CN113777330B - 一种疾病相关标志物的筛选方法、应用及试剂盒 - Google Patents

一种疾病相关标志物的筛选方法、应用及试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN113777330B
CN113777330B CN202111329614.0A CN202111329614A CN113777330B CN 113777330 B CN113777330 B CN 113777330B CN 202111329614 A CN202111329614 A CN 202111329614A CN 113777330 B CN113777330 B CN 113777330B
Authority
CN
China
Prior art keywords
protein
complex
differential
disease
sample
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202111329614.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113777330A (zh
Inventor
邱晓彦
段富刚
朱珠
戴慧
张奕潇
王一凡
姜文华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Aisaiji Biomedical Technology Co ltd
Original Assignee
Peking University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Peking University filed Critical Peking University
Priority to CN202111329614.0A priority Critical patent/CN113777330B/zh
Priority to CN202210415007.4A priority patent/CN115097137A/zh
Publication of CN113777330A publication Critical patent/CN113777330A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113777330B publication Critical patent/CN113777330B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57488—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds identifable in body fluids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G01N33/686—Anti-idiotype
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/12—Pulmonary diseases
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/26—Infectious diseases, e.g. generalised sepsis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/32—Cardiovascular disorders
    • G01N2800/324—Coronary artery diseases, e.g. angina pectoris, myocardial infarction

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种疾病相关标志物的筛选方法、应用及试剂盒。筛选方法包括：使用能够结合免疫球蛋白（Ig）的物质，分别从第一批健康样本血清和患病样本血清中纯化出Ig复合物；将与Ig相结合的蛋白进行蛋白质谱测序分析，比较健康样本与患病样本的差异，找到只出现在患病样本中的差异蛋白，即为该疾病相关潜在标志物。另外还可以通过以下步骤进一步验证该潜在标志物：使用第二批健康样本和患病样本的血清（扩大病例），纯化获得Ig复合物，利用差异蛋白的特异性抗体进行进一步鉴定。该方法先从血清中获得Ig复合物（而不是全血清），再将与Ig相结合的蛋白进行蛋白质谱测序联合特异性抗体分析，能够快速有效地筛选出疾病相关标志物。

Description

一种疾病相关标志物的筛选方法、应用及试剂盒
技术领域
本发明涉及分子生物学与免疫学技术领域，具体涉及一种疾病相关标志物的筛选方法、应用及试剂盒。
背景技术
生物标志物(Biomarker)是指一种具有可客观检测和评价的特性，可作为正常生物学过程、病理过程或治疗干预药理学反应的指示因子的生物体内物质。在疾病的诊断和治疗研究中，寻找和发现有价值的生物标志物已经成为当前医学领域的研究热点。
公开号CN108956791A的专利公开了一种大规模筛选蛋白质生物标志物的方法：将生物组织对照样本和参考样本（病理样本）匀浆、裂解；裂解液进行酶解、除盐等操作；用LC-MS/MS液质联用的方式进行蛋白质鉴定；通过比较质谱分析次数或质谱峰强度，分析样品蛋白的丰度变化，以MS1为基础，计算每个肽段的信号强度在LC-MS上的积分，以MS2的鉴定结果为定量基础，大规模对数据进行修正；通过修正的数据分析结果筛选出显著上调或下调的蛋白质生物标志物。
公开号CN111999403A的专利公开了一种瓦斯爆炸血清标志物筛选方法，以无创大鼠和瓦斯爆炸肺损伤大鼠血清样本进行LC-MS检测，采用LC-MS血清代谢组学技术进行分析，构建模型，利用模型进行数据处理，从候选代谢产物中筛选肺损伤模型生物标志物。
目前常用的筛选疾病相关特异性标志物的研究，普遍采用全基因组数据或者基因表达数据、全血清蛋白数据等作为分析基础。以新冠肺炎为例，目前通过蛋白质谱技术，已经揭示了重症COVID-19患者血清中蛋白质和代谢物的特征变化，鉴定了一些可能具有应用潜质的标志分子。然而，几乎所有寻找特异性生物标志物的研究都是利用 COVID-19的全血清蛋白[1,2,3]。对于蛋白质谱技术来说，由于其所用样品量少、而特异性标志物在血清或血浆含量却较低，显然，对于所需样本量少而为“优势”的蛋白质谱技术而言可谓是“大海捞针”，即要从这些目标分析物中筛选出有意义的标志物并非易事。
目前新型严重急性呼吸道综合征冠状病毒2型（severe acute respiratorysyndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）病毒感染诊断主要依赖核酸检测，尚缺乏血清学标志物，而且，其组织损伤程度也无可行的方法确定。因此积极研究SARS-CoV-2感染后的免疫应答反应对于寻找COVID-19生物标志物及鉴定组织损伤评估指标具有重要的临床意义。
参考文献：1.Shen B, Yi X, Sun Y, Bi X, Du J, Zhang C, Quan S, Zhang F,Sun R, Qian L et al: Proteomic and Metabolomic Characterization of COVID-19Patient Sera. Cell 2020, 182(1):59-72.e15.
2. Shu T, Ning W, Wu D, Xu J, Han Q, Huang M, Zou X, Yang Q, Yuan Y,Bie Y et al: Plasma Proteomics Identify Biomarkers and Pathogenesis of COVID-19. Immunity 2020, 53(5):1108-1122.e1105.
3. Overmyer KA, Shishkova E, Miller IJ, Balnis J, Bernstein MN,Peters-Clarke TM, Meyer JG, Quan Q, Muehlbauer LK, Trujillo EA et al: Large-Scale Multi-omic Analysis of COVID-19 Severity. Cell systems 2021, 12(1):23-40.e27.
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的上述问题，提供一种疾病相关潜在生物标志物的筛选方法、应用及试剂盒，该方法能够快速筛选出有意义的标志物，为疾病的诊断和治疗提供靶标基础。
第一方面，本发明提供了一种疾病相关潜在标志物的筛选方法，包括：
（1）使用能够结合Ig（免疫球蛋白）的物质，分别从第一批健康样本血清和患病样本血清中纯化出Ig复合物；
（2）对Ig复合物进行质谱分析和/或糖谱分析，比较健康样本与患病样本的分析结果，找到只高频出现在患病样本的Ig复合物中与Ig相结合的差异蛋白，和/或只高频出现在患病样本的Ig复合物中的差异糖基，该差异蛋白和/或差异糖基即为该疾病相关的潜在标志物。
上述筛选方法中，所述的健康样本，是指能够区别于患病样本的样本，例如，想要筛选某种疾病A相关的标志物，那么健康样本可以使用正常未患病人的样本，也可以使用患有其他疾病例如疾病B而未患疾病A的人的样本，只要能够与该疾病有明显区别，未被诊断为该疾病的样本即可。
可选或优选的，上述筛选方法中，还包括如下验证的步骤：
（3）进一步扩大健康样本和患病样本的数量，采用与步骤（1）相同的方法纯化获得Ig复合物，然后进行以下操作：
针对差异蛋白，利用该差异蛋白的特异性抗体，识别本步骤获得的Ig复合物中的差异蛋白，如果患病样品中该差异蛋白仍然高频出现或缺失，则进一步验证该差异蛋白为疾病相关的潜在标志物；
针对差异糖基，利用该糖基的结合物，或者糖谱分析，识别本步骤获得的Ig复合物的差异糖基，如果患病样本中该差异糖基仍然高频出现或缺失，则进一步验证该差异糖基为疾病相关的潜在标志物。
本步骤中使用的是新一批的健康样本和患病样本，数量可进一步扩大，大于第一批健康样本和患病样本，由于质谱或糖谱分析成本较高，第一批样本的数量只需要能够找到差异蛋白和/或差异糖基即可，当差异蛋白、糖基找到以后，再进一步大批量对这些差异蛋白、糖基的标志物特性进行验证，所得结果准确性更佳。
上述方法中，所述的高频，是指相较于其他样本，出现或缺失频率具有显著性差异，即丰度呈现显著性差异。
Ig，immunoglobulin，即免疫球蛋白。所述能够结合Ig的物质，与血清中的Ig结合后，可以分离纯化出Ig复合物，该复合物除含有Ig外，还包含了血清中存在的能够与Ig结合的其他蛋白类物质，部分蛋白可能存在糖基化修饰，因此利用能够结合Ig的物质将能够与Ig结合的蛋白进行了收集，再对这些蛋白进行蛋白质谱测序分析、糖谱分析，在分析结果中寻找其在健康样本和患病样本中的差异，就能够获得只高频在患病样本中出现的蛋白、糖基。最后利用免疫结合技术例如ELISA或Western blot或CBA流式等检测方法验证差异蛋白作为疾病相关标志物的可行性，对于差异糖基也可进一步针对性验证。
可选或优选的，上述方法中，所述能够结合Ig的物质，包括ProteinG、ProteinA、Jacalin、Hitrap、抗人IgD、抗人IgE中的至少一种。
可选或优选的，上述方法中，所述Ig复合物，包括IgG复合物、IgA复合物、IgM复合物、IgD复合物和IgE复合物中的至少一种。
第二方面，本发明提供了差异蛋白和/或差异糖基作为潜在标志物在制备疾病诊断或治疗药物中的应用，所述差异蛋白和/或差异糖基由以上任一所述方法筛选获得。
可选或优选的，上述应用中，所述疾病包括感染性疾病、免疫相关疾病、心血管疾病中的任何一种。
第三方面，本发明提供了一种检测试剂盒，用于辅助检测新冠肺炎，配合能够结合Ig的物质使用，所述试剂盒中包括抗CA1抗体、抗LRG1抗体、抗IgG-IgA复合物抗体中的至少一种。
第四方面，本发明提供了一种检测试剂盒，用于辅助检测脑胶质瘤，配合能够结合Ig的物质使用，其特征在于，所述试剂盒中包括抗S100-A8的抗体。S100-A8即后文中的Protein S100-A8。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明的筛选方法首先基于亲和纯化技术利用能够结合Ig的物质，从样本血清中纯化出Ig复合物，再以Ig复合物中与Ig相结合的蛋白作为蛋白质谱测序技术的研究对象，通过测序分析不同的蛋白在健康样本和患病样本中的差异，进而寻找出只在患病样本血清中才出现的蛋白，或者对Ig复合物进行糖谱分析，找出差异糖基，即使这些成分在血清中的浓度非常低，通过本发明的方法也能够快速有效地筛选到，经过免疫技术对蛋白的鉴定、以及进一步对糖基的鉴定后，就能够验证其为疾病相关的标志物。
不管是外源性抗原（例如各种病毒、细菌及真菌），还是由各种疾病、外伤等导致细胞内抗原的释放，都可激活体内的免疫系统，其可通过特异性识别并结合抗原性物质清除抗原，达到免疫防御作用。例如，抗原性物质可激活B细胞产生特异性抗体，该抗体又通过与特定的抗原结合发挥免疫清除作用。因此，在疾病状态下，一些抗体所结合的抗原会带有疾病相关的分子特征，该分子可能是直接致病的病原微生物成分，也可能是组织损伤后内源性抗原成分，本发明通过先收集样本中的Ig复合物，再鉴定这些复合物中Ig所携带的抗原性物质，这些抗原性物质就是与Ig结合的蛋白，缩小了蛋白质谱技术的分析范围，更优于目前在全血清蛋白中寻找疾病相关标志分子的方案。另外我们发现，Ig复合物的糖谱分析结果中，健康样本和患病样本也存在显著差异，因此利用这些差异糖基也能够区分相关疾病。这种先形成Ig复合物，再基于Ig复合物寻找差异的方式，显著缩小了筛选范围，节省时间和资金成本，更具有可操作性。
本发明方法筛选出的新冠肺炎相关标志物CA1、LRG1、IgG-IgA复合物，能够特异性标识新冠肺炎，不仅可以作为新冠肺炎的生物标志物而且对于揭示疾病的发病机制，如新冠肺炎的免疫损伤机制也具有重要的意义，可能为相关的疾病治疗提供有效的靶点。
附图说明
图1为实施例1-鉴定血清中的Ig结合蛋白的流程及原理示意图。A为流程图，B为原理图。分别使用Jacalin、Protein G或抗人IgM亲和层析柱亲和纯化结合有IgA、IgG及IgM的Ig复合物，再进行Ig结合蛋白质谱鉴定以及数据分析。HC：健康组。CP（2 weeks）：新冠肺炎恢复期2周。
图2为实施例1-Western blot法鉴定CA1及LRG1特异性呈现在新冠肺炎患者的Ig复合物中。A为不同组别的血清中IgA与CA1的结合水平。B为不同组别的血清中IgG与 LRG1的结合水平。Healthy control表示健康组，即正常人组，COVID-19 Convalescent Phase(2weeks)表示COVID-19恢复期2周，COVID-19 Vacciination表示COVID-19疫苗接种组，COVID-19 Convalescent Phase (6 months)表示COVID-19恢复期6个月。
图3为实施例1-Western blot法鉴定IgG-IgA复合物特异性呈现在新冠肺炎患者的Ig复合物中。A：鉴定在健康组、COVID-19恢复期2周、 COVID-19恢复期6个月以及COVID-19疫苗接种组的血清中IgA与IgG的结合水平。B：鉴定在健康组、COVID-19恢复期2周、COVID-19恢复期6个月以及COVID-19疫苗接种组的血清中IgG与IgA的结合水平。
图4为实施例2中冠心病患者与正常人的IgG结合蛋白质谱分析差异图，CH代表冠心病患者，NM代表正常人。
图5为实施例2中急性心肌梗死患者与正常人的IgG结合蛋白质谱分析差异图，AM代表急性心肌梗死患者，NM代表正常人。
图6为实施例2中急性心肌梗死与冠心病患者的IgG结合蛋白质谱分析差异图，AM代表急性心肌梗死患者，CH代表冠心病患者。
图7为实施例2中急性心肌梗死患者、冠心病患者与正常人三个人群的IgG结合蛋白质质谱分析差异图，AMI代表急性心肌梗死患者，CHD代表冠心病患者，NM代表正常人。
图8为实施例3中肺癌患者、脑胶质瘤患者、胃肠炎症患者、冠心病患者四组人群的IgG结合蛋白完成质谱分析后关于Protein S100-A8的表达差异对比图。
图9为实施例3中四组人群中的IgG结合蛋白完成质谱分析后关于Fibronectin的表达差异对比图。
图10为实施例3中四组人群中的IgG结合蛋白完成质谱分析后关于Suprabasin的表达差异对比图。
图11为实施例3中四组人群中的IgG结合蛋白完成质谱分析后关于Annexin A2的表达差异对比图。
图12为实施例3中四组人群中的IgG结合蛋白质谱结果分为癌症组和费癌症组后用T检验分析结果，显示5种蛋白在癌症组与非癌症组中的丰度差异显著。
图13为实施例3中四组人群中的IgG结合蛋白完成糖谱分析后显示的唾液酸（sialylation）修饰的糖蛋白的表达差异对比图。
图14为实施例3中四组人群中的IgG结合蛋白完成糖谱分析后关于G2FS修饰的糖蛋白的表达差异对比图。
图15为实施例3中四组人群中的IgG结合蛋白完成糖谱分析后关于G1S修饰的糖蛋白的表达差异对比图。
图16为实施例3中四组人群中的IgG结合蛋白完成糖谱分析后关于G1FS修饰的糖蛋白的表达差异对比图。
图17为实施例3中四组人群中的IgG结合蛋白完成糖谱分析后关于G2S修饰的糖蛋白的表达差异对比图。
图18为实施例3中对Protein S100-A8作为脑胶质瘤相关潜在标志物的免疫结合验证结果，显示其在脑胶质瘤组中出现更高频率的表达。
具体实施方式
下面结合较佳的具体实施例对本发明的技术方案进行详细解释和说明。
实施例1新冠肺炎相关潜在标志物的筛选
第一部分，纯化免疫球蛋白复合物及蛋白质谱分析。
分别取9例新冠肺炎患者（恢复期2周）及9例健康人血清200µL，用PBS稀释10倍，然后分别用Jacalin、Protein G、抗人IgM，通过亲和层析柱进行亲和纯化血清中的IgA复合物、IgG复合物及IgM复合物，这三种Ig复合物再用于蛋白质谱测序分析，操作流程如图1所示。
Jacalin能够亲和纯化出血清中的IgA，进而一起纯化出与IgA结合的各种蛋白。Protein G能够亲和纯化出血清中的IgG，进而一起纯化出与IgG结合的各种蛋白。抗人IgM能够亲和纯化出血清中的IgM，进而一起纯化出与IgM结合的各种蛋白。
经过进一步对蛋白质谱数据分析得到如下结果：
表1. IgA复合物中与IgA结合的蛋白
蛋白名称 <i>P</i>值 新冠组/健康组
APOC2 0.04773551 up
IGLV3-16 0.04657575 up
CPB2 0.00073696 up
IGHV4-28 0.03035302 up
IGHV3-38 0.00227242 up
IGHV5-51 0.04680254 up
Ig heavy chain V-II region NEWM 0.01933407 up
IGLC7 0.0212699 up
CFB 0.00023813 up
CFP 0.00800915 up
CHMP4A 0.02580533 up
CDADC1 0.00021341 up
ITIH4 0.03186222 up
CNDP1 0.00137543 up
FCN3 0.00642634 up
CP 0.00055504 up
F9 0.00158368 up
F10 0.0039227 up
*CA1 0.00198885 up
SERPINA3 5.44E-05 up
Ig lambda chain V-I region NEWM 0.0284497 up
Ig lambda chain V-IV region Kern 0.00927065 up
Ig heavy chain V-II region MCE 0.00342457 up
APCS 0.00103106 up
C1QA 0.01148978 up
LRG1 0.00280689 up
ORM1 0.01297475 up
C2 0.00381825 up
C8A 0.03259588 up
C8G 0.01454743 up
*SERPINA6 0.00210371 up
CD14 0.04387445 up
C4B 0.0393426 up
C6 0.01321296 up
CPN1 0.03042733 up
ORM2 0.02118024 up
CPN2 0.00733027 up
AZGP1 0.03598633 up
SERPINA4 0.01208177 up
IGFALS 0.00916193 up
MASP1 0.00937332 up
C1RL 0.00981707 up
FGG(C9JEU5) 0.00505784 down
*只在新冠肺炎患者（恢复期2周）中出现的蛋白。
参见表1，新冠肺炎组相比于健康组，与 IgA 结合的 42 种蛋白质增加，1 种蛋白质减少，其中CA1及SERPINA6只在9例新冠肺炎患者中出现。
进一步对差异蛋白进行富集分析发现，与 IgA 结合的蛋白质在炎症、补体系统和凝血级联过程中高度丰富。
表2. IgG复合物中与IgG结合的蛋白
蛋白名称 <i>P</i>值 新冠组/健康组
DMD 0.04600074 up
CPB2 0.00086866 up
IGHV3-43 0.01853468 up
Ig heavy chain V-I region EU 0.03803475 up
FBLN1 0.02433129 up
CFB 0.00029404 up
CP 0.00112882 up
F9 0.00350895 up
SERPINA3 0.00578391 up
Ig lambda chain V-I region VOR 0.013433 up
*LRG1 9.36E-05 up
AMBP 0.02206344 up
HPX 0.00202254 up
Ig lambda chain V region 4A 4.73E-05 up
ARG1 0.03769288 up
C2 2.71E-05 up
C8A 0.0132836 up
C8G 0.00085702 up
MBL2 0.03810486 up
CPN1 0.00021899 up
CPN2 0.0176004 up
MASP1 0.03555267 up
IGHV3OR15-7 0.02407551 down
APOC3 0.01131769 down
CHMP4A 0.03738581 down
APOA2 0.01297376 down
LBP 0.00194658 down
LGALS3BP 0.00651023 down
*只在新冠肺炎患者（恢复期2周）中出现的蛋白。
通过表2可知，新冠肺炎组相比于健康组，与 IgG 结合的蛋白有 22 种蛋白质增加，6 种蛋白质减少，其中LRG1只在8例新冠患者出现，与 IgG 结合的蛋白质在补体激活、内吞作用和蛋白水解的负调节通路富集。
表3. IgM复合物中与IgM结合的蛋白
蛋白名称 <i>P</i>值 新冠组/健康组
CFI 0.0141665 up
APCS 0.04476728 up
C2 8.74E-12 up
IGHV3-30-3 0.01111913 up
DSG1 0.01751852 up
CFHR4 0.00055017 up
APOC3 0.01959216 down
CNDP1 0.01094244 down
FCN3 0.02925569 down
LPA 0.01584391 down
CD14 0.01512459 down
CETP 0.03190065 down
PLTP 0.00197844 down
参见表3，新冠肺炎组相比于健康组，与 IgM 结合的 6 种蛋白增加，7 种结合蛋白减少，但未发现只出现于新冠肺炎患者的蛋白。
第二部分，用Western blot方法进一步鉴定CA1及LRG1特异性呈现在新冠患者的免疫球蛋白复合物中。
针对第一部分中筛选出的候选标志物CA1及LRG1，对其进行鉴定。CA1，即碳酸酐酶I，Carbonic Anhydrase I。LRG1，亮氨酸丰富α2-糖蛋白1，leucine-rich-alpha-2-glycoprotein 1。
我们又进一步扩大样本数量，检测了20例健康人，25例COVID-19恢复期2周，20例COVID-19恢复期6个月以及4例COVID-19疫苗接种者的血清，用Jacalin亲和层析柱亲和纯化结合有IgA的免疫球蛋白复合物，所获免疫球蛋白复合物用抗CA1抗体以免疫印迹方法进行检测。用 Protein G亲和层析柱亲和纯化出IgG复合物，所获IgG复合物用抗LRG1抗体以免疫印迹方法进行检测。
检测结果参见图2A、B。结果发现，CA1及LRG1无例外地只发现在所有的COVID-19恢复期2周的患者血清所得免疫球蛋白复合物中，而在其他正常人（健康组）、疫苗接种者及康复后6个月COVID-19患者样本中未发现，表明CA1及LRG1可以作为新冠肺炎的潜在标志物。
另外，我们还鉴定了IgG-IgA复合物特异性呈现在新冠患者的免疫复合物，IgG-IgA复合物同时含有IgG和IgA两种免疫球蛋白。
在分析与IgA结合的免疫球蛋白复合物的蛋白谱时偶然发现，其中包含一定量的IgG，而健康人血清中与IgA结合的免疫球蛋白复合物中则缺少IgG。
为了证明新冠肺炎患者血清中与IgA结合的免疫球蛋白复合物中确实包含IgG(可能作为新标志分子)，我们又进一步扩大样本，收集了15例健康人，20例新冠患者恢复期2周，15例COVID-19恢复期6月以及4例COVID-19疫苗接种者的血清，对Jacalin 亲和纯化的与IgA结合的免疫球蛋白复合物用抗人IgG进行Western blot分析。
结果发现，IgG无例外地只发现在所有的COVID-19恢复期2周的患者组中，而其他正常人组、疫苗接种者及康复后6个月COVID-19患者组中未发现，参见图3A。
同样，我们又用抗IgA抗体检测了亲和纯化的与IgG结合的免疫球蛋白复合物中是否存在IgA。
结果发现，IgA无例外地只发现在所有的COVID-19恢复期2周的患者组中，而其他正常人组、疫苗接种者组及康复后6个月COVID-19患者组中都未发现，参见图3B。说明IgG-IgA复合物特异性存在于新冠患者的免疫球蛋白复合物中，能够作为新冠肺炎的潜在标志物。
实施例2 冠心病（CHD）、急性心肌梗死（AMI）相关潜在标志物的筛选
第一部分：冠心病(CHD)相关潜在标志物的筛选
纯化IgG复合物及蛋白质谱分析：分别取冠心病（CHD）患者的血清，以及正常人（NM）的血清，用PBS稀释，然后用Protein G通过亲和层析柱进行亲和纯化血清中的IgG复合物。对与IgG结合的蛋白质进行质谱分析。
蛋白质谱分析结果参见图4，图中不同蛋白质标记所代表的蛋白名称如下表所示：
编号 基因 英文全称 中文全称
P02679 FGG Fibrinogen gamma chain 纤维蛋白原γ链
P02671 FGA Fibrinogen alpha chain 纤维蛋白原α链
P08493 MGP Matrix Gla protein 细胞外基质Gla蛋白
P01023 A2M Alpha-2-macroglobulin α-2巨球蛋白
P02774 GC Vitamin D-binding protein 维生素D结合蛋白
P03951 F11 Coagulation factor XI 凝血因子11
P02655 APOC2 Apolipoprotein C-II 载脂蛋白C-II
P02765 AHSG Alpha-2-HS-glycoprotein α-2-HS糖蛋白
P02656 APOC3 Apolipoprotein C-III 载脂蛋白C-III
Q96HU8 DIRAS2 GTP-binding protein Di-Ras2 GTP结合蛋白 Di-Ras2
P31947 SFN 14-3-3 protein sigma 14-3-3sigma
结果显示，与正常人相比，纤维蛋白原、细胞外基质Gla蛋白、α-2巨球蛋白、维生素D结合蛋白、凝血因子11、载脂蛋白C-II、 α-2-HS糖蛋白、载脂蛋白C-III、 GTP结合蛋白Di-Ras2及14-3-3sigma都高水平呈现在CHD患者血清中。表明上述蛋白可作为CHD相关的潜在标志物。
第二部分：急性心肌梗死（AMI）相关潜在标志物的筛选
纯化Ig复合物及蛋白质谱分析：分别取急性心肌梗死（AMI）患者的血清，以及正常人（NM）的血清，用PBS稀释，再用ProteinG从急性心肌梗死（AMI）及正常人（NM）血清中纯化获得IgG免疫复合物，对与IgG结合的蛋白进行质谱分析，寻找差异。
分析结果参见图5，图中不同蛋白质标记所代表的蛋白名称如下表所示：
编号 基因 英文全称 中文全称
P02679 FGG Fibrinogen gamma chain 纤维蛋白原γ链
A0A087WSY4 IGHV4-30-2 Immunoglobulin heavy variable 4-30-2 Ig重链可变区IGHV4-30-2
A0A075B6R2 IGHV4-4 Immunoglobulin heavy variable 4-4 IGHV4-4
P02656 APOC3 Apolipoprotein C-III 载脂蛋白C-III
Q08211 DHX9 ATP-dependent RNA helicase A ATP依赖性RNA解旋酶A
P00742 F10 Coagulation factor X 凝血因子10
A0A0C4DH72 IGKV1-6 Immunoglobulin kappa variable 1-6 Ig轻链可变区IGKV1-6
P02671 FGA Fibrinogen alpha chain 纤维蛋白原α链
P01619 IGKV3-20 Immunoglobulin kappa variable 3-20 Ig轻链可变区IGKV3-20
结果显示，与正常人相比，纤维蛋白原、IGHV4-30-2、IGHV4-4、载脂蛋白C-III、ATP依赖性RNA解旋酶A、凝血因子10、IGKV1-6及IGKV3-20高水平呈现在AMI患者血清中。表明上述蛋白可作为AMI相关的潜在标志物。
冠心病（coronary heart disease,CHD）由冠状动脉血管发生动脉粥样硬化病变引起的心肌缺血所导致，如果冠心病不能得到有效治疗而任其发展，就有可能出现部分心肌急性坏死，转化成急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）。因此，为了更进一步寻找CHD和AMI之间的差别，准确判断患者病程发展，我们又将CHD和AMI患者中与IgG结合的蛋白进行了质谱分析比较。
第三部分：对CHD和AMI相关潜在标志物的进一步筛选
纯化Ig复合物及蛋白质谱分析：分别取冠心病（CHD）患者、极性心肌梗死（AMI）患者的血清，用PBS稀释，然后用Protein G通过亲和层析柱进行亲和纯化获得血清中的IgG复合物。对复合物中与IgG结合的蛋白质进行质谱分析。
蛋白质谱分析结果参见图6，图中不同蛋白质标记所代表的蛋白名称如下表所示：
编号 基因 英文全称 中文全称
P09871 C1S Complement C1s subcomponent 补体C1S
P01602 IGKV1-5 Immunoglobulin kappa variable 1-5 IGKV1-5
P00736 C1R Complement C1r subcomponent 补体C1R
P00742 F10 Coagulation factor X 凝血因子10
A0A0C4DH73 IGKV1-12 Immunoglobulin kappa variable 1-12 IGKV1-12
A0A0C4DH67 IGKV1-8 Immunoglobulin kappa variable 1-8 IGKV1-8
P01742 IGHV1-69 Immunoglobulin heavy variable 1-69 IGKV1-69
A0A0C4DH55 IGKV3D-7 Immunoglobulin kappa variable 3D-7 IGKV3D-7
A0A0C4DH25 IGKV3D-20 Immunoglobulin kappa variable 3D-20 IGKV3D-20
P0DOX5 Immunoglobulin gamma-1 heavy chain 免疫球蛋白γ-1重链
A0A087WSY6 IGKV3D-15 Immunoglobulin kappa variable 3D-15 IGKV3D-15
结果显示，与CHD相比，AMI患者高水平呈现补体C1S、C1R、凝血因子10及IGKV1-5。而结合第一部分和第二部分的结果，与正常人IgG复合物蛋白质谱相比，AMI及CHD都突出呈现纤维蛋白原及载脂蛋白C-III。表明纤维蛋白原和载脂蛋白C-III能够作为CHD和AMI的潜在标志物，再结合第一部分和第二部分所筛选出的CHD和AMI各自的潜在标志物，就能够准确判断患者具体所患疾病，以及其病程进度如何。
图7显示了急性心肌梗死（AMI）、冠心病（CHD）和正常人（NM）这三群人中与IgG结合的蛋白质质谱分析结果，显示三群人蛋白谱的差异。
实施例3 脑胶质瘤相关标志物的筛选
纯化Ig复合物及蛋白质谱分析：脑胶质瘤患者、冠心病患者、肺癌患者、胃肠癌症疾病患者的血清共四组，每组10人，分别取血清用PBS稀释，然后用Protein G通过亲和层析柱进行亲和纯化血清中的IgG复合物。对所得IgG复合物中的蛋白质进行质谱分析以及糖谱分析。
参见图8和图9，质谱分析结果显示，相较于其他组，Protein S100-A8（5/10）和Fibronectin（纤黏连蛋白）（3/10）两种蛋白在脑胶质瘤患者血样纯化的IgG复合物中高水平表达。参见图10和图11，肺癌患者血清尤其高频率出现Suprabasin（5/10，即10例样本中5例显示高表达）和Annexin A2（膜联蛋白 A2）（4/10）。
用T检验分析发现，参见图12，当“t-test Difference”大于1.5或者小于-1.5，则该蛋白在两组中的丰度具有显著的差异性。软件分析出差异蛋白有五种：1.C4b-bindingProtein alpha chain（C4b结合蛋白α链）、，2.Ig alpha-2 chain C region（Igα-2链C区），3.Ig kappa chain V-II FR（Igκ链V-II FR），4.Ig mu heavy chain disease protein（Ig-μ重链病蛋白），5.Ig lambda chain V region 4A（Igλ链V区域4A）。
其中，癌症组（脑胶质瘤、肺癌、胃肠癌）与非癌症组（冠心病）相比，蛋白质谱显示Ig lambda chain V region 4A在癌症组水平远高于非癌症组，而C4b-binding Proteinalpha chainIg alpha-2 chain C region、Ig kappa chain V-II FR和Ig mu heavychain disease protein在非癌症组明显高于癌症组。这表明上述五种蛋白可作为癌症相关潜在标志物，其表达水平相对于非癌症对照样本显著升高或者降低即提示患癌可能性。
参见图13，糖谱分析结果显示，唾液酸（sialylation）在脑胶质瘤患者中也呈现高水平。另外，参见图14和图15，G2FS以及G1S在脑胶质瘤患者中也呈现高水平。参见图16，G1FS在肺癌患者中呈现高水平，参见图17，G2S在肺癌患者中呈现高水平。各图中，糖基结构中正方形表示N-acetylglucosamine（N-乙酰葡糖胺）,浅灰色圆形表示galactose（半乳糖），深灰色圆形表示mannose（甘露糖），菱形表示sialic acid（唾液酸 ），三角形表示fucose（岩藻糖）。
经过上述质谱分析和糖谱分析，可以将Protein S100-A8、Fibronectin、唾液酸、G2FS、G1S作为脑胶质瘤相关的潜在标志物，而G1FS、G2S作为肺癌相关的潜在标志物。
当对唾液酸进行验证时，可以用西洋接骨木凝集素（SNA）或朝鲜槐凝集素（MAL）检测，其它的糖基可以用糖谱分析检测。
对于Protein S100-A8，我们还做了进一步的验证实验。
扩大样本数量，选择一批新的脑胶质瘤患者样本28例和冠心病患者样本27例，分别采集血清后，用Protein G通过亲和层析柱进行亲和纯化，获得血清中的IgG复合物。
使用抗Protein S100-A8的特异性抗体，对上述获得的IgG复合物进行免疫结合实验，结果参见图18，Protein S100-A8在脑胶质瘤组中出现更高频率的表达，与冠心病组差异明显，进一步验证了Protein S100-A8可以作为脑胶质瘤相关标志物，用于辅助诊断脑胶质瘤。
本文中应用了具体个例对发明构思进行了详细阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离该发明构思的前提下，所做的任何显而易见的修改、等同替换或其他改进，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.α-2-HS糖蛋白、GTP结合蛋白Di-Ras2和14-3-3sigma作为潜在标志物在制备冠心病诊断或治疗药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述标志物还包括α-2巨球蛋白、纤维蛋白原γ链、纤维蛋白原α链、细胞外基质Gla蛋白、维生素D结合蛋白、凝血因子11、载脂蛋白C-II、载脂蛋白C-III中的至少一种。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述标志物由以下方法获得：
（1）使用能够结合Ig的物质，分别从第一批每个健康样本血清和每个患病样本血清中纯化出Ig复合物；
（2）对Ig复合物进行质谱分析和/或糖谱分析，比较健康样本与患病样本的分析结果，找到只在患病样本的Ig复合物中高频出现或缺失的与Ig相结合的差异蛋白，和/或只在患病样本的Ig复合物中高频出现或缺失的差异糖基，该差异蛋白和/或差异糖基即为疾病相关的潜在标志物；
（3）进一步扩大健康样本和患病样本的数量，采用与步骤（1）相同的方法纯化获得Ig复合物，然后进行以下操作：
针对差异蛋白，利用该差异蛋白的特异性抗体，识别本步骤获得的Ig复合物中的差异蛋白，如果患病样品中该差异蛋白仍然高频出现或缺失，则进一步验证该差异蛋白为疾病相关的潜在标志物；
针对差异糖基，利用该糖基的结合物，或者糖谱分析，识别本步骤获得的Ig复合物的差异糖基，如果患病样本中该差异糖基仍然高频出现或缺失，则进一步验证该差异糖基为疾病相关的潜在标志物。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的能够结合Ig的物质，包括ProteinG、ProteinA、Jacalin、Hitrap、抗人IgD、抗人IgE中的至少一种。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述Ig复合物，包括IgG复合物、IgA复合物、IgM复合物、IgD复合物和IgE复合物中的至少一种。
CN202111329614.0A 2021-11-11 2021-11-11 一种疾病相关标志物的筛选方法、应用及试剂盒 Active CN113777330B (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111329614.0A CN113777330B (zh) 2021-11-11 2021-11-11 一种疾病相关标志物的筛选方法、应用及试剂盒
CN202210415007.4A CN115097137A (zh) 2021-11-11 2021-11-11 一种疾病相关标志物的筛选方法、应用及试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111329614.0A CN113777330B (zh) 2021-11-11 2021-11-11 一种疾病相关标志物的筛选方法、应用及试剂盒

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210415007.4A Division CN115097137A (zh) 2021-11-11 2021-11-11 一种疾病相关标志物的筛选方法、应用及试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113777330A CN113777330A (zh) 2021-12-10
CN113777330B true CN113777330B (zh) 2022-05-20

Family

ID=78957074

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111329614.0A Active CN113777330B (zh) 2021-11-11 2021-11-11 一种疾病相关标志物的筛选方法、应用及试剂盒
CN202210415007.4A Pending CN115097137A (zh) 2021-11-11 2021-11-11 一种疾病相关标志物的筛选方法、应用及试剂盒

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210415007.4A Pending CN115097137A (zh) 2021-11-11 2021-11-11 一种疾病相关标志物的筛选方法、应用及试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (2) CN113777330B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115097147B (zh) * 2022-08-23 2022-11-25 细胞生态海河实验室 预测奥密克戎复阳风险的生物标志物及代谢、蛋白、联合模型
CN117607462B (zh) * 2024-01-19 2024-04-05 天津医科大学眼科医院 生物标志物在制备诊断后巩膜炎的产品中的应用

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014193999A2 (en) * 2013-05-28 2014-12-04 Caris Science, Inc. Biomarker methods and compositions
EP3216861A1 (en) * 2016-03-11 2017-09-13 Fropharm GmbH Immunoregulatory cells and methods for their production
US20210140977A1 (en) * 2018-04-16 2021-05-13 University Of Cape Town A three-protein proteomic biomarker for prospective determination of risk for development of active tuberculosis
WO2021219009A1 (zh) * 2020-04-29 2021-11-04 上海科技大学 Piwi和/或nmd复合体蛋白在高表达piwi的癌症中的诊断与治疗
CN113176411B (zh) * 2021-03-10 2023-12-26 北京大学口腔医学院 利用唾液检测新型冠状病毒感染的生物标志物及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Protein-Defined Subspecies of HDLs (High-Density Lipoproteins) and Differential Risk of Coronary Heart Disease in 4 Prospective Studies;Frank M. Sacks等;《Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology》;20201130;第40卷;第2714-2727页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN113777330A (zh) 2021-12-10
CN115097137A (zh) 2022-09-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113777330B (zh) 一种疾病相关标志物的筛选方法、应用及试剂盒
Zhan et al. Mass spectrometry analysis of human tear fluid biomarkers specific for ocular and systemic diseases in the context of 3P medicine
US8911960B2 (en) Method for identifying idiopathic pneumonia progression by measuring the level of mannose-binding protein C
EP3260866B1 (en) Novel biomarkers for cognitive impairment and methods for detecting cognitive impairment using such biomarkers
Pelaia et al. Application of proteomics and peptidomics to COPD
Laila et al. Role of proteomics in the discovery of autism biomarkers
EP2444814B1 (en) Biomarker for mental disorders including cognitive disorders, and method using said biomarker to detect mental disorders including cognitive disorders
Iadarola et al. Recent applications of CE‐and HPLC‐MS in the analysis of human fluids
CN110546505A (zh) 利用代谢组分析诊断白塞氏病的方法
ES2535971T3 (es) Nuevos biomarcadores para la enfermedad de hígado graso no alcohólico y métodos para detectar la enfermedad de hígado graso no alcohólico que emplean dichos biomarcadores
JP2011232164A (ja) 肝臓疾患マーカー、その測定方法、装置及び医薬品の検定方法
Fumagalli et al. Proteomic analysis of exhaled breath condensate from single patients with pulmonary emphysema associated to α1-antitrypsin deficiency
RU2406092C2 (ru) Способ диагностики заболеваний печени
US20120135542A1 (en) Methods and materials for diagnosing light chain amyloidosis
Martín et al. Proteomics as a new tool in forensic sciences
BR102014004679B1 (pt) método preditivo para diagnóstico diferencial de meningites in vitro, uso de proteínas biomarcadoras, e, kit para diagnóstico diferencial de meningites para determinar se um indivíduo possui meningites bacterianas ou meningites virais
CN107356761B (zh) 接骨木凝集素及结合珠蛋白相关蛋白的用途
US20230168256A1 (en) Methods for using protein biomarkers in idiopathic pulmonary fibrosis
CN109061184A (zh) 一种蒿属植物花粉过敏原组合、应用及试剂盒
Taraskin et al. Multiplex analysis of inflammation factors in serum using the MALDI-TOF mass spectrometry method
Dobrokhotov et al. Study of the urine proteome in healthy humans
CN116298233A (zh) 用于诊断双相障碍的生物标记物
POACHANUKOON et al. Shotgun proteomic analysis of saliva identifies potential biomarkers for asthma
Tadros Proteomics may help unleash the mystery of severe COVID-19: A mini review.
CN117054536A (zh) 鉴定或辅助经鉴定成人重症社区获得性肺炎患者的装置和计算机可读存储介质

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20240331

Address after: Room 706, No. 16 Chuangyan Street, Kexin Industrial Park, Huangpu District, Guangzhou City, Guangdong Province, 510555

Patentee after: Guangzhou Aisaiji Biomedical Technology Co.,Ltd.

Country or region after: China

Address before: 100871 No. 5, the Summer Palace Road, Beijing, Haidian District

Patentee before: Peking University

Country or region before: China