CN113940247A - 一种提高烟叶中硒含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提高烟叶中硒含量的方法，属于烟草种植技术领域，其步骤为：将构建的NtWRKY70过表达转基因烟草种子消毒，在铺设海绵的育苗盘中点种，培养至烟苗至四叶期后移植至装有蛭石的培养盒中培养，选取长势一致的烟苗移栽至水培盒中，加入霍格兰氏液、母液和亚硒酸钠的混合液继续培养。本发明利用种植NtWRKY70过表达转基因型烤烟，再结合施加适量浓度的硒来提高烟株对硒元素的利用效率，进而促进烤烟的生长发育，最终达到增加烟叶产量和品质的效果，无需外源施硒，操作简便，人力物力消耗少，效果好，可被大范围推广使用，经本发明创制的NtWRKY70过表达转基因烟草材料，烟叶内在化学成分指标更加协调，品质有所提升。
Description
技术领域
本发明涉及一种提高烟叶中硒含量的方法，属于烟草种植技术领域。
背景技术
微量元素硒(Se)是人体14种必须的微量营养元素之一，不仅在预防疾病、抗击癌症、缓解提高人体免疫力等方面发挥重要作用，同时也是植物生长发育的有益元素，在促进植物生长、改善品质、增加产量等方面发挥着重要生物学效应。植物可以通过不同程度的对环境中的硒吸收、利用、转化，将不同形态的硒转化为硒蛋白等有机硒。
烟草生物量大，对硒有较强富集能力，是一种特殊经济作物。大量研究表明，使用富硒烟叶制作的卷烟能够增加香烟硒含量，减低焦油和自由基含量，提高吸烟者的血硒水平，有效清除体内自由基，调节增强人体免疫力，抑制肿瘤的发生，能有效的减低肺癌的发生率，减少香烟对人体健康的危害，提高烟草的安全性。刘建福等人发现肺癌低发区烟叶中硒含量是肺癌高发地区的3倍，抽吸富硒卷烟可使人体血硒水平较抽吸普通卷烟人体血硒水平提高10％。
世界上共有40多个国家和地区是低硒和缺硒土壤，我国也有3/4以上土壤缺硒，要在少硒以及缺硒土壤上生产出符合标准的富硒烟叶，只有通过施加外源硒才能实现。杨兰芳等研究了低硒土壤施硒对烤烟硒含量及其体内分布的影响，结果表明，适量的硒能促进烟草生长发育，提高烟草经济性状，增强植株抗逆性、改良烟叶品质，提高卷烟安全性。
目前，关于外源施硒提高烟叶硒含量的方法大致有3类：一是土壤施硒，在低硒烟区施用亚硒酸盐或硒酸盐可以提高烟叶硒含量；二是叶面喷硒，在烟草生育期喷施适宜浓度的亚硒酸钠溶液能提高烟叶硒含量；三是烟叶注入，包括向上部烟叶的烟茎中注入亚硒酸钠溶液和向中下部烟叶的叶柄上及主脉上距叶柄5cm、10cm位置注入亚硒酸钠溶液能快速增加烟叶硒含量。但是，土壤施硒施用量大，吸收率低，易造成土壤富集和环境污染；叶面喷施优点是喷施量少、利用率高，但难于掌握适宜的喷施时间和喷施剂量，遇到雨天气施用效果较差等；烟叶注入优点是成本低廉、效果显著，但在大面积生产实践中，较耗费人工成本，操作繁琐。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种提高烟叶中硒含量的方法，旨在操作简单、节省人力物力资源且效果显著的增加烟叶硒含量进而改善烟草品质。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种提高烟叶中硒含量的方法，包括以下步骤：
a)将NtWRKY70过表达转基因烟草种子消毒备用；
b)将消毒后的烟草种子在铺设海绵的育苗盘中点种，培养至烟苗至四叶期后移植至装有蛭石的培养盒中培养至十字期；
c)选取长势一致的烟苗移栽至水培盒中，加入霍格兰氏液和亚硒酸钠的混合液继续培养至第14d。
本发明中烟草采用转基因烟草NtWRKY70培育富硒品系，NtWRKY70基因片段：
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进一步，步骤a)中所述消毒的操作为先加以95％的酒精浸泡消毒，30s后用去离子水冲洗2-3次，之后用浓度为2％的次氯酸浸泡消毒，10min后用去离子水反复冲洗5-6次。
进一步，步骤b)中育苗盘中的营养液为霍格兰氏液；
培养盒中的营养液为霍格兰氏液。
进一步，步骤b)中所述点种后的培养条件：种子萌发后换成1/4的霍格兰氏液，一周后换成1/2的霍格兰氏液直至移栽；
所述步骤c)的培养条件为：光周期14h，昼温28±2℃，光强4000lx；夜温18±2℃，相对湿度65％-70％。
进一步，所述混合液中每1L霍格兰氏液由5ml母液稀释得到；
所述亚硒酸钠的加入量为加入至混合液中亚硒酸钠浓度至25μmol/L。
进一步，母液每1L中含有如下组分：A液①：KNO3 50.555g，A液②：Ca(NO3)2·4H2O118.075g，B液：MgSO4·7H2O 49.294g、KH2PO4 13.609g，C液：H3BO3 2.782g、MnCl2·4H2O1.979g、ZnSO4·7H2O 0.230g、CuSO4·5H2O 0.075g、Na2MoO4·2H2O 0.097g，铁盐：FeSO4·7H2O 5.561g、EDTA-Na2 7.485g。
进一步，霍格兰氏液的原料如下：KNO3 10ml，Ca(NO3)2·4H2O 10ml，MgSO4·7H2O、KH2PO4的混合液10ml，H3BO3、MnCl2·4H2O、ZnSO4·7H2O、CuSO4·5H2O、Na2MoO4·2H2O的混合液1ml，FeSO4·7H2O、EDTA-Na2的混合液1ml。
本发明的有益效果在于：
(1)NtWRKY70转基因型的富硒效果和硒元素在烟株体内的利用效率都比野生型的好；经本发明培育出的NtWRKY70株系的烟叶，内在化学成分指标更加协调，品质有所提升。
(2)本发明采用转基因型烟草NtWRKY70进行培育，无需外源施硒，操作简便，人力物力消耗少，效果好，可被大范围推广使用。
附图说明
图1为本发明实施例2不同条件下、不同品系烤烟的株高对比结果图；
图2为本发明实施例2不同条件下的烤烟地上部分的鲜重对比结果图；
图3为本发明实施例2不同条件下的烤烟地上部分的干重对比结果图；
图4为本发明实施例2不同条件下的烤烟地下部分的鲜重对比结果图；
图5为本发明实施例2不同条件下的烤烟地下部分的干重对比结果图；
图6为本发明实施例2硒胁迫条件下烤烟的根部硒含量对比结果图；
图7为本发明实施例2硒胁迫条件下烤烟的叶片硒含量对比结果图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在以下实施例中，每1L母液中含有如下组分：A液①：KNO3 50.555g，A液②：Ca(NO3)2·4H2O 118.075g，B液：MgSO4·7H2O 49.294g、KH2PO4 13.609g，C液：H3BO3 2.782g、MnCl2·4H2O 1.979g、ZnSO4·7H2O 0.230g、CuSO4·5H2O 0.075g、Na2MoO4·2H2O 0.097g，铁盐：FeSO4·7H2O 5.561g、EDTA-Na27.485g。
霍格兰氏液的原料如下：KNO310ml，Ca(NO3)2·4H2O 10ml，MgSO4·7H2O、KH2PO4的混合液10ml，H3BO3、MnCl2·4H2O、ZnSO4·7H2O、CuSO4·5H2O、Na2MoO4·2H2O的混合液1ml，FeSO4·7H2O、EDTA-Na2的混合液1ml。
实施例1
提高烟叶中硒含量的方法，包括以下步骤：
a)将过表达NtWRKY70转基因型烟草种子先加以95％的酒精浸泡消毒，30s后用去离子水冲洗2-3次，之后用浓度为2％的次氯酸浸泡消毒，10min后用去离子水反复冲洗5-6次，备用；
b)将消毒后的烟草种子在铺设海绵的育苗盘中点种，育苗盘中的营养液为霍格兰氏液，培养至烟苗至四叶期后移植至装有蛭石的培养盒中培养至十字期，培养盒中的营养液为霍格兰氏液；
c)选取长势一致的烟苗移栽至水培盒中，加入霍格兰氏液和亚硒酸钠的混合液继续培养至第14d，其中，混合液中每1L霍格兰氏液通过5mL母液稀释得到，亚硒酸钠的加入量为加入至混合液中亚硒酸钠浓度至1μmol/L。
实施例2
提高烟叶中硒含量效果实验
(1)待测烟草种子分别为野生型K326(WT)、过表达转基因材料NtWRKY70-1(OE-1)、NtWRKY70-2(OE-2)烤烟品系，每种品系平均分为两组，共计6组，将上述种子先加以95％的酒精浸泡消毒，30s后用去离子水冲洗2-3次，之后用浓度为2％的次氯酸浸泡消毒，10min后用去离子水反复冲洗5-6次，备用；
(2)将消毒后的烟草种子在铺设海绵的育苗盘中点种，育苗盘中的营养液为霍格兰氏液，培养至烟苗至四叶期后移植至装有蛭石的培养盒中培养至十字期，培养盒中的营养液为霍格兰氏液；
(3)选取长势一致的烟苗移栽至4L容量的水培盒中，加入霍格兰氏液、母液和亚硒酸钠的混合液继续培养至第14d，其中，霍格兰氏液由20mL母液和3980ml蒸馏水混合得到，每种品系的两个分组中分别使用移液管加入0μmol/L和25μmol/L的亚硒酸钠溶液，每组处理重复三次，共3种品系，2种处理方式，每种处理方式3次重复；
(4)处理14d后对烟株进行取样保存，便于后期指标的测量。
后期指标测量记录结果如图1-7，分析可得：
(1)在0μM硒条件下，NtWRKY70转基因型整体长势都较野生型的好，而且分析结果还表明NtWRKY70转基因型的富硒效果也比同条件下的野生型的要好。
(2)在25μM硒条件下，由于高硒胁迫，野生型与转基因型烤烟的株高、地上部分鲜重和干重、地下部分鲜重和干重都表现出一定的减小，而NtWRKY70转基因型所受到的抑制效果相对野生型却相对较小；对于硒元素含量，在高硒胁迫条件下，过表达转基因材料的地上部和地下部硒元素含量较野生型的显著增多，这说明了硒元素在转基因型烟株体内的利用效率提高了，所以它们的富硒效果也就相对很明显。该发明为烟草功能基因组学研究提供了技术支撑，并创造了富硒烟草转基因新材料，为烟草遗传育种提供了资源。
Claims (7)
1.一种提高烟叶中硒含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
a)将NtWRKY70过表达转基因烟草种子消毒备用；
b)将消毒后的烟草种子在铺设海绵的育苗盘中点种，培养至烟苗至四叶期后移植至装有蛭石的培养盒中培养至十字期；
c)选取长势一致的烟苗移栽至水培盒中，加入霍格兰氏液和亚硒酸钠的混合液继续培养至第14d。
2.根据权利要求1所述提高烟叶中硒含量的方法，其特征在于，步骤a)中所述消毒的操作为先加以95％的酒精浸泡消毒，30s后用去离子水冲洗2-3次，之后用浓度为2％的次氯酸浸泡消毒，10min后用去离子水反复冲洗5-6次。
3.根据权利要求1所述提高烟叶中硒含量的方法，其特征在于，步骤b)中所述育苗盘中的营养液为霍格兰氏液；
所述培养盒中的营养液为霍格兰氏液。
4.根据权利要求1所述提高烟叶中硒含量的方法，其特征在于，步骤b)中所述点种后的培养条件：种子萌发后换成1/4的霍格兰氏液，一周后换成1/2的霍格兰氏液直至移栽到水培盒中；
所述步骤c)的培养条件为：光周期14h，昼温28±2℃，光强4000lx；夜温18±2℃，相对湿度65％-70％。
5.根据权利要求1所述提高烟叶中硒含量的方法，其特征在于，所述混合液中每1L霍格兰氏液由5ml母液稀释得到；
所述亚硒酸钠的加入量为加入至混合液中亚硒酸钠浓度至25μmol/L。
6.根据权利要求5所述提高烟叶中硒含量的方法，其特征在于，所述母液每1L中含有如下组分：A液①：KNO350.555g，A液②：Ca(NO3)2·4H2O118.075g，B液：MgSO4·7H2O 49.294g、KH2PO413.609g，C液：H3BO32.782g、MnCl2·4H2O 1.979g、ZnSO4·7H2O 0.230g、CuSO4·5H2O0.075g、Na2MoO4·2H2O0.097g，铁盐：FeSO4·7H2O 5.561g、EDTA-Na27.485g。
7.根据权利要求5所述提高烟叶中硒含量的方法，其特征在于，所述霍格兰氏液的原料如下：KNO310ml，Ca(NO3)2·4H2O 10ml，MgSO4·7H2O、KH2PO4的混合液10ml，H3BO3、MnCl2·4H2O、ZnSO4·7H2O、CuSO4·5H2O、Na2MoO4·2H2O的混合液1ml，FeSO4·7H2O、EDTA-Na2的混合液1ml。
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| CN102630400A (zh) * | 2012-04-11 | 2012-08-15 | 中国科学院亚热带农业生态研究所 | 一种促进烟苗根系发育的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 孟祥等: "硒对烟草种子萌发和幼苗生长的影响", 《安徽农业科学》 * |
| 景艺卓等: "WRKY转录因子家族响应农作物元素胁迫的研究进展", 《植物生理学报》 * |
| 樊俊等: "烟株对Se(Ⅵ)和Se(Ⅳ)的吸收及叶片硒亚细胞分布", 《中国烟草科学》 * |
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