CN113846157B - 人serpina3基因用于酒依赖筛查的用途 - Google Patents
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- C12Q2600/158—Expression markers
Abstract
本发明涉及人SERPINA3基因用于酒依赖筛查的用途,属于酒依赖筛查技术领域。为解决酒依赖筛查诊断缺少可靠遗传标记物的问题,本发明提供了人SERPINA3基因用于酒依赖筛查的用途。本发明利用酒精依赖患者血液样本进行全外显子组测序,将测序结果与健康正常人数据库进行对照整合分析,通过生物信息技术和统计学分析得到与酒精依赖形成密切相关的SERPINA3基因。采用ROC分析检测SERPINA3基因的诊断价值,其AUC为0.921(P<0.0001),敏感性为93.1%,特异性为80.0%,由此确定SERPINA3基因能够作为酒依赖筛查的可靠稳定的遗传标记物,为临床或健康筛查中酒依赖的诊断提供依据。
Description
技术领域
本发明属于酒依赖筛查技术领域,尤其涉及人SERPINA3基因用于酒依赖筛查的用途。
背景技术
酒精已成为全球范围内最常见的成瘾物质,酗酒引起的严重公共卫生问题是社会各个领域关注的重点之一。长时间的大量饮酒,不仅会有精神障碍、合并心脑血管疾病、情感性障碍以及人格障碍和肝肾功能受损等不良的影响产生,还会导致酒依赖的产生。
酒依赖是一种慢性、复发性脑部疾病,其发病机制尚不明确,长期以来,众多精神病学家们对酒依赖进行探索,仍难以解释酒依赖的发病机制,通常认为生物、心理、遗传以及社会等多种因素共同参与了酒依赖的发病,其中遗传因素占据重要地位。有研究报道,近亲间的嗜酒习性有很高的一致性。与一般人群相比,酒依赖一级亲属发生酒依赖的风险增加4-7倍。随着分子生物学技术的发展,遗传学研究存在巨大潜力,有望为酒依赖的治疗提供新途径。因此,寻找和定位候选基因是酒依赖研究领域的关键。
通过候选基因,对相关基因所涉及的蛋白质组学、分子功能等进行分析,阐释在长期酒精暴露下是如何引起酒精成瘾的强迫性和持续性,这将为酒依赖的诊断起到重要的辅助作用。目前虽有研究对其遗传学及表观遗传学机制进行了不同层次的探讨,但尚无可靠遗传标记物。
发明内容
为解决酒依赖筛查诊断缺少可靠的遗传标记物的问题,本发明提供了人SERPINA3基因用于酒依赖筛查的用途。
本发明的技术方案:
人SERPINA3基因用于酒依赖筛查的用途。
进一步的,所述用途为人SERPINA3基因在制备用于筛查酒依赖的试剂中的用途。
进一步的,所述用途为人SERPINA3基因在制备用于筛查酒依赖的试剂盒中的用途。
进一步的,所述人SERPINA3基因用于酒依赖筛查的具体筛查方法为:收集待测者血液样本于室温下3000g离心15min,取血浆上清测定血浆样品中的SERPINA3基因浓度。
进一步的,采用SERPINA3 Human ELISA试剂盒测定所述血浆样品中的SERPINA3基因浓度。
进一步的,当血浆样品中的SERPINA3基因浓度达到2798pg/mL及以上即诊断为酒依赖阳性患者。
本发明的有益效果:
本发明利用酒依赖患者血液样本进行全外显子组测序,将全外显子组测序结果与已知健康正常人数据库进行对照整合分析,筛选可靠的候选致病基因,通过生物信息技术和统计学分析,得到与酒精依赖形成密切相关的SERPINA3基因。采用ROC分析检测SERPINA3基因的诊断价值,其AUC为0.921(P<0.0001),敏感性为93.1%,特异性为80.0%,由此确定SERPINA3基因能够作为酒依赖筛查的可靠稳定的遗传标记物,为临床或健康筛查中酒依赖的诊断提供依据。将SERPINA3基因用于酒依赖筛查,能够实现检测费用的降低,使大规模个体化基因检测在不久的将来成为可能。
附图说明
图1为酒精依赖相关基因的三个微阵列数据集韦恩图;
图2为酒精依赖患者基于SERPINA 3基因水平的ROC曲线;
图3为健康对照大鼠海马CA1区SERPINA3基因表达照片;
图4为酒精依赖组大鼠海马CA1区SERPINA3基因表达照片;
图5为健康对照组大鼠前额叶皮质区SERPINA3基因表达照片;
图6为酒精依赖组大鼠前额叶皮质区SERPINA3基因表达照片;
图7为酒精依赖组大鼠海马CA1区SERPINA3+iba1免疫荧光共定位照片。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步的说明,但并不局限于此,凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的精神和范围,均应涵盖在本发明的保护范围中。下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置均采用本领域内的常规设备或装置,若未特别指明,本发明实施例中所用的原料等均可市售获得;若未具体指明,本发明实施例中所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1
本实施例所涉及的全外显子组测序(whole exome sequencing,WES)技术作为第二代测序技术的一种,仅对基因组外显子区域进行序列捕获、富集并测序,再利用生物信息学手段对WES产生的大量数据进行分析和筛选,从而找到遗传病的变异基因或位点。
利用序列捕获技术将全外显子区域DNA捕捉并富集后进行高通量测序的基因分析方法。采用的技术平台主要是罗氏公司的SeqCap EZ全外显子捕获系统,Illumina公司的Solexa技术和Agilent公司的SureSelect外显子靶向序列富集系统。其捕获的目标区在34~62M之间,不仅包括编码区同时也加入了部分非编码区。NGS的测序过程主要包括DNA测序文库的制备、锚定桥接、PCR扩增、单碱基延伸测序和数据分析。根据测序仪捕获到在测序过程中掺入有不同荧光标记碱基片段,经计算机将荧光信号转化成不同颜色的测序峰图和碱基序列。
结合全基因组测序结果,采用WGS测序后筛选酒精依赖相关的基因的三个微阵列数据集之间的差异表达基因(DEGS)。对GEO数据库进行筛选,得到图1所示酒精依赖相关基因的三个微阵列数据集韦恩图。由图1可见,这三个数据集有一个重叠基因SERPINA 3基因,由此鉴定差异表达基因(DEGs)为SERPINA3基因。
实施例2
本实施例收集酒依赖患者和健康人群的血液样本对人SERPINA3基因用于酒依赖筛查的可靠性进行临床验证。
本实施例临床验证具体方法为:
步骤一、样品准备:临床收集酒依赖血液样本58例,健康对照血液样本20例,所有血液样本都是在07:00前,即患者第一次入院且未给予任何药物之前采集的。
步骤二、样品处理:采集到的血液样本立即室温下3000g离心15min。取血浆上清,-80℃保存;
步骤三、样品测定:使用ELISA试剂盒——SERPINA3 Human ELISA kit,YanZun,Shanghai,China,根据制造商的操作方案,测定每个血浆样品中的SERPINA3基因浓度。
本实施例得到酒依赖患者和健康人的血液样本中的SERPINA3基因浓度值如表1所示。
表1
为了检测差异基因的诊断价值,根据表1数据基于SERPINA 3基因水平绘制了ROC曲线,图2为酒精依赖患者基于SERPINA 3基因水平的ROC曲线。如图2所示,采用ROC分析检测SERPINA3基因的诊断价值,其AUC为0.921(P<0.0001),敏感性为93.1%,特异性为80.0%。由此确定SERPINA3基因能够作为酒依赖筛查的可靠稳定的遗传标记物,为临床或健康筛查中酒依赖的诊断提供依据。
实施例3
构建大鼠酒精依赖模型,对酒精依赖与SERPINA3基因的关系进行组化验证。
本实施例分别设立了酒精依赖组大鼠和健康对照组大鼠,考察了SERPINA3基因在两组大鼠前额叶皮质和海马区CA1区的表达情况。
图3为健康对照大鼠海马CA1区SERPINA3基因表达照片;图4为酒精依赖组大鼠海马CA1区SERPINA3基因表达照片;由图3和图4的对比可以看出,SERPINA3基因在酒精依赖组海马CA1区的表达高于健康对照组。
图5为健康对照组大鼠前额叶皮质区SERPINA3基因表达照片;图6为酒精依赖组大鼠前额叶皮质区SERPINA3基因表达照片;由图5和图6的对比可以看出,SERPINA3基因在酒精依赖组前额叶皮质区的表达高于健康对照组。
图7为酒精依赖组大鼠海马CA1区SERPINA3+iba1免疫荧光图,可以看出SERPINA3在小胶质细胞中表达上调。
PCR验证结果也充分证明,酒精依赖组中SERPINA3基因、ELANE表达较健康对照组明显提高。进一步通过镜子观察发现,SERPINA3基因在酒精依赖大鼠中星形胶质细胞和神经元中表达上调。
Claims (1)
1.检测人SERPINA3基因表达水平的试剂在制备筛查酒依赖的试剂盒中的应用。
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Title |
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Stress–response pathways are altered in the hippocampus of chronic alcoholics;Jeanette N. McClintick等;Alcohol;第47卷(第7期);摘要、结果和讨论部分 * |
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