CN113862161A - 一种红千层内生真菌及其应用 - Google Patents

一种红千层内生真菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113862161A
CN113862161A CN202111239691.7A CN202111239691A CN113862161A CN 113862161 A CN113862161 A CN 113862161A CN 202111239691 A CN202111239691 A CN 202111239691A CN 113862161 A CN113862161 A CN 113862161A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cajeput
strain
metabolite
strains
endophytic
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111239691.7A
Other languages
English (en)
Inventor
薛永波
贾舒杰
苏向东
严文思
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sun Yat Sen University
Sun Yat Sen University Shenzhen Campus
Original Assignee
Sun Yat Sen University
Sun Yat Sen University Shenzhen Campus
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sun Yat Sen University, Sun Yat Sen University Shenzhen Campus filed Critical Sun Yat Sen University
Priority to CN202111239691.7A priority Critical patent/CN113862161A/zh
Publication of CN113862161A publication Critical patent/CN113862161A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/02—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using fungi
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明属于微生物技术领域，特别涉及一种红千层内生真菌及其应用，所述红千层内生真菌分类命名为：Neofusicoccum sp.J019，保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，其保藏编号为：GDMCC 61810，保藏日期为：2021年7月16日。本发明获得的红千层内生真菌Neofusicoccum sp.J019在PD液体培养基中获得的发酵产物对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌有较强抑制作用，对肠沙门氏菌有很强抑制作用。本发明为生产抗菌药物提供新的资源和途径。

Description

一种红千层内生真菌及其应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，特别涉及一种红千层内生真菌及其应用。
背景技术
近年来，细菌耐药性持续增强，国际临床抗生素用药仍不乏一些老产品，如头孢菌素类、喹诺酮类、大环内酯类以及青霉素类药物等。早在1958年，美国开发出糖肽类抗生素万古霉素，在多个国家广泛应用于临床，十年后华北制药厂成功研制去甲万古霉素，在临床上对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌导致的肺部感染有良好疗效，被作为万古霉素仿制药使用。但由于抗生素的滥用，抗菌药物的持续研发仍迫在眉睫，并且需要深入探索环境友好型、可人工再生的优质药源。
近年来，针对桃金娘科植物代谢物抗虫和抗菌作用的研究是天然药物化学的热点方向，该科植物富含柠檬烯、α–蒎烯等活性成分。桃金娘科约有100属，3000余种，其中包括有白千层属、红千层属等。白千层属(Melaleuca)为较好的庭园观赏树，主要分布在大洋洲。白千层属的植物精油对大肠杆菌、粪产碱杆菌、白色念珠菌等多种细菌具有抗菌活性，其中香茅醛和香茅醇共同作用使得柠檬桉精油具有抗菌活性。红千层属(Callistemon)也是广泛用于绿化、园艺观赏、入药和制取精油等。此外，垂枝红千层(C.viminalis)来源精油对人体致病菌枯草芽孢杆菌有显著的抑制作用。桃金娘科植物的化学成分非常丰富，不断有新颖活性天然产物被发掘，一直以来受到天然产物学家的热切关注。
植物内生菌是具有成药潜力的天然产物的重要来源，与其宿主植物之间的具有共生关系。已有研究显示，植物内生菌的代谢产物不仅可以表现出与宿主植物化学成分活性的差异，还存在产生与宿主植物相同或相似的药用活性成分的情况，比如紫杉醇及其类似物，喜树碱和10–羟基喜树碱，石杉碱甲，金丝桃素等。这提示我们桃金娘科植物内生菌中可能存在某些内生真菌，能够产生具有抗菌活性的代谢产物，这将为抗菌药物的开发提供重要资源，有望发现新的活性药物分子和先导化合物。
目前仅有少量文献报道对桃金娘科红千层属植物红千层(C.rigidus R.Br.)的研究，对红千层内生菌的研究更加匮乏。
发明内容
为了克服上述现有技术中的问题，提供一种红千层内生真菌及其应用。
为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种红千层内生真菌，所述红千层内生真菌分类命名为：Neofusicoccumsp.J019，保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，其保藏编号为：GDMCC 61810，保藏日期为：2021年7月16日，保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼。
所述红千层内生真菌Neofusicoccum sp.J019，提取其基因组DNA，利用ITS通用引物ITS1和ITS4进行扩增分析，得到单一DNA条带，提交GenBank数据库中进行Blast比对，筛选相似度最高的序列，建立系统进化树，最终鉴定为新壳梭孢Neofusicoccum sp.。该菌株在PD液体培养基中获得的发酵产物对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌有较强抑制作用，对肠沙门氏菌有很强抑制作用。
所述红千层内生真菌的代谢产物的制备方法，包括以下步骤：
S1.取-80℃，20％甘油保藏的菌种，解冻后吸出甘油水溶液，挑取菌种到PDA平板上，25～30℃恒温活化3～7天；
S2.将步骤S1活化后的菌种在PDA平板上划线接种，置于25～30℃培养箱生长3～7天后用于大量发酵的接种，每块长满菌体的平板以无菌水刮洗菌体，接种到PD液体培养基中，于28℃恒温振荡培养摇床中以120～150rpm的转数培养7天得到发酵液；
S3.将步骤S2获得的发酵液进行过滤，滤液用等量乙酸乙酯萃取2～5次，合并乙酸乙酯层并减压浓缩，得到菌株发酵代谢产物。
所述红千层内生真菌的代谢产物的制备方法所获得的红千层内生真菌的代谢产物。
所述红千层内生真菌的代谢产物在制备抗菌药物中的应用。
优选地，所述代谢产物在制备抗肠沙门氏菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌药物中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下技术效果：
本发明公开的一种红千层内生真菌的代谢产物的制备方法，获得的红千层内生真菌Neofusicoccum sp.J019在PD液体培养基中获得的发酵产物对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌有较强抑制作用，对肠沙门氏菌有很强抑制作用。本发明为生产抗菌药物提供新的资源和途径。
附图说明
图1五株红千层内生真菌菌落形态，a菌株J014；b菌株J015；c菌株J016；d菌株J019；e菌株J020；
图2五株红千层内生真菌的系统进化树,1菌株J014；2菌株J015；3菌株J016；4菌株J019；5菌株J020；
图3菌株J019次级代谢产物的HPLC峰形图，a 208nm；b 254nm。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
本发明中涉及到的主要原辅料：
受试菌株：抑菌实验所用菌株为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)ATCC25922、金黄色葡萄球菌金黄亚种(Staphylococcus aureus subsp.aureus)ATCC29213、肠沙门氏菌肠亚种(Salmonella enterica subsp.enterica)ATCC14028、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)ATCC27853，以上菌株均购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(ChinaGeneral Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)。
头孢他啶购自上海源叶生物科技有限公司；青霉素G钠购自Biosharp公司，DMSO购自Sigma公司。
下述实验例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1红千层内生真菌的分离
PDA单抗培养基(每升)：去皮鲜马铃薯200g，切碎，煮沸30min，以8层纱布过滤，加入葡萄糖20g，KH2PO4 3g，MgSO4·7H2O 1.5g，维生素B1 10mg，琼脂20g，加蒸馏水定容至1L，自然pH，121℃灭菌30min。灭菌后加入40μg/mL硫酸卡那霉素。
分离材料：红千层(Callistemon rigidus R.Br.)采自广州市南沙湿地公园，样品采集后在24h内进行处理，用无菌水冲洗采集的新鲜样品的叶片和茎，在经过紫外线照射30min的无菌工作台上，用5％次氯酸钠溶液浸泡1分钟，无菌水冲洗三次；再用75％乙醇浸泡1分钟，无菌水冲洗三次，用无菌滤纸吸干水分。用最后一次漂洗用的无菌水涂板作为阴性对照。茎用无菌手术剪去两端，取中间部位剪成1cm长的小段；叶片用无菌剪刀剪去边缘后剪成约0.5cm×0.5cm的方块；处理好的样品放入事先准备好的PDA单抗平板培养基中，每个培养皿接种3块相同类型组织块，每个样本每种组织部位平行接种三块平板，28℃恒温培养，每天观察，视菌体生长情况培养3～7天,待培养基上可观察到从组织块内部向周围长出菌丝时，挑取形态不同的菌落转移到新培养基上继续培养，重复此过程，直至菌株菌体生长状态单一，即得到纯化的菌株。共分离获得5株纯化的内生真菌(分别为J014、J015、J016、J019、J020，为发明人的自命名)，5株内生真菌菌落形态如图1所示。纯化后的菌株在20％的灭菌甘油管内-80℃保存。
实施例2 5株红千层内生菌的鉴定
使用真菌基因组DNA小量提取试剂盒(Mabio)提取菌株的DNA，作为PCR扩增的模板。PCR扩增采用真菌rDNA内转录间隔区(rDNA ITS)通用引物ITS1(5'－TCCGTAGGTGAACCTGCGG－3'，正向)和ITS4(5'－TCCTCCGCTTATTGATATGC－3'，反向)扩增分离菌株的rDNA ITS区。获得的序列通过BLAST程序在GenBank上进行相似性序列检索分析，对分离菌株进行鉴定。选择与目标菌株同源性较高的菌株序列，用软件MEGA7.0.14进行系统发育分析，构建系统发育进化树，5株红千层内生真菌的系统进化树如图2所示。菌株J014(SEQ ID NO.1)与胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides(KC215125.1)相似度为99.27％，菌株J015(SEQ ID NO.2)与菌核青霉Penicillium sclerotiorum(MF135518.1)相似度为99.45％，菌株J016(SEQ ID NO.3)与拟茎点霉Phomopsis sp.(MH712182.1)相似度为99.26％，菌株J019(SEQ ID NO.4)与新壳梭孢Neofusicoccum parvum(MH393201.1)相似度为99.82％，菌株J020(SEQ ID NO.5)与Quambalaria simpsonii(MT879594.1)相似度为99.53％。
结合菌落形态观察，五株内生菌最终鉴定结果为：菌株J014是炭疽菌Colletotrichum sp.，菌株J015是青霉菌Penicillium sp.，菌株J016是拟茎点霉Phomopsis sp.，菌株J019是新壳梭孢Neofusicoccum sp.，菌株J020是Quambalaria sp.。
实施例3内生菌发酵产物的制备
PD液体培养基(每升):去皮鲜马铃薯200g，切碎，煮沸30min，以8层纱布过滤，加入葡萄糖20g，KH2PO4 3g，MgSO4·7H2O 1.5g，维生素B1 10mg，加蒸馏水定容至1L，自然pH，121℃灭菌30min。
将20％灭菌甘油-80℃保存的菌种，解冻后吸出甘油水溶液，挑取菌种到PDA平板上，28℃恒温活化3～7天；活化后的菌种在PDA平板上划线接种，置于28℃培养箱生长3～7天后用于大量发酵的接种，每块长满菌体的平板(90mm i.d.)以无菌水刮洗菌体，接种到PD液体培养基中(250ml规格三角瓶×2，合计培养液约300mL)，于28℃恒温振荡培养摇床中以140rpm的转数培养7天得到发酵液；将获得的发酵液进行过滤，滤液用等量乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层并减压浓缩，得到菌株发酵代谢产物，结果如表1所示。
表1五株红千层内生真菌发酵代谢产物的质量
Figure BDA0003318779590000041
实施例4内生真菌的抗菌活性研究
表2样品信息
Figure BDA0003318779590000051
将待测样品加入96孔培养板，工作终浓度为128μg/mL；向各孔加入菌液，分别是大肠埃希氏菌(Escherichia coli)ATCC25922、金黄色葡萄球菌金黄亚种(Staphylococcusaureus subsp.aureus)ATCC29213、肠沙门氏菌肠亚种(Salmonella entericasubsp.enterica)ATCC14028、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC27853，菌液工作终浓度均为5×105CFU/mL；37℃培养24h，酶标仪测定625nm下的OD值。实验同时设置培养基空白对照、细菌对照以及头孢他啶、青霉素G钠阳性药对照。
表3五株红千层内生真菌代谢产物对四株细菌的抑制作用
Figure BDA0003318779590000052
本实验对5个菌株代谢产物进行大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、肠沙门氏菌和铜绿假单胞菌的抗细菌活性筛选。结果显示，浓度为128μg/mL时，菌株J019对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌有较强抑制作用(抑制率大于50％，表3)，对肠沙门氏菌有很强抑制作用(抑制率大于90％，表3)。
实施例5菌株J019的化学成分研究
通过HPLC法分析菌株J019的次级代谢产物：色谱柱为C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇–水。5％-100％甲醇洗脱，体积流量1.0mL/min，DAD检测，柱温35℃，进样量10μl。
代谢产物在208nm、254nm波长下吸收较明显，HPLC峰形图(图3)。从HPLC峰形图上可以看出，菌株J019的次级代谢产物丰富，且主要成分集中在35％–50％甲醇极性段。收集每一种峰形代表的化合物，进行抗菌实验以确定具有抗菌活性的单体化合物。
以上对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。
序列表
<110> 中山大学·深圳
中山大学
<120> 一种红千层内生真菌及其应用
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 549
<212> DNA
<213> 人工合成(人工合成)
<400> 1
cgactctgac tacgctctac accctttgtg acatacctat aactgttgct tcggcgggta 60
gggtctccgc gaccctcccg gcctcccgcc tccgggcggg tcggcgcccg ccggaggata 120
accaaactct gatttaacga cgtttcttct gagtggtaca agcaaataat caaaactttt 180
aacaacggat ctcttggttc tggcatcgat gaagaacgca gcgaaatgcg ataagtaatg 240
tgaattgcag aattcagtga atcatcgaat ctttgaacgc acattgcgcc cgccagcatt 300
ctggcgggca tgcctgttcg agcgtcattt caaccctcaa gctctgcttg gtgttggggc 360
cctacagctg atgtaggccc tcaaaggtag tggcggaccc tctcggagcc tcctttgcgt 420
agtaacttta cgtctcgcac tgggatccgg agggactctt gccgtaaaac ccccaatttt 480
ccaaaggttg acctcggatc aggtaggaat acccgctgaa cttaagcata tctaaagcgg 540
gaagaaaaa 549
<210> 2
<211> 555
<212> DNA
<213> 人工合成(人工合成)
<400> 2
gtgagtgaga ctctgggtca cctcccaccc gtgtttattg taccttgttg cttcggcagg 60
cccgcctcac ggccgccggg gggcttctgc ccccgggccc gcgcctgccg gagacaatct 120
tgaacgctgt ctgaagaatg cagtctgagc gattaagcaa aattagttaa aactttcaac 180
aacggatctc ttggttccgg catcgatgaa gaacgcagcg aaatgcgata attaatgtga 240
attgcagaat tcagtgaatc atcgagtctt tgaacgcaca ttgcgccccc tggtattccg 300
gggggcatgc ctgtccgagc gtcattgctg ccctcaagcc cggcttgtgt gttgggtctt 360
gtcccccccg ggggacaggc ccgaaaggca gtggcggcac cgtccgatcc tcgagcgtat 420
ggggctttgt cacccgctct gtaggcccgg ccggctgctt gccgaccccc atcaatcttt 480
ttttcaggtt gacctcggat caggtaggga tacccgctga acttaagcat atcaaaagcc 540
gggaggaacg tcaag 555
<210> 3
<211> 551
<212> DNA
<213> 人工合成(人工合成)
<400> 3
tgctgacgcg cccaggcgca cccagaaacc ctttgtgaac ttatacctta ttgttgcctc 60
ggcgcatgcc ggcccccagg ggcccctcgg agacgaggag caggcacgcc ggcggccaag 120
ttaactcttg tttttacact gaaactctga gaaaaaaaaa caaaatgaat caaaactttc 180
aacaacggat ctcttggttc tggcatcgat gaagaacgca gcgaaatgcg ataagtaatg 240
tgaattgcag aattcagtga atcatcgaat ctttgaacgc acattgcgcc ctccggtatt 300
ccggagggca tgcctgttcg agcgtcattt caaccctcaa gcattgcttg gtgttggggc 360
actgcctgta aaagggcagg ccctgaaatt cagtggcgag ctcgccagga ccccgagcgc 420
agtagttaaa ccctcgcttt ggaaggccct ggcggtgccc tgccgttaaa cccccaactc 480
ttgaaaattt gacctcggat caggtaggaa tacccgctga acttaagcat atctaaaggc 540
cggaaggaaa a 551
<210> 4
<211> 551
<212> DNA
<213> 人工合成(人工成)
<400> 4
gatatgctta agttcagcgg gtatccctac ctgatccgag gtcaaccttg agaaataatt 60
caaaggttcg tccggcgggc gacgccgtgc gctccaaagc gaggtgtttt ctactacgct 120
tgaggcaaga cgccaccgcc gaggtcttta aggcgcgtcc gtggaggacg gagcccaata 180
ccaagcagag cttgagggtt gaaatgacgc tcgaacaggc atgcccctcg gaataccaag 240
gggcgcaatg tgcgttcaaa gattcgatga ttcactgaat tctgcaattc acattactta 300
tcgcatttcg ctgcgttctt catcgatgcc agaaccaaga gatccgttgt tgaaagtttt 360
agtttattaa cttgtttttc agactgcgaa gttcactgac tggagtttta tggtcctctg 420
gcgggcgctg gccagccccc cgaagggcgc cggtgcggag gaccgcggcc cgccaaagca 480
acagaggtag gtacacattg ggtgggagag tcgagccgga gctcgaatca actcggtaat 540
gatccttccg c 551
<210> 5
<211> 651
<212> DNA
<213> 人工合成(人工合成)
<400> 5
ttaagggatt ttaggggctc cactctgtgg atcccgaccc tcacattatc cacatacact 60
tgtgcactgt tggtcaggtg tgagctcgag cccttaaccg ggcgacggct tgtttatcac 120
ctgccaacgc caattataca aactctgaga actatgaatg tgaatttaac ttgccaattt 180
ttggcgaaat taaatacaac tttcgacaac ggatctcttg gttctcccat cgatgaagaa 240
cgcagcgaat tgcgataagt aatgtgaatt gcagaattca gtgaatcatc gaatctttga 300
acgcaccttg cgctccctgg tattcctagg agcatgcctg tttgagtgtc atgaattcct 360
caaaccccaa tgttttgcaa aattcattgc ttgggtttgg ttgtgggcct atattgctgc 420
ttcacggcag ctggccttaa agatattagc tggactctcc gagactcttg gatagttcca 480
cttgatgtga taaatttgca tcggtgggtc aagactatgc ttgggaagtg tgagaagtct 540
gcttctaatc cggcgagagg tcccatcctc gacccaattc atttacaact ctggcctcaa 600
atcaggtagg actacccgct gaacttaagc atatcaaaaa ccggagggaa a 651

Claims (5)

1.一种红千层内生真菌，其特征在于，所述红千层内生真菌分类命名为：Neofusicoccum sp.J019，保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，其保藏编号为：GDMCC 61810，保藏日期为：2021年7月16日。
2.权利要求1所述红千层内生真菌的代谢产物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.取-80℃，20％甘油保藏的菌种，解冻后吸出甘油水溶液，挑取菌种到PDA平板上，25～30℃恒温活化3～7天；
S2.将步骤S1活化后的菌种在PDA平板上划线接种，置于25～30℃培养箱生长3～7天后用于大量发酵的接种，每块长满菌体的平板以无菌水刮洗菌体，接种到PD液体培养基中，于28℃恒温振荡培养摇床中以120～150rpm的转数培养7天得到发酵液；
S3.将步骤S2获得的发酵液进行过滤，滤液用等量乙酸乙酯萃取2～5次，合并乙酸乙酯层并减压浓缩，得到菌株发酵代谢产物。
3.根据权利要求2所述红千层内生真菌的代谢产物的制备方法所获得的红千层内生真菌的代谢产物。
4.根据权利要求3所述红千层内生真菌的代谢产物在制备抗菌药物中的应用。
5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述代谢产物在制备抗肠沙门氏菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌药物中的应用。
CN202111239691.7A 2021-10-25 2021-10-25 一种红千层内生真菌及其应用 Pending CN113862161A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111239691.7A CN113862161A (zh) 2021-10-25 2021-10-25 一种红千层内生真菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111239691.7A CN113862161A (zh) 2021-10-25 2021-10-25 一种红千层内生真菌及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113862161A true CN113862161A (zh) 2021-12-31

Family

ID=78997757

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111239691.7A Pending CN113862161A (zh) 2021-10-25 2021-10-25 一种红千层内生真菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113862161A (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106520572A (zh) * 2016-11-16 2017-03-22 河南省农业科学院 一种香椿内生真菌56‑50及其次级代谢产物、制备方法和应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106520572A (zh) * 2016-11-16 2017-03-22 河南省农业科学院 一种香椿内生真菌56‑50及其次级代谢产物、制备方法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CADELIS M.M.等: "Antimicrobial metabolites against methicillin-resistant Staphylococcus aureus from the endophytic fungus Neofusicoccum australe", MOLECULES, vol. 26, pages 1 - 10 *
LORENZINI M.等: "Isolation of Neofusicoccum parvum from withered grapes: strain characterization, pathogenicity and its detrimental effects on passito wine aroma", JOURNAL OF APPLIED MICROBIOLOGY, vol. 119, pages 1335 - 1344 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11459593B2 (en) Dendrobium officinale endophytic fungus strain and extracellular polysaccharide produced thereby, and extraction method and application of extracellular polysaccharide
CN109957515B (zh) 一株拟茎点霉菌株及其在对雷公藤红素进行生物转化中的应用
CN110484478B (zh) 一种枯草芽孢杆菌jz2-1-12及其应用
CN104450580B (zh) 放线菌素d的制备方法及其应用
CN108504594B (zh) 一株拟无枝菌酸菌及其在制备抗三七根腐病剂中的应用
CN102703342B (zh) 贝莱斯芽孢杆菌zj20菌株及其液体制剂
CN113444651A (zh) 一种西红花内生真菌及其在防治球茎腐烂病中的应用
CN109956991B (zh) 一种新化合物及其在制备细菌抑制剂中的应用
CN112760233B (zh) 一株深海来源的棘孢曲霉菌、其代谢产物及应用
CN112574892B (zh) 促进丹参根系发育及丹参酮合成的卷枝毛霉及其用途
CN113956983A (zh) 一种白术内生真菌、发酵产物及其应用
CN110257260B (zh) 一种白术内生真菌及其应用
CN113564074B (zh) 一株粘细菌及其在制备抑菌药物中的应用
CN115927047B (zh) 一种种子促生微生物试剂及其制备方法
CN104073453B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其在控制白酒中土臭味的应用
CN106701624A (zh) 一株拮抗枸杞根腐病的特基拉芽孢杆菌及其应用
CN114410479B (zh) 一株甘蔗内生真菌及其在生产多酚和抑菌方面的应用
CN113862161A (zh) 一种红千层内生真菌及其应用
CN115806913A (zh) 野尻链霉菌（Streptomyces nojiriensis）菌株9-13及应用
CN115074286A (zh) 一株拮抗足癣病原真菌的短小芽孢杆菌及其应用
CN104830695A (zh) 具有诱导丹参毛状根酚酸积累作用的内生菌及其用途
CN115927046A (zh) 一种金钗石斛内生皮尔瑞娥类芽孢杆菌及其制备方法
CN103589660A (zh) 一株产雷公藤甲素的内生细菌
CN111187732B (zh) 一种防治苦瓜枯萎病的生防菌株及其应用
CN112961783A (zh) 一株植物内生真菌及其在制备螺环内酯衍生物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20211231