CN113717976A - 下调PRMT2基因表达的siRNA及其应用 - Google Patents

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华浩铭
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Abstract

本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及下调PRMT2基因表达的siRNA及其应用，本发明通过研究分析发现PRMT2基因表达与IFN‑β产生呈正相关，具体为，PRMT2基因表达下调导致TLR4/IRF3信号通路受到负向调控，同时发现使用siRNA片段下调PRMT2基因表达时，IFN‑β的产生受到影响，最终抑制内毒素血症所导致的弥散性血管内凝血的发展，减轻内毒素血症所造成的危害，此外，本发明还特别发现了PRMT2siRNA1是上述siRNA片段中最有效的片段；siRNA可用于制备相应的药物，抑制内毒素血症所导致的弥散性血管内凝血。因此，本发明为控制内毒素血症的并发症提供了一种新的治疗策略。

Description

下调PRMT2基因表达的siRNA及其应用
【技术领域】
本发明属于生物医药技术领域，特别涉及下调PRMT2基因表达的siRNA及其应用。
【背景技术】
内毒素血症是由于血中细菌或病灶内细菌释放出大量内毒素至血液，或输入大量内毒素污染的液体引起，分为内源性和外源性两种。急性呼吸道窘迫症、肝胆外科疾病、严重烧伤、其他器官的炎症、脓肿、坏死等外科疾患均可导致内毒素血症，其进一步发展可能引起脓毒性休克、全身炎症反应综合征或多功能器官衰竭的发生而导致死亡。仅全美国全年有30000～100000病人因患内毒素血症得不到有效治疗而死亡。因此，研究内毒素血症及其并发症治疗的相关药物是我们目前研究中亟需解决的技术问题。细菌感染是引起内毒素血症的主要原因，其中革兰氏阴性菌感染占45～60％。细菌感染(内毒素血症)中内毒素可与TLR4结合后激活下游MyD88依赖性的和非依赖性的两条信号通路，使转录因子NF-κB和IRF3活化，导致大量的促炎症细胞因子如IL-6、IL-12、TNFα和I型干扰素如IFN-α/β的产生，从而导致休克、弥散性血管内凝血、细胞损伤和潜在的多器官功能衰竭等并发症，并可以诱发癫痫、昏迷，甚至是死亡。
因此，深入探索内毒素血症病理变化过程中的作用机理将有助于制定新的预防、诊断和治疗策略。
【发明内容】
鉴于上述内容，本申请提供下调PRMT2基因表达的siRNA，针对内毒素血症所产生的IFN-β进行调控，从而为控制内毒素血症的并发症提供了一种新的治疗策略。
为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：
下调PRMT2基因表达的siRNA，所述siRNA的核苷酸序列为SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.2、SEQ ID NO.3中的任意一个
进一步的，所述siRNA的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。
进一步的，所述PRMT2基因表达与IFN-β产生呈正相关。
本发明还包括一种下调PRMT2基因表达的siRNA在抑制经天然免疫TLR4/IRF3信号通路产生IFN-β中的应用。
本发明还包括一种下调PRMT2基因表达的siRNA在抑制经天然免疫TLR4/IRF3信号通路产生IFN-β的方法，所述方法为：在Raw264.7细胞中转染所述siRNA，下调PRMT2基因表达，实现天然免疫TLR4受体的精氨酸甲基化水平降低，最终抑制IFN-β的产生
所述IFN-β促进内毒素血症的并发症即弥散性血管内凝血，进而危及患者的生命。因此，通过下调PPRMT2基因表达可以最终抑制内毒素血症的并发症即弥撒性血管内凝血，减轻内毒素血症所造成的危害。
本发明还包括一种下调PRMT2基因表达的siRNA在制备抑制天然免疫TLR4/IRF3信号通路的药物中的应用。
本发明具有如下有益效果：
本发明通过研究分析发现，PRMT2为天然免疫TLR4受体和转录因子IRF3的精氨酸甲基转移酶，精氨酸甲基化通过TLR4/IRF3信号通路产生IFN-β模型，即PRMT2基因表达与IFN-β产生呈正相关，具体为，PRMT2基因表达下调导致TLR4/IRF3信号通路受到负向调控，同时发现使用siRNA片段下调PRMT2基因表达时，IFN-β的产生受到影响，最终抑制内毒素血症所导致的并发症弥散性血管内凝血的发展，减轻内毒素血症所造成的危害，从而挽救患者的生命，此外，本发明还特别发现了PRMT2 siRNA1是上述siRNA片段中最有效的片段；siRNA可用于制备相应的药物，抑制内毒素血症所导致的弥散性血管内凝血。因此，本发明为控制内毒素血症的并发症--弥散性血管内凝血提供了一种新的治疗策略。
【附图说明】
图1是下调PRMT2基因的siRNA免疫印迹分析表达图；
图2是下调PRMT2基因的siRNA的RT-qPCR技术分析表达情况图；
图3是下调PRMT2后天然免疫信号通路受体TLR4精氨酸甲基化修饰的免疫印迹分析表达图；
图4是图3的定量分析情况图；
图5是下调PRMT2后天然免疫信号通路转录因子IRF3精氨酸甲基化修饰的免疫印迹分析表达图；
图6是图5的定量分析情况图；
图7是PRMT2对转录因子IRF3反应原件活性的影响情况分析图；
图8是下调PRMT2后IFN-β表达检测情况图。
【具体实施方式】
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
实施例1：
人PRMT2 siRNA片段序列
下调PRMT2基因表达的siRNA，所述siRNA的核苷酸序列为：PRMT2 siRNA1：5’GGACUGGGAUCAUCAGUCUDTDT 3’；(SEQ ID NO.1)、PRMT2 siRNA2：5’GUGUCAUCCUGCAGAAUAADTDT 3’；(SEQ ID NO.2)、PRMT2 siRNA3：5’GGUACAUUCCGGCAAACCADTDT 3’；(SEQ ID NO.3)中的任意一个。
实施例2：
下调人PRMT2基因表达的有效siRNA片段的筛选
除实施例1所述的片段之外，另设置一组阴性对照：Control siRNA，核苷酸序列为：5’UUCUCCGAACGUGUCACGUTT 3’。
将上述的Control siRNA、PRMT2 siRNA1、PRMT2 siRNA2、PRMT2 siRNA3片段转染进入小鼠巨噬细胞Raw264.7细胞中，72小时后收集细胞，并做免疫印迹和RT-qPCR技术分析，结果如图1-图2所示。
根据图1-2的结果可知，PRMT2 siRNA1片段的下调效果最显著，因此，选择PRMT2siRNA1进行后续试验。
实施例3-6将进一步研究PRMT2与天然免疫TLR4/IRF3信号通路的调控关系。
实施例3
PRMT2与天然免疫信号通路受体TLR4精氨酸甲基化修饰的调控关系
将Control siRNA作为对照组，PRMT2 siRNA作为实验组，分别转染Raw264.7细胞48小时后用TLR4受体激活剂脂多糖LPS处理与不处理20小时，之后收集细胞并裂解，经免疫沉淀后做免疫印迹分析，结果如图3-4所示。
根据图3-4可知，与对照组细胞相比，实验组细胞经siRNA干扰后PRMT2基因表达明显下调；在对照组内，与未用LPS处理的细胞相比，在采用LPS处理后，TLR4精氨酸甲基化水平显著升高；而在PRMT2基因表达下调组内，LPS处理前后，TLR4精氨酸甲基化水平都显著降低。
结果表明，PRMT2介导了TLR4的精氨酸甲基化修饰，即PRMT2为TLR4的精氨酸甲基转移酶，见图3所示。图3的定量分析见图4所示。
实施例4
PRMT2与天然免疫信号通路转录因子IRF3精氨酸甲基化修饰的调控关系
将Control siRNA作为对照组，PRMT2 siRNA作为实验组，分别转染Raw264.7细胞48小时后用LPS处理与不处理20小时，之后收集细胞并裂解，经免疫沉淀后做免疫印迹分析，结果如图5-6所示。
根据图5-6可知，与对照组细胞相比，实验组细胞经siRNA干扰后PRMT2基因表达明显下调，该组细胞经LPS处理与不处理，IRF3精氨酸甲基化水平都显著降低。
结果表明，PRMT2介导了IRF3的精氨酸甲基化修饰，即PRMT2为IRF3的精氨酸甲基转移酶，见图5所示，图5的定量分析见图6所示。
实施例5
PRMT2与天然免疫信号通路转录因子IRF3反应原件活性的调控关系
将空载体、TLR4分别与PRMT2野生型(PRMT2-WT)、两个突变体(PRMT2-H112Q、PRMT2-M115I)质粒共同转染进入人胚胎肾细胞293T中，之后分别用LPS处理与不处理6个小时，之后再收集细胞并裂解，用双报告基因检测试剂盒分析IRF3反应原件的活性，结果如图7所示。
根据图7可知，与转染空载体质粒细胞相比，转染TLR4质粒并用LPS处理与不处理细胞后，IRF3反应原件活性显著升高，而共同转染TLR4与野生型PRMT2质粒的细胞IRF3反应原件活性比单独转染TLR4质粒细胞更高，而共同转染TLR4与PRMT2两个突变体质粒的细胞IRF3反应原件活性比共同转染TLR4与野生型PRMT2质粒的细胞显著降低。
结果表明，PRMT2增强了转录因子IRF3的反应原件活性，见图7所示。
实施例6
下调PRMT2对IFN-β产生的影响
IFN-β为内毒素血症产生的主要细胞因子之一，也是天然免疫TLR4/IRF3信号通路的终末产物之一，因此，本实施例进一步研究PRMT2对IFN-β产生的影响；
同样将Control siRNA作为对照组，PRMT2 siRNA作为实验组，分别转染Raw264.7细胞，48小时后用LPS处理与不处理20小时，之后收细胞并裂解，经免疫沉淀后做免疫印迹分析，结果如图8所示。
根据图8结果可知，与对照组细胞相比，实验组细胞经siRNA干扰后IFN-β表达明显下调，在对照组内，与未用LPS处理的细胞相比，LPS处理后，IFN-β表达显著升高。
结果表明，下调PRMT2基因表达抑制IFN-β的产生。
综合实施例3-6可知，PRMT2参与调控TLR4/IRF3信号通路，表明了由PRMT2介导的精氨酸甲基化修饰对TLR4/IRF3信号通路产生正向调控作用。
实施例7
应用实施例
根据上述实施例可知，本申请的siRNA干扰片段可以对内毒素血症所产生的IFN-β产生起到抑制作用，因此，可以将其制备成药品用于防治内毒素血症的并发症即弥散性血管内凝血，进而挽救患者的生命。
综上，本申请通过下调PPRMT2基因表达，可以最终抑制内毒素血症的并发症即弥撒性血管内凝血，减轻内毒素血症所造成的危害。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明范围的限制。
序列表
<110> 右江民族医学院
<120> 下调PRMT2基因表达的siRNA及其应用
<141> 2021-09-07
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 23
<212> DNA/RNA
<213> Artificial Sequence
<400> 1
ggacugggau caucagucud tdt 23
<210> 2
<211> 23
<212> DNA/RNA
<213> Artificial Sequence
<400> 2
gugucauccu gcagaauaad tdt 23
<210> 3
<211> 23
<212> DNA/RNA
<213> Artificial Sequence
<400> 3
gguacauucc ggcaaaccad tdt 23

Claims (6)

1.下调PRMT2基因表达的siRNA，其特征在于，所述siRNA的核苷酸序列为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3中的任意一个。
2.根据权利要求1所述的下调PRMT2基因表达的siRNA，其特征在于，所述siRNA的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。
3.根据权利要求1所述的下调PRMT2基因表达的siRNA，其特征在于，所述PRMT2基因表达与IFN-β产生呈正相关。
4.下调PRMT2基因表达的siRNA在抑制经天然免疫TLR4/IRF3信号通路产生IFN-β中的应用。
5.下调PRMT2基因表达的siRNA在抑制经天然免疫TLR4/IRF3信号通路产生IFN-β的方法，其特征在于，所述方法为：在Raw264.7细胞中转染所述siRNA，下调PRMT2基因表达，实现天然免疫TLR4受体的精氨酸甲基化水平降低，最终抑制IFN-β的产生。
6.下调PRMT2基因表达的siRNA在制备抑制天然免疫TLR4/IRF3信号通路的药物中的应用。
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Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JUPING WANG 等: "Arginine methylation by PRMT2 promotes IFN-β production through TLR4/IRF3 signaling pathway.", 《MOL IMMUNOL.》 *
MARYEM A HUSSEIN 等: "LXR-Mediated ABCA1 Expression and Function Are Modulated by High Glucose and PRMT2.", 《PLOS ONE.》 *
明志勇: "PRMT2在肝癌中的表达和干扰PRMT2基因对肝癌细胞系生物学行为的影响", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》 *
王居平: "TLR4乙酰化/甲基化修饰激活对炎症免疫的调节", 《中国博士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113249382A (zh) * 2021-04-12 2021-08-13 右江民族医学院 下调TRIM56基因表达的siRNA及其应用
CN113249382B (zh) * 2021-04-12 2023-05-12 右江民族医学院 下调TRIM56基因表达的siRNA及其应用

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