CN113698321B - 一种甲氧氯普胺双胺新杂质和用途 - Google Patents

一种甲氧氯普胺双胺新杂质和用途 Download PDF

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Abstract

本发明首次公开了一种甲氧氯普胺双胺新杂质，且制备得到的甲氧氯普胺双胺新杂质纯度大于99%，可以作为对照品用于甲氧氯普胺的质量研究，该杂质在甲氧氯普胺或其盐的原料药、制剂有关物质检测时作为杂质对照品，实现了对甲氧氯普胺更为严格的质量控制。

Description

一种甲氧氯普胺双胺新杂质和用途
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种甲氧氯普胺双胺新杂质和用途。
背景技术
甲氧氯普胺，又名氯普胺，英文名为metoclopramide，分子式是C14H22ClN3O2，分子量为299.7964，CAS登记号为364-62-5，白色至淡黄色结晶性粉末，有强大的中枢性镇吐作用。
甲氧氯普胺可用于因脑部肿瘤手术、肿瘤的放疗及化疗、脑外伤后遗症、急性颅脑损伤以及药物所引起的呕吐。对于胃胀气性消化不良、食欲不振、嗳气、恶心、呕吐也有较好的疗效，也可用于海空作业引起的呕吐及晕车(船)。除此之外，甲氧氯普胺亦可减轻钡餐检查时的恶心、呕吐反应，促进钡剂通过；或十二指肠插管前服用，有助于顺利插管；或用于胆道疾病和慢性胰腺炎的辅助治疗。
申请人采用的甲氧氯普胺原料药合成路线如下：
Figure BDA0003288825520000011
在合成过程中发现有未知的杂质，通过对IM2物料的结晶和母液分离富集，得到一个全新的杂质，如式I所示：
Figure BDA0003288825520000012
在新药研发过程中，药物的杂质含量将直接影响到药物的疗效和毒副作用，因此控制杂质限度、提高纯度对于保证药物的安全性、有效性和质量可控性至关重要。故本发明对甲氧氯普胺的新杂质作了进一步的结构确证，也开发了合适的检测方法并制定杂质限度，以便实现对药物更严格的质量控制。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：提供一种甲氧氯普胺双胺新杂质，其结构如式Ⅰ所示：
Figure BDA0003288825520000021
发明人推测，上述杂质应当是在原料药合成路线中，通过酰胺化反应制备化合物IM2步骤中，发生了成脲反应得到；
本发明的第二个方面提供了一种式I化合物在甲氧氯普胺或其盐的原料药、制剂有关物质检测时作为杂质对照品的用途；
本发明的第三方面提供了一种上述甲氧氯普胺双胺新杂质的检测方法，其色谱条件为：用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；用磷酸盐缓冲液为流动相A，用乙腈为流动相B，优选用 0.050mol/L磷酸二氢钾溶液(加入0.2ml N,N-二甲基辛胺，用磷酸调节pH至4.0)为流动相 A；梯度洗脱；流速1ml/min；检测波长275nm；柱温为35℃；
进一步的，所述梯度洗脱程序如下：
时间(min) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 92 8
10 92 8
15 90 10
40 70 30
45 70 30
46 92 8
55 92 8 
本发明中化合物的中文命名与结构式有冲突的，以结构式为准；结构式有明显错误的除外。
本发明首次公开了一种甲氧氯普胺双胺新杂质，制备得到的新杂质纯度大于99％，可作为甲氧氯普胺有关物质检测时的杂质对照品，有效监控甲氧氯普胺中的杂质含量，从而保证了甲氧氯普胺的安全性和有效性；且该杂质的IC50值表现出体外抗肿瘤活性，具有潜在的抗癌效果。
另外，常规HPLC检测方法不利于区分该杂质和甲氧氯普胺，从而易忽视该新杂质，因此即使甲氧氯普胺中的未知杂质均降至0.1％以下，也不能说明合成甲氧氯普胺的过程中未生成该杂质，更不可认为甲氧氯普胺与该杂质已完全分离，因此本发明开发的检测方法对于甲氧氯普胺双胺新杂质的检测具有明显优势。
附图说明：
图1：甲氧氯普胺双胺新杂质式I化合物的质谱图；
图2：甲氧氯普胺双胺新杂质式I化合物的氢谱图。
具体实施方式
以下结合实例说明本发明，但不限制本发明。在本领域内，技术人员对本发明所做的简单替换或改进均属于本发明所保护的技术方案内。
实施例1：
Figure BDA0003288825520000031
向100mL三颈瓶中加入甲氧氯普胺(2g，6.67mmol)，THF 40mL，DMF 2mL，吡啶(0.79g，10mmol)，冰浴下搅拌，降内温至0～5℃，向瓶内缓慢滴加氯甲酸苯酯(1.25g，8.01mmol)，控制内温不超过5℃，滴毕移除冰浴置于室温下反应，待原料消失后，加入N,N- 二乙基乙二胺(1.55g，13.34mmol)，加热内温30℃，保温反应2小时。反应结束旋干THF，加水另用DCM萃取30mL×3次，无水硫酸钠干燥，浓缩得到类白色固体，10倍体积异丙醇重结晶得白色固体1.9g，收率64.6％，HPLC纯度99.7％，mp：144-146℃，ESI-MS(m/z):44 2.21[M+H]+，905.35[2M+Na]+。
1H-NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.202(s,1H),8.173(s,1H),3.982(s,3H),3.509～3.537(m,2H),3.355 ～3.392(d,2H),2.572～2.659(m,12H),1.054～1.078(dd,12H)。
实施例2：
向100mL三颈瓶中加入甲氧氯普胺(2g，6.67mmol)，CH2Cl240mL，DMF 2mL，吡啶(0.79g，10mmol)，冰浴下搅拌，降内温至0～5℃，向瓶内缓慢滴加氯甲酸苯酯(1.25g，8.01mmol)，控制内温不超过5℃，滴毕移除冰浴置于室温下反应，待原料消失后，加入N, N-二乙基乙二胺(1.55g，13.34mmol)，加热内温30℃，保温反应2小时。反应结束旋干T HF，加水另用DCM萃取30mL×3次，无水硫酸钠干燥，浓缩得到类白色固体，10倍体积异丙醇重结晶得白色固体1.6g，收率54.4％，HPLC纯度99.4％。mp：144-146℃，ESI-MS(m/z): 442.21[M+H]+,905.35[2M+Na]+。核磁数据见实施例1。
实施例3：
向100mL三颈瓶中加入甲氧氯普胺(2g，6.67mmol)，THF 40mL，DMF 2mL，吡啶(0.79g，10mmol)，冰浴下搅拌，降内温至0～5℃，向瓶内缓慢滴加氯甲酸苯酯(1.25g，8.01mmol)，控制内温不超过10℃，滴毕移除冰浴置于室温下反应，待原料消失后，加入N, N-二乙基乙二胺(1.55g，13.34mmol)，加热内温40℃，保温反应2小时。反应结束旋干T HF，加水另用DCM萃取30mL×3次，无水硫酸钠干燥，浓缩得到类白色固体，10倍体积异丙醇重结晶得白色固体1.5g，收率51％，HPLC纯度99.3％，mp：144-146℃，ESI-MS(m/z): 442.21[M+H]+，905.35[2M+Na]+。核磁数据见实施例1。
实施例4：
向100mL三颈瓶中加入甲氧氯普胺(2g，6.67mmol)，THF 40mL，DMF 2mL，三乙胺(1.01g，10mmol)，冰浴下搅拌，降内温至0～5℃，向瓶内缓慢滴加氯甲酸苯酯(1.25g，8.01mmol)，控制内温不超过5℃，滴毕移除冰浴置于室温下反应，待原料消失后，加入N, N-二乙基乙二胺(1.55g，13.34mmol)，加热内温30℃，保温反应2小时。反应结束旋干T HF，加水另用DCM萃取30mL×3次，无水硫酸钠干燥，浓缩得到类白色固体，10倍体积异丙醇重结晶得白色固体1.5g，收率51％，HPLC纯度99.4％，mp：144-146℃，ESI-MS(m/z): 442.21[M+H]+，905.35[2M+Na]+。核磁数据见实施例1。
实施例5：甲氧氯普胺双胺新杂质的检测方法
供试品溶液取甲氧氯普胺原料药约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇：水(1:2) 10ml使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照溶液精密量取供试品溶液，用流动相定量稀释制成每1ml中约含1μg的溶液，作为对照溶液。
色谱条件色谱柱为Welch Xtimate-C8(5μm,4.6×250mm)；以0.050mol/L磷酸二氢钾溶液 (加入0.2ml N,N-二甲基辛胺，用磷酸调节pH至4.0)为流动相A,乙腈为流动相B；流速1ml/min；检测波长275nm；柱温为35℃，按表1进行线性梯度洗脱。
系统适用性要求理论塔板数按甲氧氯普胺峰计算不得少于4000。
测定法精密量取供试品溶液与对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分色谱峰保留时间的2倍。
表1有关物质的梯度洗脱程序
Figure BDA0003288825520000041
Figure BDA0003288825520000051
表2甲氧氯普胺双胺新杂质的相对保留时间及限度
Figure BDA0003288825520000052
在上述色谱条件下，甲氧氯普胺双胺新杂质所示的相对保留时间为0.68，能与甲氧氯普胺原料药实现有效分离。该杂质分析方法的建立，为监控甲氧氯普胺的有关物质含量提供了一种行之有效的手段，更加有利于保障甲氧氯普胺的产品质量以及患者的用药安全。
试验例：
本发明通过MTT法测定甲氧氯普胺双胺新杂质的细胞毒性，具体如下：
1.取肝癌HepG2细胞以6×104/mL的细胞密度接种于96孔培养板中，每孔100μL，置37℃、5％CO2及饱和湿度的条件下培养过夜。
2.待其贴壁后,分别加入式I化合物使其终浓度达到1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml,每组设5个复孔,每孔终体积为200μL。对照组加入等量的DMEM培养液。
3.培养24h和48h后,每孔加入MTT(5mg/mL)20μL,继续培养4h。
4.离心去上清，每孔加入DMSO 150μL溶解结晶颗粒。
5.酶标仪于570nm波长测定吸光度(D),计算不同时间、不同浓度的式I化合物对HepG2 细胞的增殖抑制率,实验重复3次。
6.计算增殖抑制率＝[(对照组D570-实验组D570)/对照组D570]×100％。
以同一样品的不同浓度对肿瘤细胞生长抑制率作图得到剂量反应曲线，计算得出式I化合物的IC50为3.26μg/ml，说明该杂质在体外对肿瘤细胞有杀伤作用，在对肿瘤患者用药时，具有潜在的抗癌效果。
以上所述的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种甲氧氯普胺双胺化合物，其结构如式Ⅰ所示：
Figure FDA0004089762310000011
2.一种根据权利要求1所述的甲氧氯普胺双胺化合物的检测方法，其色谱条件为：用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；用磷酸盐缓冲液为流动相A，用乙腈为流动相B；梯度洗脱；流速1ml/min；检测波长275nm；柱温为35℃。
3.根据权利要求2所述的甲氧氯普胺双胺化合物的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序如下：
。
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