CN114106104B - 一种环孢霉素a衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种环孢霉素a衍生物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114106104B CN114106104B CN202111414181.9A CN202111414181A CN114106104B CN 114106104 B CN114106104 B CN 114106104B CN 202111414181 A CN202111414181 A CN 202111414181A CN 114106104 B CN114106104 B CN 114106104B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- csa
- derivative
- cyclosporine
- preparation
- solvent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical class CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 title claims abstract description 98
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 24
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 20
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 19
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 claims description 17
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical group C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- -1 alkyl diamine Chemical class 0.000 claims description 16
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 14
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 12
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 10
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical group ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 9
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 8
- 238000006735 epoxidation reaction Methods 0.000 claims description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 8
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 8
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 claims description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 7
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 claims description 6
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- QYYMDNHUJFIDDQ-UHFFFAOYSA-N 5-chloro-2-methyl-1,2-thiazol-3-one;2-methyl-1,2-thiazol-3-one Chemical group CN1SC=CC1=O.CN1SC(Cl)=CC1=O QYYMDNHUJFIDDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 5
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical group [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- RZQXOGQSPBYUKH-UHFFFAOYSA-N 3-[[1,3-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)propan-2-yl]azaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound OCC(CO)(CO)NCC(O)CS(O)(=O)=O RZQXOGQSPBYUKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108700016232 Arg(2)-Sar(4)- dermorphin (1-4) Proteins 0.000 claims description 3
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 claims description 3
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 claims description 3
- JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methyl-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound OCC(CO)(CO)NCCS(O)(=O)=O JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007994 TES buffer Substances 0.000 claims description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 3
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000007142 ring opening reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 claims description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 2
- XYIPYISRNJUPBA-UHFFFAOYSA-N [3-(3'-methoxyspiro[adamantane-2,4'-dioxetane]-3'-yl)phenyl] dihydrogen phosphate Chemical compound O1OC2(C3CC4CC(C3)CC2C4)C1(OC)C1=CC=CC(OP(O)(O)=O)=C1 XYIPYISRNJUPBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims description 2
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000010791 quenching Methods 0.000 claims description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 claims 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 3
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 84
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 84
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 79
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000006837 decompression Effects 0.000 description 10
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 10
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 6
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 5
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 5
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 2
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 2
- OXIKYYJDTWKERT-UHFFFAOYSA-N [4-(aminomethyl)cyclohexyl]methanamine Chemical compound NCC1CCC(CN)CC1 OXIKYYJDTWKERT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 238000005576 amination reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- CIHOLLKRGTVIJN-UHFFFAOYSA-N tert‐butyl hydroperoxide Chemical compound CC(C)(C)OO CIHOLLKRGTVIJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 2
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHQDETIJWKXCTC-UHFFFAOYSA-N 3-chloroperbenzoic acid Chemical compound OOC(=O)C1=CC=CC(Cl)=C1 NHQDETIJWKXCTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- BDOGHYSOSXQHCL-UHFFFAOYSA-N [K].[K].CC(O)=O.CC(O)=O.CC(O)=O.CC(O)=O.NCCN Chemical compound [K].[K].CC(O)=O.CC(O)=O.CC(O)=O.CC(O)=O.NCCN BDOGHYSOSXQHCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000002038 chemiluminescence detection Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- VKIRRGRTJUUZHS-UHFFFAOYSA-N cyclohexane-1,4-diamine Chemical compound NC1CCC(N)CC1 VKIRRGRTJUUZHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 1
- PWSKHLMYTZNYKO-UHFFFAOYSA-N heptane-1,7-diamine Chemical compound NCCCCCCCN PWSKHLMYTZNYKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/581—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with enzyme label (including co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or substrates)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种环孢霉素A衍生物及其制备方法和应用。该环孢霉素A衍生物具有式I所示的结构，免疫原性强，可满足全自动化学发光检测平台定量检测需求，与常见干扰药物间不存在交叉反应；且以该半抗原衍生物为抗原制备的CsA检测试剂特异性强、精密性高、准确度高、稳定性良好。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种环孢霉素A衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
环孢霉素A(cyclosporin，CsA)是一种内含11个氨基酸的环状多肽化合物，对细胞和体液免疫有较高选择性抑制作用，是一种淋巴细胞激活抑制剂。主要被用于各种器官移植和一些自身免疫性疾病、血液系统疾病等。但由于CsA体内过程个体差异大，治疗窗窄，其血药浓度过高会引起毒副作用，尤其对肝、肾的毒性；浓度过低，则治疗效果低或无效，甚至造成器官移植排斥作用的发生。因此，监测全血中CsA的血药浓度并调整其浓度在有效范围在临床合理用药中是非常必要的。
目前国内、外主要的检测技术包括：高效液相色谱法，放免法，荧光偏振法，化学发光法，电化学发光法，均相酶免疫法等。但这些方法在临床应用上都具有一定的缺陷性。目前市场上缺乏稳定性好、灵敏度高、特异性强的环孢霉素A监测试剂，尤其是质量好的自动化检验试剂。因此，研发生产质量达到临床要求、实用性强、性价比高，可应用于全自动生化分析仪的环孢霉素A测定试剂已成为国内外体外诊断试剂行业的热点，当前主要研究方向是合成出高效的环孢霉素A衍生物作为半抗原，通过标记与抗体发生特异性反应进行检测。
关于CsA半抗原衍生物,目前公开的多为基于对CsA中游离羟基进行修饰、对双键末端甲基碳进行碳链延长得到。其中，游离羟基由于所处区域空间位阻较大，导致羟基修饰过程收率不理想，甚至无法得到目标物；双键末端碳链延长的制备方案具有条件苛刻，技术难度较高，不利于产业化生产应用等缺陷。故开发一种符合临床要求、实用性强、性价比高，且可应用于全自动生化分析仪的环孢霉素A测定试剂盒必须克服CsA半抗原衍生物制备的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种环孢霉素A衍生物及其制备方法和应用。该环孢霉素A衍生物较环孢霉素A具有更强的免疫原性，作为抗原检测环孢霉素A特异性强、精密性高、准确度高、稳定性良好。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
一种环孢霉素A衍生物，具有式I所示的结构：
R选自-NH(CH2)nNH2、其中，n＝2～7，m为0或1。
一些实施方案中，所述环孢霉素A衍生物具有式I-1～I-5所示的任意一种结构：
本发明还提供了所述的环孢霉素A衍生物的制备方法，其特征在于，包括：
1)、将CsA溶于第一溶剂中，在氧化剂作用下进行双键环氧化反应，得到式II结构的CsA环氧乙烷化产物；
2)、在第二溶剂中，所述CsA环氧乙烷化产物与烷基二胺通过回流反应进行开环，得到环孢霉素A衍生物；
一些实施方案中，步骤1)中，将CsA溶于第一溶剂中，在氧化剂作用下进行双键环氧化反应，得到CsA环氧乙烷化产物。其中，第一溶剂对CsA具有良好溶解性，包括四氢呋喃、二氯甲烷、二甲基亚砜中的至少一种，包括但不限于此；所述氧化剂为过氧单磺酸钾、间氯过氧苯甲酸、叔丁基过氧化氢中的至少一种；所述CsA与氧化剂的摩尔比为1:1～1:15，具体可为1:1或1:15；所述双键环氧化反应的温度为18℃～30℃，具体可为18℃或30℃。
步骤2)中，在第二溶剂中，所述CsA环氧乙烷化产物与烷基二胺通过回流反应进行开环，得到环孢霉素A衍生物。其中，所述第二溶剂对CsA环氧乙烷化产物具有良好溶解性，优选沸点在60℃～100℃范围内的溶剂，具体包括四氢呋喃、1,2-二氯乙烷，1,4-二氧六环中的至少一种，包括但不限于此；所述回流反应的时间为8h～40h，具体可为8h或40h；所述烷基二胺类化合物为NH2(CH2)nNH2(n为2～7)或1,4-环己基二烷基胺，CsA环氧乙烷化产物与烷基二胺类物质的摩尔比为1:2～1:50，具体可为1:2或1:50。
一些实施方案中，所述双键环氧化反应和回流反应之后还包括分离纯化的步骤，所述分离纯化包括亚硫酸钠溶液淬灭洗涤、碳酸氢钠溶液脱酸洗涤、结晶中的至少一种。
本发明还提供了所述环孢霉素A衍生物作为半抗原在制备检测CsA的试剂盒中的应用。
本发明还提供了所述环孢霉素A衍生物作为半抗原在制备检测CsA的试剂盒中的应用。
本发明还提供一种检测CsA的试剂盒，包括酶结合物和其他试剂成分；
所述酶结合物包括酶标记的式I结构的环孢霉素A衍生物；
所述其他试剂成分包括包被有CsA抗体的磁微粒悬浮液、CsA校准品、样本稀释液、清洗液和发光底物液中的至少一种。
一些实施方案中，所述磁微粒悬浮液中磁微粒的浓度为0.1～1.0mg/mL；
所述CsA校准品的浓度为0ng/mL～1500ng/mL；
所述样本稀释液为含有0.2％～5％保护蛋白、50U/ml尿激酶、0.02％～0.1％防腐剂的缓冲液；所述保护蛋白为HSA；所述缓冲液为TRIS、BIS-TRIS、MOPS、TES、HEPES、TAPSO中的至少一种，pH值为7.0～7.8；所述防腐剂为ProClin 300；
所述清洗液为含有2％Tween 20、1％Proclin 300的pH7.5的2M磷酸盐缓冲液；
所述发光底物液为鲁米诺发光底物液或AMPPD发光底物液。
一些实施方案中，所述酶结合物、磁微粒悬浮液和CsA校准品中还包括稀释液；
所述稀释液包括缓冲液、0.02％～0.1％防腐剂和0.2％～5％保护蛋白；
所述保护蛋白为HSA；
所述缓冲液为TRIS、BIS-TRIS、MOPS、TES、HEPES、TAPSO中的至少一种，pH值为7.0～7.8；
所述防腐剂为ProClin 300。
本发明提供的环孢霉素A衍生物具有式I所示的结构，免疫原性强，可满足全自动化学发光检测平台定量检测需求，与常见干扰药物间不存在交叉反应；且以该半抗原衍生物为抗原制备的CsA检测试剂特异性强、精密性高、准确度高、稳定性良好。另外，本发明制备方法存在反应条件温和、操作简单、收率高、纯度高、所得目标物晶体状态好等优点，克服了以往CsA半抗原衍生物制备条件苛刻、收率低、纯化难度大等缺陷。
附图说明
图1示实施例7建立的标准曲线，以校准品浓度值为x轴，以校准品发光值取log值为y轴建立标准曲线。
具体实施方式
本发明提供了一种环孢霉素A衍生物及其制备方法和应用。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1 CsA环氧乙烷化产物的制备
于500mL茄形瓶中加入CsA原料(5.00g,4.16mmol)，用150mL二氯甲烷溶解后，加入过氧单磺酸钾(加入量与CsA摩尔比1:1～1:15)，室温下搅拌过夜。用200mL20％的亚硫酸钠溶液洗涤反应母液2次，200mL10％的碳酸钠水溶液进行洗涤2次。然后有机层用无水硫酸钠干燥。减压浓缩得白色固体产物4.83g，纯度96.8％，收率：92.2％。
所得CsA环氧化产物质谱及核磁氢谱数据如下：
MS-ESI(m/z):1240.73[M+Na]+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.43-7.48(m,4H,-NH-CO-),5.28(s,1H,-OH),4.61-4.36(m,11H,-CH),4.05(s,2H,-CH2),3.32-2.94(m,21H,-CH3),2.73-2.46(m,4H,-CH),2.30-2.17(m,10H,-CH2),1.84-1.63(m,6H,-CH3),1.47-1.35(m,5H,-CH),1.31(m,2H,-CH2),1.24(d,3H,-CH3),0.99-0.62(m,42H,-CH3)。
实施例2：CsA胺基化衍生物1的制备
氩气保护下，向50ml无水四氢呋喃中加入CsA环氧化物(500.0mg，0.41mmol)，然后加入乙二胺(加入量与CsA环氧化物摩尔比1:2～1:50)，加热回流8h～40h。反应停止后通过旋转蒸发器减压浓缩除去溶剂，然后加入乙酸乙酯溶解剩余固体，再先后用0.01M的稀盐酸溶液洗涤1～5次，0.1M的氨水洗涤1～3次。有机相经干燥剂干燥，通过旋转蒸发器减压浓缩除去溶剂后再加入少量甲醇，然后再加入一定量纯化水(纯化水与甲醇体积比1:10～1:100)进行重结晶纯化。过滤后经干燥得到白色晶体状衍生物468.3mg，纯度99.3％，收率88.5％。
所得CsA胺基化衍生物1的质谱及核磁氢谱数据如下：
MS-ESI(m/z):1278.86[M+H]+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.43-7.48(m,4H,-NH-CO-),5.66(m,1H,-NH),5.28(s,1H,-OH),5.23(m,1H,-OH),4.61-4.36(m,12H,-CH),4.05(s,2H,-CH2),3.32-2.94(m,21H,-CH3),2.73-2.46(m,3H,-CH),2.36-2.17(m,14H,-CH2),1.84-1.63(m,6H,-CH3),1.53-1.36(m,7H,-CH,-NH2),1.31(m,2H,-CH2),1.24(d,3H,-CH3),0.99-0.62(m,42H,-CH3)。
实施例3：CsA胺基化衍生物2的制备
氩气保护下，向50ml无水四氢呋喃中加入CsA环氧化物(500.0mg，0.41mmol)，然后加入1,7-庚二胺(加入量与CsA环氧化物摩尔比1:2～1:50)，加热回流8h～40h。反应停止后通过旋转蒸发器减压浓缩除去溶剂，然后加入乙酸乙酯溶解剩余固体，再先后用0.01M的稀盐酸溶液洗涤1～5次，0.1M的氨水洗涤1～3次。有机相经干燥剂干燥，通过旋转蒸发器减压浓缩除去溶剂后再加入少量甲醇，然后再加入一定量纯化水(纯化水与甲醇体积比1:10～1:100)进行重结晶纯化。过滤后经干燥得到白色晶体状衍生物376.9mg，纯度97.5％，收率66.4％。
所得CsA胺基化衍生物2的质谱及核磁氢谱数据如下：
MS-ESI(m/z):1349.01[M+H]+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.43-7.48(m,4H,-NH-CO-),5.66(m,1H,-NH),5.28(s,1H,-OH),5.23(m,1H,-OH),4.61-4.36(m,12H,-CH),4.05(s,2H,-CH2),3.32-2.94(m,21H,-CH3),2.73-2.46(m,3H,-CH),2.36-2.17(m,14H,-CH2),1.84-1.63(m,6H,-CH3),1.53-1.36(m,7H,-CH,-NH2),1.33-1.29(m,12H,-CH2),1.24(d,3H,-CH3),0.99-0.62(m,42H,-CH3)。
实施例4：CsA胺基化衍生物3的制备
氩气保护下，向50ml无水四氢呋喃中加入CsA环氧化物(500.0mg，0.41mmol)，然后加入1,4-二氨基环己烷(加入量与CsA环氧化物摩尔比1:2～1:50)，加热回流8h～40h。反应停止后通过旋转蒸发器减压浓缩除去溶剂，然后加入乙酸乙酯溶解剩余固体，再先后用0.01M的稀盐酸溶液洗涤1～5次，0.1M的氨水洗涤1～3次。有机相经干燥剂干燥，通过旋转蒸发器减压浓缩除去溶剂后再加入少量甲醇，然后再加入一定量纯化水(纯化水与甲醇体积比1:10～1:100)进行重结晶纯化。过滤后经干燥得到白色晶体状衍生物436.6mg，纯度97.7％，收率78.0％。
所得CsA胺基化衍生物3的质谱及核磁氢谱数据如下：
MS-ESI(m/z):1333.04[M+H]+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.43-7.48(m,4H,-NH-CO-),5.66(m,1H,-NH),5.28(s,1H,-OH),5.23(m,1H,-OH),4.61-4.36(m,12H,-CH),4.05(s,2H,-CH2),3.32-2.94(m,21H,-CH3),2.73-2.46(m,5H,-CH),2.36-2.17(m,14H,-CH2),1.84-1.63(m,6H,-CH3),1.53-1.36(m,7H,-CH,-NH2),1.33-1.29(m,6H,-CH2),1.24(d,3H,-CH3),0.99-0.62(m,42H,-CH3)。
实施例5：CsA胺基化衍生物4的制备
氩气保护下，向50ml无水四氢呋喃中加入CsA环氧化物(500.0mg，0.41mmol)，然后加入1,4-二氨甲基环己烷(加入量与CsA环氧化物摩尔比1:2～1:50)，加热回流8h～40h。反应停止后通过旋转蒸发器减压浓缩除去溶剂，然后加入乙酸乙酯溶解剩余固体，再先后用0.01M的稀盐酸溶液洗涤1～5次，0.1M的氨水洗涤1～3次。有机相经干燥剂干燥，通过旋转蒸发器减压浓缩除去溶剂后再加入少量甲醇，然后再加入一定量纯化水(纯化水与甲醇体积比1:10～1:100)进行重结晶纯化。过滤后经干燥得到白色晶体状衍生物448.6mg，纯度98.8％，收率78.17％。
所得CsA胺基化衍生物4的质谱及核磁氢谱数据如下：
MS-ESI(m/z):1360.88[M+H]+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.43-7.48(m,4H,-NH-CO-),5.66(m,1H,-NH),5.28(s,1H,-OH),5.23(m,1H,-OH),4.61-4.36(m,12H,-CH),4.05(s,2H,-CH2),3.32-2.94(m,21H,-CH3),2.73-2.46(m,5H,-CH),2.42-2.10(m,14H,-CH2),1.87-1.63(m,6H,-CH3),1.56-1.36(m,7H,-CH,-NH2),1.33-1.26(m,10H,-CH2),1.24(d,3H,-CH3),0.99-0.62(m,42H,-CH3)。
实施例6：CsA胺基化衍生物5的制备
氩气保护下，向50ml无水四氢呋喃中加入CsA环氧化物(500.0mg，0.41mmol)，然后加入1,4-二氨甲基环己烷(加入量与CsA环氧化物摩尔比1:2～1:50)，加热回流8h～40h。反应停止后通过旋转蒸发器减压浓缩除去溶剂，然后加入乙酸乙酯溶解剩余固体，再先后用0.01M的稀盐酸溶液洗涤1～5次，0.1M的氨水洗涤1～3次。有机相经干燥剂干燥，通过旋转蒸发器减压浓缩除去溶剂后再加入少量甲醇，然后再加入一定量纯化水(纯化水与甲醇体积比1:10～1:100)进行重结晶纯化。过滤后经干燥得到白色晶体状衍生物448.6mg，纯度97.8％，收率78.77％。
所得CsA胺基化衍生物5的质谱及核磁氢谱数据如下：
MS-ESI(m/z):1354.87[M+H]+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.66(s,2H,-NH2),7.43-7.48(m,4H,-NH),7.27-7.19(m,4H,Ar-H),6.48(m,1H,-NH),5.28(s,1H,-OH),5.23(m,1H,-OH),4.61-4.36(m,12H,-CH),4.26-4.12(m,6H,-CH2),3.32-2.94(m,21H,-CH3),2.73-2.46(m,3H,-CH),2.36-2.17(m,10H,-CH2),1.84-1.63(m,6H,-CH3),1.51-1.38(m,5H,-CH),1.31(m,2H,-CH2),1.24(d,3H,-CH3),0.99-0.62(m,42H,-CH3)。
实施例7：CsA胺基化衍生物在全自动化学发光平台中的应用及检测试剂盒制备
所制备的磁微粒化学发光法检测CsA含量的试剂盒包括：CsA氨基化衍生物标记的CsA酶结合物，包被有CsA抗体的磁微粒悬浮液，含有牛血清白蛋白的样品稀释液、含有梯度浓度CsA的校准品，浓缩型清洗液和发光底物液。
磁微粒混悬液的制备
将粒径1～1.5μm的羧基磁微粒原液充分混匀，取30ul于1.5mL的聚苯乙烯离心管中，并置于磁力架中，用清洗液(0.1mol/L的PBS缓冲液，pH7.4)将磁微粒洗涤5次，最后一次洗涤结束后，加入100μLCouplingReagent(分别取50ul的10mg/mLEDC溶液和10mg/mLNHS溶液，溶于BindingBuffer中)，置于旋转混匀仪中，在室温(18-25℃，下同)条件下旋转反应30分钟。活化反应结束，往离心管中加入5ul抗CsA抗体和95ul的BindingBuffer，再次置于旋转混匀仪中，室温旋转反应2小时。反应结束，用封闭液封闭磁微粒三次，最后一次封闭结束后，用含有0.2％～5％HSA保护蛋白的Tris-HCl缓冲液定容至3ml，于2～8℃冰箱中储存，备用。
样品稀释液的制备
配制Tris-HCl和乙二胺四乙酸二钾的缓冲液中，调pH至7.0～7.8之间，添加0.2％～5％的HSA，50U/ml的尿激酶，0.02％～0.1％的ProClin 300防腐剂混合均匀，于2～8℃冰箱中储存，备用。
酶结合物的制备
配制含有0.2％～5％HSA保护蛋白的Tris-HCl缓冲液，pH值范围7.0～7.8之间；防腐剂：0.02％～0.1％ProClin 300，按1/1500的比例加入辣根过氧化物酶标记的CsA胺基化衍生物酶标抗原，混合均匀，于2～8℃冰箱中储存，备用。
校准品的制备
将市售CsA溶于Tris-HCl缓冲溶液中，制成不同浓度的校准品。以市售CsA校准品为原始标准，采用其CsA试剂盒对不同浓度的校准品分别检测10次，求出均值，得到CsA校准品的浓度：0，40，150，400，800，1500ng/mL。
实施例8：应用测试实验
8.1标准曲线拟合
试剂盒使用时，首先加入25uL校准品，100uL样品稀释液，20uL磁微粒混悬液，100uL酶结合物，37℃条件下反应17min后，用洗液洗涤，然后加入100uL发光底物，避光1分钟内测发光值，进而通过发光值拟合出CsA的浓度。由于CsA胺基化衍生物酶标抗原与校准品中的CsA竞争结合CsA抗体，所以待测样本中CsA的量越多，发光值越低。
选择适当的曲线拟合方式，以校准品浓度值为x轴，以校准品发光值取log值为y轴建立标准曲线(如表1及图1)。本方案选用四参数Logistic曲线拟合方程:y＝(A-D)/[1+(x/C)^B]+D，其中A＝6.53832、B＝0.64706、C＝3772.02443、D＝4.41629、r^2＝0.99997。
取待测血清或血浆样本，同法测定样本的发光值，代入校准曲线，即可计算出待测样本中CsA的含量。如果血清或血浆中CsA的浓度超出校准曲线范围，需对样本进行稀释后再检测以保证检测结果的准确性，结果见表1和图1，结果显示，本发明所提供试剂盒梯度良好。
表1
| 梯度 | 浓度值(X轴) | 发光值(Y轴) |
| S0 | 0 | 3449632 |
| S1 | 40 | 2716013 |
| S2 | 150 | 2005984 |
| S3 | 400 | 1363625 |
| S4 | 800 | 935761 |
| S5 | 1500 | 608140 |
8.2梯度测试
将购于Sigma公司CsA溶解于无水甲醇中，配制成1mg/mL的溶液，将溶液稀释于不含CsA的空白人造血清中，至浓度分别为1500，800,400,150,40,0ng/mL，将上述溶液作为样品进行ELISA实验，结果如表2所示。
表2
由表2结果可知，采用本发明化合物所配制试剂盒准确性较好。
8.3精密性测试
将8.2中配置好的六个人造血清基质CsA样品，分别用实施例7自制的CsA检测试剂盒(磁微粒化学发光法)与市售的CsA检测试剂盒重复测试30次，统计数据精密度(CV％)，结果如表3所示。
表3
由表3结果可知，采用本发明所提供CsA试剂盒精密度明显优于某厂家市售试剂盒，精密性高。
8.4药物干扰试验
选取常见药物进行干扰试验，调整浓度为100ng/mL，采用实施例7自制CsA检测试剂盒和8.3中市售CsA检测试剂盒分别测定上述干扰物，结果如表4所示。
表4
/>
由表4中结果可知，本发明所提供的CsA检测试剂盒与常见干扰物无交叉反应，特异性强。
8.5稳定性试验
将实施例7自制CsA检测试剂盒和8.3中市售CsA检测试剂盒(磁微粒化学发光法)置于37℃，放置7天后进行样本评价验证，统计浓度值降幅情况，结果如表5所示。
表5
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.环孢霉素A衍生物的制备方法，其特征在于，包括：
1）、将CsA溶于第一溶剂中，在氧化剂作用下进行双键环氧化反应，得到式II结构的CsA环氧乙烷化产物；
2）、在第二溶剂中，所述CsA环氧乙烷化产物与烷基二胺通过回流反应进行开环，得到环孢霉素A衍生物；
式II；
所述氧化剂为过氧单磺酸钾；
所述双键环氧化反应和回流反应之后还包括分离纯化的步骤，所述分离纯化包括亚硫酸钠溶液淬灭洗涤、碳酸氢钠溶液脱酸洗涤、结晶中的至少一种；
步骤1）中，所述第一溶剂为二氯甲烷；
所述CsA与氧化剂的摩尔比为1:1～1:15；
所述双键环氧化反应的温度为18℃～30℃；
步骤2）中，所述第二溶剂为四氢呋喃；
所述回流反应时间为8h～40h；
所述烷基二胺为NH2(CH2)nNH2或1,4-环己基二烷基胺，其中，n＝2～7；
所述CsA环氧乙烷化产物与烷基二胺的摩尔比为1:2～1:50。
2.根据权利要求1所述制备方法制得的环孢霉素A衍生物；
所述环孢霉素A衍生物具有式I-2~I-5所示的任意一种结构：
3.权利要求2所述的环孢霉素A衍生物作为半抗原在制备检测CsA的试剂盒中的应用。
4.一种检测CsA的试剂盒，其特征在于，包括酶结合物和其他试剂成分；
所述酶结合物包括酶标记的权利要求2所述的环孢霉素A衍生物；
所述其他试剂成分包括包被有CsA抗体的磁微粒悬浮液、CsA校准品、样品稀释液、清洗液和发光底物液中的至少一种。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述磁微粒悬浮液中磁微粒的浓度为0.1～1.0mg/mL；
所述CsA校准品的浓度为0ng/mL~1500ng/mL；
所述清洗液为含有2% Tween 20、1% Proclin 300 的 pH 7.5 的2M磷酸盐缓冲液；
所述发光底物液为鲁米诺发光底物液或AMPPD发光底物液。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述酶结合物、磁微粒悬浮液和CsA校准品中还包括稀释液；
所述稀释液包括缓冲液、0.02％～0.1％防腐剂和0.2％～5％保护蛋白；
所述保护蛋白为HSA；
所述缓冲液为TRIS、BIS-TRIS、MOPS、TES、HEPES、TAPSO中的至少一种，pH值为7.0～7.8；
所述防腐剂为ProClin 300。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111414181.9A CN114106104B (zh) | 2021-11-25 | 2021-11-25 | 一种环孢霉素a衍生物及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111414181.9A CN114106104B (zh) | 2021-11-25 | 2021-11-25 | 一种环孢霉素a衍生物及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114106104A CN114106104A (zh) | 2022-03-01 |
| CN114106104B true CN114106104B (zh) | 2023-11-03 |
Family
ID=80373124
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111414181.9A Active CN114106104B (zh) | 2021-11-25 | 2021-11-25 | 一种环孢霉素a衍生物及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114106104B (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| HK1039340A1 (zh) * | 1998-10-09 | 2002-04-19 | Isotechnika Inc | 向cyclosporine及cyclosporine代謝產物的特別位置生產抗體的方法 |
| CN102368072A (zh) * | 2011-06-30 | 2012-03-07 | 同昕生物技术（北京）有限公司 | 检测环孢霉素a药物浓度的化学发光酶联免疫检测试剂盒 |
| CN102367270A (zh) * | 2011-06-30 | 2012-03-07 | 同昕生物技术（北京）有限公司 | 环孢霉素a半抗原的制备方法及环孢霉素a的酶联免疫定量检测试剂盒 |
| CN104788560A (zh) * | 2015-05-16 | 2015-07-22 | 苏州博源医疗科技有限公司 | 环孢霉素a免疫原、抗环孢霉素a特异性抗体和环孢霉素a检测试剂 |
-
2021
- 2021-11-25 CN CN202111414181.9A patent/CN114106104B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| HK1039340A1 (zh) * | 1998-10-09 | 2002-04-19 | Isotechnika Inc | 向cyclosporine及cyclosporine代謝產物的特別位置生產抗體的方法 |
| CN102368072A (zh) * | 2011-06-30 | 2012-03-07 | 同昕生物技术（北京）有限公司 | 检测环孢霉素a药物浓度的化学发光酶联免疫检测试剂盒 |
| CN102367270A (zh) * | 2011-06-30 | 2012-03-07 | 同昕生物技术（北京）有限公司 | 环孢霉素a半抗原的制备方法及环孢霉素a的酶联免疫定量检测试剂盒 |
| CN104788560A (zh) * | 2015-05-16 | 2015-07-22 | 苏州博源医疗科技有限公司 | 环孢霉素a免疫原、抗环孢霉素a特异性抗体和环孢霉素a检测试剂 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Zheng-Rong Lu.Modification of Cyclosporin A and Conjugation of Its Derivative to HPMA Copolymers.《Bioconjugate Chem.》.2000,129-133. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114106104A (zh) | 2022-03-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1338320C (en) | Resorufin derivatives | |
| AU634716B2 (en) | Method for detection of an analyte using acridinium esters and liposomes | |
| EP0574782B1 (en) | Dual analyte immunoassay | |
| CN107353200A (zh) | 一种香草扁桃酸衍生物、其合成方法及一种香草扁桃酸免疫原、其制备方法及其应用 | |
| EP0656005B1 (en) | Biotinylated chemiluminescent label, conjugates, assays, assay kits | |
| US5324835A (en) | Pyridazinoquinoxalinones for use as chemiluminescent agents | |
| CN114106104B (zh) | 一种环孢霉素a衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN107973836B (zh) | 醛固酮衍生物及其制备方法、醛固酮均相酶免疫检测试剂 | |
| CN109824599B (zh) | 一种阿苯达唑半抗原及其制备方法和应用 | |
| CN113214132A (zh) | 一种半抗原乙酰碘代甲状腺素活性偶联试剂的制备方法 | |
| EP3483172B1 (en) | Acridine-marker conjugate and preparation method thereof, and chemiluminescence kit | |
| EP2457916A1 (en) | Compound for the covalent attachment of the chemiluminescent probe N-(4-Aminobutyl)-N-ethylisoluminol (ABEI) to target molecules and uses thereof | |
| CN113238055A (zh) | 空间邻近化学发光法检测降钙素原的试剂盒及其检测方法和应用 | |
| CN110603059B (zh) | 化学发光雄烯二酮缀合物 | |
| WO2018006264A1 (zh) | 吖啶标记结合物及其制备方法、化学发光试剂盒 | |
| CN110869382B (zh) | 甾体类衍生物fxr激动剂的结晶或无定型物、其制备方法和用途 | |
| CN110954707B (zh) | 丙戊酸衍生物及其在免疫检测中的用途 | |
| JPH06316599A (ja) | ジフェンヒドラミンおよびその代謝産物の免疫学的測定のための組成物および方法 | |
| CN115536566B (zh) | 化学交联剂、其制备方法及应用 | |
| WO2024104186A1 (zh) | 化合物及其制备方法和封闭剂 | |
| CN111518005B (zh) | 一种中间体化合物及其制备方法和应用 | |
| CN108181460B (zh) | 用于血管紧张素ⅰ检测的二肽衍生物及其制备方法和应用 | |
| US5151517A (en) | Derivatives of tetrahydro-2,3,6,7,1h,5h,11h-(1)benzopyrano(6,7,8,i,j)quinolizinone-11 usable as markers for organic compounds, particularly biological compounds with a view to their detection by chemiluminescence or fluorescence | |
| JPH04120058A (ja) | モノエチルグリシンキシリジド誘導体および類似体およびその製法および用途 | |
| CN114920696A (zh) | 奥卡西平代谢物的半抗原衍生物、人工抗原和单克隆抗体及其应用、杂交瘤细胞株 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |