CN113952351B - 用于治疗癌症的药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于治疗癌症的药物组合物及其制备方法和用途。所述药物组合物由包括如下原料药的组分制备得到:黄芩苷9~15重量份、厚朴酚2~8重量份,以及和厚朴酚1重量份。本发明的药物组合物对于治疗癌症具有协同增效作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于治疗癌症的药物组合物,还涉及包含其的制备方法和用途。
背景技术
在医学上,癌(cancer)是指起源于上皮组织的恶性肿瘤,是恶性肿瘤中最常见的一类。相对应的,起源于间叶组织的恶性肿瘤统称为肉瘤。有少数恶性肿瘤不按上述原则命名,如肾母细胞瘤、恶性畸胎瘤等。一般人们所说的“癌症”习惯上泛指所有恶性肿瘤。癌症具有细胞分化和增殖异常、生长失去控制、浸润性和转移性等生物学特征,其发生是一个多因子、多步骤的复杂过程,分为致癌、促癌、演进三个过程。
针对癌症治疗,现在有手术、化疗、放疗、免疫治疗、中医中药治疗等手段。西药副作用大,对人体伤害大。我国的中药使用历史悠久,再加上中药的副作用小,因此,研究用于癌症治疗的中药组合物是必要的。
CN110101784A公开了一种靶向抑制肺癌及其干细胞增殖、转移的活性组合物的制法,该活性组合物具体成分包括重楼皂苷、草珊瑚碱、大蓟提取物、八月札提取物、黄芩苷、甘草酸、厚朴酚、长春新碱、苦白蹄、裂蹄木层孔菌、东方栓菌、蒲公英、石见穿、仙鹤草、贯叶连翘和牛蒡子。该活性组合物是通过生物炮制发酵的手段获得,避免了因使用化学方法而产生的污染。该专利文献用药种类较多。
CN102579730A公开了一种用于治疗急慢性胆囊炎和急慢性胰腺炎的药物组合物,柴胡皂苷8~15份、黄芩苷5~12、厚朴酚7~16、大黄素1~5、枳实总黄酮9~18份、咖啡酸8~16份、芍药苷7~13份、绿原酸10~17份、法半夏7~13份、甘草酸2~7份。该专利文献用药种类较多。
CN101742991A公开了和厚朴酚类似物及其在治疗癌症中的用途,代表性的和厚朴酚类似物包括二环氧和厚朴酚类似物。该专利文献中的类似物的疗效仍待提高。
发明内容
有鉴于此,本发明人通过深入研究和实验发现一种药物组合物,其原料种类少,且能够对膀胱癌、胰腺癌、肺癌或大肠癌等癌症治疗有协同增效作用,尤其是对大肠癌治疗具有协同增效作用。
在此基础上,本发明的一个目的在于提供一种用于治疗癌症的药物组合物。
本发明的另一个目的在于提供如上所述药物组合物的一种制备方法。
本发明的再一个目的在于提供一种用于治疗癌症的药物制剂。
本发明的又一个目的在于提供所述药物组合物的制药用途。
本发明采用如下技术方案实现上述目的。
本发明提供一种用于治疗癌症的药物组合物,所述药物组合物由包括如下原料药的组分制备得到:黄芩苷9~15重量份、厚朴酚2~8重量份,以及和厚朴酚1重量份。
根据本发明所述的药物组合物,优选地,所述药物组合物由包括如下原料药的组分制成:黄芩苷10~12重量份、厚朴酚2~6重量份,以及和厚朴酚1重量份。
根据本发明所述的药物组合物,优选地,所述药物组合物仅由如下原料药的组分制成:黄芩苷10~12重量份、厚朴酚4~6重量份,以及和厚朴酚1重量份。
根据本发明所述的药物组合物,优选地,所述药物组合物仅由如下原料药的组分制成:黄芩苷11.25重量份、厚朴酚6重量份,以及和厚朴酚1重量份。
根据本发明所述的药物组合物,优选地,所述药物组合物仅由如下原料药的组分制成:黄芩苷11.25重量份、厚朴酚5.75重量份,以及和厚朴酚1重量份。
根据本发明所述的药物组合物,优选地,所述药物组合物仅由如下原料药的组分制成:黄芩苷10重量份、厚朴酚6重量份,以及和厚朴酚1重量份。
根据本发明所述的药物组合物,优选地,所述药物组合物仅由如下原料药的组分制成:黄芩苷10重量份、厚朴酚5.75重量份,以及和厚朴酚1重量份。
本发明还提供如上所述的药物组合物的制备方法,将黄芩苷、厚朴酚以及和厚朴酚混合,获得所述药物组合物。
本发明还提供一种用于治疗癌症的药物制剂,所述药物制剂包括如上所述的药物组合物和药学上可接受的辅料。
本发明还提供如上所述药物组合物在用于制备治疗癌症的药物的用途,所述癌症为膀胱癌、胰腺癌、肺癌或大肠癌。
本发明的中药组合物在特定的配比范围(黄芩苷9~15重量份、厚朴酚2~8重量份,以及和厚朴酚1重量份)内可以协同增效,各组分相互配伍,对膀胱癌、胰腺癌、肺癌或大肠癌等癌症治疗的效果明显,尤其是对大肠癌治疗的效果明显。根据本发明优选的技术方案,本发明的药物组合物的配比为:黄芩苷10~12重量份、厚朴酚4~6重量份,以及和厚朴酚1重量份。
附图说明
图1为本发明采用CCK8法检测不同的原料药或中药组合物对大肠癌细胞HCT116生长增殖的影响结果图。图1中,“+”表示含有某成分,“-”表示不含有某成分。
图2为本发明通过FITC Annexin V/PI双染和流式细胞仪检测死亡细胞比例结果图。
图3为本发明的细胞平皿单克隆形成能力实验结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明,但本发明的保护范围并不限于此。
<药物组合物>
本发明的用于治疗癌症的药物组合物由包括如下原料药的组分制备得到:黄芩苷9~15重量份、厚朴酚2~8重量份,以及和厚朴酚1重量份。优选地,所述药物组合物由包括如下原料药的组分制成:黄芩苷10~12重量份、厚朴酚2~6重量份,以及和厚朴酚1重量份。更优选地,所述药物组合物由包括如下原料药的组分制成:黄芩苷10~12重量份、厚朴酚4~6重量份,以及和厚朴酚1重量份。这样的特定配比的药物组合物可以起到协同增效治疗癌症的作用。
根据本发明优选的一个实施方式,所述药物组合物仅由如下原料药的组分制成:黄芩苷10~12重量份、厚朴酚2~6重量份,以及和厚朴酚1重量份。
根据本发明更优选的一个实施方式,所述药物组合物仅由如下原料药的组分制成:黄芩苷10~12重量份、厚朴酚4~6重量份,以及和厚朴酚1重量份。
根据本发明优选的一个具体实施方式,所述药物组合物仅由如下原料药的组分制成:黄芩苷11.25重量份、厚朴酚6重量份,以及和厚朴酚1重量份。
根据本发明优选的另一个具体实施方式,所述药物组合物仅由如下原料药的组分制成:黄芩苷11.25重量份、厚朴酚5.75重量份,以及和厚朴酚1重量份。
根据本发明优选的再一个具体实施方式,所述药物组合物仅由如下原料药的组分制成:黄芩苷10重量份、厚朴酚6重量份,以及和厚朴酚1重量份。
根据本发明优选的又一个具体实施方式,所述药物组合物仅由如下原料药的组分制成:黄芩苷10重量份、厚朴酚5.75重量份,以及和厚朴酚1重量份。
黄芩苷(baicalin)是从双子叶唇形科植物黄芩(Scutellaria baicalensisGeorgi)的干燥根中提取分离出来的一种黄酮类化合物,常温下为淡黄色粉末,味苦。黄芩,植物学范围内别名山茶根、土金茶根,是唇形科黄芩属多年生草本植物,性寒,味苦。归肺经、胆经、脾经、大肠经、小肠经,具有清热燥湿,泻火解毒的功效。黄芩苷的结构式如下:
厚朴酚、和厚朴酚是厚朴中重要的酚类。厚朴,植物学范围内别名厚皮、重皮、赤朴等,为木兰科、木兰属植物,性温,味苦、辛。归脾经、胃经、肺经、大肠经,具有燥湿清痰、下气除螨的功效。厚朴酚的结构式如下:
和厚朴酚的结构式如下:
现有技术中,虽然有对黄芩苷、厚朴酚、和厚朴酚进行单独研究的报道,但并未有关于黄芩苷、厚朴酚、和厚朴酚三者联合使用能够协同增效治疗癌症的报道。本发明人经过大量研究和实验发现,在特定的配比范围内,黄芩苷、厚朴酚、和厚朴酚三者联合使用可以起到对癌症治疗的协同增效作用。在本发明中,所述癌症主要指的是膀胱癌、胰腺癌、肺癌或大肠癌,优选为大肠癌。根据本发明优选的技术方案,三者联合使用后对大肠癌细胞的增殖抑制活性显著增强。
并且,本发明人发现,三者配比若不在本发明的配比范围内,其不具有协同增效作用,甚至还可能产生拮抗作用。目前,发明人对三者在特定配比范围内的协同增效的机理还不清楚。
<制备方法>
在本发明中,将黄芩苷、厚朴酚以及和厚朴酚混合均匀,获得所述药物组合物。
<药物制剂与用途>
本发明还提供一种用于治疗癌症的药物制剂,该药物制剂包括如上所述的药物组合物以及药学上可接受的辅料。所述制剂的剂型不限,例如可以为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂等。
本发明还提供上述药物组合物用于制备治疗癌症的药物的用途,所述癌症为膀胱癌、胰腺癌、肺癌或大肠癌。优选地,所述癌症为大肠癌。本发明研究发现,黄芩苷、厚朴酚、和厚朴酚单独对大肠癌细胞具有中等强度的增殖抑制活性,三者以特定配比联合使用后对癌细胞的增殖抑制活性显著增强,具有明显的协同增效作用。
以下实施例中所用试剂的来源:
黄芩苷、厚朴酚、和厚朴酚购自MCE公司(MedChemExpress LLC)。
实施例1
将45重量份的黄芩苷粉末、24重量份的厚朴酚粉末、4重量份的和厚朴酚粉末混合均匀,得到中药组合物,记为中药组A。
实施例2
将40重量份的黄芩苷粉末、24重量份的厚朴酚粉末、4重量份的和厚朴酚粉末混合均匀,得到中药组合物,记为中药组B。
比较例1
将45重量份的黄芩苷粉末和4重量份的和厚朴酚粉末混合均匀,得到中药组合物,记为中药组C。
比较例2
将45重量份的黄芩苷粉末和24重量份的厚朴酚粉末混合均匀,得到中药组合物,记为中药组D。
比较例3
将24重量份的厚朴酚粉末和4重量份的和厚朴酚粉末混合均匀,得到中药组合物,记为中药组E。
比较例4
将18重量份的黄芩苷粉末、14重量份的厚朴酚粉末、6重量份的和厚朴酚粉末混合均匀,得到中药组合物,记为中药组F。
比较例5
将60重量份的黄芩苷粉末、20重量份的厚朴酚粉末、2重量份的和厚朴酚粉末混合均匀,得到中药组合物,记为中药组G。
比较例6
将55重量份的黄芩苷粉末、15重量份的厚朴酚粉末、3重量份的和厚朴酚粉末混合均匀,得到中药组合物,记为中药组H。
比较例7
将50重量份的黄芩苷粉末、15重量份的厚朴酚粉末、8重量份的和厚朴酚粉末混合均匀,得到中药组合物,记为中药组I。
实验例
1.实验材料
10%胎牛血清(FBS)购自Gibco,USA;
Mccoy’s 5A培养液购自浙江吉诺生物医药技术有限公司;
0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶购自Gibco,USA;
CCK8试剂盒购自大连美仑生物技术有限公司;
人类低级别HCT116大肠癌细胞株购自ATCC(American Type CultureCollection,美国模式菌种收集中心)。
2.实验方法
2.1采用Cell Counting Kit 8(CCK8)方法检测黄芩苷、厚朴酚、和厚朴酚单独或联合使用对细胞增殖的影响
(1)选择细胞生长状态良好且处于对数生长期的大肠癌细胞HCT116,用0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶进行消化,加入含10%FBS的Mccoy’s 5A完全培养液终止,吹打成细胞悬液后转至EP管,800rpm离心5min,弃上清液,加入Mccoy’s 5A完全培养液制成细胞悬液。
(2)使用细胞计数板计数,以每组细胞5个复孔,每孔100μL体积、4000个细胞接种至96孔板中,并在四周边缘孔中加入等量的磷酸盐缓冲溶液(PBS溶液),防止边缘效应。
(3)37℃,5%CO2培养箱中常规培养液过夜;吸去每个孔中的液体培养基,将避光条件下配置的黄芩苷浓度为45μg/ml,厚朴酚的浓度为24μg/ml,和厚朴酚的浓度为4μg/ml的培养液分别加入每个孔中继续培养;以及将比较例1的中药组C的培养液(黄芩苷的浓度为45μg/ml,和厚朴酚的浓度为4μg/ml)加入孔中继续培养,以及将比较例2的中药组D的培养液(黄芩苷的浓度为45μg/ml,厚朴酚的浓度为24μg/ml)加入孔中继续培养,以及将比较例3的中药组E的培养液(厚朴酚的浓度为24μg/ml,和厚朴酚的浓度为4μg/ml)加入孔中继续培养,以及将实施例1的中药组A的培养液(黄芩苷的浓度为45μg/ml,厚朴酚的浓度为24μg/ml,和厚朴酚的浓度为4μg/ml)加入孔中继续培养;以及将比较例4的中药组F的培养液(和厚朴酚6μg/ml,厚朴酚14μg/ml,黄芩苷18μg/ml)加入孔中继续培养;以及将实施例2的培养液分别加入孔中继续培养;以及将比较例5-7的培养液分别加入孔中继续培养。
(4)培养24h后,避光条件下吸去孔板中的培养液,配制实验所需要的CCK8溶液,每孔加入100μL体积(加液过程中防止气泡产生,避免酶标仪测量不准确),培养箱中孵育1-2h;
(5)将全自动酶标仪波长调整为450nm,测定每孔的OD值;
(6)根据OD值绘制各组细胞的生长曲线,采用Graphpad 8.0计算并分析细胞增殖情况。部分结果见图1。
2.2流式细胞术检测细胞凋亡
本实验使用流式细胞仪检测上述细胞凋亡,参照美国BD公司的FITC Annexin VApoptosis Detection试剂盒步骤进行实验。
(1)选择细胞生长状态良好,且处于对数生长期的HCT116细胞,用0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶消化后,将细胞重悬于含10%特级胎牛血清(FBS)的Mccoy’s 5A完全培养液,进行计数,以每孔4×105个细胞接种在6孔板中培养过夜;
(2)吸去原培养液,将单独的黄芩苷45μg/ml、厚朴酚24μg/ml、和厚朴酚4μg/ml以及中药组合物(组合物中,黄芩苷45μg/ml、厚朴酚24μg/ml、和厚朴酚4μg/ml)的3ml Mccoy’s 5A完全培养液依次加入6孔板中;细胞培养箱培养24h。
(3)用预冷的PBS洗涤,0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶消化后收集细胞于15mL离心管中,加入100μL 1×binding buffer重悬,转移至流式管中。随后在每个样本的样管中统一加入4μL FITC和4μL PI染液,轻弹上样管底部使之混匀,室温下避光孵育15min;
(4)在避光条件下向各个样管中加入300μL 1×binding buffer,随即上机检测。结果见图2。
2.3细胞平皿单克隆形成能力实验
(1)选择细胞生长状态良好且处于对数生长期的大肠癌细胞HCT116,用0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶进行消化,加入含10%特级胎牛血清(FBS)的Mccoy’s 5A完全培养液终止,吹打成细胞悬液,转至离心管,800rpm离心5min,弃上清液;
(2)加入完全培养基重悬混匀,取10μL细胞悬液加入到细胞计数板中进行计数;
(3)以5000个细胞所对应体积的细胞悬液接种到6cm培养皿中,在培养箱中常规培养14-21天,并在培养过程中根据实际情况进行加药处理;加药浓度为黄芩苷45μg/ml、厚朴酚24μg/ml、和厚朴酚4μg/ml以及中药组合物(组合物中,黄芩苷45μg/ml、厚朴酚24μg/ml、和厚朴酚4μg/ml)。
(4)当形成肉眼可见的克隆球且加药处理有明显趋势时终止培养,吸去完全培养液,PBS冲洗2次,加入2ml 4%的多聚甲醛固定15min;
(5)吸去多聚甲醛溶液,PBS清洗2次,加入结晶紫溶液1-2ml,使其能够盖住全部细胞,放置30min;
(6)回收皿中的结晶紫溶液,用自来水缓慢冲洗,避免水流过大冲走细胞团,自然晾干后用相机进行拍照。结果见图3。
3.实验结果
3.1采用CCK8法检测结果
图1为本发明采用CCK8法检测不同的原料或中药组合物对大肠癌细胞HCT116生长增殖的影响结果图(部分结果图)。图1中,“+”表示含有某成分,“-”表示不含有某成分。比如,第二个柱形下方,“+”表示含有和厚朴酚,另外两个“-”分别表示不含有厚朴酚、黄芩苷。图1中,从左到右的柱形依次对应空白对照、和厚朴酚、厚朴酚、黄芩苷、比较例1、比较例2、比较例3和实施例1的结果。图1中,与空白对照组相比,“***”表示P<0.001,“*”表示P<0.05。
如图1所示,单独的黄芩苷、厚朴酚、和厚朴酚对癌细胞具有一定的增殖抑制活性。当一定量的黄芩苷、和厚朴酚联用时,二者具有一定的协同增效作用(比较例1)。当黄芩苷和厚朴酚联合使用时具有一定的协同增效作用(比较例2),当厚朴酚和和厚朴酚联合使用时具有较强的协同增效作用(比较例3)。当特定用量的黄芩苷、厚朴酚以及和厚朴酚三者联合使用时具有更强的协同增效作用(实施例1)。
实施例1-2以及比较例4-7的检测结果如下:
实施例1的中药组A的培养液(黄芩苷的浓度为45μg/ml,厚朴酚的浓度为24μg/ml,和厚朴酚的浓度为4μg/ml)对大肠癌细胞HCT116的存活率影响较大,存活率为5.34%。
实施例2的中药组B的培养液(黄芩苷40μg/ml,厚朴酚24μg/ml,和厚朴酚4μg/ml),其大肠癌细胞HCT116存活率仅为7.43%。
而比较例4的中药组F的培养液(和厚朴酚6μg/ml,厚朴酚14μg/ml,黄芩苷18μg/ml)对大肠癌细胞HCT116的存活率影响较小,存活率仍较高,为64.35%。
比较例5的中药组G的培养液(和厚朴酚2μg/ml,厚朴酚20μg/ml,黄芩苷60μg/ml)对大肠癌细胞HCT116的存活率影响较小,存活率仍较高,为61.57%。
比较例6的中药组H的培养液(和厚朴酚3μg/ml,厚朴酚15μg/ml,黄芩苷55μg/ml)对大肠癌细胞HCT116的存活率影响较小,存活率仍较高,为73.93%。
比较例7的中药组I的培养液(和厚朴酚8μg/ml,厚朴酚15μg/ml,黄芩苷50μg/ml)对大肠癌细胞HCT116的存活率影响较小,存活率仍较高,为43.30%。
将比较例4-7的检测结果与图1中的单独的黄芩苷、厚朴酚、和厚朴酚、比较例1、比较例2、比较例3和实施例1比较可知,在比较例4-7的用量和配比范围内,黄芩苷、厚朴酚、和厚朴酚并没有明显的协同作用,而且甚至有些还具有一定的拮抗作用。由此可知,本发明的特定配比和特定用量的药物组合物对于降低大肠癌细胞的存活率具有显著的协同增效作用。
3.2采用流式细胞仪检测死亡细胞结果
图2为本发明通过FITC Annexin V/PI双染和流式细胞仪检测死亡细胞比例结果图。图2中,对照组指的是空白组。和厚朴酚组(和厚朴酚的浓度为4μg/ml)。厚朴酚组(厚朴酚的浓度为24μg/ml)。黄芩苷组(黄芩苷的浓度为45μg/ml)。黄芩苷+厚朴酚+和厚朴酚组指的是采用实施例1的中药组合物。
如图2所示,通过FITC Annexin V/PI双染,然后通过流式细胞仪检测死亡细胞比例,右上象限和右下象限的加和为细胞死亡比例。结果显示单独使用黄芩苷、厚朴酚、和厚朴酚对HCT116具有较低的杀死效果,但当三者(黄芩苷、厚朴酚、和厚朴酚)按比例使用时,HCT116细胞的死亡比例明显增高。
3.3采用细胞平皿单克隆实验结果
图3为本发明的细胞平皿单克隆形成能力实验结果图。图3中,对照组指的是空白组。和厚朴酚组(和厚朴酚的浓度为4μg/ml)。厚朴酚组(厚朴酚的浓度为24μg/ml)。黄芩苷组(黄芩苷的浓度为45μg/ml)。黄芩苷+厚朴酚+和厚朴酚组指的是采用实施例1的中药组合物。
如图3所示,通过平皿单克隆形成能力实验观察黄芩苷、厚朴酚、和厚朴酚在实施例1的配比下对细胞克隆形成能力的影响。结果显示,黄芩苷、厚朴酚、和厚朴酚在实施例1的配比下处理的细胞克隆形成数显著低于单加黄芩苷、厚朴酚、和厚朴酚处理组,实施例1的药物组合物具有很好的抑制克隆形成能力的效果。
本发明并不限于上述实施方式,在不背离本发明的实质内容的情况下,本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。
Claims (8)
1. 一种用于治疗大肠癌的药物组合物,其特征在于,所述药物组合物仅由如下原料药的组分制成:黄芩苷 10~12重量份、厚朴酚4~6重量份,以及和厚朴酚1重量份。
2. 根据权利要求1所述的药物组合物,其特征在于,所述药物组合物仅由如下原料药的组分制成:黄芩苷 11.25重量份、厚朴酚6重量份,以及和厚朴酚1重量份。
3. 根据权利要求1所述的药物组合物,其特征在于,所述药物组合物仅由如下原料药的组分制成:黄芩苷 11.25重量份、厚朴酚5.75重量份,以及和厚朴酚1重量份。
4. 根据权利要求1所述的药物组合物,其特征在于,所述药物组合物仅由如下原料药的组分制成:黄芩苷 10重量份、厚朴酚6重量份,以及和厚朴酚1重量份。
5. 根据权利要求1所述的药物组合物,其特征在于,所述药物组合物仅由如下原料药的组分制成:黄芩苷 10重量份、厚朴酚5.75重量份,以及和厚朴酚1重量份。
6.根据权利要求1~5任一项所述的药物组合物的制备方法,其特征在于,将黄芩苷、厚朴酚以及和厚朴酚混合,获得所述药物组合物。
7.一种用于治疗大肠癌的药物制剂,其特征在于,所述药物制剂包括权利要求1~5任一项所述的药物组合物和药学上可接受的辅料。
8.根据权利要求1~5任一项所述药物组合物在用于制备治疗癌症的药物的用途,所述癌症为大肠癌。
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CN1692901A (zh) * | 2004-05-08 | 2005-11-09 | 陈菲 | 和厚朴酚在制备抗肿瘤或预防肿瘤的药物组合物中的应用 |
CN1839865A (zh) * | 2005-02-01 | 2006-10-04 | 吴一心 | 抗肿瘤的黄芩甙元和黄芩甙协同药物组合物 |
WO2018043989A1 (ko) * | 2016-08-31 | 2018-03-08 | (주) 바이오인프라생명과학 | 아피제닌, 커큐민 및 호노키올을 유효성분으로 포함하는 폐암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
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EP1849467A4 (en) * | 2005-02-01 | 2008-08-20 | Shanghai Gloriayx Biopharmaceu | SYNERGIC PHARMACEUTICAL PREPARATION CONTAINING BAICALEIN AND BAICALIN AND INTENDED FOR INHIBITION OF A TUMOR |
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2021
- 2021-09-08 CN CN202111049848.XA patent/CN113952351B/zh active Active
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