CN1138862C - 一种核酸分析用收集装置及其应用方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种核酸分析用收集装置及其应用方法。该装置由一体化的样品分析通路和样品收集通路双通路毛细管、位于分析通路上的三个检测窗口和样品收集管组成。应用该装置可实现核酸片断的自动快速分析，并对差异核酸条带进行高精度及高纯度的快速自动收集。该装置结构独特，能结合传统的毛细管核酸分析技术，如DNA测序仪技术，推广应用。

Description

一种核酸分析用收集装置及其应用方法

(一)技术领域

本发明涉及一种核酸分析仪器及其应用方法，具体地说涉及一种核酸分析用收集装置及其应用方法。

(二)背景技术

近年来，随着分子生物学的迅速深入发展以及人类基因组框架图的完成，在生命科学研究领域，人们将研究重点转向了所谓的“后基因组工程”。该工程更着重于功能基因的研究，尤其是各种功能基因转录与表达的相互关系，它对于人们破译基因组框架图这本“天书”，从机理上深入认识生命现象，揭示和掌握生命发展的自然规律，从而优化和改造生物体、控制和治疗疾病具有至关重要的作用。

要实现上述目标，其中一项非常具体而艰巨的工作，即是分析、分选和克隆与生物体的生理和病理活动密切相关的重要功能基因。目前这项工作主要通过mRNA逆转录聚合酶链反应产物来进行功能基因分析研究。

传统的基因分析的方法为平板胶电泳及毛细管电泳，用平板胶电泳的方法虽然可进行基因片断回收克隆、测序，但其操作步骤繁琐，耗时多、重复性较差，假阳性及假阴性率较高。毛细管电泳较平板胶电泳分辨率高，但无法进行同次进样中样品的回收，只能根据上次进样的电泳结果设定下次进样的可能回收位置(依据时间来推断)，因其标准来自非本次的电泳结果，固容易产生误差、回收样品不纯及污染，且无法进行样品回收的实时监测。

目前，有多种利用核酸分析仪进行核酸片断分析研究的方法，但是在核酸分析中，利用毛细管电泳对核酸差异片断进行同步分析和收集的仪器及方法，迄今经联机专利检索无此相关登记，文献检索也无此相关报道。

(三)发明内容

本发明的目的是针对已有技术的不足提供一种核酸片断自动分析，并对差异条带自动高精度、高纯度收集的装置与应用方法。它可省去传统方法和繁琐过程，提高功效、精度与收集样品纯度。

本发明的核酸分析用收集装置，总体由分析通路部分、样品收集通路部分、激光照射装置、电泳条带检测部分、分析与控制部分构成，其中：

(1)所说的分析通路部分包括：双通路毛细管，两个分析样品管，两个并联的样品分析通路电泳负极，一个分析通路电泳正极，两个分析通路电泳负极缓冲液杯，一个分析通路电泳正极缓冲液池，一个数控调节分析通路电泳电源，该装置中的毛细管具有四个分支，所有分支管腔相通，呈“十”字形垂直交叉，处于同一轴心的毛细管分支分别构成两个通路，即分析通路和下述的样品收集通路，毛细管具有四个末端，分别为分析通路的进样端和与之即分析通路和下述的样品收集通路，毛细管具有四个末端，分别为分析通路的进样端和与之对应的缓冲液端，以及下述属样品收集通路的样品收集端和与这对应的样品收集通路的电泳缓冲液端；

(2)所说的样品收集通路部分包括：双通道毛细管样品收集通路，两个样品收集管，两个样品收集通路电泳正极触头，一个样品收集通路电泳负极，一个样品收集通路电泳负极缓冲液池，一个数控调节样品收集通路电泳电源；

(3)所说的激光照射装置是指：一台氩离子激光器，一个光耦合器，6根光导纤维分光引出6束均等强度的激光束，分三组按常规方式分别照射三个检测窗口中的分析通路裸露毛细管；

(4)所说的电泳条带检测部分是指：第一、二、三检测窗口及与之相对应的三个光信号探测器；

(5)所说的分析与控制部分是指：与之相连的微机及分析与控制软件；

上述各部分及其部件整体结构间的关联与相互位置特征是：两条并行的毛细管的进样端分别置于两个样品分析管内，两个缓冲液端置入一个共同的分析通路电泳液缓冲液池，两个样品收集通路的样品收集端分别置入两个样品收集管，两个样品收集通路的样品缓冲液端置入同一个样品收集通路缓冲液池，样品分析通路电泳电源的负极分别置入两个分析样品管，样品分析通路电泳电源的正极置入一个共用的分析通路电泳液缓冲液池，样品收集通路电泳电源的正极通过一选择性通断开关后分别置入两个样品收集管，样品收集通路电泳电源的负极置入一个共用的样品收集通路缓冲液池，由激光器发出的激光束通过光耦合器分别导入六根光导纤维，六根光导纤维分成光照强度相等的三组，每组两根，分别以同轴准直对穿的方式从两侧照射两条平行排列的毛细管，光束处于两根并行排列的毛细管所形成的平面之中，且光束与照射部位毛细管的纵轴垂直相交，三组光纤以该方式照射分析通路毛细管，在照射斑点处分别形成第一、第二和第三个检测窗口，其中，第一和第二检测窗口自上而下排列，位于毛细管分析通路与样品收集通路交汇点的上方，即样品分析通路进样端一侧，第三检测窗口位于毛细管分析通路与样品收集通路交汇点的下方，即样品分析通路电泳缓冲液端一侧，与三个检测窗口平面平行排列且分别与三个检测窗口的中心准直设有三个光信号探测器，三个探测器分别与计算机相连，样品分析通路与样品收集通路毛细管电泳电原的调节控制端也分别与计算机相连。

上述所说的双通路毛细管是两条纵轴轴心垂直相交且管腔贯通成为一体的毛细管，此管按功能可分为分析通路与样品收集通路两部分，且此两根分析通路与样品收集通路一体化的毛细管，平行排列构成双通道毛细管功能实施单元，分别完成两个对应样品的比较分析和差异条带收集。

上述所说的双通路毛细管功能实施单元可以有多个。

上述所说的分析通路与样品收集通路毛细管两通路纵轴轴心垂直交点距分析通路的非进样端8-12cm、距样品收集通路的两端距离相等。

上述所说的分析通路毛细管长度为28-80cm，内径8-60μum，外径100-150μum。

上述所说的样品收集通路毛细管长度为5-15cm，内径6-60μum，外径100-150μum。

上述所说的样品收集管是底部镶有一直径3mm石墨电极作为样品收集通路电泳阳极的0.3ml塑料离心管。

上述所说的两个样品收集通路电泳正极触头中的一个，是直径3mm、厚0.5mm的圆形铂片，其下表面中部伸出一直径0.2mm、长1cm的铂丝，两个铂片的上表面分别与两个样品收集管底部的石墨电极密切接触，两个铂片的下面借铂丝分别与样品收集通路电泳电源的两个正极输出端连接。

上述所说的三个检测窗口位于毛细管的检测通路上，为激光束照射的裸露毛细管区；其中第一、第二检测窗口位于检测通路阴极端，分别距毛细管两通道纵轴轴心交点2cm和1cm，第三检测窗口位于检测通路阳极端，距毛细管两通道纵轴轴心交点1cm。

上述核酸分析用收集装置的应用方法，该方法包括下述顺序的步骤：

(1)毛细管按常规方式进行基因扫描胶灌注；

(2)两个含有差异核酸条带的样品按常规毛细管电泳进样方法，分别从两通道毛细管样品管中进样；

(3)进样后，按常规毛细管电泳的电压10-18kV设定，进行毛细管分析通路的双道电泳；

(4)当双通道毛细管中的核酸片断条带迁移至第一检测窗口时，第一检测窗口探测器将获取的检测信息送入计算机进行分析，若通过分析发现两通道中的核酸条带存在差异，即可将核酸片断差异条带在计算机中进行诸如核酸片断差异条带相对位置、相对出现时间及带宽的标注；

(5)当通过第一检测窗口并被标注的核酸片断差异条带到达第二检测窗口时，计算机通过第二检测窗口探测器获取被标注的核酸片断差异条带到达第二检测窗口的时间，并根据被标注的差异条带到达第一与第二检测窗口的相对时间及两检测窗口之间的距离，由公式：核酸片断差异条带的迁移率＝核酸片断差异条带的迁移距离÷核酸片断差异条带通过该距离的迁移时间，自动求出被标注的差异条带的迁移率；

(6)计算机通过公式：第二检测窗口距分析通路毛细管与样品收集通路毛细管交汇点的距离÷被标注的核酸片断差异条带的迁移率，自动计算出被标注的核酸片断差异条带迁移到达两通路交汇点的时间；

(7)计算机根据步骤(6)计算出的被标注的核酸片断差异条带迁移到达两通路交汇点的时间，判定被标注的核酸片断差异条带迁移到达了两通路交汇点时，通过分极通路毛细管电泳电源将分极通路毛细管电泳电压调整到80-220V，同时启动核酸片断差异条带所在的样品收集通路的电泳电源，电压调整到10-18kV，准备收集被标注的核酸片断差异条带；

(8)样品收集通路电泳运行的时间设定为3-10分钟，被标注的核酸片断差异条带即泳入样品收集管，此样品收集管可取出，待用；

(9)计算机关闭收集通路电泳电源，并将分析通路毛细管电泳电压调整到10-18kV；

(10)计算机根据原被标注的核酸片段差异条带在分析通路中的迁移率、在收集通路电泳时的耗时与分析通路毛细管电泳调整后的电压，由公式：原被标注的差异条带在分析通路中的迁移率×开启收集通路毛细管电泳后调整的分析通路毛细管电泳电压÷调整前的分析通路毛细管电泳电压，计算出开启收集通路毛细管电泳后的被标注的核酸差异条带在分析通路中的迁移率；再根据开启收集通路毛细管电泳后的被标注的核酸差异条带在分析通路中的迁移率、收集通路毛细管电泳的电泳时间及第三检测窗口距分析通路毛细管与样品收集通路毛细管交汇点的距离，由公式：(第三检测窗口距分析通路毛细管与样品收集通路毛细管管腔交汇点的距离-开启收集通路毛细管电泳后的被标注的核酸差异条带在分析通路中的迁移率×收集通路毛细管电泳的电泳时间)÷原被标注的核酸差异条带在分析通路中的迁移率，自动计算出被标注的核酸片断差异条带迁移到达第三检测窗口的时间；

(11)根据被标注的核酸片断差异条带迁移到达第三检测窗口的时间，于第三检测窗口检测被标注的核酸片断差异条带的收集状况，若收集效果好，则检测不到被标注的核酸片断差异条带，或仅有极少部分残留，此时可继续进行下一步骤：反之则说明收集效果不好；

(12)更换样品收集管，重复进行上述过程，直至本次分析通路中，其余的核酸片断差异条带分析与收集结束。

本专利项目的内容是针对以往耗时、耗力和精度低的基因分析、分选问题而设计的一套自动化装置的核心关键硬件及与之相配套的应用方法。应用本发明装置与技术方法，可实现核酸片断差异条带的自动分析与自动收集，避免了传统平板胶电泳在mRNA差异显示分析及差异核酸片断收集过程中的繁琐步骤，同时可降低假阳性条带的比率。由于应用本发明装置与技术方法所进行的核酸片断差异条带分析与收集是在同一次电泳中同步完成，可实现对每条核酸差异片断迁移率的实时计算，故避免了传统毛细管电泳所采用的非同次进样分析和收集核酸片断差异条带所造成的繁琐步骤和误差。本发明装置与技术方法应用于相应的核酸分析与基因分析分仪中，除克服了上述传统方法的缺点外，还可实现实时显示电泳图形、发现差异条带自动报警、核酸片断差异条带的收集状态监测、根据需求自行灵活设置差异条带或非差异条带自动收集以及多次电泳结果的自动对比分析。

本发明的装置与技术方法除了核酸片断分析与收集功能外，不可用于DNA序列分析(测序)、蛋白分析以及药物分析(如中草药药效成分的测定)等传统毛细管电泳的应用方面。所以在本发明装置的样品收集管中所获得的核酸片断，可直接应用本装置进行DNA序列分析，从而实现对功能基因组的大规模快速分析及查找新基因。

(四)附图说明

图1是本发明装置的整体状态图。

其中1、2为样品管，3为分析通路毛细管电泳负极，4、5为分析通路毛细管，6为六路光导纤维及其中的光束，7为激光器，8为光耦合器，9为第一检测窗口探测器，10为第二检测窗口探测器，17为第三检测窗口控测器，11，12为样品收集通路毛细管，13、15为样品收集管，14、16为样品收集通路电泳正极触头，18为分析通路毛细管电泳电源，19为分析通路毛细管电泳缓冲液池，20为样品收集通路毛细管电泳电源，21为样品收集通路毛细管电泳电源通道貌岸然选择开关，2为微型计算机，23、24、25分别为第一、二、三检测窗口，28为样品收集通路毛细管电泳缓冲液池。

图2是本发明装置中分析通路毛细管与样品收集通路毛细管交汇部位的结构图。

其中11、12为样品收集通路毛细管，4、5为分析通路毛细管。

图3是本发明装置中样品收集管与样品收集通路电泳正极触头的结构图。

其中13、15为样品收集管，26、27为石墨镶嵌电极，14、16为样品收集通路电泳正极触头。

图4是本发明装置中三个相同的第一、二、三检测窗口中的一个窗口结构图。

其中30为石英毛细管体，29为聚酯纤维毛细管外涂层，31为裸露的毛细管检测窗口区，6为六路光导纤维中的两路光导纤维及其中的光束。

(五)具体实施方式

实施例1：本实施例中，缓冲液的配制与用量均同常规核酸片断分析规格。激光器7为氩离子激光，波长488nm，功率20mW。样品收集通路毛细管11、12长度7cm。分析通路毛管4、5长度47cm。

(1)取正常结肠组织和家族性结肠息肉组织各0.5g，采用常规方法分别提取RNA，再分别取20ngRNA用常规FAM荧光素标记的试剂盒，进行mRNA差异显示聚合酶链反应(DD-PCR)扩增，扩增后的产物待用；

(2)用ABI公司的POP-4基因扫描胶按常规方式进行毛细管4、5、11、12灌注；

(3)上述两个用常规FAM荧光标记的mRNADD-PCR扩增产物，分别置入两个样品管1、2，按常规毛细管电泳电进样方法分别从两通道毛细管样品管1、2中进样；

(4)进样后，通过计算机22控制分析通路毛细管电泳电源18，调整至常规毛细管电泳的电压设定，即12kV，进行毛细管分析通路的双道电泳；

(5)当双通道毛细管中的差异核酸片断条带迁移至第一检测窗口23时，第一检测窗口探测器9将获取的检测信息送入计算机22进行分析，计算机22通过分析发现两通道4、5中的核酸条带存在差异，如通道5出现一条核酸条带，而通道4中未检测到，通道5中的核酸片断差异条带立即在计算机22中被标注，标注过程由计算机自动完成，包括该核酸片断差异条带相对位置、相对出现时间及带宽；

(6)当通过第一检测窗口23并被标注的核酸片断差异条带到达第二检测窗口24时，计算机22通过第二检测窗口探测器10获取被标注的核酸片断差异条带到达第二检测窗口10的时间，并根据被标注的差异条带到达第一检测窗口23与第二检测窗口24的相对时间及两检测窗口23、24之间的距离，由公式：核酸片断差异条带的迁移率＝核酸片断差异条带的迁移距离÷核酸片断差异条带通过该距离的迁移时间，自动给出被标注的差异条带的迁移率；

(7)计算机22通过公式：第二检测窗口24距分析通路毛细管4、5与样品收集通路毛细管11、12交汇点的距离÷被标注的核酸片断差异条带的迁移率，自动计算出被标注的核酸片断差异条带迁移到达两通路交汇点的时间；

(8)计算机22根据步骤(7)计算出的被标注的核酸片断差异条带迁移到达两通路交汇点的时间，判定被标注的核酸片断差异条带迁移到达了两通路4、5与11、12交汇点时，通过分析通路毛细管电泳电源18将分析通路毛细管电泳电压调整到100V，同时将样品收集通路的电源开关21开启于被标注的核酸片断差异条带所在的样品收集通路12，并通过样品收集通路的电泳电源20，调整样品收集通路12的电泳电压到16kV，准备收集被标注的核酸片断差异条带；

(9)样品收集通路电泳运行的时间设定为6分钟，被标注的核酸片断差异条带即泳入样品收集管15，此样品收集管15可取出，待用；也可根据修需要更换新的样品收集管；

(10)计算机22关闭收集通路电泳电源20，并将分析通路4、5毛细管电泳电压调整到12kV；

(11)计算机22根据原被标注的差异条带在分析通路5中的迁移率、在收集通路12电泳时的耗时与分析通路毛细管4、5电泳调整后的电压，由公式：原被标注的差异条带在分析通路5中的迁移率×开启收集通路毛细管12电泳后调整的分析通路毛细管4、5电泳电压÷调整前的分析通路毛细管4、5电泳电压，自动计算出开启收集通路毛细管12电泳后的被标注的核酸差异条带在分析通路5中的迁移率。计算机再根据开启收集通路毛细管12电泳后的被标注的核酸差异条带在分析通路5中的迁移率、收集通路毛细管12电泳的电泳时间及第三检测窗口25距分析通路毛细管4、5与样品收集通路毛细管11、12交汇点的距离，由公式：(第三检测窗口25距分析通路毛细管4、5样品收集通路毛细管11、12管腔交汇点的距离-开启收集通路毛细管12电泳后的被标注的核酸差异条带的分析通路5中的迁移率×收集通路毛细管12电泳的电泳时间)÷原被标注的核酸差异条带在分析通路5中的迁移率，自动计算出被标注的核酸片断差异条带迁移到达第三检测窗口25的时间。

(12)根据被标注的核酸片断差异条带迁移到达第三检测窗口25的时间，于第三检测窗口25检测被标注的核酸片断差异条带的收集状况，此次收集后，经检验，未检测到被标注的核酸片断差异条带，说明收集效果良好。

(13)更换样品收集管，重复进行上述过程，直至本次分析通路中其余核酸片断差异条带的分析与收集结束。

Claims (10)

1.一种核酸分析用收集装置，总体由分析通路部分、样品收集通路部分、激光照射装置、电泳条带检测部分、分析与控制部分构成，其特征是：

(1)所说的分析通路部分包括：双通路毛细管，两个分析样品管，两个并联的样品分析通路电泳负极，一个分析通路电泳正极，两个分析通路电泳负极缓冲液杯，一个分析通路电泳正极缓冲液池，一个数控调节分析通路电泳电源，该装置中的毛细管具有四个分支，所有分支管腔相通，呈“十”字形垂直交叉，处于同一轴心的毛细管分支分别构成两个通路，即分析通路和下述的样品收集通路，毛细管具有四个末端，分别为分析通路的进样端和与之对应的缓冲液端，以及下述属样品收集通路的样品收集端和与之对应的样品收集通路的电泳缓冲液端；

(2)所说的样品收集通路部分包括：双通道毛细管样品收集通路，两个样品收集管，两个样品收集通路电泳正极触头，一个样品收集通路电泳负极，一个样品收集通路电泳负极缓冲液池，一个数控调节样品收集通路电泳电源；

(3)所说的激光照射装置是指：一台氩离子激光器，一个光耦合器，6根光导纤维分光引出6束均等强度的激光束，分三组按常规方式分别照射三个检测窗口中的分析通路裸露毛细管；

(4)所说的电泳条带检测部分是指：第一、二、三检测窗口及与之相对应的三个光信号探测器；

(5)所说的分析与控制部分是指：与之相连的微机及分析与控制软件；

上述各部分及其部件整体结构间的关联与相互位置特征是：两条并行的毛细管的进样端分别置于两个样品分析管内，两个缓冲液端置入一个共同的分析通路电泳液缓冲液池，两个样品收集通路的样品收集端分别置入两个样品收集管，两样品收集通路的样品缓冲液端置入同一个样品收集通路缓冲液池，样品分析通路电泳电源的负极分别置入两个分析样品管，样品分析通路电泳电源的正极置入一个共用的分析通路电泳液缓冲液池，样品收集通路电泳电源的正极通过一选择性通断开关后分别置入两个样品收集管，样品收集通路电泳电源的负极置入一个共用的样品收集通路缓冲液池，由激光器发出的激光束通过光耦合器分别导入六根光导纤维，六根光导纤维分成光照强度相等的三组，每组两根，分别以同轴准直对穿的方式从两侧照射两条平行排列的毛细管，光束处于两根并行排列的毛细管所形成的平面之中，且光束与照射部位毛细管的纵轴垂直相交，三组光纤以该方式照射分析通路毛细管，在照射斑点处分别形成第一、第二和第三个检测窗口，其中，第一和第二检测窗口自上而下排列，位于毛细管分析通路与样品收集通路交汇点的上方，即样品分析通路进样端一侧，第三检测窗口位于毛细管分析通路与样品收集通路交汇点的下方，即样品分析通路电泳缓冲液端一侧，与三个检测窗口平面平行排列且分别与三个检测窗口的中心准直设有三个光信号探测器，三个探测器分别与计算机相连，样品分析通路与样品收集通路毛细管电泳电源的调节控制端也分别与计算机相连。

2.根据权利要求1所述的核酸分析用收集装置，其特征在于：所说的双通路毛细管是两条纵轴轴心垂直相交且管腔贯通成为一体的毛细管，此管按功能可分为分析通路与样品收集通路两部分，且此两根分析通路与样品收集通路一体化的毛细管平行排列构成双通道毛细管功能实施单元，分别完成两个对应样品的比较分析和差异条带收集。

3.根据权利要求2所述的核酸分析用收集装置，其特征在于：所说的双通路毛细管功能实施单元可以有多个。

4.根据权利要求2所述的核酸分析用收集装置，其特征在于：所说的分析通路与样品收集通路毛细管两通路纵轴轴心垂直交点距分析通路的非进样端8-12cm、距样品收集通路的两端距离相等。

5.根据权利要求2所述的核酸分析用收集装置，其特征在于：所说的分析通路毛细管长度为28-80cm，内径8-60μm，外径100-150μm。

6.根据权利要求2所述的核酸分析用收集装置，其特征在于：所说的样品收集通路毛细管长度为5-15cm，内径8-60μm，外径100-150μm。

7.根据权利要求1所述的核酸分析用收集装置，其特征在于：所说的样品收集管是底部镶有一直径3mm石墨电极作为样品收集通路电泳阳极的0.3ml塑料离心管。

8.根据权利要求1所述的核酸分析用收集装置。其特征在于：所说的两个样品收集通路电泳正极触头中的一个，是直径3mm、厚0.5mm的圆形铂片，其下表面中部伸出一直径0.2mm、长1cm的铂丝，两个铂片的上表面分别与两个样品收集管底部的石墨电极密切接触，两个铂片的下面借铂丝分别与样品收集通路电泳电源的两个正极输出端连接。

9.根据权利要求1所述的核酸分析用收集装置，其特征在于：所说的三个检测窗口位于毛细管的检测通路上，为激光束照射的裸露毛细管区；其中第一、第二检测窗口位于检测通路阴极端，分别距毛细管两通道纵轴轴心交点2cm和1cm，第三检测窗口位于检测通路阳极端，距毛细管两通道纵轴轴心交点1cm。

10.一种如权利要求1所述核酸分析用收集装置的应用方法，该方法包括下述顺序的步骤：

(1)毛细管按常规方式进行基因扫描胶灌注：

(2)两个含有差异核酸条带的样品按常规毛细管电泳进样方法，分别从两通道毛细管样品管中进样；

(3)进样后，按常规毛细管电泳的电压10-18kV设定，进行毛细管分析通路的双道电泳；

(4)当双通道毛细管中的核酸片断条带迁移至第一检测窗口时，第一检测窗口探测器将获取的检测信息送入计算机进行分析，若通过分析发现两通道中的核酸条带存在差异，即可将核酸片断差异条带在计算机中进行诸如核酸片断差异条带相对位置、相对出现时间及带宽的标注；

(5)当通过第一检测窗口并被标注的核酸片断差异条带到达第二检测窗口时，计算机通过第二检测窗口探测器获取被标注的核酸片断差异条带到达第二检测窗口的时间，并根据被标注的差异条带到达第一与第二检测窗口的相对时间及两检测窗口之间的距离，由公式：核酸片断差异条带的迁移率＝核酸片断差异条带的迁移距离÷核酸片断差异条带通过该距离的迁移时间，自动求出被标注的差异条带的迁移率；

(6)计算机通过公式：第二检测窗口距分析通路毛细管与样品收集通路毛细管交汇点的距离÷被标注的核酸片断差异条带的迁移率，自动计算出被标注的核酸片断差异条带迁移到达两通路交汇点的时间；

(7)计算机根据步骤(6)计算出的被标注的核酸片断差异条带迁移到达两通路交汇点的时间，判定被标注的核酸片断差异条带迁移到达了两通路交汇点时，通过分析通路毛细管电泳电源将分析通路毛细管电泳电压调整到80-220V，同时启动核酸片断差异条带所在的样品收集通路的电泳电源，电压调整到10-18kV，准备收集被标注的核酸片断差异条带；

(8)样品收集通路电泳运行的时间设定为3-10分钟，被标注的核酸片断差异条带即泳入样品收集管，此样品收集管可取出，待用；

(9)计算机关闭收集通路电泳电源，并将分析通路毛细管电泳电压调整到10-18kV；

(10)计算机根据原被标注的核酸片段差异条带在分析通路中的迁移率、在收集通路电泳时的耗时与分析通路毛细管电泳调整后的电压，由公式：原被标注的差异条带在分析通路中的迁移率×开启收集通路毛细管电泳后调整的分析通路毛细管电泳电压÷调整前的分析通路毛细管电泳电压，计算出开启收集通路毛细管电泳后的被标注的核酸差异条带在分析通路中的迁移率；再根据开启收集通路毛细管电泳后的被标注的核酸差异条带在分析通路中的迁移率、收集通路毛细管电泳的电泳时间及第三检测窗口距分析通路毛细管与样品收集通路毛细管交汇点的距离，由公式：(第三检测窗口距分析通路毛细管与样品收集通路毛细管管腔交汇点的距离-开启收集通路毛细管电泳后的被标注的核酸差异条带在分析通路中的迁移率×收集通路毛细管电泳的电泳时间)÷原被标注的核酸差异条带在分析通路中的迁移率，自动计算出被标注的核酸片断差异条带迁移到达第三检测窗口的时间；

(11)根据被标注的核酸片断差异条带迁移到达第三检测窗口的时间，于第三检测窗口检测被标注的核酸片断差异条带的收集状况，若收集效果好，则检测不到被标注的核酸片断差异条带，或仅有极少部分残留，此时可继续进行下一步骤；反之则说明收集效果不好；

(12)更换样品收集管，重复进行上述过程，直至本次分析通路中，其余的核酸片断差异条带分析与收集结束。

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