CN113855695B - 一种结肠释药口服复方药物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种结肠释药口服复方药物组合物及其制备方法,属于医药技术领域。所述结肠释药口服复方药物组合物的有效成分为卡培他滨和奥西替尼,结构为核壳结构,其中核层材料包括:卡培他滨、奥西替尼和载体材料;壳层材料为肠溶包衣材料,所述肠溶包衣材料包括:聚甲基丙烯酸树脂、邻苯二甲酸醋酸纤维素、羟丙甲纤维素酞酸酯、聚乙烯醇酞酸酯、醋酸纤维素苯三酸酯和虫胶中的一种或多种。本发明提供的结肠释药口服复方药物组合物中的卡培他滨与奥西替尼具有显著的抗结肠癌协同效应,二者抗结肠癌的协同指数达0.243,在原位结肠癌动物模型中取得良好治疗效果,抑瘤率达到85%以上。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,特别涉及一种结肠释药口服复方药物组合物及其制备方法。
背景技术
结肠癌是源于结肠黏膜上皮细胞的恶性肿瘤,是胃肠道常见的恶性肿瘤之一。对于结肠癌患者来说,无论是局部结肠癌还是转移性结肠癌,药物治疗都是不可或缺的治疗方式。
卡培他滨的化学名称是5'-脱氧-5-氟-N-[(戊氧基)羰基]-胞苷,分子量为359.35。卡培他滨是白色或类白色结晶性粉末,在20℃时的水溶解度为26mg/mL。卡培他滨在体内会代谢为5-氟尿嘧啶。
奥西替尼(AZD9291)化学名称为N-[2-[[2-(二甲基氨基)乙基]甲基氨基]-4-甲氧基-5-[[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-2-丙烯酰胺,分子量为499.607。奥西替尼是一种表皮生长因子受体(EGFR)的激酶抑制剂。它与某些突变形式的EGFR(T790M,L858R和外显子19缺失)不可逆地结合。对具有EGFR突变的非小细胞肺癌(NSCLC)表现出明显的抗肿瘤活性。
结肠癌是常见的发生于结肠部位的消化道恶性肿瘤,化疗在结肠癌的治疗中占有重要地位。结肠癌的治疗药物包括细胞毒药物伊立替康、5-氟尿嘧啶、卡培他滨、奥沙利铂,单抗药物西妥昔单抗、帕尼单抗、贝伐单抗,小分子酪氨酸激酶抑制剂维莫非尼、曲美替尼、达拉非尼、康奈非尼、比美替尼等,其中FOLFOX是经典的组合疗法,包括奥沙利铂、亚叶酸钙和5-氟尿嘧啶组合的化疗方案,在FOLFOX基础上开展KRAS,NRAS和BRAF等突变检测,联合应用靶向药物,在其中小分子酪氨酸激酶抑制剂是针对BRAF V600E阳性突变,但结肠癌药物治疗后易产生耐药性、复发和转移。
卡培他滨在体内会代谢为5-氟尿嘧啶,是5-氟尿嘧啶的前体药物,在肿瘤组织内经胸苷磷酸化酶催化为氟尿嘧啶(5-FU)而起作用。临床研究表明,卡培他滨口服后肿瘤组织内5-FU的浓度明显高于血液和肌肉水平,具有疗效高、副作用低的特点。奥西替尼是EGFR抑制剂,对具有EGFR突变的非小细胞肺癌(NSCLC)表现出明显的抗肿瘤活性,目前结肠癌治疗指导原则以及相关的研究中未见奥西替尼的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种结肠释药口服复方药物组合物及其制备方法。通过卡培他滨与奥西替尼联合用药,表现出对结肠癌肿瘤的高抑制率,二者联用具备协同增效的作用,可以实现结肠癌的治疗。
为实现上述目的,本发明提供了如下技术方案:
本发明技术方案之一:提供一种结肠释药口服复方药物组合物,有效成分为卡培他滨和奥西替尼。
优选的,所述结肠释药口服复方药物组合物为核壳结构,其中核层材料包括:卡培他滨、奥西替尼和载体材料;壳层材料为肠溶包衣材料,所述肠溶包衣材料包括:聚甲基丙烯酸树脂、邻苯二甲酸醋酸纤维素(CAP)、羟丙甲纤维素酞酸酯(HPMCP)、聚乙烯醇酞酸酯(PVAP)、醋酸纤维素苯三酸酯(CAT)和虫胶(SA)中的一种或多种。
优选的,所述肠溶包衣材料还包括:增塑剂和/或抗粘剂。
更优选的,所述增塑剂包括:PEG6000、柠檬酸三乙酯、邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯中的一种或多种;所述抗粘剂包括滑石粉、微粉硅胶、硬脂酸中的一种或多种。
优选的,所述载体材料包括:聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、乙基纤维素(EC)、羟丙甲纤维素(HPMC)、醋酸纤维素(CA)、甲基纤维素(MC)、羟丙基纤维素(HPC)、卡波姆(POLY)、聚乙烯醇(PVA)、泊洛沙姆、明胶、聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)、聚乳酸(PLA)和聚已内酯(PLA)中的一种或多种;所述聚甲基丙烯酸树脂包括:尤特奇L30D-55、尤特奇L100-55、尤特奇L100、尤特奇S100和尤特奇FS30D中的一种或多种。
更优选的,所述载体材料为PLGA;所述聚甲基丙烯酸树脂为尤特奇S100,尤特奇S100是甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯1:2共聚物。
更优选的,所述PLGA的平均分子量为9000~12000,PLGA中丙交酯和已交酯的摩尔比为50:50。
优选的,所述卡培他滨与奥西替尼的质量比为10:1~1:10。
更优选的,所述卡培他滨与奥西替尼的质量比为1:1。
本发明技术方案之二,提供一种上述结肠释药口服复方药物组合物的制备方法,步骤包括:以肠溶包衣材料溶液为外层流体,以卡培他滨、奥西替尼和载体材料的混合物溶液为内层流体,利用同轴静电喷雾法将外层流体和内层流体制备成核壳结构的结肠释药口服复方药物组合物。
优选的,所述同轴静电喷雾法的电压为6~20KV,外层流速为0.25~2mL/min,内层流速为0.1~1.5mL/min,接收距离为10~20cm,环境湿度为30~50%,环境温度为25±5℃。
更优选的,所述同轴静电喷雾法的电压为10~15KV,外层流速为0.5~1.2mL/min,内层流速为0.25~0.6mL/min,接收距离为13~16cm。
同轴静电喷雾技术可以一步构建复杂结构的微纳颗粒,但影响因素多,工艺参数控制要求高,不同药物的理化性质差异大,目前并没有静电喷雾制备复方多种药物结肠给药微纳颗粒的药物组合物。本发明提供的工艺参数能够成功构建含卡培他滨和奥西替尼的复方结肠释药微粒制剂,该药物组合物在pH1.0胃酸条件下不释药,在pH7.4条件下卡培他滨与奥西替尼以等比例缓慢持续释药。
优选的,所述肠溶包衣材料溶液的溶剂为乙醇,肠溶包衣材料的浓度为0.1~50mg/mL;所述卡培他滨、奥西替尼和载体材料的混合物溶液的溶剂为二氯甲烷,卡培他滨的浓度为0.1~50mg/mL,奥西替尼0.1~50mg/mL,载体材料的浓度为0.1~150mg/mL。
更优选的,所述肠溶包衣材料为尤特奇S100,尤特奇S100的浓度为10~30mg/mL;所述卡培他滨的浓度为3~10mg/mL;所述奥西替尼3~10mg/mL;所述载体材料为PLGA,PLGA的浓度为10~30mg/mL。
本发明技术方案之三:提供一种上述结肠释药口服复方药物组合物为有效成分的药物制剂,剂型包括颗粒剂、片剂和胶囊。
本发明技术方案之四,提供一种上述结肠释药口服复方药物组合物在制备治疗结肠癌药物中的应用。
本发明的有益技术效果如下:
本发明制得的结肠释药口服复方药物组合物为核壳结构的微粒,微粒粒径在0.1~50μm之间。该结肠释药口服复方药物组合物在pH1.0胃酸条件下不释药,在pH7.4条件下卡培他滨与奥西替尼以等比例缓慢持续释药。
本发明所述结肠释药口服复方药物组合物中的卡培他滨与奥西替尼具有显著的抗结肠癌协同效应,二者抗结肠癌的协同指数达0.243,在原位结肠癌动物模型中取得良好治疗效果,抑瘤率达到85%以上。
本发明所使用奥西替尼具有抗P-gp和BCRP底物的作用,而同为EGFR抑制剂的吉非替尼与卡培他滨联合应用则没有相应的协同效果,曲美替尼、康奈非尼与卡培他滨对结肠癌肿瘤细胞的协同指数亦不如奥西替尼与卡培他滨联用。将卡培他滨与奥西替尼联用,有望为结肠癌肿瘤的治疗提供一种临床治疗手段。
附图说明
图1为实施例所用静电喷雾装置的示意图。
图2为实施例4制备的结肠释药口服复方药物组合物的共聚焦显微镜照片,其中a为罗丹明B的照片;b为香豆素-6的照片,c为罗丹明B和香豆素-6重叠的照片。
图3为实施例1制备的结肠释药口服复方药物组合物的粒径检测结果。
图4为实施例1制备的结肠释药口服复方药物组合物扫描电镜图片。
图5为实施例6中利用HPLC测定空白溶液,卡培他滨及奥西替尼的图谱,其中a为空白溶液检测结果,b为卡培他滨检测结果,c为奥西替尼检测结果。
图6为实施例1制备的结肠释药口服复方药物组合物的体外释放曲线(pH1.0和pH7.4)。
图7为实施例1和2制备的结肠释药口服复方药物组合物的体外释放曲线(pH5.8)。
图8为实施例10中各组裸鼠的结肠部位肿瘤生长情况。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式,该详细说明不应认为是对本发明的限制,而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式,并非用于限制本发明。
另外,对于本发明中的数值范围,应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明,否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料,但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等,均为开放性的用语,即意指包含但不限于。
实施例1
结肠释药口服复方药物组合物的制备:
将PLGA(分子量9000,丙交酯:已交酯=50:50)300mg、卡培他滨50mg和奥西替尼50mg溶于8mL二氯甲烷中,涡旋振荡溶解后,加二氯甲烷定容至10mL,作为内层溶液;尤特奇S100300mg、柠檬酸三乙酯15mg溶于10mL乙醇中,作为外层溶液。取两支5mL注射器,分别加入内层溶液和外层溶液,将注射器分别连接到同轴针头两端,推动注射器的活塞,排出气泡,直至针头有液滴出现,重复操作完成两只注射器的排气。分别将注射器固定在蠕动泵上,通过鳄鱼夹把同轴针头和高压发生器连接,同轴针头下方放置接收平台,将接收平台连接导线使其接地。制备平台如图1所示,搭建好制备平台后,调节蠕动泵改变流速,直至针头处有液滴流下,开启高压发生器,随后调节各参数,控制电压11~13KV、外层流速0.8mL/min、内层流速0.4mL/min、接收距离15cm,得到结肠释药口服复方药物组合物。同轴电喷雾颗粒制备过程中,保持周边空气湿度30~40%,温度25±2℃。
实施例2
结肠释药口服复方药物组合物的制备:
将PLA(分子量40000)100mg、卡培他滨40mg和奥西替尼40mg溶于10mL二氯甲烷-二甲基亚砜(体积比9:1)溶媒中,作为内层溶液;邻苯二甲酸醋酸纤维素300mg溶于10mL丙酮中,作为外层溶液。取两支5mL注射器,分别加入内层溶液和外层溶液,将注射器分别连接到同轴针头两端,推动注射器的活塞,排出气泡,直至针头有液滴出现,重复操作完成两只注射器的排气。分别将注射器固定在蠕动泵上,通过鳄鱼夹把同轴针头和高压发生器连接,同轴针头下方放置接收平台,将接收平台连接导线使其接地。制备平台如实施例1,搭建好制备平台后,调节蠕动泵改变流速,直至针头处有液滴流下,开启高压发生器,随后调节各参数,控制电压10~12KV、外层流速0.5mL/min、内层流速0.25mL/min、接收距离13cm,得到结肠释药口服复方药物组合物。同轴电喷雾颗粒制备过程中,保持周边空气湿度30~50%,温度25±5℃。
实施例3:
结肠释药口服复方药物组合物的制备:
将PVPK30250mg、卡培他滨50mg和奥西替尼50mg溶于10mL乙醇溶媒中,作为内层溶液;尤特奇L100300mg溶于10mL丙酮中,作为外层溶液。取两支5mL注射器,分别加入内层溶液和外层溶液,将注射器分别连接到同轴针头两端,推动注射器的活塞,排出气泡,直至针头有液滴出现,重复操作完成两只注射器的排气。分别将注射器固定在蠕动泵上,通过鳄鱼夹把同轴针头和高压发生器连接,同轴针头下方放置接收平台,将接收平台连接导线使其接地。制备平台如实施例1,搭建好制备平台后,调节蠕动泵改变流速,直至针头处有液滴流下,开启高压发生器,随后调节各参数,控制外层流速0.7mL/min、内层流速0.3mL/min,调节电压和接收距离,同轴电喷雾颗粒制备过程中,保持周边空气湿度30~50%,温度25±5℃。电压和接收距离参数调节与样品性状见表1。
表1工艺参数与样品性状
实施例4:
结肠释药口服复方药物组合物的制备:
将PLGA(分子量12000,丙交酯:已交酯=50:50)250mg、香豆素-65mg、卡培他滨50mg和奥西替尼50mg溶于10mL二氯甲烷溶媒中,作为内层溶液;尤特奇S100300mg、罗丹明B5mg溶于10mL丙酮中,作为外层溶液。取两支5mL注射器,分别加入内层溶液和外层溶液,将注射器分别连接到同轴针头两端,推动注射器的活塞,排出气泡,直至针头有液滴出现,重复操作完成两只注射器的排气。分别将注射器固定在蠕动泵上,通过鳄鱼夹把同轴针头和高压发生器连接,同轴针头下方放置接收平台,将接收平台连接导线使其接地。制备平台如实施例1,搭建好制备平台后,调节蠕动泵改变流速,直至针头处有液滴流下,开启高压发生器,随后调节各参数,控制电压10~12KV、外层流速0.6mL/min、内层流速0.3mL/min、接收距离13cm,得到结肠释药口服复方药物组合物。同轴电喷雾颗粒制备过程中,保持周边空气湿度30~50%,温度25±5℃。
图2为本发明实施例4制得的结肠释药口服复方药物组合物的共聚焦显微镜照片,其中a为罗丹明B的照片;b为香豆素-6的照片,c为罗丹明B和香豆素-6重叠的照片。从图2中可以看出,本发明制备的结肠释药口服复方药物组合物呈现内外核壳结构。
实施例5
粒径测定与电镜观察:
称取实施例1制备的结肠释药口服复方药物组合物,加入超纯水稀释至1%(w/v),使用马尔文2000激光粒度扫描仪在25℃下测量,结果见图3,测得粒径为2.11±0.246μm,PDI为0.21±0.02;利用扫描电镜观察结肠释药口服复方药物组合物形态,结果见图4,从图4中可以看出,本发明制备的结肠释药口服复方药物组合物外观形态圆整。
实施例6
药物含量测定:
利用HPLC测定卡培他滨、奥西替尼的含量,HPLC的色谱条件如下:
色谱柱:Agilent C18柱(4.6×250mm,5μm);检测波长:213nm;流速:1.0mL/min;柱温:30℃;进样量:20μL;流动相:A相:B相=1:1(流动相A:称取7.8g磷酸二氢钠溶解于1L去离子水中,用磷酸调节pH至2.5,抽滤并超声排气;流动相B:取1L纯甲醇超声排气),等度洗脱。
空白溶液,卡培他滨及奥西替尼的HPLC检测结果见图5,其中a为空白溶液检测结果,b为卡培他滨(30μg/mL)检测结果,c为奥西替尼(30μg/mL)检测结果。
实施例7
实施例1制备的结肠释药口服复方药物组合物的体外释放试验:
量取9mL浓盐酸,缓慢加入去离子水稀释并定容至1000mL,得到0.1mol/L盐酸缓冲液;称取磷酸二氢钾6.8g,加0.1mol/L氢氧化钠溶液395mL,加入1mL吐温80,再加入去离子水摇匀并定容至1000mL,得到含0.1%吐温80的PBS缓冲液(pH 7.4)。
选择截留分子量为1000的透析袋,裁剪成适当长度的小段,置于装满去离子水的烧杯中,90℃水浴加热30分钟,依次用2%(w/v)碳酸氢钠溶液、1×10-3mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液、50%乙醇清洗,然后用去离子水多次冲洗备用。
称取实施例1制备的结肠释药口服复方药物组合物20mg,放入5mL容量的EP管中,加入5mL浓度为0.1mol/L盐酸缓冲液,37℃ 100rpm条件下水浴振荡2h,离心,倒出上清液并过滤,取滤液0.75mL加入进样小瓶,再加入0.75mL甲醇,摇匀作为体外释放2h测试样品。取离心后的颗粒,放入处理好的透析袋中,将透析袋扎紧,放置于50mL EP管中,加入25mL含0.1%吐温80的PBS缓冲液(pH 7.4)作为释放介质,37℃100rpm条件下水浴振荡。分别在3h、4h、5h、6h、7h、8h、10h、12h、24h、36h、48h取样,每次取样200μL,补充相同体积的保温空白释放介质。200μL取样液体中加入等量的甲醇,摇匀作为体外释放测试样品。共设置三组平行组,使用HPLC进行含量检测,色谱条件与实施例6相同。
实验结果见图6,从图6中可以看出,卡培他滨与奥西替尼药物释放速率几乎一致,在2h内(pH1.0条件下),药物释放量在5%以内,12h的药物释放量达到65%左右。在48h内,可以释放约80%的药物。
实施例8
实施例1和2制备的结肠释药口服复方药物组合物的体外释放试验:
称取磷酸二氢钾8.34g和磷酸氢二钾0.87g,加入1mL吐温80,加水溶解成1000mL,得到含0.1%吐温80的PBS缓冲液(pH 5.8)。
选择截留分子量为1000的透析袋,裁剪成适当长度的小段,置于装满去离子水的烧杯中,90℃水浴加热30分钟,依次用2%(w/v)碳酸氢钠溶液、1×10-3mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液、50%乙醇清洗,然后用去离子水多次冲洗备用。
称取实施例1和2制备的结肠释药口服复方药物组合物20mg,放入5mL容量的EP管中,加入5mL浓度为0.1mol/L盐酸缓冲液,37℃ 100rpm条件下水浴振荡2h,离心,倒出上清液并过滤,取滤液0.75mL加入进样小瓶,再加入0.75mL甲醇,摇匀作为体外释放2h测试样品。取离心后的颗粒,放入处理好的透析袋中,将透析袋扎紧,放置于50mL EP管中,加入25mL含0.1%吐温80的PBS缓冲液(pH 5.8)作为释放介质,37℃100rpm条件下水浴振荡。分别在3h、4h、5h、6h、7h、8h、10h、12h、24h、36h、48h取样,每次取样200μL,补充相同体积的保温空白释放介质。200μL取样液体中加入等量的甲醇,摇匀作为体外释放测试样品。共设置三组平行组,使用HPLC进行含量检测,色谱条件与实施例6相同。
实验结果见图7,从图7中可以看出,实施例1样品在pH5.8条件下几乎不释药,实施例2样品在pH5.8条件下缓慢释药,结合实施例7结果,实施例1样品可以实现在结肠条件(pH7.4)下释药,而在pH小于7.4条件下不释药。
实施例9
细胞实验:
使用DMEM高糖培养基培养人结肠癌HCT116细胞,将人结肠癌HCT116细胞以5000个细胞/孔的密度在96孔细胞培养皿中铺板(空白组无细胞),每孔200μL培养液,培养箱内孵育24小时,观察细胞的形态,确认细胞状态良好后,弃掉孔板中的培养液,分别换上配制的不同浓度的含培养基的药物组别。孵育24小时,每个孔板中加入20μL的MTT溶液,继续孵育4小时,吸出孔板中的液体,向每个孔板加入200μL DMSO,在空气摇床上振荡10分钟。使用酶标仪测定每个孔板在490nm波长下的吸光度(A)。统计所有吸光度数值,使用以下公式计算出每个给药浓度下的细胞存活率:
存活率=[(A实验孔-A空白孔)÷(A对照孔-A空白孔)]×100%实验结果见表2~5:
表2不同比例卡培他滨/奥西替尼对人结肠癌HCT116细胞的IC50和CI50
卡/奥比例 | IC50卡(μg/mL) | IC50奥(μg/mL) | CI50 |
卡培他滨 | 114.8 | ||
卡:奥=5:1 | 37.75 | 7.55 | 0.693 |
卡:奥=2:1 | 11.38 | 5.69 | 0.374 |
卡:奥=1:1 | 4.26 | 4.26 | 0.243 |
卡:奥=1:2 | 3.80 | 7.60 | 0.400 |
卡:奥=1:5 | 2.89 | 14.45 | 0.723 |
奥西替尼 | 20.72 |
表3不同比例卡培他滨/吉非替尼对人结肠癌HCT116细胞的IC50和CI50
卡/吉比例 | IC50卡(μg/mL) | IC50吉(μg/mL) | CI50 |
卡培他滨 | 123.5 | ||
卡:吉=5:1 | 90.41 | 22.85 | 1.10 |
卡:吉=2:1 | 72.46 | 26.72 | 1.025 |
卡:吉=1:1 | 78.37 | 20.55 | 0.972 |
卡:吉=1:2 | 70.52 | 19.36 | 0.889 |
卡:吉=1:5 | 58.41 | 26.33 | 0.905 |
吉非替尼 | 60.93 |
表4不同比例卡培他滨/曲美替尼对人结肠癌HCT116细胞的IC50和CI50
卡/曲比例 | IC50卡(μg/mL) | IC50曲(μg/mL) | CI50 |
卡培他滨 | 110.49 | ||
卡:曲=5:1 | 49.22 | 12.37 | 0.841 |
卡:曲=2:1 | 16.42 | 10.63 | 0.489 |
卡:曲=1:1 | 19.16 | 12.95 | 0.588 |
卡:曲=1:2 | 17.15 | 16.24 | 0.675 |
卡:曲=1:5 | 15.68 | 20.17 | 0.787 |
曲美替尼 | 31.26 |
表5不同比例卡培他滨/康奈非尼对人结肠癌HCT116细胞的IC50和CI50
卡/康比例 | IC50卡(μg/mL) | IC50康(μg/mL) | CI50 |
卡培他滨 | 121.6 | ||
卡:康=5:1 | 43.64 | 12.87 | 0.846 |
卡:康=2:1 | 22.92 | 13.54 | 0.701 |
卡:康=1:1 | 26.18 | 11.47 | 0.659 |
卡:康=1:2 | 20.25 | 7.92 | 0.466 |
卡:康=1:5 | 16.84 | 11.57 | 0.576 |
康奈非尼 | 26.42 |
从表2~5的结果可以看出,卡培他滨与奥西替尼对人结肠癌HCT116细胞具有强协同作用,卡培他滨与吉非替尼无协同作用,卡培他滨/曲美替尼和卡培他滨/康奈非尼具有中-高程度的协同作用,但均远不如卡培他滨与奥西替尼。
实施例10
动物实验:
结肠癌裸鼠动物模型的建立:将人结肠癌HCT116细胞连续传代培养,通过生物显微镜观察细胞状态,得到足量人结肠癌HCT116细胞后停止细胞培养。吸去培养基,加入适量胰酶消化,吸去胰酶,加入适量培养液吹打混匀细胞,使用细胞计数仪对细胞计数。计数完成后对含人结肠癌HCT116细胞的培养液离心,吸去上层培养液,用PBS调整细胞浓度为1.25×108个/mL细胞,将细胞吹打混匀备用;
种瘤手术前对裸鼠禁食12h。使用三溴乙醇(10μL/g)通过腹腔注射对裸鼠进行麻醉,麻醉后的裸鼠以仰卧位固定,使用75%酒精消毒腹部皮肤。从裸鼠腹部左下位置切口,在切口下找到盲肠,将盲肠拉出腹部,找到近盲肠端结肠。将备用的细胞再次吹打混匀,使用1mL胰岛素针吸取40μL接种于结肠壁,将盲肠和结肠放置回裸鼠腹腔,依次缝合内皮、外皮,缝合完毕后使用75%酒精将伤口消毒,向裸鼠大腿处注射50μL青霉素钠溶液,防止感染。将处理好的裸鼠放置在保温箱内,等待裸鼠复苏后移至笼中。将处理后的裸鼠放置在笼中继续饲养,持续观测其身体状态和体重变化。一段时间后解剖观察肿瘤生长情况。
选择16只8周龄无胸腺裸鼠,再次建立结肠癌裸鼠动物模型。16只裸鼠随机分为4组,分别设为生理盐水组3只、空白材料组3只、游离药组5只、实施例1样品组5只。将已种瘤的4组裸鼠分别放置在不同的笼子中培养,保证培养条件一致,持续检测其状态和体重变化。4组裸鼠培养3周后开始给药,给药剂量定为10mg/kg,空白材料组、实施例1样品组和游离药组分别使用200μL生理盐水分散混匀,给药方式为灌胃给药,空白组给予等量的生理盐水。给药频率为2次/周,共给药三次。最后一次给药的4天后,使用颈椎脱臼法处死所有裸鼠。解剖裸鼠,观察其结肠部位肿瘤生长情况,并对肿瘤称重。各组裸鼠的结肠部位肿瘤生长情况见图7,肿瘤称重结果见表6。
表6抑瘤率实验结果
从图8和表6中的结果看出,生理盐水组和空白材料组肿瘤组织生长迅速,游离药组的肿瘤比生理盐水组稍小,实施例1样品组的肿瘤组织体积最小,该样品组抑瘤率达到85%以上。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述,并非对本发明的范围进行限定,在不脱离本发明设计精神的前提下,本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进,均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (4)
1.一种结肠释药口服复方药物组合物,其特征在于,有效成分为卡培他滨和奥西替尼;
所述结肠释药口服复方药物组合物为核壳结构,其中核层材料包括:卡培他滨、奥西替尼和载体材料;壳层材料为肠溶包衣材料,所述肠溶包衣材料包括:聚甲基丙烯酸树脂、邻苯二甲酸醋酸纤维素、羟丙甲纤维素酞酸酯、聚乙烯醇酞酸酯、醋酸纤维素苯三酸酯和虫胶中的一种或多种;
所述载体材料包括:聚乙烯吡咯烷酮、乙基纤维素、羟丙甲纤维素、醋酸纤维素、甲基纤维素、羟丙基纤维素、卡波姆、聚乙烯醇、泊洛沙姆、明胶、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚乳酸和聚已内酯中的一种或多种;所述聚甲基丙烯酸树脂包括:尤特奇L30D-55、尤特奇L100-55、尤特奇L100、尤特奇S100和尤特奇FS30D中的一种或多种;
所述卡培他滨与奥西替尼的质量比为5:1~1:5;
所述结肠释药口服复方药物组合物的制备步骤包括:以肠溶包衣材料溶液为外层流体,以卡培他滨、奥西替尼和载体材料的混合物溶液为内层流体,利用同轴静电喷雾法将外层流体和内层流体制备成核壳结构的结肠释药口服复方药物组合物;
所述同轴静电喷雾法的电压为6~20KV,外层流速为0.25~2mL/min,内层流速为0.1~1.5mL/min,接收距离为10~20cm,环境湿度为30~50%,环境温度为25±5℃;
所述肠溶包衣材料溶液的溶剂为乙醇,肠溶包衣材料的浓度为0.1~50mg/mL;所述卡培他滨、奥西替尼和载体材料的混合物溶液的溶剂为二氯甲烷,卡培他滨的浓度为0.1~50mg/mL,奥西替尼0.1~50mg/mL,载体材料的浓度为0.1~150mg/mL。
2.根据权利要求1所述的结肠释药口服复方药物组合物,其特征在于,所述肠溶包衣材料还包括:增塑剂和/或抗粘剂。
3.一种权利要求1或2所述结肠释药口服复方药物组合物为有效成分的药物制剂,其特征在于,剂型包括颗粒剂、片剂和胶囊。
4.权利要求1或2所述结肠释药口服复方药物组合物在制备治疗结肠癌药物中的应用。
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