CN113624897B - 一种莲藕中酚类物质的测量方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种莲藕中酚类物质的测量方法，包括如下步骤：步骤1：称取莲藕样品，加入预冷的pH为2.5‑3.5且体积分数为38‑42％的乙醇溶液匀浆，超声60‑80min后4000‑5000r/min离心8‑12min，过滤分离上清液，其中，莲藕样品与乙醇溶液的质量体积比为0.18‑0.22g/mL；步骤2：向步骤1中的离心后的滤渣中再次加入的预冷的pH为2.5‑3.5且体积分数为38‑42％的乙醇溶液重复浸提1次，超声8‑12min后4000‑5000r/min离心8‑12min，过滤分离上清液，其中，乙醇溶液的加入量为步骤1中乙醇溶液加入量的1.2‑1.3倍；步骤3：将步骤1和步骤2中离心后所得的上清液混合后进行浓缩，并用甲醇定容至步骤1和步骤2中乙醇溶液总添加体积的1/25‑1/23，得到提取浓缩液；步骤4：利用高效液相色谱法对步骤3的提取浓缩液进行分析检测，其分析方法简便。

Description

一种莲藕中酚类物质的测量方法
技术领域
本发明属于食品检测领域，尤其涉及一种莲藕中酚类物质的测量方法。
背景技术
莲藕作为一种水产蔬菜，采收期时间较长，大部分品种从9月份到次年1月份都能覆盖市场，此时的莲藕含有大量淀粉，不仅适合生吃、炒菜、炖汤，而且可以加工做成藕粉，而目前莲藕的生长期中其内的酚类物质的含量或各类酚类物质的含量也也存在变化，且根据选择合适的采收时间对莲藕采后储藏期的长短有着显著的影响，但目前对莲藕中酚类物质的测量还不成熟。
发明内容
本发明的目的是为了解决背景技术中的技术问题，提供一种测量精确度高，且可对莲藕中两类酚类物质的进行分别测量的莲藕中酚类物质的测量方法。
本发明的技术方案如下：一种莲藕中酚类物质的测量方法，包括如下步骤：
步骤1：称取莲藕样品，加入预冷的pH为2.5-3.5且体积分数为38-42％的乙醇溶液匀浆，超声60-80min后4000-5000r/min离心8-12min，过滤分离上清液，其中，莲藕样品与乙醇溶液的质量体积比为0.18-0.22g/mL；
步骤2：向步骤1中的离心后的滤渣中再次加入的预冷的pH为2.5-3.5且体积分数为38-42％的乙醇溶液重复浸提1次，超声8-12min后4000-5000r/min离心8-12min，过滤分离上清液，其中，乙醇溶液的加入量为步骤1中乙醇溶液加入量的1.2-1.3倍；
步骤3：将步骤1和步骤2中离心后所得的上清液混合后进行浓缩，并用甲醇定容至步骤1和步骤2中乙醇溶液总添加体积的1/25-1/23，得到提取浓缩液；
步骤4：利用高效液相色谱法对步骤3中所得到的提取浓缩液进行分析检测。
其中，所述步骤4中流动相A为甲醇，B为0.4％冰醋酸，流速为1.0mL/min，柱温30℃，紫外检测器波长为280nm，进样量为20μL，线性洗脱程序：0-40min，5％-25％流动相A；40-50min，25％-50％流动相A；50-65min，50％-70％流动相A；65-66min，70％-100％流动相A；66-72min，100％流动相A；72-73min，100％-5％流动相A；73-80min，5％流动相A。
其中，所述步骤4中流动相A为乙腈，B为0.4％冰醋酸，流速为1.0mL/min，柱温30℃，紫外检测器波长为280nm，进样量为20μL，线性洗脱程序：0-10min，5％-25％流动相A；10-20min，25％-35％流动相A；20-21min，35％-100％流动相A；21-25min，100％流动相A；25-26min，100％-5％流动相A；26-30min，5％流动相A。
其中，所述步骤1和步骤2中乙醇溶液的PH为3，且体积分数为40％的。
其中，所述步骤1和步骤2中步骤1和步骤2中离心条件为4500r/min离心10min。
其中，所述步骤1中超声时间为70min,所述步骤2中超声时间为10min。
其中，所述步骤3中甲醇定容后的总体积为步骤1和步骤2中乙醇溶液总添加体积的1/24。
本发明的有益效果在于：本发明提供的检测方法可对莲藕中的各类酚类物质分别进行精确的测量，其中，采用甲醇作为流动相A时可对莲藕焦性没食子酸、天麻素、香豆酸、没食子儿茶素、邻苯二酚、儿茶素、绿原酸、咖啡酸、表儿茶素、槲皮素、芹菜素进行检测分析，而采用乙腈作为流动相时可对莲藕中没食子酸、芦丁、金丝桃苷、白藜芦醇进行检测分析。
附图说明
图1为本发明实施例所述酚类物质混合标准品HPLC色谱图之一；
图2为本发明实施例所述酚类物质混合标准品HPLC色谱图之二。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
以新鲜带泥的“鄂莲五号”莲藕，采收于武汉市江夏区棋良公司莲藕生产基地；不同生长期(S1、S2、S3、S4、S5、S6)采样时间为2019年7月21日-2019年8月29日，每隔6天采样一次；不同采收期(H1、H2、H3、H4)采样时间为2020年9月26日-2020年12月26日，每隔1个月采样一次。莲藕采收后立即套袋运回实验室，于4℃预冷24h，用洁净的自来水洗去表面淤泥，并用刀具将莲藕断节切分，注意藕节处切分完整且内部藕肉未接触空气。
莲藕中酚类物质含量的具体检测方法如下：称取32g莲藕样品，加入160mL预冷的pH 3.0且体积分数为40％的乙醇匀浆，超声72min后4500r/min离心10min，过滤分离上清液，向离心后的滤渣加入200mL预冷的pH 3.0且体积分数为40％的乙醇重复浸提1次，超声10min并离心取上清液，合并两次上清液，真空旋转蒸馏法进行浓缩，浓缩后利用甲醇(分析纯)定容至15mL；高效液相测定条件分为两个部分，其中检测焦性没食子酸、天麻素、香豆酸、没食子儿茶素、邻苯二酚、儿茶素、绿原酸、咖啡酸、表儿茶素、槲皮素、芹菜素的程序为：流动相A为甲醇，B为0.4％冰醋酸，流速为1.0mL/min，柱温30℃，紫外检测器波长为280nm，进样量为20μL，线性洗脱程序：0-40min，5％-25％流动相A；40-50min，25％-50％流动相A；50-65min，50％-70％流动相A；65-66min，70％-100％流动相A；66-72min，100％流动相A；72-73min，100％-5％流动相A；73-80min，5％流动相A。检测没食子酸、芦丁、金丝桃苷、白藜芦醇的程序为：流动相A为乙腈，B为0.4％冰醋酸，流速为1.0mL/min，柱温30℃，紫外检测器波长为280nm，进样量为20μL，线性洗脱程序：0-10min，5％-25％流动相A；10-20min，25％-35％流动相A；20-21min，35％-100％流动相A；21-25min，100％流动相A；25-26min，100％-5％流动相A；26-30min，5％流动相A。
酚类物质混合标准品HPLC色谱图如图1所示，其中，图1中1为焦性没食子酸，2为天麻素，3为香豆酸，4为没食子儿茶素，5为邻苯二酚，6为儿茶素，7为绿原酸，8为咖啡酸，9为表儿茶素，10为槲皮素，11为芹菜素；图2中1为没食子酸，2为芦丁，3为金丝桃苷，4为白藜芦醇。酚类物质动态变化结果如表1所示，各酚类物质相关性如表2所示。不同生长期莲藕中酚酸类物质主要包括没食子酸、咖啡酸、香豆酸、绿原酸，主要的酚酸类物质是绿原酸，香豆酸和咖啡酸在莲藕中的含量也较高。由表1可得，酚酸类物质含量呈现先降低后增加后又降低的趋势，与总酚含量变化相似。各酚酸类物质在S2到S3时期均显著增长，没食子酸、香豆酸、绿原酸在S4时期含量最高，咖啡酸在S3时期含量最高。由表2可知，各酚酸类物质之间，香豆酸与绿原酸呈现显著正相关，相关性达0.928，咖啡酸与香豆酸相关性最低，仅0.150。
不同生长期莲藕中黄酮类物质包括槲皮素、儿茶素、芦丁、金丝桃苷、表儿茶素、没食子儿茶素，主要的黄酮类物质为没食子儿茶素，其次是儿茶素，芦丁和表儿茶素也是莲藕中含量较高的黄酮类物质，但生长期莲藕中未检测到芹菜素。由表1可得，莲藕根茎膨大过程中，S1到S2时期黄酮类物质含量小幅降低，S2到S4时期含量显著增高，S4到S6时期含量又逐渐降低。槲皮素在S1时期含量最高，除S3和S4时期外金丝桃苷的含量很低，没食子儿茶素、儿茶素、芦丁在S3及S4时期含量较高，表儿茶素仅在S3、S4、S5时期检测到。这说明莲藕中黄酮类物质表达具有生长时期特异性。而整个生长发育时期均未检测到芹菜素，初步判断莲藕中可能不含芹菜素。总体上，S3时期黄酮类物质含量最高，总酚含量也在S3时期最高，生长期莲藕中黄酮类物质的变化可以用来表征总酚含量的变化。由表2，除槲皮素与各单酚相关性较低外，各酚类物质相关性均高于0.8，其中没食子儿茶素与金丝桃苷、儿茶素、表儿茶素相关性均高于0.9，呈显著正相关。
不同生长期莲藕中非类黄酮物质包括焦性没食子酸、天麻素、邻苯二酚、白藜芦醇，其中含量最高为天麻素，其次为焦性没食子酸，白藜芦醇仅在S3时期检测到。由表1，与总酚含量、酚酸类、黄酮类物质含量动态变化规律相似，非黄酮类物质在S1到S2时期含量较低，S2到S4时期含量增多并在S4时期达到峰值，S5到S6时期含量又有所下降。天麻素在整个生长周期含量一直较高，S4时期含量最高。焦性没食子酸、邻苯二酚具有生长时期特异性，分别在S3、S4时期达到最大值。由表2，邻苯二酚与天麻素相关性高达0.948，白藜芦醇与焦性没食子酸相关性为0.854，白藜芦醇与天麻素呈弱的负相关，相关性为-0.042，其他非类黄酮物质之间呈弱的正相关。
莲藕中单体酚含量随生长时期的变化而改变，呈现出先增加后降低的趋势，S3、S4时期最高，变化趋势与总酚含量趋势大致相同，其中黄酮类物质与总酚含量变化趋势一致性较好，可代表生长期莲藕中总酚含量的变化。莲藕中含量最高的单酚类物质是天麻素，其次是没食子儿茶素，儿茶素的含量也相对较高。
表1不同生长时期莲藕中酚类物质的动态变化(其中nd表示未检测到；含量单位：μg/g)
表2不同生长时期莲藕中酚类物质相关性
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。

Claims (5)

1.一种莲藕中酚类物质的测量方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：称取莲藕样品，加入预冷的pH为2.5-3.5且浓度为38-42vol％的乙醇溶液匀浆，超声60-80min后4000-5000r/min离心8-12min，过滤分离上清液，其中，莲藕样品与乙醇溶液的质量体积比为0.18-0.22g/mL；
步骤2：向步骤1中的离心后的滤渣中再次加入的预冷的pH为2.5-3.5且浓度为38-42vol％的乙醇溶液重复浸提1次，超声8-12min后4000-5000r/min离心8-12min，过滤分离上清液，其中，乙醇溶液的加入量为步骤1中乙醇溶液加入量的1.2-1.3倍；
步骤3：将步骤1和步骤2中离心后所得的上清液混合后进行浓缩，并用甲醇定容至步骤1和步骤2中乙醇溶液总添加体积的1/25-1/23，得到提取浓缩液；
步骤4：利用高效液相色谱法对步骤3中所得到的提取浓缩液进行分析检测；
所述莲藕中酚类物质包括焦性没食子酸、天麻素、香豆酸、没食子儿茶素、邻苯二酚、儿茶素、绿原酸、咖啡酸、表儿茶素、槲皮素、芹菜素、没食子酸、芦丁、金丝桃苷和白藜芦醇；
其中检测焦性没食子酸、天麻素、香豆酸、没食子儿茶素、邻苯二酚、儿茶素、绿原酸、咖啡酸、表儿茶素、槲皮素和芹菜素的程序为：所述步骤4中流动相A为甲醇，B为0.4％冰醋酸，流速为1.0mL/min，柱温30℃，紫外检测器波长为280nm，进样量为20μL，线性洗脱程序：0-40min，5％-25％流动相A；40-50min，25％-50％流动相A；50-65min，50％-70％流动相A；65-66min，70％-100％流动相A；66-72min，100％流动相A；72-73min，100％-5％流动相A；73-80min，5％流动相A；
其中检测没食子酸、芦丁、金丝桃苷和白藜芦醇的程序为：所述步骤4中流动相A为乙腈，B为0.4％冰醋酸，流速为1.0mL/min，柱温30℃，紫外检测器波长为280nm，进样量为20μL，线性洗脱程序：0-10min，5％-25％流动相A；10-20min，25％-35％流动相A；20-21min，35％-100％流动相A；21-25min，100％流动相A；25-26min，100％-5％流动相A；26-30min，5％流动相A。
2.根据权利要求1所述的莲藕中酚类物质的测量方法，其特征在于，所述步骤1和步骤2中乙醇溶液的PH为3，浓度为40vol％。
3.根据权利要求1所述的莲藕中酚类物质的测量方法，其特征在于，所述步骤1和步骤2中离心条件为4500r/min离心10min。
4.根据权利要求1所述的莲藕中酚类物质的测量方法，其特征在于，所述步骤1中超声时间为70min,所述步骤2中超声时间为10min。
5.根据权利要求1所述的莲藕中酚类物质的测量方法，其特征在于，所述步骤3中甲醇定容后的总体积为步骤1和步骤2中乙醇溶液总添加体积的1/24。
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