CN113677359A - Cd25抗体 - Google Patents
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Abstract
本文提供了与CD25特异性结合的抗体。本文还提供了制备所述抗体的方法以及所述抗体的使用方法。例如，所述CD25抗体可以在治疗上用于治疗癌症或自身免疫性疾病。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年11月14日提交的美国临时申请序列号62/767,405的优先权，将该申请的内容通过引用以其整体特此并入本文。
背景技术
CD25蛋白是白介素-2(IL-2)受体的α链，并且是存在于调节性T细胞和激活的T细胞上的跨膜蛋白。在正常状态下，调节性T细胞组成性地表达CD25并用于抑制效应细胞的扩增。调节性T细胞维持健康状态并抑制效应T细胞对自身抗原的反应或对外来抗原的过度反应。在正常的保护性免疫应答中，效应T细胞在与外来抗原接触后繁殖，并克服了调节性T细胞的抑制作用。然而，在增殖性疾病的情况下，癌细胞通过增加调节性T细胞的量来使健康的免疫应答失能，从而限制了针对它们的效应T细胞的产生。需要另外的分子工具来改变表达CD25的调节性T细胞的增殖，例如从而抑制免疫系统以用于癌症疗法或从而上调免疫系统以用于自身免疫性疾病；本文提供了此类工具。
发明内容
本文提供了与CD25特异性结合的抗体(抗CD25抗体，在本文中可互换地称为CD25抗体)。所述抗体可能是人的、嵌合的或人源化的。本文还提供了所述抗体的使用方法和制备方法。例如，所述CD25抗体可以用于治疗癌症，包括向有需要的受试者施用抗体或其药物组合物。还提供了产生本文所述的CD25抗体的方法。
在一方面，本文提供了一种与人CD25结合并且具有以下特征中的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个的单克隆CD25抗体：
a.所述抗体不破坏IL-2配体与IL-2受体的α链(CD25)的结合，并且结合与7G7B6所结合的表位不同的表位；
b.所述抗体不破坏IL-2配体与IL-2受体的α链(CD25)的结合，但破坏IL-2受体的β链、γ链和α链(CD25)的三聚化；
c.所述抗体破坏IL-2配体与IL-2受体的α链、β链和/或γ链的结合，并且结合与达利珠单抗(daclizumab)或巴利昔单抗(baciliximab)所结合的表位不同的表位；
d.当与在7.4的pH下与CD25结合的亲和力相比时，所述抗体在低于7.4的pH下展现出更高的与CD25结合的亲和力；
e.所述抗体包含表1A、表1C、表1E、表1G、表1I、表1K、表2A、表2B、表2C、表4A和表5A或图3A、图3B和图5中呈现的可变重链中的任一个的氨基酸序列、其人源化形式、或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列；
f.所述抗体包含表1B、表1D、表1F、表1H、表1J、表1L、表3A、表3B、表3C、表4B和表5B或图4A、图4B和图6中呈现的可变轻链中的任一个的氨基酸序列、其人源化形式、或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列；
g.所述抗体的VH包含如表1A、表1C、表1E、表1G、表1I、表1K、表2A、表2B、表2C、表4A、表5A和表6中所呈现的或在图3A、图3B和图5中呈现的序列中含有的CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列中的任一个；
h.所述CD25抗体的VL包含如表1B、表1D、表1F、表1H、表1J、表1L、表3A、表3B、表3C、表4B、表5B和表7中所呈现的或在图4A、图4B和图6中呈现的序列中含有的CDRL1、CDRL2和CDRL3的氨基酸序列中的任一个；以及
i.所述抗体包含表6中呈现的组合中的任一个的CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列和表7中呈现的组合中的任一个的CDRL1、CDRL2和CDRL3的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗体的VH包含如表1A、表1C、表1E、表1G、表1I、表1K、表2A、表2B、表2C、表4A、表5A或表6中所呈现的或在图3A、图3B或图5中呈现的序列中含有的CDRH1、CDRH2和CDRH3组合的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述CD25抗体的VL包含如表1B、表1D、表1F、表1H、表1J、表1L、表3A、表3B、表3C、表4B、表5B或表7中所呈现的或在图4A、图4B或图6中呈现的序列中含有的CDRL1、CDRL2和CDRL3组合的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含表6中呈现的组合中的任一个的CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含表7中呈现的组合中的任一个的CDRL1、CDRL2和CDRL3的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗体是人抗体。在一些实施方案中，所述抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，所述抗体是嵌合抗体。在一些实施方案中，所述抗体是抗体片段。在一些实施方案中，所述抗体还结合食蟹猴CD25。
在另一方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的抗体中的任一种或药物组合物。在一些实施方案中，本文提供了一种耗尽受试者中调节性T细胞的数量的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的抗体中的任一种或药物组合物。在一些实施方案中，所述受试者患有癌症；在其他实施方案中，所述受试者患有自身免疫相关疾病或障碍。
在另一方面，本文提供了一种耗尽包含外周血单核细胞的样品中调节性T细胞的数量的方法，所述方法包括使所述样品与本文所述的抗体中的任一种接触。
在相关方面，本文提供了药物组合物或试剂盒，所述药物组合物或试剂盒包含本文所述的抗体、编码本文所述抗体中的任一种的核酸序列、包含所述核酸的载体、以及表达本文所述抗体中的任一种的噬菌体中的任何一种或多种。
本文描述的所有上述特征(包括任何所附权利要求、摘要和附图)和/或如此公开的任何方法或过程的所有步骤可以以任何组合的形式进行组合，但其中此类特征和/或步骤中的至少一些互相排斥的组合除外。
附图说明
通过结合附图参考以下描述，可以理解本申请。
图1是本文所述的CD25抗体类别之一的所需特征的示例性描述：仅阻断IL-2受体的α链(CD25)、不阻断IL-2的结合、不破坏由IL-2介导的信号转导并且导致Treg耗尽的CD25抗体。数据是用Fab克隆收集的，但如本文所提供的，在一些实施方案中，所述CD25抗体是全长抗体，即人IgG1抗体。
图2是用于CD25抗体发现、体外测试和体内测试的示例性工作流程。
图3A和图3B描绘了本公开文本的示例性CD25抗体的可变重链(VH)氨基酸序列。
图4A和图4B描绘了本公开文本的示例性CD25抗体的可变轻链(VL)氨基酸序列。
图5描绘了本公开文本的示例性CD25抗体的VH氨基酸序列。
图6描绘了本公开文本的示例性CD25抗体的VL氨基酸序列。
图7描绘了使用生物传感器利用交叉阻断测定对非IL-2阻断剂的鉴定。
图8使用生物传感器描绘了噬菌体表达与IL-2非阻断抗体7G7B6竞争的本公开文本的Fab。
图9显示pSTAT5水平是IL-2剂量依赖性的并且被IL-2阻断抗体达利珠单抗抑制。
图10描绘了本公开文本的D5 Fab对pSTAT5水平的影响。数据表明D5 Fab是部分IL-2阻断剂。
图11描绘了相对于最大IL-2pSTAT5水平，不同浓度的D5 Fab对pSTAT5水平的影响。
图12描绘了与对照(仅IL-2、达利珠单抗(Dac)和7G7B6)相比，在1、2和5ug/mL下的若干个Fab克隆之间的pSTAT5水平的差异。
图13A-图13C描绘了被重新格式化为人IgG1抗体的若干个Fab克隆的Kd和Koff速率的差异(图13A)。与可商购抗体7G7B6、达利珠单抗和巴利昔单抗(Basiliximab)相比，若干个重新格式化克隆具有更好的亲和力和Koff速率(图13B、图13C)。
图14A-图14D显示了来自使用重新格式化为人IgG1抗体的Fab克隆针对IL-2和可商购抗体7G7B6、达利珠单抗和巴利昔单抗的表位分组交叉竞争测定的代表性数据。抗体具有不同的交叉阻断谱。
图15A-图15B描绘了人IgG1重新格式化Fab在CD25+细胞系SUDHL-1和HEK IL-2报告细胞上的特异性结合(图15A)以及在CD25-细胞系SUDHL-2上的不结合(图15B)。
图16A-图16B显示了与可商购抗体7G7B6、达利珠单抗和巴利昔单抗相比，人IgG1重新格式化Fab克隆对CD25+细胞系SUDHL-1的代表性剂量响应曲线(图16A)。与IL-2非阻断剂7G7B6相比，若干个克隆显示出更好的EC50值(图16B)。
图17显示了与重组食蟹猴CD25蛋白结合的人IgG1重新格式化Fab克隆(25nM)的代表性数据。大多数克隆以剂量依赖性方式结合(从25nM开始且稀释3倍)。
图18A-图18B显示了与0.1ng/mL下的IL-2水平相比，跨越在5ug/ml下的若干个人IgG1重新格式化Fab克隆的pSTAT5水平的差异(图18A)。图18B显示了随着采用5ug/mL每种抗体的IL-2剂量响应曲线(从10ng/mL开始且稀释10倍)的pSTAT5水平。与0.1ng/mL下的可商购抗体7G7B6、达利珠单抗和巴利昔单抗相比，显示一些克隆是更好的IL-2阻断剂和IL-2非阻断剂。
图19A-图19B显示了在使用PBMC作为效应细胞和SUHL-1细胞作为靶标的ADCC测定中引发细胞杀伤的20ug/mL下的人IgG1重新格式化Fab克隆的代表性数据(图19A)。从10ug/mL开始且抗体稀释5倍，与7G7B6相比，若干个克隆显示出更高的ADCC(图19B)。
具体实施方式
本文提供了与CD25特异性结合的抗体。所述抗体可能是人的、嵌合的或人源化的。本文还提供了所述抗体的使用方法和制备方法。例如，所述CD25抗体可以用于治疗癌症，包括向有需要的受试者施用抗体或其药物组合物。还提供了产生本文所述的CD25抗体的方法。
定义
除非本文另外定义，否则本文中使用的所有技术术语和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。在本发明的实践或测试中可以使用与本文所述的那些方法和材料类似或等效的任何方法和材料，但描述示例性方法和材料。
本文提供的标题不是对本发明的各个方面或实施方案的限制。因此，通过在整体上参考说明书，可以更全面地定义下面紧接着定义的术语。
数值范围包括定义所述范围的数字。
如本文所用，术语抗体包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、人抗体、人源化抗体、非人抗体、嵌合抗体、单价抗体和抗体的抗原结合片段(例如Fab片段、Fab'2片段或scFV)。本文还提供了展现出对CD25的特异性的抗体-药物缀合物、双特异性抗体和多特异性抗体。非人抗体(例如小鼠抗体)可以使用常规技术(例如，通过引入框架区中的变化，同时保留小鼠CDR)进行“人源化”。
术语“多核苷酸”和“核酸”在本文中可互换使用，并且是指任何长度的核苷酸(其可以是核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸)的聚合形式。所述术语包括但不限于单链、双链或多链DNA或RNA；基因组DNA；cDNA；DNA-RNA杂合体；或者包括嘌呤和嘧啶碱基或其他天然的、化学修饰的或生化修饰的核苷酸碱基，非天然的或衍生的核苷酸碱基的聚合物。除非明确限制或另有说明，否则所述术语涵盖含有天然核苷酸的已知类似物并且具有类似的结合特性的核酸，并且以与天然存在的核苷酸类似的方式代谢。
当一个核酸或氨基酸序列被称为与另一个核酸或氨基酸序列具有一定百分比的“序列同一性”或“同一性”或与另一个核酸或氨基酸序列是一定百分比“相同的”时，在所述序列进行比对时、在比较这两个序列时所述百分比的碱基或氨基酸是相同的，并且处于相同的相对位置。
术语“个体”、“受试者”和“患者”在本文中可互换使用，并且是指需要治疗或疗法的任何受试者。所述受试者可以是哺乳动物受试者。哺乳动物受试者包括例如人、非人灵长类动物、啮齿动物(例如，大鼠、小鼠)、兔类动物(例如，兔子)、有蹄类动物(例如，牛、绵羊、猪、马、山羊等)等。在一些实施方案中，所述受试者是人。在一些实施方案中，所述受试者是非人灵长类动物。在一些实施方案中，所述受试者是伴侣动物(例如猫、狗)。
抗体
本文提供了与CD25特异性结合的抗体。此类抗体能够与存在于调节性T细胞上的单独的或与其他分子缔合以形成高亲和力IL-2受体的CD25抗原结合。
在一些实施方案中，所述CD25抗体是与CD25特异性结合的人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体是嵌合抗体，例如小鼠-人嵌合抗体，例如包含小鼠可变结构域和人恒定区的抗体。
本公开文本的CD25抗体可以是人IgA、IgD、IgE、IgG或IgM抗体中的任一种。所述IgA抗体可以是IgA1或IgA2抗体。所述IgG抗体可以是IgG1、IgG2、IgG2a、IgG2b、IgG3或IgG4抗体。也可以制备和使用这些抗体中的任一种的组合。在一些实施方案中，所述恒定区是IgG类型的，例如人IgG类型的。在一些实施方案中，所述恒定区是IgG1类型的，例如人IgG1类型的。
在一些实施方案中，所述CD25抗体展现出对多于一种物种的交叉反应性，例如与人CD25和非人CD25特异性结合，例如与人CD25和食蟹猴CD25特异性结合。
本文提供的抗体的KD(亲和力常数)的范围为约10^-5至约10^-14nM。在一些实施方案中，本文提供的抗体的KD的范围为约10^-8至约10^-12nM。在示例性实施方案中，CD25抗体的KD是至少约10^-5nM、约10^-6nM、约10^-7nM nM、约10^-8nM、约10^-9nM、约10^-10nM、约10^-11nM、约10^-12nM、约10^-13nM、或甚至约10^-14nM。
本文提供的抗体的Kd(解离速率常数)的范围为约10^-2至约10^-6 1/s。
在一些实施方案中，所述CD25抗体在生理pH(约7.4)和非生理pH下展现出相同的对CD25抗原的亲和力(KD)。在一些实施方案中，所述CD25抗体在生理pH(约7.4)和非生理pH下展现出相同的对CD25抗原的解离速率(Kd)。
在一些实施方案中，所述CD25抗体在生理pH(约7.4)和非生理pH下展现出不同的对CD25抗原的亲和力(不同KD)。在一些实施方案中，所述CD25抗体在生理pH(约7.4)和非生理pH下展现出不同的对CD25抗原的解离速率常数(不同Kd)。
在一些实施方案中，与在低于生理pH的pH下(例如当pH为7.3、7.2、7.1、7.0、6.9、6.8、6.7、6.6、6.5、6.4、6.3、6.2、6.1或更低时)相比，所述CD25抗体在生理pH(约7.4)下展现出更低的对CD25抗原的亲和力(更高的KD)。在示例性实施方案中，当与在约7.4的pH下的亲和力相比时，所述抗体在约6.5的pH下展现出更高的对CD25抗原的亲和力。在一些实施方案中，此类抗体可用于在酸性环境、低氧环境(例如肿瘤微环境)中保持活性或展现出增强的活性。
在一些实施方案中，所述抗体是非IL-2阻断抗体(非IL-2阻断剂)，也就是说，所述抗体与CD25的结合不破坏或阻止IL-2配体与CD25(IL-2α链)的结合，并且不影响IL-2介导的信号转导，例如通过IL-2/JAK3/STAT-5信号传导途径的信号传导。在一些实施方案中，所述抗体不破坏IL-2配体与CD25(IL-2α链)的结合，并且与7G7B6抗体所结合的表位不同的表位结合。在一些实施方案中，所述抗体不破坏IL-2配体与CD25(IL-2α链)的结合，但破坏IL-2受体的β链、γ链和α链(CD25)的三聚化。
在一些实施方案中，所述抗体是IL-2阻断抗体(IL-2阻断剂)，例如，所述抗体破坏或阻止IL-2配体与受体的α链、β链和/或γ链的结合，并降低或抑制IL-2介导的信号转导。在某些实施方案中，所述抗体破坏或阻止IL-2配体与CD25的结合。在一些实施方案中，所述抗体破坏或阻止IL-2配体与CD25的结合，并与达利珠单抗或巴利昔单抗所结合的表位不同的表位结合。
在一些实施方案中，所述CD25抗体是部分阻断抗体(部分IL-2阻断剂)，并且部分但不完全破坏IL-2配体与IL-2受体的α链(CD25)、β链和/或γ链的结合，和/或部分但不完全降低IL-2介导的信号转导。
在一些实施方案中，所述CD25抗体破坏或阻止α、β和γIL-2链的异三聚化。在一些实施方案中，所述抗体不阻断IL-2配体与CD25的结合，但破坏或阻止α、β和γIL-2链的异三聚化。在某些实施方案中，所述抗体与调节性T细胞选择性地结合。在其他实施方案中，所述抗体与T效应细胞选择性地结合。
在一些实施方案中，所述CD25抗体的结合导致调节性T细胞(Treg)的耗尽，同时允许效应T细胞(Teff)的扩增。
在一些实施方案中，所述抗体以反式取向与CD25结合。在其他实施方案中，所述抗体以顺式取向与CD25结合。在仍其他实施方案中，所述抗体能够以顺式或反式构型与CD25结合。
在一些实施方案中，与7G7B6(抗人CD25与小鼠IgG2a Fc受体；IL-2非阻断剂；BioXcell)与CD25的结合相比，所述CD25抗体展现出更大的对CD25的结合亲和力。
表1A-表1L、表2A-表2C、表3A-表3C、表4A-表4B、表5A-表5B、表6和表7和图3A、图3B、图4A、图4B、图5和图6提供了本文所述的CD25抗体的示例性序列。应注意，所示的互补决定区(CDR)和框架(FR)序列是基于针对抗体注释的IMGT约定。然而，技术人员可以基于所呈现的VH和VL序列，使用针对抗体注释的其他算法/约定(如Kabat和Chothia)来确定CDR和框架序列的其他接合。因此，本公开文本的CDR和FR序列不限于在下表中注释的那些示例性CDR和FR序列，而是由技术人员鉴于可变区的序列而理解并确定的CDR。
表1A-D5 VH序列
表1B-D5 VL序列
表1C-D11 VH序列
表1D-D11 VL序列
表1E-D16 VH序列
表1F-D16 VL序列
表1G-D17 VH序列
表1H-D17 VL序列
表1I-D34 VH序列
表1J-D34 VL序列
表1K-D36 VH序列
表1l-D36 VL序列
表2A示例性克隆-重链序列
表2B示例性克隆-重链序列
表2C示例性克隆-重链序列
表3A示例性克隆-轻链序列
表3B示例性克隆-轻链序列
表3C示例性克隆-轻链序列
表4A示例性克隆-重链序列
表4B示例性克隆-轻链序列
表5A示例性克隆-重链序列
表5B示例性克隆-轻链序列
表6-重链CDR
表7轻链CDR
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含表2A、表2B和表2C中的任一个中呈现的“V-D-J区”重链序列以及表3A、表3B和表3C中的任一个中呈现的“V-J区”轻链序列、其人源化形式、或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含来自由其给定的“ID”命名的特定抗体克隆的重链可变区序列(或其人源化形式)和来自相同抗体克隆的轻链可变区序列(例如来自由相同“ID”鉴定的克隆的轻链)(或其人源化形式)。因此，可以通过表2A-表2C或表3A-表3C中所示的ID来鉴定抗体克隆的起源。例如，在此类实施方案中，所述CD25抗体包含如表2B的第1行所呈现的抗体克隆“AHH03760”的重链可变区(或其人源化形式)和如表3B的第3行所呈现的抗体克隆“AHH03760”的轻链可变区(或其人源化形式)。在其他实施方案中，所述CD25抗体包含来自由其给定的“ID”命名的特定抗体克隆的重链可变区序列(或其人源化形式)和来自不同抗体克隆的轻链可变区序列(例如来自由相同“ID”鉴定的克隆的轻链)(或其人源化形式)。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含表2A、表2B和表2C中的任一个中呈现的CDRH1、CDRH2和CDRH3以及表3A、表3B和表3C中的任一个中呈现的CDRL1、CDRL2和CDRL3。在此类实施方案中，所述CD25抗体包含来自特定抗体克隆的CDRH1、CDRH2和CDRH3以及来自相同抗体克隆的CDRL1、CDRL2和CDRL3。如上所讨论，可以通过表2A-表2C或表3A-表3C中所示的ID来鉴定抗体克隆的起源。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含表4A中呈现的重链可变区、其人源化形式、或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。所述可变区可以包含用于形成完整可变区的连续的HFR1、CDRH1、HFR2、CDRH2、HFR3、CDRH3、HRF4序列，其人源化形式，或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述CD25抗体包含表4B中呈现的轻链可变区、其人源化形式、或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。所述可变区可以包含用于形成完整可变区的连续的LFR1、CDRL1、LFR2、CDRL2、LFR3、CDRL3、LRF4序列，其人源化形式，或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述CD25抗体包含如表4A中所呈现的完整重链可变区和如表4B中所呈现的完整轻链可变区，包括其人源化形式以及与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述CD25抗体包含来自特定抗体克隆的重链可变区序列和来自相同抗体克隆的轻链可变区序列，包括其人源化形式以及与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述CD25抗体包含来自特定抗体克隆的重链可变区序列和来自不同抗体克隆的轻链可变区序列，包括其人源化形式以及与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。可以通过表4A和表4B中所示的ID来鉴定抗体克隆的起源。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含表4A中呈现的CDRH1、CDRH2和CDRH3以及表4B中呈现的CDRL1、CDRL2和CDRL3。在一些实施方案中，所述CD25抗体包含来自特定抗体克隆的CDRH1、CDRH2和CDRH3以及来自相同抗体克隆的CDRL1、CDRL2和CDRL3。在其他实施方案中，所述CD25抗体包含来自特定抗体克隆的CDRH1、CDRH2和CDRH3以及来自不同抗体克隆的CDRL1、CDRL2和CDRL3。如上所讨论，可以通过表4A和表4B中所示的ID来鉴定抗体克隆的起源。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含表5A中呈现的重链可变区，包括其人源化形式以及与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。所述可变区可以包含用于形成完整可变区的连续的HFR1、CDRH1、HFR2、CDRH2、HFR3、CDRH3、HRF4序列，包括其人源化形式以及与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述CD25抗体包含表5B中呈现的轻链可变区，包括其人源化形式以及与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。所述可变区可以包含用于形成完整可变区的连续的LFR1、CDRL1、LFR2、CDRL2、LFR3、CDRL3、LRF4序列，包括其人源化形式以及与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述CD25抗体包含如表5A中所呈现的完整重链可变区和如表5B中所呈现的完整轻链可变区，包括其人源化形式以及与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述CD25抗体包含来自特定抗体克隆的重链可变区序列和来自相同抗体克隆的轻链可变区序列，包括其人源化形式以及与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。在其他实施方案中，所述CD25抗体包含来自特定抗体克隆的重链可变区序列和来自不同抗体克隆的轻链可变区序列，包括其人源化形式以及与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。可以通过表5A和表5B中所示的ID来鉴定抗体克隆的起源。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含表5A中呈现的CDRH1、CDRH2和CDRH3以及表5B中呈现的CDRL1、CDRL2和CDRL3。在一些实施方案中，所述CD25抗体包含来自特定抗体克隆的CDRH1、CDRH2和CDRH3以及来自相同抗体克隆的CDRL1、CDRL2和CDRL3。在其他实施方案中，所述CD25抗体包含来自特定抗体克隆的CDRH1、CDRH2和CDRH3以及来自不同抗体克隆的CDRL1、CDRL2和CDRL3。如上所讨论，可以通过表5A和表5B中所示的ID来鉴定抗体克隆的起源。
所述CD25抗体包含表1A、表1C、表1E、表1G、表1I、表1K、表2A、表2B、表2C、表4A和表5A或图3A、图3B和图5中呈现的可变重链中的任一个的氨基酸序列、或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述CD25抗体包含表1A、表1C、表1E、表1G、表1I、表1K、表2A、表2B、表2C、表4A和5A或图3A、图3B和图5中呈现的已进一步人源化的可变重链中的任一个的氨基酸序列。
所述CD25抗体包含表1B、表1D、表1F、表1H、表1J、表1L、表3A、表3B、表3C、表4B和表5B或图4A、图4B和图6中呈现的可变轻链中的任一个的氨基酸序列、或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述CD25抗体包含表1B、表1D、表1F、表1H、表1J、表1L、表3A、表3B、表3C、表4B和表5B或图4A、图4B和图6中呈现的已使用常规技术进一步人源化的可变重链中的任一个的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含表1A、表1C、表1E、表1G、表1I、表1K、表2A、表2B、表2C、表4A和表5A或图3A、图3B和图5中呈现的可变重链中的任一个的氨基酸序列、其人源化形式、或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列；并且所述CD25抗体包含表1B、表1D、表1F、表1H、表1J、表1L、表3A、表3B、表3C、表4B和表5B或图4A、图4B和图6中呈现的可变轻链中的任一个的氨基酸序列、其人源化形式、或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述CD25抗体的VH包含如表1A、表1C、表1E、表1G、表1I、表1K、表2A、表2B、表2C、表4A或表5A中所呈现的或在图3A、图3B或图5中呈现的序列中含有的CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述CD25抗体的VH包含如表6中所呈现的CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述CD25抗体的VL包含如表1B、表1D、表1F、表1H、表1J、表1L、表3A、表3B、表3C、表4B或表5B中所呈现的或在图4A、图4B或图6中呈现的序列中含有的CDRL1、CDRL2和CDRL3的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述CD25抗体的VL包含如表7中所呈现的CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述CD25抗体的VH包含如表1A、表1C、表1E、表1G、表1I、表1K、表2A、表2B、表2C、表4A或表5A中所呈现的或在图3A、图3B或图5中呈现的序列中含有的CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列；并且所述CD25抗体的VL包含如表1B、表1D、表1F、表1H、表1J、表1L、表3A、表3B、表3C、表4B或表5B中所呈现的或在图4A、图4B或图6中呈现的序列中含有的CDRL1、CDRL2和CDRL3的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述CD25抗体的VH包含如表6中所呈现的CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列，并且所述CD25抗体的VL包含如表7中所呈现的CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗体的VH包含表5A中呈现的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体的VL包含表5B中呈现的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含VH和VL，所述VH包含表5A中呈现的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列，所述VL包含表5B中呈现的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗体包含D5 CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列、表1A和表1B中呈现的D5 VH和D5 VL氨基酸序列、或表1A和表1B中呈现的D5 VH和D5 VL氨基酸序列的人源化形式。
在一些实施方案中，所述抗体包含D11 CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列、表1C和表1D中呈现的D11 VH和D11 VL氨基酸序列、或表1C和表1D中呈现的D11 VH和D11 VL氨基酸序列的人源化形式。
在一些实施方案中，所述抗体包含D16 CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列、表1E和表1F中呈现的D16 VH和D16 VL氨基酸序列、或表1E和表1F中呈现的D16 VH和D16 VL氨基酸序列的人源化形式。
在一些实施方案中，所述抗体包含D17 CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列、表1G和表1H中呈现的D17 VH和D17 VL氨基酸序列、或表1G和表1H中呈现的D17 VH和D17 VL氨基酸序列的人源化形式。
在一些实施方案中，所述抗体包含D34 CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列、表1I和表1J中呈现的D34 VH和D34 VL氨基酸序列、或表1I和表1J中呈现的D34 VH和D34 VL氨基酸序列的人源化形式。
在一些实施方案中，所述抗体包含D36 CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列、表1K和表1L中呈现的D36 VH和D36 VL氨基酸序列、或表1K和表1L中呈现的D36 VH和D36 VL氨基酸序列的人源化形式。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含表5A中呈现的AH04507、AH04522、AH04526、AH04527、AH04734、AH04750、AH05214、AH05247、AH05249、AH05251、AH05256、AH05257、AH05258、AH05259、AH05268、AH05271、AH05274、AH05280、AH05285、AH05286、AH4501、AH4502、AH4503、AH4505、AH4509、AH4511、AH4518、AH4523、AH4524、AH4525、D11、D17、D34、D36、D5、BP003-T2P1C4、BP003-T2P1D10、BP003-T2P1D7、BP003-T2P1E3或BP003-T2P1D1克隆中的任一个的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含表5B中呈现的AH04507、AH04522、AH04526、AH04527、AH04734、AH04750、AH05214、AH05247、AH05249、AH05251、AH05256、AH05257、AH05258、AH05259、AH05268、AH05271、AH05274、AH05280、AH05285、AH05286、AH4501、AH4502、AH4503、AH4505、AH4509、AH4511、AH4518、AH4523、AH4524、AH4525、D11、D17、D34、D36、D5、BP003-T2P1C4、BP003-T2P1D10、BP003-T2P1D7、BP003-T2P1E3或BP003-T2P1D1克隆中的任一个的CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含表5A中呈现的AH04507、AH04522、AH04526、AH04527、AH04734、AH04750、AH05214、AH05247、AH05249、AH05251、AH05256、AH05257、AH05258、AH05259、AH05268、AH05271、AH05274、AH05280、AH05285、AH05286、AH4501、AH4502、AH4503、AH4505、AH4509、AH4511、AH4518、AH4523、AH4524、AH4525、D11、D17、D34、D36、D5、BP003-T2P1C4、BP003-T2P1D10、BP003-T2P1D7、BP003-T2P1E3或BP003-T2P1D1克隆中的任一个的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列；并且所述CD25抗体包含表5B中呈现的AH04507、AH04522、AH04526、AH04527、AH04734、AH04750、AH05214、AH05247、AH05249、AH05251、AH05256、AH05257、AH05258、AH05259、AH05268、AH05271、AH05274、AH05280、AH05285、AH05286、AH4501、AH4502、AH4503、AH4505、AH4509、AH4511、AH4518、AH4523、AH4524、AH4525、D11、D17、D34、D36、D5、BP003-T2P1C4、BP003-T2P1D10、BP003-T2P1D7、BP003-T2P1E3或BP003-T2P1D1克隆中的任一个的CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH04507的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH04522的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH04526的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH04527的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH04734的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH04750的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH05214的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH05247的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH05249的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH05251的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH05256的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH05257的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH05258的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH05259的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH05268的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH05271的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH05274的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH05280的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH05285的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH05286的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH4501的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH4502的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH4503的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH4505的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH4509的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH4511的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH4518的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH4523的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH4524的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含AH4525的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含D11的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含D17的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含D34的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含D36的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体包含D5的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，所述CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，CD25抗体包含BP003-T2P1C4的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，CD25抗体包含BP003-T2P1D10的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，CD25抗体包含BP003-T2P1D7的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，CD25抗体包含BP003-T2P1E3的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，CD25抗体包含BP003-T2P1D1的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列(分别在表5A和表5B中呈现)；在一些实施方案中，CD25抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述CD25抗体被缀合用于多种目的，包括但不限于用于治疗和检测/诊断。
本文还提供了编码本文提供的任何CD25抗体的核酸序列。在表1A-表1L中提供了编码D5、D11、D16、D17、D34和D36 VH和VL区的示例性核酸序列，人们可以使用其人源化形式。本文还提供了包含编码所述抗体的任何核酸的载体、包含此类载体的噬菌体和包含此类载体的宿主细胞。
抗体产生和测试
图2是用于CD25抗体发现、体外测试和体内测试的示例性非限制性工作流程，但是本领域技术人员认识到存在替代方法来进行抗体发现和测试。
可以通过将CD25完整或部分免疫原注射至动物(例如小鼠或兔子)中产生本文所述的CD25抗体。可以收集来自动物的CD25免疫原阳性B细胞，并由其产生噬菌体文库。在一些实施方案中，所述噬菌体表达候选CD25抗体的Fab片段。噬菌体可以经历多轮筛选(本文称为噬菌体淘选)，例如针对浓度相继降低的CD25抗原的筛选，以选择那些能够以高亲和力结合CD25的Fab片段。例如，可以针对CD25抗原包被的珠或例如一些其他底物来筛选噬菌体。在一些实施方案中，所述筛选在生理pH(例如约pH 7.4)下进行。在其他实施方案中，所述筛选在较低pH下进行，例如在约6.5的pH下进行，以筛选能够在较低pH下结合CD25抗原的Fab片段，例如以用于治疗环境中，例如以用于低氧、酸性肿瘤微环境中。
可以使用多种体外、体内、离体和/或基于细胞的测定来测试本文产生的CD25抗体的功效。
在一些实施方案中，可以测定本文中的CD25抗体耗尽调节性T细胞的能力并且在此基础上对其进行进一步选择。在特定实施方案中，可以测定本文中的CD25抗体在酸性环境中(例如，在低于生理pH的pH下，例如在pH为7.3、7.2、7.1、7.0、6.9、6.8、6.7、6.6、6.5、6.4、6.3、6.2、6.1或更低时)耗尽调节性T细胞的能力，并且在此基础上对其进行进一步选择。
在一些实施方案中，可以针对pSTAT5体外测定来测定本文中的CD25抗体并且在此基础上对其进行进一步选择，所述测定用于测定通过IL-2/IL-2受体途径的信号传导，它的维持表明所述抗体不是IL-2阻断抗体。
在一些实施方案中，可以测定本文中的CD25抗体以用于使用生物传感器筛选来表征分子相互作用。
在一些实施方案中，可以针对采用已知机制与其他已知CD25抗体的结合竞争来测定本文中的CD25抗体。
在一些实施方案中，可以测定本文中的CD25抗体的表位特异性。
在一些实施方案中，可以测定本文中的CD25抗体成为非IL-2阻断剂、IL-2阻断剂或部分IL-2阻断剂的能力。
治疗用途
本文提供了用于治疗用途(例如用于增殖性疾病或障碍(如癌症)或用于自身免疫性疾病)的CD25抗体。
因此，本文提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的治疗性CD25抗体。在一些实施方案中，所述癌症是原发性癌症。在一些实施方案中，所述癌症是转移性癌症。在一些实施方案中，所述癌症涉及实体瘤；在其他实施方案中，所述癌症涉及液体肿瘤，例如基于血液的癌症。在示例性实施方案中，所述CD25抗体是非IL-2阻断抗体。
因此，本文提供了治疗自身免疫相关疾病或障碍的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的治疗性CD25抗体。在示例性实施方案中，所述CD25抗体是IL-2阻断抗体。
如本文所用，受试者是指被分类为哺乳动物的任何动物，包括人、家畜和农场动物以及动物园、体育或宠物动物，如狗、马、兔、牛、猪、仓鼠、沙鼠、小鼠、雪貂、大鼠、猫等。受试者可以是雄性或雌性。
本文提供的任何治疗性CD25抗体的施用可以与其他已知药物/治疗(例如小分子药物或生物制剂)组合施用。所述施用可以是依序的也可以是并行的。
本文所述的治疗性CD25抗体的体内施用可以通过静脉内、瘤内、颅内、病灶内(例如病灶内注射、直接接触扩散)、腔内(腹膜内、胸膜内、子宫内、直肠内)、腹膜内、肌肉内、皮下、局部、口服、经皮、植入、吸入、鞘内、心室内或鼻内进行。在示例性实施方案中，所述施用途径是通过静脉内注射。
将施用治疗有效量的治疗性抗体。所述治疗性抗体的适当剂量可以基于癌症的严重程度、受试者的临床状况、受试者的临床病史和对治疗的反应以及主治医师的判断来确定。
根据施用途径，本文提供的CD25抗体的剂量可以从每天约1ng/kg直至约1000mg/kg受试者体重或更多而变化。为了在若干天或更长时间内重复施用，根据癌症的严重程度，可持续治疗直至实现所需症状抑制。取决于医师所希望实现的药代动力学衰减的模式，剂量方案也是可用的。例如，本文提供了每周一至二十次对个体进行给药。在某些实施方案中，给药频率为每天三次、每天两次、每天一次、每隔一天一次、每周一次、每两周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每七周一次、每八周一次、每九周一次、每十周一次、或每月一次、每两个月一次、每三个月一次或更长时间。所述疗法的进展可通过常规技术和测定进行监测。给药方案可随时间变化而与所用剂量无关。
诊断用途
本文提供的CD25抗体可以用于诊断和检测目的。根据应用，可以在体内或体外检测和定量CD25抗体。
本文提供的CD25抗体可用于多种免疫测定。这些免疫测定包括但不限于酶联免疫吸附测定(ELISA)、蛋白质印迹、放射免疫测定(RIA)、流式细胞术、放射免疫测定、免疫荧光测定、分光光度法、射线照相术、电泳、高效液相色谱法(HPLC)或薄层色谱法(TLC)。
本文提供的CD25抗体可以包含可检测标记，例如可通过光谱、光化学、生物化学、免疫化学、荧光、电、光学或化学方法检测的标记。本公开文本中有用的标记包括但不限于荧光染料、放射性标记、酶、比色标记、亲和素或生物素。
在一些实施方案中，所述CD25抗体用同位素进行放射性标记，所述同位素可用于通过核医学设备(SPECT、PET或闪烁法)成像。
药物组合物
本公开文本提供了包含治疗性CD25抗体的组合物，在一些实施方案中，所述组合物是无菌的。所述药物组合物通常包含药学上可接受的赋形剂中的有效量的治疗性抗体。
试剂盒和制品
本公开文本还提供了包含本文所述的任何CD25抗体的试剂盒，例如以用于治疗或诊断用途。在一些实施方案中，所述试剂盒进一步含有选自以下中的任一种的组分：二级抗体、用于免疫组织化学分析的试剂、药学上可接受的赋形剂和说明书及其任何组合。在一些实施方案中，所述试剂盒包含本文所述治疗性组合物中的一种或多种，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
本申请还提供了包含本文所述治疗性或诊断性组合物或试剂盒中的任一种的制品。制品的例子包括小瓶(例如密封小瓶)。
本文提供的描述阐述了许多示例性构型、方法、参数等。然而，应认识到，这样的描述并不旨在作为对本公开文本的范围的限制，而是旨在作为示例性实施方案的描述而提供。
包括以下实施例用于说明性目的，而不旨在限制本发明的范围。
列举的实施方案
实施方案1.一种与人CD25结合并且具有以下特征中的至少一个的单克隆CD25抗体：
a.所述抗体不破坏IL-2配体与IL-2受体的α链(CD25)的结合，并且结合与7G7B6所结合的表位不同的表位；
b.所述抗体不破坏IL-2配体与IL-2受体的α链(CD25)的结合，但破坏IL-2受体的β链、γ链和α链(CD25)的三聚化；
c.所述抗体破坏IL-2配体与IL-2受体的α链(CD25)、β链和/或γ链的结合，并且结合与达利珠单抗或巴利昔单抗所结合的表位不同的表位；
d.当与在7.4的pH下与CD25结合的亲和力相比时，所述抗体在低于7.4的pH下展现出更高的与CD25结合的亲和力；
e.所述抗体包含表1A、表1C、表1E、表1G、表1I、表1K、表2A、表2B、表2C、表4A和表5A或图3A、图3B和图5中呈现的可变重链中的任一个的氨基酸序列、其人源化形式、或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列；
f.所述抗体包含表1B、表1D、表1F、表1H、表1J、表1L、表3A、表3B、表3C、表4B和表5B或图4A、图4B和图6中呈现的可变轻链中的任一个的氨基酸序列、其人源化形式、或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列；
g.所述抗体的VH包含如表1A、表1C、表1E、表1G、表1I、表1K、表2A、表2B、表2C、表4A、表5A和表6中所呈现的或在图3A、图3B和图5中呈现的序列中含有的CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列中的任一个；
h.所述CD25抗体的VL包含如表1B、表1D、表1F、表1H、表1J、表1L、表3A、表3B、表3C、表4B、表5B和表7中所呈现的或在图4A、图4B和图6中呈现的序列中含有的CDRL1、CDRL2和CDRL3的氨基酸序列中的任一个；以及
i.所述抗体包含表6中呈现的组合中的任一个的CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列和表7中呈现的组合中的任一个的CDRL1、CDRL2和CDRL3的氨基酸序列。
实施方案2.根据实施方案1所述的抗体，其中所述抗体具有本文所提供的特征中的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个。
实施方案3.根据实施方案1所述的抗体，其中所述抗体不破坏IL-2配体与IL-2受体的α链(CD25)的结合，并且结合与7G7B6所结合的表位不同的表位。
实施方案4.根据实施方案1所述的抗体，其中所述抗体不破坏IL-2配体与IL-2受体的α链(CD25)的结合，但破坏IL-2受体的β链、γ链和α链(CD25)的三聚化。
实施方案5.根据实施方案1所述的抗体，其中所述抗体破坏IL-2配体与IL-2受体的结合，并且结合与达利珠单抗或巴利昔单抗所结合的表位不同的表位。
实施方案6.根据实施方案1所述的抗体，其中当与在7.4的pH下与CD25结合的亲和力相比时，所述抗体在低于7.4的pH下展现出更高的与CD25结合的亲和力。
实施方案7.根据实施方案6所述的抗体，其中所述抗体在约6.5的pH下展现出更高的与CD25结合的亲和力。
实施方案8.根据实施方案1至7中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含表1A、表1C、表1E、表1G、表1I、表1K、表2A、表2B、表2C、表4A和表5A或图3A、图3B和图5中呈现的可变重链中的任一个的氨基酸序列、其人源化形式、或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案9.根据实施方案1至8中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含表1B、表1D、表1F、表1H、表1J、表1L、表3A、表3B、表3C、表4B和表5B或图4A、图4B和图6中呈现的可变轻链中的任一个的氨基酸序列、其人源化形式、或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案10.根据实施方案1至7中任一项所述的抗体，其中所述抗体的VH包含如表1A、表1C、表1E、表1G、表1I、表1K、表2A、表2B、表2C、表4A或表5A中所呈现的或在图3A、图3B或图5中呈现的序列中含有的CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列。
实施方案11.根据实施方案1至7和实施方案10中任一项所述的抗体，其中所述CD25抗体的VL包含如表1B、表1D、表1F、表1H、表1J、表1L、表3A、表3B、表3C、表4B或表5B中所呈现的或在图4A、图4B或图6中呈现的序列中含有的CDRL1、CDRL2和CDRL3的氨基酸序列。
实施方案12.根据实施方案1至10中任一项所述的抗体，其中所述CD25抗体包含表6中呈现的组合中的任一个的CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列。
实施方案13.根据实施方案1至10中任一项所述的抗体，其中所述CD25抗体包含表7中呈现的组合中的任一个的CDRL1、CDRL2和CDRL3的氨基酸序列。
实施方案14.根据实施方案1至13中任一项所述的抗体，其中所述抗体是人抗体。
实施方案15.根据实施方案1至13中任一项所述的抗体，其中所述抗体是人源化抗体。
实施方案16.根据实施方案1至13中任一项所述的抗体，其中所述抗体是嵌合抗体。
实施方案17.根据实施方案16所述的抗体，其中所述抗体包含小鼠可变结构域和人恒定结构域。
实施方案18.根据实施方案1至15中任一项所述的抗体，其中所述抗体是抗体片段。
实施方案19.根据实施方案1至18中任一项所述的抗体，其中所述抗体还结合食蟹猴CD25。
实施方案20.一种包含根据实施方案1至19所述的抗体中的任一种的药物组合物。
实施方案21.一种编码根据实施方案1至19所述的抗体中的任一种的核酸序列。
实施方案22.一种包含根据实施方案21所述的核酸序列的载体。
实施方案23.一种表达根据实施方案1至19所述的抗体中的任一种的噬菌体。
实施方案24.一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据实施方案1至19所述的抗体中的任一种或根据实施方案20所述的药物组合物。
实施方案25.一种耗尽受试者中调节性T细胞的数量的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据实施方案1至19所述的抗体中的任一种或根据实施方案20所述的药物组合物。
实施方案26.根据实施方案24或25所述的方法，其中所述受试者患有癌症。
实施方案27.根据实施方案24或25所述的方法，其中所述受试者患有自身免疫相关疾病或障碍。
实施方案28.一种耗尽包含外周血单核细胞的样品中调节性T细胞的数量的方法，所述方法包括使所述样品与根据实施方案1至19所述的抗体中的任一种接触。
实施方案29.一种包含根据实施方案1至19所述的抗体中的任一种或根据实施方案20所述的药物组合物的试剂盒。
实施例
实施例1：用CD25免疫
将与KLH缀合的全长CD25注射至五只不同的BalbC小鼠中。所有注射均经由尾静脉进行。免疫方案如下：
–第0天：免疫1
–第14天：免疫2
–第28天：免疫3
–第35天：抽血
来自五只小鼠中的四只的脾细胞和白细胞用于生成四个噬菌体文库。所述噬菌体文库含有表达抗原结合(Fab)片段的噬菌体。更特别地，如下构建使用来自免疫动物的材料的M13噬菌粒文库。(i)从白细胞和脾细胞中提取总RNA；(ii)用特异性引物扩增VH和VL基因；以及(iii)通过两步克隆将VH和VL片段插入GenScript的M13噬菌粒载体中。所述文库大小>2x10^8；插入率>90％，并且框内率>80％。所述文库是高多样性文库，且具有>95％的独特序列。
实施例2：针对CD25结合的噬菌体淘选
使用基于ELISA的测定对含Fab的噬菌体文库进行3轮噬菌体淘选。在CD25包被的珠上对噬菌体进行筛选。每轮以逐渐降低的CD25浓度进行。单独噬菌体克隆在大肠杆菌TG1细胞(铺板于LB/羧苄青霉素)中表达。将单个菌落在0.4ml 2YT肉汤中在37℃下培养30min，然后在37℃下用M13 K07辅助噬菌体感染3小时。然后将50μg/ml羧苄青霉素和10μg/ml卡那霉素添加至培养物中，然后在25℃下生长过夜。第二天，从培养物中收获噬菌体。
如下对阳性克隆进行测序。将阳性命中克隆培养过夜，并用Qiagen质粒小规模制备试剂盒制备质粒DNA。将纯化的质粒提交给Genewiz和ELIM Biopharmaceuticals进行桑格测序。用测序引物(ACGCCTGCGAAGTCACCCAT)或(AGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCAC)获得VH序列。用测序引物(AGCGGATAACAATTTCACACAGGA)或CGGATAACAATTTCACACAG获得VL序列。
图3A、图3B、图4A和图4B以及表2A、表2B、表3A和表3B显示了在第二轮淘选之后选择的Fab的VH和VL序列。
图5和图6以及表2C和表3C显示了在第三轮淘选之后选择的Fab的VH和VL序列。
表4A、表4B、表5A和表5B显示了在类似的淘选方案之后的另外的克隆。
进行了进一步的基于pH的噬菌体淘选。
实施例3：在pH 6.5下针对CD25结合的噬菌体淘选
进行了进一步的噬菌体淘选，以选择在较低pH范围内结合CD25的Fab候选物，从而选择例如在低氧酸性肿瘤微环境中可以结合的结合物。
通过在TG1和使用标准噬菌体展示方案通过添加CM13繁殖的噬菌体中电穿孔来转化四个小鼠HuCD25免疫的噬菌体文库(7807、7808、7809、7810)(Barbas等人,2001)。在冰上孵育一小时后，将分泌噬菌体的TG1培养物用PEG/NaCl进行PEG沉淀。
使用标准方案将噬菌体文库(7807、7808、7809、7810)用于特定pH选择。为了耗尽在生理pH下以高亲和力结合的抗体，首先通过经由在用PBST(pH 7.4)中的10ug/ml全长CD25(400nM)包被的ELISA板上吸附1小时进行的在pH 7.4下3x10^11pfu噬菌体(3x10^8的1000倍表示)反选择来进行负淘选。收集所得噬菌体上清液，并用PBST将pH调节至pH 6.5。随后的噬菌体淘选选择在pH 6.5下进行。
孵育1小时后，用不含CD25抗原的25微升链霉亲和素戴诺磁珠(dynabeads)预清理淘选选择物。然后将噬菌体添加至新的预封闭的Eppendorf LoBind管中。以100nM浓度添加生物素化全长CD25抗原持续一小时。然后将样品与25微升链霉亲和素珠在室温下孵育一小时。将样品沉淀并使用磁铁/磁珠与PBST洗涤7-9次。更换两次管以去除残留的噬菌体。
为了洗脱噬菌体，将800微升甘氨酸(pH 2.2)添加至珠中并孵育不超过十分钟。然后将它们用高pH Tris 9.0中和。将洗脱的噬菌体添加至1ml新生长的TG1(OD600为约0.5)中，并孵育20-30分钟。将部分对数稀释系列铺板于板上，并将剩余物转移至25ml 2 x YT(2x酵母胰蛋白胨肉汤)中。这些步骤另外重复了两次，总共进行了三轮淘选，接着进行噬菌体ELISA和周质提取物的Octet筛选。
测序
将阳性命中克隆培养过夜，并用Qiagen质粒小规模制备试剂盒制备质粒DNA。将纯化的质粒提交给Genewiz和ELIM Biopharmaceuticals进行桑格测序。用测序引物(ACGCCTGCGAAGTCACCCAT)或(AGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCAC)获得VH序列。用测序引物(AGCGGATAACAATTTCACACAGGA)或(CGGATAACAATTTCACACAG)获得VL序列。通过IMGT HighV-Quest鉴定了VH和VL V-D-J排列、核酸比对和氨基酸比对。
所选择的Fab克隆D5、D11、D16、D17、D34和D36的序列呈现在表1A-表1L中。
实施例4：噬菌体ELISA方案和生物传感器/Octet筛选
ELISA/提取物制备
用于评估CD25与Fab噬菌体结合的噬菌体ELISA和用于Fab Octet筛选的周质提取物制备基本上如所描述的进行，且记录了修改(Schwimmer等人,2013)。
将CD25抗原在PBS(pH 7.4)中稀释。对于待包被的96孔板的每个孔，制备了50微升的含有1ug CD25的抗原溶液。将50微升的抗原溶液添加至ELISA板孔中，并在4℃下孵育过夜。孵育后，将孔用PBS洗涤两次，并通过添加200微升的1 x PBST 2.0％BSA封闭孔，并在25℃下孵育2小时。将噬菌体在1 x PBST 1.0％BSA(pH 6.5)中稀释两倍。每孔添加50微升，并在室温下孵育5分钟。将封闭溶液从孔中抖出，并将50ul的稀释的噬菌体制剂添加至每个孔中，并在室温下孵育1小时。将ELISA板孔用200微升PBST(pH 6.5)洗涤3-5次。用1 x PBST1.0％BSA(pH 6.5)以1:5000稀释HRP缀合的抗M13抗体(Abcam，ab50370)。将50微升的稀释的二抗缀合物添加至每个孔中，并在室温下孵育1小时。将ELISA板孔用200微升PBST(pH6.5)洗涤3-5次。如所描述的将ECL Lumo底物(例如Supersignal ELISA Pico化学发光底物)制备成1:1混合物。向每个孔中添加50微升底物溶液，在室温下孵育5至60分钟，然后读取。
将菌落接种在0.03-4ml 2xYT 0.2％葡萄糖和0.1ml过夜培养物(在96孔板中1ml培养物或在14ml falcon管中4ml培养物)中。将它们在37℃下以250-700rpm孵育1.5-2小时，直到OD600为约0.5-1.0。用50-400ul IPTG0.025-0.1M诱导培养物。在一些情况下，在以250rpm摇动的情况下°将温度降低至30℃。然后将它们孵育过夜。第二天，通过以3400rcf沉淀10-15分钟来收获培养物。丢弃上清液。
将培养物用具有1x Halt蛋白酶抑制剂的50-75ul PPB缓冲液(30mM Tris-HCl(pH8.0)、1mM EDTA、20％蔗糖)重悬，并在摇摆平台上于室温下孵育15分钟或于4℃下孵育10min。将培养物用具有1x Halt蛋白酶抑制剂的150-225ul冷ddH20重悬，并在摇摆平台上于室温下孵育一小时或于4℃下孵育1-2小时。将裂解物悬浮液以15000rcf在4C下旋转10-15min。收集上清液并将其稀释。
Fab表达与纯化方案
将单个大肠杆菌菌落接种在板中具有0.03-0.5ml过夜培养物的50 2xYT 0.2％葡萄糖中或50mL培养物中并使其生长。将培养物在37℃下以250-700rpm孵育1.5小时。用50ul的25mM-1M IPTG诱导培养物。将温度降低至30℃，并将rpm降低至150。孵育是过夜进行的。通过以3400rcf沉淀15分钟来收获50ml培养物或板。丢弃上清液。将来自50mL培养物的细胞沉淀物置于-80℃冰箱中1小时，而在板中生长的培养物添加了75uL PPB与不含EDTA的1xHalt蛋白酶抑制剂(Thermo Fisher Scientific)并进行涡旋。在4℃下以1000rpm摇动板持续10分钟。将具有不含EDTA的1x Halt蛋白酶抑制剂(Thermo Fisher Scientific)的225uL体积的冷水添加至每个孔中。将样品混合并在4℃下以最大速度即1000rpm摇动1-2小时。将板在4℃下以3500rpm旋转10min。将上清液(PPE)转移至新的板中，并在-20℃下储存。从冰箱中取出来自50mL培养物的细胞沉淀物，并添加了5ml PBS、10mM咪唑与2.5mg/ml溶菌酶和不含EDTA的1x Halt蛋白酶抑制剂(Thermo Fisher Scientific)。一旦沉淀物完全解冻/混合，将它们在室温下孵育30分钟。将裂解物以3400rcf离心15分钟。移取上清液并丢弃沉淀物。添加500ul Ni-NTA树脂(预洗涤并沉淀)或使用Ni-NTA旋转柱进行Fab纯化。用清理的裂解物孵育30min-1h。将其以1500rcf进行旋转。将这些用1ml PBS、10mM咪唑洗涤5次。每次旋转后都丢弃缓冲液。添加1ml PBS、200mM咪唑并混合，孵育30分钟并以1500rcf旋转15分钟。在确定蛋白质浓度后，将洗脱的蛋白质在4℃或20℃下储存。Zeba柱用于脱盐/缓冲液更换。
Fab的Octet/生物传感器筛选
对于在原始上清液中的Octet Koff速率筛选，在384孔Pall ForteBio Octet板中使用50ul裂解物。数据收集在Octet RED 384(MD ForteBio)上。简而言之，将人CD25(1ug/ml)与AR2G尖端连接。为了进行数据收集，在pH 6.5的PBST 1％BSA缓冲液中评估基线，持续60秒。然后将尖端移动至50ul裂解物(调节至pH 6.5)，并测量缔合，持续300秒。最后，将尖端移动至pH 6.5的PBST 1％BSA缓冲液。然后将尖端用200mM Tris-甘氨酸(pH 2.5)再生，并用PBST、1％BSA(pH 6.5)中和。为了进行数据分析，在Octet HT 11.0软件上进行双重参考(尖端上没有CD25以及空白参考孔)，以进行参考减法。
进行生物传感器测定以确定所选择的Fab是否会阻断IL-2与CD25的结合。
人IgG1抗体的Octet/生物传感器筛选
将所选择的40个Fab的子集重新格式化为含有人IgG1(在本文中称为人IgG1抗体)，并收集这些的数据。所选择的用于重新格式化的Fab显示在表5A(重链)和表5B(轻链)中。在
Octet RED384TM生物层干涉测量仪上评价了不同重新格式化IgG1抗体的Koff速率和亲和力。纯化的抗体被共价固定在胺反应性生物传感器(
AR2G)上，并且过量的反应性酯被乙醇胺封闭。然后将传感器浸入作为基线的运行缓冲液中，转移至含有300nM全长CD25的孔中，然后转移回至运行缓冲液中。一式两份地记录CD25的缔合和随后的解离。仅运行缓冲液的缔合(以对照传感器漂移)和具有来自人ND血清的固定化IgG的另外的传感器(以对照非特异性IgG结合)作为对照运行。使用1:1结合拟合模型拟合所观察到的缔合和解离速率，并计算平衡结合常数(KD)。
重新格式化人IgG1抗体的表位分组(epitope binning)是使用以经典夹心形式进行的交叉竞争测定来进行的，所述经典夹心形式涉及收集基线，将样品抗体固定在生物传感器上，捕获抗原，然后与竞争性分析物一起孵育。只有当竞争性分析物的结合表位不与固定抗体的结合表位重叠时，竞争性分析物才能结合捕获的CD25。纯化的抗体被共价固定在胺反应性生物传感器(
AR2G)上，并且过量的反应性酯被乙醇胺封闭。将传感器浸入作为基线的运行缓冲液中，接着是全长CD25。然后将传感器转移至含有竞争性分析物(IL-2、7G7B6、巴利昔单抗、达利珠单抗)或作为参考的运行缓冲液的孔中。必要时，通过将传感器暴露于3个循环的0.1M甘氨酸(pH 2.0)持续10秒、接着是运行缓冲液持续10秒使其再生。
结果
图7描绘了使用分子水平上的交叉阻断测定对非IL-2阻断剂和IL-2阻断剂(Fab)的鉴定。将CD25包被在生物传感器尖端上，并使其与所指示的Fab接触。然后添加IL2。信号传导的增加表明Fab和IL2在CD25上具有不同的结合位点。
表8显示所测试的Fab克隆在生理和酸性pH下展现出类似的结合动力学。
表8
图8描绘了噬菌体表达与IL-2非阻断抗体7G7B6竞争的本公开文本的Fab。将生物传感器尖端用抗体7G7B6包被，并使其首先与CD25接触，然后与所指示的Fab或巴利昔单抗(已知的IL2阻断抗体)接触。当7G7B6与CD25结合时，克隆D11、D34和D36不结合。克隆D5、D16和D17结合但迅速脱落，这表明了可能的交叉阻断作用。
图13A-图13C显示了对重新格式化人IgG1抗体克隆的Koff速率和亲和力的动力学分析(图13A)。抗体的KD值范围为4.4E-10至8.4E-09，且Koff值范围为6.4E-05至1.9E-03。与可商购抗体7G7B6、达利珠单抗和巴利昔单抗(Basilixumab)(Kd值分别为2.6E-09、4.5E-10、4.7E-10，并且Koff速率分别为2.3E-04、1.1E-04、1.9E-04)相比，若干种抗体具有更高的亲和力(图13B)和Koff值(图13C)。在该分析中，与7G7B6相比，克隆BP003-T2P1D7、AH0580、AH05268、D36、D11、AH05259、BF003-T2P1D1和D34具有更好的Kd值；在该分析中，与达利珠单抗和巴利昔单抗相比，克隆D17、AH04526、AH04750、AH05285、AH05256和AH04527具有更好的Kd值(图13B)。在该分析中，与7G7B6相比，克隆AH05256、AH04527、AH04526、AH05251、AH05285、AH05259、D17、AH04750具有更好的Koff速率(图13C)。
图14A-图14D进行表位分组以评价重新格式化人IgG1 Fab与在可商购的抗人CD25抗体7G7B6、达利珠单抗和巴利昔单抗以及IL-2有重叠的表位的结合。所述克隆的阻断谱是：(图14A)被7G7B6阻断，但不被IL-2、达利珠单抗或巴利昔单抗阻断；(图14B)被IL-2、达利珠单抗、巴利昔单抗阻断，但不被7G7B6阻断；(图14C)被7G7B6和达利珠单抗阻断，但不被巴利昔单抗阻断；(图14D)被IL-2、达利珠单抗和巴利昔单抗阻断。这些阻断谱表明所述抗体从不同的接近角度与不同的表位结合。
功能性表位的另外的表位定位将通过丙氨酸诱变进行。该方法用作用于将抗体分组的正交方法，因为其在功能性表位上而不是竞争测定所定义的结构表位上操作。选择各种表面可及残基对进行诱变。使用计算建模来证实选择用于这些测定的丙氨酸突变不影响整体或局部稳定性。
实施例5：结合测定
用于人IgG抗体的CD25特异性结合的细胞结合测定
为了验证抗体与细胞上CD25的结合以及特异性，使用三种细胞系SUDHL-1和SUDHL-2(人大弥漫性组织细胞性淋巴瘤细胞系，ATCC)和HEK IL-2报告细胞(Invivogen)来测试CD25结合。SUDHL-1和HEK IL-2报告细胞系是CD25+细胞，而SUDHL-2是CD25-细胞。对于每种细胞系，将100,000个细胞铺板于96孔圆底板中的细胞缓冲液(PBS+2％HI FBS)中并离心。使用1-10ug/mL的抗体浓度来测试每种抗体的结合。将细胞重悬于100uL抗体/孔中并在冰上孵育20分钟。孵育后，将细胞在室温下以300x g离心5分钟，并且重悬并用冰冷的细胞缓冲液洗涤。然后用与AF647(Biolegend)缀合的抗人Fc二抗将细胞染色，并在黑暗中在冰上孵育20min。将细胞离心，洗涤并重悬于具有DAPI的冷细胞缓冲液中，并使用流式细胞术(Cytoflex，Becton Dickinson)进行分析。从分析中排除DAPI+细胞。平均荧光强度使用中位数(FlowJo，TreeStar)来计算。
人IgG1克隆的重组CD25食蟹猴结合
为了测试与重组食蟹猴(cyno)CD25的结合，将微量滴定板用80ul的在50mM碳酸钠(pH 9.6)中的1ug/ml Cyno CD25在4℃下包被过夜。第二天，从孔中去除蛋白质，并用200ulPBS/0.1％BSA/0.05％tween20封闭。将板在室温下孵育1小时。将人IgG1重新格式化Fab克隆(人IgG1抗体)从25nM开始且在PBT缓冲液中连续稀释3倍，并添加至板中以在室温下孵育1小时。然后洗涤板，然后添加HRP缀合物抗Fab抗体的1:2500稀释液。将板用PBS/tween20洗涤5-10次，以去除非特异性结合物。添加TMB过氧化物酶底物和过氧化物酶溶液，并孵育所需的时间，以用最后添加的80uL ELISA终止溶液显影。然后使用读板器(SpectraMax iD3读板器，Molecular Devices)在450nM处进行OD测量。
图15A-图15B显示了所有抗体克隆(10ug/mL)与两种CD25+细胞系即SUDHL-1和HEK细胞的验证和特异性结合，以及在CD25-SUDHL-2细胞系上的验证和不结合。另外，大多数抗体与对照7G7B6、达利珠单抗、巴利昔单抗类似地结合。
图16A-图16B显示了从10ug/mL开始且连续稀释5倍的在SUDHL-1CD25+细胞系上结合的克隆的剂量响应曲线(图16A)。大多数克隆以剂量依赖性方式结合并且与可商购的7G7B6相比，具有更好的EC50值(图16B，表9)，克隆名称是指在本公开文本的上表中呈现的那些。与7G7B6相比，表9中的若干个克隆具有更好的EC50值。
表9
图17显示了与重组cyno CD25结合的若干个克隆的剂量响应曲线。达利珠单抗和巴利昔单抗用作阳性对照。
实施例6：使用原代细胞的pSTAT5测定
用于筛选Fab克隆对高度纯化的人调节性T细胞的生物学活性的pSTAT5测定
IL-2/JAK3/STAT-5信号传导途径参与Treg的存活和扩增。该途径启动并维持转录因子Foxp3(对于Treg的抑制活性至关重要的因子)的表达。当IL-2与IL-2R结合时，JAK蛋白被激活；它们是与IL-2受体的胞质区结合的酪氨酸激酶。这启动特定酪氨酸残基上的反式磷酸化，从而产生STAT蛋白被募集和磷酸化的对接位点。然后二聚化和磷酸化的STAT被易位至细胞核中以结合特定的DNA序列，从而调节Treg中的若干个靶基因(如Foxp3和CD25)的转录。
在该实施例中，评估当与原代人调节性T细胞上的CD25结合时所选择的Fab的功能。该测定允许基于pSTAT5水平确定哪些是IL-2阻断剂、非阻断剂和部分阻断剂，以及效力。用于测定的对照包括已知的IL-2阻断剂(达利珠单抗)和IL-2非阻断剂(7G7B6)。首先，从白细胞减少系统腔室(斯坦福血液中心)中分离新鲜的PBMC细胞。将等体积的细胞缓冲液(PBS+2％HI FBS)添加至每个血液样品中，并添加至填充在50mL SepMate锥形管(StemCell Technologies)内的Ficoll Paque中，并遵循使用SepMate管分离PBMC的标准方案。为了从PBMC中分离人T调节性细胞，使用了EasySep人CD4+CD127低CD25+调节性T细胞分离试剂盒(Stem Cell Technologies)和调节性人CD4+CD25+T细胞试剂盒(Dynabeads)。各个分离试剂盒方案用于基于磁性分离细胞。通过用抗人CD4、CD25、CD127抗体和细胞内Foxp3染色(BD Biosciences)将细胞染色来证实Treg分离。对于pSTAT5测定，将100,000个Treg铺板于96孔圆底板中并离心。使用1-5ug/mL的抗体浓度。将Treg重悬于50uL抗体/孔中，并在37℃培养箱中孵育15分钟。接下来，从100ng/mL浓度开始且稀释10倍，在细胞培养基中制备了IL-2的稀释液。将IL-2稀释液以50uL/孔添加至孔中，在37℃培养箱中持续10分钟。孵育后，将板在室温下以300x g离心5分钟，并重悬于100uL/孔的室温固定缓冲液(BDBiosciences)中，在室温下持续15min。将细胞旋转减慢并重悬于冷细胞缓冲液(PBS+2％HIFBS)中。然后将细胞重悬于100uL/孔的冰冷透化缓冲液(BD Biosciences)中，并在冰上孵育15分钟。将细胞用细胞缓冲液洗涤，并重悬于50uL制备的pSTAT5抗体中，以使用流式细胞术(Cytoflex，Becton Dickinson)进行分析。
用于使用HEK IL-2报告细胞筛选抗体克隆的生物学活性的pSTAT5测定
在该实施例中，使用HEK IL-2报告细胞系(Invivogen)测试克隆。该细胞系是由Invivogen产生的，以监测通过IL-2结合对JAK-STAT途径的激活。为了获得完全活性的人IL-2信号传导途径，通过用人IL-2Rα、IL-2Rβ和IL-2Rγ基因以及JAK3和STAT5基因稳定转染HEK293细胞来产生报告细胞系。该测定提出了一种高通量方法，其用于基于pSTAT5水平评价在存在IL-2时添加抗体和竞争物的情况下IL-2阻断剂、非阻断剂、部分阻断剂的IL-2生理学和表征。用于测定的对照包括已知的IL-2阻断剂(达利珠单抗和巴利昔单抗)和IL-2非阻断剂(7G7B6)。对于pSTAT5测定，将100,000个细胞铺板于96孔圆底板中并离心。使用1-5ug/mL的抗体浓度。将HEK细胞重悬于50uL抗体/孔中，并在37℃培养箱中孵育15分钟。接下来，从10ng/mL浓度开始且稀释10倍，在细胞培养基中制备了IL-2的稀释液。将IL-2稀释液以50uL/孔添加至孔中，在37℃培养箱中持续10分钟。孵育后，将板在室温下以300x g离心5分钟，并重悬于100uL/孔的室温固定缓冲液(BD Biosciences)中，在室温下持续15min。将细胞旋转减慢并重悬于冷细胞缓冲液(PBS+2％HI FBS)中。然后将细胞重悬于100uL/孔的冰冷透化缓冲液(BD Biosciences)中，并在冰上孵育15分钟。将细胞用细胞缓冲液洗涤，并重悬于50uL制备的pSTAT5抗体中，以使用流式细胞术(Cytoflex，Becton Dickinson)进行分析。基于亲本群体对pSTAT5+细胞百分比进行定量，并将值针对在10ng/mL浓度下的IL-2进行归一化。
结果
图9显示pSTAT5信号是IL-2剂量依赖性的，并被达利珠单抗(IL-2阻断剂)抑制。pSTAT5水平与IL-2的剂量相关，其中高IL-2剂量增加pSTAT5水平，而较低水平的IL-2产生较低水平的pSTAT5。另外，当以2ug/mL的固定浓度添加抗人IL-2抗体IL-2阻断剂达利珠单抗时，其抑制JAK/STAT5信号传导途径，从而产生较少的pSTAT5水平。
图10和图11显示了pSTAT5测定中D5 Fab的测试。图10中的数据显示pSTAT5测定能够区分与达利珠单抗和仅IL-2相比，在1、2和5ug/mL下的D5 Fab活性的差异。在不同浓度的D5下，pSTAT5的水平呈剂量依赖性降低，这表明即使在最低浓度1ug/mL时，D5也部分阻断了IL-2与IL-2R的结合。数据通过原始MFI水平(平均荧光强度)和通过比较pSTAT5水平相对于由最高剂量的IL-2(100ng/mL)产生的最大pSTAT5水平来表示(图11)。
图12显示了来自一个供体的初步Fab筛选数据。来自一个供体的该测定显示了与对照(仅IL-2、达利珠单抗(Dac，IL-2阻断剂)和7G7B6(非IL-2阻断剂))相比，在1、2和5ug/mL下的若干个Fab克隆之间的pSTAT5水平的差异。一些克隆似乎是比7G7B6更好的IL-2非阻断剂，而其他克隆是比达利珠单抗更好的IL-2阻断剂。预期完全IL-2非阻断剂将具有与IL-2类似的pSTAT5水平，并且预期将不是浓度依赖性的。数据通过原始MFI水平(平均荧光强度)和通过比较pSTAT5水平相对于由7G7B6产生的最大pSTAT5水平来表示。另外，数据可以用于观察Fab克隆的IC50效力值的差异。(表10)。
表10
随后的测定将包括达利珠单抗和7G7B6的Fab形式，以及在多个供体上测试相同的Fab克隆。另外，pSTAT5测定将在较低的pH水平(pH6.4-6.7)下进行，以概括肿瘤微环境的pH针对生理pH下的克隆活性。
图18A-图18B显示了在IL-2浓度从10ng/ml开始且连续稀释10倍的情况下，通过测量HEK IL-2报告细胞系中的pSTAT5对作为IL-2阻断剂、非阻断剂和部分阻断剂的重新格式化人IgG1克隆(在5ug/mL下)的功能性表征。在0.1ng/mL(更接近生理水平)的IL-2浓度下，克隆如AH04503、AH04750是比达利珠单抗或巴利昔单抗更好的IL-2阻断剂，而在5ug/mL下克隆AH05280和AH02571可以是比7G7B6更好的IL-2非阻断剂(A)。克隆AH05251、AH05257是IL-2部分阻断剂的例子(图18A)。IL-2剂量响应曲线清楚地描绘了作为IL-2非阻断剂的克隆与作为IL-2阻断剂的那些，其中分别地，7G7B6使曲线向左移动且达利珠单抗和巴利昔单抗使曲线向右移动(图18B)。
可以继续进行pSTAT5研究，以使用原代Treg和多个供体测试这些抗体克隆。
实施例7：抗体依赖性细胞毒性(ADCC)
功能性细胞杀伤测定ADCC和ADCP
Treg耗尽的机制之一是通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。这是一种细胞介导的免疫防御机制，其通常会导致由免疫/效应细胞对与靶细胞上的特定抗原结合的抗体的识别触发的细胞死亡。为了引发ADCC，具有人Fc亚类IgG1的抗体通常因其具有与在免疫细胞(如NK细胞、单核细胞和粒细胞)上表达的三种Fc受体即FcγRI(CD64)、FCγRII(CD32)和FcγRIIIA(CD16)结合的能力的效应子功能而被选择。NK细胞主要表达FcγRIIIA，并且被认为是ADCC中的主要效应细胞。
在该实施例中，使用基于乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性板的比色测定(ThermoFisher)对ADCC进行定量。在该测定中，LDH的释放与细胞杀伤的量成比例。乳酸脱氢酶(LDH)是存在于所有细胞中的当质膜受损时释放的胞质酶。通过偶联的酶促反应定量培养基中的胞外LDH，在所述反应中LDH催化经由NAD+还原为NADH将乳酸转化为丙酮酸。通过添加黄递酶，NADH被还原为四唑盐(INT)以形成可在490nm处测量的甲瓒产物。测定的对照包括在人Raji淋巴瘤细胞系上使用利妥昔单抗(抗CD20抗体)和在SUDHL-1细胞上使用达利珠单抗(已知两种抗体均诱导ADCC)。另外的对照包括：非糖基化人IgG1作为阴性对照和非岩藻糖基化人IgG1作为阳性对照。作为首次初始筛选，使用来自单个供体的PBMC在ADCC分析中以一种浓度(10ug/mL)测试重新格式化克隆。将人PBMC(ASTARTE Biologics)在前一天解冻，并用X-VIVO 15或20培养基(Lonza)在37C下5％CO2培养箱中培养过夜。在实验当天，对PBMC和SUDHL-1靶细胞进行计数，并将其重悬于X-VIVO 15(Lonza，酚红)无血清培养基中。从10ug/ml开始且连续稀释5倍，制备了抗体稀释液。然后将靶细胞以96孔50μL/孔铺板于96孔白色平底不透明板(CORNING Ref#3917)中，并将10μL/孔抗体稀释液添加至靶细胞中，并在37℃和5％CO2培养箱中孵育30min。孵育后，将PBMC添加至靶细胞(50μL/孔)中。对于用于自发和最大LDH释放计算的对照靶细胞，添加50μL/孔的测定培养基(X-VIVO15，不含酚红)。共孵育(ADCC诱导)是通过将板在37℃和5％CO2的培养箱中孵育4h进行的，在共孵育完成之前45min，将10％Triton X100溶液(在PBS中)添加至孔中以计算最大LDH释放(10μL/孔，11x稀释因子)。孵育后，将50μL/孔的反应底物铺板于96孔板(透明平底)中，然后将测定板的50μL/孔的上清液转移至反应底物中。将板在黑暗中在室温下显影30min。孵育后，添加50μL/孔的终止溶液，并通过使用读板器(SpectraMax iD3读板器，Molecular Devices)测量490nm和680nm处的吸光度。
另外，还将进行功能抗体依赖性细胞吞噬(ADCP)测定，以测试抗体结合后巨噬细胞吞噬Treg细胞的活性。这可能是Treg耗尽的另一种作用机制。巨噬细胞上的Fc受体FCγRIIa(CD32b)被认为是ADCP的主要诱导物。在该测定中，原代Treg将被用作靶细胞，且人单核细胞来源的巨噬细胞被用作效应细胞。将从白细胞减少系统腔室(斯坦福血液中心)中分离PBMC，以使用CD14微珠(Miltenyi Biotec)进行单核细胞分离，以及使用调节性人CD4+CD25+T细胞试剂盒(Dynabeads)和人Treg细胞分化试剂盒(R&D Systems)进行Treg分离。单核细胞将与人血清或M-CSF在培养基中培养5-7天。在第5-7天，巨噬细胞将与预先标记的Treg(用可固定的活力染料(Invitrogen)标记)以10比1的效应物与靶标比率在添加抗CD25抗体和对照的情况下共培养2-4小时，并用固定缓冲液(BD Bioscienes)固定。巨噬细胞将用CD14来染色，以从标记的Treg中鉴定巨噬细胞，并使用流式细胞术分析定义为CD14+和Treg标记+群体的吞噬群体。预期抗CD25抗体也诱导ADCP。
结果
图19A-图19B显示了所有重新格式化克隆的功能性ADCC活性。在首次筛选中，克隆与CD25+细胞结合，并且诱导了ADCC，其中细胞杀伤在18.2％至26.7％裂解的范围内(Raji细胞杀伤用作参考；(图19A))。为了验证这些发现，用所选择的克隆的剂量响应曲线重复测定。结果显示，ADCC活性的范围是基线裂解的2至6倍，其中克隆AH04511、AH05274、D11、D34、D36引发最有效的ADCC，并且比7G7B6抗体具有更大的效力，如通过相对于背景裂解％的倍数变化所测量的。
随后的研究将包括作为功能性ADCC杀伤测定的效应物的PBMC和NK细胞的另外的供体。
实施例8：CD25抗体的功能性表征
体外表征
随后的体外表征将包括T细胞激活和Treg抑制研究，以评价在不存在和存在Treg细胞的情况下CD25抗体对T效应细胞应答的影响。对于激活的读数将包括细胞内颗粒酶B、增殖和细胞因子(例如IL-2、IFNγ、TNF-α)释放。特别地，来自健康供体和具有特异性抗原反应(例如人巨细胞病毒或流行性感冒流感抗原)的供体的人原代常规T细胞(T conv细胞)将用细胞增殖染料(例如ThermoFisher)标记，并用不同浓度的CD25和对照抗体(1-10ug/mL)处理，接着使用CD3/CD28珠激活，并在有和没有Treg的情况下孵育，以在37℃、5％CO2下孵育48-72小时。为了评价T细胞激活，将收集上清液用于细胞因子分析，并用可固定的活力染料(例如Thermofisher)和表面抗人T细胞标记物即CD3、CD4、CD8、CD45RA、CD25将细胞染色，接着进行固定和透化处理以染色细胞内颗粒酶B和Foxp3。将使用流式细胞术针对颗粒酶B阳性和增殖细胞对细胞进行分析。
体内表征
使用小鼠异种移植肿瘤模型的CD25抗体的体内活性。这些实验将有助于基于经由ADCC和/或ADCP的CD25+肿瘤耗尽来区分CD25抗体的差异。候选抗体将作为小鼠IgG2a同种型抗体产生，并用于免疫缺陷型RAG-/-敲除小鼠(具有功能性NK和APC细胞，但没有成熟的B或T淋巴细胞)。将动物皮下植入CD25+人细胞系(例如SUDHL-1，一种CD25+间变性大细胞淋巴瘤)。可以使用各种大小的肿瘤(可触知的，100-500mm3)来辨别抗体之间的差异。将用不同剂量的CD25抗体(例如1-10mg/kg，每周3次或每天一次)处理动物，并监测体重和TGI的变化。
人源化小鼠中小鼠异种移植肿瘤模型的药物功效和MOA研究。
将在各种人肿瘤模型(例如肝癌、乳腺癌、黑色素瘤、胃癌、NSCLC和结肠癌)中测试经由Treg耗尽和增加肿瘤内Teff/Treg以及增加T效应细胞活性抑制肿瘤生长的更有效抗体，从而确立功效和作用机制。一些研究可以包括使用三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231、胃癌细胞系、黑色素瘤细胞系A375和肝癌细胞系Huh-7以及人PDX模型，其已经被很好地表征并且已经显示出浸润性Treg与肿瘤生长之间的关联和/或已经在植入了人PBMC和/或CD34+细胞的人源化小鼠中用PD-1抗体组合进行了处理。在这些模型中，肿瘤将被皮下植入直到肿瘤达到从可触知至100-500mm3的大小范围，并且用各种剂量的CD25抗体和给药时间表(例如1-10mg/kg，每周3次或每天一次)进行处理。动物健康评分、体重、肿瘤生长以及血液和肿瘤的免疫表型分析将使用流式细胞术、Meso Scale Discovery多重板和组织学来表征肿瘤和免疫细胞组成和肿瘤浸润性细胞以及细胞因子分泌。
人源化小鼠中小鼠异种移植肿瘤模型的组合研究。基于功效和MOA研究确定主要候选物和适应症后，我们将使用各种各样的药剂进行组合研究，以增加免疫原性和用于免疫激活的其他途径激活(例如化学疗法、检查点抑制剂、TLR激动剂、疫苗)。将在功效和MOA研究中使用的类似肿瘤模型中进行组合实验。
将本文引用的所有专利、专利申请、出版物、文件、网络链接和文章通过引用以其整体并入本文。
Claims (29)
1.一种与人CD25结合并且具有以下特征中的至少一个的单克隆CD25抗体：
a.所述抗体包含表6中呈现的组合中的任一个的CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列和表7中呈现的组合中的任一个的CDRL1、CDRL2和CDRL3的氨基酸序列；
b.所述抗体不破坏IL-2配体与IL-2受体的α链(CD25)的结合，并且结合与7G7B6所结合的表位不同的表位；
c.所述抗体不破坏IL-2配体与IL-2受体的α链(CD25)的结合，但破坏IL-2受体的β链、γ链和α链(CD25)的三聚化；
d.所述抗体破坏IL-2配体与IL-2受体的α链(CD25)、β链和/或γ链的结合，并且结合与达利珠单抗或巴利昔单抗所结合的表位不同的表位；
e.当与在7.4的pH下与CD25结合的亲和力相比时，所述抗体在低于7.4的pH下展现出更高的与CD25结合的亲和力；
f.所述抗体包含表1A、表1C、表1E、表1G、表1I、表1K、表2A、表2B、表2C、表4A和表5A或图3A、图3B和图5中呈现的可变重链中的任一个的氨基酸序列、其人源化形式、或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列；
g.所述抗体包含表1B、表1D、表1F、表1H、表1J、表1L、表3A、表3B、表3C、表4B和表5B或图4A、图4B和图6中呈现的可变轻链中的任一个的氨基酸序列、其人源化形式、或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列；
h.所述抗体的VH包含如表1A、表1C、表1E、表1G、表1I、表1K、表2A、表2B、表2C、表4A、表5A和表6中所呈现的或在图3A、图3B和图5中呈现的序列中含有的CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列中的任一个；以及
i.所述CD25抗体的VL包含如表1B、表1D、表1F、表1H、表1J、表1L、表3A、表3B、表3C、表4B、表5B和表7中所呈现的或在图4A、图4B和图6中呈现的序列中含有的CDRL1、CDRL2和CDRL3的氨基酸序列中的任一个。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体具有本文所提供的特征中的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个。
3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体不破坏IL-2配体与IL-2受体的α链(CD25)的结合，并且结合与7G7B6所结合的表位不同的表位。
4.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体不破坏IL-2配体与IL-2受体的α链(CD25)的结合，但破坏IL-2受体的β链、γ链和α链(CD25)的三聚化。
5.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体破坏IL-2配体与IL-2受体的结合，并且结合与达利珠单抗或巴利昔单抗所结合的表位不同的表位。
6.根据权利要求1所述的抗体，其中当与在7.4的pH下与CD25结合的亲和力相比时，所述抗体在低于7.4的pH下展现出更高的与CD25结合的亲和力。
7.根据权利要求6所述的抗体，其中所述抗体在约6.5的pH下展现出更高的与CD25结合的亲和力。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含表1A、表1C、表1E、表1G、表1I、表1K、表2A、表2B、表2C、表4A和表5A或图3A、图3B和图5中呈现的可变重链中的任一个的氨基酸序列、其人源化形式、或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含表1B、表1D、表1F、表1H、表1J、表1L、表3A、表3B、表3C、表4B和表5B或图4A、图4B和图6中呈现的可变轻链中的任一个的氨基酸序列、其人源化形式、或与其含有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列。
10.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体，其中所述抗体的VH包含如表1A、表1C、表1E、表1G、表1I、表1K、表2A、表2B、表2C、表4A或表5A中所呈现的或在图3A、图3B或图5中呈现的序列中含有的CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列。
11.根据权利要求1至7和权利要求10中任一项所述的抗体，其中所述CD25抗体的VL包含如表1B、表1D、表1F、表1H、表1J、表1L、表3A、表3B、表3C、表4B或表5B中所呈现的或在图4A、图4B或图6中呈现的序列中含有的CDRL1、CDRL2和CDRL3的氨基酸序列。
12.根据权利要求1至10中任一项所述的抗体，其中所述CD25抗体包含表6中呈现的组合中的任一个的CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列。
13.根据权利要求1至10中任一项所述的抗体，其中所述CD25抗体包含表7中呈现的组合中的任一个的CDRL1、CDRL2和CDRL3的氨基酸序列。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的抗体，其中所述抗体是人抗体。
15.根据权利要求1至13中任一项所述的抗体，其中所述抗体是人源化抗体。
16.根据权利要求1至13中任一项所述的抗体，其中所述抗体是嵌合抗体。
17.根据权利要求16所述的抗体，其中所述抗体包含小鼠可变结构域和人恒定结构域。
18.根据权利要求1至15中任一项所述的抗体，其中所述抗体是抗体片段。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的抗体，其中所述抗体还结合食蟹猴CD25。
20.一种包含根据权利要求1至19所述的抗体中的任一种的药物组合物。
21.一种编码根据权利要求1至19所述的抗体中的任一种的核酸序列。
22.一种包含根据权利要求21所述的核酸序列的载体。
23.一种表达根据权利要求1至19所述的抗体中的任一种的噬菌体。
24.一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至19所述的抗体中的任一种或根据权利要求20所述的药物组合物。
25.一种耗尽受试者中调节性T细胞的数量的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至19所述的抗体中的任一种或根据权利要求20所述的药物组合物。
26.根据权利要求24或25所述的方法，其中所述受试者患有癌症。
27.根据权利要求24或25所述的方法，其中所述受试者患有自身免疫相关疾病或障碍。
28.一种耗尽包含外周血单核细胞的样品中调节性T细胞的数量的方法，所述方法包括使所述样品与根据权利要求1至19所述的抗体中的任一种接触。
29.一种包含根据权利要求1至19所述的抗体中的任一种或根据权利要求20所述的药物组合物的试剂盒。
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|---|---|---|---|---|
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Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
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