CN113710663A - Myc家族原癌基因蛋白的调节剂 - Google Patents

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Abstract

本文公开了在调节Myc家族蛋白中具有效力的化合物和组合物。此类化合物和组合物可用于治疗增殖性疾病，例如癌症，或用于治疗需要调节Myc家族蛋白的疾病。本文还公开了使用所述化合物和组合物的方法。

Description

MYC家族原癌基因蛋白的调节剂
相关申请的交叉引用
本申请要求于2019年2月19日提交的美国临时专利申请号62/807,452的优先权，其内容通过引用整体并入本文。
背景技术
MYC原癌基因家族包括三个成员：C-MYC、MYCN和MYCL。这些致癌基因分别编码c-Myc、N-Myc和L-Myc癌蛋白，它们属于“超级转录因子”家族，其调节超过15％的整个基因组的转录。最近对小鼠模型的研究表明，致癌Myc蛋白的调节可能潜在导致癌症治疗剂的发展，因为已经证明即使是Myc的短暂失活也导致肿瘤消退。然而，直接靶向Myc蛋白的药物和治疗剂的开发遇到了两个主要挑战。首先，Myc蛋白缺乏用于结合小分子的明确定义的活性位点，因此对其活性的功能调节或抑制提出了挑战。其次，Myc蛋白主要位于细胞核中，并且用抗体靶向细胞核Myc蛋白可能在技术上具有挑战性。这些挑战催生了间接调节Myc蛋白的策略。
例如，N-Myc的扩增和过表达可导致肿瘤发生。过量的N-Myc与多种肿瘤(例如神经母细胞瘤)有关。MYCN也可以通过体细胞突变在肿瘤中被激活。
C-Myc还可以在各种癌症(例如宫颈癌、结肠癌、乳腺癌、肺癌和胃癌)中组成型表达。这种组成型表达可导致参与细胞增殖的其他基因的表达增加。
在患者中例如N-Myc基因的扩增经常导致不良的健康结果。然而，直接调节Myc蛋白的策略仍然难以捉摸，因为Myc蛋白不容易被靶向。
因此，持续需要用于治疗各种小病痛、疾病和病症(例如癌症)的Myc蛋白的小分子治疗调节剂。
发明内容
本公开内容提供了可用作Myc蛋白调节剂的化合物和组合物，以及使用它们的方法。此外，本公开内容考虑使用公开的化合物和组合物作为Myc蛋白的直接调节剂用于治疗增殖性疾病(例如癌症)，或用于治疗需要调节Myc家族蛋白的疾病。
例如，本公开内容提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物：
Figure BDA0003305115970000021
其中：
W选自N、C-H和C-F；
X选自N-RA、O、S、CH2、C(CH3)2、CF2和C(CH2)2；
Y选自O和N-RB；
Z选自稠合双环烷基、C3-C7单环环烷基、C5-C9桥连环烷基和螺C5-C10双环烷基，其中Z可任选地被一个或两个各自独立地选自卤素、羟基、C1-C4烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)、-C(O)OH和-C(O)-O-C1-4烷基的取代基取代；
R1选自C1-C6烷基、C3-C10环烷基、螺C5-C10双环烷基、杂环基、氰基、卤素和杂芳基；其中C1-C6烷基、C3-C7环烷基、杂环基或杂芳基可以被一个、两个或三个各自独立地选自卤素和C1-C4烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)的取代基取代；
R2选自H、F、-O-甲基、甲基、C3-C7环烷基和杂环基；
R6选自C1-C6-烷基、C3-C10环烷基、杂环基、苯并稠合杂环基、苯基、苄基、杂芳基、C1-3亚烷基-杂芳基、-C(O)-杂芳基和苯氧基；其中R6可以任选地被一个、两个或三个各自独立地选自RP的取代基取代；
R7选自H和C1-C6烷基；其中C1-C6烷基可以任选地被一个、两个或三个各自独立地选自卤素、羟基、氰基、氧基和C1-6烷氧基(任选地被一个、两个或三个各自选自卤素、氰基、羟基和C1-3烷氧基的取代基取代)的取代基取代；
R8选自H和C1-C6-烷基；其中C1-C6烷基可以任选地被一个、两个或三个各自独立地选自卤素、羟基、氰基、氧基和C1-6烷氧基(任选地被一个、两个或三个各自选自卤素、氰基、羟基和C1-3烷氧基的取代基取代)的取代基取代；
其中R7或R8中的至少一个必须是H；
RA选自H、C1-C4烷基、-C(O)-C1-4烷基、S(O)w-C1-4烷基(其中w为0、1或2)、C3-6环烷基和杂环基；其中C1-C4烷基和C3-6环烷基可以任选地被一个、两个或三个各自选自卤素、C1-4烷氧基、-S(O)w-甲基、-S(O)w-乙基(其中w为0、1或2)和杂环基的取代基取代；并且其中杂环基可以任选地被一个或两个各自选自甲基、乙基和卤素的取代基取代；
RB选自H、C1-C4烷基、-C(O)-C1-4烷基、S(O)w-C1-4烷基(其中w为0、1或2)和氰基；其中C1-C4烷基可以任选地被一个、两个或三个氟取代基取代；
RP选自卤素、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基(任选地被一个、两个或三个各自选自卤素、氰基、羟基和C1-3烷氧基的取代基取代)、-C(O)-C1-4烷基、C(O)-O-C1-4烷基、C(O)-O-C3-6环烷基、-C(＝N)-NR’R’、-C(O)-NR’R’、-S(O)w-NR’R’、-S(O)w-C1-4烷基(其中w为0、1或2)、-NR’R’、氧基、苯基、苯氧基、C3-6环烷基、杂环基、-O-杂环基和杂芳基；其中杂环基、杂芳基或苯基可任选地被羟基、C1-6烷基或卤素取代；并且其中C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和C3-6环烷基可各自任选地被一个、两个或三个各自选自卤素、氰基、羟基、杂芳基和NR’R’的取代基取代；和
每次出现的R’独立地选自H、甲基、乙基、杂环基(任选地被C1-3烷基或卤素取代)、苯基和C3-6环烷基，或两个R’连同它们所附接于的氮形成可以任选地被甲基、卤素、氰基、氧基或羟基取代的杂环基。
还提供了由式(III)表示的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物：
Figure BDA0003305115970000041
其中：
R1选自C3-C6环烷基、杂环基和甲基，其中R1任选地被卤素取代；
R6选自饱和的C3-C6单环碳环、饱和或部分不饱和的8-10元双环碳环、具有至少一个选自O、S(O)w(其中w为0、1或2)和NRC的杂原子部分的单环或双环的饱和或部分不饱和杂环、苯基、苯氧基、萘基、单环或双环杂芳基、苄基和-CR7R8-杂芳基；其中：
R6任选地在可用碳上被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、氰基、羟基、氧基、C1-C6-烷基(任选地被一个、两个或三个卤素或羟基取代)、C3-C6-环烷基(任选地被一个、两个或三个卤素或羟基取代)、C1-C6-烷氧基(任选地被一个、两个或三个各自选自卤素、甲氧基和乙氧基的取代基取代)、杂环基(任选地被一个或多个各自选自甲基、乙基、羟基、卤素和氧基的取代基取代)、杂环氧基(任选地被一个或多个各自选自甲基、乙基、卤素、羟基和氧基的取代基取代)、杂芳基(任选地被一个或多个各自选自甲基、乙基、羟基、卤素和氧基的取代基取代)、杂芳氧基(任选地被一个或多个各自选自甲基、乙基、卤素、羟基和氧基的取代基取代)，-NRaRb；-C(O)O(Ra)、-C(O)-N(Rb)(Rc)、-S(O)w-Ra、-NRb-S(O)w-Ra和-S(O)w-N(Rb)(Rc)(其中w为0、1或2)；和其中
如果存在，RC选自氢、C1-C6烷基(任选地被苯基或杂芳基取代；其中苯基或杂芳基任选地被卤素、羟基或甲基取代)、环丙基、C(O)O(Ra)、C(O)Ra和-S(O)w-Ra(其中w为0、1或2)；
RA选自H和甲基；
R7选自H和甲基；
R7选自H和甲基；
其中R7和R8中的至少一个必须是氢；
Ra每次出现时独立地选自氢、C1-C6-烷基、C3-C6-环烷基、杂环基、苯基和杂芳基；其中C1-C6烷基、C3-C6环烷基、杂环基、苯基或杂芳基可以任选地被一个或多个各自独立地选自卤素、氰基、氧基和羟基的取代基取代；
Rb和Rc每次出现时各自独立地选自氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、苯基、苄基和杂芳基；或
Rb和Rc可以与它们所附接于的氮一起形成4-6元杂环基，其可以具有额外的杂原子并且可以任选地被氧基、C1-C3烷基或环丙基取代；
R7和R8各自独立地选自氢、卤素和C1-C3烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)，或R7和R8一起形成氧基；
Y选自O和N-RB；和
RB选自H、C1-C4烷基、-S(O)w-C1-C4烷基(其中w为0、1或2)、-C(O)C1-C4烷基和CN；其中C1-C4烷基任选地被一个、两个或三个卤素取代。
包含如本文所述的公开的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物的药物组合物，例如公开的药物组合物可包括至少一种或多种药学上可接受的承载体、稀释剂、稳定剂、赋形剂、分散剂、悬浮剂和/或增稠剂。本公开内容还提供了制备本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物的方法。
还提供了调节Myc家族蛋白(即，C-Myc、N-Myc、L-Myc或人Myc)的量和活性的方法，例如，Myc家族蛋白的活性可以通过使细胞与有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物接触而在细胞中进行调节。
本公开内容还提供了一种在有需要的受试者中治疗Myc家族蛋白相关疾病的方法，该方法包括施用治疗有效量的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，包括任何实施例、表格或附图中的实施方案。在一些实施方案中，受试者是人受试者并且疾病是增殖性疾病，例如癌症。
发明详述
定义
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。
应理解，本文提供的定义并非旨在相互排斥。因此，一些化学部分可能落入多于一个术语的定义内。
如本文所用，术语“烷氧基”是指与氧附接的直链或支链烷基(烷基-O-)。示例性烷氧基包括但不限于1-6或2-6个碳原子的烷氧基，本文分别称为C1-6烷氧基和C2-6烷氧基。示例性烷氧基包括但不限于甲氧基、乙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、正己氧基、1,2-二甲基丁氧基等。
如本文所用，术语“烷基”是指饱和的直链或支链烃。示例性烷基包括但不限于1-6、1-4或1-3个碳原子的直链或支链烃，本文分别称为C1-6烷基、C1-4烷基和C1-3烷基。示例性烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-2-丁基、2-甲基-1-戊基、3-甲基-1-戊基、4-甲基-1-戊基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、2,2-二甲基-1-丁基、3,3-二甲基-1-丁基、2-乙基-1-丁基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基等。
如本文所用，术语“烯基”是指具有至少一个碳-碳双键的不饱和直链或支链烃。示例性烯基包括但不限于2-6或3-4个碳原子的直链或支链基团，本文分别称为C2-6烯基和C3-4烯基。示例性烯基包括但不限于乙烯基、烯丙基、丁烯基、戊烯基等。
如本文所用，术语“亚烷基”是指双自由基烷基。示例包括亚甲基(-CH2-)、乙烯基(-CH2CH2-)、丙烯基(-CH2CH2CH2-)、2-甲基丙烯基(-CH2-CH(CH3)-CH2-)、己烯基(–(CH2)6–)等。
如本文所用，术语“炔基”是指具有至少一个碳-碳三键的不饱和直链或支链烃。示例性炔基包括但不限于2-6或3-6个碳原子的直链或支链基团，本文分别称为C2-6炔基和C3-6炔基。示例性炔基包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、甲基丙炔基等。
如本文所用，术语“亚烯基”、“亚炔基”、“亚芳基”、“芳基亚烷基”和“烷基亚芳基”分别是指双自由基烯基、炔基、芳基、芳基烷基和烷芳基。
如本文所用，术语“叠氮基”是指基团-N3。
如本文所用，术语“羧基”、“羧基-”或“羧酸酯”是指-CO2H或其盐。
如本文所用，术语“氨基甲酰基”是指基团NH2CO-。
如本文所用，术语“环烷基”或“碳环基团”是指例如3-10、3-6或4-6个碳原子的饱和或部分不饱和烃基，本文分别称为C3-10环烷基，或C4-6环烷基，并且其可以为单环或双环结构，例如4-9或4-6元饱和环结构，包括桥环、稠环或螺环。示例性环烷基包括但不限于金刚烷基、环己基、环戊基、环戊烯基、环丁基、环丙基和茚满基。
如本文所用，基团
Figure BDA0003305115970000071
可互换使用并指环己基。
如本文所用，术语“氰基”和“腈”是指基团-CN。
如本文所用，术语“甲酰基”是指基团-C(O)H。
如本文所用，术语“胍基”是指基团-NHC(＝NH)NH2。
如本文所用，术语“卤基”和“卤素”以常规意义使用以指代氯、溴、氟或碘取代基。
如本文所用，术语“羟基”和“氢氧基”是指基团-OH。
如本文所用，术语“杂芳基”或“杂芳族基团”是指含有一个或多个杂原子例如一到三个杂原子例如氮、氧和硫的单环芳族5-6元环系统。在可能的情况下，所述杂芳环可以通过碳或氮连接到相邻的基团。杂芳环的实例包括但不限于呋喃、噻吩、吡咯、噻唑、噁唑、异噻唑、异噁唑、咪唑、吡唑、三唑、吡啶或嘧啶等。
术语“杂环基”或“杂环基团”是本领域公认的并且是指例如饱和或部分不饱和的4-10元单环或双环结构，或例如4-9或4-6元饱和环结构，包括桥环、稠环或螺环，并且其环结构包含一到三个杂原子，例如氮、氧和硫。在可能的情况下，杂环基环可以通过碳或氮与相邻基团连接。杂环基的实例包括但不限于吡咯烷、哌啶、吗啉、硫代吗啉、哌嗪、氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、四氢呋喃或二氢呋喃等。
如本文所用，术语“硝基”是指基团-NO2。
如本文所用，术语“氧基”是指基团(＝O)或(O)。
如本文所用，术语“异构体”是指包含相同数目和类型的原子或组分，但具有不同结构排列和原子连接性的化合物。
如本文所用，术语“互变异构体”是指两种或更多种结构异构体中的一种，其容易从一种异构形式转化为另一种并且平衡存在。
本公开内容的化合物可包含一个或多个手性中心，因此作为立体异构体存在。本文使用的术语“立体异构体”由所有对映异构体或非对映异构体组成。这些化合物可以由符号“(+)”、“(-)”、“R”或“S”指定，这取决于立体碳原子周围的取代基的构型，但本领域技术人员将认识到结构可以隐含地表示手性中心。本公开内容包括这些化合物的各种立体异构体及其混合物。对映异构体或非对映异构体的混合物在命名法中可指定为“(±)”，但本领域技术人员将认识到结构可隐含地表示手性中心。
本公开内容的化合物可包含一个或多个双键，因此作为由围绕碳-碳双键的取代基的排列产生的几何异构体存在。符号表示可以是如本文所述的单键、双键或三键的键。碳-碳双键周围的取代基被指定为处于“Z”或“E”构型，其中根据IUPAC标准使用术语“Z”和“E”。除非另有说明，否则描述双键的结构包括“E”和“Z”异构体。碳-碳双键周围的取代基可替代地可称为“顺式”或“反式”，其中“顺式”代表双键同一侧的取代基，而“反式”代表双键相对侧的取代基。
本公开内容的化合物可包含碳环或杂环，并因此作为由环周围的取代基的排列产生的几何异构体存在。碳环或杂环周围的取代基可称为“顺式”或“反式”，其中术语“顺式”表示位于环平面同一侧的取代基，而术语“反式”表示位于环平面相对侧的取代基。其中取代基位于环平面的相同侧和相对侧的化合物的混合物被称为“顺式/反式”。
本公开内容的化合物的单个对映异构体和非对映异构体可以从包含不对称或立体中心的市售原料合成制备，或者通过制备外消旋混合物然后通过本领域普通技术人员公知的拆分方法来制备。这些拆分方法的例子有：(1)对映异构体混合物与手性助剂的附接，通过重结晶或色谱法分离得到的非对映异构体混合物，并从助剂中释放出光学纯的产物，(2)使用旋光拆分剂的盐形成，(3)在手性液相色谱柱上直接分离旋光对映异构体的混合物或(4)使用立体选择性化学试剂或酶试剂进行动力学拆分。外消旋混合物也可以通过众所周知的方法(例如手性相液相色谱或在手性溶剂中结晶化合物)拆分成它们的组分对映异构体。立体选择性合成(一种化学或酶促反应，其中单一反应物在新立体中心的产生过程中或先前存在的立体中心的转化过程中形成立体异构体的不等量混合物)是本领域公知的。立体选择性合成包括对映选择性和非对映选择性转化，并且可能涉及手性助剂的使用。例如，参见Carreira和Kvaerno,Classics in Stereoselective Synthesis,Wiley-VCH:Weinheim,2009。
本文公开的化合物可以以与药学上可接受的溶剂(例如水、乙醇等)的溶剂化和非溶剂化形式存在，并且本公开内容旨在包括溶剂化和非溶剂化形式。在一个实施方案中，公开的化合物是无定形的。在一个实施方案中，公开的化合物是单一多晶型物。在另一个实施方案中，公开的化合物是多晶型物的混合物。在另一个实施方案中，公开的化合物呈结晶形式。
本公开内容还包括同位素标记的本公开内容的化合物，除了一个或多个原子被具有不同于在自然界中通常发现的原子质量或质量数的原子质量或质量数的原子取代之外，这些化合物与本文所述的那些相同。可掺入本公开内容的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，例如分别地2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。例如，本公开内容的化合物可以具有一个或多个H原子被氘取代。
某些同位素标记的公开的化合物(例如，用3H和14C标记的那些)可用于化合物和/或底物组织分布测定。氚化(即3H)和碳14(即14C)同位素是特别优选的，因为它们易于制备和可检测。此外，用更重的同位素(例如氘(即2H))取代可以提供由于更大的代谢稳定性(例如，增加的体内半衰期或减少的剂量要求)而产生的某些治疗优势，因此在某些情况下可能是优选的。本公开内容的同位素标记的化合物通常可以通过以下与本文实施例中公开的那些类似的程序通过用同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂来制备。
如本文所用，单数冠词例如“一个”、“一种”和“该”以及描述要素的上下文中的类似指代词应被解释为涵盖单数和复数，除非本文另有说明或显然与上下文相矛盾。除非本文另有说明，否则本文对数值范围的引用仅旨在作为单独提及落入该范围内(包括该范围的上限和下限)的每个单独值的简写方法，并且每个单独的值并入本说明书就像在此单独引用一样。除非本文另有说明或与上下文明显矛盾，否则本文所述的所有方法都可以任何合适的顺序进行。除非另有说明，否则本文提供的任何和所有实例或示例性语言(即“例如”)的使用仅旨在更好地阐明实施方案并且不对权利要求的范围构成限制。
在一些实施方案中，除非另外特别说明，否则在使用术语“约”之前是定量值时，本公开内容还包括特定定量值本身。如本文所用，除非另有说明或推断，否则术语“约”是指从标称值的±10％变化。当提供相对于组合物中组分或材料的量的百分比时，除非另有说明或从上下文理解，该百分比应理解为基于重量的百分比。
在提供分子量而不是例如聚合物的绝对值的情况下，除非另有说明或从上下文中理解，否则分子量应理解为平均分子量。
应当理解，只要本公开内容保持可操作，步骤的顺序或执行某些动作的顺序是不重要的。此外，可以同时进行两个或更多个步骤或动作。
如本文所用，不在两个字母或符号之间的破折号(“-”)是指取代基的键合或附接点。例如，-NH2通过氮原子附接。
如本文所用，术语“活性剂”、“药物”、“药理学活性剂”和“活性药物组分”可互换使用以指化合物或组合物，当施用于受试者时，其通过局部或全身作用或两者的诱导所需药理或生理作用。
如本文所用，术语“前药”是指在体内转化以提供本文所述的化合物或化合物的药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物的化合物。转化可以通过各种机制(即酯酶、酰胺酶、磷酸酶、氧化和/或还原代谢)在不同位置(即，在肠腔中或在进入肠、血液或肝脏时)发生。
如本文所用，术语“调节剂”是指增加或降低靶标水平或靶标功能的化合物或组合物，其可以是但不限于Myc家族蛋白，例如c-Myc、N-Myc、L-Myc和人Myc。
如本文所用，术语“降解剂”是指降低靶标的量或靶标的活性的化合物或组合物。在一些实施方案中，靶标可以是但不限于Myc家族蛋白，包括c-Myc、N-Myc、L-Myc和人Myc。
如本文所用，术语“降解”是指降低靶标的量或靶标的活性的方法或过程。在一些实施方案中，靶标可以是但不限于Myc家族蛋白，包括c-Myc、N-Myc、L-Myc和人Myc。
如本文所用，术语“Myc家族蛋白”是指如本文所述的蛋白质c-Myc、N-Myc或L-Myc中的任一种。在一些实施方案中，Myc蛋白是c-Myc蛋白。在一些实施方案中，Myc蛋白是N-Myc蛋白。在一些实施方案中，Myc蛋白是L-Myc蛋白。在一些实施方案中，Myc蛋白是人c-Myc蛋白。在一些实施方案中，Myc蛋白是人N-Myc蛋白。在一些实施方案中，Myc蛋白是人L-Myc蛋白。在一些实施方案中，Myc家族蛋白是人Myc家族蛋白。
如本文所用，术语“N-Myc”和“MycN”可以互换使用并且指蛋白质“V-Myc髓细胞组织增生病毒相关癌基因，神经母细胞瘤衍生的”并且包括该蛋白质的野生型和突变体形式。在一些实施方案中，MycN是指与Entrez Gene 4613、OMIM 164840、UniProt P04198和RegSeq NP_005369的一个或多个数据库条目相关的蛋白质。
如本文所用，术语“c-Myc”是指蛋白质“V-Myc髓细胞组织增生病毒癌基因”并且包括该蛋白质的野生型和突变体形式。在一些实施方案中，c-Myc是指与Entrez Gene 4609、OMIM 190080、UniProt P01106和RegSeq NP_002458的一个或多个数据库条目相关的蛋白质。
如本文所用，术语“L-Myc”是指蛋白质“V-Myc髓细胞组织增生病毒癌基因同源物，肺癌衍生的”并且包括该蛋白质的野生型和突变体形式。在一些实施方案中，L-Myc是指与Entrez Gene 4610、OMIM164850、UniProt P12524和RegSeq NP_001028253的一个或多个数据库条目相关的蛋白质。
术语“个体”、“宿主”、“受试者”和“患者”在本文中可互换使用，并且是指动物，包括但不限于人和非人灵长类动物，包括猿猴和人；啮齿动物，包括大鼠和小鼠；牛；马；羊；猫科动物；犬科动物；等。“哺乳动物”是指任何哺乳动物物种的一个或多个成员，例如包括犬科动物、猫科动物、马、牛、羊、啮齿类动物等和灵长类动物，即非人灵长类动物和人。非人动物模型即哺乳动物、非人灵长类动物、鼠类、兔类等可用于实验研究。
如本文所用，术语“治疗”、“医治”等是指获得期望的药理学和/或生理学效果，例如减少肿瘤负荷。该作用在完全或部分预防疾病或其症状方面可以是预防性的，和/或在部分或完全治愈疾病和/或可归因于该疾病的不利影响方面可以是治疗性的。如本文所用，“治疗”涵盖对哺乳动物特别是人的疾病的任何治疗，并且包括：(a)预防可能易患该疾病但尚未被诊断为患有它(即，包括可能与原发疾病相关或由原发疾病引起的疾病)的受试者中疾病或疾病症状的发生；(b)抑制疾病，即阻止其发展；和(c)缓解疾病，即引起疾病消退(即减少肿瘤负荷)。在一些实施方案中，本文所述的某些方法治疗与Myc家族蛋白例如c-Myc、N-Myc、L-Myc或人Myc的信号传导途径相关的癌症。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指可用于施用于受试者的盐。应当理解，对于给定的剂量方案，具有抗衡离子的此类盐将具有可接受的哺乳动物安全性。这样的盐也可以衍生自药学上可接受的无机或有机碱和衍生自药学上可接受的无机或有机酸，并且可以包含有机和无机抗衡离子。通过使化合物与碱或酸接触并分离所得盐，可将本文所述化合物的中性形式转化为相应的盐形式。
盐的实例包括但不限于：乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、氟代庚酸盐(flucoheptanoate)、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、palmoate、果胶酸盐、过硫酸盐、苯基丙酸盐、苦味酸盐、三甲基乙酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐等。
盐的其他实例包括与合适的阳离子例如N+、NH4 +和NW4 +(其中W可以是C1-C8烷基)等复合的本公开内容的化合物的阴离子。对于治疗用途，本公开内容的化合物的盐可以是药学上可接受的。然而，非药学上可接受的酸和碱的盐也可用于例如药学上可接受的化合物的制备或纯化。
包含在本发明的组合物中的性质为碱性的化合物能够与各种无机和有机酸形成多种盐。可用于制备此类碱性化合物的药学上可接受的酸加成盐的酸是形成无毒酸加成盐的那些，即含有药学上可接受的阴离子的盐，包括但不限于苹果酸盐、草酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸性磷酸盐、异烟酸盐、醋酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、单宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐(glucaronate)、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(即，1,1'-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐))。
包含在本发明组合物中的性质为酸性的化合物能够与各种药理学上可接受的阳离子形成碱盐。这种盐的实例包括碱金属或碱土金属盐，特别是钙、镁、钠、锂、锌、钾和铁盐。
包含在本发明组合物中的包含碱性或酸性部分的化合物也可以与各种氨基酸形成药学上可接受的盐。本公开内容的化合物可以包含酸性和碱性基团；例如，一个氨基和一个羧酸基团。在这种情况下，该化合物可以作为酸加成盐、两性离子或碱盐存在。
如本文所用，术语“确定”、“测量”、“评估”和“测定”可互换使用并且包括定量和定性确定。
如本文所用，短语“信号传导途径”是指细胞内和细胞外的细胞组分之间的一系列相互作用，其将变化传送到活生物体中的一个或多个其他组分，这可能导致另外组分的随后变化。任选地，由一种信号传导途径传送的变化可以传播到其他信号传导途径组分。细胞组分的实例包括但不限于蛋白质、核酸、肽、脂质和小分子。
如本文所用，术语“有效量”和“治疗有效量”可互换使用，是指当向哺乳动物或其他受试者施用以治疗疾病、病况或病症时，化合物的量足以影响对疾病、病况或病症的此类治疗。“有效量”或“治疗有效量”将取决于化合物、疾病及其严重程度以及待治疗的受试者的年龄、体重等而变化。
如本文所用，术语“药学上可接受的赋形剂”、“药学上可接受的稀释剂”、“药学上可接受的承载体”和“药学上可接受的佐剂”是指可用于制备药物组合物的赋形剂、稀释剂、承载体和佐剂，所述药物组合物通常是安全的、无毒的并且在生物学上或其他方面都不是不合需要的，并且包括对于兽医用途以及人药物用途都是可接受的赋形剂、稀释剂、承载体和佐剂。在说明书和权利要求书中使用的短语“药学上可接受的赋形剂、稀释剂、承载体和佐剂”包括一种和多于一种这样的赋形剂、稀释剂、承载体和佐剂。
如本文所用，术语“药物组合物”意在涵盖适合施用于受试者，例如哺乳动物，尤其是人的组合物。通常，“药物组合物”是无菌的，并且不含能够在受试者内引起不希望的反应的污染物(即，药物组合物中的一种或多种化合物是药物级的)。药物组合物可以设计用于通过多种不同的施用途径(包括口服、口腔、直肠、肠胃外、腹膜内、皮内、气管内、肌肉内、皮下等)向有需要的受试者或患者施用。
通常，提及或描述诸如氢或H的特定元素意在包括该元素的所有同位素。例如，如果R基团定义为包括氢或H，则它还包括氘和氚。因此，包含放射性同位素例如氚、14C、32P和35S的化合物在本技术的范围内。基于本文的公开内容，将此类标记插入到本技术的化合物中的程序对于本领域技术人员来说将是明显的。
除非明确指出具体的立体化学，否则化合物的所有手性、非对映体和外消旋形式都是预期的。因此，本文所述的化合物包括在任何或所有不对称原子处的富集或拆分的光学异构体，如从描述中明显看出的。(R)-对映异构体和(S)-对映异构体的外消旋混合物，以及包含(R)-和(S)-对映异构体的对映体富集的立体异构混合物，以及单独的旋光异构体可以被分离或合成，以便基本上不含它们的对映体或非对映体伴侣，并且这些立体异构体都在本技术的范围内。
本文所述的化合物可以作为溶剂化物尤其是水合物存在，并且除非另有说明，否则所有此类溶剂化物和水合物都是预期的。水合物可在化合物或包含该化合物的组合物的制造过程中形成，或由于化合物的吸湿性，水合物可随时间形成。本技术的化合物也可以作为有机溶剂化物存在，包括DMF、醚和醇溶剂化物等。任何特定溶剂化物的鉴定和制备在合成有机或药物化学的普通技术人员的技能范围内。
如本文所述，本文指的是本发明的化合物、组合物和方法的各种实施方案。所描述的各种实施方案意在提供各种说明性实例并且不应被解释为对替代种类的描述。相反，应当注意，本文提供的各种实施方案的描述可能具有重叠的范围。本文讨论的实施方案仅是举例说明性的，并不意味着限制本技术的范围。
化合物
本公开内容一般涉及调节(例如，降解)MycN和/或MycC并因此可以具有显著的抗肿瘤特性的化合物。所公开的化合物及其药物组合物可用于其中需要调节Myc蛋白的量和活性的多种应用，包括用作有效的抗肿瘤剂。
例如，本文提供的是式(I)化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物:
Figure BDA0003305115970000161
其中：
W选自N、C-H和C-F；
X选自N-RA、O、S、CH2、C(CH3)2、CF2和C(CH2)2；
Y选自O和N-RB；
Z选自稠合双环烷基、C3-C7单环环烷基、C5-C9桥连环烷基和螺C5-C10双环烷基，其中Z可任选地被一个或两个各自独立地选自卤素、羟基、C1-C4烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)、-C(O)OH和-C(O)-O-C1-4烷基的取代基取代；
R1选自C1-C6烷基、C3-C10环烷基、螺C5-C10双环烷基、杂环基、氰基、卤素和杂芳基；其中C1-C6烷基、C3-C7环烷基、杂环基或杂芳基可以被一个、两个或三个各自独立地选自卤素和C1-C4烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)的取代基取代；
R2选自H、F、-O-甲基、甲基、C3-C7环烷基和杂环基；
R6选自C1-C6-烷基、C3-C10环烷基、杂环基、苯并稠合杂环基、苯基、苄基、杂芳基、C1-3亚烷基-杂芳基、-C(O)-杂芳基和苯氧基；其中R6可以任选地被一个、两个或三个各自独立地选自RP的取代基取代；
R7选自H和C1-C6烷基；其中C1-C6烷基可以任选地被一个、两个或三个各自独立地选自卤素、羟基、氰基、氧基和C1-6烷氧基(任选地被一个、两个或三个各自选自卤素、氰基、羟基和C1-3烷氧基的取代基取代)的取代基取代；
R8选自H和C1-C6-烷基；其中C1-C6烷基可以任选地被一个、两个或三个各自独立地选自卤素、羟基、氰基、氧基和C1-6烷氧基(任选地被一个、两个或三个各自选自卤素、氰基、羟基和C1-3烷氧基的取代基取代)的取代基取代；
其中R7或R8中的至少一个必须是H；
RA选自H、C1-C4烷基、-C(O)-C1-4烷基、S(O)w-C1-4烷基(其中w为0、1或2)、C3-6环烷基和杂环基；其中C1-C4烷基和C3-6环烷基可以任选地被一个、两个或三个各自选自卤素、C1-4烷氧基、-S(O)w-甲基、-S(O)w-乙基(其中w为0、1或2)和杂环基的取代基取代；并且其中杂环基可以任选地被一个或两个各自选自甲基、乙基和卤素的取代基取代；
RB选自H、C1-C4烷基、-C(O)-C1-4烷基、S(O)w-C1-4烷基(其中w为0、1或2)和氰基；其中C1-C4烷基可以任选地被一个、两个或三个氟取代基取代；
RP选自卤素、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基(任选地被一个、两个或三个各自选自卤素、氰基、羟基和C1-3烷氧基的取代基取代)、-C(O)-C1-4烷基、C(O)-O-C1-4烷基、C(O)-O-C3-6环烷基、-C(＝N)-NR’R’、-C(O)-NR’R’、-S(O)w-NR’R’、-S(O)w-C1-4烷基(其中w为0、1或2)、-NR’R’、氧基、苯基、苯氧基、C3-6环烷基、杂环基、-O-杂环基和杂芳基；其中杂环基、杂芳基或苯基可任选地被羟基、C1-6烷基或卤素取代；并且其中C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和C3-6环烷基可各自任选地被一个、两个或三个各自选自卤素、氰基、羟基、杂芳基和NR’R’的取代基取代；和
每次出现的R’独立地选自H、甲基、乙基、杂环基(任选地被C1-3烷基或卤素取代)、苯基和C3-6环烷基，或两个R’连同它们所附接于的氮形成可以任选地被甲基、卤素、氰基、氧基或羟基取代的杂环基。
在一些实施方案中，例如，W是N，并且本公开内容的化合物具有式Ia或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物:
Figure BDA0003305115970000181
在另一个实施方案中，Y是O，并且本公开内容的化合物具有式Ib或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物:
Figure BDA0003305115970000182
在一些实施方案中，Y是N-RB，并且本公开内容的化合物具有式Ic或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物:
Figure BDA0003305115970000183
其中：
RB选自H、C1-C4烷基、-SO2-C1-C4-烷基、C(O)C1-C4-烷基、CN和CH2CF3。
在一些实施方案中，R1是5-6元杂环基或C3-6环烷基。例如，R1选自：2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-氧杂环丁烷基、环己基、环丙基、环丁基和环戊基。
在其他实施方案中，R1选自例如甲基和乙基。
在一个示例性实施方案中，Z选自环己基、环戊基和环丁基。
在一些实施方案中，Z是C5-C9桥连的环烷基。
在一些实施方案中，Z是螺C5-C10双环烷基。
在一些实施方案中，Z是稠合的双环烷基。
在一些实施方案中，Z选自：
Figure BDA0003305115970000191
或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：
R3选自H、C1-C4-烷基、CO2H和-C(O)-O-C1-4烷基；
R4是H或C1-C4-烷基；或者
R3和R4一起形成-CH2-或-CH2CH2-。
例如，Z选自：
Figure BDA0003305115970000192
本文还公开了由式II表示的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物:
Figure BDA0003305115970000193
其中：
R3选自H、C1-C4烷基、CO2H和-C(O)-O-C1-4烷基；和
R4选自H或C1-C4烷基。
示例性公开的化合物可由式IIa表示：
Figure BDA0003305115970000201
或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：
R3选自H、C1-C4-烷基、CO2H和-C(O)-O-C1-4烷基；和
R4选自H和C1-C4-烷基；
RB选自H、C1-C4烷基、-SO2-C1-C4-烷基、C(O)C1-C4-烷基、CN和CH2CF3。
在一些实施方案中，R6选自8-10元双环环烷基和8-10元双环杂环基。
在一些实施方案中，R6选自单环或桥连C3-6环烷基、单环或桥连杂环基、双环或稠合杂环基和杂芳基。
在一些实施方案中，R6选自：茚满基、环己基、环丁基和环戊基，其中R6任选地被一个或两个各自选自以下的取代基取代：氰基、卤素、苯基、-C(＝N)-NR’R’、C1-4烷基(任选地被甲氧基或被一个、两个或三个氟原子取代)、C1-4烷氧基(任选地被一个、两个或三个氟原子取代)、S(O)2-CH3；环丙基、环丁基、-O-杂环基、杂环基和杂芳基。例如，R6是茚满基。
在一些实施方案中，R6选自杂环基、苯基和杂芳基。
在一些实施方案中，R6由下式表示：
Figure BDA0003305115970000202
其中R66选自氢、氰基、杂环基、杂芳基、-C(＝N)-R’R’；和S(O)2-CH3。
例如，R6选自：
Figure BDA0003305115970000211
在其他实施方案中，R6由下式表示：
Figure BDA0003305115970000212
或者
Figure BDA0003305115970000213
其中R77选自氢、C1-4烷基(任选地被一个、两个或三个氟原子取代)、C1-4烷氧基(任选地被甲氧基或被一个、两个或三个氟原子取代)、杂环基和S(O)2-C1-4烷基。例如，R77选自-CF3、-OCH3、-OCHF2、-SO2CH3和-OCH2CH2OCH3。例如，R6选自：
Figure BDA0003305115970000214
在进一步的实施方案中，R6选自：
Figure BDA0003305115970000215
在其他实施方案中，R6选自：
Figure BDA0003305115970000221
Figure BDA0003305115970000231
Figure BDA0003305115970000241
或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。
在一些实施方案中，X是N-H。在其他实施方案中，X是O。
在一些实施方案中，R7是H并且R8是甲基。在其他实施方案中，R7为甲基且R8为H。在进一步的实施方案中，R7和R8各自为H。
本文进一步公开了由式(III)表示的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物:
Figure BDA0003305115970000242
其中：
R1选自C3-C6环烷基、杂环基和甲基，其中R1任选地被卤素取代；
R6选自饱和的C3-C6单环碳环、饱和或部分不饱和的8-10元双环碳环、具有至少一个选自O、S(O)w(其中w为0、1或2)和NRC的杂原子部分的单环或双环的饱和或部分不饱和杂环、苯基、苯氧基、萘基、单环或双环杂芳基、苄基和-CR7R8-杂芳基；其中：
R6任选地在可用碳上被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、氰基、羟基、氧基、C1-C6-烷基(任选地被一个、两个或三个卤素或羟基取代)、C3-C6-环烷基(任选地被一个、两个或三个卤素或羟基取代)、C1-C6-烷氧基(任选地被一个、两个或三个各自选自卤素、甲氧基和乙氧基的取代基取代)、杂环基(任选地被一个或多个各自选自甲基、乙基、羟基、卤素和氧基的取代基取代)、杂环氧基(任选地被一个或多个各自选自甲基、乙基、卤素、羟基和氧基的取代基取代)、杂芳基(任选地被一个或多个各自选自甲基、乙基、羟基、卤素和氧基的取代基取代)、杂芳氧基(任选地被一个或多个各自选自甲基、乙基、卤素、羟基和氧基的取代基取代)、-NRaRb；-C(O)O(Ra)、-C(O)-N(Rb)(Rc)、-S(O)w-Ra、-NRb-S(O)w-Ra和-S(O)w-N(Rb)(Rc)(其中w为0、1或2)；和其中
如果存在，RC选自氢、C1-C6烷基(任选地被苯基或杂芳基取代；其中苯基或杂芳基任选地被卤素、羟基或甲基取代)、环丙基、C(O)O(Ra)、C(O)Ra和-S(O)w-Ra(其中w为0、1或2)；
RA选自H和甲基；
R7选自H和甲基；
R7选自H和甲基；
其中R7和R8中的至少一个必须是氢；
Ra每次出现时独立地选自氢、C1-C6-烷基、C3-C6-环烷基、杂环基、苯基和杂芳基；其中C1-C6烷基、C3-C6环烷基、杂环基、苯基或杂芳基可以任选地被一个或多个各自独立地选自卤素、氰基、氧基和羟基的取代基取代；
Rb和Rc每次出现时各自独立地选自氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、苯基、苄基和杂芳基；或
Rb和Rc可以与它们所附接于的氮一起形成4-6元杂环基，其可以具有额外的杂原子并且可以任选地被氧基、C1-C3烷基或环丙基取代；
R7和R8各自独立地选自氢、卤素和C1-C3烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)，或R7和R8一起形成氧基；
Y选自O和N-RB；和
RB选自H、C1-C4烷基、-S(O)w-C1-C4烷基(其中w为0、1或2)、-C(O)C1-C4烷基和CN；其中C1-C4烷基任选地被一个、两个或三个卤素取代。
在一些实施方案中，R6是部分不饱和的双环碳环。例如，R6由下式表示：
Figure BDA0003305115970000261
其中R66选自氰基、杂环基、杂环氧基、C1-C3-烷基(任选地被卤素取代)、-C(＝N)-RbRc；和-S(O)2-C1-C3-烷基。
在其他实施方案中，R6是具有杂原子部分NRC的杂环。例如，R6由下式表示
Figure BDA0003305115970000262
或者
Figure BDA0003305115970000263
其中RC选自氢、C1-C3-烷基(任选地被苯基或杂芳基取代；其中苯基或杂芳基任选地被卤素、羟基或甲基取代)、C3-C6-环烷基、C(O)O(Ra)、C(O)Ra和-S(O)w-Ra。
在一些实施方案中，RC是C1-C6烷基、C3-C8-环烷基、C3-C8-杂环烷基、-CH2-杂芳基、-C(O)-C1-C6-烷基、-C(O)-杂芳基、-C(O)-C3-C8-环烷基和-C(O)-C3-C8-杂环烷基。
在一些实施方案中，R6选自：茚满基、环己基、环丁基和环戊基，其中R6任选地被一个或两个各自选自以下的取代基取代：氰基、卤素、苯基、-C(＝N)-NR’R’、C1-4烷基(任选地被一个、两个或三个氟取代)、C1-4烷氧基(任选地被甲氧基或一个、两个或三个氟取代)、S(O)2-CH3；环丙基、环丁基、-O-杂环基和杂环基。
例如，R6由下式表示：
Figure BDA0003305115970000271
或者
Figure BDA0003305115970000272
其中R77选自氢、C1-4烷基(任选地被一个、两个或三个氟原子取代)、C1-4烷氧基(任选地被甲氧基或被一个、两个或三个氟原子取代)、杂环基和S(O)2-C1-4烷基。例如，R77选自-CF3、-OCH3、OCHF2、-SO2CH3、-OCH2CH2OCH3。例如，R6选自：
Figure BDA0003305115970000273
例如，预期的化合物可以选自：
Figure BDA0003305115970000281
Figure BDA0003305115970000291
Figure BDA0003305115970000301
Figure BDA0003305115970000311
Figure BDA0003305115970000321
Figure BDA0003305115970000331
Figure BDA0003305115970000341
Figure BDA0003305115970000351
及其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。
本文所述公开的化合物可以以盐形式存在，并且所述化合物的盐形式是药学上可接受的盐，和/或本文所述化合物可以以前药形式存在。可以例如根据Rautio等人(“Prodrugs:design and clinical applications”,Nature Reviews Drug Discovery 7,255-270(February 2008))描述的策略和方法制备主题化合物的任何方便的前药形式。本文所述的化合物可以以溶剂化物形式存在。
在一些实施方案中，化合物或其前药形式以药学上可接受的盐的形式提供。含有胺官能团或含氮杂芳基的化合物在性质上可以是碱性的并且可以与任意数量的无机和有机酸反应以形成相应的药学上可接受的盐。通常用于形成此类盐的无机酸包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸和磷酸，以及相关的无机酸。通常用于形成此类盐的有机酸包括对甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、对溴苯磺酸、富马酸、马来酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸和乙酸，以及相关的有机酸。因此，这样的药学上可接受的盐包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、醋酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、癸酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、苯甲酸甲酯、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二甲酸盐、磺酸酯、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、β-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、扁桃酸盐、马尿酸盐、葡萄糖酸盐、乳糖醛酸盐和相关的盐。
应理解，盐、溶剂化物、水合物、前药和立体异构体的所有变体均意在被本公开内容涵盖。
药物组合物和制剂
本文所述的化合物、前药和组合物可用作向有需要的受试者施用的药物组合物。
因此，提供了药物组合物，其可包含至少一种本文所述的化合物、其药学上可接受的盐或其前药，以及至少一种药学上可接受的承载体、稀释剂、稳定剂、赋形剂、分散剂、悬浮剂或增稠剂。例如，所公开的药物组合物可以包括一种或多种本文所述的所公开的化合物、药学上可接受的盐或前药。预期的组合物可以包括治疗有效量的化合物、其药学上可接受的盐或其前药，例如，公开的药物组合物可以配制用于肠胃外施用至有需要的受试者，配制用于静脉内施用至有需要的受试者，或配制用于皮下施用至有需要的受试者。
治疗方法
如上所述，本公开内容的实施方案包括本文所述的化合物、前药和药物组合物在有需要的受试者中治疗与Myc蛋白相关的增殖性疾病的用途。此类增殖性疾病包括癌症，例如，选自以下的癌症：头颈癌、神经系统癌、脑癌、神经母细胞瘤、肺癌/纵隔癌、乳腺癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆道癌、胰腺癌、小肠癌、大肠癌、结直肠癌、妇科癌、泌尿生殖系统癌、卵巢癌、甲状腺癌、肾上腺癌、皮肤癌、黑色素瘤、骨肉瘤、软组织肉瘤、小儿恶性肿瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、骨髓瘤、白血病和未知原发部位的转移瘤。
在一些实施方案中，预期的治疗方法包括治疗癌症，其是与Myc蛋白相关的癌症，例如，其中Myc蛋白选自N-Myc蛋白、c-MYc蛋白、L-Myc蛋白、人N-Myc蛋白、人c-Myc蛋白和人L-Myc蛋白。
例如，本文提供治疗选自神经母细胞瘤、小细胞肺癌、乳腺癌或造血癌的癌症的方法。
在一些实施方案中，公开的治疗癌症的方法进一步包括第二疗法，其中第二疗法是抗肿瘤疗法，例如，预期的方法可以进一步包括施用抗肿瘤疗法，例如一种或多种选自以下的试剂：DNA拓扑异构酶I或II抑制剂、DNA损伤剂、免疫治疗剂(例如抗体、细胞因子、免疫检查点抑制剂或癌症疫苗)、抗代谢物或胸苷酸合酶(TS)抑制剂、微管靶向剂、电离辐射、有丝分裂调节剂或有丝分裂检查点调节剂的抑制剂、DNA损伤信号转导剂的抑制剂和DNA损伤修复酶的抑制剂。例如，另外的抗肿瘤疗法可以选自免疫疗法(例如，免疫肿瘤疗法)、放射疗法、光动力疗法、基因定向酶前药疗法(GDEPT)、抗体定向酶前药疗法(ADEPT)、基因治疗和控制饮食。
本公开内容还考虑了本文所述的化合物、前药和药物组合物用于调节Myc蛋白的量和活性(在体外或在患者中)的用途，其中Myc蛋白可以是例如N-Myc蛋白、c-MYc蛋白、L-Myc蛋白、人N-Myc蛋白、人c-Myc蛋白和/或人L-Myc蛋白。
例如，本公开内容提供了一种调节Myc蛋白的量(例如，浓度)和/或活性(例如降解Myc蛋白，或调节Myc蛋白的降解速率)的方法，例如包括使Myc蛋白与有效量的本文所述化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物接触，包括实施方案或来自任何实施例、表格或附图。
考虑的方法包括调节Myc家族蛋白的蛋白质-蛋白质相互作用的方法，或减少Myc蛋白的量和减少活性水平的方法。
公开的调节Myc蛋白的量和活性的方法可以包括共同施用本文所述的化合物或其药学上可接受的盐和治疗有效量的第二药剂，例如治疗剂。
实施例
以下是用于实施本公开内容的具体实施方案的实施例。提供这些实施例仅用于举例说明目的，并不旨在以任何方式限制本公开内容的范围。已努力确保关于所用数字(即数量、温度等)的准确性，但当然应该允许一些实验误差和偏差。
一般实验
最终化合物通过HPLC/MS分析确认并且确定为按重量计>90％纯。1H和13C NMR光谱记录在CDCl3(残留内标CHCl3＝δ7.26)、DMSO-d6(残留内标CD3SOCD2H＝δ2.50)、甲醇-d4(残留内标CD2HOD＝δ3.20)或丙酮-d6(残留内标CD3COCD2H＝δ2.05)。报告的化学位移(δ)以百万分率(ppm)给出，并且耦合常数(J)以赫兹(Hz)为单位。自旋多重性报告为s＝单峰，bs＝宽单峰，bm＝宽多重峰，d＝双峰，t＝三重峰，q＝四重峰，p＝五重峰，dd＝双峰的双峰，ddd＝双峰的双峰的双峰，dt＝三重峰的双峰，td＝双峰的三重峰，tt＝三重峰的三重峰，以及m＝多重峰。
HPLC-MS分析用梯度洗脱进行。中压液相色谱(MPLC)使用硅胶柱在正相和反相中进行。应理解，报告为盐形式(例如，TFA盐)的化合物可能具有或不具有1:1化学计量比，和/或例如报告的效力浓度或其他测定结果可能例如稍高或稍低。
实施例1：中间体E的合成
合成方案1：
Figure BDA0003305115970000391
步骤1：合成化合物A-3-环戊基-3-氧代丙腈
在65℃下向氢化钠(37g，937mmol)在THF(600mL)中的浆液滴加环戊烷羧酸甲酯(60g，468mmol)和乙腈(38g，937mmol)的混合物。将反应在65℃搅拌16小时。在原料完全消耗后，通过TLC监测反应进程，将反应混合物倒入冰中并用乙醚萃取。将水层酸化至pH＝4-5，然后用乙醚萃取。有机层在无水Na2SO4上干燥、过滤并浓缩溶剂以得到化合物A-3-环戊基-3-氧代丙腈(59g，产率92.18％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ4.11(s,2H),3.00-2.92(m,1H),1.81-1.77(m,2H),1.76–1.73(m,2H),1.70-1.65(m,4H)。
步骤2：合成化合物B-5-环戊基-1H-吡唑-3-胺
向乙醇(600mL)中的3-环戊基-3-氧代丙腈(59g，430mmol)的搅拌溶液添加水合肼(42mL，861mmol)。将反应混合物加热至80℃保持2小时。在原料完全消耗后，通过TLC监测反应进程，将反应混合物在减压下浓缩，粗制品用乙醚洗涤，得到化合物B-5-环戊基-1H-吡唑-3-胺(60g，92.30％的产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ5.17(s,1H),2.87-2.83(m,1H),1.92-1.90(m,2H),1.89–1.47(m,9H)。LC纯度:98.45％；m/z:152.2[M+H]+(分子式C8H13N3,计算的分子量151.21)。
步骤3：合成化合物C-2-氯-N-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺
向DMSO(600mL)中的5-环戊基-1H-吡唑-3-胺(60g,397mmol)的搅拌溶液添加DIPEA(101mL,595mmol)和2,4-二氯嘧啶(71g，476mmol)。将反应加热至60℃，保持16小时。在原料完全消耗后，通过TLC监测反应进程，用冰水淬灭反应混合物，过滤固体，用二氯甲烷洗涤并真空干燥，得到化合物C-2-氯-N-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(60g，57.69％产率)。LC纯度:93.55％；m/z:264.1[M+H]+(分子式C12H14ClN5,计算的分子量263.73)。
步骤4：合成化合物D-叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯
向密封管中的无水DMSO(75mL)中的2-氯-N-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(7.0g，26.315mmol)的搅拌溶液添加DIPEA(9.3mL,52.63mmol)。将反应混合物冷却至0℃并添加叔丁基((1R,4R)-4-氨基环己基)氨基甲酸酯(8.6g，39.572mmol)。将反应混合物加热至140℃持续16小时。通过TLC监测反应，在原料完全消耗后，将反应混合物用冰水淬灭并用乙酸乙酯萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。粗制品通过Biotage-isolera使用硅胶(230-400目)以0-16％二氯甲烷/甲醇的梯度洗脱纯化，得到化合物D-叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(6.0g，51％产率)。LC纯度:90.25％；m/z:442.3[M+H]+(分子式C27H35N7O2,计算的分子量441.0)。
步骤5：合成中间体E-N2-((1R,4R)-4-(氨基环己基)-N4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基))嘧啶-2,4-二胺
无水DCM(60mL)中的叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(6.0g,13.605mmol)的搅拌溶液。将反应混合物冷却至0℃并添加二噁烷中的HCl(60mL，4M溶液)。使反应在室温下搅拌3小时。在原料完全消耗后通过TLC监测反应进程，将所得混合物浓缩并与石油醚一起研磨并在高真空下浓缩以产生N2-((1R,4R)-4-(氨基环己基)-N4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基))嘧啶-2,4-二胺作为HCl盐(5.0g,定量产率)。LC纯度:99.78％；m/z:342.3[M+H]+(分子式C28H27N7,计算的分子量341.0)。
实施例2：化合物39的合成
合成方案2：
Figure BDA0003305115970000411
向中间体E-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(0.25g，0.73mmol)在冷却到0℃的无水DMF(1mL)中的搅拌溶液滴加三乙胺(0.37mL，3.6mmol)和1-异氰酸基-3-(三氟甲基)苯(0.137mL，0.73mmol)。将反应在室温下搅拌4小时(反应混合物通过TLC监测)。反应完成后，反应混合物用二氯甲烷稀释，用水、盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥并浓缩，得到粗产物。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物以产生1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-环己基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲(25mg，8.9％产率)作为TFA盐。LC纯度:99.19％；m/z:529.3[M+H]+(分子式C26H31F3N8O,计算的分子量528.61)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.86(s,1H),7.69(d,J＝7.16Hz,1H),7.50(d,J＝7.96Hz,1H),7.42(t,J＝7.8Hz,1H),7.25(d,J＝7.64Hz,1H),6.51(bs,1H),6.45(bs,1H),3.93-3.91(m,1H),3.61(t,J＝11.56Hz,1H),3.14-3.12(m,1H),2.16-2.15(m,6H),1.84-1.73(m,6H),1.59-1.54(m,2H),1.44-1.38(m,3H)。
实施例3：化合物40的合成
合成方案3：
Figure BDA0003305115970000421
步骤1:合成化合物F-叔丁基((1S,4S)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯
向化合物C-2-氯-N-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(0.2g，0.76mmol)和叔丁基((1S,4S)-4-氨基环己基)氨基甲酸酯(0.152g，0.74mmol)在20mL微波小瓶中的正丁醇(2mL)中的混合物添加DIPEA(0.7mL，3.8mmol)。将反应混合物在160℃下进行微波处理8小时。通过TLC监测反应进程，在原料完全消耗后，将反应混合物冷却至室温并浓缩以除去正丁醇。所得残余物用水稀释并用二氯甲烷萃取。合并的有机层在无水Na2SO4上干燥并在减压下浓缩以得到化合物F-叔丁基((1S,4S)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.2g，粗制品)。LC纯度:45.76％；m/z:442.2[M+H]+(分子式C23H35N7O2,计算的分子量441.58)。
步骤2：合成中间体G-N2-((1S,4S)-4-氨基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺
向化合物F-叔丁基((1S,4S)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.2g，0.45mmol)在二氯甲烷(2mL)中的冷却的0℃溶液添加二噁烷中的HCl(2mL，4M溶液)。使反应在室温下搅拌3小时。通过TLC监测反应混合物，并且原料被消耗。将所得混合物浓缩以获得中间体G-N2-((1S,4S)-4-(氨基环己基)-N4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基))嘧啶-2,4-二胺(180mg，定量产率)作为HCl盐。LC纯度:51.85％；m/z:342.2[M+H]+(分子式C18H27N7,计算的分子量341.46)。
步骤3：合成化合物40-1-((1S,4S)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲
将中间体G-N2-((1s,4s)-4-氨基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(0.18g，0.527mmol)在无水DMF(2mL)中的搅拌溶液冷却至0℃并滴加三乙胺(0.268mL,2.63mmol)和1-异氰酸基-3-(三氟甲基)苯(0.098mL,0.527mmol)。反应混合物在室温下搅拌4小时(反应混合物通过TLC监测)。反应完成后，反应混合物用二氯甲烷稀释，用水、盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥并浓缩，得到粗产物。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物，得到化合物40-1-((1S,4S)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲(25mg，8.9％产率)作为TFA盐。LC纯度:95.26％；m/z:529.3[M+H]+(分子式C26H31F3N8O,计算的分子量528.26)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.82(s,1H),7.70(s,1H),7.51(d,J＝8.04Hz,1H),7.41(t,J＝7.6Hz,1H),7.24(d,J＝7.04Hz 1H),6.50(bs,1H),6.31(bs,1H),4.04-4.02(m,1H),3.84(s,1H),3.15(d,J＝7.76Hz,1H),2.12-2.10(m,2H),1.93-1.71(s,14H)。
实施例4：中间体H的合成
合成方案4：
Figure BDA0003305115970000441
向无水DMF(5mL)中的中间体E-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(0.5g,1.4mmol)的搅拌溶液添加三乙胺(0.62mL，0.439mmol)。将反应混合物在0℃搅拌15分钟。然后滴加氯甲酸苯酯(0.22mL，0.146mmol)。将反应在0℃-10℃下搅拌1小时。在原料完全消耗后通过TLC监测反应进程，用水稀释反应混合物并用乙酸乙酯萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩得到粗制品，其用石油醚研磨以得到中间体H-苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.3g，67.59％产率)。LC纯度:19.61％；m/z:462.3[M+H]+(分子式C25H31N7O2,计算的分子量461.57)。
实施例5：化合物72的合成
合成方案5
Figure BDA0003305115970000442
向无水DMF(6.0mL)中的中间体H-苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(300mg，0.651mmol)的搅拌溶液添加三乙胺(0.27mL，1.952mmol)。将反应混合物在70℃搅拌，搅拌2小时后，将反应混合物冷却至室温并添加1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-胺(124mg，0.651mmol)并加热至95℃持续16小时。反应完成后，反应混合物用水稀释，用二氯甲烷中的5％甲醇萃取。合并的有机层在无水Na2SO4上干燥，在减压下浓缩，得到粗物质。通过制备型HPLC纯化粗物质以获得化合物671-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-环己基)-3-(1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-基)脲(80mg，22％产率)作为TFA盐。LC纯度:96.17％；m/z:557.3[M-H]+(分子式C30H42N10O,计算的分子量558.740)。1H NMR(400 MHz,CD3OD):δ8.70(s,1H),7.94-7.90(m,1H),7.769(d,J＝7.2 Hz,1H),7.51-7.46(m,2H),6.51-6.29(m,2H),4.49(s,2H),3.84-3.82(m,2H),3.58-3.36(m,3H),3.32-3.25(m,2H),3.18-3.14(m,1H),2.18-2.05(m,8H),1.86-1.73(m,8H),1.82-1.76(m,2H),1.53-1.47(m,2H),1.37-1.30(m,2H)。
实施例6：化合物61的合成
合成方案6
Figure BDA0003305115970000451
向无水DMF(4mL)中的苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(200mg，0.433mmol)的搅拌溶液添加三乙胺(0.18mL，1.30mmol)。将反应混合物加热至85℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温并添加8-环丙基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-胺(72mg，0.433mmol)。将反应混合物加热至95℃，保持16小时。通过TLC监测反应进程，在原料完全消耗后，将反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。粗化合物通过反相制备型HPLC纯化，得到化合物61-1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(8-环丙基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)脲(25mg，10.8％产率)作为TFA盐。LC纯度:99.94％；m/z:532.4[M-H]+(分子式C29H43N9O,计算的分子量:533.73)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.74(s,1H),6.24(bs,2H),4.05-4.01(m,1H),3.99-3.76(m,3H),3.51-3.47(m,1H),3.11-3.07(t,J＝7.2Hz,1H),2.70-2.62(m,1H),2.33-2.25(m,3H),2.09-1.98(m,9H),1.82-1.70(m,7H),1.52-1.32(m,4H),1.06-1.00(m,4H)。
实施例7：化合物11的合成
合成方案7
Figure BDA0003305115970000461
向无水DMF(5.0mL)中的化合物I-苯基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(500mg，1.466mmol)的搅拌溶液添加三乙胺(1.01mL,7.331mmol)并将所得反应混合物在70℃下搅拌。搅拌2小时后，将反应混合物冷却至室温，添加中间体E-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(448mg，1.466mmol)并将所得混合物加热至95℃。搅拌16小时后，反应混合物用水(20mL)稀释并用二氯甲烷中的5％甲醇(2x30mL)萃取。合并的有机层在无水Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩以提供粗物质。粗物质通过制备型HPLC纯化，得到化合物11-1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲(200mg，26％)作为TFA盐。LC纯度:99.8％；m/z:526.4[M+H]+(分子式C29H35N9O,计算的分子量525.66)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.13(s,1H),10.80(s,1H),8.02(s,1H),7.79(d,J＝7.2Hz,1H),7.63(s,1H),7.56(d,J＝7.6Hz,1H),7.41(d,J＝8.8Hz,1H),6.42-6.36(m,2H),6.01(s,1H),5.53(s,1H),4.38-4.37(m,1H),3.80-3.72(m,1H),3.49-3.40(m,1H),3.25-3.17(m,2H),3.09-3.06(m,1H),2.83-2.75(m,2H),2.04-1.93(m,6H),1.73-1.59(m,6H),1.44-1.38(m,2H),1.38-1.29(m,2H)。
实施例8：化合物6的合成
合成方案8
Figure BDA0003305115970000471
步骤1：合成化合物J-2-氯-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺
2,4-二氯嘧啶(0.5g,3.3mmol)、3-氯-5-甲基-1H-吡唑(0.355g,3.6mmol)和DIPEA(0.6mL,3.3mmol)在DMSO(5mL)中的混合物在60℃下搅拌16小时。通过TLC监测反应，消耗原料。将反应混合物冷却至室温，添加水并沉淀出固体。过滤固体，用石油醚洗涤并真空干燥，得到化合物J-2-氯-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(0.596g，90％产率)。LC纯度:96.69％；m/z:210.2[M+H]+(分子式C8H8ClN5,计算的分子量209.64)。
步骤2：合成化合物K-叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯
化合物J-2-氯-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(0.5g，2.38mmol)、叔丁基((1R,4R)-4-氨基环己基)氨基甲酸酯(0.511g，2.39mmol)和DIPEA(2.14mL，11.9mmol)在DMSO(5mL)中的混合物在120℃下搅拌16小时。通过LCMS监测反应，消耗原料。将反应混合物冷却至室温，添加水并用二氯甲烷萃取。有机层在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。粗化合物通过硅胶柱色谱以石油醚中50-100％乙酸乙酯的梯度洗脱纯化，得到化合物K-叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.45g，48.6％产率)。LC纯度:58.18％；m/z:388.2[M+H]+(分子式C19H29N7O2,计算的分子量387.49)。
步骤3：合成中间体L-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺
向化合物K-叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.45g，1.16mmol)在无水二氯甲烷(2mL)中的混合物添加二噁烷中的HCl(2mL，4M溶液)。将反应混合物在室温搅拌3小时。通过TLC分析监测反应进程。浓缩反应混合物以获得纯中间体L-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(0.3g，定量产率)。LC纯度:70.67％；m/z:288.2[M+H]+(分子式C14H21N7,计算的分子量287.37)。
步骤4：合成化合物6-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺
向化合物K叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.45g，1.16mmol)在无水二氯甲烷(2mL)中的混合物添加二噁烷中的HCl(2mL，4M溶液)。将反应混合物在室温搅拌3小时。通过TLC分析监测反应进程。将反应混合物浓缩以获得纯化合物6-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(0.3g，定量产率)。LC纯度:70.67％；m/z:288.2[M+H]+(分子式C14H21N7,计算的分子量287.37)。
实施例9：化合物20的合成
合成方案9
Figure BDA0003305115970000491
步骤1：合成化合物L-(Z)-2-(3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲基)-N'-羟基-2,3-二氢-1H-茚-5-羧酰亚胺酰胺(carboximidamide)
向乙醇(3mL)中的化合物111-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲(150mg，0.285mmol)的搅拌溶液在0℃添加羟胺盐酸盐(0.15mL，2.198mmol)。反应回流16小时。在原料完全消耗之后通过TLC监测反应进程，在减压下蒸发溶剂并向残余物添加水。混合物用二氯甲烷萃取，有机萃取物在减压下蒸发。残余物通过柱色谱法Biotage isolera 230-400硅胶用石油醚中0-85％乙酸乙酯的梯度洗脱纯化，得到化合物L-(Z)-2-(3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲基)-N'-羟基-2,3-二氢-1H-茚-5-羧酰亚胺酰胺(130mg，81％)。LC纯度:65.18％；m/z:559.3[M+H]+(分子式C29H38N10O2,计算的分子量558.69)。
步骤2：合成化合物K-1-((1R,4R)-4-((4-((1-乙酰-5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(5-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)-2,3-二氢-1H-茚-2-基)脲
化合物L-(Z)-2-(3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2)-基)氨基)环己基)脲基)-N'-羟基-2,3-二氢-1H-茚-5-羧酰亚胺酰胺(130mg，1.465mmol)和乙酰氯(1.3mL,10vol)的混合物在55℃加热16小时。在原料完全消耗后通过TLC监测反应进程，用水稀释反应混合物，用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩，得到粗化合物M-1-((1R,4R)-4-((4-((1-乙酰基-5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(5-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)-2,3-二氢-1H-茚-2-基)脲(120mg，粗制品)。LC纯度:15.2％；m/z:526.3[M-100]+(分子式C33H40N10O3,计算的分子量624.75)。
步骤3：合成化合物20-1-((1S,4S)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲
向化合物M-1-((1R,4R)-4-((4-((1-乙酰基-5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(5-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)-2,3-二氢-1H-茚-2-基)脲(120mg，0.192mmol)在甲醇(5mL)中的溶液在室温下添加碳酸钾(80mg，0.576mmol)。将反应加热至60℃，保持12小时。在原料完全消耗后通过TLC监测反应进程，浓缩反应混合物，添加水并用二氯甲烷萃取。合并的有机层用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥并浓缩。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物，得到化合物20-1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(5-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)-2,3-二氢-1H-茚-2-基)脲(18mg，16％)作为TFA盐。LC纯度:98.95％；m/z:583.4[M+H]+(分子式C31H38N10O2,计算的分子量582.71)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.87(s,1H),7.84(d,J＝8Hz,1H),7.68(d,J＝6.4Hz,1H),7.35(d,J＝7.6Hz,1H),6.51(s,1H),6.28(s,1H),4.54-4.51(m,1H),3.88-3.82(m,1H),3.58-3.53(m,1H),3.14-3.10(m,1H),2.87-2.82(m,2H),2.63(s,3H),2.27-2.05(m,6H),1.81-1.80(m,2H),1.75-1.71(m,4H),1.55-1.46(m,2H),1.34-1.25(m,5H)。
实施例10：中间体R的合成
Figure BDA0003305115970000511
步骤1：合成化合物O-3-氧代-3-(四氢呋喃-3-基)丙腈
将氢化钠(3.07g，76.9mmol)在无水THF中的搅拌的悬浮液加热至65℃。在45分钟的时间内向其中滴加四氢呋喃-3-羧酸甲酯(5g，38.4mmol)和乙腈(4.1mL，76.92mmol)的混合物。将所得浅黄色悬浮液在65℃下再加热15小时(由TLC监测)。原料完全消耗后，将反应混合物冷却至室温。将反应混合物倒入冰冷的水中，所得溶液用石油醚萃取。分离水层并用6N HCl溶液酸化至pH～2并用乙酸乙酯萃取。将有机层在无水Na2SO4上干燥并在减压下浓缩以得到化合物O-3-氧代-3-(四氢呋喃-3-基)丙腈(4.3g，82.07％产率),将其用于下一步而无需进一步纯化。
步骤2：合成化合物P-5-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3-胺
向化合物O-3-氧代-3-(四氢呋喃-3-基)丙腈(4.3g，31.4mmol)在2-丙醇(40mL)中的搅拌溶液添加一水合肼(4.6mL，94.3mmol)。将反应在80℃下加热10小时。通过TLC监测反应完成后，将反应混合物冷却至环境温度并真空除去溶剂。残余物通过Biotage isolara使用硅胶(230-400)以二氯甲烷中的0-10％甲醇的梯度洗脱纯化，以得到化合物P-5-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3胺(3.1g，65.9％的产率)。LC纯度:90.67％；m/z:154.2[M+H]+(分子式C7H11N3O计算的分子量153.09)。
步骤3：合成化合物Q-2-氯-N-(5-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺
向化合物P-5-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3-胺(3.1g，20.2mmol)在DMSO(25mL)中的溶液添加2,4-二氯嘧啶(3.01g，20.2mmol)和DIPEA(5.2mL，30.3mmol)。将反应在60℃加热16小时。通过TLC监测反应的完成。反应混合物用冷水稀释并用乙酸乙酯萃取。有机层在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。粗制品通过Biotage isolara使用硅胶(230-400)以二氯甲烷中的0-10％甲醇的梯度洗脱纯化，以得到化合物Q-2-氯-N-(5-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(2.9g，54.7％产率)。LC纯度:94.8％；m/z:266.2[M+H]+(分子式C11H12ClN5O计算的分子量265.70)。
步骤4和5：合成中间体R-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺
向化合物Q-2-氯-N-(5-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(2.78g，10mmol)在DMSO(25mL)中的溶液添加叔丁基((1R,4R)-4-氨基环己基)氨基甲酸酯(2.91g，13.6mmol)和DIPEA(5.48mL，31.47mmol)。将反应在140℃加热16小时。通过TLC监测反应的完成。反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。有机层在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。粗制品通过Biotage isolara使用硅胶(230-400)以二氯甲烷中的0-20％甲醇的梯度洗脱纯化，以得到叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(3.5g，76.5％产率)。LC纯度:84.86％；m/z:444.3[M+H]+(分子式C22H33N7O3计算的分子量443.58)。
向叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(3.5g，7.9mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液在0℃下添加二噁烷中的30mL的4M HCl。将反应在室温下搅拌4小时。原料完全消耗后(通过TLC监测)，反应混合物在减压下浓缩以得到中间体R-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(2.6g，96％产率)。将其用于下一步而无需进一步纯化。LC纯度:81％；m/z:344.3[M+H]+(分子式C17H25N7O计算的分子量343.44)。
实施例11：化合物102的合成
合成方案11
Figure BDA0003305115970000531
合成化合物102-1-((1R,3R)-3-苯基环丁基)-3-((1,4R)-4-((4-((5-(四氢呋喃-3-基)1H-吡唑-3)-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲
向苯基((1R,3R)-3-苯基)环丁基氨基甲酸酯(0.155g，0.58mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液添加三乙胺(0.24mL，1.74mmol)并在65℃加热1小时。1小时后，将反应混合物冷却至室温，然后添加N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(0.200g，0.58mmol)并将反应在85℃下加热16h。将反应混合物冷却至室温，添加水并用二氯甲烷萃取。分离有机层并在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过反相制备型HPLC纯化，得到1-((1R,3R)-3-苯基环丁基)-3-((1,4R)-4-((4-((5-(四氢呋喃-3-基))1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲(60mg，20％产率)作为TFA盐。LC纯度:98.91％；m/z:517.3[M+H]+(分子式C28H36N8O2计算的分子量516.65)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.69(d,J＝7.2Hz,1H),7.31-7.30(m,3H),7.19-7.16(m,1H),6.65(s,1H),6.29(d,J＝6.8Hz,1H),4.30(t,J＝6.8Hz,1H),4.06-3.90(m,5H),3.57-3.52(m,3H),2.51-2.33(m,4H),2.11-2.04(m,5H),1.52-1.30(m,4H)。
实施例12：化合物11的(R)-和(S)-对映异构体的手性分离
使用手性SFC分离化合物11的各个对映异构体，其中使用
色谱柱：Chiral Pak OX-H
流速：5mL/分钟
共溶剂：50％
共溶剂：甲醇
注射体积：15μL
出口压力：100bar
温度：35℃。
收集第一洗脱的(RT＝3.03)级分和第二洗脱的(RT＝4.6)级分并在减压下浓缩。
第一洗脱异构体：LC纯度:98.97％；m/z:526.3[M+H]+(分子式C29H35N9O,计算的分子量525.66)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.69(d,J＝7.2Hz,1H),7.59(s,1H),7.54(d,J＝8Hz,1H),7.41(d,J＝8Hz,1H),6.55-6.29(m,2H),4.54-4.51(m,1H),3.95-3.80(m,1H),3.56-3.49(m,1H),3.36-3.33(m,2H),3.15-3.11(m,1H),2.90-2.83(m,2H),2.13-2.06(m,6H),1.83-1.71(m,6H),1.56-1.48(m,2H),1.35-1.26(m,2H)。
第二洗脱异构体：LC纯度:98.35％；m/z:526.3[M+H]+(分子式C29H35N9O,计算的分子量525.66)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.69(d,J＝7.2Hz,1H),7.59(s,1H),7.54(d,J＝8Hz,1H),7.41(d,J＝7.6Hz,1H),6.55-6.29(m,2H),4.55-4.49(m,1H),3.90-3.87(m,1H),3.56-3.50(m,1H),3.32-3.30(m,2H),3.15-3.11(m,1H),2.90-2.83(m,2H),2.13-2.06(m,6H),1.83-1.71(m,6H),1.53-1.48(m,2H),1.35-1.26(m,2H)。
实施例13：化合物12的合成
合成方案12
Figure BDA0003305115970000551
向中间体H-苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(200mg，0.433mmol)在无水DMF(4mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.18mL，1.30mmol)。将反应混合物加热至85℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温并添加1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-胺(67mg，0.433mmol)。将反应加热至95℃，保持16小时。通过TLC监测反应，在原料完全消耗后，反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物，得到化合物121-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)脲(25mg，11.06％产率)作为TFA盐。LC纯度:99.85％；m/z:524.3[M+H]+(分子式C27H41N9O2,计算的分子量523.69)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.69(d,J＝7.2Hz,1H),6.52(bs,1H),6.31(bs,1H),4.89-4.80(m,4H),4.39-4.36(m,1H),3.90-3.78(m,2H),3.52-3.49(m,3H),3.14-3.12(m,1H),2.97-2.94(m,2H),2.13-2.04(m,8H),1.83-1.72(m,8H),1.52-1.49(m,2H),1.34-1.31(m,2H)。
实施例14：化合物70的合成
合成方案13
Figure BDA0003305115970000561
向中间体H-苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(200mg，0.433mmol)在无水DMF(4mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.18mL，1.30mmol)。将反应混合物加热至85℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温，并添加2-(4-氨基哌啶-1-基)乙烷-1-醇(62mg，0.433mmol)。将反应加热至95℃，保持16小时。反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。粗化合物通过反相制备型HPLC纯化，得到化合物701-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(1-(2-羟乙基)哌啶-4-基)脲(25mg，11.3％产率)作为TFA盐。LC纯度:97.93％；m/z:512.4[M+H]+(分子式C26H41N9O2,计算的分子量511.68)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.71(d,J＝6.0Hz,1H),6.55(bs,1H),6.30(bs,1H),3.89(t,J＝5.2Hz,2H),3.70-3.68(m,1H),3.68-3.65(m,3H),3.65-3.58(m,2H),3.50-3.56(m,1H),3.28-3.26(m,2H),3.15-3.13(m,2H),2.17-2.04(m,7H),1.84-1.72(m,7H),1.53-1.50(d,J＝12Hz,2H),1.36-1.28(m,3H)。
实施例15：化合物35的合成
合成方案14
Figure BDA0003305115970000571
向中间体H-苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(200mg，0.433mmol)在无水DMF(2mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.2mL，1.301mmol)。将反应混合物加热至65℃，保持1小时。将反应混合物冷却至室温并添加反式-3-(三氟甲基)环己-1-胺(90mg，0.433mmol)。将反应加热至85℃，保持16小时。通过TLC监测反应进程，在原料完全消耗后，将反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。粗化合物通过反相制备型HPLC纯化，得到化合物351-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-((1R,3S/1S,3R)-3-(三氟甲基)环己基)脲(70mg，35％产率)作为TFA盐。LC纯度:99.54％；m/z:535.4[M+H]+(分子式C26H37F3N8O,计算的分子量534.63)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ7.65-7.64(m,1H),6.52(s,1H),6.26(s,1H),3.87(s,1H),3.49(s,2H),3.11(s,1H),2.23(d,J＝8.40Hz,8H),1.80-1.69(m,12H),1.19-1.16(m,5H)。
实施例16：化合物101的合成
合成方案15
Figure BDA0003305115970000581
向中间体H-苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(120mg，0.260mmol)在无水DMF(2mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.1mL，0.780mmol)。将反应加热至65℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温并添加6，7-二氢-5H-环戊并[c]吡啶-6-胺(70mg，0.520mmol)。将反应混合物加热至90℃，保持18小时。反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物，得到化合物1011-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(6,7-二氢-5H-环戊并[c]吡啶-6-基)脲(25mg，20％产率)作为TFA盐。LC纯度:97.75％；m/z:502.3[M+H]+(分子式C27H35N9O,计算的分子量501.64)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.69(s,1H),8.63(d,J＝6.0Hz,1H),7.97(d,J＝6.0Hz,1H),7.69(d,J＝7.2Hz,1H),6.55(bs,1H),6.29(d,J＝6.8Hz,1H),4.71-4.64(m,1H),3.91-3.87(m,1H),3.62-3.49(m,3H),3.22-3.08(m,3H),2.13-2.05(m,6H),1.83-1.72(m,6H),1.53-1.48(m,2H),1.37-1.29(m,2H)。
实施例17：化合物27的合成
合成方案16
Figure BDA0003305115970000591
向中间体H-苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(100mg，0.217mmol)在无水DMF(2mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.1mL，0.651mmol)。将反应加热至85℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温并添加1-(3-氨基环己基)吡咯烷-2-酮(43mg，0.239mmol)。将反应混合物加热至95℃，保持16小时。在原料完全消耗后通过TLC监测反应进程，用水稀释反应混合物并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物，得到化合物271-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(3-(2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)脲(15mg，5％产率)作为TFA盐。LC纯度:95.14％；m/z:550.5[M+H]+(分子式C29H43N9O2,计算的分子量549.72)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.82(s,1H),6.52(bs,2H),3.93-3.91(m,1H),3.95-3.90(m,1H),3.58-3.42(m,4H),3.13(t,J＝7.4Hz,1H),2.36(t,J＝7.6Hz,2H),2.13-1.98(m,8H),1.95-1.93(m,2H),1.82(t,J＝5.6Hz,3H),1.71-1.68(m,6H),1.54-1.26(m,7H)。
实施例18：化合物38的合成
合成方案17
Figure BDA0003305115970000601
向中间体H-苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(200mg，0.432mmol)在无水DMF(2mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.2mL，1.29mmol)。将反应混合物加热至85℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温并添加4-甲基四氢-2H-吡喃-4-胺(55mg，0.432mmol)。将反应混合物加热至90℃，保持16小时。通过LCMS监测反应混合物。反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物以产生化合物381-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)脲(40mg，19.2％产率)作为TFA盐。LC纯度:99.13％；m/z:483.4[M+H]+(分子式C25H38N8O2,计算的分子量482.63)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.69(d,J＝8.3Hz,1H),6.57(s,1H),6.29(d,J＝7.2Hz,1H),3.91-2.89(m,1H),3.72-3.63(m,5H),3.57(t,J＝8.21Hz,2H),3.47(t,J＝8.03Hz,1H),3.15-3.12(m,1H),2.09-2.00(m,7H),1.86-1.59(m,6H),1.56-1.50(m,2H),1.36(s,3H),1.36-1.32(s,2H)。
实施例19：化合物57的合成
合成方案18
Figure BDA0003305115970000611
向中间体H-苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(200mg，0.433mmol)在无水DMF(4.0mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.18mL，1.30mmol)，并将反应混合物在70℃下搅拌120分钟。使反应混合物冷却至室温，然后添加3-(甲基磺酰基)环丁烷-1-胺(64mg，0.433mmol)，并将反应混合物加热至95℃。搅拌16小时完成后，将反应混合物用水稀释并用二氯甲烷中的5％甲醇萃取。合并的有机层在无水Na2SO4上干燥，在减压下浓缩，得到粗物质。通过制备型HPLC纯化粗物质以提供化合物571-((1R,4R)-4-((4-((S5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-环己基)-3-(1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-基)脲(15mg，22％产率)作为TFA盐。LC纯度:97.95％；m/z:517.3[M+H]+(分子式C24H36N8O3S,计算的分子量516.26)；1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.70(d,J＝6.8Hz,1H),6.47-6.31(m,2H),4.45-4.41(m,1H),3.91-3.81(m,1H),3.80-3.76(m,1H),3.53-3.47(m,1H),3.32-3.14(m,1H),2.92(s,3H),2.83-2.77(m,2H),2.45-2.37(m,2H),2.14-2.04(m,6H),1.84-1.67(m,6H),1.56-1.46(m,2H),1.37-1.30(m,2
实施例20：化合物43的合成
合成方案19
Figure BDA0003305115970000621
向中间体H-苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(150mg，0.325mmol)在无水DMF(4.0mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.14mL，0.976mmol)并将反应混合物在70℃搅拌120分钟。然后，将反应混合物冷却至室温，添加2-甲氧基乙烷-1-胺，并将反应混合物加热至95℃。搅拌16小时完成后，反应混合物用水(10mL)稀释，用二氯甲烷中的5％甲醇(2x10mL)萃取，合并的有机层在无水Na2SO4上干燥并在减压下浓缩，得到粗物质。通过制备型HPLC纯化粗物质以提供化合物431-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-环己基)-3-(2-甲氧基乙基)脲(20mg，14％产率)作为TFA盐。LC纯度:96.6％；m/z:443.3[M+H]+(分子式C22H34N8O2,计算的分子量442.57)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.69(d,J＝6.96Hz,1H),6.56(s,1H),6.29(d,J＝6.92Hz,1H),3.97-3.91(m,1H),3.51-3.45(m,2H),3.44-3.43(m,2H),3.37(s,3H),3.14-3.13(m,1H),2.13-2.06(m,6H),1.89-1.85(m,2H),1.83-1.73(m,4H),1.53-1.50(m,2H),1.36-1.30(m,2H)。
实施例21：化合物97的合成
合成方案20
Figure BDA0003305115970000631
步骤1:苯基(1-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯的合成
在0℃下向二氯甲烷(5mL)中的1-甲基哌啶-4-胺(0.200g，1.33mmol)的溶液滴加三乙胺(0.46mL，3.32mmol)，然后添加氯甲酸苯酯(0.17mL，1.33mmol)。将反应混合物在0℃至10℃搅拌2小时。通过TLC监测反应并且在原料完全消耗之后，将反应混合物用二氯甲烷稀释并用水洗涤。分离的有机层在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。所得固体用石油醚研磨，得到苯基(1-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(220mg，粗制品)作为白色固体，其可用于下一步而无需进一步纯化。LC纯度:99.5％；m/z:235.2[M+H]+(分子式C25H39N9O计算的分子量234.32))。
步骤2:合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(1-甲基哌啶-4-基)脲
向苯基(1-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(0.05g，0.16mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液添加三乙胺(0.07mL，0.48mmol)，并将反应混合物在65℃下加热1小时。1小时后，将反应混合物冷却至室温，然后添加中间体E-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(0.075g，0.16mmol)。然后将反应混合物在85℃加热16小时。将反应混合物冷却至室温，用水稀释并用二氯甲烷萃取。有机层在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过反相制备型HPLC纯化，得到化合物971-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(1-甲基哌啶-4-基)脲(20mg，24.6％产率)作为TFA盐。LC纯度:99.09％；m/z:482.4[M+H]+(分子式C25H39N9O计算的分子量481.65)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.69(d,J＝6.8Hz,1H),6.51-6.31(m,2H),3.84-3.73(m,2H),3.56-3.49(m,3H),3.20-3.08(m,3H),2.88(s,3H),2.19-2.07(m,8H),1.85-1.72(m,8H),1.56-1.42(m,2H),1.38-1.25(m,2H)。
实施例22：化合物60的合成
合成方案21：
Figure BDA0003305115970000641
步骤1：合成叔丁基(1-环丙基哌啶-3-基)氨基甲酸酯
向叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.150g，0.75mmol)在9:1THF:MeOH(5mL)中的溶液在室温下添加
Figure BDA0003305115970000642
分子筛(0.150g)、(1-乙氧基环丙氧基)三甲基硅烷(0.390g，2.25mmol)、乙酸(0.51mL，9mmol)和氰基硼氢化钠(0.141g，2.25mmol)。将反应在65℃下加热16小时。通过TLC监测反应完成。过滤悬浮液并浓缩。粗制品用碳酸氢钠溶液稀释并用二氯甲烷萃取。有机层在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。粗物质通过Biotageisolara使用硅胶(230-400)以二氯甲烷中的0-20％甲醇的梯度洗脱纯化，以得到无色油状叔丁基(1-环丙基哌啶-3-基)氨基甲酸酯(120mg，66.6％产率)。LC纯度:93.9％；m/z:241.4[M+H]+(分子式C13H24N2O2计算的分子量240.35)。
步骤2：1-环哌啶-3-胺的合成
在0℃下向叔丁基(1-环丙基吡咯烷-3-基)氨基甲酸酯(0.103g，0.42mmol)添加二噁烷中的2mL 4M HCl。将反应在室温下搅拌4小时。在原料完全消耗后(通过TLC监测)，将反应混合物在减压下浓缩，得到1-环丙基哌啶-3-胺(50mg，83％)作为无色胶状固体。将其用于下一步而无需进一步纯化。LC纯度:99.9％；m/z:141.2[M+H]+(分子式C8H16N2计算的分子量140.13)。
步骤3:合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(1-环丙基哌啶-3基)脲
向中间体H-苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.150g，0.325mmol)在无水DMF(2mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.06mL，0.45mmol)。将反应加热至65℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温并添加1-环哌啶-3-胺(0.045g，0.325mmol)并加热至85℃持续16h。通过TLC监测反应混合物的完成，原料被消耗。反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩以获得粗化合物。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物以提供化合物601-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(1-环丙基哌啶-3-基)脲(16mg，9.7％产率)。LC纯度:99.43％；m/z:506.3[M-H]+(分子式C27H41N9O计算的分子量507.69)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.78(s,1H),6.14-(bs,2H),3.73-3.70(m,2H),3.69-3.50(m,1H),3.09-3.01(m,1H),2.91-2.90(m,1H),2.74-2.68(m,1H),2.48-2.42(m,1H),2.24-2.23(m,1H),2.11-2.00(m,6H),1.82-1.56(m,10H),1.41-1.29(m,5H),0.47-0.39(m,4H)。
实施例23：化合物79的合成
合成方案22
Figure BDA0003305115970000651
步骤1：合成叔丁基(1-环丙基吡咯烷-3-基)氨基甲酸酯
向叔丁基吡咯烷-3-基氨基甲酸酯(0.150g，0.80mmol)在9:1THF:MeOH(5mL)中的溶液在室温下添加
Figure BDA0003305115970000661
分子筛(0.150g)、(1-乙氧基环丙氧基)三甲基硅烷(0.421g，2.41mmol)、乙酸(0.55mL，9.6mmol)和氰基硼氢化钠(0.152g，2.41mmol)。将反应在65℃下加热16小时。通过TLC监测反应的完成。过滤悬浮液并浓缩。粗物质用碳酸氢钠溶液稀释并用二氯甲烷萃取。有机层在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。粗物质通过Biotageisolara使用硅胶(230-400)以二氯甲烷中的0-20％甲醇的梯度洗脱纯化，以得到无色油状叔丁基(1-环丙基吡咯烷-3-基)氨基甲酸酯(80mg，44.4％产率)。LC纯度:99.7％；m/z:227.3[M+H]+(分子式C12H22N2O2计算的分子量226.32)。
步骤2：1-环丙基吡咯烷-3-胺的合成
在0℃下向叔丁基(1-环丙基吡咯烷-3-基)氨基甲酸酯(0.080g，0.35mmol)添加二噁烷中的2mL 4M HCl。将反应混合物在室温搅拌4小时。在原料完全消耗后(通过TLC监测)，将反应混合物在减压下浓缩以获得1-环丙基吡咯烷-3-胺(40mg，90％)作为无色胶状固体。将其用于下一步而无需进一步纯化。LC纯度:99.6％；m/z:127.2[M+H]+(分子式C7H14N2计算的分子量126.20)。
步骤3:合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(1-环丙基哌啶-3-基)脲
向中间体H-苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.07g，0.15mmol)在无水DMF(2mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.06mL，0.45mmol)。将反应混合物加热至65℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温并添加1-环丙基吡咯烷-3-胺(0.019g，0.15mmol)。将反应混合物加热至85℃，保持16小时。通过TLC监测反应混合物，在原料完全消耗后，反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩以获得粗化合物。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物以获得化合物79 1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(1-环丙基吡咯烷-3-基)脲(10mg，20％产率)。LC纯度:99.06％；m/z:494.3[M+H]+(分子式C26H39N9O计算的分子量493.33)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.78(d,J＝6Hz,1H),6.31-6.15(m,2H),4.28-4.21(m,1H),3.82-3.78(m,1H),3.50-3.48(m,1H),3.09-3.01(m,1H),3.00-2.97(m,1H),2.91-2.90(m,1H),2.71-2.67(m,1H),2.61-2.57(m,1H),2.26-2.24(m,1H),2.11-2.09(m,4H),2.02-1.99(m,2H),1.83-1.59(m,8H),1.43-1.30(m,5H),0.52-0.44(m,4H)。
实施例24：化合物2的合成
合成方案23：
Figure BDA0003305115970000671
步骤1：合成叔丁基(1-乙酰哌啶-4-基)氨基甲酸酯
向叔丁基哌啶-4-基氨基甲酸酯(200mg，1.00mmol)在无水DMF(5ml)中的搅拌溶液在0℃添加三乙胺(0.41mL，3.00mmol)和乙酰氯(0.11mL，1.50mmol))。将反应混合物在环境温度下搅拌12小时。通过TLC监测反应混合物，原料被消耗。用水稀释反应混合物，用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。将由此获得的粗物质通过Biotage isolera(230-400硅胶)用石油醚中的0-80％乙酸乙酯的梯度洗脱纯化，以得到叔丁基(1-乙酰哌啶-4-基)氨基甲酸酯(180mg，75％产率)。LC纯度:58.69％；m/z:187.2[M+H-tBu]+(分子式C12H22F3N2O3,计算的分子量242.32)。
步骤2：合成1-(4-氨基哌啶-1-基)乙烷-1-酮
在0℃下向叔丁基(1-乙酰哌啶-4-基)氨基甲酸酯(180mg，0.7428mmol)在二氯甲烷(5mL)中的搅拌溶液添加TFA(2mL)。将反应混合物缓慢升温至室温并搅拌5小时。在减压下除去溶剂并与甲苯共蒸馏以得到粗1-(4-氨基哌啶-1-基)乙烷-1-酮(120mg，定量产率)。LC纯度:93.36％；m/z:143.2[M+H]+(分子式C7H14N2O,计算的分子量142.2)。
步骤3:合成1-(1-乙酰哌啶-4-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲
向中间体H-苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(120mg，0.260mmol)在无水DMF(2mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.1mL，0.780mmol)。将反应混合物加热至65℃保持1小时。将反应冷却至室温并添加1-(4-氨基哌啶-1-基)乙烷-1-酮(40mg，0.260mmol)。将反应混合物加热至70℃，保持16小时。通过TLC监测反应混合物，原料被消耗。反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。粗化合物通过反相制备型HPLC纯化，得到化合物21-(1-乙酰哌啶-4-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲(30mg，23％产率)作为TFA盐。LC纯度:99.53％；m/z:510.4[M+H]+(分子式C26H39N9O2,计算的分子量509.6)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.67(s,1H),6.51(bs,1H),6.29(bs,1H),4.34-4.30(m,1H),4.86-4.72(m,3H),3.53-3.49(m,1H),3.24-3.11(m,2H),2.90-2.85(m,1H),2.13-2.05(m,9H),1.87-1.71(m,7H),1.52-1.46(m,2H),1.41-1.25(m,5H)。
实施例25：化合物49的合成
合成方案24：
Figure BDA0003305115970000681
步骤1：合成N-苄基-2-氧杂螺[3.5]壬烷-7-胺
向2-氧杂螺[3.5]壬烷-7-酮(200mg，1.428mmol)在1,2-二氯乙烷(5mL)中的搅拌溶液在0℃添加苯甲胺(0.2mL，1.714mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(450mg，2.142mmol)。将反应混合物升温至室温并搅拌16小时。通过TLC监测反应混合物，在原料完全消耗后，反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥并浓缩以得到粗产物，然后通过Biotage isolera使用230-400硅胶以石油醚中的0-80％乙酸乙酯的梯度洗脱纯化以得到N-苄基-2-氧杂螺[3.5]壬烷-7-胺(220mg，66.6％产率)。LC纯度:81.90％；m/z:232.2[M+H]+(分子式C15H21NO,计算的分子量231.34)。
步骤2：合成2-氧杂螺[3.5]壬烷-7-胺
向N-苄基-2-氧杂螺[3.5]壬烷-7-胺(180mg，0.7792mmol)在乙醇(5mL)中的溶液添加100mg Pd(OH)2和催化量的冰醋酸。在球囊压力下用H2替换容器中的大气并将反应在室温下搅拌16小时。通过硅藻土过滤反应混合物并用甲醇洗涤。在真空下除去溶剂以得到2-氧杂螺[3.5]壬烷-7-胺(140mg，粗制品)，其直接用于下一步而无需进一步纯化。
步骤3:合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(2-氧杂螺[3.5]壬烷-7-基)脲
向中间体H-苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(100mg，0.2169mmol)在无水DMF(3mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.1mL，0.6507mmol)。将反应混合物加热至65℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温并添加2-氧杂螺[3.5]壬烷-7-胺(80mg，0.2169mmol)。将反应混合物加热至90℃，保持16小时。通过TLC监测反应混合物，并且原料被消耗。反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。粗化合物通过反相制备型HPLC纯化，得到化合物49 1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(2-氧杂螺[3.5]壬烷-7-基)脲(15mg，14％产率)作为TFA盐。LC纯度:97.13％；m/z:509.3[M+H]+(分子式C27H40N8O2,计算的分子量508.67)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.66(bs,1H),6.52(bs,1H),6.26(bs,1H),4.42(s,2H),4.34(s,2H),3.86(m,1H),3.46-3.43(m,2H),3.18-3.12(m,1H),2.09-2.01(m,8H),1.81-1.58(m,10H),1.55-1.46(m,3H),1.28-1.25(m,2H),1.19-1.13(m,2H)。
实施例26：化合物44的合成
Figure BDA0003305115970000701
步骤1：苯基((1R,3R)-3-甲氧基环丁基)氨基甲酸酯的合成
向(1R,3R)-3-甲氧基环丁烷-1-胺(200mg，1.977mmol)在DMF(5ml)中的搅拌溶液在0℃添加三乙胺(0.82mL，5.931mmol)和氯甲酸苯酯(0.37mL,2.965mmol)。将反应在室温下搅拌3小时。通过TLC监测反应混合物并且在原料完全消耗之后，反应混合物用水稀释，用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。将由此获得的粗物质与石油醚一起研磨并浓缩以产生苯基((1R,3R)-3-甲氧基环丁基)氨基甲酸酯(250mg，57.2％产率)。LC纯度:99.21％；m/z:222.2[M+H]+(分子式C12H15NO3,计算的分子量221.26)。
步骤2:合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-((1R,3R)-3-甲氧基环丁基)脲
向苯基((1R,3R)-3-甲氧基环丁基)氨基甲酸酯(250mg，1.129mmol)在无水DMF(5mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.46mL，3.387mmol)。将反应混合物加热至65℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温并添加中间体E-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(385mg，1.129mmol)。将反应加热至90℃保持16小时。通过TLC监测反应混合物，原料被消耗。反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物，得到化合物44 1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-((1R,3R)-3-甲氧基环丁基)脲(30mg，6％产率)作为TFA盐。LC纯度:99.64％；m/z:469.4[M+H]+(分子式C24H36N8O2,计算的分子量468.61)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.67(s,1H),6.45(bs,2H),4.22-4.18(m,1H),4.00-3.97(m,1H),3.80-3.75(m,1H),3.51-3.49(m,1H),3.23(s,3H),3.15-3.11(m,1H),2.35-2.29(m,2H),2.13-2.03(m,8H),1.83-1.71(m,6H),1.68-1.48(m,2H),1.45-1.29(m,2H)。
实施例27：化合物48的合成
Figure BDA0003305115970000711
步骤1：合成苯基(1-乙酰氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸酯
向1-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)乙烷-1-酮(200mg，1.752mmol)在无水DMF(5ml)中的搅拌溶液在0℃添加三乙胺(0.72mL，5.256mmol)和苯基氯甲酸酯(0.33mL，2.628mmol)。将反应在室温下搅拌3小时。在原料完全转化后通过TLC监测反应混合物，用水稀释反应混合物，用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。由此获得的粗物质用石油醚洗涤并浓缩以产生苯基(1-乙酰氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸酯(190mg，46.3％产率)。LC纯度:98.40％；m/z:235.1[M+H]+(分子式C12H14N2O3,计算的分子量234.26)。
步骤2:合成1-(1-乙酰氮杂环丁烷-3-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲
向苯基(1-乙酰氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸酯(190mg，0.811mmol)在无水DMF(5mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.33mL，2.433mmol)。将反应混合物加热至65℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温并添加中间体E-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(277mg，0.811mmol)。将反应混合物加热至90℃，保持16小时。通过TLC监测反应混合物，原料被消耗。反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物以产生化合物48 1-(1-乙酰氮杂环丁烷-3-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲(20mg，5％产率)作为甲酸盐。LC纯度:97.87％；m/z:482.8[M+H]+(分子式C24H35N9O2,计算的分子量481.61)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.72(s,1H),6.25(bs,2H),4.49-4.43(m,2H),4.25-4.21(m,1H),4.02-4.00(m,1H),3.79-3.76(m,2H),3.52-3.48(m,1H),3.12-3.08(m,1H),2.12–2.01(m,6H),1.86(s,3H),1.82-1.80(m,2H),1.76-1.64(m,4H),1.49-1.39(m,2H),1.37-1.29(m,2H)。
实施例28：化合物37的合成
Figure BDA0003305115970000721
步骤1:合成苯基(4-(2-氧代噁唑烷-3-基)环己基)氨基甲酸酯
向3-(4-氨基环己基)噁唑烷-2-酮(200mg，1.09mmol)在无水二氯甲烷(2mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.46mL，3.2mmol)。将反应混合物在0℃搅拌15分钟。然后添加氯甲酸苯酯(0.16mL，1.3mmol)。将反应在室温下搅拌3小时。通过TLC监测反应，消耗原料。反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得苯基(4-(2-氧代噁唑烷-3-基)环己基)氨基甲酸酯(160mg，48％产率)。LC纯度:99.56％；m/z:305.2[M+H]+(分子式C16H20N2O4,计算的分子量304.14)。
步骤2:合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(4-(2-氧代噁唑烷-3-基)环己基)脲
向苯基(4-(2-氧代噁唑烷-3-基)环己基)氨基甲酸酯(160mg，0.526mmol)在无水DMF(2mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.22mL，1.57mmol)。将反应混合物加热至85℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温，添加中间体E-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(179mg，0.179mmol)。将反应加热至95℃，保持16小时。通过TLC监测反应，原料被消耗。反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。粗化合物通过反相制备型HPLC纯化，得到化合物37 1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基))-氨基)环己基)-3-(4-(2-氧代噁唑烷-3-基)环己基)脲(30mg，5.5％产率)作为甲酸盐。LC纯度:95.18％；m/z:552.4[M+H]+(分子式C28H41N9O3,计算的分子量551.70)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.40(s,1H),7.75(d,J＝6.4Hz,1H),6.20(bs,2H),4.38-4.33(m,2H),3.89-3.86(m,2H),3.67-3.59(m,5H),3.51-3.42(m,1H),3.28-3.11(m,1H),2.13-2.02(m,7H),1.84-1.68(m,10H),1.48-1.28(m,5H)。
实施例29：化合物77的合成
Figure BDA0003305115970000731
步骤1：合成叔丁基(2-环丙基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基甲酸酯
向叔丁基(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基甲酸酯(0.2g，0.94mmol)在THF:MeOH9:1(5mL)中的搅拌溶液在室温下添加
Figure BDA0003305115970000732
分子筛(0.2g)、(1-乙氧基环丙氧基)三甲基硅烷(0.492g，2.8mmol)、乙酸(0.1mL，0.18mmol)和氰基硼氢化钠(0.175g，2.8mmol)。将反应在65℃下加热16小时。通过TLC监测反应的完成。过滤反应混合物并浓缩。粗制品用饱和碳酸氢钠溶液稀释并用二氯甲烷萃取。有机层在无水Na2SO4上干燥并在减压下浓缩。粗化合物通过Biotage isolara使用硅胶(230-400)以石油醚中的0-90％乙酸乙酯的梯度洗脱纯化，以得到叔丁基(2-环丙基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基甲酸酯(0.1g，42％产率)。LC纯度:48.20％；m/z:253.3[M+H]+(分子式C14H24N2O2,计算的分子量252.36)
步骤2：合成2-环丙基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-胺
向叔丁基(2-环丙基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基甲酸酯(0.1g，0.396mmol)在无水二氯甲烷(2mL)中的混合物添加二噁烷中的HCl(2mL,4M溶液)。将反应混合物在室温搅拌3小时。通过TLC分析监测反应进程。反应完成后，将反应混合物浓缩，得到2-环丙基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-胺(82mg，定量产率)，其直接用于下一步而无需进一步纯化。LC纯度:92.26％；m/z:153.2[M+H]+(分子式C9H16N2,计算的分子量152.24)。
步骤3:合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(2-环丙基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)脲
向中间体H-苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(200mg，0.433mmol)在无水DMF(2mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.179mL，1.3mmol)。将反应混合物加热至85℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温并添加2-环丙基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-胺(65mg，0.433mmol)。将反应加热至90℃保持16小时。通过TLC监测反应混合物，原料被消耗。反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩，得到粗化合物。其通过反相制备型HPLC纯化，得到化合物77 1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-环己基)-3-(2-环丙基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)脲(20mg，22％产率)作为TFA盐。LC纯度:98.18％；m/z:520.4[M+H]+(分子式C28H41N9O,计算的分子量519.70)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.75(s,1H),6.12(bs,2H),4.45-4.42(m,1H),4.25(s,1H),4.09-4.03(m,1H),3.88-3.78(m,1H),3.50(s,2H),3.17-3.11(m,1H),2.99-2.95(m,1H),2.66-2.64(m,2H),2.22-2.01(m,8H),1.82-1.71(m,6H),1.55-1.41(s,3H),1.35-1.26(m,2H),0.96-0.91(m,4H)。
实施例30：化合物3的合成
合成方案29：
Figure BDA0003305115970000751
步骤1：合成叔丁基(5-溴-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯
向5-溴-2,3-二氢-1H-茚-2-胺(1g，4.716mmol)在二氯甲烷(20mL)中的冷却的0℃溶液添加三乙胺(1.95mL，14.15mmol))和Boc酸酐(1.5mL，7.075mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时。反应完成后(通过TLC监测)，反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。有机层在无水Na2SO4上干燥并浓缩。残余物通过Biotage isolara使用硅胶(230-400)用石油醚中的0-60％乙酸乙酯的梯度洗脱纯化，得到叔丁基(5-溴-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(1g，68％产率)。LC纯度:98.97％；m/z:258.9[M-tBu]+(分子式C14H18BrNO2,计算的分子量312.21)。
步骤2：合成叔丁基(5-(甲基磺酰基)-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯
在20mL微波小瓶中，向叔丁基(5-溴-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(0.25g，0.80mmol)在无水DMSO(4mL)中的搅拌溶液添加甲磺酸钠(0.189g，1.6mmol)和Cu(II)三氟甲磺酸盐(0.06mg，0.16mmol)，然后添加反式-N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺(0.01mL，0.08mmol)。将小瓶密封并在微波中加热至120℃。2小时后，将反应混合物冷却至环境温度，用水稀释并用乙酸乙酯萃取有机物。将由此获得的有机层在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。由此获得的残余物通过快速柱色谱纯化使用硅胶(230-400目)用石油醚中的0-50％乙酸乙酯洗脱，得到叔丁基(5-(甲基磺酰基)-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(0.08g，32％产率)。LC纯度:99.67％；m/z:212.2[M-Boc]+(分子式C15H21N9O4S,计算的分子量311.40)。
步骤3：合成5-(甲基磺酰基)-2,3-二氢-1H-茚-2-胺
向叔丁基(5-(甲基磺酰基)-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(0.08g，0.257mmol)在无水二氯甲烷(2mL)中的混合物添加二噁烷中的HCl(2mL，4M溶液)。将反应混合物在室温搅拌3小时。通过TLC分析监测反应进程。将反应混合物浓缩以得到5-(甲基磺酰基)-2,3-二氢-1H-茚-2-胺(62mg，定量产率)，将其用于下一步而无需纯化。LC纯度:56.81％；m/z:212.0[M+H]+(分子式C10H13NO2S,计算的分子量211.28)。
步骤4:合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(5-(甲基磺酰基)-2,3-二氢-1H-茚-2-基)脲
向中间体H-苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(200mg，0.433mmol)在无水DMF(4mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.2mL，1.29mmol)。将反应加热至85℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温并添加5-(甲基磺酰基)-2,3-二氢-1H-茚-2-胺(134mg，0.433mmol)。将反应混合物加热至95℃，保持16小时。通过TLC监测反应混合物，在原料完全消耗后，反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。粗化合物通过反相制备型HPLC纯化，得到化合物3 1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(5-(甲基磺酰基)-2,3-二氢-1H-茚-2-基)脲(25mg，25％产率)作为甲酸盐。LC纯度:96.44％；m/z:579.3[M+H]+(分子式C29H38N8O3S,计算的分子量578.74)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.79-7.68(m,3H),7.46(d,J＝8Hz,1H),6.52(bs,1H),6.31(bs,1H),4.53-4.58(m,1H),3.86-3.53(m,1H),3.50(t,J＝11.2Hz,1H),3.34-3.29(m,1H),3.11-3.09(m,1H),3.07(s,3H),2.89-2.83(m,2H),2.09-2.02(m,6H),1.79-1.68(m,6H),1.49-1.44(m,2H),1.31-1.22(m,3H)。
实施例31:化合物103的合成
合成方案30：
Figure BDA0003305115970000771
步骤1：合成叔丁基(1-(环丙烷羰基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯
向叔丁基哌啶-4-基氨基甲酸酯(500mg，2.496mmol)和环丙烷羧酸(258mg，2.995mmol)在无水二氯甲烷(8mL)中的溶液在0℃滴加三乙胺(1.03mL，7.489mmol)，然后添加T3P(1.2mL，3.744mmol，乙酸乙酯中的50％溶液)。将反应升温至室温并搅拌12小时。反应完成后，反应混合物用二氯甲烷稀释，用水和盐水洗涤并在无水Na2SO4上干燥。然后将所得溶液浓缩以产生粗产物。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物，得到叔丁基(1-(环丙烷羰基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(480mg，71.6％产率)。LC纯度:85.34％；m/z:269.3[M+H]+(分子式C14H24N2O3,计算的分子量268.36)。
步骤2：合成(4-氨基哌啶-1-基)(环丙基)甲酮
向叔丁基(1-(环丙烷羰基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(480mg，1.791mmol)在无水二氯甲烷(5mL)中的搅拌溶液在0℃滴加二噁烷中的4M HCl(5mL)。将反应混合物缓慢升温至室温并搅拌3小时。在减压下除去溶剂并与甲苯共蒸馏得到粗(4-氨基哌啶-1-基)(环丙基)甲酮(350mg，定量产率)。LC纯度:60.61％；m/z:169.2[M+H]+(分子式C9H16N2O,计算的分子量168.24)。
步骤3：合成苯基(1-(环丙烷羰基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯
向(4-氨基哌啶-1-基)(环丙基)甲酮(350mg，2.083mmol)在无水DMF(5ml)中的搅拌溶液在0℃添加三乙胺(0.86mL，6.249mmol)和氯甲酸苯酯(0.39mL，3.124mmol)。将反应在环境温度下搅拌3小时。通过TLC监测反应，在原料完全转化后，将反应混合物用水稀释，用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。由此获得的粗制品用石油醚洗涤并浓缩，得到苯基(1-(环丙烷羰基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(150mg，25％产率)。LC纯度:90.94％；m/z:289.3[M+H]+(分子式C16H20N2O3,计算的分子量288.35)。
步骤4:合成1-(1-(环丙烷羰基)哌啶-4-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲
向苯基(1-(环丙烷羰基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(150mg，0.5208mmol)在无水DMF(5mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.21mL，1.562mmol)。将反应混合物加热至65℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温，添加中间体L-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(150mg，0.5208mmol)。将反应混合物加热至90℃，保持16小时。反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。粗化合物通过反相制备型HPLC纯化，得到化合物1031-(1-(环丙烷羰基)哌啶-4-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲(12mg，5％产率)作为甲酸盐。LC纯度:95.91％；m/z:482.0[M+H]+(分子式C24H35N9O2，计算的分子量481.61)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.76(s,1H),6.25(bs,2H),4.37-4.24(m,2H),3.81-3.75(m,2H),3.56-3.50(m,1H),2.92-2.87(m,1H),2.30(s,3H),2.14-1.88(m,7H),1.49-1.29(m,7H),0.92-0.79(m,4H)。
实施例32：化合物5的合成
Figure BDA0003305115970000791
步骤1：合成苯基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2基)氨基甲酸酯
向2-氨基-2,3-二氢-1H-茚-5-腈(0.200g，1.03mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液在0℃滴加三乙胺(0.35mL，2.5mmol)，然后添加氯甲酸苯酯(0.13mL，1.03mmol)。将反应在0℃至10℃搅拌2小时。通过TLC监测反应进程，在原料完全消耗后，将反应混合物用二氯甲烷稀释并用水洗涤。分离的有机层在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。所得固体用石油醚研磨，得到苯基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2基)氨基甲酸酯(220mg，产率76.9％)作为白色固体，其用于下一步而无需进一步纯化。LC纯度:91％；m/z:279[M+H]+(分子式C17H14N2O2，计算的分子量278.31)。
步骤2：合成1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-(四氢呋喃-3基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲
向苯基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2基)氨基甲酸酯(0.162g，0.58mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液添加三乙胺(0.24mL,1.74mmol)并将溶液在65℃下加热1小时。1小时后，将反应混合物冷却至室温，然后添加中间体R-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(0.200g，0.58mmol)并将反应在85℃加热16小时。将反应混合物冷却至室温，添加水并用二氯甲烷萃取。有机层在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过反相制备型HPLC纯化，得到化合物5-1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲(50mg，16.2％产率)作为TFA盐。LC纯度:98.62％；m/z:528.3[M+H]+(分子式C28H33N9O2计算的分子量527.63)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.51(d,J＝8Hz,1H),7.59(s,1H),7.53(d,J＝8Hz,1H),7.41(d,J＝7.6Hz,1H),6.63-6.28(m,2H),4.53-4.50(m,2H),4.12-4.08(m,2H),4.01-3.90(m,3H),3.58-3.50(m,2H),2.86-2.84(m,2H),2.48-2.41(m,1H),2.11-2.04(m,5H),1.52-1.46(m,2H),1.38-1.30(m,3H)。
实施例33:化合物7的合成
Figure BDA0003305115970000801
步骤1：合成苯基((1R,3S)-3-(三氟甲基)环己基)氨基甲酸酯
向(1R,3S)-3-(三氟甲基)环己烷-1-胺(0.200g，0.98mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液在0℃滴加三乙胺(0.34mL，2.45mmol)，然后添加氯甲酸苯酯(0.12mL，0.98mmol)。将反应混合物在0℃至10℃搅拌2小时。通过TLC监测反应。原料完全消耗后，反应混合物用二氯甲烷稀释并用水洗涤。分离的有机层在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。所得固体用石油醚研磨，得到苯基((1R，3S)-3-(三氟甲基)环己基)氨基甲酸酯(250mg，87.1％产率)作为白色固体，其用于下一步而无需进一步纯化。LC纯度:97.9％；m/z:288.2[M+H]+(分子式C14H16F3NO2，计算的分子量287.11)。
步骤2:合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-(四氢呋喃-3-基)1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(三氟甲基)环己基)脲
向苯基((1R,3S)-3-(三氟甲基)环己基)氨基甲酸酯(0.167g，0.58mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液添加三乙胺(0.243mL，1.74mmol))并在65℃下加热1小时。1小时后，将反应混合物冷却至室温，然后添加N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(0.200g，0.58mmol)并将反应在85℃下加热16h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释并用二氯甲烷萃取。有机层在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过反相制备型HPLC纯化，得到化合物71-((1R,4R)-4-((4-((5-(四氢呋喃-3-基)1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(三氟甲基)环己基)脲(15mg，5％产率)作为TFA盐。LC纯度:99.49％；m/z:537.2[M+H]+(分子式C25H35F3N8O2计算的分子量536.60)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.70(d,J＝7.28Hz,1H),6.65(s,1H),6.30(d,J＝7.3Hz,1H),4.13-4.02(m,2H),3.95-3.86(m,2H),3.56-3.50(m,3H),2.45-2.38(m,1H),2.35-2.28(m,1H),2.16-2.07(m,6H),1.92-1.89(m,3H),1.56-1.46(m,2H),1.42-1.30(m,4H),1.24-1.10(m,3H)。
实施例34:化合物74的合成
合成方案33：
Figure BDA0003305115970000811
步骤1：合成苯基((1R,4R)-4-((4-((5-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(IS_18000911_40)
向中间体R-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(0.200g，0.58mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液在0℃下滴加三乙胺(0.8mL，1.16mmol)，然后添加氯甲酸苯酯(0.09mL，0.69mmol)。将反应混合物在0℃至10℃搅拌2小时。通过TLC监测反应并且在原料完全消耗之后，将反应混合物用二氯甲烷稀释并用水洗涤。分离的有机层在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。所得固体用石油醚研磨，得到苯基((1R,4R)-4-((4-((5-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(220mg，81.7％产率)作为白色固体。该物质用于下一步而无需进一步纯化。LC纯度:54.5％；m/z:463.3[M]+(分子式C24H29N7O3，计算的分子量463.54)。
步骤2：合成1-(1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-基)-3((1R,4R)-4-((4-((5-(四氢呋喃-3-基))-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2基)氨基)环己基)脲。
向苯基((1R,4R)-4-((4-((5-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.220g，0.47mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液添加三乙胺(0.19mL，1.41mmol)，并将反应混合物在65℃加热1小时。1小时后，将反应混合物冷却至室温，然后添加1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-胺(0.090g，0.47mmol)并将反应在85℃加热16h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释并用二氯甲烷萃取。有机层在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。通过反相制备型HPLC纯化残余物以产生化合物74-1-(1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲(25mg，9.3％产率)作为TFA盐。LC纯度:96.7％；m/z:562.3[M+H]+(分子式C29H40N10O2，计算的分子量560.71)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ8.7(d,J＝4.6Hz,1H),7.94-7.92(m,1H),7.7(d,J＝7.2Hz,1H),7.49-7.46(m,2H),6.65(s,1H),6.30(d,J＝6.6Hz,1H),4.49(s,2H),4.12-4.02(m,2H),3.95-3.89(m,4H),3.58-3.55(m,4H),3.28-3.25(m,1H),2.45-2.40(m,1H),2.18-2.04(m,7H),1.84-1.81(m,2H),1.53-1.36(m,4H)。
实施例35:化合物52的合成
Figure BDA0003305115970000821
步骤1：合成苯基(3-苯基环丁基)氨基甲酸酯
向3-苯基环丁烷-1-胺(200mg，1.36mmol)在无水DMF(4mL)中的冰冷却溶液添加三乙胺(0.56mL，4.08mmol)和氯甲酸苯酯(0.2mL，1.63mmol)。将反应在室温下搅拌3小时。通过TLC分析监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水淬灭并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并在减压下浓缩以获得苯基(3-苯基环丁基)氨基甲酸酯(320mg，粗制品)作为淡黄色固体。粗物质用于下一步而无需任何纯化。LC纯度:18.1％；m/z:268.1[M+H]+(分子式C17H17NO2，计算的分子量267.33)。
步骤2:合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(3-苯基环丁基)脲
向苯基(3-苯基环丁基)氨基甲酸酯(320mg，1.19mmol)在无水DMF(3mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.49mL，3.59mmol)。将反应混合物加热至65℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温并添加中间体E-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(326mg，0.958mmol)。将反应加热至90℃，保持18小时。通过TLC监测反应混合物，原料被消耗。反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物以产生化合物52-1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(3-苯基环丁基)脲(35mg，6％产率)作为TFA盐。LC纯度:96.4％；m/z:515.3[M+H]+(分子式C29H38N8O，计算的分子量514.68)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.67(d,J＝7.2Hz,1H),7.29-7.26(m,4H),7.17-7.15(m,1H),6.29-6.27(m,2H),4.31-4.28(m,1H),3.91-3.85(m,1H),3.54-3.51(m,2H),3.30-3.13(m,1H),2.52-2.46(m,2H),2.38-2.31(m,2H),2.12-1.98(m,6H),1.84-1.67(m,6H),1.52-1.29(m,4H)。
实施例36:化合物73的合成
合成方案35：
Figure BDA0003305115970000841
步骤1：合成叔丁基(1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯
在氮气下向4-(boc-氨基)哌啶(2.0g，9.986mmol)在1,2二氯乙烷(60mL)中的溶液添加2-吡啶甲醛(0.96mL，9.986mmol)和DIPEA(1.76mL,9.986mmol)，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(2.54g，11.983mmol)。将反应混合物在室温搅拌12小时。真空除去溶剂并将残余物溶解在二氯甲烷中。有机层用碳酸氢钠溶液洗涤，用盐水洗涤，分离，在无水Na2SO4上干燥，过滤并浓缩，得到黄色固体。将其溶解在无水甲醇中并向该混合物添加乙醚中的2M HCl(12mL)。将反应在室温下搅拌过夜。滤出所得沉淀，用乙醚洗涤并真空干燥，得到叔丁基(1-吡啶甲酰基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(1.1g，37％产率)作为绿色固体。LC纯度:67.3％；m/z:292.2[M+H]+(分子式C16H25N3O2,计算的分子量291.40)。
步骤2：合成1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-胺
向叔丁基(1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(1.1g，3.43mmol)在无水二氯甲烷(20mL)中的搅拌溶液。将反应混合物冷却至0℃并添加二噁烷中HCl(10mL，4M溶液)。将反应混合物在室温搅拌2小时。通过TLC监测反应混合物的进程，在原料完全消耗后，将所得混合物浓缩以得到1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-胺(1.1g，定量产率)作为盐酸盐。LC纯度:99.6％；m/z:192.3[M+H]+(分子式C11H17N3，计算的分子量191.28)。
步骤3:合成苯基(1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯
在0℃向1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-胺(1.1g，5.76mmol)在无水DMF(15mL)中的溶液添加三乙胺(3.4mL，28.8mmol)和氯甲酸苯酯(0.86mL，6.91mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时。通过TLC分析监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水淬灭并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并在减压下浓缩以获得苯基(1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(600mg，33％产率)作为棕色液体。LC纯度:98.99％；m/z:312.2[M+H]+(分子式C18H21N3O2,计算的分子量311.39)。
步骤4:合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-基)脲
向苯基(1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(600mg，1.926mmol)在无水DMF(6mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.8mL，5.780mmol))。将反应混合物加热至140℃保持2小时。将反应混合物冷却至室温并添加中间体L-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(553mg，1.926mmol)。将反应加热至90℃保持16小时。通过TLC监测反应混合物，原料被消耗。反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物以产生化合物36-1-((1R,4R)-4-((4-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-基)脲(25mg，20％产率)作为TFA盐。LC纯度:96.44％；m/z:505.3[M+H]+(分子式C26H36N10O，计算的分子量504.64)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.47(s,1H),7.81-7.77(m,2H),7.51(d,J＝7.6Hz,1H),7.30-7.27(m,1H),6.29-6.13(m,2H),3.71-3.65(m,3H),3.57-3.51(m,2H),2.89-2.80(m,2H),2.28-2.23(m,6H),2.11-2.08(m,2H),2.01-1.98(m,2H),1.88-1.86(m,2H),1.53-1.43(m,2H),1.39-1.26(m,3H)。
实施例37：化合物16的合成
Figure BDA0003305115970000861
步骤1：合成叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯
将叔丁基((1R,4R)-4-氨基环己基)氨基甲酸酯(1g，4.67mmol)在甲醇(10mL)中的溶液冷却至0℃并添加三氟乙酸乙酯(1.71mL，23.1mmol)。将反应在环境温度下搅拌3小时。通过TLC监测反应完成，反应完成后，将混合物过滤并用冷甲醇洗涤，得到叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯(1.1g，70％产率)。LC纯度:99.7％；m/z:309.0[M-H]+(分子式C22H34N8O2,计算的分子量310.15)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ9.25(d,J＝6Hz,1H),6.75(d,J＝7.8Hz,1H),3.54(d,J＝7.2Hz,1H),3.17(d,J＝5.4Hz,1H),1.77-1.75(m,4H),1.36(s,9H),1.30-1.18(m,4H)。
步骤2：合成叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯。
向叔丁基((1R,4R)-4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯(1.0g，3.21mmol)在无水DMF(10mL)中的悬浮液在0℃分批添加氢化钠(0.16g，6.81mmol)。将稍微混浊的反应混合物在室温搅拌20分钟。然后将反应混合物冷却至0℃并滴加甲基碘(0.24mL，3.81mmol)。将反应在室温下搅拌16小时。反应完成(通过TLC监测)后，将反应混合物倒入冰冷的水中并用柠檬酸中和。滤出形成的沉淀，用水洗涤并真空干燥，得到叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯(0.85g，85％产率)。LC纯度:99.3％；m/z:225.2[M-Boc]+,269.1[M-tBu]+(分子式C14H23N2O3，计算的分子量324.34)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):不干净。
步骤3：合成叔丁基((1R,4R)-4-(甲基氨基)环己基)氨基甲酸酯
将叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯(600mg，1.849mmol)在甲醇(6mL)中的悬浮液在搅拌下加热至50℃直至形成澄清溶液。然后在不断搅拌下向其添加0.6mL 2N NaOH溶液。获得略微混浊的溶液，将其在环境温度下再搅拌2-3小时。浓缩反应混合物，将残余物添加到2N柠檬酸溶液中并用二氯甲烷中的10％甲醇萃取。然后用2N NaOH溶液使其呈碱性，并再次用二氯甲烷中的10％甲醇萃取。合并的有机层在无水Na2SO4上干燥并浓缩，得到叔丁基((1R,4R)-4-(甲基氨基)环己基)氨基甲酸酯(600mg，定量)作为白色固体。LC纯度:95％；m/z:229.2[M+H]+(分子式C12H24N2O2,计算的分子量228.34)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ6.69(d,J＝7.6Hz,1H),3.24-3.14(m,1H),2.25(s,3H),2.20-2.17(m,1H),1.86-1.81(m,2H),1.75-1.72(m 2H),1.39(s,9H),1.24-1.15(m,2H),1.12-1.02(m,3H)。
步骤4：合成叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯
向2-氯-N-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(600mg，2.281mmol)在密封管中的无水DMSO(6.0mL)中的搅拌溶液添加DIPEA(0.78mL，4.562mmol)。将反应混合物冷却至0℃并添加叔丁基((1R,4R)-4-(甲基氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.52g，2.281mmol)。将反应加热至140℃持续16小时。反应混合物用冰冷的水淬灭并用乙酸乙酯萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。通过使用快速柱色谱法230-400硅胶网和甲醇在作为洗脱剂的DCM中纯化获得的粗产物以产生叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(300mg，30％)。LC纯度:72.98％；m/z:456.3[M+H]+(分子式C24H37N7O2，计算的分子量455.61)。
步骤5：合成N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺
向叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.3g，0.659mmol)在无水二氯甲烷(6mL)中的搅拌溶液。将反应混合物冷却至0℃并添加二噁烷中的HCl(3mL，4M溶液)。使反应在室温下搅拌2小时。通过TLC监测反应进程，在原料完全消耗后，将所得混合物浓缩成N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺盐酸盐(300mg，定量产率)。LC纯度:82.6％；m/z:356.2[M+H]+(分子式C19H29N7,计算的分子量355.49)。
步骤6：合成1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)脲
向苯基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(281mg，1.014mmol)在无水DMF(6mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.58mL，4.225mmol)。将反应混合物加热至80℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温和添加N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(300mg,0.845mmol)。将反应加热至85℃，保持16小时。通过TLC监测反应混合物，并且原料被消耗。反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物以产生化合物16-1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)脲(35mg，8％)作为TFA盐。LC纯度:95.08％；m/z:540.2[M+H]+(分子式C30H37N9O，计算的分子量539.69)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.72(d,J＝6.8Hz,1H),7.60(s,1H),7.54(d,J＝7.6Hz,1H),7.42(d,J＝8Hz,1H),6.48(s,1H),6.35(d,J＝6.8Hz,1H),4.56-4.50(m,1H),3.54-3.39(m,1H),3.15-2.91(m,5H),2.89-2.83(m,2H),2.18-2.12(m,4H),1.83-1.70(m,12H),1.39-1.30(m,3H)。
1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)脲的手性分离
通过手性SFC分离各个立体异构体，使用柱：Chiral Pak OX-H流速：5ml/min，共溶剂：50％，共溶剂：甲醇，注射体积：15μl，出口压力：100bar，温度：35℃。收集第一洗脱(RT＝7.72)级分并在减压下浓缩，收集第二洗脱级分并在减压下浓缩(RT＝11.35)。
第一洗脱异构体
LC纯度:99.2％；m/z:540.2[M+H]+(分子式C30H37N9O,计算的分子量539.69)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ7.84(s,1H),7.58(s,1H),7.53(d,J＝8Hz,1H),7.41(d,J＝8Hz,1H),6.55-6.12(m,2H),4.54-4.51(m,2H),3.52-3.46(m,1H),3.32-3.31(m,1H),3.29-3.06(m,2H),2.99(s,3H),2.88-2.82(m,2H),2.08-2.05(m,4H),1.94-1.69(m,10H),1.40-1.30(m,2H)。
第二洗脱异构体
LC纯度:97.6％；m/z:540.2[M+H]+(分子式C30H37N9O,计算的分子量539.69)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ7.84(s,1H),7.58(s,1H),7.53(d,J＝8Hz,1H),7.41(d,J＝8Hz,1H),6.55-6.12(m,2H),4.54-4.51(m,2H),3.52-3.46(m,1H),3.32-3.31(m,1H),3.29-3.06(m,2H),2.99(s,3H),2.88-2.82(m,2H),2.08-2.05(m,4H),1.94-1.65(m,10H),1.37-1.29(m,2H)。
实施例38:化合物8的合成
合成方案38：
Figure BDA0003305115970000891
步骤1：合成2-氯-N-(5-乙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺
将DMSO(10mL)中的2,4-二氯嘧啶(1.6g，10.8mmol)、5-乙基-1H-吡唑-3-胺(1.0g，9.00mmol)和DIPEA(2.3mL，13.5mmol)在60℃下搅拌16小时。通过TLC监测反应进程，在原料完全消耗后，将反应混合物冷却至室温并添加水。过滤沉淀的固体，用石油醚洗涤并真空干燥，得到2-氯-N-(5-乙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(1.4g，70％产率)。LC纯度:91.7％；m/z:224.2[M+H]+(分子式C9H10ClN5，计算的分子量223.66)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ12.16(s,1H),10.30(s,1H),8.15(s,1H),7.24(s,1H),6.16(s,1H),2.60-2.50(m,2H),1.21-1.16(m,3H)。
步骤2：合成叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-乙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯
将DMSO(10mL)中的2-氯-N-(5-乙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(1.0g，4.48mmol)叔丁基((1R,4R)-4-氨基环己基)氨基甲酸酯(1.14g，5.36mmol)和DIPEA(1.14mL，6.71mmol)在110℃下搅拌16小时。通过LCMS监测反应混合物。将反应混合物冷却至室温并用二氯甲烷萃取。有机层用水和盐水洗涤并在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。粗化合物通过Biotage iolera使用(60-120硅胶)用石油醚中的0-10％乙酸乙酯的梯度洗脱纯化，得到叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-乙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.6g，33％产率)。LC纯度:89.98％；m/z:402.3[M+H]+(分子式C20H31N7O2,计算的分子量401.52)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ11.87(s,1H),9.31(s,1H),7.77(s,1H),6.76(s,1H),6.42-6.15(m,2H),3.61-3.55(m,1H),3.33-3.20(m,1H),2.56-2.50(m,2H),1.92-1.80(m,4H),1.38(s,9H),1.25-1.17(m,3H),1.08-0.93(m,3H)。
步骤3：合成N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-乙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺
向叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-乙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.3g，0.725mmol)在无水二氯甲烷(6mL)中的搅拌溶液。将反应混合物冷却至0℃并添加二噁烷中的HCl(3mL，4M溶液)。使反应在室温下搅拌2小时。将所得混合物浓缩成N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-乙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(0.3g，定量产率)盐酸盐。LC纯度:93.5％；m/z:302.2[M+H]+(分子式C15H23N7,计算的分子量301.40)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ12.21(s,1H),11.22(s,1H),8.56(s,1H),8.23-7.80(m,4H),6.43-6.30(m,2H),3.56(s,3H),3.03-2.88(m,1H),2.03-1.71(m,4H),1.59-1.43(m,4H),1.25-1.12(m,3H)。
步骤6：合成1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-乙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲
向苯基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(0.221g，0.798mmol)在无水DMF(4.0mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.3mL，1.99mmol)。将反应混合物加热至65℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温并添加N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-乙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(0.2g，0.665mmol)。将反应加热至85℃持续16小时。通过TLC监测反应进程，在原料完全转化后，将反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物，得到化合物8-1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-乙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲(225mg，9％)作为TFA盐。LC纯度:99.01％；m/z:486.3[M+H]+(分子式C26H31N9O,计算的分子量485.60)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.69(s,1H),7.56(s,1H),7.51(d,J＝8.0Hz,1H),7.39(d,J＝7.6Hz,1H),6.60(s,1H),6.33(s,1H),4.59-4.49(m,1H),3.82-3.85(m,1H),3.57-3.49(m,1H),3.29-3.27(m,2H),2.90-2.82(m,2H),2.73-2.67(m,2H),2.14-2.04(m,4H),1.55-1.46(m,2H),1.34-1.26(m,5H)。
实施例39:化合物21的合成
合成方案39：
Figure BDA0003305115970000911
步骤1：合成2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺
将2,4-二氯嘧啶(1.45g，9.76mmol)、5-环丙基-1H-吡唑-3-胺(1.0g，8.13mmol)和DIPEA(2.12mL，12.2mmol)在DMSO(10mL)中的混合物在60℃下搅拌16小时。在原料完全消耗后通过TLC监测反应进程，将反应混合物冷却至室温，添加水，并沉淀出固体产物。过滤固体，用石油醚洗涤并在真空下干燥，得到2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(1.2g，63％产率)。LC纯度:96.69％；m/z:210.2[M+H]+(分子式C10H10ClN5，计算的分子量235.68)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ12.18(s,1H),10.26(s,1H),8.14(d,J＝5.7Hz,1H),7.20(s,1H),6.01(s,1H),1.92-1.86(m,1H),0.96-0.89(m,2H),0.71-0.69(m,2H)。
步骤2:合成叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯
将2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(0.9,3.82mmol)、叔丁基((1R,4R)-4-氨基环己基)氨基甲酸酯(0.98g，4.59mmol)和DIPEA(0.98mL，5.73mmol)在DMSO(10mL)中的混合物在110℃下搅拌16h。通过LCMS监测反应混合物，将反应混合物冷却至室温，添加水并用二氯甲烷萃取。有机层在无水Na2SO4上干燥并浓缩以得到残余物。残余物通过硅胶柱色谱法用石油醚中的0-10％乙酸乙酯的梯度洗脱纯化，得到叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.54g，35％产率)。LC纯度:87.4％；m/z:414.2[M+H]+(分子式C21H31N7O2,计算的分子量413.53)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ9.26(s,1H),7.75(s,1H),6.75(s,1H),6.41-6.12(m,3H),3.59-3.45(m,1H),3.17(m,1H),1.92-1.80(m,5H),1.38-1.25(m,14H),0.91-0.90(m,2H),0.67-0.58(m,2H)。
步骤3:合成N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺
将叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.3g，0.725mmol)在二氯甲烷(6mL)中的搅拌溶液冷却至0℃并添加二噁烷中的HCl(3mL，4M溶液)。使反应在室温下搅拌2小时。通过TLC监测反应进程，在原料完全消耗后，将所得混合物浓缩成N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(300mg，定量产率)作为盐酸盐。LC纯度:89.2％；m/z:314.2[M+H]+(分子式C16H23N7，计算的分子量313.41)。
步骤4：合成1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲
向苯基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(0.21g，0.767mmol)在无水DMF(4.0mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.27mL，1.92mmol)。将反应混合物加热至65℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温和添加N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(0.2g，1.92mmol)。将反应加热至85℃持续16小时。通过TLC监测反应进程，在原料完全消耗后，将反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物以产生化合物21-1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲(35mg，12％)作为TFA盐。LC纯度:98.98％；m/z:498.3[M+H]+(分子式C27H31N9O，计算的分子量497.61)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.68(d,J＝6Hz,1H),7.56(s,1H),7.51(d,J＝7.6Hz,1H),7.39(d,J＝7.6Hz,1H),6.37(s,1H),6.29(s,1H),4.57-4.49(m,1H),3.89-3.82(m,1H),3.57-3.51(m,1H),3.29-3.27(m,2H),2.90-2.82(m,2H),2.13-2.05(m,4H),1.96-1.90(m,1H),1.55-1.46(m,2H),1.35-1.27(m,2H),1.04-1.00(m,2H),0.99-0.75(m,2H)。
实施例40：化合物81的合成
合成方案40：
Figure BDA0003305115970000931
步骤1:合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)硫脲
向2-((4-氨基苯基)硫代)-N-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(0.15g，0.42mmol)在二氯甲烷(2mL)中的搅拌溶液在0℃下添加3-三氟甲基苯基异硫氰酸酯(0.08g，0.42mmol)。将所得反应在室温下搅拌16小时。通过TLC监测反应完成，然后将反应混合物冷却至室温，然后通过烧结漏斗滤出所得白色沉淀物，固体用二氯甲烷洗涤数次，得到粗1-(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)硫代)苯基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲(0.06g，26％)作为白色固体，其用于下一步而无需进一步纯化。LC纯度:33.1％；m/z:545.3[M+H]+(分子式C26H31F3N8S,计算的分子量544.65)。
步骤2:合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)胍
向1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)硫脲(0.5g，0.42mmol)的冷却的0℃溶液添加甲醇中的4M氨(10mL)。将所得反应混合物在0℃搅拌30分钟。然后添加DIPEA(0.5mL，w/v)，接着添加DCC(0.5g，w/w)。将反应混合物在环境温度下搅拌16小时。通过LCMS监测反应进程，在原料完全消耗后，浓缩反应混合物。将粗制品添加水并用二氯甲烷中的10％甲醇萃取。有机层在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得残余物。残余物通过反相制备型HPLC纯化，得到1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)胍(25mg，5％)作为甲酸盐。LC纯度:99.75％；m/z:526.3[M+H]-(分子式C26H32F3N9,计算的分子量527.6)。11H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.77(d,J＝6.4Hz,1H),7.68-7.62(m,2H),7.58-7.53(m,2H),6.28(d,J＝6.4Hz,1H),6.16(s,1H),3.82-7.75(m,1H),3.63-3.58(m,1H),3.12-3.08(m,1H),2.22-2.06(m,6H),1.83-1.76(m,2H),1.76-1.66(m,4H),1.64-1.50(m,4H)。
实施例41：化合物87的合成
合成方案41：
Figure BDA0003305115970000951
步骤1：合成1-(3-氰基苯基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)硫脲
向中间体E-N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(0.5g，1.46mmol)在二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液在0℃下添加3-异硫氰酸苯丙腈(0.235g，1.46mmol)。所得反应混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC监测反应完成。原料消耗完后，使反应混合物升温至室温，然后用浓HCl酸化，然后使用烧结漏斗回收所得白色沉淀物，固体用二氯甲烷洗涤数次，得到1-(3-氰基苯基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)硫脲(0.5g，粗)作为白色固体。LC纯度:83.04％；m/z:502.3[M+H]+(分子式C26H31N9S,计算的分子量501.66)。
步骤2：合成1-(3-氰基苯基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)胍
向1-(3-氰基苯基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)硫脲(0.5g，0.42mmol)的冷却的0℃溶液添加甲醇中的4M氨(10mL)。将所得反应混合物在0℃搅拌30分钟。然后添加DIPEA(0.5mL，w/v)，接着添加DCC(0.5g，w/w)。将反应在环境温度下搅拌16小时。通过LCMS监测反应进程。原料完全消耗后，浓缩反应混合物。将粗制品添加水并用二氯甲烷中的10％甲醇萃取。有机层在无水Na2SO4上干燥并浓缩以得到残余物。残余物通过反相制备型HPLC纯化，得到化合物871-(3-氰基苯基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)胍(40mg，10％)作为TFA盐。LC纯度:99.54％；m/z:483.3[M-H]+(分子式C26H32N10，计算的分子量484.61)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ7.76(s,1H),7.67-7.57(m,4H),6.31(s,1H),6.20(s,1H),3.82-3.75(m,1H),3.59-3.57(m,1H),3.13-3.09(m,1H),2.21-2.07(m,6H),1.81-1.64(m,6H),1.60-1.45(m,4H)。
实施例42:化合物104的合成
合成方案42：
Figure BDA0003305115970000961
步骤1:合成苯基((1R,3S)-3-(三氟甲基)环己基)氨基甲酸酯
在0℃向(1R,3S)-3-(三氟甲基)环己-1-胺(200mg，0.985mmol)在无水DMF(5mL)中的溶液添加三乙胺(0.41mL，2.95mmol)和氯甲酸苯酯(0.15mL，1.18mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时。通过TLC分析监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水淬灭并用DCM萃取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并在减压下浓缩以获得苯基((1R,3S)-3-(三氟甲基)环己基)氨基甲酸酯(220mg，粗制品)作为淡黄色固体。粗物质用于下一步而无需纯化。LC纯度:48.3％；m/z:288.3[M+H]+(分子式C14N16F3NO2，计算的分子量287.28)。
步骤2：合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-((1R,3S)-3-(三氟甲基)环己基)脲
向苯基((1R,3S)-3-(三氟甲基)环己基)氨基甲酸酯(220mg，0.766mmol)在无水DMF(5mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.32mL，2.298mmol)。将反应混合物加热至65℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温并添加N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(238mg，0.766mmol)。将反应混合物加热至85℃，保持24小时。通过TLC监测反应混合物，原料被消耗。反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物以产生化合物104-1-((1R,4R)-4-((4-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)-3-((1R,3S)-3-(三氟甲基)环己基)脲(30mg，20％产率)作为甲酸盐。LC纯度:98.72％；m/z:481.8[M+H]+(分子式C22H31F3N8O,计算的分子量480.54)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.75(d,J＝6Hz,1H),6.22(d,J＝6.0Hz,1H),6.17(s,1H),3.77-3.71(m,1H),3.55-3.48(m,2H),2.28(s,3H),2.25-2.22(m,1H),2.20–2.12(m,3H),2.09-2.01(m,2H),1.95-1.87(m,3H),1.47-1.33(m,6H),1.29-1.16(m,3H)。
实施例43:化合物105的合成
合成方案44：
Figure BDA0003305115970000971
步骤1：合成苯基((1S,2R)-1-甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯
向(1S,2R)-1-甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-2-胺(250mg，1.533mmol)在无水DCM(5mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.3mL，2.300mmol)。将反应混合物冷却至0℃并添加氯甲酸苯酯(280mg，1.840mmol)。将反应在室温下搅拌3小时。通过TLC监测反应，在原料消耗后，反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。用石油醚洗涤粗化合物并浓缩以产生苯基((1S,2R)-1-甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(200mg，46％产率)。LC纯度:93.20％；m/z:282.3[M-H]+(分子式C17H17NO3，计算的分子量283.33)。
步骤2：合成1-((1S,2R)-1-甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基脲
向苯基((1S,2R)-1-甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(200mg，0.711mmol)在无水DMF(2mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.3mL，2.135mmol)。将反应混合物加热至65℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温并添加N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.711mmol)。将反应加热至90℃持续16小时。在原料完全转化后通过TLC监测反应，将反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。粗化合物通过反相制备型HPLC纯化，得到化合物106-1-((1S,2R)-1-甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲(30mg，35％产率)作为TFA盐。LC纯度:97.70％；m/z:477.3[M+H]+(分子式C25H32N8O2，计算的分子量476.59)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.68(s,1H),7.23-7.21(m,4H),6.94(s,1H),6.11(d,J＝138.80Hz,1H),4.47-4.45(m,2H),3.90-3.89(m,1H),3.41(s,1H),3.32-3.31(m,3H),3.12-3.10(m,1H),2.84-2.83(m,1H),2.34(s,3H),2.07(t,J＝12.40Hz,4H),1.52(d,J＝10.80Hz,2H),1.33(t,J＝9.60Hz,2H)。
实施例44：合成1-((1R,4S)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-3-((1S,3R)-3-(三氟甲基)环己基)脲(化合物121)
Figure BDA0003305115970000981
步骤1:合成苯基((1S,3R)-3-(三氟甲基)环己基)氨基甲酸酯
在0℃向外消旋顺式-(1S,3R)-3-(三氟甲基)环己-1-胺(500mg，2.99mmol)在无水DCM(10mL)中的溶液添加三乙胺(1.03mL,7.48mmol)和氯甲酸苯酯(0.35mL，2.99mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时。通过TLC分析监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水淬灭并用DCM萃取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并在减压下浓缩，得到苯基((1S,3R)-3-(三氟甲基)环己基)氨基甲酸酯(650mg，76％)作为白色固体。LC纯度:99％；m/z:288.3[M+H]+(分子式C14H16F3NO2,计算的分子量287.28)。
步骤2:合成1-((1R,4S)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-3-((1S,3R)-3-(三氟甲基)环己基)脲
向苯基((1S,3R)-3-(三氟甲基)环己基)氨基甲酸酯(404mg，1.406mmol)在无水DMF(10mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.58mL，4.218mmol)。将反应混合物加热至80℃保持2小时。然后将反应冷却至室温并添加N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(500mg，1.406mmol)。将反应混合物加热至85℃保持24小时。通过TLC监测反应混合物的进程，消耗原料。反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。粗化合物通过反相制备型HPLC纯化，得到1-((1R,4R)-4-((4-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-环己基)-3-((1S,3R)-3-(三氟甲基)环己基)脲(140mg，18％产率)作为TFA盐。LC纯度:99.7％；m/z:549.3[M+H]+(分子式C27H39F3N8O,计算的分子量548.66)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.72(d,J＝6.8Hz,1H),6.49(s,1H),6.35(d,J＝6.8Hz,1H),3.56-3.50(m,2H),3.33-3.08(m,4H),2.28-2.26(m,1H),2.16-2.14(m,5H),1.95-1.73(m,14H),1.46-1.30(m,3H),1.24-1.06(m,3H)。
1-((1R,4S)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-3-((1S,3R)-3-(三氟甲基)环己基)脲的手性分离
甲醇中的0.5％异丙胺％共溶剂：甲醇，注射体积：15μl，出口压力：100bar，温度：35℃。收集第一洗脱(RT＝4.91)级分并在减压下浓缩，收集第二洗脱(RT＝5.91)级分并在减压下浓缩。
第一洗脱异构体
LC纯度:99.8％；m/z:549.3[M+H]+(分子式C27H39F3N8O,计算的分子量548.66)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ7.72(s,J＝6.56Hz,1H),6.49(s,1H),6.35(d,J＝6.92Hz,1H),4.89(s,1H),3.57-3.50(m,2H),3.33-3.08(m,4H),2.29-2.25(m,2H),2.17-2.14(m,5H),1.95-1.73(m,12H),1.40-1.20(m,3H),1.17-1.07(m,3H)。
第二洗脱异构体
LC纯度:99.4％；m/z:549.3[M+H]+(分子式C27H39F3N8O,计算的分子量548.66)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ7.72(s,J＝6.56Hz,1H),6.49(s,1H),6.35(d,J＝6.92Hz,1H),4.89(s,1H),3.57-3.50(m,2H),3.33-3.08(m,4H),2.29-2.25(m,2H),2.17-2.14(m,5H),1.95-1.73(m,12H),1.40-1.20(m,3H),1.17-1.07(m,3H)。
实施例45:合成1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)脲(化合物142)
Figure BDA0003305115970001001
步骤1：合成叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯
在0℃向叔丁基((1R,4R)-4-氨基环己基)氨基甲酸酯(60g，279mmol)在甲醇(600mL)中的溶液添加三氟乙酸乙酯(40.11mL，336mmol)。添加完成后，将反应在环境温度下搅拌6小时。通过TLC监测反应，在原料完全消耗之后，过滤反应物料并且用冷甲醇洗涤固体以产生叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯(60g，69％)作为白色固体。LC纯度:99.8％；m/z:309.2[M-H]-(分子式C13H21F3N2O3,计算的分子量310.32)。
步骤2：合成叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯
将叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯(30g，96.67mmol)在无水DMF(300mL)中的溶液冷却至0℃并分批添加氢化钠(4.9g，203.2mmol，在矿物油中的60％)。将反应混合物在0℃搅拌1小时，然后添加甲基碘(7.2mL，116.0mmol)。将反应物料在环境温度下搅拌16小时。通过LCMS监测反应，在原料完全消耗后，反应混合物用冰水稀释并用2N柠檬酸溶液中和。将所得白色沉淀通过烧结漏斗滤出并用水充分洗涤，真空干燥得到叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯(29g，92％)。LC纯度:92.6％；m/z:225.2[M-Boc]+(分子式C14H23F3N2O3,计算的分子量324.34)。
步骤3：合成叔丁基((1R,4R)-4-(甲基氨基)环己基)氨基甲酸酯
将叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯(40g，0.123mol)在甲醇(400mL)中的悬浮液在50℃下搅拌直至形成澄清溶液。然后在恒定搅拌下向其添加2N NaOH溶液(80mL)。在环境温度下进一步搅拌所得的轻微混浊溶液3小时。通过LCMS监测反应，在原料完全消耗后，将反应在减压下浓缩以得到残余物。将残余物添加2N柠檬酸溶液并用二氯甲烷中的10％甲醇萃取。然后用2NNaOH溶液使水层呈碱性并再次用DCM:MeOH(9:1)萃取。合并的有机层在无水硫酸钠上干燥并浓缩，得到叔丁基((1R,4R)-4-(甲基氨基)环己基)氨基甲酸酯(23g，81％)作为白色固体。LC纯度:96％；m/z:229.4[M+H]+(分子式C12H24N2O2,计算的分子量228.34)
步骤4：合成2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺
向5-环丙基-1H-吡唑-3-胺(1.0g，8.13mmol)在DMSO(10mL)中的搅拌溶液添加DIPEA(2.12mL，12.2mmol)和2,4-二氯嘧啶(1.45g，9.76mmol)。将反应加热至60℃保持16小时。原料完全消耗后，通过TLC监测反应进程，用冰水淬灭反应混合物，过滤固体，用二氯甲烷洗涤并在真空下干燥，得到2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(1.2g，63％产率)作为白色固体。LC纯度:87％；m/z:236.1[M+H]+(分子式C10H10ClN5,计算的分子量235.68)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.10(s,1H),10.26(s,2H),8.15(d,1H),7.20(s,1H),6.01(s,1H),1.92-1.86(m,1H),0.96-0.89(m,2H),0.70(d,J＝8.0Hz,2H)。
步骤5：合成叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯
向2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(0.5g，2.131mmol)在DMSO(5mL)中的溶液添加DIPEA(0.74mL),4.252mmol)和叔丁基((1R,4R)-4-(甲基氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.58g，2.550mmol)。将反应混合物加热至140℃持续24小时。在原料完全消耗后(通过TLC监测)，将反应混合物冷却至室温并添加水。因此，通过用水和石油醚洗涤的烧结漏斗过滤获得的白色固体，然后在真空下干燥。粗制品通过Biotage-Isolera使用硅胶(230-400目)以石油醚中0-85％乙酸乙酯的梯度洗脱纯化，得到叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.3g，32％)作为白色固体。LC纯度:76％；m/z:428.4[M+H]+(分子式C22H33N7O2，计算的分子量427.55)。
步骤6:合成N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺
将叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.35g，0.818mmol)在无水DCM(7mL)中的搅拌溶液冷却至0℃并添加二噁烷中的HCl(3.5mL，4M溶液)。使反应在室温下搅拌3小时。在原料完全消耗后通过TLC监测反应进程，将所得混合物浓缩并与石油醚一起研磨并在高真空下浓缩以产生N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(0.35g，定量产率)作为盐酸盐。LC纯度:54％；m/z:328.3[M+H]+(分子式C17H25N7,计算的分子量327.44)。
步骤7：合成1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)脲
向苯基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(169mg，0.612mmol)在DMF(4.0mL)中的溶液添加三乙胺(0.25mL，1.832mmol)并将所得反应逐渐加热至85℃保持2小时。将反应冷却至室温并添加N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.612mmol)。将反应混合物加热至85℃持续24小时。在原料完全消耗后通过TLC监测反应进程，将反应混合物浓缩，然后添加水并用二氯甲烷中的10％甲醇萃取。合并的有机层用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥并浓缩。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物以产生1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)脲(30mg，10％产率)作为TFA盐。LC纯度:97.6％；m/z:512.2[M+H]+(分子式C28H33N9O，计算的分子量511.63)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.78(s,1H),7.72(d,J＝6.36Hz,1H),7.54(d,J＝7.64Hz,1H),7.42(d,J＝7.76Hz,1H),6.36-6.33(m,2H),4.54-4.51(m,2H),3.52(d,J＝10.36Hz,1H),3.33-3.28(m,2H),3.07(s,3H),2.91-2.83(m,2H),2.13(d,J＝6.92Hz,2H),1.95(d,J＝4.88Hz,1H),1.84(s,4H),1.40-1.33(m,2H),1.06-1.03(m,2H),0.81-0.65(m,2H)。
实施例46:合成3-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-1-甲基脲(化合物143)
Figure BDA0003305115970001031
步骤1：合成叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯
在0℃向叔丁基((1R,4R)-4-氨基环己基)氨基甲酸酯(60g，279mmol)在甲醇(600mL)中的溶液添加三氟乙酸乙酯(40.11mL，336mmol))。添加完成后，将反应物料在环境温度下搅拌6小时。通过TLC监测反应，在完全消耗原料后，过滤反应物料并且用冷甲醇洗涤获得的固体以产生叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯(60g，69％)作为白色固体。LC纯度:99.8％；m/z:309.2[M-H]-(分子式C13H21F3N2O3，计算的分子量310.32)。
步骤2：合成叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯
将叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯(30g，96.67mmol)在无水DMF(300mL)中的溶液冷却至0℃和分批添加氢化钠(4.9g，203.2mmol，在矿物油中的60％)。将反应混合物在0℃搅拌1小时，然后添加甲基碘(7.2mL，116.0mmol)。将反应物料在环境温度下搅拌16小时。通过LCMS监测反应，在消耗大部分原料后，将反应混合物倒在冰水上并使用2N柠檬酸溶液中和。所得白色沉淀经烧结漏斗滤出，用水充分洗涤并在真空下干燥，得到叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯(29g，92％)。LC纯度:92.6％；m/z:225.2[M-Boc]+(分子式C14H23F3N2O3，计算的分子量324.34)。
步骤3:合成叔丁基甲基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯
将叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯(2.0g，6.19mmol)在无水DMF(20mL)中的溶液冷却至0℃和分批添加氢化钠(0.74g，30.87mmol)。将反应物料在0℃搅拌30分钟，然后添加甲基碘(0.77mL，12.34mmol)。将反应在环境温度下搅拌16小时。通过LCMS监测反应，在原料完全消耗后，将反应混合物倒在冰水上并用2N柠檬酸溶液中和。所得白色沉淀经烧结漏斗过滤，用水充分洗涤并在真空下干燥，得到叔丁基甲基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯(1.6g，76.9％)。LC纯度:85％；m/z:239.2[M-Boc]+(分子式C15H25F3N2O3，计算的分子量338.37)。
步骤4：合成叔丁基甲基((1R,4R)-4-(甲基氨基)环己基)氨基甲酸酯
将叔丁基甲基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯(1.6g，6.61mmol)在甲醇(16mL)中的悬浮液加热至50℃搅拌直至形成澄清溶液。然后在不断搅拌下向其添加2N NaOH溶液(8mL)，直到我们得到略微混浊的沉淀物，将其在室温下进一步搅拌3小时。通过LCMS监测反应，在原料完全消耗后，将反应混合物在减压下浓缩以得到残余物。将由此获得的残余物溶解在2N柠檬酸溶液中并用二氯甲烷中的10％甲醇萃取。分离的水层用2N NaOH溶液碱化并再次用DCM:MeOH(9:1)萃取。将合并的有机层在无水硫酸钠上干燥并浓缩，得到叔丁基甲基((1R,4R)-4-(甲基氨基)环己基)氨基甲酸酯(750mg，粗制品)作为白色固体。LC纯度:57％；m/z:未离子化(分子式C13H26N2O2，计算的分子量242.36)。
步骤5：合成叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)(甲基)氨基甲酸酯
在20mL微波小瓶中，向2-氯-N-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(300mg，1.138mmol)、叔丁基甲基((1R,4R)-4-(甲基氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.28g，1.138mmol)在正丁醇(6mL)中的混合物添加DIPEA(0.4mL，2.276mmol)。将反应混合物在微波中在160℃加热2小时。在原料完全消耗后通过TLC监测反应进程，将反应混合物冷却至室温并浓缩以除去正丁醇。通过柱色谱法使用硅胶(230-400目)用石油醚中的0-100％乙酸乙酯的梯度洗脱纯化获得的残余物，以得到叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)(甲基)氨基甲酸酯(300mg，56％)。LC纯度:83％；m/z:470.3[M+H]+(分子式C25H39N7O2,计算的分子量469.63)。
步骤6:合成N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-((1R,4R)-4-(甲基氨基)环己基)嘧啶-2,4-二胺
将叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)(甲基)氨基甲酸酯(300mg，0.64mmol)在DCM(6.0mL)中的溶液冷却至0℃并添加在1,4二噁烷中的4M盐酸(3.0mL)。使反应物料在室温下搅拌3小时。通过TLC监测反应，原料消耗后，将反应混合物浓缩以得到N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-((1R,4R)-4-(甲基氨基)环己基)嘧啶-2,4-二胺(300mg，定量产率)作为盐酸盐。LC纯度:85％；m/z:370.1[M+H]+(分子式C18H27N7，计算的分子量369.52)。
步骤7：合成3-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-1-甲基脲
在0℃向苯基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(151mg，0.542mmol)在DMF(14mL)中的溶液添加三乙胺(0.23mL，1.63mmol)。将反应物料在0℃下搅拌1小时。然后分批添加N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-((1R,4R)-4-(甲基氨基)环己基)嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.542mmol)，并将反应混合物加热至85℃持续24小时。在原料完全消耗后通过TLC监测反应进程，浓缩反应混合物，用水稀释并使用二氯甲烷中的10％甲醇萃取。合并的有机层用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥并浓缩。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物以产生3-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-1-甲基脲(25mg，8％产率)作为TFA盐。LC纯度:98.9％；m/z:554.2[M+H]+(分子式C31H39N9O，计算的分子量553.72)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.78(s,1H),7.57(s,1H),7.53(d,J＝7.68Hz,1H),7.40(d,J＝7.76Hz,1H),6.37(m,2H),4.63-4.59(m,2H),4.12(s,1H),3.37-3.35(m,1H),3.06-2.94(m,6H),2.94(s,3H),2.14(d,J＝5.6Hz,2H),1.88-1.67(m,15H)。
实施例47:合成1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环丁基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)脲(化合物144)
Figure BDA0003305115970001071
步骤1：合成2-氯-N-(5-环丁基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺
向5-环丁基-1H-吡唑-3-胺(3g，21.89mmol)在DMSO(15mL)中的搅拌溶液添加2,4-二氯嘧啶(3.88g，26.27mmol)和DIPEA(5.72mL，32.84mmol)。将反应混合物加热至60℃保持16h。反应完成(通过TLC监测)后，将反应混合物倒入冰冷的水中。滤出形成的沉淀，用水和石油醚洗涤，然后在真空下干燥，得到2-氯-N-(5-环丁基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(3.2g，58.69％)。LC纯度:87.6％；m/z:250.0[M+H]+(分子式C11H12ClN5，计算的分子量249.70)。
步骤2：合成叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环丁基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯
在20mL微波小瓶中，向叔丁基((1R,4R)-4-(甲基氨基)环己基)氨基甲酸酯(3.2g，14.035mmol)、2-氯-N-(5-环丁基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(2.79g，11.22mmol)在正丁醇(30mL)中的混合物添加DIPEA(7.33mL，42.105mmol)。反应在微波中加热至160℃保持4小时。将反应混合物冷却至室温并浓缩以除去正丁醇。将由此获得的残余物通过Biotageisolera使用硅胶(230-400目)柱色谱以二氯甲烷中的0-10％甲醇的梯度洗脱纯化，以获得叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环丁基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(1.15g，18.58％)。LC纯度:93.4％；m/z:442.2[M+H]+(分子式C23H35N7O2，计算的分子量441.58)。
步骤3：合成N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环丁基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺
将叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环丁基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(1.15g，2.607mmol)在二氯甲烷(12mL)中的搅拌溶液冷却至0℃并添加二噁烷中的HCl(10mL，4M溶液)。使反应物料在室温下搅拌1小时。原料完全消耗后(通过TLC监测)，浓缩反应混合物以得到N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环丁基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(1.1g，定量产率)。LC纯度:98.2％；m/z:342.3[M+H]+(分子式C18H27N7，计算的分子量341.46)。
步骤4：合成1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环丁基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)脲
向苯基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(896.7mg，3.225mmol)在无水DMF(10mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(1.35mL，9.677mmol)。将反应混合物在0℃至室温搅拌1小时。将反应冷却至室温并添加N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环丁基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(1.1g，3.225mmol)。将反应物料加热至85℃持续16小时。在原料完全转化后(通过TLC监测)，将反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。分离的有机层用水、盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。由此获得的粗制品通过反相制备型HPLC纯化，得到1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环丁基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)脲(530mg，31.3％)作为TFA盐。LC纯度:99.86％；m/z:526.1[M+H]+(分子式C29H35N9O，计算的分子量525.66)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.74(d,J＝6.4Hz,1H),7.59(s,1H),7.54(d,J＝8Hz,1H),7.42(d,J＝7.6Hz,1H),6.54(s,1H),6.35(s,1H),4.54-4.51(m,2H),3.61-3.53(m,2H),3.08(s,3H),2.90–2.83(m,2H),2.13-2.05(m,2H),2.44–2.40(m,2H),2.26-2.21(m,2H),2.14-2.07(m,3H),1.96-1.85(m,5H),1.45-1.35(m,2H)。
实施例48:合成1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-(3,3-二氟环丁基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)脲(化合物145)
Figure BDA0003305115970001091
步骤1：合成3-(3,3-二氟环丁基)-3-氧代丙腈
在65℃下向氢化钠(1.06g，26.6mmol)在THF(600mL)中的浆液滴加3,3-二氟环丁烷-1-羧酸甲酯(2g，13.3mmol)和乙腈(1.4mL，26.6mmol)的混合物。将反应混合物在65℃搅拌12小时。在原料完全消耗后通过TLC监测反应进程，将反应物料倒入冰中并用乙醚萃取。使用1.5N HCl将水层酸化至pH＝4-5，然后用乙醚萃取。分离的有机层在无水Na2SO4上干燥，过滤并浓缩溶剂，得到3-(3,3-二氟环丁基)-3-氧代丙腈(1.7g，80.1％产率)。LC纯度:未离子化(分子式C7H7F2NO，计算的分子量159.14)。
步骤2：合成5-(3,3-二氟环丁基)-1H-吡唑-3-胺
向3-(3,3-二氟环丁基)-3-氧代丙腈(1.7g，10.69mmol)在乙醇(20mL)中的搅拌溶液添加水合肼(1.069mL，21.38mmol)。将反应混合物加热至80℃保持3小时。原料完全消耗后，通过TLC监测反应进程，将反应混合物在减压下浓缩，粗制品用乙醚洗涤，得到5-(3,3-二氟环丁基)-1H-吡唑-3-胺(1.7g，92.3％)。LC纯度:87.15％；m/z:174.1[M+H]+(分子式C7H9F2N3，计算的分子量173.17)。
步骤3：合成2-氯-N-(5-(3,3-二氟环丁基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺
向5-(3,3-二氟环丁基)-1H-吡唑-3-胺(1.7g，9.82mmol)在DMSO(10mL)中的搅拌溶液添加DIPEA(2.56mL，14.73mmol)和2,4-二氯嘧啶(1.74g，11.78mmol)。将反应加热至60℃保持12小时。原料完全消耗后通过TLC监测反应进程，反应用乙酸乙酯稀释并用水洗涤，有机层在无水硫酸钠上干燥，过滤并在减压下浓缩。粗制品通过Biotage-Isolera使用硅胶(230-400目)以石油醚中的0-60％乙酸乙酯的梯度洗脱纯化，得到2-氯-N-(5-(3,3-二氟环丁基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(900mg，32.14％)。LC纯度:93.4％；m/z:286,288[M+H]+(分子式C11H10ClF2N5计算的分子量285.68)。
步骤4：合成叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-(3,3-二氟环丁基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯
在20mL微波小瓶中，向2-氯-N-(5-(3,3-二氟环丁基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(0.900g，3.15mmol)在正丁醇(10mL)中的混合物添加DIPEA(1.65mL，9.45mmol)和叔丁基((1R,4R)-4-(甲基氨基)环己基)氨基甲酸酯(1.44g，6.31mmol)。使反应混合物经受160℃微波加热2h，原料完全消耗后(通过TLC监测)，反应混合物在减压下浓缩以除去正丁醇，粗制品通过Biotage-Isolera使用硅胶(230-400目)以0-80％石油醚-乙酸乙酯的梯度洗脱纯化以得到叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-(3,3-二氟环丁基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(450mg，30％)。LC纯度:59.4％；m/z:478.3[M+H]+(分子式C23H33F2N7O2，计算的分子量477.56)。
步骤5：合成N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-(3,3-二氟环丁基)-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺
将叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-(3，3-二氟环丁基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.450g，0.94mmol)在无水DCM(4mL)中的搅拌溶液冷却至0℃并添加二噁烷中的HCl(5mL，4M溶液)。使反应物料在室温下搅拌3小时。通过TLC监测反应进程。原料完全消耗后，将反应混合物浓缩并用石油醚研磨并在高真空下浓缩以产生N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-(3,3-二氟环丁基)-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺作为盐酸盐(380mg，定量产率)。LC纯度:95.79％；m/z:378.3[M+H]+(分子式C18H25F2N7，计算的分子量377.74)。
步骤6：合成1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-(3,3-二氟环丁基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)脲
向苯基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2基)氨基甲酸酯(0.147g，0.53mmol)在无水DMF(6mL)中的溶液添加三乙胺(0.22mL，1.59mmol)并在65℃下加热1h。1小时后，将反应混合物冷却至室温，然后添加N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-(3,3-二氟环丁基)-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(0.200g，0.53mmol)并且将反应在85℃加热16小时。将反应混合物冷却至室温，用水稀释并用二氯甲烷萃取。有机层在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过反相制备型HPLC纯化，得到1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-(3,3-二氟环丁基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)脲(70mg，23.5％)作为TFA盐。LC纯度:98.3％；m/z:562.5[M+H]+(分子式C29H33F2N9O，计算的分子量561.64)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ7.74(d,J＝7.2Hz,1H),7.59(s,1H),7.54(d,J＝7.6Hz,1H),7.41(d,J＝7.6Hz,1H),6.60(s,1H),6.35(d,J＝7.2Hz,1H),4.54-4.51(m,1H),3.52-3.50(m,2H),3.09(s,3H),3.05-3.03(m,2H)2.91-2.87(m,2H),2.85-2.79(m,2H),2.11(m,2H),1.92-1.84(m,4H)。
实施例49：合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲(化合物146)
Figure BDA0003305115970001111
步骤1:合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲
在0℃下向N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.563mmol)在无水DCM(3mL)中的搅拌溶液滴加三乙胺(0.08mL，0.563mmol)和1-异氰酸基-3-(三氟甲基)苯(0.06mg，0.450mmol)。反应物料在室温下搅拌4小时(反应混合物通过TLC监测)。反应完成后，反应混合物用二氯甲烷稀释，用水、盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥并浓缩，得到残余物。残余物通过反相制备型HPLC纯化，得到1-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲(30mg，10％)作为游离盐。LC纯度:99.47％；m/z:543.3[M+H]+(分子式C27H33F3N8O，计算的分子量542.61)。1H VTNMR(400MHz,CD3OD):δ7.88(d,J＝5.6Hz,1H),7.82(s,1H),7.53(d,J＝8.4Hz,1H),7.44-7.40(m,1H),7.24(d,J＝7.6Hz,1H),6.32(s,1H),6.15(s,1H),3.70-3.57(m,2H),3.13-3.09(m,1H),3.02(s,3H),2.16–2.13(m,4H),1.82-1.77(m,10H),1.54-1.48(m,2H)。
实施例50：合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲(化合物147)
Figure BDA0003305115970001121
步骤1:合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲
向N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.611mmol)在0℃的DCM(1mL)中的混合物添加三乙胺(0.08mL，0.611mmol)。所得混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加1-异氰酸基-3-(三氟甲基)苯(91.25mg，0.488mmol)并在室温下搅拌3小时。在原料完全消耗之后通过TLC监测反应进程，添加水并用DCM萃取。分离的有机层在无水硫酸钠上干燥并浓缩以得到粗制品。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物以提供纯的1-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲(30mg，9％产率)。LC纯度:99.59％；m/z:515.24[M+H]+(分子式C25H29F3N8O，计算的分子量514.56)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.88(d,J＝8.0Hz 1H),7.82(s,1H),7.53(d,J＝8.0Hz,1H),7.42(t,J＝8.0Hz,1H),7.24(d,J＝8.0Hz,1H),6.12(d,J＝8.0Hz,2H),3.62-3.58(m,1H),3.02-3.00(m,4H),2.16-2.13(m,2H),1.94-1.90(m,1H),1.82-1.76(m,4H),1.48-1.44(m,2H),1.00-0.96(m,2H),0.77-0.73(m,2H)。
实施例51:合成1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-(甲基(4-((5-(螺[2.3]己-5-基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲(化合物148)
Figure BDA0003305115970001131
步骤1：合成3-氧代-3-(螺[2.3]己-5-基)丙腈
将乙腈(0.43mL，7.133mmol)在无水THF(5mL)中的溶液冷却至-78℃并滴加n-BuLi(3.5mL，8.917mmol，在己烷中的2.5M)。反应物料在-78℃下搅拌30分钟。然后滴加在THF(2mL)中的螺[2.3]己烷-5-羧酸甲酯(500mg，3.566mmol)。将反应混合物在-40℃搅拌2小时。反应完成后(通过TLC监测)，用饱和氯化铵溶液淬灭反应并用乙酸乙酯萃取。有机层用水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并在减压下浓缩，得到3-氧代-3-(螺[2.3]己-5-基)丙腈(550mg，粗制品)。LC纯度：未离子化(分子式C9H11NO,计算的分子量149.19)。
步骤2：合成5-(螺[2.3]己-5-基)-1H-吡唑-3-胺
向3-氧代-3-(螺[2.3]己-5-基)丙腈(550mg，3.686mmol)在乙醇(10mL)中的搅拌溶液添加水合肼(0.4mL，7.373mmol)。将反应混合物加热至80℃保持3小时。通过TLC监测反应进程。原料完全消耗后，将反应在减压下浓缩以得到残余物。残余物用乙醚洗涤，得到5-(螺[2.3]己-5-基)-1H-吡唑-3-胺(500mg，83.3％产率)。LC纯度:84.13％；m/z:164.1[M+H]+(分子式C9H13N3，计算的分子量163.22)。
步骤3:合成2-氯-N-(5-(螺[2.3]己-5-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺
向5-(螺[2.3]己-5-基)-1H-吡唑-3-胺(650mg，3.982mmol)在DMSO(1mL)中的搅拌溶液添加DIPEA(1mL，5.973mmol)和2,4-二氯嘧啶(712mg，4.778mmol)。将反应混合物加热至60℃，保持16小时。在原料完全消耗后(通过TLC监测)，将反应用冰水淬灭并用二氯甲烷萃取。有机层在无水硫酸钠上干燥，过滤并在减压下浓缩以得到残余物。残余物通过使用Biotage isolera(230-400硅胶)用石油醚中的0-60％乙酸乙酯的梯度洗脱纯化，得到2-氯-N-(5-(螺[2.3]己-5-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(480mg，44％产率)。LC纯度:83.45％；m/z:276.0[M+H]+(分子式C13H14ClN5,计算的分子量275.74)。
步骤4：合成产生叔丁基(1R,4R)-4-(甲基(4-((5-(螺[2.3]己-5-基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯
在20mL微波小瓶中，向叔丁基((1R,4R)-4-(甲基氨基)环己基)氨基甲酸酯(992mg，4.352mmol)、2-氯-N-(5-(螺[2.3]己-5-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(480mg，1.741mmol)在正丁醇(8mL)中的混合物添加DIPEA(0.91mL，5.223mmol)。将反应在160℃下进行微波处理4小时。将反应冷却至室温并浓缩以除去正丁醇。所得残余物通过使用Biotage isolera(230-400硅胶)用石油醚中的0-80％乙酸乙酯的梯度洗脱进行纯化，得到叔丁基(1R,4R)-4-(甲基(4-((5-(螺[2.3]己-5-基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(200mg，24.5％产率)。LC纯度:87.90％；m/z:468.4[M+H]+(分子式C25H37N7O2，计算的分子量467.62)。
步骤5:合成N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N2-甲基-N4-(5-(螺[2.3]己-5-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺
将叔丁基((1R,4R)-4-(甲基(4-((5-(螺[2.3]己-5-基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(200mg，0.427mmol)在无水DCM(2mL)中的搅拌溶液冷却至0℃并添加TFA(2mL)。反应物料在室温下搅拌3小时。在原料完全消耗后(通过TLC监测)，将反应浓缩以得到残余物。残余物用石油醚研磨并在减压下浓缩，得到N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N2-甲基-N4-(5-(螺[2.3]己-5-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(200mg，定量产率)作为TFA盐。LC纯度:94.61％；m/z:368.1[M+H]+(分子式C20H29N7，计算的分子量367.50)。
步骤6：合成1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-(甲基(4-((5-(螺[2.3]己-5-基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲
将苯基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(151mg，0.544mmol)在无水DMF(2mL)中的搅拌溶液冷却至0℃并添加三乙胺(0.07mL，0.544mmol)。将反应在0℃下搅拌1小时。在另一个小瓶中，向在无水DMF(1mL)中的N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N2-甲基-N4-(5-(螺[2.3]己-5-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.544mmol)添加三乙胺(0.15mL，1.088mmol)并搅拌15分钟。在室温下将所得溶液添加到上述反应中。将反应加热至85℃保持16小时。在原料完成后(通过TLC监测)，将反应用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以得到粗制品。粗制品通过反相制备型HPLC纯化得到1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-(甲基(4-((5-(螺[2.3]己-5-基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)脲(60mg，20％产率)作为TFA盐。LC纯度:99.94％；m/z:552.2[M+H]+(分子式C31H37N9O，计算的分子量551.70)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.72(d,J＝7.20Hz,1H),7.57(s,1H),7.52(d,J＝7.60Hz,1H),7.40(d,J＝7.60Hz,1H),6.55-6.32(m,2H),4.58-4.51(m,1H),3.56-3.49(m,1H),3.36-3.34(m,1H),3.33-3.32(m,1H),3.30-3.28(m,2H),3.09(s,3H),2.91-2.87(m,2H),2.47-2.44(m,4H),2.12(d,J＝10Hz,2H),1.86-1.82(m,4H),1.40-1.35(m,2H),0.57-0.53(m,2H),0.47-0.43(m,2H)。
实施例52:合成1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-(3,3-二氟环戊基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)脲(化合物149)
Figure BDA0003305115970001161
步骤1：合成3-(3,3-二氟环戊基)-3-氧代丙腈
在-78℃下，向乙腈(1.59mL，30.48mmol)在无水四氢呋喃(50mL)中的溶液滴加n-BuLi(9.14mL，22.86mmol，THF中的2.5M溶液)。在-50℃下搅拌反应混合物30分钟至1小时。将反应混合物再次冷却至-78℃，并滴加3,3-二氟环戊烷-1-羧酸甲酯(2.5g，15.24mmol)在无水四氢呋喃(10mL)中的溶液，并在-78℃下搅拌1小时。使反应混合物达到室温并搅拌16小时。反应完成后，反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水、盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥并浓缩，得到粗化合物3-(3,3-二氟环戊基)-3-氧代丙腈(2.7g，定量产率)。将其直接用于下一步。LC纯度:86.73％；m/z:172.1[M-H]+(分子式C8H9F2NO，计算的分子量173.16)。
步骤2：合成5-(3,3-二氟环戊基)-1H-吡唑-3-胺
向3-(3,3-二氟环戊基)-3-氧代丙腈(2.7g，15.60mmol)在EtOH(30mL)中的溶液添加水合肼(1.57mL，31.21mmol)。将反应在80℃搅拌2小时。反应完成后，将反应混合物浓缩并用石油醚中的10％乙醚洗涤以除去水合肼。浓缩反应混合物得到粗化合物5-(3,3-二氟环戊基)-1H-吡唑-3-胺(3g，定量产率)，其用于下一步而无需进一步纯化。LC纯度:87.62％；m/z:188.2[M+H]+(分子式C8H11F2N3，计算的分子量187.19)。
步骤3:合成2-氯-N-(5-(3,3-二氟环戊基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺
2,4-二氯嘧啶(2.2g，14.86mmol)、5-(3,3-二氟环戊基)-1H-吡唑-3-胺(3.05g，16.35mmol)和DIPEA(7.98mL，44.59mmol)在DMSO(20mL)中的混合物在60℃下搅拌16小时。通过TLC监测反应混合物。原料完成后，将反应混合物冷却至室温，添加水并沉淀出固体。过滤固体，用石油醚洗涤并在真空下干燥，得到2-氯-N-(5-(3,3-二氟环戊基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(1.8g，49.54％产率)。LC纯度:84.33％；m/z:300.0[M+H]+(分子式C12H12ClF2N5，计算的分子量299.71)。
步骤4:合成叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-(3,3-二氟环戊基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯
在20mL微波小瓶中，向2-氯-N-(5-(3,3-二氟环戊基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(0.5g，1.67mmol)在正丁醇(10mL)中的溶液添加DIPEA(0.9mL，5.01mmol)和叔丁基((1R,4R)-4-(甲基氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.457g，2.0mmol)。将反应混合物在140℃微波处理2小时。在原料完成后(通过TLC监测)，将反应冷却至室温，浓缩以除去n-BuOH以提供粗化合物。粗化合物通过Biotage isolera使用硅胶(230-400)以石油醚中的50-100％乙酸乙酯的梯度洗脱纯化，得到叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-(3,3-二氟环戊基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(350mg，42.6％产率)。LC纯度:84.98％；m/z:492.2[M+H]+(分子式C24H35F2N7O2，计算的分子量491.59)。
步骤5：合成N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-(3,3-二氟环戊基)-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺
向叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-(3,3-二氟环戊基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(0.35g，0.712mmol)在无水DCM(10mL)中的溶液添加二噁烷中的HCl(5mL，4M溶液)。使反应物料在室温下搅拌1小时。通过TLC监测反应进程。原料完全消耗后，将所得混合物浓缩并与石油醚一起研磨并在高真空下浓缩以产生N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-(3,3-二氟环戊基)-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，定量产率)。LC纯度:81.39％；m/z:392.2[M+H]+(分子式C19H27F2N7,计算的分子量391.47)。
步骤6：合成1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-(3,3-二氟环戊基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)脲
向苯基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(142mg，0.511mmol)在无水DMF(4mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.21mL，1.53mmol)。将反应混合物在65℃搅拌1小时并在室温下添加N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-(3,3-二氟环戊基)-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.511mmol)。将反应在85℃搅拌16小时。通过TLC监测反应混合物。反应完成后，反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以得到粗化合物，然后通过反相制备型HPLC纯化得到1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-(3,3-二氟环戊基)-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)脲(100mg，34.01％产率)作为TFA盐。LC纯度:95.30％；m/z:576.0[M+H]+(分子式C30H35F2N9O，计算的分子量575.67)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.73(d,J＝7.2Hz,1H),7.56(s,1H),7.52(d,J＝7.6Hz,1H),7.39(d,J＝7.6Hz,1H),6.55-6.30(m,2H),4.58-4.51(m,2H),3.51-3.47(m,2H),3.35-3.28(m,2H),3.09(s,3H),2.91-2.83(m,2H),2.54-2.64(m,1H),2.33-2.11(m,6H),1.98-1.95(m,1H),1.86-1.82(m,4H),1.36-1.32(m,2H)。
实施例53：合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-3-(2,3-二氢-1H-茚-2-基)脲(化合物150)
Figure BDA0003305115970001191
步骤1：合成2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺
2,4-二氯嘧啶(14.43g，97.56mmol)、5-环丙基-1H-吡唑-3-胺(10g，81.3mmol)和DIPEA(21.25mL，121.95mmol)在DMSO(100mL)中的混合物在60℃下加热16小时。在原料完全消耗后(通过TLC监测)，将反应冷却至室温并用水稀释。过滤沉淀的固体，用石油醚洗涤并在真空下干燥，得到2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(17.0g，89％产率)。LC纯度:72.2％；m/z:236.07[M+H]+(分子式C10H10ClN5，计算的分子量235.68)。
步骤2：合成叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯
2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(2g，8.510mmol)、叔丁基((1R,4R)-4-(甲基氨基)环己基)氨基甲酸酯(2.3g，10.21mmol)和DIPEA(2.96mL，17.02mmol)在DMSO(20mL)中的混合物在密封管中在110℃加热24小时。在原料完全消耗后(通过TLC监测)，将反应混合物冷却至室温并用水稀释。过滤沉淀的固体，用石油醚洗涤并在真空下干燥得到叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(2g，55％产率)。LC纯度:84.3％；m/z:428.27[M+H]+(分子式C22H33N7O2，计算的分子量427.55)。
步骤3：合成N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺
将叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(2.0g，4.683mmol)在DCM(20mL)中的混合物冷却至0℃并添加1,4-二噁烷中的4M HCl(15mL)。所得混合物在室温下搅拌1小时。在原料完全消耗后通过TLC监测反应进程，在真空下浓缩反应混合物以产生N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(1.8g，定量产率)。LC纯度:73.1％；m/z:328.22[M+H]+(分子式C17H25N7，计算的分子量327.44)。
步骤4：合成苯基(2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯
在0℃下向2,3-二氢-1H-茚-2-胺(100mg，0.751mmol)在DCM(2mL)中的混合物添加TEA(0.15mL，1.12mmol)，在相同温度下添加苯基氯化碳(117.15mg，0.751mmol)并在室温下搅拌2小时。通过TLC监测反应进程。原料完全消耗后，添加水并用DCM萃取。分离的有机层在无水硫酸钠上干燥并浓缩。固体用石油醚洗涤并在真空下干燥以产生苯基(2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(150mg，78％产率)。LC纯度:76.00％；m/z:254.11[M+H]+(分子式C16H15NO2,计算的分子量253.30)。
步骤5:合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-3-(2,3-二氢-1H-茚-2-基)脲
向苯基(2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(154.58mg，0.611mmol)在无水DMF中的搅拌溶液添加三甲胺(0.08mL，0.611mmol)。将反应混合物加热至85℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温并添加在TEA(0.08mL，0.611mmol)中的N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.611mmol)。将反应混合物加热至85℃并搅拌16小时。在原料完全消耗后(通过TLC监测)，将反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。通过反相制备型HPLC纯化粗化合物，得到1-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-3-(2,3-二氢-1H-茚-2-基)脲作为TFA盐(30mg，10％产率)。LC纯度:99.95％；m/z:487.29[M+H]+(分子式C27H34N8O，计算的分子量486.62)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.71(d,1H),7.20-7.17(m,2H),7.14-7.11(m,2H),6.36(s,1H),6.33(d,J＝8Hz,2H),4.48-4.45(m,2H),3.53-3.49(m,1H),3.26-3.21(m,2H),3.06(s,3H),2.79-2.74(m,2H),2.14-2.11(m,2H),1.94-1.82(m,5H),1.39-1.32(m,2H),1.05-1.00(m,2H),0.77-0.73(m,2H)。
实施例54：合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)甲基)氨基)环己基)-3-(5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-2-基)脲(化合物151)
Figure BDA0003305115970001211
步骤1:合成(Z)-5,6-二氟-2-(羟基亚氨基)-2,3-二氢-1H-茚-1-酮
在40℃向含有5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮(4.60g，27.4mmol)的甲醇溶液(30mL)添加亚硝酸异戊酯(4.17g，35.6mmol)，然后添加浓HCl(2.7mL)。加热45分钟后，使溶液冷却至室温并添加水。通过真空过滤收集所得沉淀。用水彻底洗涤固体以产生(Z)-5,6-二氟-2-(羟基亚氨基)-2,3-二氢-1H-茚-1-酮(3.97g，20.15mmol,73.6％产率)作为浅橙色固体。LC纯度:85.99％；m/z:198.1[M+H]+(分子式C9H5F2NO2，计算的分子量197.14)。
步骤2：合成5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-2-胺
向(Z)-5,6-二氟-2-(羟基亚氨基)-2,3-二氢-1H-茚-1-酮(1g，5.07mmol)在乙酸(15mL)中的溶液添加1mL浓H2SO4，然后添加10％Pd/C(500mg)。反应在60℃在微型釜中在10Kg压力下氢化96小时。通过硅藻土床过滤反应物并用甲醇彻底洗涤。然后真空除去溶剂以得到粗化合物，将其通过反相制备型HPLC纯化以得到5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-2-胺(80mg，9.33％产率)。LC纯度:99.84％；m/z:170.1[M+H]+(分子式C9H9F2N，计算的分子量169.17)。
步骤3a：苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯的合成
向N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(1g，3.058mmol)在无水THF(80mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(3.86mL，27.522mmol)。将反应混合物在0℃搅拌1小时，然后添加在THF(20mL)中的苯基氯化碳(0.39mL，3.058mmol)。将反应混合物在0℃搅拌20分钟。反应完成后(通过TLC监测)，将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物，然后通过Biotage isolera使用用石油醚中的0-100％乙酸乙酯洗脱的230-400硅胶纯化，得到苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(200mg，14.64％)。LC纯度:93.55％；m/z:448.2[M+H]+(分子式C24H29N7O2,计算的分子量447.54)。
步骤3:合成1-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-3-(5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-2-基)脲
向苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(200mg，0.447mmol)在无水DMF(4mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.19mL，1.34mmol)。将反应混合物在65℃下搅拌1小时并在室温下添加5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-2-胺(75.6mg，0.447mmol)。将反应在85℃搅拌16小时。通过TLC监测反应混合物。反应完成后，反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以得到粗化合物，然后通过反相制备型HPLC纯化得到1-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-3-(5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-2-基)脲(20mg，8.58％产率)作为TFA盐。LC纯度:99.74％；m/z:523.9[M+H]+(分子式C27H32F2N8O，计算的分子量522.60)。1H VTNMR(400MHz,CD3OD):δ7.74(d,J＝6.0Hz,1H),6.96(t,J＝9.2Hz,2H),6.03-5.97(m,2H),3.48-3.36(m,1H),3.13-3.08(m,2H),2.89(s,3H),2.66-2.61(m,2H),1.97-1.94(m,2H),1.80-1.77(m,1H),1.67-1.61(m,4H),1.27-1.19(m,4H),0.88-0.83(m,2H),0.63-0.59(m,2H)。
实施例55:合成1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(2-甲氧基乙基)氨基)环己基)脲(化合物152)
Figure BDA0003305115970001231
步骤1:合成叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟-N-(2-甲氧基乙基)乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯
在0℃下向叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯(3g，9.677mmol)在无水DMF(30mL)中的搅拌溶液分批添加氢化钠(1.935g，48.387mmol)。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后在0℃滴加1-溴-2-甲氧基乙烷(1.372mL，14.516mmol)。将反应混合物搅拌16小时。反应完成后(通过LCMS监测)，将反应混合物用冰淬灭，用2N柠檬酸中和并用二氯甲烷萃取。有机层在无水硫酸钠上干燥，过滤并在减压下浓缩以得到叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟-N-(2-甲氧基乙基)乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯(3g，84.26％)。LC纯度:90.43％；m/z:313.2[M-(t-Bu)]+(分子式C16H27F3N2O4，计算的分子量368.40)。
步骤2：合成叔丁基((1R,4R)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基甲酸酯
将叔丁基((1R,4R)-4-(2,2,2-三氟-N-(2-甲氧基乙基)乙酰胺基)环己基)氨基甲酸酯(3g，8.152mmol)在甲醇(30mL)中的悬浮液加热至50℃并搅拌几分钟，直至形成澄清溶液。然后在搅拌下添加2N氢氧化钠溶液直至形成略微混浊的溶液。所得混合物在室温下搅拌3小时。反应完成后(通过LCMS监测)，浓缩反应混合物，将残余物溶解在2N柠檬酸溶液中并用二氯甲烷/甲醇(9:1)萃取。有机层在无水硫酸钠上干燥，过滤并在减压下浓缩，得到叔丁基((1R,4R)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(1.8g，81.44％)。LC纯度:94.02％；m/z:217.3[M-(t-Bu)]+(分子式C14H28N2O3，计算的分子量272.39)。
步骤3:合成叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基甲酸酯
在20mL微波小瓶中，向叔丁基((1R,4R)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(1.8g，6.617mmol)、2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(770mg，3.308mmol)在正丁醇(18mL)中的混合物添加DIPEA(1.73mL，9.926mmol)。将反应混合物在微波中在160℃加热2小时。将反应混合物冷却至室温并浓缩以除去正丁醇。获得的残余物通过Biotageisolera使用硅胶(230-400目)以二氯甲烷中的0-10％甲醇的梯度洗脱纯化，得到叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(635mg，20.37％)。LC纯度:40.43％；m/z:472.2[M+H]+(分子式C24H37N7O3，计算的分子量471.6)。
步骤4:合成N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-(2-甲氧基乙基)嘧啶-2,4-二胺
向叔丁基((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(600mg，1.273mmol)在DCM(7mL)中的搅拌溶液在0℃下滴加三氟乙酸(6mL)，并在相同温度下搅拌1小时。反应完成后(通过TLC监测)，将反应混合物浓缩以得到N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-(2-甲氧基乙基)嘧啶-2,4-二胺(450mg，定量产率)。LC纯度:57.92％；m/z:372.1[M+H]+(分子式C19H29N7O，计算的分子量371.4)。
步骤5：合成1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(2-甲氧基乙基)氨基)环己基)脲
向苯基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(187mg，0.673mmol)在无水DMF(2.5mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.28mL，2.021mmol)并在0℃至室温下搅拌1小时。向其添加N2-((1R,4R)-4-氨基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-(2-甲氧基乙基)嘧啶-2,4-二胺(250mg，0.673mmol)并加热至85℃持续16小时。在原料完全转化后(通过TLC监测)，将反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩以获得粗化合物。粗化合物通过反相制备型HPLC纯化，得到1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(2-甲氧基乙基)氨基)环己基)脲(40mg，10.72％)作为TFA盐。LC纯度:97.28％；m/z:556.1[M+H]+(分子式C30H37N9O2，计算的分子量555.69)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.69(d,J＝7.2Hz,1H),7.62(s,1H),7.55(d,J＝7.6Hz,1H),7.44(d,J＝8.0Hz,1H),6.41(s,1H),6.29(d,J＝6.0Hz,1H),4.53-4.50(m,1H),4.09(t,J＝8Hz,1H),3.90-3.86(m,1H),3.47-3.46(m,2H),3.36-3.29(m,3H),3.14(s,3H),2.94-2.87(m,2H),2.18(d,J＝6Hz,2H),1.97(s,1H),1.83(s,2H),1.68-1.52(m,4H),1.30(s,1H),1.04(s,2H),0.77(d,J＝3.2Hz,2H)。
实施例56:合成1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-1-甲基脲(化合物153)
Figure BDA0003305115970001261
步骤1：合成叔丁基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯
在0℃下向2-氨基-2,3-二氢-1H-茚-5-腈(100mg，0.632mmol)在DCM(0.2mL)中的溶液添加三乙胺(0.26mL，1.896mmol)，然后添加(Boc)2O(0.16mL，0.758mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时。反应完成后(通过TLC监测)，反应混合物用二氯甲烷稀释并用水洗涤。有机层在无水硫酸钠上干燥，过滤并在减压下浓缩。用石油醚研磨固体以获得叔丁基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(155mg，96.8％)。LC纯度:86％；m/z:259[M+H]+(分子式C15H18N2O2，计算的分子量258.32)。
步骤2：合成叔丁基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸酯
在100mL密封管中，将在无水DMF(2mL)中的叔丁基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯(180mg，0.700mmol)冷却至0℃并在N2气氛下，分批添加氢化钠(84mg，3.501mmol)。在环境温度下搅拌反应混合物20分钟。然后在0℃下滴加甲基碘(0.052mL，0.840mmol)，然后将反应加热至60℃保持16小时。通过TLC监测反应的完成。反应完成后，将反应用冰水淬灭并用乙酸乙酯萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩，得到叔丁基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(150mg，79.3％产率)。LC纯度:68.03％；m/z:173.1[M-Boc]+(分子式C16H20N2O2，计算的分子量272.35)。
步骤3：合成2-(甲基氨基)-2,3-二氢-1H-茚-5-腈
将叔丁基(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(150mg，0.550mmol)在无水DCM(2mL)中的搅拌溶液冷却至0℃并添加TFA(1.5mL)。将反应混合物在室温搅拌3小时。在原料完全消耗后通过TLC监测反应进程，将反应浓缩以得到2-(甲基氨基)-2,3-二氢-1H-茚-5-腈(150mg，定量产率)作为TFA盐。LC纯度:86.29％；m/z:173.2[M+H]+(分子式C11H12N2，计算的分子量172.23)。
步骤4：合成1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-1-甲基脲
向苯基((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸酯(414mg，0.871mmol)在无水DMF(5mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.12mL，0.871mmol)。将反应在0℃下搅拌1小时。在另一个小瓶中，向无水DMF(2mL)中的2-(甲基氨基)-2,3-二氢-1H-茚-5-腈(150mg，0.871mmol)添加三乙胺(0.23mL，1.744mmol)并搅拌15分钟。在室温下将所得溶液添加到上述反应中。将反应加热至85℃，保持16小时。原料完成后(通过TLC监测)，反应用水稀释并用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥并浓缩，得到粗化合物。然后通过反相制备型HPLC纯化得到1-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-3-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)-1-甲基脲(40mg，8.3％产率)。LC纯度:96.40％；m/z:554.2[M+H]+(分子式C31H39N9O，计算的分子量553.72).1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.81(dd,J＝12,5.6Hz,1H),7.57(s,1H),7.52(d,J＝8Hz,1H),7.40(d,J＝8Hz,1H),6.30-6.25(m,2H),5.21-5.17(m,1H),4.53(s,1H),3.68-3.60(m,1H),3.32-3.21(m,2H),3.19-3.03(m,6H),2.75(s,3H),2.12-2.09(m,4H),1.82-1.67(m,10H),1.51-1.46(m,2H)。
实施例57：MycN蛋白的降解
细胞培养
在T150烧瓶中铺板在含有Roswell Park Memorial Institute(RPMI)1640培养基(Thermo Fisher，目录号#11875-085)、10％胎牛血清(FBS，Thermo Fisher：目录号#10437-028)、1％青霉素/链霉素(Thermo Fisher：目录号#10378016)和1％两性霉素B(ThermoFisher，目录号#15290026)的总共30mL中的2x106个HL-60(人白血病细胞系)或SKNBE2(神经母细胞瘤细胞系)细胞。通过重新接种HL-60或SKNBE2细胞，每72小时分开一次细胞，并记录传代数。值得注意的是，没有使用40代以上的细胞培养物，并且大多数实验都是用小于30代的细胞进行的。
蛋白质印迹
在6孔细胞培养板中，接种总共3mL的1x106个细胞/mL的HL-60或SKNBE2细胞，导致每孔总共3x106个细胞。向每个含有3mL HL-60或SKNBE2细胞系的孔添加6uL MycN调节化合物(1mM)，从左到右摇动所得板，但不要涡旋。6小时后，将细胞置于15mL的falcon管中，并在4℃下以500G在摆动桶式离心机中旋转。然后在不干扰沉淀的情况下小心地去除培养基。然后用3mL冷冻的磷酸缓冲盐水(PBS)洗涤沉淀物并使其进行旋转循环。然后除去PBS，将沉淀在200uL的放射免疫沉淀(RIPA)裂解缓冲液(Thermo Fisher：目录号#899000)中裂解，该缓冲液补充有蛋白酶和磷酸酶抑制剂(Thermo Fisher：目录号#A32959)。然后将细胞裂解物在离心机中在4℃下以13000G旋转10分钟。然后将上清液小心地转移到新鲜的eppendorf管中，而不干扰沉淀(～180uL)。然后根据制造商的方案(Thermo Fisher：目录号#23227)使用二辛可宁酸(BCA测定)测定细胞裂解物的蛋白质浓度。
凝胶运行和转移
细胞裂解物(大约25ug-30ug)每孔装载在4-20％聚丙烯酰胺凝胶(Biorad.目录号#5671094)中。在从凝胶运行去除染料前沿后，根据制造商的方案，使用transblot turbo系统(Biorad：目录号#1704150)将凝胶转移到硝酸纤维素膜(Biorad：目录号#1704159)上。转移30分钟后，膜用5％BSA室温封闭1小时。然后洗掉BSA，添加所选的一抗(1:500)，将膜与一抗在4℃下孵育过夜。第二天早上，去除一抗，用1X-TBST洗膜10分钟，并重复另外3次。在最后一次洗涤之后，以1:5000的稀释度添加二抗(Molecular Devices.目录号#R8209或R8208)并在室温下孵育1小时。与二抗孵育后，将膜用1X-TBST洗涤10分钟，并重复另外3次。最后一次洗涤后，将膜用去离子水洗涤两次并干燥至少两小时。一旦膜完全干燥，就使用Molecular Devices Spectra Max western系统观察条带。保存western图像并用ImageJ软件测量条带密度。
实施例45:各种化合物对MycN蛋白的降解百分比
Figure BDA0003305115970001291
Figure BDA0003305115970001301
Figure BDA0003305115970001311
Figure BDA0003305115970001321
符号：*＊＊*：降解80-100％
*＊*：降解50-79％
**：降解20-49％
*：降解<20％
除非另外指明，否则本公开内容的实践将采用本领域技术范围内的有机化学、蛋白质化学、生物化学、重组DNA技术和药理学的常规方法。虽然已经参考优选实施方案和各种替代实施方案具体地示出和描述了本公开内容，但是相关领域的技术人员将理解，在不脱离本公开内容的精神和范围的情况下，可以在其中进行形式和细节的各种改变。
在本说明书正文中引用的所有参考文献、授权专利和专利申请特此通过引用整体并入用于所有目的。

Claims (55)

1.式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物：
Figure FDA0003305115960000011
其中：
W选自N、C-H和C-F；
X选自N-RA、O、S、CH2、C(CH3)2、CF2和C(CH2)2；
Y选自O和N-RB；
Z选自稠合双环烷基、C3-C7单环环烷基、C5-C9桥连环烷基和螺C5-C10双环烷基，其中Z可任选地被一个或两个各自独立地选自卤素、羟基、C1-C4烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)、-C(O)OH和-C(O)-O-C1-4烷基的取代基取代；
R1选自C1-C6烷基、C3-C10环烷基、螺C5-C10双环烷基、杂环基、氰基、卤素和杂芳基；其中C1-C6烷基、C3-C7环烷基、杂环基或杂芳基可以被一个、两个或三个各自独立地选自卤素和C1-C4烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)的取代基取代；
R2选自H、F、-O-甲基、甲基、C3-C7环烷基和杂环基；
R6选自C1-C6-烷基、C3-C10环烷基、杂环基、苯并稠合杂环基、苯基、苄基、杂芳基、C1-3亚烷基-杂芳基、-C(O)-杂芳基和苯氧基；其中R6可以任选地被一个、两个或三个各自独立地选自RP的取代基取代；
R7选自H和C1-C6烷基；其中C1-C6烷基可以任选地被一个、两个或三个各自独立地选自卤素、羟基、氰基、氧基和C1-6烷氧基(任选地被一个、两个或三个各自选自卤素、氰基、羟基和C1-3烷氧基的取代基取代)的取代基取代；
R8选自H和C1-C6-烷基；其中C1-C6烷基可以任选地被一个、两个或三个各自独立地选自卤素、羟基、氰基、氧基和C1-6烷氧基(任选地被一个、两个或三个各自选自卤素、氰基、羟基和C1-3烷氧基的取代基取代)的取代基取代；
其中R7或R8中的至少一个必须是H；
RA选自H、C1-C4烷基、-C(O)-C1-4烷基、S(O)w-C1-4烷基(其中w为0、1或2)、C3-6环烷基和杂环基；其中C1-C4烷基和C3-6环烷基可以任选地被一个、两个或三个各自选自卤素、C1-4烷氧基、-S(O)w-甲基、-S(O)w-乙基(其中w为0、1或2)和杂环基的取代基取代；并且其中杂环基可以任选地被一个或两个各自选自甲基、乙基和卤素的取代基取代；
RB选自H、C1-C4烷基、-C(O)-C1-4烷基、S(O)w-C1-4烷基(其中w为0、1或2)和氰基；其中C1-C4烷基可以任选地被一个、两个或三个氟取代基取代；
RP选自卤素、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基(任选地被一个、两个或三个各自选自卤素、氰基、羟基和C1-3烷氧基的取代基取代)、-C(O)-C1-4烷基、C(O)-O-C1-4烷基、C(O)-O-C3-6环烷基、-C(＝N)-NR’R’、-C(O)-NR’R’、-S(O)w-NR’R’、-S(O)w-C1-4烷基(其中w为0、1或2)、-NR’R’、氧基、苯基、苯氧基、C3-6环烷基、杂环基、-O-杂环基和杂芳基；其中杂环基、杂芳基或苯基可任选地被羟基、C1-6烷基或卤素取代；并且其中C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和C3-6环烷基可各自任选地被一个、两个或三个各自选自卤素、氰基、羟基、杂芳基和NR’R’的取代基取代；和
每次出现的R’独立地选自H、甲基、乙基、杂环基(任选地被C1-3烷基或卤素取代)、苯基和C3-6环烷基，或两个R’连同它们所附接于的氮形成可以任选地被甲基、卤素、氰基、氧基或羟基取代的杂环基。
2.权利要求1的化合物，其中W为N，并且具有式Ia或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物：
Figure FDA0003305115960000031
3.权利要求1或2的化合物，其中Y是O，并且具有式Ib或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物：
Figure FDA0003305115960000032
4.权利要求1或2的化合物，其中Y是N-RB，并且具有式Ic或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物：
Figure FDA0003305115960000033
其中：
RB选自H、C1-C4烷基、-SO2-C1-C4-烷基、C(O)C1-C4-烷基、CN和CH2CF3。
5.权利要求1-4中任一项的化合物，其中R1是5-6元杂环基或C3-6环烷基。
6.权利要求1-5中任一项的化合物，其中R1选自：2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-氧杂环丁烷基、环己基、环丙基、环丁基和环戊基。
7.权利要求1-4中任一项的化合物，其中R1选自甲基和乙基。
8.权利要求1-7中任一项的化合物，其中Z选自环己基、环戊基和环丁基。
9.权利要求1-7中任一项的化合物，其中Z是C5-C9桥连环烷基。
10.权利要求1-7中任一项的化合物，其中Z是螺C5-C10双环烷基。
11.权利要求1-7中任一项的化合物，其中Z是稠合的双环烷基。
12.权利要求1-6中任一项的化合物，其中Z选自：
Figure FDA0003305115960000041
或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：
R3选自H、C1-C4-烷基、CO2H和-C(O)-O-C1-4烷基；
R4是H或C1-C4-烷基；或者
R3和R4一起形成-CH2-或-CH2CH2-。
13.权利要求12的化合物，其中Z选自：
Figure FDA0003305115960000051
14.权利要求13的化合物，由式II表示：
Figure FDA0003305115960000052
或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：
R3选自H、C1-C4烷基、CO2H和-C(O)-O-C1-4烷基；和
R4选自H或C1-C4烷基。
15.权利要求13的化合物，由式IIa表示：
Figure FDA0003305115960000053
或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：
R3选自H、C1-C4-烷基、CO2H和-C(O)-O-C1-4烷基；和
R4选自H和C1-C4-烷基；
RB选自H、C1-C4烷基、-SO2-C1-C4-烷基、C(O)C1-C4-烷基、CN和CH2CF3。
16.权利要求1-15中任一项的化合物，其中R6选自8-10元双环环烷基和8-10元双环杂环基。
17.权利要求1-15中任一项的化合物，其中R6选自单环或桥连C3-6环烷基、单环或桥连杂环基、双环或稠合杂环基和杂芳基。
18.权利要求1-15中任一项的化合物，其中R6选自：茚满基、环己基、环丁基和环戊基，其中R6任选地被一个或两个各自选自以下的取代基取代：氰基、卤素、苯基、-C(＝N)-NR’R’、C1-4烷基(任选地被甲氧基或被一个、两个或三个氟原子取代)、C1-4烷氧基(任选地被一个、两个或三个氟原子取代)、S(O)2-CH3；环丙基、环丁基、-O-杂环基、杂环基和杂芳基。
19.权利要求18的化合物，其中R6是茚满基。
20.权利要求1-15中任一项的化合物，其中R6选自杂环基、苯基和杂芳基。
21.权利要求1-15中任一项的化合物，其中R6由下式表示：
Figure FDA0003305115960000061
其中R66选自氢、氰基、杂环基、杂芳基、-C(＝N)-R’R’；和S(O)2-CH3。
22.权利要求21的化合物，其中R6选自：
Figure FDA0003305115960000062
23.权利要求1-15中任一项的化合物，其中R6由下式表示：
Figure FDA0003305115960000063
或者
Figure FDA0003305115960000064
其中R77选自氢、C1-4烷基(任选地被一个、两个或三个氟原子取代)、C1-4烷氧基(任选地被甲氧基或被一个、两个或三个氟原子取代)、杂环基和S(O)2-C1-4烷基。
24.权利要求23的化合物，其中R77选自-CF3、-OCH3、-OCHF2、-SO2CH3和-OCH2CH2OCH3。
25.权利要求23或24的化合物，其中R6选自：
Figure FDA0003305115960000071
26.权利要求1-15中任一项的化合物，其中R6选自：
Figure FDA0003305115960000072
27.权利要求1-15中任一项的化合物，其中R6选自：
Figure FDA0003305115960000081
Figure FDA0003305115960000091
Figure FDA0003305115960000101
或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。
28.权利要求1-27中任一项的化合物，其中X是N-H。
29.权利要求1-27中任一项的化合物，其中X是O。
30.权利要求1-29中任一项的化合物，其中R7是H并且R8是甲基。
31.权利要求1-29中任一项的化合物，其中R7是甲基并且R8是H。
32.权利要求1-29中任一项的化合物，其中R7和R8各自为H。
33.式(III)表示的化合物：
Figure FDA0003305115960000111
或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：
R1选自C3-C6环烷基、杂环基和甲基，其中R1任选地被卤素取代；
R6选自饱和的C3-C6单环碳环、饱和或部分不饱和的8-10元双环碳环、具有至少一个选自O、S(O)w(其中w为0、1或2)和NRC的杂原子部分的单环或双环的饱和或部分不饱和杂环、苯基、苯氧基、萘基、单环或双环杂芳基、苄基和-CR7R8-杂芳基；其中：
R6任选地在可用碳上被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、氰基、羟基、氧基、C1-C6-烷基(任选地被一个、两个或三个卤素或羟基取代)、C3-C6-环烷基(任选地被一个、两个或三个卤素或羟基取代)、C1-C6-烷氧基(任选地被一个、两个或三个各自选自卤素、甲氧基和乙氧基的取代基取代)、杂环基(任选地被一个或多个各自选自甲基、乙基、羟基、卤素和氧基的取代基取代)、杂环氧基(任选地被一个或多个各自选自甲基、乙基、卤素、羟基和氧基的取代基取代)、杂芳基(任选地被一个或多个各自选自甲基、乙基、羟基、卤素和氧基的取代基取代)、杂芳氧基(任选地被一个或多个各自选自甲基、乙基、卤素、羟基和氧基的取代基取代)，-NRaRb；-C(O)O(Ra)、-C(O)-N(Rb)(Rc)、-S(O)w-Ra、-NRb-S(O)w-Ra和-S(O)w-N(Rb)(Rc)(其中w为0、1或2)；和其中
如果存在，RC选自氢、C1-C6烷基(任选地被苯基或杂芳基取代；其中苯基或杂芳基任选地被卤素、羟基或甲基取代)、环丙基、C(O)O(Ra)、C(O)Ra和-S(O)w-Ra(其中w为0、1或2)；
RA选自H和甲基；
R7选自H和甲基；
R7选自H和甲基；
其中R7和R8中的至少一个必须是氢；
Ra每次出现时独立地选自氢、C1-C6-烷基、C3-C6-环烷基、杂环基、苯基和杂芳基；其中C1-C6烷基、C3-C6环烷基、杂环基、苯基或杂芳基可以任选地被一个或多个各自独立地选自卤素、氰基、氧基和羟基的取代基取代；
Rb和Rc每次出现时各自独立地选自氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、苯基、苄基和杂芳基；或
Rb和Rc可以与它们所附接于的氮一起形成4-6元杂环基，其可以具有额外的杂原子并且可以任选地被氧基、C1-C3烷基或环丙基取代；
R7和R8各自独立地选自氢、卤素和C1-C3烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)，或R7和R8一起形成氧基；
Y选自O和N-RB；和
RB选自H、C1-C4烷基、-S(O)w-C1-C4烷基(其中w为0、1或2)、-C(O)C1-C4烷基和CN；其中C1-C4烷基任选地被一个、两个或三个卤素取代。
34.权利要求33的化合物，其中R6是部分不饱和双环碳环。
35.权利要求33或34的化合物，其中R6由下式表示：
Figure FDA0003305115960000121
其中R66选自氰基、杂环基、杂环氧基、C1-C3-烷基(任选地被卤素取代)、-C(＝N)-RbRc；-S(O)2-C1-C3-烷基。
36.权利要求33的化合物，其中R6是具有杂原子部分NRC的杂环。
37.权利要求36的化合物，其中R6由下式表示
Figure FDA0003305115960000131
或者
Figure FDA0003305115960000132
其中RC选自氢、C1-C3-烷基(任选地被苯基或杂芳基取代；其中苯基或杂芳基任选地被卤素、羟基或甲基取代)、C3-C6-环烷基、C(O)O(Ra)、C(O)Ra和-S(O)w-Ra。
38.权利要求37的化合物，其中RC是C1-C6烷基、C3-C8-环烷基、C3-C8-杂环烷基、-CH2-杂芳基、-C(O)-C1-C6-烷基、-C(O)-杂芳基、-C(O)-C3-C8-环烷基和-C(O)-C3-C8-杂环烷基。
39.权利要求33的化合物，其中R6选自：茚满基、环己基、环丁基和环戊基，其中R6任选地被一个或两个各自选自以下的取代基取代：氰基、卤素、苯基、-C(＝N)-NR’R’、C1-4烷基(任选地被一个、两个或三个氟取代)、C1-4烷氧基(任选地被甲氧基或一个、两个或三个氟取代)、S(O)2-CH3；环丙基、环丁基、-O-杂环基和杂环基。
40.权利要求39的化合物，其中R6由下式表示：
Figure FDA0003305115960000133
或者
Figure FDA0003305115960000134
其中R77选自氢、C1-4烷基(任选地被一个、两个或三个氟原子取代)、C1-4烷氧基(任选地被甲氧基或被一个、两个或三个氟原子取代)、杂环基和S(O)2-C1-4烷基。
41.权利要求36或3的化合物，其中R77选自-CF3、-OCH3、OCHF2、-SO2CH3、-OCH2CH2OCH3。
42.权利要求39的化合物，其中R6选自：
Figure FDA0003305115960000135
43.选自以下的化合物及其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物：
Figure FDA0003305115960000141
Figure FDA0003305115960000151
Figure FDA0003305115960000161
Figure FDA0003305115960000171
Figure FDA0003305115960000181
Figure FDA0003305115960000191
Figure FDA0003305115960000201
Figure FDA0003305115960000211
44.一种药物组合物，其包含权利要求1-43中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，以及至少一种药学上可接受的承载体或稀释剂。
45.权利要求44的药物组合物，其中所述组合物被配制用于肠胃外施用。
46.权利要求44的药物组合物，其中所述组合物被配制用于静脉内施用。
47.权利要求44的药物组合物，其中所述组合物被配制用于皮下施用。
48.一种治疗增殖性疾病的方法，其包括：
向患有增殖性疾病的受试者施用治疗有效量的权利要求1-43中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，或治疗有效量的权利要求44-47中任一项的药物组合物。
49.权利要求48的方法，其中所述增殖性疾病是癌症。
50.权利要求49的方法，其中所述癌症选自头颈癌、神经系统癌、脑癌、神经母细胞瘤、肺癌/纵隔癌、乳腺癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆道癌、胰腺癌、小肠癌、大肠癌、结直肠癌、妇科癌、泌尿生殖系统癌、卵巢癌、甲状腺癌、肾上腺癌、皮肤癌、黑色素瘤、骨肉瘤、软组织肉瘤、小儿恶性肿瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、骨髓瘤、白血病和未知原发部位的转移瘤。
51.一种在有需要的受试者的细胞中调节MycN的方法，其包括：
向有需要的受试者施用一定量的权利要求1-43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，或权利要求44-47中任一项所述的药物组合物，其有效地在受试者的细胞中引起MycN调节。
52.权利要求48-51中任一项的方法，其还包括对该受试者施用第二疗法。
53.权利要求52的方法，其中第二疗法是抗肿瘤疗法。
54.权利要求53的方法，其中所述抗肿瘤疗法是施用一种或多种选自以下的试剂：DNA拓扑异构酶I或II抑制剂、DNA损伤剂、免疫治疗剂、抗代谢物或胸苷酸合酶(TS)抑制剂、微管靶向剂、电离辐射、有丝分裂调节剂或有丝分裂检查点调节剂的抑制剂、DNA损伤信号转导剂的抑制剂和DNA损伤修复酶的抑制剂。
55.权利要求53的方法，其中所述抗肿瘤疗法选自免疫疗法、放射疗法、光动力疗法、基因定向酶前药疗法(GDEPT)、抗体定向酶前药疗法(ADEPT)、基因疗法和控制饮食。
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