CN113795250A

CN113795250A - 关节炎疾病的联合治疗

Info

Publication number: CN113795250A
Application number: CN202080034595.6A
Authority: CN
Inventors: 托马斯·恩格尔布雷希特·诺克尔德·约纳森
Original assignee: Sinac Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Sinac Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2019-05-10
Filing date: 2020-05-07
Publication date: 2021-12-14
Also published as: IL287904A; SG11202111821SA; EP4119140A1; HUE059638T2; SI3773558T1; EP3773558A1; BR112021022397A2; PL3773558T3; JP2022531906A; LT3773558T; MX2021013296A; ES2927294T3; CA3139000A1; ZA202108219B; PT3773558T; DK3773558T3; KR20220006551A; EP3773558B1; AU2020273479A1; WO2020229297A1

Abstract

本发明涉及包含分开或合并的甲氨蝶呤(MTX)和(E)‑N‑反式‑{3‑[1‑(2‑硝基苯基)‑1H‑吡咯‑2‑基]‑烯丙叉}‑氨基胍乙酸盐(AP1189)或其药学上可接受的衍生物的组合物，其用于治疗关节炎疾病例如类风湿性关节炎的方法中。

Description

关节炎疾病的联合治疗

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年5月10日提交的欧洲专利申请号19173734.5的优先权，其全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及包含分开或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药和苯基吡咯氨基胍衍生物化合物(例如AP1189)或其药学上可接受的衍生物的组合物，其用于治疗关节炎疾病(包括类风湿性关节炎(RA))的方法中。

背景

关节炎疾病是暗示一个或多个关节受损或发炎的病况。该病况常表现为疼痛、肿胀、发热、发红和活动受限。存在许多不同形式的关节炎病症，最常见的类型是骨关节炎和类风湿性关节炎。骨关节炎是一种退行性关节疾病，由软骨磨损引起。由于软骨不能被身体适当地替换，它可能会在关节边缘产生新的骨骼来补偿软骨的损失。这反过来会产生疼痛的骨肿胀，因为新骨会拉伸原有骨的敏感内层。这种情况在手指中很常见。类风湿性关节炎(RA)是一种自身免疫性疾病，主要影响关节，发达国家中0.5-1％的成年人受RA影响。虽然类风湿性关节炎的病因尚不清楚，但据信与遗传和环境因素的组合有关。当前治疗的目标是减轻疼痛和炎症，以改善患有这种病况的患者的生活质量。止痛药、类固醇和非甾体抗炎药(NSAID)经常被用作减轻症状的治疗方法。缓解疾病的抗风湿药(DMARD)(例如羟氯喹，特别是甲氨蝶呤(MTX))可用于减缓疾病的进展。然而，避免副作用的适当剂量对MTX而言可能是一个挑战，并不是所有的患者都对MTX做出适当的反应。

黑素肾上腺皮质激素系统是一组神经肽能(neuropeptidergic)和免疫内分泌信号通路，其在大量生理功能(包括黑素生成、应激反应、炎症、免疫调节和肾上腺皮质类固醇生成)的稳态控制中起着不可或缺的作用。它由多种成分组成，包括五种G蛋白偶联的黑素肾上腺皮质激素受体：黑素肾上腺皮质激素受体1(MC1R)至MC5R；肽配体：α、β、γ-促黑素细胞激素(α、β、γ-MSH)、脑垂体前叶分泌的促肾上腺皮质激素(ACTH)；和内源性拮抗剂。黑素肾上腺皮质激素系统的生物学功能由这五种黑素肾上腺皮质激素受体(MCR)介导，它们具有不同的组织分布，传递不同的信号并在不同的器官系统中发挥不同的生物活性。促肾上腺皮质激素(ACTH)是所有黑素肾上腺皮质激素受体1至5(MC1-5R)的内源性肽激素和激动剂，其中MC2R与ACTH特异性结合；类固醇生成仅由ACTH触发，并通过肾上腺皮质中的MC2R介导。α-促黑素细胞激素(αMSH)是一种小的内源性肽激素，在结构上与ACTH相关，可以与除MC2R以外的所有MCR结合。MC1R由皮肤中的黑素细胞大量表达，是黑素生成的关键控制点，并决定头发的颜色。

外周MC1和MC3可以被药理学激活以诱导抗炎。内源性激动剂α-黑素细胞刺激素(aMSH)与其他保护性介质一样，由免疫细胞释放以抵消促炎信号，从而防止过度的组织损伤。然后，靶向受体MC1和MC3的疗法将通过模仿身体自身的保护资源来发挥作用，并且可能具有较轻的副作用负担的特征。

当前对关节炎病症的治疗(例如用甲氨蝶呤治疗类风湿性关节炎)通常涉及副作用的风险，并且在单独施用时也可能不是完全有效，并且患有关节炎病症的受试者需要新的和有效的治疗方案。

WO 2007/141343中公开了对黑素肾上腺皮质激素受体具有活性的苯基吡咯氨基胍衍生物。这种化合物的一个实例是抗炎化合物AP1189((E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉(allylidene)}-氨基胍乙酸盐)，其首先被显示与MC1R结合(WO2007/141343)，随后被鉴定为受体MC1R和MC3R的偏向双重激动剂，它不引起经典的cAMP生成(因此没有MC1R诱导的黑素生成)，而是似乎诱导旁路途径，包括ERK1/2-磷酸化和Ca²⁺动员(Montero-Melendez et al.2015)。

概述

本发明人已经发现苯基吡咯氨基胍衍生物AP1189((E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐)，当与目前的标准护理甲氨蝶呤(MTX)联合使用时，与任一化合物单独施用时相比，均表现出显著更好的抗关节炎作用。通过提供如本文所公开的新的抗关节炎联合治疗，本发明人提供了对当前抗关节炎治疗的治疗有效替代方案，以及提供了潜在降低MTX毒性并为对MTX具有低响应速率的患者(例如MTX无响应者)提供新的治疗管理的有吸引力的方式。

本公开的一方面提供了一种组合物，其包含分开或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药和式(I)或(Ia)的化合物：

包括其互变异构和异构形式，例如对映体形式、非对映体形式和外消旋形式；

其中

n为1、2或3；

每个R₁、R₂、R₃、R₄和R₅独立地选自氢、任选取代的C_1-6-烷基、任选取代的C_3-6-环烷基、任选取代的C_2-6-烯基、任选取代的C_4-6-二烯基(alkadienyl)、任选取代的C_2-6-炔基、羟基、任选取代的C_1-6-烷氧基、任选取代的C_2-6-烯氧基、羧基、任选取代的C_1-6-烷氧基羰基、任选取代的C_1-6-烷基羰基、甲酰基、C_1-6-烷基磺酰基氨基、任选取代的芳基、任选取代的芳基氧基羰基、任选取代的芳基氧基、任选取代的芳基羰基、任选取代的芳基氨基、芳基磺酰基氨基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳基氧基羰基、任选取代的杂芳基氧基、任选取代的杂芳基羰基、任选取代的杂芳基氨基、杂芳基磺酰基氨基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环基氧基羰基、任选取代的杂环基氧基、任选取代的杂环基羰基、任选取代的杂环基氨基、杂环基磺酰基氨基、氨基、单-和二(C_1-6-烷基)氨基、氨基甲酰基、单-和二(C_1-6-烷基)氨基羰基、氨基-C_1-6-烷基-氨基羰基、单-和二(C_1-6-烷基氨基-C_1-6-烷基-氨基羰基、C_1-6-烷基羰基氨基、氨基-C_1-6-烷基-羰基氨基、单-和二(C_1-6-烷基)氨基-C_1-6-烷基-羰基氨基、氰基、胍基、脲基、C_1-6-烷酰基氧基、C_1-6-烷基磺酰基、C_1-6-烷基亚磺酰基、C_1-6-烷基磺酰基-氧基、氨基磺酰基、单-和二(C_1-6-烷基)氨基磺酰基、硝基、任选取代的C_1-6-烷硫基和卤素，其中任何氮结合的C_1-6-烷基任选地被羟基、C_1-6-烷氧基、C_2-6-烯氧基、氨基、单-和二(C_1-6-烷基)氨基、羧基、C_1-6-烷基羰基氨基、卤素、C_1-6-烷硫基、C_1-6-烷基-磺酰基-氨基或胍取代；

每个R₆和R₇独立地选自氢、任选取代的C_1-6-烷基、任选取代的C_2-6-烯基、任选取代的C_4-6-二烯基、任选取代的C_2-6-炔基、任选取代的C_1-6-烷氧基羰基、任选取代的C_1-6-烷基羰基、任选取代的芳基、任选取代的芳基氧基羰基、任选取代的芳基羰基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳基氧基羰基、任选取代的杂芳基羰基、氨基羰基、单-和二(C_1-6-烷基)氨基羰基、氨基-C_1-6-烷基-氨基羰基和单-和二(C_1-6-烷基)氨基-C_1-6-烷基-氨基羰基；或者R₆和R₇可以一起形成五元或六元含氮环；

或其药学上可接受的衍生物，

其用于治疗受试者的关节炎疾病，例如关节炎疾病。

在一个实施方案中，提供了一种组合物，其包含分开或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药，和式(II)的化合物：

或其药学上可接受的衍生物，

其用于治疗关节炎疾病。

本公开的另一个方面提供了一种组合物，其包含甲氨蝶呤(MTX)或其前药和选自以下的化合物或其药学上可接受的衍生物：{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍；{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐；(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍；和(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐，其用于治疗关节炎疾病。

在一个实施方案中，所述关节炎疾病是类风湿性关节炎(RA)。

定义

在本文中，术语“药学上可接受的衍生物”包括药学上可接受的盐，其表示对受试者无害的盐。这样的盐包括药学上可接受的碱或酸加成盐以及药学上可接受的金属盐、铵盐和烷基化的铵盐。药学上可接受的衍生物还包括酯和前药，或者化合物的可以被生物代谢成活性化合物的其他前体，或者化合物的晶体形式。

术语“酸加成盐”旨在包括“药学上可接受的酸加成盐”，其表示对受试者无害的盐。酸加成盐包括无机酸和有机酸的盐。合适的无机酸的代表性实例包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸、硫酸、硝酸等。合适的有机酸的代表性实例包括甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯甲酸、肉桂酸、柠檬酸、富马酸、乙醇酸、乳酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、草酸、苦味酸、丙酮酸、水杨酸、琥珀酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、酒石酸、抗坏血酸、双羟萘酸、双亚甲基水杨酸(bismethylene salicylic)、乙烷二磺酸、葡萄糖酸、柠康酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕榈酸、EDTA、乙醇酸、对氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等。药学上可接受的无机或有机酸加成盐的其他实例包括在以下文献中列出的药学上可接受的盐：J.Pharm.Sci.66,2,(1977)，其通过引用并入本文。

本文所用的术语化合物的“治疗有效量”是指足以治愈、减轻、预防给定疾病或病症及其并发症、降低给定疾病或病症及其并发症的风险、或者部分阻止给定疾病或病症及其并发症的临床表现的量。足以实现这一点的量被定义为“治疗有效量”。用于每种目的的有效量将取决于疾病或损伤的严重程度以及受试者的体重和总体状态。将理解的是，可以使用常规实验通过构建数值矩阵并测试矩阵中的不同点来确定合适的剂量，这都属于经过培训的医师或兽医的普通技能。

本文所用的术语“治疗(treatment和treating)”是指出于对抗病况、疾病或病症的目的对受试者的管理和护理。该术语旨在包括针对受试者所患有的给定病况的全部种类的治疗。待治疗的受试者优选是哺乳动物，特别是人类。然而，对动物例如小鼠、大鼠、狗、猫、马、牛、绵羊和猪的治疗也在本文的范围内。待治疗的受试者可以是各种年龄的。

本文所用的“关节炎疾病”是表现为关节炎症的炎性疾病。也称为关节炎。

本文所用的术语“缓解”是指关节炎疾病的体征和症状的减少或消失。缓解可以是暂时的或永久的。部分缓解是关节炎疾病的体征和症状的减少，而完全缓解在本文中被理解为关节炎疾病的体征和症状的消失。

附图说明

图1：在用K/BxN血清治疗的小鼠中，在8天的研究期期间发展成定义为临床评分为10或更高的重度关节炎的动物的百分比(详情参见实施例1)。组1：未治疗的时间对照；组2：用溶媒治疗的动物；组3：用甲氨蝶呤治疗的动物；组4：用AP1189治疗的动物；组5：用甲氨蝶呤和AP1189的组合治疗的动物。组3和组5用相同剂量的甲氨蝶呤治疗。组4和组5用相同剂量的AP1189治疗。

图2：健康志愿者单次口服测试化合物后的血浆浓度。测试化合物(AP1189)在早晨作为悬浮液给予禁食的男性健康志愿者。测试化合物的剂量水平：100、200、400、600或800mg。收集连续的血浆样品并通过LCMS-MS测定血浆中的浓度。每个剂量水平N＝6。每组平均值。

图3：健康志愿者重复口服测试化合物后的血浆浓度。测试化合物(AP1189)在早晨作为悬浮液给予禁食的男性健康志愿者，每天一次，持续两周。测试化合物1的剂量水平：50、100、200mg。在给药的最后一天(第14天)后收集连续的血浆样品，并通过LCMS-MS测定血浆中的浓度。每个剂量水平N＝9。每组平均值+/-SD。

详述

本公开提供了一种组合物，其包含分开存在的或合并存在的甲氨蝶呤(MTX)和如本文定义的式(I)、(Ia)或(II)的化合物，其用于治疗关节炎疾病(或关节炎)。

在本公开的一个方面，提供了一种组合物，其包含分开或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药，和

式(I)或(Ia)的化合物：

其中

n为1、2或3；

或其药学上可接受的衍生物；

其用于治疗受试者的关节炎疾病，例如关节炎疾病。

在一个实施方案中，本公开提供甲氨蝶呤(MTX)或其前药，以及式(I)或(Ia)的化合物，其中n、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆和R₇各自如本文所定义，用于治疗受试者的关节炎疾病，例如关节炎疾病。

在一个实施方案中，提供了一种治疗关节炎疾病的方法，该方法包括一个或多个向受试者例如有需要的受试者施用组合物的步骤，该组合物包含分开的或合并的

甲氨蝶呤(MTX)或其前药，和

式(I)或(Ia)的化合物：

其中

n为1、2或3；

或其药学上可接受的衍生物。

在一个实施方案中，本公开提供了一种治疗关节炎疾病的方法，包括一个或多个向受试者(例如有需要的受试者)施用甲氨蝶呤(MTX)或其前药的步骤，以及一个或多个向受试者(例如有需要的受试者)施用式(I)或(Ia)的化合物(其中n、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆和R₇各自如本文所定义)的步骤。

在本公开的一个实施方案中，提供了包含分开的或合并的甲氨蝶呤(MTX)和式(I)或(Ia)的化合物的组合物在制备用于治疗关节炎疾病(例如受试者的关节炎疾病)的药物中的用途：

其中

n为1、2或3；

或其药学上可接受的衍生物。

在一个实施方案中，本公开提供了甲氨蝶呤(MTX)和式(I)或(Ia)的化合物(其中n、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆和R₇各自如本文所定义)在制备用于治疗关节炎疾病的药物中的用途。

化合物

本公开提供甲氨蝶呤(MTX)或其前药与式(I)或(Ia)的化合物(其中n、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆和R₇各自如本文上面所定义)的组合，其用于治疗关节炎疾病。在特定实施方案中，n、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆和R₇各自根据以下公开内容指定。

在一个实施方案中，n＝1。在一个实施方案中，本公开提供了一种组合物，其包含分开或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药，以及式(I)或(Ia)的化合物，其中R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆和R₇各自如本文所定义，并且n＝1，其用于治疗关节炎疾病。

在一个实施方案中，每个R₁、R₂和R₃独立地选自-H、-CH₃、-CF₃、-CCl₃、-O-C_1-6烷基、-OH、-OCH₃、-NH-C_1-6烷基、-N(C_1-6烷基)₂、-S-C_1-6烷基、-^tBu、-CN、-SO₃-C_1-6烷基、-NH₂、-NO₂、-CO₂H、-CO₂-C_1-6烷基、-C(＝O)-C_1-6烷基、-CHO、吗啉、吡咯烷、吡咯或卤素。

在一个实施方案中，本公开提供了一种组合物，其包含分开或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药，以及式(I)或(Ia)的化合物，其中n、R₄、R₅、R₆和R₇各自如本文所定义，并且每个R₁、R₂和R₃独立地选自-H、-CH₃、-CF₃、-CCl₃、-O-C_1-6烷基、-OH、-OCH₃、-NH-C_1-6烷基、-N(C_1-6烷基)₂、-S-C_1-6烷基、-^tBu、-CN、-SO₃-C_1-6烷基、-NH₂、-NO₂、-CO₂H、-CO₂-C_1-6烷基、-C(＝O)-C_1-6烷基、-CHO、吗啉、吡咯烷、吡咯或卤素，其用于治疗关节炎疾病，例如受试者的关节炎疾病。

在一个实施方案中，R₁和/或R₂各自为吸电子基团。在一个实施方案中，本公开提供了一种组合物，其包含分开或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药，和式(I)或(Ia)的化合物，其中n、R₃、R₄、R₅、R₆和R₇各自如本文所定义，并且R₁和/或R₂各自为吸电子基团，其用于关节炎疾病，例如治疗受试者的关节炎疾病。

吸电子基团被理解为吸电子元素或官能团，其通常通过共振或诱导效应从邻近原子向自身吸取电子密度。可以使用哈米特方程(Hammett equation)(本领域技术人员已知的一种方程)来确定官能团是吸电子的还是给电子的。哈米特取代基常数，也称为取代基常数σ，可以用作官能团从邻近原子向自身吸取电子密度的能力的量度。吸电子基团是取代基常数σ>0(例如在0.01至0.9之间，例如0.78)的吸电子元素或官能团。这些值在本领域中是已知的，并且可以在诸如J.Org.Chem.,23,420(1958)的科学文献的表格中找到。CF₃、CCl₃、F、Cl、CN和NO₂是吸电子基团的实例。

在一个实施方案中，所述R₁选自CF₃、CCl₃、F、Cl、CN和NO₂。在一个实施方案中，本公开提供甲氨蝶呤(MTX)或其前药和式(I)或(Ia)的化合物，其中n、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆和R₇各自如本文所定义，并且所述R₁选自CF₃、CCl₃、F、Cl、CN和NO₂，其用于治疗受试者的关节炎疾病，例如关节炎疾病。

在一个实施方案中，所述R₂和/或R₃各自为氢。在一个实施方案中，本公开提供甲氨蝶呤(MTX)或其前药和式(I)或(Ia)的化合物，其中n、R₁、R₄、R₅、R₆和R₇各自如本文所定义，并且所述R₂和/或R₃各自为氢，其用于治疗受试者的关节炎疾病，例如关节炎疾病。

在一个实施方案中，每个R₄和R₅独立地选自-H、C_1-6烷基、卤素、-O(C_1-6烷基)、-NH(C_1-6烷基)和-C(＝O)C_1-6烷基。

在一个实施方案中，本公开提供甲氨蝶呤(MTX)或其前药和式(I)或(Ia)的化合物，其中n、R₁、R₂、R₃、R₆和R₇各自如本文所定义，并且每个R₄和R₅独立地选自-H、C_1-6烷基、卤素、-O(C_1-6烷基)、-NH(C_1-6烷基)和-C(＝O)C_1-6烷基，其用于治疗受试者的关节炎疾病，例如关节炎疾病。

在一个实施方案中，每个R₆和R₇独立地选自氢、甲基、乙基和丙基。

在一个实施方案中，所述R₆和R₇各自为氢。

在一个实施方案中，所述R₆为氢且R₇为甲基或乙基。在一个实施方案中，所述R₆为氢且R₇为甲基。在一个实施方案中，所述R₆为氢且R₇为乙基。在一个实施方案中，所述R₆和R₇均为甲基。在一个实施方案中，所述R₆和R₇均为乙基。

在一个实施方案中，本公开提供了甲氨蝶呤(MTX)或其前药和式(I)或(Ia)的化合物，其中n、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅各自如本文所定义，并且每个R₆和R₇独立地选自氢、甲基、乙基和丙基，例如其中

所述R₆和R₇各自为氢，或

所述R₆为氢且R₇为甲基或乙基，或

所述R₆为氢且R₇为甲基，或

所述R₆为氢且R₇为乙基，或

所述R₆和R₇均为甲基，或

所述R₆和R₇均为乙基，

其用于治疗受试者的关节炎疾病，例如关节炎疾病。

在一个实施方案中，所述R₂、R₃、R₄、R₅、R₆和R₇各自为氢，并且所述R₁选自CF₃、CCl₃、F、Cl、NO₂和CN。

在一个实施方案中，本公开提供了甲氨蝶呤(MTX)或其前药和式(I)或(Ia)的化合物，其中n为1、2或3，所述R₂、R₃、R₄、R₅、R₆和R₇各自为氢，并且所述R₁选自CF₃、CCl₃、F、Cl、NO₂和CN，其用于治疗关节炎疾病，例如受试者的关节炎疾病。

在一个实施方案中，所述R₂、R₃、R₄、R₅、R₆和R₇各自为氢，所述R₁选自CF₃、CCl₃、F、Cl、NO₂或CN，并且n＝1。

在一个实施方案中，本公开提供了甲氨蝶呤(MTX)或其前药和式(I)或(Ia)的化合物，其中n＝1，所述R₂、R₃、R₄、R₅、R₆和R₇各自为氢，并且所述R₁选自CF₃、CCl₃、F、Cl、NO₂和CN，其用于治疗关节炎疾病，例如受试者的关节炎疾病。

在一个实施方案中，所述R₃位于4-位。

在一个实施方案中，所述R₃选自F、Cl和Br。

在一个实施方案中，本公开提供了甲氨蝶呤(MTX)或其前药和式(I)或(Ia)的化合物，其中n、R₁、R₂、R₄、R₅、R₆和R₇各自如本文所定义，并且所述R₃位于4-位和/或所述R₃选自F、Cl和Br，其用于治疗关节炎疾病，例如受试者的关节炎疾病。

在一个实施方案中，本公开提供了一种组合物，其包含分开或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药和式(II)化合物：

包括其互变异构和异构形式，例如对映体形式、非对映体形式和外消旋形式；或其药学上可接受的衍生物；

其用于治疗受试者的关节炎疾病，例如关节炎疾病。

在一个实施方案中，所述化合物是{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍，优选(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍，或其药学上可接受的衍生物，例如其药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，提供了一种组合物，其包含甲氨蝶呤或其前药和如本文所定义的式(I)、(Ia)或(II)的化合物，包括其药学上可接受的衍生物，其用于治疗关节炎疾病，其中其药学上可接受的衍生物是无机酸的药学上可接受的盐或有机酸的药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，有机酸选自：甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯甲酸、肉桂酸、柠檬酸、富马酸、乙醇酸、乳酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、草酸、苦味酸、丙酮酸、水杨酸、琥珀酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、酒石酸、抗坏血酸、双羟萘酸、双亚甲基水杨酸、乙烷二磺酸、葡萄糖酸、柠康酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕榈酸、EDTA、乙醇酸、对氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸和对甲苯磺酸。

在一个实施方案中，所述有机酸是乙酸、琥珀酸、酒石酸或丙酸。

在一个实施方案中，所述无机酸选自：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸、硫酸和硝酸。

在一个实施方案中，所述药学上可接受的酸是乙酸。

在一个实施方案中，所述化合物是{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐，优选为(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐(AP1189)。

在一个具体实施方案中，提供了一种组合物，其包含分开的或合并的甲氨蝶呤(MTX)和(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐(AP1189)，其用于治疗关节炎疾病。

在一个具体实施方案中，提供了一种组合物，其包含分开的或合并的甲氨蝶呤(MTX)和(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐(AP1189)，其用于治疗类风湿性关节炎(RA)。

在一个实施方案中，提供了甲氨蝶呤(MTX)和(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐(AP1189)，其用于治疗关节炎疾病，例如类风湿性关节炎。

“(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐”和“E-N-[反式-3-{1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基}-烯丙叉氨基]胍乙酸盐”(IUPAC)在本文中互换使用。

在一个实施方案中，提供了一种组合物，其包含甲氨蝶呤或其前药和式(Ia)的化合物，其中所述R₂、R₃、R₄和R₅各自为氢，R₆和R₇各自独立地选自氢、甲基、乙基和丙基，所述R₁选自CF₃、CCl₃、F、Cl、NO₂或CN，并且n＝1，其用于治疗关节炎疾病。

在一个实施方案中，提供了一种组合物，其包含甲氨蝶呤或其前药和式(Ia)的化合物，其中所述R₂、R₃、R₄、R₅、R₆和R₇各自为氢，所述R₁选自CF₃、CCl₃、F、Cl、NO₂或CN，且n＝1，其用于治疗关节炎。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中该组合物进一步包含一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中该组合物进一步包含分开的或合并的叶酸，例如剂量为至少5mg/周的叶酸。可以提供叶酸以进一步减少MTX的毒性。

在一个实施方案中，本公开提供了一种组合物，其包含分开的或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药以及如本文所定义的式(I)、(Ia)或(II)的化合物，其用于治疗关节炎疾病，其中所述甲氨蝶呤或其前药选自甲氨蝶呤(全身)、甲氨蝶呤(口服)、甲氨蝶呤片剂、甲氨蝶呤口服溶液、甲氨蝶呤(注射剂)、甲氨蝶呤钠、甲氨蝶呤LPF钠、Trexall(Xatmep)、Rheumatrex、Rasuvo、Otrexup、Alltrex、Beltrax、Biotrexate、Caditrex、Carditrex、Cytotrex、Dermotrex、Folitrax、HI-Trex、Imutrex、Merex、Methocip、Methorex、Methotrexate、Metorex、Metrex、Mexate、MTX-韩国(MTX-Korea)、Neotrexate、Nidtrex、Oncotrex、Onotrex、Plastomet、Remtrex、Rextop、Roxate、Tevatrex、Throtex、Trex、Thixilem和Vibzi以及Zexate。

关节炎疾病

本公开提供了甲氨蝶呤(MTX)或其前药以及式(I)或(Ia)的化合物，其中n、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆和R₇各自如本文所定义，其用于治疗受试者的关节炎疾病，例如关节炎疾病，其中关节炎疾病在下文详述。

“关节炎疾病(Arthritic disease)”和“关节炎(arthritis)”在本文中可以互换使用。

术语关节炎通常用于指影响关节的任何病症。这些病症落在更广泛的风湿性疾病类别。“关节炎”的字面意思是关节炎症，这是该疾病的一种症状。

在一个实施方案中，关节炎疾病是自身免疫疾病和/或表现为关节炎症的炎性疾病。

在一个实施方案中，关节炎疾病选自炎性关节炎(inflammatory arthritis)、退行性关节炎(degenerative arthritis)、代谢性关节炎(metabolic arthritis)、反应性关节炎(reactive arthritis)和感染性关节炎(infectious arthritis)。

在一个实施方案中，关节炎疾病是炎性关节炎。在一个实施方案中，炎性关节炎选自类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)、银屑病关节炎(Psoriatic Arthritis)和强直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis)。

在一个实施方案中，退行性关节炎是骨关节炎(osteoarthritis)。

在一个实施方案中，代谢性关节炎是痛风性关节炎(gouty arthritis)。

在一个实施方案中，反应性和/或感染性关节炎是与丙型肝炎、衣原体、淋病、沙门氏菌或志贺氏菌中的一种或多种的感染相关的关节炎。

在一个实施方案中，关节炎疾病是作为全身性炎性疾病的一部分的关节炎。

在一个实施方案中，关节炎作为全身性炎性疾病的一部分，例如选自全身性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus)、混合性结缔组织病(mixed connective tissuedisease)、Still病(Still′s disease)和风湿性多肌痛(Polymyalgia Rheumatica)的炎性疾病。

在一个实施方案中，类风湿性关节炎是幼年型类风湿性关节炎(juvenilerheumatoid arthritis，JRA)。JRA是一种在不到16岁的儿童中持续时间超过6周的自身免疫性、非感染性、炎症性关节疾病。这种疾病通常发生在1至6岁的儿童中，但也可能延迟到15岁出现。

在一个实施方案中，JRA选自少关节型JRA(pauciarticular JRA)、全身发病型JRA(systemic-onset JRA)、多关节型JRA(polyarticular JRA)和血清阴性脊柱关节炎(seronegative spondylarthritis)。

在一个实施方案中，本公开提供了一种组合物，其包含分开或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药以及如本文所定义的式(I)、(Ia)或(II)的化合物，其用于治疗选自下组的关节炎疾病：

-自身免疫疾病或炎性疾病，表现为关节炎症，

-炎性关节炎，例如选自类风湿性关节炎(RA)、银屑病关节炎和强直性脊柱炎的炎性关节炎，

-退行性关节炎，如骨关节炎，

-代谢性关节炎，如痛风性关节炎，

-反应性和/或感染性关节炎，例如与丙型肝炎、衣原体、淋病、沙门氏菌或志贺氏菌中的一种或多种的感染相关的关节炎，

-作为全身性炎性疾病的一部分的关节炎，例如选自以下的炎性疾病：全身性红斑狼疮、混合性结缔组织病、Still病和风湿性多肌痛，

-幼年型类风湿性关节炎(JRA)，例如选自下组的JRA：少关节型JRA、全身发病型JRA、多关节型JRA和血清阴性脊柱关节炎。

在一个实施方案中，关节炎疾病与滑膜炎(synovitis)相关。滑膜炎是指滑膜的炎症，滑膜是一种特化结缔组织，排列在滑膜关节囊和腱鞘的内表面。

在一个实施方案中，本公开提供了一种组合物，其包含分开的或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药，以及如本文所定义的式(I)、(Ia)或(II)的化合物，其用于治疗关节炎症。

在一个实施方案中，本公开提供了一种组合物，其包含分开的或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药，以及如本文所定义的式(I)、(Ia)或(II)的化合物，其用于治疗滑膜炎。

在一个实施方案中，关节炎疾病影响手、膝、髋、脊柱、腕、踝、臀部、脚趾和/或肘中的一个或多个关节。

在一个实施方案中，根据本公开使用的组合物提供关节炎疾病的治疗，其中关节炎疾病呈现一种或多种选自下组的其他症状：关节僵直、关节压痛、不能使用手、无法行走、不适、疲劳、体重减轻、睡眠不佳、肌肉酸痛、疼痛、肌肉无力、失去灵活性和有氧适能下降。

在一个具体的实施方案中，关节炎疾病是未分化多关节炎(undifferentiatedpolyarthritis，UP)。

在一个具体的实施方案中，关节炎疾病是类风湿性关节炎(RA)。在一个实施方案中，本公开提供了一种组合物，其包含分开的或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药以及如本文定义的式(I)、(Ia)或(II)的化合物，其用于治疗类风湿性关节炎RA。

在一个实施方案中，类风湿性关节炎是重度活动性RA(severe active RA)(CDAI>22)。在一个实施方案中，类风湿性关节炎是CDAI>22的RA。

在一个实施方案中，根据本公开使用的组合物提供对新诊断的患有重度活动性RA(CDAI>22)的受试者的治疗。

在一个实施方案中，类风湿性关节炎是DAS28评分高于5.1的RA。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中受试者在治疗之前测试类风湿因子和/或抗环瓜氨酸肽(CCP)IgG抗体呈阳性。

受试者和疾病严重程度的评估

待治疗的受试者优选为哺乳动物，特别是人类。然而对动物如小鼠、大鼠、狗、猫、马、牛、羊和猪的治疗也在本公开的范围内。待治疗的受试者可以具有各种年龄。

受试者的关节炎疾病的严重程度以及药物治疗的功效可以通过许多不同的临床评分系统来评估，例如DAS28评分、CDAI评分和ACR评分。

例如，治疗后一个或多个临床评分的变化可以通过评估得到的所述临床评分的变化并将其与基线或安慰剂进行比较来评价。

RA疾病活动度的测量范围很广，包括：

·检查受试者关节的肿胀和压痛(肿胀关节计数SJC和压痛关节计数TJC)，

·疼痛的总体评分和受试者的总体状态，

·炎症的血液标志物(例如间接测量受试者体内炎症程度的红细胞沉降率(ESR或sed率)，以及测量受试者血液中c反应蛋白(CRP)水平的c反应蛋白测试)，

·问卷(例如健康评估问卷功能残疾指数(HAQ-DI，其评估受试者的功能)&慢性疾病治疗的功能评估-疲劳(FACIT-疲劳))，

·成像技术，例如X射线成像、超声成像和磁共振成像(MRI)。

在一个实施方案中，根据本公开的治疗导致受试者的身体机能得到改善，如按照健康评估问卷残疾指数(HAQ-DI)确定的。

在一个实施方案中，根据本公开的治疗导致受试者的功能得到改善，如按照慢性疾病治疗的功能评估-疲劳(FACIT-疲劳)所确定的。

在一个实施方案中，根据本公开使用的组合物导致一种或多种关节炎症状的部分或完全缓解。

在一个实施方案中，根据本公开使用的组合物减轻关节炎症。

在一个实施方案中，根据本公开使用的组合物降低血液中反应蛋白(CRP)的水平。

在一个实施方案中，根据本公开使用的组合物减少压痛关节的数量和/或减少肿胀关节的数量。

DAS28评分

DAS28评分是类风湿性关节炎(RA)疾病活动度的量度。DAS代表“疾病活动度评分”，数字28指的是本次评估中检查的28个关节。

DAS28是从上述4项量度中得出的综合评分。这个‘28’版本是原始DAS评分的简化版，原始DAS评分需要计算44个关节。其他版本的DAS28允许使用CRP代替ESR，或者省略任一项。DAS28-CRP是RA的许多DAS评分的一部分，对于对类风湿性关节炎活动度进行客观、可重复和可比较的评估非常有用。DAS28-CRP特别考虑了以下项目：

·TJC28：压痛关节的数量(0-28)。

·SJC28：肿胀关节的数量(0-28)。

·CRP：C反应蛋白水平(单位为mg/l)。

·GH：患者整体健康评估(从0＝最好到100＝最差)。

28个压痛或肿胀关节评分针对相同的关节(肩、肘、腕、掌指关节、近端指间关节和膝盖)。评分的计算可以通过以下等式完成：

一般而言，如果评分介于0至<2.6之间，则认为已达到缓解。低疾病活动度对应于2.6至<3.2。中等疾病活动度介于3.2至≤5.1之间，而高疾病活动度严格高于5.1。

在一个实施方案中，提供了本文公开的用于治疗关节炎疾病例如RA的组合物，其中在治疗之前和之后确定受试者的疾病活动度评分28(DAS28)，其中治疗导致DAS28评分降低，例如其中治疗导致DAS28评分低于5.1，例如5.0或更低，例如4.8或更低，例如4.6或更低，例如4.4或更低，例如4.2或更低，例如4.0或更低，例如3.8或更低，例如3.6或更低，例如3.4或更低，例如3.2或更低，例如3.0或更低，例如2.8或更低，例如2.6或更低，例如2.4或更低，例如2.2或更低，例如2.0或更低，例如1.8或更低，例如1.6或更低，例如其中治疗导致DAS28评分低于5.1，优选3.2或更低，更优选2.6或更低。

在一个实施方案中，将根据本公开的组合物施用于DAS28评分为5.1或更高的受试者。在一个实施方案中，所述受试者在治疗期间和/或治疗后的DAS28评分降低到3.2至≤5.1之间(中等活动度)，例如降低到2.6至<3.2之间(低活动度)，例如降低到0至<2.6之间(缓解)。

在一个实施方案中，将根据本公开的组合物施用于DAS28评分在3.2至≤5之间的受试者。

在一个实施方案中，将根据本公开的组合物施用于DAS28评分在2.6至<3.2之间的受试者。

在一个优选的实施方案中，通过本公开的治疗将DAS28评分降低至低于3.2(低疾病活动度)。在优选的实施方案中，通过本公开的治疗将DAS28评分降低至低于2.6(缓解)。

CDAI评分

CDAI(临床疾病活动度指数)是一种有用的临床综合评分，可用于追踪类风湿性关节炎患者。CDAI是4个结果参数的总和：压痛和肿胀关节计数(评估的28个关节)以及患者和医师对疾病活动度的总体评估(在0-10cm视觉模拟量表上)。CDAI与简化疾病活动指数(SDAI)相同，除了SDAI包括C反应蛋白水平。

CDAI的描述性变化，其中CDAI＝SJC(28)+TJC(28)+PGA+IGA；

·SJC(28)：28关节肿胀计数(肩；肘；腕；MCP；PIP，包括拇指IP；膝盖)；

·TJC(28)：28关节压痛计数(肩；肘；腕；MCP；PIP，包括拇指IP；膝盖)；

·PGA：患者总体疾病活动度(患者在0-100范围内对总体RA疾病活动度的自我评估，其中100是最大活动度)；

·IGA：医师总体疾病活动度(评价者在0-100范围内对受试者的总体RA疾病活动度的评估，其中100是最大活动度)

如果评分介于0至<2.8之间，则认为达到缓解；低疾病活动度对应于2.8至<10。中等疾病活动度在10至≤22之间，而高疾病活动度严格高于22(CDAI>22)

在一个实施方案中，将根据本公开的组合物施用于CDAI评分为22或更高的受试者。在一个实施方案中，所述受试者在治疗期间和/或治疗后的CDAI评分降低到10至≤22之间(中等活动度)，例如降低到2.8至<10之间(低活动度)，例如降低到0至<2.8之间(缓解)。

在一个实施方案中，将根据本公开的组合物施用于CDAI评分在10至≤22之间的受试者。

在一个实施方案中，将根据本公开的组合物施用于DAS28评分在2.8至<10之间的受试者。

在一个实施方案中，所述受试者在治疗期间和/或治疗后的CDAI评分降低5分，例如降低10分，例如降低15分。

在一个优选的实施方案中，通过本公开的治疗将CDAI评分降低至低于10(低疾病活动度)。在优选的实施方案中，通过本公开的治疗将DAS28评分降低至低于2.8(缓解)。

在一个优选的实施方案中，CDAI评分降低了5分或更多，例如10分或更多，例如15分或更多。

ACR评分

ACR(美国风湿病学会)标准是测量RA临床试验中各种关节炎药物或治疗的有效性的标准性标准。

ACR响应率ACR20、ACR50和ACR70分别被定义为肿胀和压痛关节计数(SJC/TJC)和以下5项评估中的3项达到≥20％、≥50％和≥70％的改善：患者对疾病活动度的总体评估、医师对疾病活动度的总体评估、患者对疼痛的评估、健康评估问卷(HAQ-DI)和C-反应蛋白(CRP)。

在一个优选的实施方案中，通过本公开的治疗提高了ACR评分。在一个优选的实施方案中，本治疗导致ACR响应率改善≥20％、≥50％或≥70％。

在一个实施方案中，本公开提供了一种组合物，其包含分开的或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药以及如本文所定义的式(I)、(Ia)或(II)的化合物，其用于以下方法中：

-改善患有关节炎疾病的受试者的身体机能，如通过健康评估问卷残疾指数(HAQ-DI)所确定的

-改善患有关节炎疾病的受试者的功能，如通过慢性疾病治疗的功能评估-疲劳(FACIT-疲劳)所确定的，

-诱导一种或多种关节炎症状的部分或完全缓解，

-减轻关节炎症，

-降低血液中c反应蛋白(CRP)的水平，

-减少压痛关节的数量和/或减少肿胀关节的数量

-降低DAS28评分，例如将DAS28评分降低到3.2至≤5.1之间(中等疾病活动度)，例如降低到2.6至<3.2之间(低疾病活动度)，例如降低到0至<2.6之间(缓解)，

-降低CDAI评分，例如将CDAI评分降低到10至≤22之间(中等疾病活动度)，例如降低到2.8至<10之间(低疾病活动度)，例如降低到0至<2.8之间(缓解)，

-将CDAI评分降低5分或更高，如10分或更高，如15分或更高，

-改善ACR评分，例如改善ACR响应率≥20％、≥50％或≥70％，和/或

-在患有关节炎疾病如RA的受试者中降低MTX浓度和/或改善MTX响应。

MTX响应

甲氨蝶呤(MTX)仍然是类风湿性关节炎(RA)的首选缓解疾病的抗风湿药，但响应各不相同。在观察性研究中，约30％的患者在中期停用MTX—大约一半是由于无效，一半是由于不良事件。

预测对MTX无响应可以更早地获得替代性或额外的药物并控制疾病进展。在最近的一项研究中，43％的RA患者被归类为MTX无响应者(Sergeant et al.ArthritisResearch&Therapy(2018)20:147)。

使用EULAR(欧洲抗风湿病联盟)响应标准，将6个月时对MTX治疗无响应定义为“无响应”，即28个关节的疾病活动度评分(DAS28)改善≤0.6，或DAS28改善>0.6但≤1.2且6个月DAS28>5.1。

6个月时无响应的定义包括继续服用药物但没有表现出足够被归类为中等或良好响应者的改善的那些人，以及因无效而停用该药物或开始bDMARD(生物DMARD-缓解疾病的抗风湿药)的那些人。

根据临床评分标准，“中等”或“良好”响应者被认为是响应者，因为缓解到6个月停用MTX的患者也被认为是响应者。

在一个实施方案中，使用预测患者无响应以识别处于无响应高风险的个体的模型来预测MTX无响应者，例如Sergeant et al 2018公开的模型。多变量逻辑回归模型中无响应的基线预测因子是RF(类风湿因子)阴性、较高的HAQ(健康评估问卷)评分、较高的压痛关节计数、较高HADS(医院焦虑和抑郁量表)焦虑评分和较低的疾病活动度(较低的基线DAS28-CRP)。

在一个实施方案中，本公开提供了一种组合物，其包含分开的或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药以及如本文定义的式(I)、(Ia)或(II)的化合物，例如AP1189，其用于治疗MTX无响应者的关节炎疾病，例如RA。

在一个实施方案中，MTX无响应者选自

-在6个月时对治疗无响应的受试者

-在6个月时对治疗无响应的受试者，使用EULAR响应标准定义为“无响应”，

-在6个月时对治疗无响应的受试者，评价为28个关节的疾病活动度评分(DAS28)改善≤0.6，或DAS28改善>0.6但≤1.2且6个月DAS28>5.1，

-到6个月时停用MTX的受试者，即由于无效而停用MTX且不打算重新开始，

-具有选自以下的一个或多个无响应基线预测因子的受试者：RF(类风湿因子)阴性、较高的HAQ(健康评估问卷)评分、较高的压痛关节计数(TJC28)、较高的HADS(医院焦虑和抑郁量表)焦虑评分和较低的疾病活动度(较低的基线DAS28-CRP)

-处于无响应高风险(或概率)的个体，如通过Sergeant et al 2018公开的模型测定的，

-女性，

-现时吸烟者，和

-具有高BMI的人。

在一个实施方案中，本公开提供了一种组合物，其包含分开的或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药以及如本文所定义的式(I)、(Ia)或(II)的化合物，例如AP1189，其用于治疗对MTX具有低或不显著的响应的受试者的关节炎疾病，例如RA。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中基本上同时开始用MTX和如本文定义的式(I)、(Ia)或(II)的化合物治疗。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中继续用MTX治疗并且在将受试者定义为MTX无响应者时开始用如本文定义的式(I)、(Ia)或(II)的化合物治疗。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中在与本文所定义的式(I)、(Ia)或(II)的化合物共同治疗之前，受试者已经接受MTX以治疗关节炎疾病，例如RA。在一个实施方案中，在用式(I)、(Ia)或(II)的化合物开始治疗之前，MTX治疗已经是达不到最佳效果的。

剂量

在一个实施方案中，本公开提供了一种组合物，其包含分开的或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药以及本文所定义的式(I)、(Ia)或(II)的化合物，其用于治疗关节炎疾病，其中所述MTX和所述化合物各自以治疗有效量提供。

本文提供的使用的联合治疗可以降低受试者的毒性，优选通过施用比单独施用甲氨蝶呤治疗关节炎疾病所使用的剂量更低的剂量的甲氨蝶呤。

或者，与单独施用甲氨蝶呤治疗关节炎疾病相比，本文提供的使用的联合治疗可以允许增加对受试者的作用，优选通过增强甲氨蝶呤的作用。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中甲氨蝶呤(MTX)或其前药以每周约1至约30mg例如每周约15mg的量施用。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中甲氨蝶呤(MTX)或其前药以以下量施用：1至1.5mg/周，例如1.5至2，例如2至2.5，例如2.5至3，例如3至3.5，例如3.5至4，例如4至4.5，例如4.5至5，例如5至5.5，例如5.5至6，例如6至6.5，例如6.5至7，例如7至7.5，例如7.5至8.5，例如8.5至9，例如9至9.5，例如9.5至10，例如10至10.5，例如10.5至11，例如11至11.5，例如11.5至12，例如12至12.5，例如12.5至13，例如13至13.5，例如13.5至14，例如14至14.5，例如14.5至15，例如15至15.5，例如15.5至16，例如16至16.5，例如16.5至17，例如17至17.5，例如17.5至18，例如18至18.5，例如18.5至19，例如19至19.5，例如19.5至20，例如20至20.5，例如20.5至21，例如21至21.5，例如21.5至22，例如22至22.5，例如22.5至23，例如23至23.5，例如23.5至24，例如24至24.5，例如24.5至25，例如25至25.5，例如25.5至26，例如26至26.5，例如26.5至27，例如27至27.5，例如27.5至28，例如28至28.5，例如28.5至29，例如29至29.5，例如29.5至30mg/周。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中甲氨蝶呤(MTX)或其前药以每周约5至10mg、5至15mg、10至15mg、5至20mg、10至20mg、10至25mg或15至20mg的量施用。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中甲氨蝶呤(MTX)或其前药以约10至约25mg的量每周一次/每周以口服剂型施用。每周一次是指每7天一次，优选是在每周同一日。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中以约5至约25mg的量每周一次/每周皮下施用甲氨蝶呤(MTX)或其前药。每周一次是指每7天一次，优选是在每周同一日。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中式(I)、(Ia)或(II)的化合物以每天约1mg至约1000mg，例如每天约500至约1000mg，例如每天约50至约800mg的量施用。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中式(I)、(Ia)或(II)的化合物的施用量为1至5mg、5至10mg、10至15mg、15至20mg、20至30mg、30至60mg、60至80mg、80至100mg、100至130mg、130至160mg、160至200mg、200至240mg、240至280mg、280至320mg、320至360mg、360至400mg、400至440mg、440至500mg、500至560mg、560至620mg、620至680mg、680至740mg、740至800mg、800至860mg、860至920mg、920至980mg、980至1000mg/天。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中所述化合物为{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍，例如(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍，或其药学上可接受的盐，例如(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐(AP1189)，并且所述化合物以50g，例如100mg，例如200mg，例如400mg，例如600mg，例如800mg的量每天一次施用。

在一个实施方案中，提供了一种组合物，其包含分开的或合并的甲氨蝶呤(MTX)和(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐(AP1189)，其用于治疗关节炎疾病，例如类风湿性关节炎(RA)，

其中所述化合物以约50g，例如100mg，例如200mg，例如400mg，例如600mg，例如800mg的量每天一次施用，并且所述MTX以约10至约25mg的量每周一次口服施用，

或其中所述MTX以约5至约15mg的量每周一次皮下施用。

在一个优选的实施方案中，MTX或其前药每周施用一次。市售的MTX剂型可用于口服施用或皮下施用。两者均每周施用一次，优选在每周同一日。

在一个优选的实施方案中，式(I)、(Ia)或(II)的化合物每天施用，例如每天一次、每天两次或每天三次。

在一个实施方案中，将包含分开的或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药和如本文定义的式(I)、(Ia)或(II)的化合物的组合物施用1周，例如超过1周，例如2周或超过2周，例如3周或超过3周，例如4周或超过4周，例如1个月或超过1个月，例如2个月或超过2个月，例如3个月或超过3个月，例如4个月或超过4个月，例如5个月或超过5个月，例如6个月或超过6个月，例如超过1年。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中式(I)、(Ia)或(II)的化合物的(共同)施用允许以亚治疗剂量或减少的剂量(即低于正常处方的剂量)施用MTX或其前药。

在一个实施方案中，用式(I)、(Ia)或(II)的化合物和MTX或其前药进行治疗是协同的。在一个实施方案中，用式(I)、(Ia)或(II)的化合物和MTX或其前药进行的治疗是加和的。

在一个实施方案中，本文所定义的式(I)、(Ia)或(II)的化合物如AP1189和MTX或其前药的施用产生协同效应。

在一个实施方案中，本文所定义的式(I)、(Ia)或(II)的化合物(例如AP1189)和MTX或其前药的施用产生相互作用，以产生大于它们各自效应的和的联合效应。

在一个具体的实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中每天施用式(I)、(Ia)或(II)的化合物并且每周施用MTX或其前药。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中式(I)、(Ia)或(II)的化合物在MTX或其前药之前和/或同时和/或之后施用。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中停用MTX治疗一段时间，而继续用式(I)、(Ia)或(II)的化合物治疗。

制剂

用于治疗关节炎疾病的组合物在任何合适的制剂中包含分开的或合并的式(I)、(Ia)或(II)的化合物和甲氨蝶呤(MTX)或其前药。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中MTX或其前药被配制用于口服施用，例如以片剂或胶囊的形式。

在一个实施方案中，MTX或其前药被配制成液体。液体可适合静脉内施用或注射，例如皮下注射。

在一个实施方案中，MTX或其前药被配制用于缓释。在一个实施方案中，MTX或其前药被配制用于立即释放。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中式(I)、(Ia)或(II)的化合物被配制用于口服施用，例如以片剂或胶囊的形式。

在一个实施方案中，将式(I)、(Ia)或(II)的化合物配制成液体，例如用于静脉内施用或连续输注的液体，或用于注射的液体。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中式(I)、(Ia)或(II)的化合物被配制用于缓释。在一个实施方案中，将式(I)、(Ia)或(II)的化合物配制成立即释放。

在一个实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中式(I)、(Ia)或(II)的化合物被配制用于口服施用；并且MTX或其前药被配制用于口服、静脉内、肌内或皮下施用。

在一个具体的实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中式(I)、(Ia)或(II)的化合物被配制用于口服施用。

在一个具体的实施方案中，提供了根据本公开使用的组合物，其中所述化合物是{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍，例如(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍，或其药学上可接受的盐，例如(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐(AP1189)，并且所述化合物被配制用于口服施用。

在一个实施方案中，所述化合物被配制成固体口服剂型，例如片剂。

在一个实施方案中，所述化合物被配制成粉剂，例如口服粉剂，例如适合悬浮在液体中的口服粉剂。

在一个实施方案中，所述化合物被配制成包含溶解的口服粉剂的悬浮液。

在一个实施方案中，所述化合物被配制成口服悬浮液，例如用于口服施用的悬浮液。

组合物

在本公开的另一个方面，提供一种组合物，例如药物组合物，其包含分开的或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药，以及式(I)或(Ia)的化合物：

其中

n为1、2或3；

每个R₁、R₂、R₃、R₄和R₅独立地选自氢、任选取代的C_1-6-烷基、任选取代的C_3-6-环烷基、任选取代的C_2-6-烯基、任选取代的C_4-6-二烯基、任选取代的C_2-6-炔基、羟基、任选取代的C_1-6-烷氧基、任选取代的C_2-6-烯氧基、羧基、任选取代的C_1-6-烷氧基羰基、任选取代的C_1-6-烷基羰基、甲酰基、C_1-6-烷基磺酰基氨基、任选取代的芳基、任选取代的芳基氧基羰基、任选取代的芳基氧基、任选取代的芳基羰基、任选取代的芳基氨基、芳基磺酰基氨基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳基氧基羰基、任选取代的杂芳基氧基、任选取代的杂芳基羰基、任选取代的杂芳基氨基、杂芳基磺酰基氨基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环基氧基羰基、任选取代的杂环基氧基、任选取代的杂环基羰基、任选取代的杂环基氨基、杂环基磺酰基氨基、氨基、单-和二(C_1-6-烷基)氨基、氨基甲酰基、单-和二(C_1-6-烷基)氨基羰基、氨基-C_1-6-烷基-氨基羰基、单-和二(C_1-6-烷基氨基-C_1-6-烷基-氨基羰基、C_1-6-烷基羰基氨基、氨基-C_1-6-烷基-羰基氨基、单-和二(C_1-6-烷基)氨基-C_1-6-烷基-羰基氨基、氰基、胍基、脲基、C_1-6-烷酰基氧基、C_1-6-烷基磺酰基、C_1-6-烷基亚磺酰基、C_1-6-烷基磺酰基-氧基、氨基磺酰基、单-和二(C_1-6-烷基)氨基磺酰基、硝基、任选取代的C_1-6-烷硫基和卤素，其中任何氮结合的C_1-6-烷基任选地被羟基、C_1-6-烷氧基、C_2-6-烯氧基、氨基、单-和二(C_1-6-烷基)氨基、羧基、C_1-6-烷基羰基氨基、卤素、C_1-6-烷硫基、C_1-6-烷基-磺酰基-氨基或胍取代；

或其药学上可接受的衍生物。

在一个实施方案中，提供了一种组合物，例如药物组合物，其包含分开的或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药和式(II)的化合物：

包括其互变异构和异构形式，例如对映体形式、非对映体形式和外消旋形式；或其药学上可接受的衍生物。

在一个实施方案中，提供了一种组合物，例如药物组合物，其包含分开的或合并的甲氨蝶呤(MTX)和(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐(AP1189)。

在一个实施方案中，本公开提供了一种组合物，其包含分开的或合并的甲氨蝶呤(MTX)或其前药、本文所定义的式(I)、(Ia)或(II)的化合物和叶酸。

实施例

实施例1：甲氨蝶呤和AP1189((E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐)的联合治疗

材料&方法

六周大的C57/BL6小鼠购自Charles River，并在开始实验前放置一周以适应环境。

小鼠被随机分配到以下组：

·组1：没有干预的时间对照动物

·组2：诱发关节炎的动物，并且该动物用甲氨蝶呤的溶媒(溶媒2)和AP1189的溶媒(溶媒1)治疗

·组3：诱发关节炎的动物，并且该动物用AP1189的溶媒(溶媒1)和甲氨蝶呤治疗

·组4：诱发关节炎的动物，并且该动物用甲氨蝶呤的溶媒(溶媒2)和AP1189治疗

·组5：诱发关节炎的动物，并且该动物用甲氨蝶呤和AP1189治疗

在所有组中N＝6。

在第0天和第2天两次腹腔注射100μl K/BxN血清诱发关节炎(详见J Immunol2015；194:3381-3388)。

从第2天到第7天口服施用AP1189和Veh1(20％PEG-200的PBS溶液)，口服总体积为200μl。

在第3、5和7天通过腹腔注射施用甲氨蝶呤和Veh2(12.5％碳酸盐)(注射体积：200μl)。

甲氨蝶呤制剂的制备：使用小体积的0.1M碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液pH＝9.6溶解甲氨蝶呤(Sigma目录编号：A6770)。然后，使用PBS达到所需浓度。最终缓冲液产生12.5％的碳酸盐缓冲液。将稀释的化合物分成单次使用的等分试样，并在-20℃下储存直至使用。

从第0天到第8天每天监测关节炎的发展。

在记录每天测量值后在第8天处死小鼠。

K/BxN血清通过将KRN小鼠与NOD/Lt小鼠杂交产生。后代发展出自发性关节炎，在6周时明显，发病率为100％。在第9周，收集血清并储存在-80℃直至使用，即血清转移模型中诱发的关节炎是由于将收集的血清施用于WT小鼠(详情参见：Trends Mol Med,2004；10:40-5)。

使用Am J Pathol,2014；184(8):2333-41中描述的评分方法评估关节炎的可见体征，所述评分方法包括为每只爪子分配0-3分，每只小鼠最多达到12分：

·0分：无炎症体征。

·1分：轻微炎症，局部。

·2分：易于识别，但局部。

·3分：明显的炎症，非局部。

临床评分用于计算以下参数(详见J Immunol,2015；194(7):3381-8)。

·关节炎发病率(小鼠表现出明显的炎症体征，即得分≥1)。

·重度关节(每只老鼠达到最高3分的爪子的数量)。

·重度关节炎的发病率(得分>10的小鼠数量)。

使用肢体肿胀测量仪(Ugo Basile)测量后爪的肿胀。

结果：

重度关节炎的发病率计算为每组中达到≥10的总分的小鼠的百分比。

组1(未诱发关节炎的时间对照)中没有动物出现关节炎。

在组2中，溶媒治疗的患有关节炎的动物中，6只动物中有5只发生重度关节炎。

单独用甲氨蝶呤(组3)或AP1189(组4)治疗的动物中重度关节炎的发病率为50％。

令人惊讶的是，用甲氨蝶呤和AP1189的组合治疗的动物都没有发生重度关节炎。

结论：

使用甲氨蝶呤和AP1189的组合治疗关节炎出人意料地有效，因为通过该组合治疗的动物均未发生重度关节炎。

实施例2

研究

在单次递增给药中使用口服施用悬浮液(第I部分—图2)，在生物等效性研究中使用口服悬浮液和片剂(第II部分)，以及在14天重复给药(图3)中，在健康志愿者中施用第一剂量的AP1189。14天重复给药使用片剂制剂(第III部分)开始，并使用口服施用悬浮液完成(第IV部分)。

共有111名受试者被随机分组；104名年轻健康男性志愿者和八(8)名绝经后女性。在第I部分中，56名受试者有一次机会接受单次口服剂量(42名受试者接受AP1189，14名受试者接受安慰剂)。在第II部分中，八(8)名受试者在三个时间接受一个单次AP1189口服剂量，每次之间间隔一周洗脱期。在第III部分中，十一(11)名受试者每天接受单次口服剂量，持续14天(8名受试者接受AP1189，三(3)名受试者接受安慰剂)，以及在第IV部分中；三十六(36)名受试者每天一次用AP1189/安慰剂治疗，持续14天(27名受试者接受AP1189，九(9)名受试者接受安慰剂)。

I期；第I、II和III部分的研究结果总结；

研究第I和II部分已完成。研究第I部分是一项随机、双盲、安慰剂对照、单次递增剂量研究，AP1189或安慰剂以口服悬浮液施用。由健康志愿者(48名男性)组成的7个男性组，以及由8名健康女性绝经后志愿者(定义为至少两年闭经期且FSH水平>30I.U/L.)组成的1个女性组在禁食条件下接受单次递增剂量的AP1189/安慰剂，其作为IMP溶解在SyrSpend ALKA中的口服悬浮液施用。前两个男性组由3名接受活性药物的受试者和一名接受安慰剂的受试者组成；其他组由6名接受活性IMP的受试者和两名接受安慰剂的受试者组成。包括四十八(48)名年龄为19至39岁的健康男性志愿者和八(8)名年龄为47至60岁的健康绝经后女性志愿者。

男性受试者用剂量范围为15-800mg AP1189(15mg、50mg、100mg、200mg、400mg、600mg或800mg)或安慰剂的口服悬浮液治疗。女性用400mg AP1189或安慰剂悬浮液治疗(见图2)。

药代动力学(PK)结果显示，在接受剂量范围为50-800mg的男性受试者中，AP1189被快速吸收，中位t_max(观察到C_max的时间)在1至4小时之间。C_max(最大血浆浓度)和AUC(曲线下面积)的个体间差异从低到中等(<36％)。平均t1/2接近20小时(CV％<20％)。

平均Vd/F介于556至784L之间，CV％低于35％，平均CL/F介于20.26至31.26L/h之间，CV％低于50％。

在女性受试者中，施用400mg AP1189后，与男性受试者相比，C_max和AUC略有增加。女性人群的表观清除率较低(17.26L/h)，表观分布容积相似。从统计上看，无法就性别影响得出结论。

二十(20)名受试者报告了总共38次治疗出现的不良事件(TEAE)。所有TEAE的严重程度均为轻度(27)或中度(11)。在研究期间没有报告重度AE和严重的AE。38次TEAE中有二十二(22)次被认为与研究治疗相关：这些事件中21次发生在施用200至800mg AP1189之后，1次事件发生在施用安慰剂之后。

最常见的相关TEAE是胃肠道疾病(十四(14)名受试者报告了19次事件)：恶心(7次事件)、腹痛(5次事件)、呕吐(3次事件)、腹泻(2次事件)、腹胀(1次事件)和消化不良(1次事件)。这些相关TEAE的频率随着剂量的增加而增加。尽管如此，该悬浮液中溶媒的量随着剂量的增加而增加，使得研究药物的稠度和味道增加。在被认为不相关的TEAE中，七(7)名受试者报告了头痛。其他TEAE是零星的。

在实验室参数、生命体征和ECG参数上观察到一些平均变化和个体异常。这些变化和异常中的大多数是有限的，并且被认为没有临床意义。

总共有四(4)名用AP1189治疗的男性受试者出现了单独的转氨酶升高(没有报告伴随着碱性磷酸酶或胆红素的变化)。在用400mg治疗的一(1)名受试者、用600mg治疗的两(2)名受试者和用800mg治疗的一(1)名受试者中观察到最高达到高于ALT正常上限的1.6的升高。在安慰剂治疗的受试者中没有观察到高于正常上限范围的转氨酶升高。

未观察到生命体征的治疗相关变化。

在连续24小时1000HZ Holter ECG记录评价期间，未发现AP1189相关的QTcF(Fredericia校正的QT间期)增加或任何其他心脏参数的变化。

得出的结论是未达到最大耐受剂量(MTD)。在最大给药剂量(MAD)下，获得的暴露量比获得治疗效果的预期暴露水平高出10倍以上。

第II部分研究

第II部分研究是AP1189片剂与口服悬浮液的比较生物利用度研究，并根据三交叉设计额外评估了施用片剂后的食物的影响。测试了200mg AP1189剂量：以口服悬浮液一次施用，以及在两个不同时间以两个100mg AP1189片剂施用：一次在禁食条件期间，一次在高脂肪早餐后。给药悬浮液后的结果证实了第I部分研究的结果。与悬浮液的数据相比，施用片剂的数据显示更低的暴露量和更高的可变性。

研究了100mg(组1)、200mg(组2)和400mg(组3)的AP1189片剂的每日剂量。第III部分设计为随机、双盲、安慰剂对照、多次递增剂量研究，AP1189以片剂形式施用。

在14天重复剂量给药后，在第III部分研究的组1中获得的药代动力学(PK)结果显示出受试者内部和受试者之间的高且不可预测程度的生物利用度。在从低于定量限(BLQ)直到预期高于会产生治疗效果的预期暴露量三倍的水平的跨度内，可以观察到根据C_max判断的暴露量。

第IV部分研究

将第IV部分添加到研究中，该部分与第III部分研究相同，但在禁食条件下使用口服悬浮液进行。

第IV部分的结果总结

第IV部分研究是一项随机、双盲、安慰剂对照、重复剂量研究，AP1189或安慰剂作为口服悬浮液施用，每天给予一次，持续14天。三组12名受试者(9名接受活性药物；3名接受安慰剂)，每组都用与研究第1部分中使用的相同制剂给药。测试的剂量水平为50mg、100mg或200mg，并使用匹配的安慰剂(见图3)。

PK，第IV部分组1

剂量为每天一次50mg。无论给药日期为何，在给药后1至2.5小时之间观察到C_max。在第7天达到稳态，C_max为约180ng/mL。

PK，第IV部分组2

剂量为每天一次100mg。

PK分析显示血浆浓度急剧增加，并在稳态时达到C_max约400ng/ml，即与组1中的发现结果相比，峰值增加了约2倍。

PK，第IV部分组3

剂量为每天一次200mg。至于其他两组，在给药后1-2小时内达到C_max。C_max水平达到高达900ng/ml(组平均值)，最高测量水平为1.300ng/ml。

第4部分的安全性

十四(14)名受试者报告了总共35次治疗出现的不良事件(TEAE)。所有TEAE的严重程度均为轻度(27)或中度(8)。在研究期间没有报告重度AE和严重的AE。35次TEAE中的四(4)次被认为可能与研究治疗有关。这4次事件均与施用研究药物后出现的胃肠道病症有关(同一受试者在50mg剂量水平下发生两(2)次事件(一次腹泻和一次腹部绞痛)，同一受试者在200mg剂量水平下发生两(2)次事件(一次恶心和一次呕吐)。在被认为不相关的TEAE中，九(9)名受试者报告了头痛，其中七(7)名用研究药物治疗，两(2)名用安慰剂治疗。其他TEAE是零星的。

在实验室参数、生命体征和ECG参数上观察到一些平均变化和个体异常。这些变化和异常中的大多数是有限的，并且被认为没有临床意义。在本研究部分的任何时间，在重复的标准12导联安全性ECG中均未观察到个体QTcF临床显著值。

共计五(5)名受试者具有单独的转氨酶升高(没有报告伴随的碱性磷酸酶或胆红素的变化)，这(5)名受试者全都包括在组3(200mg)中，其中三(3)名用活性药物治疗和两(2)名用安慰剂治疗。升高在用活性药物治疗的受试者中最为明显，其中升高高达正常上限(ALT)的3.6倍和2.9倍。研究完成后，所有值均恢复正常。

得出的结论是未达到MTD。

实施例3

在本研究中，选择了50mg和100mg AP1189的剂量。

在稳态条件下，在AP1189研究的重复剂量部分中确定的峰浓度和谷浓度分别如下：

	C Max(平均值+/-SD,N＝9)	C谷(平均值+/-SD,N＝9)
			50mg每天一次	180±38ng/ml	46±14ng/ml
100mg每天一次	427±76ng/ml	100±25ng/ml
			200mg每天一次	893±198ng/ml	186±45ng/ml

主要安全终点

通过评价不良事件(AE)、严重不良事件(SAE)和实验室值异常来评价AP1189相比于安慰剂的安全性。

主要疗效终点

将通过按治疗组评估以下各项来评价与基线相比治疗4周后CDAI的变化：

·CDAI从基线到第4周的平均变化

·与基线相比，第4周CDAI评分从重度(CDAI>22)变为中度(CDAI≤22)的受试者的比例。

次要疗效终点

将通过按治疗组评估以下各项来评价AP1189相比于安慰剂的作用：

·与基线相比，第4周达到减少超过10(十)个肿胀和/或压痛关节(SJC和TJC，总结)的受试者的比例

·与基线相比，第4周CDAI评分达到以下变化的受试者的比例

ο下降5分的受试者的比例

ο下降10分的受试者的比例

ο下降15分的受试者的比例

·与基线相比，第4周DAS28从DAS28>3.2变为DAS28≤3.2的受试者的比例

·与基线相比，第4周HAQ-DI的变化

·与基线相比，第4周FACIT-疲劳的变化

·达到ACR20、ACR50和AC70评估的ACR响应的受试者的比例

三级疗效终点

将按治疗组评估以下各项来进一步评价与基线相比第4周AP1189相比于安慰剂的效果：

·CXCL13、IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α

·在基线和4周治疗后进行滑膜活检(仅第2部分，在选定地点进行)。

研究设计

该研究是一项多中心、两部分、随机、双盲、安慰剂对照、为期4周的重复剂量AP1189研究。研究群体将由新诊断的患有重度活动性RA(CDAI>22)的受试者组成，他们将开始MTX剂量增加(up-titration)。预计至少有90名受试者完成这项研究。计划招募多达120名受试者，以预备最高25％的停药率。符合入组标准的受试者将按2:1的比例随机分配到A组和B组中。一组将接受活性药物治疗，另一组将接受安慰剂。C/D组将在活性药物和安慰剂之间具有相同的2:1比例。

·A组(12名受试者)：AP1189剂量50mg，每天一次，持续4周(28天)加上每周MTX(10-25mg)

·B组(6名受试者)：安慰剂4周(28天)加每周MTX(10-25mg)

·C组(12名受试者)：AP1189剂量100mg，每天一次，持续4周(28天)加每周MTX(10-25mg)

·D组(6名受试者)：安慰剂治疗4周(28天)加每周MTX(10-25mg)

第1部分的受试者数

预计至少有36名受试者将完成研究的第1部分。计划招募约48名受试者，以预备约25％的停药率。

第2部分

所有受试者将被随机分配到一个设计中，设计1、2或3

·设计1：AP1189剂量50mg(36名受试者)或安慰剂(18名受试者)，每天一次，持续4周(28天)，加每周MTX(10-25mg)

·设计2：AP1189剂量100mg(36名受试者)或安慰剂(18名受试者)，每天一次，持续4周(28天)，加每周MTX(10-25mg)

·设计3：继续使用与第1部分相同的剂量，比例为1:1:1(AP1189 50mg(18名受试者)，AP1189 100mg(18名受试者)或安慰剂(18名受试者))，加每周MTX(10-25mg)

第2部分的受试者数

预计至少54名受试者将完成研究的第2部分。计划招募约72名受试者，以预备约25％的停药率。

研究时间

总研究时间为18个月，每个受试者的研究时间为约且最多10周。

研究地点的数量

该研究将在欧洲的一些地点进行。

研究人群

研究人群将由患有重度活动性RA(定义为CDAI>22)、即将开始MTX剂量增加的受试者组成。

纳入标准

1.在开始任何研究特定程序之前已获得书面知情同意书

2.男性和女性受试者，年龄为18至85岁

3.根据2010 ACR/EULAR RA分类标准确认RA的诊断

4.测试的68个关节中至少有3个关节出现关节肿胀和压痛的关节炎

5.MTX治疗的候选者

6.即将开始用MTX治疗

7.抗CCP或RF检测呈阳性

8.筛选和基线时为重度活动性RA(CDAI>22)

9.阴性QFG-IT(如果QFG-IT不可能，则可以使用Mantoux测试)

10.受试者应该能够完成(读和写)PRO问卷

11.有生育能力的女性只有在使用可靠的避孕方法(详细信息参见第17.8节)或绝经后(月经期在试验登记前至少12个月停止)才可以参与。筛选前至少6个月手术绝育的女性

12.有生育能力的女性在筛选和基线时的妊娠试验必须为阴性。

排除标准

符合以下任一标准的受试者不符合参与研究的资格：

1.在进入研究前4周内参与任何其他涉及研究药物的研究

2.筛选前8周内进行过大手术(包括关节手术)或随机分组后1个月内计划手术

3.除RA外的风湿性自身免疫病，包括SLE、MCTD、硬皮病、多发性肌炎或继发于RA的显著全身受累(例如，血管炎、肺纤维化或Felty综合征)。伴有RA的

综合征是允许的4.根据ACR RA功能状态分类标准定义为功能IV类或轮椅/卧床

5.RA以外的炎性关节疾病的既往史或当前病史(例如，痛风、反应性关节炎、银屑病关节炎、血清阴性脊柱关节病、Lyme病)

6.患有纤维肌痛的受试者

7.在用IMP给药前2周内开始NSAID(包括低剂量阿司匹林和COX-2抑制剂)或改变NSAID的剂量

8.在筛选前2周内(以及在整个治疗期间和直到最后一次访视(访视7)期间)禁止使用皮质类固醇

9.严重不受控制的伴随心血管、神经系统、肺(包括阻塞性肺病)、肾、肝、内分泌(包括不受控制的糖尿病)或胃肠道疾病的迹象

10.具有既往的肾移植、当前的肾透析或重度肾功能不全(由当地实验室使用Cockcroft Gault公式计算得出的肾小球滤过率(GFR)为≤30ml/min/1,73m²确定)

11.不受控制的疾病状态，例如哮喘、银屑病或炎性肠病，其中通常用口服或肠胃外皮质类固醇治疗突发(flares)。

12.活动性恶性疾病的迹象(已切除和治愈的皮肤基底细胞癌除外)

13.孕妇或哺乳(母乳喂养)母亲

14.筛选之前6个月内有酒精、药物或化学品滥用史

15.可能干扰疼痛评价的神经病或其他疼痛状况

16.体重>150kg。

17.中度和/或重度器官功能障碍的迹象

18.异常胸部X射线(根据研究者的判断)

19.肝炎血清学阳性的迹象

20.消化性溃疡病的迹象

下表列出了研究药物信息。

表1、测试治疗

名称	AP1189
		剂量强度	50mg,100mg
制剂	粉剂
		施用途径	口服
供应商	SynAct Pharma

表2、参照治疗

名称	安慰剂
		剂量强度	0mg
制剂	粉剂
		施用途径	口服
供应商	SynAct Pharma

AP1189产品的描述

IUPAC:E-N-[反式-3-{1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基}-烯丙叉氨基]胍乙酸盐

该物质是乙酸盐，为无味的黄色固体。

结构式

分子式：C₁₆H₁₈N₆O₄

盐的分子量为358.35，游离碱的分子量为298.30。

甲氨蝶呤(MTX)

所有受试者将遵循当地指南开始使用MTX治疗并在整个研究过程中继续MTX治疗。

肝酶升高情况下的MTX治疗说明

如果肝酶升高，建议进行更频繁的血液检查。

转氨酶增加：

叶酸

通常与MTX治疗相关的AE可能会发生。为了使MTX的毒性最小化，所有用MTX治疗的受试者都应根据当地指南和研究者的判断，以至少5mg/周的剂量服用叶酸或等效物。叶酸既可以每周单次剂量给药，也可以分为每日剂量以达到每周至少5mg叶酸的摄入量。

禁忌药物

不允许使用以下CYP1A2底物：阿洛司琼(Alosetron)、氯氮平(Clozapine)、氟他胺(Flutamide)、夫罗曲坦(Frovatriptan)、褪黑素(Melatonin)、美西律(Mexiletine)、米氮平(mirtazapine)、奥氮平(Olanzapine)、雷美替胺(Ramelteon)、雷沙吉兰(Rasagiline)、罗匹尼罗(Ropinirole)、他克林(Tacrine)、茶碱(Theophylline)、替扎尼定(Tizanidine)、氨苯蝶呤(Triamterene)和佐米曲普坦(zolmitriptan)。

实验室评估

将使用当地实验室最新更新的参考范围。

血液学

血红蛋白、白细胞(WBC)计数(总计和分类：白细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞)、红细胞(RBC)、血小板和血红蛋白A1c(HbA1C)。将在筛选、基线、治疗2周和4周后采集血液学血液样本。

生物化学

钠、钾、氯、钙、葡萄糖、肌酐、脲、白蛋白、未结合胆红素和总胆红素、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)和INR。将在所有访视时采集生化血液样本。筛选时将进行血清β-HCG妊娠试验。

甲状腺功能

甲状腺素(T4)游离、三碘甲状腺原氨酸(T3)总量或游离，以及促甲状腺激素(TSH)。用于测量甲状腺功能的血液样本。

尿液分析

将在筛查访视的地点进行血液、蛋白质和葡萄糖的试纸尿检。尿样可能被送去进行尿培养。

血清学

RF或抗CCP、HBsAg、HBV抗体和HCV抗体。

RF是一种抗体，可在大约80％的RA成人的血液中检测到。

CRP是一种急性期反应物，是一种由肝脏制造并在组织损伤、感染开始或其他炎症原因后数小时内释放到血液中的蛋白质。CRP最常见因炎症而升高。治疗的目的之一是将CRP降至正常水平。将在筛选、基线、治疗2周和4周后测量CRP。

安全性(AE和SAE)

在整个研究期间将登记安全性量度(AE、SAE，包括实验室值异常)。

安全性评估(子研究，仅第2部分)

第2部分中的关节镜检查子研究将通过检查滑液来评估与基线相比AP1189/安慰剂治疗4周的效果：(评价滑液中多态、单核细胞和淋巴细胞的百分比变化)。

在RA中，滑膜炎症的免疫组织学特征会随着响应常规的缓解疾病的抗风湿药物加甲基强的松龙或关节内糖皮质激素的临床表现的变化而变化。

功效评估

肿胀关节计数(SJC)和压痛关节计数(TJC)

将在筛选、基线、治疗2周和4周后评估66个关节的肿胀和68个关节的压痛。关节将在身体检查时通过压力和关节操作评估和分类为肿胀/不肿胀和压痛/不压痛。受试者将被询问对这些操作的疼痛感觉并观察自发的疼痛反应。任何对压力、运动或这两者的积极响应都将被归类为压痛对不压痛。肿胀被定义为关节可触知的波动性滑膜炎。继发于骨关节病的肿胀将被评估为不肿胀，除非有明确的波动。

在整个试验过程中，对一个特定受试者的关节评估应由同一评估员(如果可能的话)进行，以尽量减少观察者间的差异。

临床疾病活动度指数(CDAI)

CDAI是追踪RA患者的临床综合评分。

CDAI的描述性变化，其中CDAI＝SJC(28)+TJC(28)+PGA+IGA；

·IGA：医师总体疾病活动(评价者在0-100范围内对受试者的总体RA疾病活动度的评估，其中100是最大活动度)

将在筛选、基线、2周和4周治疗后对CDAI进行评分。

疾病活动度评分28(DAS28)

DAS28是测量RA疾病活动度的综合指数。该指数包括肿胀和压痛关节计数、CRP和一般健康状况。在本次试验中，CRP将用于计算DAS28评分。该指数使用以下公式计算：

DAS28-CRP(4)＝0.56*sqrt(TJC28)+0.28*sqrt(SJC28)+0.36*ln(CRP+1)+0.014*GH+0.96

其中，TJC＝对28个关节的压痛关节计数，SJC＝对28个关节的肿胀关节计数，In＝自然对数，CRP＝C反应蛋白，GH＝一般健康状况，即患者对疾病活动度的总体评估(100-mmVAS)。

DAS28提供了在0.49到9.07的范围内RA疾病活动度的绝对指示。

·DAS28值>5.1对应于高疾病活动度

·介于3.2和5.1之间的DAS28值对应于中等疾病活动度

·介于2.6和3.2之间的DAS28值对应于低疾病活动度

·DAS28值<2.6对应于缓解

与初始值相比，受试者的疾病活动度可分类如下：

将在基线、2周和4周治疗后对DAS28进行评分。

医师对疾病活动度VAS的总体评估(“研究者总体VAS”)

医师在100mm水平VAS上对受试者当前疾病活动度的评估。线的最左端应描述为“无疾病活动度”(无症状且无关节炎症状)，最右端应描述为“最大疾病活动度”。功效评估者这应该完成这一评估。将在筛选、基线、治疗2周和4周后测量研究者总体VAS。

患者对疾病活动度VAS的总体评估(“患者总体VAS”)

受试者在100mm水平VAS上对其当前疾病活动度的总体评估。线的最左端应描述为“无疾病活动度”(无症状且无关节炎症状)和最右端为“最大疾病活动度”(最大关节炎疾病活动度)。将在筛选、基线、治疗2周和4周后测量患者总体VAS。

患者对疼痛VAS的评估(“患者疼痛VAS”)

受试者在100mm水平VAS上对其当前疼痛水平的评估。线的最左端应描述为“无痛”，最右端应描述为“无法忍受的疼痛”。将在筛选、基线、治疗2周和4周后测量患者疼痛VAS。

生活质量和身体机能

慢性疾病治疗疲劳的功能评估(FACIT-疲劳)

FACIT-疲劳评估是一个13项问卷，受试者按5分制对每个项目进行评分。该评估最初是针对慢性疾病开发的，现在已验证对于RA患者有效。将在基线、治疗2周和4周后对FACIT-疲劳进行评分。

健康评估问卷-功残疾指数(HAQ-DI)

HAQ-DI是一种经过验证的评价身体机能的工具。它由20个问题组成，涉及8个组成部分：穿衣/梳头、起床、进食、行走、卫生、伸手、抓握和活动。将在基线、2周和4周治疗后对HAQ-DI进行评分。

美国风湿病学会响应率

ACR响应率ACR20、ACR50和ACR70分别被定义为肿胀和压痛关节计数(SJC/TJC)和以下5项评估中的3项达到≥20％、≥50％和≥70％的改善：患者对疾病活动度的总体评估(见上文)、医师对疾病活动度的总体评估(见上文)、患者对疼痛的评估(见上文)、健康评估问卷(HAQ-DI，见上文)和C反应蛋白(CRP)。

药代动力学评估

PK样品收集

用于暴露-响应分析的血浆PK样品将在治疗1、2、3和4周后采集。

细胞因子样品

用于CXCL13、IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α分析的血浆样品将在基线、治疗2周和4周后采集。

生物样本库

在研究期间，将以下样本冷冻保存在生物样本库或类似机构中(根据每个国家/地区所适用的)：

·细胞因子(CXCL13、IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α)、血浆

·PK，血浆

所有细胞因子和PK的分析将在中心实验室进行。样品将被定期送往和分析。

安全性

严重程度分类

评价事件的严重程度以对事件进行子分类。严重程度不是严重性。非常重度的事件可以是不严重的，而严重的事件可能是轻度严重程度。将使用不良事件通用术语标准(CTCAE)v4.03分级量表：2010年6月14日对每个事件的严重程度进行分级。

将适用以下分级：

·轻度(1级)-轻度；无症状或轻微症状；仅临床或诊断观察；未指明干预。

·中度(2级)-中度；指示最小、局部或非侵入性干预；限制年龄相适应的工具性日常生活活动(ADL)。

·重度(3级)-重度或具有医学意义但不会立即危及生命；指示住院或延长住院时间；失能；限制自我护理ADL。

·危及生命(4级)-危及生命的后果；指示紧急干预。

·与AE相关的死亡(5级)。

将确定不良事件与研究药物之间的关系(如果有的话)。如果确定存在不良事件可能是由研究药物引起的合理可能性，则存在因果关系。

参考文献

1.Perretti et al.Trends Pharmacol Sci.36:737-55,2015

2.Brzoska et al.Endocr Rev.29:581-602,2008

3.Montero-Melendez et al.Am J Pathol.179:259-69,2011

4.Catania et al.,2004

5.

-Borron et al.Pigment Cell Res 18:393–410,2005

6.Slominski et al.,2000

7.Hunt et al.,1994

8.Abdel-Malek et al.,1995

9.Abdel-Malek,2001

10.Manna and Aggarwal,1998

11.Buckley and Ramachandran,1981

12.Mountjoy et al.,1992

13.Xia and Wikberg,1996

14.Boston,1999

15.Chhajlani,1996

16.Gantz et al.,1993

17.Roselli-Rehfuss et al.,1993

18.Getting,2002

19.Li et al.,1996

20.Chen et al.,2000

21.Guarini et al.,2002

22.Getting and Perretti,2000

23.Alvaro et al.,1996

24.Mountjoy et al.,1994

25.Marsh et al.,1999

26.Van der Ploeg et al.,2002

27.Taylor and Namba,2001

28.Chen et al.,1997

29.Thody and Shuster,1970

30.Lindskog et al.,2010.

31.Silman AJ,Pearson JE,Epidemiology and genetics of rheumatoidarthritis.Arthritis Res.2002；4 Suppl 3:S265-72.Epub 2002 May 9

32.Gibofsky A.Overview of epidemiology,pathophysiology,and diagnosisof rheumatoid arthritis.Am J Manag Care 2012；18:S295-302

33.Blumberg S,Fox D.Rheumatoid Arthritis:Guidelines for EmergingTherapies.Am J Manag Care.2001；7(6):617-26.

34.Hirano T.The biology of interleukin-6.Chem immunol.1992；51:153-180

35.Keller TK,Wanagat J,Erschler WB.Molecular and cellular biology ofinterleukin-6 and its receptor.Frontiers Biosci.1996；1:340-357

36.Metzger S,Hassin T,Barash V,Pappo O,Chajek-Shaul T.Reduced bodyfat and increased hepatic lipid synthesis in mice bearing interleukin-6-secreting tumor.Am J Physiol Endocrinol Metab.2001；281:E597-E965

37.Tamura T,Udagawa N,Takahashi N,Miyaura C,Tanaka S,Yamada Y,etal.Soluble interleukin-6 receptor triggers osteoclast formation byinterleukin-6.Proc Natl Acad Sci USA.1993；90:11924-11928

38.Taub R.Hepatoprotection via the IL-6/Stat3 pathway.J Clin Invest2003；112:978-980

39.Hirano T,Matsuda T,Turner M,Miyasaka N,Buchan G,Tang B,etal.Excessive production of IL-6/B cell stimulatory factor-2 in rheumatoidarthritis.Eur J Immunol.1988；18:1797-1801

40.Houssiau FA,Devogelaer JP,Van Damme J,de Deuxchaisnes CN,Van SnickJ.IL-6 in synovial fluid and serum of patients with rheumatoid arthritis andother inflammatory arthritides.Arthritis Rheum.1988；31:784-788

41.Madhok R,et al.The effect of second line drugs on seruminterleukin 6 levels in rheumatoid arthritis.Arthritis Rheum.1990；33:S154.Abstract

42.Salaffi F1,Cimmino MA,Leardini G,Gasparini S,Grassi W.Diseaseactivity assessment of rheumatoid arthritis in daily practice:validity,internal consistency,reliability and congruency of the Disease Activity Scoreincluding 28 joints(DAS28)compared with the Clinical Disease Activity Index(CDAI).2009 Jul-Aug；27(4):552-9

43.https://doi.org/10.1161/JAHA.116.003264.Journal of the AmericanHeart Association.2016；5:e003264.Originally published June 17,2016

44.Rooney M,Whelan A,Feighery C,Bresnihan B Changes in lymphocyteinfiltration of the synovial membrane and the clinical course of rheumatoidarthritis.Arthritis Rheum.1989；32:361-369

45.Walters MT,Smith JL,Moore K,Evans PR,Cawley MID An investigationof the action of disease modifying anti-rheumatic drugs on the rheumatoidsynovial membrane:reduction in T lymphocyte subpopulations and HLA-DP and DQantigen expression after gold or penicillamine therapy.Ann Rheum Dis 1987；30:1–10

46.Firestein GS,Paine MM,Littman BH Gene expression (collagenase,tissue inhibitor of metalloproteinases,complement and HLA-DR)in rheumatoidarthritis synovium.Quantitative analysis and effect of intra-articularcorticosteroids.Arthritis Rheum 1991；34:1094–1105

47.Firestein GS,Paine MM,Boyle DL Mechanism of methotrexate action inrheumatoid arthritis.Selective decrease in synovial collagenase geneexpression.Arthritis Rheum 1994；37:193–200

48.Yanni G,Farahat MNMR,Poston RN,Panayi GS Intramuscular golddecreases cytokine expression and macrophage numbers in the rheumatoidsynovial membrane.Ann Rheum Dis 1994；53:315–322

49.Youssef PP,Cormack J,Evill CA,Peter DT,Roberts-Thompson PJ,AhernMJ,et al.Neutrophil trafficking into inflamed joints in patients withrheumatoid arthritis and the effect of methylprednisolone.Arthritis Rheum1996；39:236–242

50.Youssef PP,Haynes DR,Triantafillou S,Parker A,Gamble JR,Roberts-Thomson PJ,et al.Effects of pulse methylprednisolone on inflammatorymediators in peripheral blood,synovial fluid,and synovial membrane inrheumatoid arthritis.Arthritis Rheum 1997；40:1400–1408

51.Dolhain RJEM,Tak PP,Dijkmans BAC,de Kuiper P,Breedveld FC,Miltenburg AMM Methotrexate treatment reduced inflammatory cell numbers,expression of monokines and of adhesion molecules in synovial tissue ofpatients with rheumatoid arthritis.Br J Rheumatol 1998；37:502–508

52.Bresnihan B,Tak PP Synovial tissue analysis in rheumatoidarthritis.Ballieres Clin Rheumatol 1999；13:645–659

53.Non-Clinical Safety Studies for the Conduct of Human ClinicalTrials for Pharmaceuticals(M3,rev 1).International Conference onHarmonization.Current Step 4 version,dated 9 November 2000.

54.Sergeant et al.Arthritis Research&Therapy(2018)20:147).

Claims

1.一种组合物，其包含分开存在或合并存在的甲氨蝶呤(MTX)或其前药以及式(I)或(Ia)的化合物：

式(I)或(Ia)的化合物包括其互变异构和异构形式，例如对映体形式、非对映体形式和外消旋形式；

其中

n是1、2或3；

或其药学上可接受的衍生物，

用于治疗关节炎疾病。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中n＝1。

3.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中每个R₁、R₂和R₃独立地选自-H、-CH₃、-CF₃、-CCl₃、-O-C_1-6烷基、-OH、-OCH₃、-NH-C_1-6烷基、-N(C_1-6烷基)₂、-S-C_1-6烷基、-^tBu、-CN、-SO₃-C_1-6烷基、-NH₂、-NO₂、-CO₂H、-CO₂-C_1-6烷基、-C(＝O)-C_1-6烷基、-CHO、吗啉、吡咯烷、吡咯或卤素。

4.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中R₁和/或R₂是吸电子基团。

5.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中R₁选自CF₃、CCl₃、F、Cl、CN和NO₂。

6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中R₂和/或R₃是氢。

7.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中每个R₄和R₅独立地选自-H、C_1-6烷基、卤素、-O(C_1-6烷基)、-NH(C_1-6烷基)和-C(＝O)C_1-6烷基。

8.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中每个R₆和R₇独立地选自氢、甲基、乙基和丙基。

9.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中R₆和R₇是氢。

10.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中R₂、R₃、R₄、R₅、R₆和R₇是氢，并且其中R₁是CF₃、CCl₃、F、Cl、NO₂或CN。

11.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中R₂、R₃、R₄、R₅、R₆和R₇是氢，并且其中R₁是CF₃、CCl₃、F、Cl、NO₂或CN，并且其中n＝1。

12.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中R₃位于4-位。

13.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中R₃选自F、Cl或Br。

14.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述化合物具有式(II)

15.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述化合物选自{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍和(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍，或其药学上可接受的衍生物，例如其药学上可接受的盐。

16.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述药学上可接受的衍生物是无机酸或有机酸的药学上可接受的盐。

17.根据权利要求16所述的组合物，其中所述有机酸选自：甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯甲酸、肉桂酸、柠檬酸、富马酸、乙醇酸、乳酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、草酸、苦味酸、丙酮酸、水杨酸、琥珀酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、酒石酸、抗坏血酸、双羟萘酸、双亚甲基水杨酸、乙烷二磺酸、葡萄糖酸、柠康酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕榈酸、EDTA、乙醇酸、对氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸和对甲苯磺酸。

18.根据权利要求16至17中任一项所述的组合物，其中所述有机酸是乙酸、琥珀酸、酒石酸或丙酸。

19.根据权利要求16所述的组合物，其中所述无机酸选自盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸、硫酸和硝酸。

20.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述药学上可接受的酸是乙酸。

21.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述化合物选自{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐和(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐。

22.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述化合物是(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐(AP1189)。

23.根据权利要求1所述的组合物，其中所述关节炎疾病是自身免疫疾病和/或表现为关节炎症的炎性疾病。

24.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述关节炎疾病选自炎性关节炎、退行性关节炎、代谢性关节炎、反应性关节炎和感染性关节炎。

25.根据权利要求24所述的组合物，其中所述炎性关节炎选自类风湿性关节炎、银屑病关节炎和强直性脊柱炎。

26.根据权利要求24所述的组合物，其中所述退行性关节炎是骨关节炎。

27.根据权利要求24所述的组合物，其中所述代谢性关节炎是痛风性关节炎。

28.根据权利要求24所述的组合物，其中所述反应性和/或感染性关节炎是与丙型肝炎、衣原体、淋病、沙门氏菌或志贺氏菌中的一种或多种的感染相关的关节炎。

29.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述关节炎疾病是未分化多关节炎(UP)。

30.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述关节炎疾病是类风湿性关节炎(RA)。

31.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述关节炎疾病是重度活动性类风湿性关节炎(RA)，例如新诊断的重度活动性RA。

32.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述关节炎疾病是DAS28评分高于5.1和/或CDAI>22的类风湿性关节炎。

33.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述关节炎疾病是DAS28评分为5.1或更高(高疾病活动度)，例如DAS28评分为3.2至≤5.1之间(中等活动度)，例如DAS28评分为2.6至<3.2之间(低疾病活动度)的类风湿性关节炎。

34.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述关节炎疾病是CDAI评分为22或更高(高疾病活动度)，例如CDAI评分为10至≤22之间(中等疾病活动度)，例如CDAI评分为2.8至<10之间(低疾病活动度)的类风湿性关节炎。

35.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述类风湿性关节炎是幼年型类风湿性关节炎(JRA)。

36.根据权利要求32所述的组合物，其中所述JRA选自少关节型JRA、全身发病型JRA、多关节型JRA和血清阴性脊柱关节炎。

37.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述关节炎疾病本身与滑膜炎有关。

38.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述关节炎疾病影响手、膝盖、髋、脊柱、腕、踝、臀部、脚趾和/或肘中的一个或多个关节。

39.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述关节炎疾病呈现一种或多种选自下组的其他症状：关节僵直、关节压痛、不能使用手、无法行走、不适、疲劳、体重减轻、睡眠不佳、肌肉酸痛、疼痛、肌肉无力、失去灵活性和有氧适能下降。

40.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物

i)减轻关节炎症，

ii)减少压痛关节的数量和/或减少肿胀关节的数量，

iii)降低血液中c反应蛋白(CRP)的水平，

iv)导致一种或多种关节炎症状的部分或完全缓解，

v)改善受试者的身体机能，如通过健康评估问卷残疾指数(HAQ-DI)所确定的，

vi)改善受试者的功能，如通过慢性疾病治疗的功能评估-疲劳(FACIT-疲劳)所确定的，

vii)降低DAS28评分，例如使DAS28评分降低到3.2至≤5.1之间(中等疾病活动度)，例如降低到2.6至<3.2之间(低疾病活动度)，例如降低到0至<2.6之间(缓解)，

viii)降低CDAI评分，例如使CDAI评分降低到10至≤22之间(中等疾病活动度)，例如降低到2.8至<10之间(低疾病活动度)，例如降低到0至<2.8之间(缓解)，

ix)CDAI评分降低5分或更高，如10分或更高，如15分或更高，

x)使ACR响应率达到≥20％、≥50％或≥70％的改善。

41.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述受试者在治疗之前测试类风湿因子和/或抗环瓜氨酸肽(CCP)IgG抗体呈阳性。

42.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其用于治疗MTX无响应者的关节炎疾病，例如RA。

43.根据权利要求42所述的组合物，其中所述MTX无响应者选自：

a.在6个月时对治疗无响应的受试者，

b.在6个月时对治疗无响应的受试者，使用EULAR响应标准定义为“无响应”，

c.在6个月时对治疗无响应的受试者，评价为28个关节的疾病活动度评分(DAS28)改善≤0.6，或DAS28改善>0.6但≤1.2且6个月DAS28>5.1，

d.到6个月时停用MTX的受试者，即由于无效已停用MTX且不打算重新开始，

e.具有选自以下的一个或多个无响应基线预测因子的受试者：RF(类风湿因子)阴性、较高的HAQ(健康评估问卷)评分、较高的压痛关节计数(TJC28)、较高的HADS(医院焦虑和抑郁量表)焦虑评分和较低的疾病活动度(较低的基线DAS28-CRP)

f.处于无响应高风险(或概率)的个体，如通过Sergeant et al 2018公开的模型确定的，

g.女性，

h.现时吸烟者，和

i.具有高BMI的人。

44.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中甲氨蝶呤(MTX)或其前药以每周约1至约30mg，例如每周一次约10至25mg的量，例如每周约5至15mg的量施用。

45.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中MTX或其前药每周施用一次。

46.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中式(I)、(Ia)或(II)的化合物以每天约1mg至约1000mg，例如每天约50至约800mg，例如每天50mg、100mg、200mg、400mg、600mg或800mg的量施用。

47.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中式(I)、(Ia)或(II)的化合物每天，例如每天一次、每天两次或每天三次施用。

48.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物施用1周，例如超过1周，例如2周或超过2周，例如3周或超过3周，例如4周或超过4周，

例如1个月或超过1个月，例如2个月或超过2个月，例如3个月或超过3个月，例如4个月或超过4个月，例如5个月或超过5个月，例如6个月或超过6个月，

例如超过1年。

49.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中式(I)或(Ia)的化合物在MTX或其前药之前和/或同时和/或之后施用。

50.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中用式(I)、(Ia)或(II)的化合物和MTX或其前药进行治疗是协同的。

51.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中用式(I)、(Ia)或(II)的化合物和MTX或其前药进行治疗是加和的。

52.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中每天施用式(I)、(Ia)或(II)的化合物并且每周一次施用MTX或其前药。

53.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中用MTX的治疗停止一段时间，而用式(I)、(Ia)或(II)的化合物的治疗继续。

54.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中MTX或其前药被配制用于口服施用，例如以片剂或胶囊的形式。

55.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中口服施用MTX或其前药。

56.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中MTX或其前药被配制成注射用液体。

57.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中MTX或其前药通过皮下注射施用。

58.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中式(I)、(Ia)或(II)的化合物被配制用于口服施用。

59.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中式(I)、(Ia)或(II)的化合物为口服固体剂型，例如片剂或胶囊。

60.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中式(I)、(Ia)或(II)的化合物是粉剂，例如口服粉剂，例如适合悬浮在液体中的口服粉剂。

61.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中式(I)、(Ia)或(II)的化合物是口服悬浮液，例如用于口服施用的悬浮液。

62.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中在用式(I)、(Ia)或(II)的化合物治疗之前已经施用MTX来治疗关节炎疾病。

63.根据权利要求62所述的组合物，其中在开始用式(I)、(Ia)或(II)的化合物治疗之前，所述关节炎疾病的先前MTX治疗已经是达不到最佳效果的。

64.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含分开存在的或合并存在的叶酸或其等价物。

65.一种组合物，例如药物组合物，其包含分开存在的或合并存在的甲氨蝶呤(MTX)或其前药和式(I)或(Ia)的化合物：

其中

n为1、2或3；

或其药学上可接受的衍生物。

66.根据权利要求65所述的组合物，其中所述化合物具有式(II)

包括其互变异构和异构形式，例如对映体形式、非对映体形式和外消旋形式；或其药学上可接受的衍生物，

例如其中所述化合物选自{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍和(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍，或其药学上可接受的盐，

例如其中所述化合物选自{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐和(E)-N-反式-{3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-烯丙叉}-氨基胍乙酸盐。

67.根据权利要求62至63中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含叶酸或其等价物。