/h，核层溶液流速为0.6ml/h。
4、将获得的负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜避光真空干燥24h，除去残留溶剂，经灭菌后密封避光保存。
实施例3
一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜，制备方法包括如下步骤：
1、避光下，将聚己内酯(PCL)和磷脂(PC)缓慢加入到混合溶剂中，避光密闭搅拌直至完全溶解后，再连续搅拌3h，最后超声除去气泡，所得混合溶液作为纺丝材料的壳层溶液。
混合溶剂配制：将二氯甲烷(CH2CL2)与N-N二甲基甲酰胺(DMF)，按体积比5:1混合，搅拌混合均匀，制得混合溶剂。
所得壳层溶液中，按质量体积百分比，聚己内酯的浓度为30％(w/v％)，磷脂(PC)的浓度为8％(w/v％)。
2、将聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和积雪草总苷(CTG)加入到无水乙醇中，搅拌溶解后，再连续搅拌1h，最后超声除去气泡，所得混合溶液作为纺丝材料的核层溶液。
所得核层溶液中，按质量体积百分比，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度为8％(w/v％)，积雪草总苷(CTG)浓度为2％(w/v％)。
3、按体积比1:2，将核层溶液和壳层溶液分别装入不同注射器中，以同轴针头相连，以滚筒作为接收装置，控制高压直流电源、纺丝距离、喷液速度等参数，通过静电纺丝技术，制得具有核壳结构的负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜。
静电纺丝技术的条件为：高压直流电源电压14KV，针尖距接收装置距离为10cm，环境温度为30℃，环境湿度为45％，壳层溶液流速为1.2ml/h，核层溶液流速为0.6ml/h。
4、将获得的负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜避光真空干燥24h，除去残留溶剂，经灭菌后密封避光保存。
对比例1
一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜，制备方法包括如下步骤：
1、避光下，将聚己内酯(PCL)缓慢加入到混合溶剂中，避光密闭搅拌直至完全溶解后，再连续搅拌3h，最后超声除去气泡，所得混合溶液作为纺丝材料的壳层溶液。
混合溶剂配制：将二氯甲烷(CH2CL2)与N-N二甲基甲酰胺(DMF)，按体积比5:1混合，搅拌混合均匀，制得混合溶剂。
所得壳层溶液中，按质量体积百分比，聚己内酯(PCL)的浓度为30％(w/v％)。
2、将聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和积雪草总苷(CTG)加入到无水乙醇中，搅拌溶解后，再连续搅拌1h，最后超声除去气泡，所得混合溶液作为纺丝材料的核层溶液。
所得核层溶液中，按质量体积百分比，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度为12％(w/v％)，积雪草总苷(CTG)浓度为2％(w/v％)。
3、按体积比1:2，将核层溶液和壳层溶液分别装入不同注射器中，以同轴针头相连，以滚筒作为接收装置，控制高压直流电源、纺丝距离、喷液速度等参数，通过静电纺丝技术，制得具有核壳结构的负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜。
静电纺丝技术的条件为：高压直流电源电压14KV，针尖距接收装置距离为10cm，环境温度为30℃，环境湿度为45％，壳层溶液流速为1.2ml/h，核层溶液流速为0.6ml/h。
4、将获得的负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜避光真空干燥24h，除去残留溶剂，经灭菌后密封避光保存。
对比例2
1、避光下，将聚己内酯(PCL)和磷脂(PC)缓慢加入到混合溶剂中，避光密闭搅拌直至完全溶解后，再连续搅拌3h，最后超声除去气泡，所得混合溶液作为纺丝材料的壳层溶液。
混合溶剂配制：将二氯甲烷(CH2CL2)与N-N二甲基甲酰胺(DMF)，按体积比5:1混合，搅拌混合均匀，制得混合溶剂。
所得壳层溶液中，按质量体积百分比，聚己内酯(PCL)的浓度为30％(w/v％)，磷脂(PC)的浓度为16％(w/v％)。
2、将聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和积雪草总苷(CTG)加入到无水乙醇中，搅拌溶解后，再连续搅拌1h，最后超声除去气泡，所得混合溶液作为纺丝材料的核层溶液。
所得核层溶液中，按质量体积百分比，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度为12％(w/v％)，积雪草总苷(CTG)浓度为2％(w/v％)。
3、按体积比1:2，将核层溶液和壳层溶液分别装入不同注射器中，以同轴针头相连，以滚筒作为接收装置，控制高压直流电源、纺丝距离、喷液速度等参数，通过静电纺丝技术，制得具有核壳结构的负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜。
静电纺丝技术的条件为：高压直流电源电压14KV，针尖距接收装置距离为10cm，环境温度为30℃，环境湿度为45％，壳层溶液流速为1.2ml/h，核层溶液流速为0.6ml/h。
4、将获得的负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜避光真空干燥24h，除去残留溶剂，经灭菌后密封避光保存。
对比例3
1、避光下，将聚己内酯(PCL)和磷脂(PC)缓慢加入到混合溶剂中，避光密闭搅拌直至完全溶解后，再连续搅拌3h，最后超声除去气泡，所得混合溶液作为纺丝材料的壳层溶液。
混合溶剂配制：将二氯甲烷(CH2CL2)与N-N二甲基甲酰胺(DMF)，按体积比5:1混合，搅拌混合均匀，制得混合溶剂。
所得壳层溶液中，按质量体积百分比，聚己内酯的浓度为30％(w/v％)，磷脂(PC)的浓度为8％(w/v％)。
2、将聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和积雪草总苷(CTG)加入到无水乙醇中，搅拌溶解后，再连续搅拌1h，最后超声除去气泡，所得混合溶液作为纺丝材料的核层溶液。
所得核层溶液中，按质量体积百分比，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度为16％(w/v％)，积雪草总苷(CTG)浓度为2％(w/v％)。
3、按体积比1:2，将核层溶液和壳层溶液分别装入不同注射器中，以同轴针头相连，以滚筒作为接收装置，控制高压直流电源、纺丝距离、喷液速度等参数，通过静电纺丝技术，制得具有核壳结构的负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜。
静电纺丝技术的条件为：高压直流电源电压14KV，针尖距接收装置距离为10cm，环境温度为30℃，环境湿度为45％，壳层溶液流速为1.2ml/h，核层溶液流速为0.6ml/h。
4、将获得的负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜避光真空干燥24h，除去残留溶剂，经灭菌后密封避光保存。
实施例4应用
1、静电纺丝纳米纤维膜形态分析
将实施例1-3和对比例1-3制备的静电纺丝纳米纤维膜的适量纤维接收于铝箔纸上，制得的静电纺丝纳米纤维膜样品贴于导电胶上，在惰性气体保护下喷金，利用扫描电子显微镜观察纤维形貌，加速电压为5KV，结果如图1所示。
由图1可知，实施例1、2、3均可以获得纤维较均匀的纳米纤维。对比例1为未加入磷脂的处方，由SEM图可知，磷脂的加入促进了电纺进程的连续性。对比例2中磷脂的过量加入，导致纤维中出现较多的粗纤维，是由于磷脂过多导致聚己内酯成丝性能下降，部分聚己内酯外壳未能顺利分化导致。对比例3中，PVP的过量加入，导致有部分核层未被完全包裹，SEM图中出现较多的细纤维。可见，PVP和PC在合适的范围内可获得均匀的纳米级纤维。
2、静电纺丝纳米纤维膜同轴结构确认
使用透射电子显微镜检测实施例2同轴纳米纤维以确证其同轴结构。将铜网小心贴于铝箔纸上，调整好纺丝参数，在接收10s后小心取下铜网，即制得样品静电纺丝纳米纤维膜，将置于铜网上静电纺丝纳米纤维膜表面喷金，放入仪器内观察并记录结果，结果如图2。
由图2可知，依据实施例2中的制备方法，可以获得具有核壳结构的纳米级纤维。
3、药物释放行为分析
体外释放实验采用摇瓶法于恒温摇床中进行，在预定的时间点1、2、4、6、8、12、24h用注射器取样1.0mL，过0.22μm的滤膜，取20μL滤液，HPLC法对样品进行分析。
由图3a和图3b可知，实施例1-3制备的静电纺丝纳米纤维膜可以缓慢释放CTG，以达到治疗效果。根据对比例1，对比例2，实施例1和实施例2可知，在一定范围内，磷脂量增加，药物累积释放量呈现逐渐减小的趋势。在不含磷脂时，2h的累积释放约为60％，这个结果是由于在未加磷脂时，未形成核壳结构，药物并没有被完全的包裹，又因内核PVP分子快速的溶解性，导致出现此结果，这个实验结果也侧面的证明了磷脂的加入对于改善纺丝性能，增进药物被包裹进静电纺丝纳米纤维膜内，也验证了在纺丝过程中，外壳的纺丝液性质对于实验结果影响很大。对比例2中磷脂量增大，释放加快，可能的原因是由于磷脂占比达到一定程度时，由于磷脂具有两亲性，在介质中溶解增快，在相同时间内，对于外壳的破坏更大，导致内部核层的药物快速在短时间内快速接触水分，虽然磷脂的增加量增多，静电纺丝纳米纤维膜更加柔软，但从实验的体外释放结果以及经济角度等综合考虑，需控制磷脂加入量。
由对比例3和实施例2可知，随着PVP含量的增大，导致纤维前期药物释放快，但6h后药物基本不再释放，可能是PVP含量增多导致的水分进入核层时，对PCL外壳破坏较大，内核药物快速暴露于溶液中导致其释放加快。后期药物释放较少，是由于大量PVP堵塞了纤维之间的孔隙，使外部的水分难以在短时间内继续进入到深层次的静电纺丝纳米纤维膜内部，导致药物释放趋于停滞，由图3b可以证明此结论。这一结果也提示在选用PVP作为同轴内核时，要控制PVP的含量在一定的值之间，以免影响静电纺丝纳米纤维膜中的药物释放。
4、泡囊结构及粒径信息
由图4a-图4c可知，依据实施例2所制备的静电纺丝纳米纤维膜能够形成泡囊结构，促进积雪草总苷的吸收，这一结果也可从释放曲线中获知，即静电纺丝纳米纤维膜中磷脂的加入使得药物释放减慢，侧面证明药物被成功包裹。
5、保水能力分析
取0.5mL蒸馏水，添加到干燥至恒重的静电纺丝纳米纤维膜上，稳定吸水饱和0.5h后，拭去表面浮水，记录初始重量。在室温下，测定1、4、8、12h静电纺丝纳米纤维膜的重量变化，并计算累积水量损失百分比。在不同时间段水保持率计算公式为：
(Wi-Wt)/Wi*100％
其中，Wi为试样在吸收饱和后的初始重量，Wt为试样在室温放置固定时间点的重量。
由图5可知，磷脂的加入增强静电纺丝纳米纤维膜的柔韧性的同时，也使得静电纺丝纳米纤维膜具有更强的保水能力，这对于伤口患处能够保持相对湿润环境具有至关重要的作用。
实施例5应用
SD大鼠经过一周适应性喂养后(12h光照，12h黑暗，自由进水进食)，于腹腔注射10％水合氯醛(3.5mL/kg)麻醉，固定于鼠板上，背部使用电剃刀剃毛，于背部脊柱两侧用手术剪刀开1cm的近圆形切口作为急性伤口模型。按照0、3、7、10、14天观察伤口愈合情况，设置对照组(空白纱布组)，对比例1，实施例2进行试验。
Masson染色：处死SD大鼠后，取愈合后的组织，剪取组织样品，石蜡包埋，切片，随后石蜡切片脱蜡至水。利用重铬酸钾过夜浸泡，水洗。入铁苏木素3min，自来水水洗，分化液分化之后再水洗，返蓝液返蓝后流水冲洗。然后利用丽春红酸性品红浸染8min之后自来水漂洗。最后磷钼酸水溶液浸染2min，直接入苯胺蓝染液染5min。处理好的切片入无水乙醇5min，二甲苯5min透明，中性树胶封片，显微镜镜检。
VEGF、CD31组化检测：分别取伤口愈合过程中第7天、第16天的组织样本，石蜡包埋，切片，脱蜡至水，EDTA(PH9.0)抗原修复液修复抗原，随后将载玻片放于PBS(PH7.4)中，在脱色摇床上晃动洗涤3次/5min。3％双氧水中避光孵育25min，随后脱色摇床上晃动洗涤(PBS 7.4)3次/5min。滴加3％BSA封闭30min。轻甩除去封闭液，滴加一抗(VEGF、CD31)，平放湿盒内4℃孵育过夜。加HRP标记山羊抗兔，脱色摇床上晃动洗涤(PBS 7.4)3次/5min。滴加新配的DAB显色液，阳性为棕黄色，冲洗切片终止显色，复染细胞核，将切片脱水透明，稍干后中性树胶封片，镜检。
由图6a可知，相比于空白对照组(纱布)，静电纺丝纳米纤维膜能够明显加速伤口愈合进程，且根据对比例1和实施例2可知，磷脂的加入使得伤口愈合更加快速，证明通过实施例2所制备的静电纺丝纳米纤维膜能够更好的适应于伤口组织，更快的加速伤口愈合，且能严密的覆盖患处，减少感染。
由图6b可知，通过实施例2所制备静电纺丝纳米纤维膜，具有更多的皮肤附属器和更多的胶原纤维生成，更加接近于正常皮肤。且通过对比例1可知，纤维中磷脂的加入使得其促进胶原纤维生成的能力更加明显，是由于磷脂将药物包裹形成的泡囊结构，更加利于药物吸收起效。此外可观察到对照组纤维较细相互堆叠，具有疤痕特征，实施例2中能够更接近于正常皮肤，证明实施例2所制备的静电纺丝纳米纤维膜能够减少疤痕的生成。
VEGF又被称之为促血管素，其作用可以促进血管内皮细胞增值，增加微小血管通透性。其生物学特性主要表现在两方面：一是促进血管内皮细胞的分裂增值进而促进新生血管生成；二是增加微血管通透性并且能特异性的与其血管内皮细胞受体结合。新生血管数量的增加可以运送更多的营养物质以供伤口更快的愈合，进而可以通过检测VEGF的水平侧面反映伤口愈合的情况。
CD31为血小板-内皮细胞粘附因子，分子量为130KDa，主要存在于血小板、内皮细胞等表面，可用于鉴别血管内皮细胞，在发生损伤时，血管形成过程最为重要的一个步骤是血管内皮细胞向损伤区移行进入到损伤部位。完成迁移之后，再进行增殖反应。内皮细胞通过血管的形成，加强损伤部位氧及营养成分的运输，并分泌一系列生物活性物质，以促进损伤修复过程，因此可以通过检测CD31的含量来反映血管内皮细胞的含量。
由图6c可知，实施例2相比于空白对照组，实施例2中载有CTG静电纺丝纳米纤维膜更能促进VEGF和CD31生成，进而促进新生血管的生成，加速血管内皮细胞的增值，最终表现为加速伤口愈合。

Claims (10)

1.一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜，其特征在于，所述静电纺丝纳米纤维膜由壳层和核层构成，所述壳层包含水不溶性高分子材料和磷脂，所述核层包含水溶性高分子材料和中药成分，经静电纺丝技术制成；所述中药成分为积雪草总苷。
2.根据权利要求1所述的一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜，其特征在于，所述水不溶性高分子材料为聚己内酯。
3.根据权利要求1所述的一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜，其特征在于，所述水溶性高分子材料为聚乙烯吡咯烷酮。
4.一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜的制备方法，其特征在于，制备方法包括如下步骤：
1)避光下，将聚己内酯和磷脂溶解于溶剂中，搅拌均匀后，超声除去气泡，得壳层溶液；
2)将聚乙烯吡咯烷酮和积雪草总苷溶解于无水乙醇中，搅拌均匀后，超声除去气泡，得核层溶液；
3)将壳层溶液和核层溶液分别装入不同注射器中，以同轴针头相连，以滚筒作为接收装置，通过静电纺丝技术，制得具有核壳结构的负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜；
4)将获得的负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜避光真空干燥，除去残留溶剂。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述溶剂为二氯甲烷、六氟异丙醇和DMF的一种或二种以上的混合。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述壳层溶液，按质量体积百分比，聚己内酯含量为20～40％；磷脂含量为4～12％。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述核层溶液，按质量体积百分比，聚乙烯吡咯烷酮含量为8～12％，积雪草总苷含量为1.5～2.5％。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中，核层溶液和壳层溶液的体积比为1:1～4。
9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述静电纺丝技术的条件为：电压12～16KV，针尖距接收装置距离为10～12cm，环境温度为5～32℃，环境湿度为20～50％，壳层溶液流速为0.8～1.2ml/h，核层溶液流速为0.4～0.6ml/h。
10.权利要求1所述的一种负载自组装中药成分泡囊的静电纺丝纳米纤维膜作为创伤敷料的应用。
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