CN114088500A - 一体化试剂盒和二次染色方法 - Google Patents
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Abstract
一体化试剂盒和二次染色方法中，其中的一体化试剂盒包括试剂存放及混合液制备区和平铺区；平铺区用于镜检中待观察样本混合液的盛放和平铺；试剂存放及混合液制备区，用于样本处理试剂的存放和样本处理；在第一状态下，试剂存放及混合液制备区存放用于样本处理的试剂；在第二状态下，试剂存放及混合液制备区，用于接受从外部输入的样本并在试剂存放及混合液制备区对样本进行处理；在第三状态下，经过处理后的样本混合液从试剂存放及混合液制备区进入平铺区平铺。试剂盒结构简单巧妙，非常方便进行高效的样品二次染色，操作简单效率高，适用于大批量的样本处理。
Description
技术领域
本申请属于一体化试剂装置领域，尤其涉及进行二次以上样本处理的试剂装置和方法。
背景技术
将待观察样本制作成样本混合液进行观察，是样本检验中的常规操作。在一些比较复杂的样本处理过程中需要用到多种试剂按步骤进行样本处理。
现有技术中，通常多种试剂会单独存放在不同的容器中，需要操作者从不同位置的不同容器中取出相应成份的试剂进行样本处理。操作效率低，且在试剂具有相似性的时候，对步骤管理的要求比较高。
即使制备好了样本混合液也需要将制备好的样本混合液转移到专用的承载装置如玻片上用于镜检观察，转移的过程也需要严格管理转移的样本混合液容量以及转移时间，对操作者和相关装置的要求都比较高，且整个过程繁琐，效率低，无法进行批量化的操作和应用。
生物体体液的细胞检测中，为区分体液或分泌物中的细胞种类、形态和状态，通常采用细胞染色技术来区分不同种类、不同形态、不同状态的细胞。为了有较好的染色效果，需要多种试剂以合适的时序进行染色步骤。且制备好染色后的样本混合液后需要尽快用于观察。而采用上述现有技术中的装备和步骤，不仅步骤极其繁琐耗时，且每个步骤的操作都需训练有素的专业操作者，才能制作出合格的观测样本，中间任意一个环节出现状况都可能影响后续的观察效果。现有技术中的染色效率极低，无法大批量进行样本细胞染色。
发明内容
本申请要解决的技术问题在于避免现有技术上述不足之处，提出了一种简单高效的一体化试剂盒和二次染色方法，适用于大规模批量操作的样本处理包括样本的二次染色。
本申请解决上述问题的技术方案是一种一体化试剂盒，包括试剂存放及混合液制备区和平铺区；平铺区，用于镜检中待观察样本混合液的盛放和平铺；试剂存放及混合液制备区，用于样本处理试剂的存放和样本处理；在第一状态下，试剂存放及混合液制备区存放用于样本处理的试剂；在第二状态下，试剂存放及混合液制备区，用于接受从外部输入的样本并在试剂存放及混合液制备区对样本进行处理；在第三状态下，经过处理后的样本混合液从试剂存放及混合液制备区进入平铺区平铺。
一体化的试剂盒，不仅能用于试剂存放，还能利用试剂进行样本混合液的处理制备，同时还能将制备好的样本混合液平铺，集合三种功能于一身。大大提高了处理制备样本混合液的效率，避免了取用称量各种试剂的步骤，也避免了各种不同试剂应用时序上管理工作，且样本混合液能即配即用地进入观察区，使观察区能尽快获得新鲜的样本混合液用于观察。极大地提高了样本混合液制备的过程效率和应用效率。
试剂存放及混合液制备区的一侧设置有封口膜；封口膜用于密封试剂存放及混合液制备区；在第二状态下，外部采样装置突破封口膜，使待处理样品进入试剂存放及混合液制备区进行样本处理。
封口膜使试剂能密封存放，可以有尽量长的保质期。
所述一体化试剂盒还包括采样装置，采样装置包括采样装置主体和采样嘴；采样嘴设置在采样装置主体的一端，采样嘴用于将外部样品装入采样装置内；采样嘴还用于突破封口膜，将采样获取的外部样品送入试剂存放及混合液制备区。
封口膜和采样嘴互相配合地设置，使采样装置能方便突破，进行样本混合液制备。
采样装置主体的外壁上设置有定位环；在第二状态下，当采样装置突破封口膜时，定位环用于定位采样装置主体进入到端部容置空间的深度，同时定位环用于替代封口膜的作用，将端部容置空间与外界隔离。
定位环可以定位进入的深度，确保每一次采样装置进入的空间都是可预期的，避免了进入不到位或者超过定位的情况，确保样本混合液配制过程的可靠性。且定位环确保在样本混合液制备过程中的密封性，使其定量准确，不会漏液。
试剂存放及混合液制备区包括底部容置空间和端部容置空间；平铺区和底部容置空间之间连通；底部容置空间和端部容置空间之间设置有隔断。
不同的空间用于存放不同步骤中需要用到的试剂，简化了样本混合液制备流程。
在第一状态下，底部容置空间空置，端部容置空间用于容置样本处理试剂；在第二状态下，端部容置空间用于接受从外部输入的样本并在端部容置空间对样本进行处理；在第三状态下，经过处理后的样本混合液从端部容置空间进入底部容置空间，经由底部容置空间进入平铺区。
预留的底部容置空间，可以用作试剂存放和制备区和观察区之间的缓冲空间，缓冲空间有利于样本混合液的混合均匀，且更快速进入观察区，并能使观察区尽快平稳用于观察。
在第一状态下，底部容置空间和端部容置空间各自独立存储用于样本处理的试剂；端部容置空间，用于容置初始试剂,初始试剂用于样本第一次处理；底部容置空间，用于容置终试试剂，终试试剂用于样本的末次处理；在第二状态下，端部容置空间用于接受从外部输入的样本并在端部容置空间对样本进行第一次处理；经过第一次处理后的样本混合液从端部容置空间进入底部容置空间进行样本的末次处理；在第三状态下，经过样本的末次处理后的样本混合液从底部容置空间进入平铺区。
底部容置空间和端部容置空间之间还设置有至少一个中间容置空间，中间容置空间用于容置中间试剂,中间试剂用于中间样本处理；中间容置空间和端部容置空间之间设置有第一隔断；中间容置空间和底部容置空间之间设置有第二隔断；在第一状态下，一体化试剂盒纵向放置，底部容置空间、中间容置空间和端部容置空间各自独立存储用于样本处理的试剂；在第二状态下，外部样本依次突破封口膜、第一隔断和第二隔断，使样本依次进入端部容置空间、中间容置空间和底部容置空间中依次完成样本的初始处理、中间次处理和末次处理。
各个空间都存放试剂，可以使能存放的试剂种类增多，能适应需要更多种试剂参与的样本混合液制备过程。
所述一体化试剂盒还包括采样装置，采样装置包括采样装置主体和采样嘴；采样嘴设置在采样装置主体的一端，采样嘴用于将外部样品装入采样装置内；采样嘴还将采样获得的样本送入端部容置空间、中间容置空间和底部容置空间；采样装置主体的外壁上设置有第一定位环、第二定位环和第三定位环；在第二状态下，当外部采样装置突破封口膜时，第一定位环用于定位采样装置主体进入到端部容置空间的深度，同时第一定位环用于替代封口膜的作用，将端部容置空间与外界隔离；当外部采样装置突破第一隔断时，第二定位环用于定位采样装置主体进入到中间容置空间的深度，同时第二定位环用于替代封口膜的作用，将端部容置空间与外界隔离；当外部采样装置突破第二隔断时，第三定位环用于定位采样装置主体进入到底部容置空间的深度，同时第三定位环用于替代封口膜的作用，将端部容置空间与外界隔离。
端部容置空间一侧的靠近封口膜的内壁上还设置有密封圈凹槽，密封圈凹槽内嵌有密封圈，当采样装置依次往里推进时，第一定位环、第二定位环或第三定位环中的任意一个和端部容置空间之间通过密封圈密封。
密封圈进一步地保证了采样装置进入后，试剂存放和混合液制备区相对外部的密封性，确保了试剂存放和制备过程的密封性。
所述采样装置为定量采样装置，定量采样的容量范围是5ul～15ul。
端部容置空间的容量范围是50ul～3000ul。
底部容置空间的容量范围是50ul～1000ul。
中间容置空间的容量范围是50ul～1000ul。
定量采样装置和定容的各空间配合，定容空间中可以存放定容的试剂，免除了各个步骤单独称量试剂的步骤，且各个步骤由于各个空间的巧妙设置，能通过推进采样装置就能依次完成各个步骤，极大地提高了样本混合液制备的过程效率。
底部容置空间和端部容置空间之间还设置有多个中间容置空间；多个中间容置空间相邻设置，且多个中间容置空间作为整体设置在端部容置空间和底部容置空间之间，多个中间容置空间用于存放多种不同的处理试剂；端部容置空间和中间容置空间之间设置有第一隔断，各中间容置空间之间设置有中间隔断，中间容置空间和底部容置空间之间设置有第末隔断；在第一状态下，一体化试剂盒纵向放置；底部容置空间、多个中间容置空间和端部容置空间各自独立存储用于样本处理的试剂；在第二状态下，一体化试剂盒纵向放置，外部样本依次突破封口膜、第一隔断、中间隔断和第末隔断，使样本在依次进入端部容置空间、多个中间容置空间和底部容置空间中依次完成样本的初始处理、中间多次处理和末次处理。
所述一体化试剂盒还包括采样装置，采样装置包括采样装置主体和采样嘴；采样嘴设置在采样装置主体的一端，采样嘴用于将外部样品装入采样装置内；采样嘴还将采样获得的样本依次送入端部容置空间、多个中间容置空间和底部容置空间；采样装置主体的外壁上设置有第一定位环、多个中间定位环和第末定位环；在第二状态下，当外部采样装置突破封口膜时，第一定位环用于定位采样装置主体进入到端部容置空间的深度，同时第一定位环用于替代封口膜的作用，将端部容置空间与外界隔离；当外部采样装置突破第一隔断时，中间定位环用于定位采样装置主体进入到中间容置空间的深度，同时中间定位环用于替代封口膜的作用，将端部容置空间与外界隔离；当外部采样装置突破第末隔断时，第末定位环用于定位采样装置主体进入到底部容置空间的深度，同时第末定位环用于替代封口膜的作用，将端部容置空间与外界隔离。
端部容置空间一侧的靠近封口膜的内壁上还设置有密封圈凹槽，密封圈凹槽内嵌有密封圈，当采样装置依次往里推进时，第一定位环、中间定位环或第末定位环中的任意一个和端部容置空间之间通过密封圈密封。
所述采样装置为定量采样装置；端部容置空间的容量、中间容置空间量的容量以及底部容置空间的容量与定量采样装置的容量相匹配。
对定量样本进行定量稀释的时候，端部容置空间、中间容置空间量以及底部容置空间中可以存满试剂，也可以不存满试剂；端部容置空间、中间容置空间量以及底部容置空间的空间要足以完成定量采样装置中定量样本的处理即可。也就是端部容置空间、中间容置空间量以及底部容置空间的容量至少要大于等于需要存放的最小试剂用量。
本申请解决上述问题的技术方案还可以是一种二次染色方法，用于生物样本中细胞的二次染色处理，是基于上述一体化试剂盒；端部容置空间中的初始试剂是用于第一次样本染色处理的第一染色试剂；底部容置空间中的终试试剂是用于第二次样本染色处理的第二染色试剂；所述细胞二次染色方法包括以下步骤：步骤一：用采样装置进行待染色样本的定量采样；步骤二：利用步骤一中的采样装置，将定量的待染色样本送入端部容置空间进行第一次染色，在一体化试剂盒的第二状态下，使样本和第一染色试剂混合均匀，即完成第一次染色；步骤三：利用步骤二中的采样装置，将第一染色处理后的混合液送入底部容置空间，在一体化试剂盒的第二状态下，使第一染色处理后的混合液与底部容置空间内的第二染色试剂混合均匀，即完成第二次染色。
本申请解决上述问题的技术方案还可以是一种二次染色方法，用于生物样本中细胞的二次染色处理，是基于上述一体化试剂盒；端部容置空间中的初始试剂是用于第一次样本稀释处理的稀释剂；中间容置空间中的中间试剂是用于第一样本染色处理的第一染色试剂；底部容置空间中的终试试剂是用于第二次样本染色处理的第二染色试剂；所述细胞二次染色方法包括以下步骤：步骤一：用采样装置进行待染色样本的定量采样；步骤二：利用步骤一中的采样装置，将定量的待染色样本送入端部容置空间进行稀释处理；在一体化试剂盒的第二状态下，使样本和稀释剂混合均匀，即完成稀释步骤，获得稀释后的样本液；步骤三：利用步骤二中的采样装置，将稀释后的样本液送入中间容置空间进行第一次染色，在一体化试剂盒的第二状态下，使稀释后的样本液和第一染色试剂混合均匀，即完成第一次染色，获得第一染色处理后的混合液；步骤四：利用步骤三中的采样装置，将第一染色处理后的混合液送入底部容置空间进行第二染色，在一体化试剂盒的第二状态下，使第一染色处理后的混合液和第二染色试剂混合均匀，即完成第二次染色。
同现有技术相比较，本申请的有益效果是：1.巧妙的一体化试剂盒结构设计，试剂存放、样本处理、样本平铺三个功能同时综合在一起，各步骤的操作都集中在一个试剂盒中完成，集成化程度高，染色效率高；2.定量采样装置和定容的试剂存放空间，免除了称量过程，提高了过程效率；3.按一定顺序依次设置的试剂存放空间，能非常方便地利用采样装置按步骤依次进行多步骤的样本处理过程，进一步提高过程效率。
附图说明
图1是一体化试剂盒和采样装置分解状态下的展示其配合关系的轴测投影示意图；
图2是采样装置的轴测投影示意图；
图3是采样装置的俯视正投影示意图；
图4是图3的AA剖视示意图；
图5是一体化试剂盒在采样装置插入一体化试剂盒时的轴测投影示意图；
图6是一体化试剂盒和采样装置在组合状态下的后视正投影示意图；
图7是图6的BB剖视示意图；
图8是采样装置还没有插入一体化试剂盒的状态，且一体化试剂盒处在立起来的纵向直立状态；通常在一体化试剂盒封装好之后，会处在纵向放置状态；当然，当底部容置空间在初始时候为空置，即其中不预埋试剂时，对一体化试剂盒的放置状态没有要求；当底部容置空间存有试剂，但是流出孔和回流孔中设置有封闭管路的单向阀或其他截流装置时，对一体化试剂盒的放置状态也没有要求；当底部容置空间存有试剂，且流出孔和回流孔中没有设置用于封闭管路的截流装置时，对一体化试剂盒的放置状态有要求，必须纵向放置状态；
图9是采样装置插入一体化试剂盒的状态，且一体化试剂盒处在立起来的纵向直立状态；且在该状态下进行样本和试剂的混合；
图10是采样装置插入一体化试剂盒的状态，且一体化试剂盒处在横向平放状态；该状态下底部容置空间中的液体会流向平铺区。
具体实施方式
以下结合各附图对本申请的实施方式做进一步详述。
如图5至图7所示一体化试剂盒的实施例中，包括试剂存放及混合液制备区100和平铺区200；试剂存放及混合液制备区100和平铺区200共同设置在一个基台900上。平铺区200，用于镜检中待观察样本混合液的盛放和平铺；试剂存放及混合液制备区100，用于样本处理试剂的存放和样本处理；在第一状态下，试剂存放及混合液制备区100存放用于样本处理的试剂；在第二状态下，试剂存放及混合液制备区100，用于接受从外部输入的样本并在试剂存放及混合液制备区对样本进行处理；在第三状态下，经过处理后的样本混合液从试剂存放及混合液制备区100进入平铺区200。
如图1所示一体化试剂盒的实施例中，底部容置空间130和端部容置空间110之间还设置有一个中间容置空间120，中间容置空间120用于容置中间试剂,中间试剂用于样本中间处理；只设置有一个中间容置空间120时，中间容置空间120和端部容置空间110之间设置有第一隔断121；中间容置空间120和底部容置空间130之间设置有第二隔断131；在第一状态下，一体化试剂盒纵向放置；底部容置空间130、中间容置空间120和端部容置空间110各自独立存储用于样本处理的试剂；在第二状态下，一体化试剂盒纵向放置，外部样本依次突破封口膜、第一隔断121和第二隔断131，使样本依次进入端部容置空间110、中间容置空间120和底部容置空间130中依次完成样本的初始处理、中间次处理和末次处理。图1中标号160是罩覆在底部容置空间130、中间容置空间120和端部容置空间110 上的一个上盖。图中这样分解是为了展示各个空间之间的关系，并不应被理解为各个空间因此是互相连通的。各个空间在存放试剂期间是各自独立的空间，只在制备样本混合液时，通过采样装置的带入进行各个区域之间存放试剂或液体的混合。即底部容置空间130、中间容置空间120和端部容置空间只在配制过程中需要的时候才会互相连通。
在一些附图中未显示的实施例中，试剂存放及混合液制备区可以只包括底部容置空间130和端部容置空间110；平铺区200和底部容置空间130之间连通；底部容置空间130和端部容置空间110之间设置有隔断。在第一状态下，底部容置空间130空置；在第二状态下，端部容置空间110用于接受从外部输入的样本并在端部容置空间110对样本进行处理；在第三状态下，经过处理后的样本混合液从端部容置空间110进入底部容置空间130，经过处理后的样本混合液会从底部容置空间130进入平铺区200。
在一些附图中未显示的实施例中，端部容置空间和底部容置空间之间设置有多个中间容置空间时，多个中间容置空间相邻设置，且多个中间容置空间作为整体设置在端部容置空间和底部容置空间之间，多个中间容置空间用于存放多种不同的处理试剂；端部容置空间和中间容置空间之间设置有第一隔断，各中间容置空间之间设置有中间隔断，中间容置空间和底部容置空间之间设置有第二隔断；在第一状态下，一体化试剂盒纵向放置；底部容置空间、多个中间容置空间和端部容置空间各自独立存储用于样本处理的试剂；在第二状态下，一体化试剂盒纵向放置，外部样本依次突破封口膜、第一隔断、中间隔断和第二隔断，使样本在依次进入端部容置空间、多个中间容置空间和底部容置空间中依次完成样本的初始处理、中间多次处理和末次处理。在第一状态下，底部容置空间和端部容置空间各自独立存储用于样本处理的试剂；底部容置空间，用于容置终试试剂，终试试剂用于样本的末次处理；端部容置空间，用于容置初始试剂,初始试剂用于样本第一次处理；在第二状态下，端部容置空间用于接受从外部输入的样本并在端部容置空间对样本进行第一次处理；经过第一次处理后的样本混合液从端部容置空间进入底部容置空间进行第二次处理；在第三状态下，经过第二次处理后的样本混合液从底部容置空间进入平铺区。
多个中间容置空间使一体化试剂盒能适用于需要使用多种试剂分步骤进行处理的场景，使一体化试剂盒能适用于更复杂的应用场合。
如图1所示一体化试剂盒的实施例中，试剂存放及混合液制备区的一侧设置有封口膜111；封口膜111通过封口膜固定圈115固定在试剂存放及混合液制备区的外侧壁上；封口膜111用于密封试剂存放及混合液制备区；在第二状态下，外部采样装置300突破封口膜111，使待处理样品进入试剂存放及混合液制备区进行样本处理。
如图1所示一体化试剂盒的实施例中，平铺区200包括承载主体210；承载主体210上设置有下沉空间，下沉空间用于容置样本混合液，下沉空间中设置有观察区；在第三状态,处理后样本混合液从试剂存放及混合液制备区100流入下沉空间中的观察区；观察区用于待观察样本混合液的平铺，形成镜检用的观察视野。承载主体210和所述试剂存放及混合液制备区100被固定在同一安装面即基台900上；在第三状态下，一体化试剂盒横向放置；横向放置后，试剂或多次处理后的样本混合液在重力作用下自动流入平铺区200。
如图2至图7所示一体化试剂盒的实施例中，还包括采样装置300，采样装置300包括采样装置主体320、采样嘴310；采样嘴310设置在采样装置主体320的一端，采样嘴310用于将外部样品装入采样装置300内。采样嘴310还用于突破封口膜111，将采样获得的样本送入试剂存放及混合液制备区100。采样嘴310还将采样获得的样本送入端部容置空间110、中间容置空间120和底部容置空间130；采样装置主体320的外壁上设置有第一定位环321、第二定位环322和第三定位环323；在第二状态下，当外部采样装置300突破封口膜111时，第一定位环321用于定位采样装置主体320进入到端部容置空间110的深度，同时第一定位环321用于替代封口膜111的作用，将端部容置空间110与外界隔离；当外部采样装置300突破第一隔断121时，第二定位环322用于定位采样装置主体320进入到中间容置空间120的深度，同时第二定位环323用于替代封口膜111的作用，将试剂存放及混合液制备区100与外界隔离；当外部采样装置300突破第二隔断131时，第三定位环323用于定位采样装置主体320进入到底部容置空间130的深度，同时第三定位环323用于替代封口膜111的作用，将试剂存放及混合液制备区100与外界隔离。
如图2至图7所示一体化试剂盒的实施例中，采样装置300还包括手柄325和限位环324，手柄325设置在采样装置主体320未设置采样嘴310的一端；手柄用于推动或转动采样装置主体320；限位环324设置在手柄325和第三定位环323之间，用于限制采样装置300整体进入试剂存放及混合液制备区100的深度。
如图2至图7所示一体化试剂盒的实施例中，端部容置空间110一侧的靠近封口膜的内壁上还设置有密封圈凹槽180，密封圈凹槽180内嵌有密封圈150，当采样装置依次往里推进时，第一定位环321、第二定位环322或第三定位环323中的任意一个和端部容置空间110之间通过密封圈150密封。
在一些附图中未显示的实施例中，采样装置为定量采样装置，定量采样的容量范围是5ul(微升)至15ul。定量采样的容量范围还可以是7.5ul至10ul。端部容置空间110的容量范围是50ul～3000ul。底部容置空间130的容量范围是50ul～1000ul。中间容置空间120的容量范围是50ul～1000ul。端部容置空间110、中间容置空间120和底部容置空间130这三个空间的大小可以根据需要放置的试剂容量大小进行合理设置；端部容置空间110、中间容置空间120和底部容置空间130可以预留一定的空间，并不装满试剂；当然端部容置空间110、中间容置空间120和底部容置空间130也可以装满试剂；各空间的大小会大于等于必须要容纳的试剂体积。端部容置空间110、中间容置空间120和底部容置空间130中容置的各试剂的体积和定量采样装置的采样量匹配。
如图1所示一体化试剂盒的实施例中，下沉空间是横截面为方形的空间；下沉空间上方设置有盖片290；盖片形状和盖片尺寸和下沉空间的形状和尺寸相应，能嵌入式地覆盖在下沉空间上。盖片290嵌合在下沉空间的上方，使盖片290罩覆下的下沉空间230形成密封的空间，用于待观察样本混合液的盛放和平铺。
在一些附图中未显示的一种二次染色方法的实施例中，是基于上述的一体化试剂盒；端部容置空间中的初始试剂是用于第一次样本染色处理的第一染色试剂；底部容置空间中的终试试剂是用于第二次样本染色处理的第二染色试剂；所述细胞二次染色方法包括以下步骤：步骤一：用采样装置进行待染色样本的定量采样；步骤二：利用步骤一中的采样装置，将定量的待染色样本送入端部容置空间进行第一次染色，在一体化试剂盒的第二状态下，使样本和第一染色试剂混合均匀，即完成第一次染色；步骤三：利用步骤二中的采样装置，将第一染色处理后的混合液送入底部容置空间，在一体化试剂盒的第二状态下，使第一染色处理后的混合液与底部容置空间内的第二染色试剂混合均匀，即完成第二次染色。
在一些附图中未显示的一种二次染色方法的实施例中，是基于如图1或图7所示的一体化试剂盒；端部容置空间110中的初始试剂是用于第一次样本稀释处理的稀释剂；中间容置空间120中的中间试剂是用于第一样本染色处理的第一染色试剂；底部容置空间130中的终试试剂是用于第二次样本染色处理的第二染色试剂；所述细胞二次染色方法包括以下步骤：步骤一：用采样装置300进行待染色样本的定量采样；步骤二：利用步骤一中的采样装置，将定量的待染色样本送入端部容置空间进行稀释处理；在一体化试剂盒的第二状态下，使样本和稀释剂混合均匀，即完成稀释步骤；步骤三：利用步骤二中的采样装置，将稀释处理后的待染色样本送入中间容置空间进行第一次染色，在一体化试剂盒的第二状态下，使稀释处理后的待染色样本和第一染色试剂混合均匀，即完成第一次染色；步骤四：利用步骤三中的采样装置，将第一染色处理后的混合液送入底部容置空间进行第二染色，在一体化试剂盒的第二状态下，使第一染色处理后的混合液和第二染色试剂混合均匀，即完成第二次染色。
本申请中，待染色样本中的细胞是在液态的悬浮液中完成染色过程，且用于染色液及稀释液的环境为比较接近细胞生理状态，因此在染色过程中，细胞活性保持的较好，一方面能利用细胞与溶液中染料分子共同的布朗运动，及静电作用力，进行染色反应，染色速度更快，效率更高。
本申请中，1.巧妙的一体化试剂盒结构设计，试剂存放、样本处理、样本平铺三个功能同时综合在一起，各步骤的操作都集中在一个试剂盒中完成，集成化程度高，染色效率高；2.巧妙的结构设计，使染色后样品能借助重力快速流向平铺区；3.定量采样装置和定容的试剂存放空间，免除了称量过程，提高了过程效率；样品染色试剂和样品之间的配比的比率设定合理，且通过设置定容的试剂存放空间即可完成各种不同试剂的配比，简单高效；4.按一定顺序依次设置的试剂存放空间，能非常方便地利用采样装置按步骤依次进行多步骤的样本处理过程，提高了效率。
本申请提供的试剂盒和二次染色方法，操作简单、对操作者的要求不高、染色均匀、耗时短，能实现傻瓜化的染色过程；避免了现有技术中细胞染色操作繁琐，专业要求高，耗时长，易染色不均的不足之处。染色操作简单，能实现傻瓜式的染色操作，使其适用于多种应用场景。如即时检验这样的场景，也适用于急救、床边，战地等多种缺乏大型专业设备、专业人员及复杂检验环境的应用场景。
以上所述仅为本申请的实施例，并非因此限制本申请的专利范围，凡是利用发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本申请的专利保护范围内。
Claims (20)
1.一种一体化试剂盒，其特征在于，
包括试剂存放及混合液制备区和平铺区；
平铺区，用于镜检中待观察样本混合液的盛放和平铺；
试剂存放及混合液制备区，用于样本处理试剂的存放和样本处理；
在第一状态下，试剂存放及混合液制备区存放用于样本处理的试剂；
在第二状态下，试剂存放及混合液制备区，用于接受从外部输入的样本并在试剂存放及混合液制备区对样本进行处理；
在第三状态下，经过处理后的样本混合液从试剂存放及混合液制备区进入平铺区平铺。
2.根据权利要求1所述一体化试剂盒，其特征在于，
试剂存放及混合液制备区的一侧设置有封口膜；封口膜用于密封试剂存放及混合液制备区；
在第二状态下，外部采样装置突破封口膜，使待处理样品进入试剂存放及混合液制备区进行样本处理。
3.根据权利要求2所述一体化试剂盒，其特征在于，
还包括采样装置，采样装置包括采样装置主体和采样嘴；
采样嘴设置在采样装置主体的一端，采样嘴用于将外部样品装入采样装置内；
采样嘴还用于突破封口膜，将采样获取的外部样品送入试剂存放及混合液制备区。
4.根据权利要求3所述一体化试剂盒，其特征在于，
采样装置主体的外壁上设置有定位环；
在第二状态下，当采样装置突破封口膜时，定位环用于定位采样装置主体进入到端部容置空间的深度，同时定位环用于替代封口膜的作用，将端部容置空间与外界隔离。
5.根据权利要求1所述一体化试剂盒，其特征在于，
试剂存放及混合液制备区包括底部容置空间和端部容置空间；
平铺区和底部容置空间之间连通；
底部容置空间和端部容置空间之间设置有隔断。
6.根据权利要求5所述一体化试剂盒，其特征在于，
在第一状态下，底部容置空间空置，端部容置空间用于容置样本处理试剂；
在第二状态下，端部容置空间用于接受从外部输入的样本并在端部容置空间对样本进行处理；
在第三状态下，经过处理后的样本混合液从端部容置空间进入底部容置空间，经由底部容置空间进入平铺区。
7.根据权利要求5所述一体化试剂盒，其特征在于，
在第一状态下，底部容置空间和端部容置空间各自独立存储用于样本处理的试剂；端部容置空间，用于容置初始试剂,初始试剂用于样本第一次处理；底部容置空间，用于容置终试试剂，终试试剂用于样本的末次处理；
在第二状态下，端部容置空间用于接受从外部输入的样本并在端部容置空间对样本进行第一次处理；经过第一次处理后的样本混合液从端部容置空间进入底部容置空间进行样本的末次处理；
在第三状态下，经过样本的末次处理后的样本混合液从底部容置空间进入平铺区。
8.根据权利要求5所述一体化试剂盒，其特征在于，
底部容置空间和端部容置空间之间还设置有至少一个中间容置空间，中间容置空间用于容置中间试剂,中间试剂用于中间样本处理；
中间容置空间和端部容置空间之间设置有第一隔断；中间容置空间和底部容置空间之间设置有第二隔断；
在第一状态下，一体化试剂盒纵向放置，底部容置空间、中间容置空间和端部容置空间各自独立存储用于样本处理的试剂；
在第二状态下，外部样本依次突破封口膜、第一隔断和第二隔断，使样本依次进入端部容置空间、中间容置空间和底部容置空间中依次完成样本的初始处理、中间次处理和末次处理。
9.根据权利要求8所述一体化试剂盒，其特征在于，
还包括采样装置，采样装置包括采样装置主体和采样嘴；
采样嘴设置在采样装置主体的一端，采样嘴用于将外部样品装入采样装置内；采样嘴还将采样获得的样本送入端部容置空间、中间容置空间和底部容置空间；
采样装置主体的外壁上设置有第一定位环、第二定位环和第三定位环；
在第二状态下，当外部采样装置突破封口膜时，第一定位环用于定位采样装置主体进入到端部容置空间的深度，同时第一定位环用于替代封口膜的作用，将端部容置空间与外界隔离；
当外部采样装置突破第一隔断时，第二定位环用于定位采样装置主体进入到中间容置空间的深度，同时第二定位环用于替代封口膜的作用，将端部容置空间与外界隔离；
当外部采样装置突破第二隔断时，第三定位环用于定位采样装置主体进入到底部容置空间的深度，同时第三定位环用于替代封口膜的作用，将端部容置空间与外界隔离。
10.根据权利要求9所述一体化试剂盒，其特征在于，
端部容置空间一侧的靠近封口膜的内壁上还设置有密封圈凹槽，密封圈凹槽内嵌有密封圈，当采样装置依次往里推进时，第一定位环、第二定位环或第三定位环中的任意一个和端部容置空间之间通过密封圈密封。
11.根据权利要求9所述一体化试剂盒，其特征在于，
所述采样装置为定量采样装置，定量采样的容量范围是5ul～15ul。
12.根据权利要求11所述一体化试剂盒，其特征在于，
端部容置空间的容量范围是50ul～3000ul。
13.根据权利要求11所述一体化试剂盒，其特征在于，
底部容置空间的容量范围是50ul～1000ul。
14.根据权利要求11所述一体化试剂盒，其特征在于，
中间容置空间的容量范围是50ul～1000ul。
15.根据权利要求5所述一体化试剂盒，其特征在于，
底部容置空间和端部容置空间之间还设置有多个中间容置空间；
多个中间容置空间相邻设置，且多个中间容置空间作为整体设置在端部容置空间和底部容置空间之间，多个中间容置空间用于存放多种不同的处理试剂；
端部容置空间和中间容置空间之间设置有第一隔断，各中间容置空间之间设置有中间隔断，中间容置空间和底部容置空间之间设置有第末隔断；
在第一状态下，一体化试剂盒纵向放置；底部容置空间、多个中间容置空间和端部容置空间各自独立存储用于样本处理的试剂；
在第二状态下，一体化试剂盒纵向放置，外部样本依次突破封口膜、第一隔断、中间隔断和第末隔断，使样本在依次进入端部容置空间、多个中间容置空间和底部容置空间中依次完成样本的初始处理、中间多次处理和末次处理。
16.根据权利要求15所述一体化试剂盒，其特征在于，
还包括采样装置，采样装置包括采样装置主体和采样嘴；
采样嘴设置在采样装置主体的一端，采样嘴用于将外部样品装入采样装置内；采样嘴还将采样获得的样本依次送入端部容置空间、多个中间容置空间和底部容置空间；
采样装置主体的外壁上设置有第一定位环、多个中间定位环和第末定位环；
在第二状态下，当外部采样装置突破封口膜时，第一定位环用于定位采样装置主体进入到端部容置空间的深度，同时第一定位环用于替代封口膜的作用，将端部容置空间与外界隔离；
当外部采样装置突破第一隔断时，中间定位环用于定位采样装置主体进入到中间容置空间的深度，同时中间定位环用于替代封口膜的作用，将端部容置空间与外界隔离；
当外部采样装置突破第末隔断时，第末定位环用于定位采样装置主体进入到底部容置空间的深度，同时第末定位环用于替代封口膜的作用，将端部容置空间与外界隔离。
17.根据权利要求16所述一体化试剂盒，其特征在于，
端部容置空间一侧的靠近封口膜的内壁上还设置有密封圈凹槽，密封圈凹槽内嵌有密封圈，当采样装置依次往里推进时，第一定位环、中间定位环或第末定位环中的任意一个和端部容置空间之间通过密封圈密封。
18.根据权利要求16所述一体化试剂盒，其特征在于，
所述采样装置为定量采样装置；端部容置空间的容量、中间容置空间量的容量以及底部容置空间的容量与定量采样装置的容量相匹配。
19.一种二次染色方法，用于生物样本中细胞的二次染色处理，其特征在于，是基于上述权利要求7所述一体化试剂盒；
端部容置空间中的初始试剂是用于第一次样本染色处理的第一染色试剂；底部容置空间中的终试试剂是用于第二次样本染色处理的第二染色试剂；
所述细胞二次染色方法包括以下步骤：
步骤一：用采样装置进行待染色样本的定量采样；
步骤二：利用步骤一中的采样装置，将定量的待染色样本送入端部容置空间进行第一次染色，在一体化试剂盒的第二状态下，使样本和第一染色试剂混合均匀，即完成第一次染色；
步骤三：利用步骤二中的采样装置，将第一染色处理后的混合液送入底部容置空间，在一体化试剂盒的第二状态下，使第一染色处理后的混合液与底部容置空间内的第二染色试剂混合均匀，即完成第二次染色。
20.一种二次染色方法，用于生物样本中细胞的二次染色处理，其特征在于，是基于上述权利要求8所述一体化试剂盒；
端部容置空间中的初始试剂是用于第一次样本稀释处理的稀释剂；
中间容置空间中的中间试剂是用于第一样本染色处理的第一染色试剂；
底部容置空间中的终试试剂是用于第二次样本染色处理的第二染色试剂；
所述细胞二次染色方法包括以下步骤：
步骤一：用采样装置进行待染色样本的定量采样；
步骤二：利用步骤一中的采样装置，将定量的待染色样本送入端部容置空间进行稀释处理；在一体化试剂盒的第二状态下，使样本和稀释剂混合均匀，即完成稀释步骤，获得稀释后的样本液；
步骤三：利用步骤二中的采样装置，将稀释后的样本液送入中间容置空间进行第一次染色，在一体化试剂盒的第二状态下，使稀释后的样本液和第一染色试剂混合均匀，即完成第一次染色，获得第一染色处理后的混合液；
步骤四：利用步骤三中的采样装置，将第一染色处理后的混合液送入底部容置空间进行第二染色，在一体化试剂盒的第二状态下，使第一染色处理后的混合液和第二染色试剂混合均匀，即完成第二次染色。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011266954.9A CN114088500A (zh) | 2020-11-13 | 2020-11-13 | 一体化试剂盒和二次染色方法 |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| CN202011266954.9A CN114088500A (zh) | 2020-11-13 | 2020-11-13 | 一体化试剂盒和二次染色方法 |
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ID=80295868
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| CN202011266954.9A Pending CN114088500A (zh) | 2020-11-13 | 2020-11-13 | 一体化试剂盒和二次染色方法 |
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|---|---|
| CN (1) | CN114088500A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115678751A (zh) * | 2022-12-30 | 2023-02-03 | 北京金诺美科技股份有限公司 | 一种样品管 |
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2020
- 2020-11-13 CN CN202011266954.9A patent/CN114088500A/zh active Pending
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