CN114081966A

CN114081966A - Aav9-cpeb3在制备治疗胃癌的药物中的应用

Info

Publication number: CN114081966A
Application number: CN202111422762.7A
Authority: CN
Inventors: 何裕隆; 陈键; 刘田雨; 杨东杰; 李璐; 傅桦烽
Original assignee: First Affiliated Hospital of Sun Yat Sen University
Current assignee: First Affiliated Hospital of Sun Yat Sen University
Priority date: 2021-11-26
Filing date: 2021-11-26
Publication date: 2022-02-25
Anticipated expiration: 2041-11-26
Also published as: CN114081966B

Abstract

本发明公开本发明属于生物医学技术领域，具体涉及AAV9‑CPEB3在制备治疗胃癌的药物中的应用。本发明通过实验发现CPEB3基因编码的相应蛋白，在细胞质内存在表达下调时，患者术后癌症复发几率增高。通过已知各种给药方式，实现对CPEB3基因编码的相应蛋白的表达上调，从而达到有效防止胃癌细胞术后在人体内的增殖，降低胃癌细胞在体内的转移机会，从而提高患者术后的生存质量。提高术后的康复，防止胃癌复发。

Description

AAV9-CPEB3在制备治疗胃癌的药物中的应用

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及AAV9-CPEB3在制备治疗胃癌的药物中的应用。

背景技术

2020年全球癌症流行病学统计数据显示，胃癌新发病例超过100万例，死亡约76.9万例，分别位列第五大常见的恶性肿瘤和第四大肿瘤相关死因，严重威胁人类生命健康。近年来随着诊断方法、手术技术和综合治疗手段的进步，为胃癌的诊治提供了更多的选择，使胃癌的疗效得到了一定的提高。然而胃癌是一种具有高度恶性生物学行为的肿瘤，极易在早期发生侵袭、转移，大部分患者就诊时已到中晚期，失去了根治该疾病的机会，导致总体生存率仍不乐观。因此有效控制胃癌的侵袭和转移是改善胃癌患者治疗效果及获得长期生存的根本办法，这就要求鉴定出新的治疗靶点，研发出新的靶向药物，从而使得更加有效的精准的靶向治疗成为可能。

RNA结合蛋白(RNAbindingprotein，RBP)是一类能够以其特定的RNA结合结构域与RNA相互作用进而调控RNA的代谢与功能的蛋白。RBP是转录后修饰的重要成员。目前实验证实的存在于人类的编码RBP的基因有1542种，约占所有蛋白编码基因的7.5％。RBP不仅数量庞大，而且在不同种属间具有高度保守性，提示其在调节基因稳态中的重要作用。研究RBP对肿瘤发生发展的作用，了解RBP如何调节原癌基因、抑癌基因以及其他肿瘤重要参与基因的表达，对揭示肿瘤的形成机制以及寻找治疗肿瘤的靶标有重要意义。RBP强大的功能及特殊的调控方式已经吸引了众多学者的关注，目前大量研究已证明RBP在肿瘤的发生、增殖、分化、侵袭、转移、凋亡等方面均发挥重要的作用，在肿瘤的诊断、预后评估、治疗等领域开始崭露头角。

CPEB蛋白家族由4个旁系同源基因(CPEB1-4)构成，其中CEPBs2-4在起源上最为靠近而CPEB1距离最远。所有的CPEB样蛋白都有类似的结构:其羧基末端区域都由两个RNA识别模体，两个锌指样模体和一个调节性N-端所组成。CPEB1-4的N-端具有高度的可变性，而C-端则比较保守。CPEBs在各种组织和肿瘤中都有表达，并且其表达情况也存在部分重叠。但CPEBs在不同恶性肿瘤中的表达以及CPEBs的功能是高度可变的。有证据表明，CPEB1可能充当肿瘤抑制因子，而CPEB2和CPEB4似乎是致癌基因。

目前，虽然发现CPEB3可以作为miR-107的新靶点，可抑制肝细胞癌(HCC)进展，但是CPEB3在胃癌中应用尚未发现有相关研究。

发明内容

本发明的目的提供一种在患者体内表达内源性CPEB3蛋白的药物组合物AAV9-CPEB3在制备治疗胃癌或术后预防胃癌复发药物中的应用，以解决现有技术中对于胃癌患者术后胃癌细胞容易在人体内侵袭转移导致癌细胞扩散的技术问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供一种AAV9-CPEB3的应用，主要体现在AAV9-CPEB3在制备治疗胃癌的药物中的应用。

具体的，AAV9-CPEB3在制备治疗胃癌的药物或术后预防胃癌复发药物中的应用。

本发明中通过研究发现了与胃癌侵袭转移和胃癌增殖过程密切相关的分子机制，并利用在该分子机制中起关键作用的基因CPEB3的表达量的变化和作用通路，提供了用于治疗胃癌的药物组合物。

进一步的，所述药物包括CPEB3基因和递送载体。

进一步的，所述递送载体为腺相关病毒AAV9。

进一步的，所述CPEB3基因编码区序列为SEQIDNO.1。

进一步的，所述CPEB3基因和递送载体连接后用于药物中。

进一步的，所述治疗胃癌的药物用于胃癌的生长期或胃癌转移期。

进一步的，所述药物为注射剂。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1.本发明通过实验发现CPEB3基因编码的相应蛋白，在细胞质内存在表达下调时，患者术后癌症复发几率增高。通过已知各种给药方式，实现对CPEB3基因编码的相应蛋白的表达上调，从而达到有效防止胃癌细胞术后在人体内的增殖，降低胃癌细胞在体内的转移机会，从而提高患者术后的生存质量。

2.本发明提供的CPEB3基因的应用包括对胃癌的治疗或胃癌术后预防癌细胞在人体内转移侵袭其他组织中的药物应用。

3.本发明通过研究首次证实名为CPEB3的基因在胃癌组织的细胞质中存在表达下调，且低表达患者术后更易复发，生存时间更短，利用该基因的这一特性，可以用于制备检测判断胃癌患者预后的试剂盒。

附图说明

图1为CPEB3基因在胃癌细胞系和组织中的表达相关结果图；

图2为CPEB3低表达与胃癌患者不良预后明显相关结果图；

图3为CPEB3过表达可在体外抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力的相关结果图；

图4为CPEB3过表达可在体内抑制胃癌生长和侵袭转移的相关结果图；

图5为AAV9-CPEB3注射可抑制胃癌皮下瘤生长的相关结果图；

图6为AAV9-CPEB3注射可抑制胃癌肺转移的相关结果图；

图7为AAV9-CPEB3注射可抑制胃癌PDX模型皮下瘤生长的相关结果图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

首先选取胃癌细胞系SNU-1,SGC-7901,AGS,MGC-803,HGC-27,NCI-N87,MKN-28,MKN-45以及人胃粘膜细胞系GES-1，分别对其进行荧光实时定量PCR检测、Western-blot实验，结果显示CPEB3信使RNA和蛋白在胃癌细胞系中表达显著下调(图1A,C)。

接着从在中山大学附属第一医院胃肠外科诊治行胃癌切除并术后证实为胃腺癌患者中，随机收集20例患者的新鲜的胃癌组织及相应的邻近非瘤胃黏膜组织，分别对该组织进行荧光实时定量PCR检测、Western-blot实验，结果显示CPEB3信使RNA和蛋白在胃癌组织中表达显著下调(图1B,C)。

随后，收集15例远离癌旁胃粘膜组织(DNT)，15例邻近癌旁胃粘膜组织(ANT)，对其进行石蜡包埋切片；另从样本库里调取15例淋巴结转移阴性的患者的胃癌石蜡标本，15例淋巴结转移阳性的患者的胃癌石蜡标本及相应的淋巴结标本，分别行切片。对这些切片进行免疫组化染色检测CPEB3的表达，结果显示CPEB3在DNT和ANT中高表达，在胃癌组织和淋巴结转移灶中低表达(图1D)。

实施例2

从于2012年1月到12月在中山大学附属第一医院胃肠外科诊治行胃癌切除的患者中，随机选取160例胃癌患者；从于2013年1月到12月在中山大学附属第一医院胃肠外科诊治行胃癌切除的患者中，随机选取80例胃癌患者。按照一定的纳入与排除标准，最终131例胃腺癌患者纳入训练队列，68例纳入验证队列。

详细收集上述患者的各项临床病理资料、手术资料及术后随访资料，如患者性别、年龄、合并疾病、浆膜侵犯、肿瘤位置、手术方式、手术时间、止血方式、术中出血及输血量、术后并发症、围手术期死亡、切除标本大小、肿块大小、浸润深度、病理类型、细胞分化程度、淋巴结转移情况、远处转移及肿瘤分期等。术后通过门诊复查、电话或面对面沟通的方式定期(前2年每3-6个月随访1次，2年后每年随访1次)进行临床随访，建立完善的随访数据库。胃癌病人术后是否发生复发转移则依据胃镜检查、CT、MRI、肿瘤标志物以及再次手术等方法确定。若病人在此时间内发生死亡或者复发转移则作为随访的终止点；若患者未因胃癌死亡或者未出现复发转移或因其他原因死亡者则作为删失数据。患者的生存时间为患者手术之日到患者死亡的时间。患者的无瘤生存时间为患者手术之日起到出现复发转移的时间。

从石蜡样本库中调取上述这199例患者的样本并行切片，免疫组化染色检测CPEB3在胃癌组织中的表达，并依据免疫组化评分将各队列的患者分为高、低表达两组，统计分析CPEB3表达水平与患者临床病理特征及预后的相关性。首先，对两个队列的基本临床资料进行了比较，以确保两个队列中纳入的患者具有可比性，比对结果列于表1中。

表1.训练队列与验证队列中各临床病理特征比较

缩写词:pTNM,pathological tumor node metastasis；LODDS,log odds ofpositive lymph node.

连续变量

为了了解CPEB3表达水平与各临床病理特征之间的关系，进行了相关性分析，分析结果显示两个队列中CPEB3的表达水平与浆膜侵犯、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、pTNM分期以及LODDS相关。训练队列中CPEB3与临床病理特征相关性列于表2中。验证队列中CPEB3与临床病理特征相关性的情况列于表3中。

表2.训练队列中CPEB3表达水平与临床病理特征相关性

连续变量

表3.验证队列中CPEB3表达水平与临床病理特征相关性

连续变量

而这几个临床病理特征已知与胃癌术后的转移、复发密切相关。由此可知，CPEB3表达水平可能与胃癌术后的转移复发有关。

为了探索各临床病理特征与CPEB3的表达水平对胃癌术后总体生存率、无瘤生存率影响的相对危险度(RR)，了解CPEB3是否是胃癌术后生存或复发的独立预后因素。采用COX回归模型来对两个队列中各变量进行了单多因素统计分析。统计结果显示：训练队列中浸润深度、LODDS及CPEB3表达为胃癌术后总体生存的独立预后因素，而浸润深度、LODDS及CPEB3表达同样也被发现为胃癌术后无瘤生存的独立预后因素。前述结果分别列于表4和表5中。

表4.单因素与多因素分析训练队列中胃癌总体生存率的预后因素

缩写词:pTNM,pathological tumor node metastasis；LODDS,log odds ofpositive lymph node；n.a.,not available.

连续变量

表5.单因素与多因素分析训练队列中胃癌无瘤生存率的预后因素

连续变量

为了证实这一研究发现，同样在验证队列中再次进行了分析统计，结果显示在验证队列中，浆膜侵犯、pTNM分期及CPEB3表达为胃癌术后总体生存的独立预后因素。参见表6。而浆膜侵犯、pTNM分期及CPEB3表达为胃癌术后无瘤生存的独立预后因素。参见表7。

表6.单因素与多因素分析验证队列中胃癌总体生存率的预后因素

连续变量

表7.单因素与多因素分析验证队列中胃癌无瘤生存率的预后因素

连续变量

从以上表格所列结果可得知，CPEB3的表达通常与胃癌的总体生存率及无瘤生存率息息相关，CPEB3的低表达为胃癌低总体生存率及低无瘤生存率重要的独立预后因素之一。

为了更为直观的观察CPEB3高表达与CPEB3低表达患者的术后远期预后，采用Kaplan-meier曲线对两个队列中CPEB3高表达组与低表达组的患者进行了分析比较，统计曲线如图2显示，训练队列中CPEB3高表达组总体生存率率与无病生存率均显著优于CPEB3低表达组。同样，也在验证队列以及两个队列合并后的总队列中证实了这一发现。由此可知，胃癌组织中高表达CPEB3的患者往往有着一个相对较好的远期生存预后。

实施例3

对CPEB3分别进行以下体外实验，以进一步证实其对胃癌的作用。

1.CPEB3可抑制胃癌细胞的体外增殖能力

胃癌细胞的增殖能力往往与胃癌的生长有密切的联系，为了了解CPEB3是否与胃癌的增殖能力有关，采用了多个试验对这一情况进行证实。CCK8细胞生长曲线如图3A显示，过表达CPEB3后胃癌细胞MGC-803及HGC-27的增殖能力显著下降。如图3B显示，细胞集落形成试验显示过表达CPEB3后胃癌细胞MGC-803及HGC-27的集落数显著减少。这两个实验均证实CPEB3与胃癌的增殖能力有明显关系，可发挥明显的抑制作用。

2.CPEB3可抑制胃癌细胞的体外侵袭与迁移能力

胃癌的侵袭转移能力与胃癌的术后复发与转移密切相关，为了明确CPEB3是否与胃癌的复发转移能力相关，采用了Transwell侵袭/迁移实验来进行检测。Transwell实验结果显示于图3C中。过表达CPEB3后，胃癌细胞MGC-803及HGC-27侵袭/迁移的细胞数较对照组减少，提示CPEB3可抑制胃癌细胞的侵袭迁移能力。此外，还采用了细胞骨架荧光染色实验来判断CPEB3对细胞形态的影响，结果显示于图3D中。发现过表达CPEB3后，胃癌细胞MGC-803及HGC-27由适于迁移运动的细长的梭形变成了不利于迁移运动的臃肿的卵圆形，且伪足减少。这些实验结果均可证实，CPEB3可抑制胃癌细胞的体外侵袭与迁移能力。

实施例4

为了能够更好的模拟人体内的胃癌生长状况，采用上述的稳定转染CPEB3过表达的胃癌细胞MGC-803及HGC-27以及相应的对照细胞系构建了裸鼠皮下成瘤模型，每组各5只裸鼠，1个月后，将小鼠处死。图4A示1个月后，CPEB3过表达组胃癌皮下瘤显著小于其对照组，表明CPEB3可在体内抑制胃癌的生长。

为了探讨CPEB3在体内对胃癌转移状况的影响，分别采用了尾静脉注射肺转移模型以及爪垫注射淋巴结转移模型。采用上述的稳定转染CPEB3过表达的胃癌细胞MGC-803及HGC-27以及相应的对照细胞系分别注射至实验组/对照组裸鼠的尾静脉或爪垫，6周后处死小鼠。肺转移模型小鼠取肺组织行石蜡包埋切片，HE染色判断肺转移情况；淋巴结转移模型小鼠取腘窝及腹股沟淋巴结，行石蜡包埋切片，HE染色判断淋巴结转移情况。结果显示，CPEB3过表达组胃癌肺转移及淋巴结转移情况显著少于其对照组，表明CPEB3可在体内抑制胃癌的转移。代表性结果见于图4B、C。

实施例5

为了探究CPEB3能否作为胃癌靶向治疗的靶点，明确其转化应用价值，构建了药物组合物AAV9-CPEB3，用于靶向上调体内CPEB3的表达，并进行后续药效学以及毒理学实验。

1.用于靶向干预体内CPEB3表达的AAV9-CPEB3构建

腺相关病毒(AAV)作为一种安全、持久、高效、高特异性的基因操作工具，在生物学特别是神经生物学领域中被广泛使用。野生型AAV是一种复制缺陷型微小病毒，需要腺病毒或疱疹病毒帮助其在体内复制扩增。而实验用的是不需要辅助病毒的重组AAV。本研究采用的AAV均为重组AAV。将目的基因的编码区序列或者干扰序列插入AAV表达质粒中，包装病毒，然后直接使用其感染细胞就能完成目的基因操作。根据衣壳蛋白的差异，目前AAV可分为12种血清型(AAV-1～AAV-12)和100多种变异体。不同的AAV具有不同的衣壳蛋白空间结构、序列和组织特异性，因而其识别与结合的细胞表面受体也相应有很大差别，这也导致不同血清型转染的细胞类型和感染效率也各不相同。由于没有特异性分布于胃的血清型，所以选择了最广谱的血清型AAV9，其感染全身效果极好，可以穿过血脑屏障、胎盘屏障。委托维真生物科技有限公司(中国，济南)构建了靶向上调体内CPEB3表达的药物组合物AAV9-CPEB3以及相应对照AAV9-CMV。AAV9-CPEB3所含特异性的碱基序列见SEQ ID NO.1。

1.AAV9-CPEB3抑制裸鼠皮下瘤的生长

选取15只4-6周龄的雄性裸鼠，随机分为3组，每组5只，MGC-803细胞系皮下注射，构建裸鼠胃癌皮下瘤模型。具体分组如下：

生理盐水组：每组5只，皮下成瘤后瘤内注射生理盐水；

NC组：每组5只，皮下成瘤后瘤内注射AAV9-CMV；

治疗组：每组5只，皮下成瘤后瘤内注射AAV9-CPEB3；

当皮下肿瘤直径达到4-6mm，1×10¹¹vg/mouse AAV9-CPEB3或者AAV9-CMV，以及生理盐水各50微升，瘤内注射，单次。每周监测比较皮下瘤大小。

用药后的1、4、7天，每组随机采集3只裸鼠的尿液，每只采集尿液100微升，检测尿肌酐(UCR)与尿微量白蛋白(mALB)。分别与生理盐水组比较，判断有无肾毒性。

用药后6周，处死裸鼠，取出皮下瘤，IHC检测CPEB3表达，判断治疗组是否过表达。取出肝肾送石蜡切片，HE染色，判断有无肝肾损害。

结果显示，AAV9-CPEB3可以显著抑制裸鼠皮下瘤的生长(图5A)，并且未见明显肾毒性(图5B)，但是对肝脏造成了可逆性的肝损伤，主要是肝细胞水样变性(图5C)。

2.AAV9-CPEB3抑制裸鼠胃癌肺转移灶的形成

为了验证AAV9-CPEB3在活体内对胃癌转移的抑制效果，采用萤火虫荧光素酶(Luciferase)标记的胃癌细胞MGC-803，每只按照1×10⁶细胞数从尾静脉注射，构建了15只裸鼠尾静脉注射肺转移模型，随机分为如下3组：

生理盐水组：每组5只，尾静脉注射1周后尾静脉注射生理盐水；

NC组：每组5只，尾静脉注射1周后尾静脉注射AAV9-CMV；

治疗组：每组5只，尾静脉注射1周后尾静脉注射AAV9-CPEB3；

尾静脉注射MGC-803-luc细胞1周后，1*10¹¹vg/mouse AAV9-CPEB3或者AAV9-CMV，以及生理盐水各100微升，尾静脉注射，单次。此后每周采用小动物活体荧光成像检测系统(IVIS)检测有无肺转移。

用药后的1、4、7天，每组随机采集3只裸鼠的尿液，每只裸鼠采集尿液100微升，检测尿肌酐(UCR)与尿微量白蛋白(mALB)。分别与生理盐水组比较，判断有无肾毒性。

用药6周后处死小鼠，取出肺送石蜡切片，HE染肺，鉴定肺转移灶。分别取肝肾送石蜡切片，HE染色，判断有无肝肾损伤。

结果显示，AAV9-CPEB3可以显著抑制裸鼠胃癌肺转移灶的形成(图6A)，并且未见明显肾毒性(图6B)，但是对肝脏造成了可逆性的肝损伤，主要是肝细胞水样变性(图6C)。

1.AAV9-CPEB3抑制裸鼠胃癌PDX模型皮下瘤的生长

为了更好地验证AAV9-CPEB3在胃癌治疗中的转化应用价值，随机选取了2例来自中山大学附属第一医院胃肠外科中心诊治的胃癌患者，收集其新鲜胃癌样本并构建了人源肿瘤异种移植(Patient-derived tumor xenograft,PDX)模型，共30只裸鼠，具体分组如下：

PDX-1

NC组：每组7只，皮下成瘤后瘤内注射AAV9-CMV；

治疗组：每组7只，皮下成瘤后瘤内注射AAV9-CPEB3。

PDX-2

NC组：每组8只，皮下成瘤后瘤内注射AAV9-CMV；

治疗组：每组8只，皮下成瘤后瘤内注射AAV9-CPEB3。

按照1*10¹¹vg/mouse AAV9-CPEB3或者AAV9-CMV，于皮下移植瘤术后1周后采取瘤内注射50微升。如此，NC组共计15只，治疗组共计15只，每组随机5只分成1小组，如此NC组和治疗组均又分成3小组。注射前3天，注射后的1、4、7、14、21、28、35、42天分别每只尾静脉/眼眶静脉采血60-80微升，3800r/min离心5min，每管约得血清25-30微升，按照分组每5管合并为1管，每管吸取血清20微升，共计每小组得血清100微升。每只采血后均补液，腹腔注射生理盐水60-80微升。

检测血清中ALT、AST、尿素(UREA)以及肌酐(CREA)，与用药前比较以及两两之间比较有无显著差异。

每周监测肿瘤大小，用药6周后处死裸鼠，分别取肝肾送石蜡切片，HE染色，判断有无肝肾损伤。皮下瘤切片，IHC检测CPEB3表达情况，判断治疗组CPEB3有无过表达。

结果显示，AAV9-CPEB3可以显著抑制胃癌PDX模型皮下瘤的生长(图7A)，并且未见明显肾毒性，但是对肝脏造成了一定程度的肝损伤，在注射后的第7天开始出现，3-4周达到高峰(图7B)，但是肝损伤为可逆性的，主要是肝细胞水样变性(图7C)。

本发明在实施例1中，对从中山大学附属第一医院纳入的多例行胃癌切除的患者的新鲜的胃癌组织及相应的邻近非瘤胃黏膜组织，分别对该组织进行荧光实时定量PCR检测、Western-blot实验以及免疫组化检测，所得结果列于图1中。可发现CPEB3在胃癌细胞系和患者肿瘤组织中均为低表达。

实施例2通过对胃癌患者术后各项指标进行统计，发现患者术后组织中CPEB3低表达者的预后较差，而CPEB3高表达者则预后各项指标较好。充分说明了CPEB3能反映出胃癌患者预后康复效果，是否存在癌细胞转移或再生的可能。所得结果列于图2和表格1～7中。

实施例3对CPEB3进行各项体外实验，以进一步证实其所具有的对胃癌的增殖抑制和转移抑制作用。结果列于图3中。

实施例4是在以上实验结果的支持下，对CPEB3进行体内实验，以进一步证实其所具有的对胃癌的生长和转移的抑制作用。结果列于图4中。

实施例5中通过将CPEB3包装至AAV9内，通过动物实验发现，采用瘤内注射或者尾静脉注射给药后，能有效的抑制癌细胞在肿瘤内再次增殖或转移至其他组织中，能用于胃癌早、中和晚期的各项治疗中，尤其能起到抑制胃癌细胞的生长和转移。提高术后的康复，防止胃癌复发。结果列于图5-7中。

本发明的一方面提供了一种CPEB3基因编码区序列在制备治疗胃癌和抑制胃癌术后癌细胞转移的药物中的应用。通过上述实施例中的各项实验可知，CPEB3基因具有抑制胃癌细胞增殖和转移的作用。当将CPEB3基因与适当的载体相结合后，即可作用于动物体，进而发挥对胃癌的治疗效果。显然CPEB3基因也可加入其他具有治疗胃癌作用的药物中，起到增加其疗效或协同其发挥疗效的作用。CPEB3基因的给药方式以能使其发挥抑制胃癌细胞增殖和转移的效果即可。CPEB3基因可以与任何常用的基因给药载体相结合，从而对患者体内胃癌细胞的生长转移发挥抑制作用。CPEB3具有SEQ ID NO.1所示的序列。

本发明的另一方面提供了一种药物组合物，其中含有CPEB3基因编码区序列。该药物组合物主要作用为进入体内后，AAV9感染相应的肿瘤细胞，使得CPEB3在肿瘤细胞内表达升高，发挥抑制肿瘤细胞增殖和侵袭转移的作用。优选的递送载体为腺相关病毒AAV9。以该载体进行给药在实施例5中已经证明对动物体具有抑制转移和增殖的作用。

本发明中SEQ ID NO.1所示序列:

atgcaggatg atttactgat ggacaaaagc aaaacccagc cccagcccca gcagcagcagcggcagcagc agcagcccca acctgagtcc agcgtatccg aagccccgtc cacgcccctc tcctcagagacccccaagcc ggaggaaaac agcgcagtgc cggccctcag cccagccgct gcccccccgg cccccaacggcccggacaag atgcagatgg aatcaccgct cctgccaggc ttgagtttcc atcagcctcc tcagcagccgccgccgcctc aggagcccgc ggcaccgggc gcgtcgctgt cgccgtcctt cggcagcacc tggtccacgggcaccaccaa cgcggtagag gacagcttct tccaggggat caccccagtc aacgggacca tgctcttccagaacttcccg caccatgtca acccagtctt cggaggcact ttctccccgc agatcggcct ggcgcagacccagcaccacc agcagccgcc gccgcctgcg cccgcgccgc agccggcaca gccagcgcag ccaccacaggcgcagccccc gcagcagcgc cgctcacccg ccagccccag ccaggcgccc tacgcgcaga ggagcgccgccgcggcgtac ggccaccagc ccatcatgac cagcaagccg tcctcgtctt cggcggttgc agccgctgctgccgcagccg ccgcctcgtc ggcctcgtcc agctggaaca cgcaccaaag cgtgaatgca gcctggagcgcaccgtccaa cccctggggc ggcctgcagg cgggccggga ccctcgccgg gcggtcggtg tgggcgtgggtgtgggtgtc ggggtgcctt ccccgctcaa ccccatctcg ccgctcaaaa agcccttctc cagcaacgtgatcgcgccgc ccaagttccc tcgcgcggcc cctctcactt ccaagtcctg gatggaggat aacgctttccggaccgataa tggtaacaat ctgttgccat ttcaggaccg gagtaggccc tatgatactt ttaacttgcactcgttggag aactccttaa tggatatgat aaggactgat catgaacctc tgaaaggtaa acactaccctcccagtggcc caccaatgag tttcgctgat ataatgtgga ggaatcattt tgcaggacgc atggggataaatttccatca tccaggaaca gataatatta tggcacttaa caatgccttc ctggatgata gccatggtgatcaagccttg tcatctggct taagttctcc cactcgctgt caaaatgggg aacgagtaga acgctactctagaaaggtgt ttgttggagg acttcctcct gatattgatg aagatgagat cactgccagc tttcgcaggtttggacctct cgtagtagac tggcctcaca aagctgaaag caagtcttat tttcctccta aaggctatgcctttctgctg ttccaagagg aaagctcagt acaagctttg atagatgcct gcctagaaga agatgggaaactctacctgt gtgtgtcaag ccccaccatc aaggacaagc cagtgcaaat tcgaccatgg aacctaagtgacagtgactt tgtaatggat ggttctcagc ctttggaccc cagaaaaact atctttgttg ggggagttccacgacccctt cgagctgttg aactggcaat gatcatggac cgtttgtacg gtggtgtctg ctatgctggcattgatacgg acccagagct gaagtacccc aaaggtgctg gccgcgtggc attctccaat cagcagagttacattgcagc catcagcgct cgttttgtgc agcttcagca caatgacatt gacaaacggg ttgaagtaaagccatatgtg ctggatgatc agatgtgtga tgagtgccag ggcacacgct gtggtgggaa gtttgccccgttcttctgtg ccaacgtcac ctgtctgcag tattactgtg aatactgctg ggcgagcata cattcccgagccgggcggga gttccacaaa ccgctggtga aggagggagg cgaccgccct cgtcacgtcc cgttccgctggagctga

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

SEQUENCE LISTING

<110> 中山大学附属第一医院

<120> AAV9-CPEB3在制备治疗胃癌的药物中的应用

<130> AAV9-CPEB3在制备治疗胃癌的药物中的应用

<160> 1

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 2097

<212> DNA

<213> Artificial（人工序列）

<400> 1

atgcaggatg atttactgat ggacaaaagc aaaacccagc cccagcccca gcagcagcag 60

cggcagcagc agcagcccca acctgagtcc agcgtatccg aagccccgtc cacgcccctc 120

tcctcagaga cccccaagcc ggaggaaaac agcgcagtgc cggccctcag cccagccgct 180

gcccccccgg cccccaacgg cccggacaag atgcagatgg aatcaccgct cctgccaggc 240

ttgagtttcc atcagcctcc tcagcagccg ccgccgcctc aggagcccgc ggcaccgggc 300

gcgtcgctgt cgccgtcctt cggcagcacc tggtccacgg gcaccaccaa cgcggtagag 360

gacagcttct tccaggggat caccccagtc aacgggacca tgctcttcca gaacttcccg 420

caccatgtca acccagtctt cggaggcact ttctccccgc agatcggcct ggcgcagacc 480

cagcaccacc agcagccgcc gccgcctgcg cccgcgccgc agccggcaca gccagcgcag 540

ccaccacagg cgcagccccc gcagcagcgc cgctcacccg ccagccccag ccaggcgccc 600

tacgcgcaga ggagcgccgc cgcggcgtac ggccaccagc ccatcatgac cagcaagccg 660

tcctcgtctt cggcggttgc agccgctgct gccgcagccg ccgcctcgtc ggcctcgtcc 720

agctggaaca cgcaccaaag cgtgaatgca gcctggagcg caccgtccaa cccctggggc 780

ggcctgcagg cgggccggga ccctcgccgg gcggtcggtg tgggcgtggg tgtgggtgtc 840

ggggtgcctt ccccgctcaa ccccatctcg ccgctcaaaa agcccttctc cagcaacgtg 900

atcgcgccgc ccaagttccc tcgcgcggcc cctctcactt ccaagtcctg gatggaggat 960

aacgctttcc ggaccgataa tggtaacaat ctgttgccat ttcaggaccg gagtaggccc 1020

tatgatactt ttaacttgca ctcgttggag aactccttaa tggatatgat aaggactgat 1080

catgaacctc tgaaaggtaa acactaccct cccagtggcc caccaatgag tttcgctgat 1140

ataatgtgga ggaatcattt tgcaggacgc atggggataa atttccatca tccaggaaca 1200

gataatatta tggcacttaa caatgccttc ctggatgata gccatggtga tcaagccttg 1260

tcatctggct taagttctcc cactcgctgt caaaatgggg aacgagtaga acgctactct 1320

agaaaggtgt ttgttggagg acttcctcct gatattgatg aagatgagat cactgccagc 1380

tttcgcaggt ttggacctct cgtagtagac tggcctcaca aagctgaaag caagtcttat 1440

tttcctccta aaggctatgc ctttctgctg ttccaagagg aaagctcagt acaagctttg 1500

atagatgcct gcctagaaga agatgggaaa ctctacctgt gtgtgtcaag ccccaccatc 1560

aaggacaagc cagtgcaaat tcgaccatgg aacctaagtg acagtgactt tgtaatggat 1620

ggttctcagc ctttggaccc cagaaaaact atctttgttg ggggagttcc acgacccctt 1680

cgagctgttg aactggcaat gatcatggac cgtttgtacg gtggtgtctg ctatgctggc 1740

attgatacgg acccagagct gaagtacccc aaaggtgctg gccgcgtggc attctccaat 1800

cagcagagtt acattgcagc catcagcgct cgttttgtgc agcttcagca caatgacatt 1860

gacaaacggg ttgaagtaaa gccatatgtg ctggatgatc agatgtgtga tgagtgccag 1920

ggcacacgct gtggtgggaa gtttgccccg ttcttctgtg ccaacgtcac ctgtctgcag 1980

tattactgtg aatactgctg ggcgagcata cattcccgag ccgggcggga gttccacaaa 2040

ccgctggtga aggagggagg cgaccgccct cgtcacgtcc cgttccgctg gagctga 2097

Claims

1.AAV9-CPEB3在制备治疗胃癌的药物或术后预防胃癌复发药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述药物包括CPEB3基因和递送载体。

3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述递送载体为腺相关病毒AAV9。

4.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述CPEB3基因编码区序列为SEQIDNO.1。

5.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述CPEB3基因和递送载体连接后用于药物中。

6.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述治疗胃癌的药物用于胃癌的生长期或胃癌转移期。

7.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述药物为注射剂。