CN1138860C - 核糖体s6蛋白激酶 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种新的多核苷酸，由该多核苷酸编码的多肽，以及利用所述多核苷酸生产多肽的方法。更具体的说，本发明的多肽是核糖体S6蛋白激酶。

Description

核糖体S6蛋白激酶

本发明涉及一种新的多核苷酸，由该多核苷酸编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产。更具体地说，本发明的多肽是核糖体S6蛋白激酶。

在细胞分裂增殖过成中，细胞对各种丝裂原样物质的反应涉及到多种丝氨酸专一的蛋白激酶的活化，其中RSK(ribosomalprotein S6 kinase)就是其中之一。这种激酶在丝裂原刺激的细胞中对核糖体的40S亚基的S6蛋白进行多个丝氨酸残基的磷酸化。核糖体40S亚基的S6蛋白进行多个丝氨酸残基的磷酸化。核糖体S6蛋白的磷酸化最初是在肝再生中被发现，此后许多研究证明，在多种丝裂原和原癌基因产物激活的细胞中都发生了S6磷酸化，此外，卵细胞在孕酮或胰岛素作用下的分裂也伴随着S6的磷酸化。自1985年以来，不断有具S6蛋白激酶活性的酶及其基因的报道。这些酶根据分子量和结构的不同可分为两个亚族，即Mr＝9200-9000的p90^rsk亚族和Mr＝6500-7000的p70^rsk亚族。

p90^rsk亚族的最初成员--一个Mr＝92000的蛋白激酶S6KII，是最先从未受精的爪蟾卵中分离得到的。相继分离的是一个Mr＝90000的蛋白激酶S6KI。利用S6KII蛋白的胰蛋白酶水解片段序列设计的寡核苷酸探针于爪蟾中克隆了一系列cDNA，氨基酸序列分析表明，其所编码的蛋白包含两个催化区域：N端催化区和C端催化区。N端催化区和蛋白激A/C家族有48％的相似度，C端催化区与磷酸化酶b的催化亚单位非常相似。利用爪蟾S6KIIαcDNA，Alcorta等在鸡和小鼠中分离了三个cDNA克隆，三个克隆所编码的蛋白与爪蟾S6KIIα蛋白有79％的相似度。其中鸡和小鼠的一个cDNA(rsk^ch和rsk^mo-1，长度分别为3.7kb和3.1kb)分别编码了含752和724个氨基酸的蛋白。另一小鼠的非全长cDNA(rsk^mo-2)所编码的肽的C端的633个氨基酸与爪蟾S6KIIα的C端非常相近。1990年Rey Huei等在鸡CEF细胞，小鼠Swiss3T3细胞和人Hela细胞中检测到了具有p90^rsk活性的蛋白。

1994年David.E.Moller等报道了与小鼠RSK基因(rsk^mo-1和rsk^mo-2)同源的三个人类cDNA(Hu-1，Hu-2，Hu-3)的克隆。根据推测的氨基酸序列与rsk^mo-1和rsk^mo-2进行比较，发现Hu-1(全长3061bp，编码735个氨基酸)与rsk^mo-1和rsk^mo-2的相似度分别为95％和84％，Hu-2(1728bp，非全长)则分别为80％和99％。Hu-3(1700bp，非全长)的相似度比较小，分别为75％和84％。通过染色体定位，确定Hu-1在3号染色体，Hu-2在6号染色体，Hu-3在X染色体。1995年该实验室又克隆了一个新的RSK cDNA(RSK3，最长开读框为2202bp，编码733个氨基酸)，并将之定位于6号染色体q27区。根据与rsk^mo-1和rsk^mo-2的比较，RSK3与rsk^mo-1的相似度比与rsk^mo-2的相似度大，分别为84％和37％。除了脊椎动物，RSK基因在无脊椎动物中也有发现。1994年DavidWassarman等在果蝇中克隆了一个RSK DNA，其最大开读框为2730bp。

RSK家族的另一亚族-p70^rsk亚族包括具S6蛋白激酶活性的，分子量在65000-70000之间的蛋白激酶。除了在分子量和结构上与p90^rsk亚族不同外，两者的功能也有差异。p70^rsk已陆续在鸟类，小鼠，兔和牛细胞中发现。1990年Benerjee R.L.等在大鼠的cycloheximide处理的肝细胞中分离了一个70kd的S6激酶，cDNA序列分析表明，其蛋白结构中只包含一个催化区域。此催化区域的氨基酸顺序与大鼠p85 S6蛋白激酶的N端蛋白激酶C相似区有56％的相似度。在此催化区的330个氨基酸之外，两者是迥异的^[10]。同年Kozma S.C.等分离了两个大鼠编码p70 S6蛋白激酶的cDNA克隆，分别编码了502和525个氨基酸的的蛋白，除了N端的23个氨基酸为后者独有外，其余的氨基酸序列都相同。利用大鼠的这两个克隆，Grove J.R.等在1991年分离了人类的两个相应的cDNA克隆(p70 S6蛋白激酶αI，525个氨基酸；p70 S6kαII，505个氨基酸)。氨基酸比较的结果与大鼠的两个cDNA克隆相同。

RSK基因与人类疾病的关系少见报道，1996年Elisabeth Trivier发现人类RSK-2基因的突变与Coffin-Lowry症有关。这表明对人类RSK基因的研究不仅有其重要的理论意义而且可能较大的医学价值。

因此，本发明的一个目的是提供一种新的多核苷酸，该多核苷酸编码核糖体S6蛋白激酶。

本发明的另一个目的是提供一种新的核糖体S6蛋白激酶，命名为Hums6pkh。

本发明的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的新的核糖体S6蛋白激酶的方法。

本发明涉及一种新的多核苷酸，由该多核苷酸编码的多肽，以及利用所述多核苷酸生产所述多肽的方法。更具体地说，本发明的多肽是新的核糖体S6蛋白激酶。编码本发明的多核苷酸可以是RNA形式和DNA形式，DNA包括cDNA、基因组DNA和合成DNA，DNA可以是双链或单链，如果是单链，可以是编码链或非编码链。

在本发明中，术语“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内天然状态下的多核苷酸和多肽是没有分离的，但同样的多核苷酸或多肽如从天然状态中同存的其他物质中分开，则为分离的。

在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸全长为2331个核苷酸，其详细序列见SEQ ID NO：1，其中开放读框位于86-1495位核苷酸。该多核苷酸是如此获得的，以人肌肉λgt11cDNA文库(购自Clontech公司)为模板，合成正向引物5’-CCTTGATGCTTTACATAGAGAG-3’，和反向引物5’-CCAAGTCGTTCCAGAGGATTGAA-3’，进行PCR，获得283bp的目的片段。然后标记该片段，以该标记片段为探针与扩增后的人肌肉λgt11cDNA文库杂交，挑取阳性克隆，经同样的探针及筛选过程对得到的阳性克隆进行复筛后，最终得到若干阳性单克隆。鉴定测序后得到SEQ ID NO：1的全长cDNA序列。

根据本发明的另一方面，本发明的多核苷酸序列可用来表达或生产重组的蛋白或多肽。一般来说有以下步骤：用本发明的编码Hums6pkh的DNA片段(或变异体)或含有该DNA片段的重组表达载体转化合适的宿主细胞；在合适的培养基中培养的宿主细胞；从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。

本发明还涉及含有本发明的多核苷酸序列的表达载体及用所述的表达载体遗传工程化的宿主细胞。表达载体的一个重要特征是含有适当的启动子和翻译控制元件。多种表达载体可从商业途径得到。常用的载体包括(但不限于)质粒，噬菌体，粘粒，酵母表达载体，病毒，Ti质粒等，但最常用的载体首选质粒。常用的宿主细胞包括(但不限于)细菌，酵母，昆虫细胞，动物细胞或植物细胞等，但最常用的宿主细胞为细菌，尤其是大肠杆菌。另一个较常用的表达系统是哺乳动物细胞系，如Hela，COS细胞系或CHO细胞系等。

可用本领域中熟练人员已知的方法构建含hGTH6编码序列的重组表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术，DNA合成技术，体内重组技术等(J Sambrook等1989，分子克隆实验手册)。

本发明还涉及针对本发明的多肽的抗体，有多种方法可用于生产针对hGTH6抗原决定簇的抗体。这些抗体包括(但不限于)多克隆抗体，单克隆抗体，嵌合抗体，单链抗体，Fab片段和Fab表达文库产生的片段。

多克隆抗体的生产可用hGTH6蛋白或多肽免疫动物，如家兔，小鼠，大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。

单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler and Milstein.Nature，1975，256：495-497)。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术生产(Morrison等，PNAS，1985，81：6851)。而已有的生产单链抗体的技术(U.S.Pat No.4946778)也可用于生产抗Hums6pkh的单链抗体。

以下将通过实施例对本发明进行进一步的描述，但实施例仅是举例性的，并非对本发明的限制。实施例1Hums6pkh的cDNA的克隆和测序1.引物扩增

以人肌肉λgt11cDNA文库(购自Clontech公司)为模板，用寡核苷酸5’-CCTTGATGCTTTACATAGAGAG-3’为正向引物，寡核苷酸5’-CCAAGTCGTTCCAGAGGATTGAA-3’为反向引物，进行PCR，PCR条件为93℃3分钟，随之以93℃1分钟、62℃1分钟和72℃1分钟进行35个循环，最后72℃延伸5分钟。电泳检测得到的283bp目的片段。2.探针及其标记

以上述PCR目的片段为探针，用α-³²P-dATP(DuPont公司)对其进行随机引物标记，条件为37℃1小时，具体操作见MegaprimeDNA标记系统说明书(Amersham)。3.cDNA文库扩增及印迹标记(筛选文库)

将人肌肉λgt11cDNA文库进行扩增，克隆数达50万个，然后将扩增好的cDNA文库印迹到Hybond TM-N+尼龙膜上(Amersham)，再将标记好的探针变性后与印迹膜杂交，洗膜，放入带增感屏的片夹，与FUJI MEDIAI X光胶片于-80℃下进行放射自显影，72小时后冲片。4.挑取克隆及初筛克隆的复筛

通过上述杂交筛选获得8个初筛阳性克隆，用上述相同的探针杂交和筛选过程对这8个阳性克隆进行复筛，最终得到8个阳性单克隆。5.单克隆的鉴定和测序

以上述步骤4中得到的单克隆噬菌体为模板，用上述步骤1的两个正反引物分别与λgt11左右臂上的引物S1及S2(S1：5’-GTTCAACATCAGCCGCTACA-3’；S2：5’-CACCAGACCAACTGGTAATG-3’)进行搭配扩增，然后进行琼脂糖凝胶电泳，以判断每个克隆从探针出发向5’或3’步移(延伸)的长度，从中选出向5’延伸最长和向3’延伸最长的克隆，前者的插入片段约为1.8kb，后者的插入片段约为1.6kb。将这两个克隆S1、S2扩增产物与pGEM-T^载体(Promega)连接，转化大肠杆菌JM103；用QIAprep Plasmid试剂盒(QIAGEN)提取质粒，用双链嵌套式缺失试剂盒(Pharmacia)对插入片段进行定向系列缺失，然后用PCR对缺失子进行快速鉴定及排序。用SwquiTherm EXCEL^TMDNA测序试剂盒(Epicentre Technologies)对依次截短的缺失子进行测序，最后用电脑软件拼接顺序，获得全长cDNA序列，共2331bp，详细序列见SEQID NO：1，其中开放读框位于86-1495位核苷酸。

根据得到的cDNA序列推导出Hums6pkh的氨基酸序列，共469个氨基酸残基，其氨基酸序列详见SEQ ID NO：2。实施例2Hums6pkh的表达谱分析和染色体定位

多种组织Northem(MNT^TM)印迹膜(16种组织)购自Clontech公司，人/啮齿类体细胞杂种系Southem印迹膜(Pst)购自Oncor公司，以上实施例1步骤中的以3’EcoRs酶切800bp片段为探针，探针的标记方法同实施例1步骤2，Northern杂交按用户手册操作。16种组织的Northern杂交结果显示Northern基因为广谱表达基因，在脾、胸腺、卵巢、肝、骨骼肌、等组织中均有表达，表达量稍有差异，在睾丸中为高表达。实施例3Hums6pkh在大肠杆菌中的表达

在该实施例中，将以人肌肉λgt11cDNA为模板，编码Hums6pkgh的cDNA序列用对应于该DNA序列的5’和3’端的PCR寡核苷酸引物进行扩增，获得Hums6pkgh cDNA作为插入片段。

PCR反应中使用的5’寡核苷酸引物序列为：

5’-AGAGGTCGACATGGAATTCTTTAGGATAG-3’，

该引物含有SalI限制性内切酶的酶切位点，在该酶切位点之后是由起始密码子开始的nek4编码序列的19个核苷酸；

3’端引物序列为：

5’-CCGAGTCGACTCATCTCATCAGTTCTGCC-3’，

该引物含有SalI限制性内切酶的酶切位点、翻译终止子和Hums6pkh的部分编码序列。

引物上的限制性内切酶的酶切位点对应于细菌表达载体pQE-9(Qiagen Inc.，Chatsworth，CA)上的限制性内切酶酶切位点，该质粒载体编码抗生素抗性(Amp^r)、一个细菌复制起点(ori)、一个IPTG-可调启动子/操纵子(P/O)、一个核糖体结合位点(RBS)、一个6-组氨酸标记物(6-His)以及限制性内切酶克隆位点。

用SalI消化pQE-9载体以及插入片段，随后将插入片段连接到pQE-9载体并保持开放读框在细菌RBS起始。随后用连接混合物转化购自Qiagen，商品名为M15/rep4的E.coli菌株，M15/rep4含有多拷贝的质粒pREP4，其表达lacI阻遏物并携带卡那霉素抗性(Kan^r)。在含有Amp和Kan的LB培养皿上筛选转化子，抽提质粒，并测序验证Hums6pkh的cDNA片段已正确插入了载体。

在补加Amp(100μg/ml)和Kan(25μg/ml)的LB液体培养基中过夜培养(O/N)含所需构建物的阳性转化子克隆。过夜(O/N)培养物以1∶100-1∶250的稀释率稀释，然后接种到大体积培养基中，培养细胞至600光密度(OD₆₀₀)为0.4-0.6时，加入IPTG(“异丙基硫代-β-D-半乳糖苷”)至终浓度为1mM。通过使lacI阻遏物失活，IPTG诱导启动P/O导致基因表达水平提高。继续培养细胞3-4小时，随后离心(6000×g，20分钟)。超声裂解包涵体，收集细胞并将细胞沉淀溶于6M的盐酸胍中。澄清后，通过在能使含6-His标记物蛋白紧密结合的条件下，用镍-螯合柱层析从溶液中纯化溶解的Hums6pkh。用6M盐酸胍(PH5.0)从柱中洗脱Hums6pkh。可用几种方法从盐酸胍中变性沉淀蛋白。或者，使用透析步骤除去盐酸胍，或者从镍-螯合柱中分离出纯化蛋白。纯化后的蛋白质被结合到第二个柱中，该柱中具有递减的线性盐酸胍梯度。在结合到该柱时蛋白质变性，随后用盐酸胍(PH5.0)洗脱。最后，将可溶的蛋白质用PBS进行透析，然后将蛋白质保存在终浓度为10％(w/v)甘油的贮存液中。

用12％的SDS-PAGE胶进行电泳，鉴定表达蛋白的分子量大小为约52KDa。

此外，用常规方法对达蛋白的N端和C端各10个氨基酸长度的氨基酸进行测序。实施例4Hums6pkh在真核细胞(CHO细胞株)中的表达

在该实施例中，将以人肌肉λgt11cDNA为模板，编码Hums6pkh的cDNA序列用对应于该DNA序列的5’和3’端的PCR寡核苷酸引物进行扩增，获得Hums6pkh cDNA作为插入片段。

PCR反应中使用的5’寡核苷酸引物序列为：

5’-ACAGAAGCTTATGGAATTCTTTAGGATAG-3’，

该引物含有HindIII限制性内切酶的酶切位点，在该酶切位点之后是由起始密码子开始的Hums6pkh编码序列的19个核苷酸；

3’端引物序列为：

5’-CGCGGCGGCCGCTCATCTCATCAGTTCTGCC-3’

该引物含有NotI限制性内切酶的酶切位点、一个翻译终止子和Hums6pkh的部分编码序列。

引物上的限制性内切酶的酶切位点对应于CHO细胞表达载体pcDNA3上的限制性内切酶酶切位点，该质粒载体编码抗生素抗性(Amp^r和Neo^r)、一个噬菌体复制起点(f1ori)、一个病毒复制起点(SV40ori)、一个T7启动子、一个病毒启动子(P-CMV)、一个Sp6启动子、一个SV40启动子、一个SV40加尾信号和相应的polyA顺序、一个BGH加尾信号和相应的polyA顺序。

用HindIII、NotI消化pcDNA3载体以及插入片段，随后将插入片段连接到pcDNA3载体。随后用连接混合物转化E.coli DH5α菌株。在含有Amp的LB培养皿上筛选转化子，在补加Amp(100μg/ml)的LB液体培养基中过夜培养(O/N)含所需构建物的克隆。抽提质粒，并测序验证Hums6pkh的cDNA片段已正确插入了载体。

质粒转染CHO细胞是采用脂转染法，用Lipofectin试剂盒(GiBcoLife)进行的。转染48小时后，经2-3周的持续G418加压筛选，收集细胞及细胞上清测定表达蛋白酶活力。去G418，连续传代培养；对混合克隆细胞极限稀释，选择具有较高蛋白活性的细胞亚克隆。按常规方法大量培养上述阳性亚克隆。48小时后，开始收集细胞及上清，用超声裂解方法破碎细胞。以含0.05％Triton的50mMTris·Hcl(PH7.6)溶液为平衡液及洗脱液，用经预平衡的Superdex G-75柱收集上述蛋白的活性峰。再用50mMTris·Hcl(PH8.0)平衡的DEAE-Sepharose柱，以含0-1M NaCl的50mMTris·Hcl(PH8.0)溶液为洗脱液进行梯度洗脱，收集上述蛋白的活性峰。然后以PBS(PH7.4)为透析液对表达蛋白溶液进行透析。最后冻干保存。

用12％的SDS-PAGE胶进行电泳，鉴定表达蛋白的分子量大小为约52KDa。

此外，用常规方法对达蛋白的N端和C端各10个氨基酸长度的氨基酸进行测序。

根据上文教导，本发明可有各种改进和变动，因此，在所附权利要求范围内，本发明可以与具体所述不同的方式实施。

               序列表(1)一般信息(i)申请人：复旦大学(ii)发明名称：核糖体S6  基激酶(ii)序列数：2(iii)联系地址：

 (A)收信人：永新专利商标代理有限公司

 (B)街道：金融大街27号A座10层

 (C)城市：北京市

 (D)国家：中国

 (E)邮政编码：100032

 (vi)本申请资料：

 (A)申请号：

 (B)申请日：

 (C)分类号：

 (viii)律师/代理人信息：

 (A)姓名：林晓红

 (B)注册号：72002027

 (C)卷号：I98598cb

 (ix)电讯信息：

 (A)电话：8610-66211834

 (B)传真：8610-66211845(2)SEQ ID NO：1的信息：(i)序列特征：

(A)长度：2331bp

(B)类型：核酸

(C)链性：单链

(D)拓扑结构：线性(iii)分子型：cDNA(xi)序列描述：SEQ ID NO：11 CCAACGATGA   CCCAGAAGCA   GTTAGTTCTC   CAAGAACATC   AGATTCCCTC   AGTAGATTCC61 CTCAGTAGAT   CAAAAAAATA   GCCCCATGGA   ATTCTTTAGG   ATAGACAGTA   AGGATAGCGC121 AAGTGAACTC   CTGGGACTTG   ACTTTGGAGA   AAAATTGTAT   AGTCTAAAAT   CAGAACCTTT181 GAAACCATTC   TTTACTCTTC   CAGATGGAGA   CAGTGCTTCT   AGGAGTTTTA   ATACTAGTGA241 AAGCAAGGTA   GAGTTTAAAG   CTCAGGACAC   CATTAGCAGG   GGCTCAGATG   ACTCAGTGCC301 AGTTATTTCG   TTTAAAGATG   CTGCTTTTGA   TGATGTCAGT   GGTACTGATG   AAGGAAGACC361 TGATCTTCTT   GTAAATTTAC   CTGGTGAATT   GGAGTCAACA   AGAGAAGCTG   CAGCAATGGG421 ACCTACTAAG   TTTACACAAA   CTAATATAGG   GATAATAGAA   AATAAACTCT   TGGAAGCCCC481 TGATGTTTTA   TGCCTCAGGC   TTAGTACTGA   ACAATGCCAA   GCACATGAGG   AGAAAGGCAT541 AGAGGAACTG   AGTGATCCCT   CTGGGCCCAA   ATCCTATAGT   ATAACAGAGA   AACACTATGC601 ACAGGAGGAT   CCCAGGATGT   TATTTGTAGC   AGCTGTTGAT   CATAGTAGTT   CAGGAGATAT661 GTCTTTGTTA   CCCAGCTCAG   ATCCTAAGTT   TCAAGGACTT   GGAGTGGTTG   AGTCAGCAGT721 AACTGCAAAC   AACACAGAAG   AAAGCTTATT   CCGTATTTGT   AGTCCACTCT   CAGGTGCTAA781 TGAATATATT   GCAAGCACAG   ACACTTTAAA   AACAGAAGAA   GTATTGCTGT   TTACAGATCA841 GACTGATGAT   TTGGCTAAAG   AGGAACCAAC   TTCTTTATTC   CAGAGAGACT   CTGAGACTAA901 GGGTGAAAGT   GGTTTAGTGC   TAGAAGGAGA   CAAGGAAATA   CATCAGATTT   TTGAGGACCT961 TGATAAAAAA   TTAGCACTAG   CCTCCAGGTT   TTACATCCCA   GAGGGCTGCA   TTCAAAGATG1021 GGCAGCTGAA   ATGGTGGTAG   CCCTTGATGC   TTTACATAGA   GAGGGAATTG   TGTGCCGCGA1081 TTTGAACCCA   AACAACATCT   TATTGAATGA   TAGAGGACAC   ATTCAGCTAA   CGTATTTTAG1141 CAGGTGGAGT   GAGGTTGAAG   ATTCCTGTGA   CAGCGATGCC   ATAGAGAGAA   TGTACTGTGC1201 CCCAGAGGTT   GGAGCAATCA   CTGAAGAAAC   TGAAGCCTGT   GATTGGTGGA   GTTTGGGTGC1261 TGTCCTCTTT   GAACTTCTCA   CTGGCAAGAC   TCTGGTTGAA   TGCCATCCAG   CAGGAATAAA1321 TACTCACACT   ACTTTGAACA   TGCCAGAATG   TGTCTCTGAA   GAGGCTCGCT   CACTCATTCA1381 ACAGCTCTTG   CAGTTCAATC   CTCTGGAACG   ACTTGGTGCT   GGAGTTGCTG   GTGTTGAAGA1441 TATCAAATCT   CATCCATTTT   TTACCCCTGT   GGATTGGGCA   GAACTGATGA   GATGAACGTA1501 ATGCAGGGTT   ATCTTCACAC   ATTCTGATCT   TCTCTGTGAC   AGGCATCTCC   AGCACTGAGG1561 CACCTCTGAC   TCACAGTTAC   TTATGGAGCA   CCAAAGCATT   TGGATAAAGA   CCGTTATAGG1621 AAATGGGGGG  GAAATGGCTA  AAAGAGAACA  ATTCGTTTAC  AATTACAAGA  TATTAGCTAA1681 TTGTGCCAGG  GGCTGTTATA  TACATATATA  CACAACCAAG  GTGTGATCTG  AATTTAATCC1741 ACATTTGGTG  TTGCAGATGA  GTTGTAAAGC  CAACTGAAAG  AGTTCCTTCA  AGAAGTTCCT1801 CTGATAGGAA  GCTAGAAGTG  TAGAATGAAG  TTTTACTTGA  CAGAAGGACC  TTTACATGGC1861 AGCTAACAGT  GCTTTTTGCT  GACCAGGATT  GGTTTATATG  ATTAAATTAA  TATTTGCTTA1921 ATAATACACT  AAAAGTATAT  GAACAATGTC  ATCAATGAAA  CTTAAAAGCG  AGAAAAAAGA1981 ATATACACAT  AATTTCTGAC  GGAAAACCTG  TACCCTGATG  CTGTATAATG  TATGTTGAAT2041 GTGGTCCCAG  ATTATTTCTG  TAAGAAGACA  CTCCATGTTG  TCAGCTTTGT  ACTCTTTGTT2101 GATACATGCT  TATTTAGAGA  AGGGTTCATA  TAAACACTCA  CTCTGTGTCT  TCAACAGCAT2161 CTTTCTTTCC  CCATCTTTCT  ATTTTCTGCA  CCCTCTGCTT  GTTCCCTCAT  ATTCTGTTCT2221 TCCGACTCCT  GCTAACACAC  ATGCAACAAA  AAAGGGAAGG  GAGTGCTTAT  TTCCCTTTGT2281 GTAAGGACTA  AGAAATCATG  ATATCAAATA  AACATGGTGA  AACCATTAAA  A(2)SEQ ID NO：2的信息：(i)序列特征：

(A)长度：469个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(C)拓扑结构：线性(iii)分子型：多肽(xi)序列描述：SEQ D NO：21   MEFFRIDSKDSASELLGLDFGEKLYSLKSEPLKPFFTLPDGDSASRSFNTSESKVEFKAQ61  DTISRGSDDSVPVISFKDAAFDDVSGTDEGRPDLLVNLPGELESTREAAAMGPTKFTQTN121 IGIIENKLLEAPDVLCLRLSTEQCQAHEEKGIEELSDPSGPKSYSITEKHYAQEDPRMLF181 VAAVDHSSSGDMSLLPSSDPKFQGLGVVESAVTANNTEESLFRICSPLSGANEYIASTDT241 LKTEEVLLFTDQTDDLAKEEPTSLFQRDSETKGESGLVLEGDKEIHQIFEDLDKKLALAS301 RFYIPEGCIQRWAAEMVVALDALHREGIVCRDLNPNNILLNDRGHIQLTYFSRWSEVEDS361 CDSDAIERMYCAPEVGAITEETEACDWWSLGAVLFELLTGKTLVECHPAGINTHTTLNMP421 ECVSEEARSLIQQLLQFNPLERLGAGVAGVEDIKSHPFFTPVDWAELMR

Claims (14)

1、一种分离出的多核苷酸，其编码由SEQ ID NO：2的推导的氨基酸序列组成的多肽。

2、如权利要求1所述的多核苷酸，其中该多核苷酸是DNA。

3、如权利要求1所述的多核苷酸，其中该多核苷酸是RNA。

4、如权利要求1所述的多核苷酸，其中该多核苷酸是基因组DNA。

5、如权利要求1所述的多核苷酸，其由SEQ ID NO：1所示的编码序列组成。

6、含有权利要求2所述的多核苷酸的载体。

7、一种宿主细胞，其用权利要求6的载体转化、转染或转导。

8、如权利要求7所述的宿主细胞，该宿主细胞为原核细胞。

9、如权利要求8所述的宿主细胞，该宿主细胞为大肠杆菌。

10、如权利要求7所述的宿主细胞，该宿主细胞为真核细胞。

11、如权利要求10所述的宿主细胞，该宿主细胞为COS-7、CHO、Hela细胞。

12、如权利要求10所述的宿主细胞，该宿主细胞为酵母细胞。

13、生产多肽的方法，包括在合适的条件下培养权利要求7-12任一项的宿主细胞，使之表达所述的多肽。

14、一种多肽，所述的多肽是由SEQ ID NO：2的推导的氨基酸序列组成的多肽。