CN113599357A - 包覆有造血生长因子的ros响应型纳米粒在制备治疗造血损伤药物中的应用 - Google Patents

包覆有造血生长因子的ros响应型纳米粒在制备治疗造血损伤药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113599357A
CN113599357A CN202110874248.0A CN202110874248A CN113599357A CN 113599357 A CN113599357 A CN 113599357A CN 202110874248 A CN202110874248 A CN 202110874248A CN 113599357 A CN113599357 A CN 113599357A
Authority
CN
China
Prior art keywords
hematopoietic
ros
solution
hematopoietic growth
growth factors
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110874248.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113599357B (zh
Inventor
杨菁
李慧洋
梁晓玉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Biomedical Engineering of CAMS and PUMC
Original Assignee
Institute of Biomedical Engineering of CAMS and PUMC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Biomedical Engineering of CAMS and PUMC filed Critical Institute of Biomedical Engineering of CAMS and PUMC
Priority to CN202110874248.0A priority Critical patent/CN113599357B/zh
Publication of CN113599357A publication Critical patent/CN113599357A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113599357B publication Critical patent/CN113599357B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/196—Thrombopoietin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
    • A61K9/5153—Polyesters, e.g. poly(lactide-co-glycolide)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5169—Proteins, e.g. albumin, gelatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒在制备治疗造血损伤药物中的应用，实验证明本发明的包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒生物利用度提高，并且纳米粒能够被细胞快速摄取，发挥作用。本发明的纳米粒递送细胞因子，可以清除辐射产生的ROS，并能持续性释放细胞因子促进造血。实现了改善造血微环境与造血因子同时作用治疗辐射后造血损伤。同时在动物实验水平证明了本发明的纳米粒相比游离药物有更好的疾病治疗效果，显示了其增效作用。

Description

包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒在制备治疗造血损 伤药物中的应用
技术领域
本发明属于生物医学、纳米医学领域，涉及一种包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒在制备治疗造血损伤药物中的应用。
背景技术
随着科技经济的发展，核技术被广泛应用，同时公众暴露于电离辐射的危险增加。机体受到电离辐射照射后，各组织系统均会受到损伤，造血系统对电离辐射尤其敏感。大于1Gy的小剂量照射即可引起造血组织破坏、萎缩和再生障碍，临床表现为全血细胞迅速减少，造血干细胞出现更新及再生障碍，造血祖细胞无法增殖，最终导致白细胞、红细胞及血小板均减少。辐照暴露后，临床通常使用造血生长因子进行治疗，包括各种集落刺激因子，干细胞因子，促血小板生成素,促红细胞生成素等。但这些生物大分子半衰期短，限制了其在临床的应用。亟需一种能够延长这些生物大分子半衰期的技术。
电离辐射作用于机体后，射线可直接作用于体内核酸，蛋白质等生物大分子，导致分子结构和性质的改变。另一方面射线会引起机体内的水分子电离，产生大量活性氧(ROS)，ROS会造成造血干细胞(HSCs)和造血祖细胞(HPCs)DNA损伤，导致HSCs和HPCs凋亡，从而引起造血抑制。目前有研究运用抗氧化剂来清除ROS改善辐射后造血系统损伤，但作用单一，效果有限。还未有包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒治疗造血损伤的报道。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒在制备治疗造血损伤药物中的应用。
本发明的技术方案概述如下：
包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒在制备治疗造血损伤药物中的应用。
所述包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒用下述方法制成：
(1)按比例，取10-100mg过氧化氢敏感型两亲性生物材料溶解于2ml二氯甲烷中，得到溶液一；
(2)按比例，将5-50mg载体蛋白溶解于1mL蒸馏水中，得到溶液二；
将1-2000μL造血生长因子加入到溶液二中，得到溶液三，4℃冷藏；
(3)将溶液一置于冰浴条件下，利用超声波细胞破碎仪，剪切率为10％-35％，将溶液三逐滴加到溶液一中，超声2-10min，形成乳液一；
(4)取1-1000mL质量浓度为0.1％-5％的乳化剂水溶液，置于冰浴条件下，利用超声波细胞破碎仪，剪切率为10％-35％，将乳液一逐滴加入，超声5-15min，形成乳液二；
(5)将乳液二搅拌挥发2-24h，在15000-30000rpm离心条件下，离心10-40min，倒掉上清，用蒸馏水洗沉淀，离心，再重复用蒸馏水洗3-6次；冷冻干燥,得到一种包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒。
优选地，所述过氧化氢敏感型两亲性生物材料为中国专利号201410606622.9公开的过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG。也可以选用其他ROS响应型聚合物材料。
所述载体蛋白为牛血清白蛋白，卵清蛋白和血蓝蛋白中至少一种。
所述造血生长因子为促红细胞生成素，促血小板生成素，粒细胞集落刺激因子和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子中至少一种。
所述乳化剂为聚乙烯醇、聚苯乙烯磺酸钠、环氧乙烷和环氧丙烷嵌段共聚物、十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠或磷酸钠。
本发明的优点：
本发明的包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒的制备方法简单，成本低。
本发明的包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒生物利用度提高，并且纳米粒能够被细胞快速摄取，发挥作用。本发明的纳米粒递送细胞因子，可以清除辐射产生的ROS，并能持续性释放细胞因子促进造血。实现了改善造血微环境与造血因子同时空作用治疗辐射后造血损伤。同时在动物实验水平证明了本发明的纳米粒相比游离药物有更好的疾病治疗效果，显示了其增效作用。
附图说明
图1为一种包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒理化性质表征图。其中A为纳米粒粒径图；B为纳米粒电位图；C为纳米粒体外释放百分数。
图2为细胞对一种包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒的摄取图。其中A为细胞对游离药物的摄取图，B为细胞对纳米粒的摄取图。
图3为一种包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒过氧化氢清除作用。A为包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒体外过氧化氢清除作用；B为一种包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒对细胞内过氧化氢清除作用。
图4为一种包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒对于辐射造血系统损伤模型小鼠体内治疗评价。A是白细胞数；B是红细胞数；C是血小板数。
具体实施方式
下面各实施例中的过氧化氢敏感型两亲性生物材料均为中国专利号201410606622.9公开的过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG。
下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒制备方法，包括如下步骤：
(1)取70mg过氧化氢敏感型两亲性生物材料(中国专利号201410606622.9的发明中的实施例4制备的三臂过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG)溶解于2ml二氯甲烷中，得到溶液一；
(2)将30mg卵清蛋白(OVA)溶解于1mL蒸馏水中，得到溶液二；将100μL促红细胞生成素(EPO)(10000IU/mL)加入到溶液二中，得到溶液三，4℃冷藏；
(3)将溶液一置于冰浴条件下，利用超声波细胞破碎仪，剪切率为20％，将溶液三逐滴加到溶液一中，超声5min，形成乳液一；
(4)取20mL质量浓度为0.5％的乳化剂水溶液(平均分子量30000-70000的聚乙烯醇水溶液)，置于冰浴条件下，利用超声波细胞破碎仪，剪切率为20％，将乳液一逐滴加入，超声10min，形成乳液二；
(5)将乳液二搅拌挥发10h，在20000rpm离心条件下，离心25min，倒掉上清，用蒸馏水洗沉淀，离心，再重复用蒸馏水洗4次；冷冻干燥,得到一种包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒。
实施例2
包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒制备方法，包括如下步骤：
(1)取10mg过氧化氢敏感型两亲性生物材料(中国专利号201410606622.9的发明中的实施例4制备)溶解于2ml二氯甲烷中，得到溶液一；
(2)将5mg牛血清白蛋白溶解于1mL蒸馏水中，得到溶液二；将1μL促血小板生成素(15000U/mL)加入到溶液二中，得到溶液三，4℃冷藏；
(3)将溶液一置于冰浴条件下，利用超声波细胞破碎仪，剪切率为10％，将溶液三逐滴加到溶液一中，超声2min，形成乳液一；
(4)取1mL质量浓度为5％的乳化剂水溶液(平均分子量～70000的聚苯乙烯磺酸钠)，置于冰浴条件下，利用超声波细胞破碎仪，剪切率为10％，将乳液一逐滴加入，超声5min，形成乳液二；
(5)将乳液二搅拌挥发2h，在15000rpm离心条件下，离心40min，倒掉上清，用蒸馏水洗沉淀，离心，再重复用蒸馏水洗3次；冷冻干燥,得到一种包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒。
实施例3
包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒制备方法，包括如下步骤：
(1)取100mg过氧化氢敏感型两亲性生物材料(中国专利号201410606622.9的发明中的实施例4制备)溶解于2ml二氯甲烷中，得到溶液一；
(2)将50mg血蓝蛋白溶解于1mL蒸馏水中，得到溶液二；将2000μL粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(150μg/mL)加入到溶液二中，得到溶液三，4℃冷藏；
(3)将溶液一置于冰浴条件下，利用超声波细胞破碎仪，剪切率为35％，将溶液三逐滴加到溶液一中，超声10min，形成乳液一；
(4)取1000mL质量浓度为0.1％乳化剂水溶液(平均分子量～12600的环氧乙烷和环氧丙烷嵌段共聚物)，置于冰浴条件下，利用超声波细胞破碎仪，剪切率为35％，将乳液一逐滴加入，超声15min，形成乳液二；
(5)将乳液二搅拌挥发24h，在30000rpm离心条件下，离心10min，倒掉上清，用蒸馏水洗沉淀，离心，再重复用蒸馏水洗6次；冷冻干燥,得到一种包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒。
实施例4
包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒制备方法，包括如下步骤：
(1)取50mg过氧化氢敏感型两亲性生物材料(中国专利号201410606622.9的发明中的实施例4制备)溶解于2ml二氯甲烷中，得到溶液一；
(2)将10mg卵清蛋白和10mg牛血清白蛋白溶解于1mL蒸馏水中，得到溶液二；将10μL粒细胞集落刺激因子(100μg/0.6mL)和100μL促红细胞生成素(10000IU/mL)加入到溶液二中，得到溶液三，4℃冷藏；
(3)将溶液一置于冰浴条件下，利用超声波细胞破碎仪，剪切率为25％，将溶液三逐滴加到溶液一中，超声5min，形成乳液一；
(4)取500mL质量浓度为1％的乳化剂水溶液(乳化剂为十二烷基硫酸钠)，置于冰浴条件下，利用超声波细胞破碎仪，剪切率为25％，将乳液一逐滴加入，超声10min，形成乳液二；
(5)将乳液二搅拌挥发15h，在20000rpm离心条件下，离心20min，倒掉上清，用蒸馏水洗沉淀，离心，再重复用蒸馏水洗4次；冷冻干燥,得到一种包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒。
用十二烷基苯磺酸钠或磷酸钠替代本实施例的十二烷基硫酸钠，其它同本实施例，得到的一种包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒的性质和效果与本实施例相似。
实验1
实施例1制备的包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒,简称EPO NPS。
采用动态光散射法测定了实施例1制备的EPO NPS的平均粒径和分布(见图1)。EPONPS粒径(图1A)在170～230nm范围内集中分布，分散性指数PDI值为0.1-0.3。EPO NPS的表面电荷(图1B)为(-17)mV-(-22)mV。
利用BCA试剂盒法测定纳米粒中蛋白浓度，计算得到EPO NPS平均包封率为74.9％，平均载药量为26.8％。体外释放实验表明纳米粒可以持续性释放蛋白长达28天(图1C)。
实验2
细胞对包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒的摄取能力。
用异硫氰酸荧光素标记的OVA(OVA-FITC)替代实施例1的OVA(卵清蛋白)，其它同实施例1，制备出带有异硫氰酸荧光素标记的包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒(OVA-FITC NPS)。
将小鼠胚胎成纤维细胞(市售)于共聚焦皿中(细胞浓度为1×105个/mL)培养24h,在不同共聚焦皿中加入OVA-FITC或OVA-FITC NPS孵育1h，细胞核用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色，多聚甲醛固定。利用激光共聚焦显微镜观察细胞对蛋白的摄取情况。如图2所示，OVA-FITC NPS可被细胞快速摄取，发挥作用(图2B)，相比之下，OVA-FITC在相同时间内被细胞摄取量较少(图2A)。
实验3
一种包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒(实施例1制备)过氧化氢清除作用
本发明实施例1所用过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG，又可以称为：3S-PLGA-PO-PEG。
(1)一种包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒(实施例1制备，简称EPO NPS)体外过氧化氢清除作用
过氧化氢检测试剂盒(Amplex Red assay)可用来检测材料的过氧化氢敏感性。3S-PLGA-PO-PEG和EPO NPS分别用浓度为20μM的过氧化氢水溶液溶解，使终浓度分别为2mg/mL，空白对照为浓度为20μM的过氧化氢水溶液，置于37℃摇床中孵育24h。拿出后离心除去没有溶解的颗粒，检测上清过氧化氢浓度，计算样品过氧化氢清除能力(图3A)。
(2)一种包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒(实施例1制备)对细胞内过氧化氢清除作用
在共聚焦皿中培养小鼠胚胎成纤维细胞(细胞浓度为1×105个/mL)，体积为1mL，使用1μL浓度为1mg/mL的脂多糖(LPS)刺激小鼠胚胎成纤维细胞2h产生ROS，加入不同的物质孵育2h。其中：
空白对照组不接受LPS刺激；
LPS组为接受LPS刺激后用DMEM培养基孵育；
3S-PLGA-PO-PEG组为接受LPS刺激后用含有3S-PLGA-PO-PEG的DMEM培养基孵育；
EPO NPS组为接受LPS刺激后用含有EPO NPS的DMEM培养基孵育；
用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFDA)荧光探针检测细胞中ROS含量。细胞核用DAPI染色，多聚甲醛固定。利用激光共聚焦显微镜观察细胞内ROS强度。结果表明，3S-PLGA-PO-PEG和EPO NPS孵育后细胞的ROS水平明显低于LPS组(图3B)。
实验4
一种包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒(实施例1制备的)对于辐射造血系统损伤模型小鼠体内治疗评价。
选用6-8周龄C57BL/6J雄性小鼠，分成5组，(每组4只)正常对照组小鼠不接受全身照射，其余组小鼠接受一次137Cs源γ射线全身照射(TBI)，照射剂量为4Gy,剂量率为0.99Gy/min。照射后腹腔注射药物治疗两周，一周两次给药。其中：
TBI组每次给予200μL生理盐水治疗；
TBI+3S-PLGA-PO-PEG组每次按照18.6mg/kg给予3S-PLGA-PO-PEG治疗；
TBI+EPO组每次按照20μL/kg给予EPO注射液治疗；
TBI+EPO NPS组每次按照24.59mg/kg给予EPO NPS治疗；
两周后用血细胞计数仪测定小鼠外周血细胞数。如图4所示，TBI+EPO NPS组小鼠恢复效果最好，白细胞(图4A)、红细胞(图4B)、血小板数(图4C)最接近正常对照组。
实验证明，实施例2、3、4制备的包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒对过氧化氢清除作用，及对于辐射造血系统损伤模型小鼠体内治疗评价效果与实施例1的包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒的效果相似。

Claims (6)

1.包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒在制备治疗造血损伤药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征是所述包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒用下述方法制成：
(1)按比例，取10-100mg过氧化氢敏感型两亲性生物材料溶解于2ml二氯甲烷中，得到溶液一；
(2)按比例，将5-50mg载体蛋白溶解于1mL蒸馏水中，得到溶液二；
将1-2000μL造血生长因子加入到溶液二中，得到溶液三，4℃冷藏；
(3)将溶液一置于冰浴条件下，利用超声波细胞破碎仪，剪切率为10％-35％，将溶液三逐滴加到溶液一中，超声2-10min，形成乳液一；
(4)取1-1000mL质量浓度为0.1％-5％的乳化剂水溶液，置于冰浴条件下，利用超声波细胞破碎仪，剪切率为10％-35％，将乳液一逐滴加入，超声5-15min，形成乳液二；
(5)将乳液二搅拌挥发2-24h，在15000-30000rpm，离心10-40min，倒掉上清，用蒸馏水洗沉淀，离心，再重复用蒸馏水洗3-6次；冷冻干燥,得到一种包覆有造血生长因子的ROS响应型纳米粒。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述过氧化氢敏感型两亲性生物材料为中国专利号201410606622.9的过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述载体蛋白为牛血清白蛋白，卵清蛋白和血蓝蛋白中至少一种。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述造血生长因子为促红细胞生成素，促血小板生成素，粒细胞集落刺激因子和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子中至少一种。
6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述乳化剂为聚乙烯醇、聚苯乙烯磺酸钠、环氧乙烷和环氧丙烷嵌段共聚物、十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠或磷酸钠。
CN202110874248.0A 2021-07-30 2021-07-30 包覆有造血生长因子的ros响应型纳米粒在制备治疗造血损伤药物中的应用 Active CN113599357B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110874248.0A CN113599357B (zh) 2021-07-30 2021-07-30 包覆有造血生长因子的ros响应型纳米粒在制备治疗造血损伤药物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110874248.0A CN113599357B (zh) 2021-07-30 2021-07-30 包覆有造血生长因子的ros响应型纳米粒在制备治疗造血损伤药物中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113599357A true CN113599357A (zh) 2021-11-05
CN113599357B CN113599357B (zh) 2023-03-24

Family

ID=78338831

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110874248.0A Active CN113599357B (zh) 2021-07-30 2021-07-30 包覆有造血生长因子的ros响应型纳米粒在制备治疗造血损伤药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113599357B (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103638527A (zh) * 2013-12-05 2014-03-19 浙江大学 促红细胞生成素载药纳米粒及其应用
WO2014158165A1 (en) * 2013-03-28 2014-10-02 WU, Sophia, Shu Fen Composition and method for inducing epo-mediated haemoglobin expression and mitochondrial biogenesis in nonhaematopoietic cell
CN104371113A (zh) * 2014-10-31 2015-02-25 中国医学科学院生物医学工程研究所 过氧化氢敏感型两亲性生物材料plga-peg及制备方法及用途
US20200131462A1 (en) * 2018-10-28 2020-04-30 Schickwann Tsai Low-macrophage-adhesion/activation culture devices and methods thereof for continuous hematopoiesis and expansion of hematopoietic stem cells

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014158165A1 (en) * 2013-03-28 2014-10-02 WU, Sophia, Shu Fen Composition and method for inducing epo-mediated haemoglobin expression and mitochondrial biogenesis in nonhaematopoietic cell
CN103638527A (zh) * 2013-12-05 2014-03-19 浙江大学 促红细胞生成素载药纳米粒及其应用
CN104371113A (zh) * 2014-10-31 2015-02-25 中国医学科学院生物医学工程研究所 过氧化氢敏感型两亲性生物材料plga-peg及制备方法及用途
US20200131462A1 (en) * 2018-10-28 2020-04-30 Schickwann Tsai Low-macrophage-adhesion/activation culture devices and methods thereof for continuous hematopoiesis and expansion of hematopoietic stem cells

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHEN, H ET AL，: ""Nanoerythropoietin Is 10-Times More Effective Than Regular Erythropoietin in Neuroprotection in a Neonatal Rat Model of Hypoxia and Ischemia"，", 《STROKE》 *
孙云 等，: ""红细胞生成素抑制活性氧诱导的红细胞衰亡"，", 《中国病理生理杂志》 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN113599357B (zh) 2023-03-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Huang et al. Rat bone mesenchymal stem cell‐derived exosomes loaded with miR‐494 promoting neurofilament regeneration and behavioral function recovery after spinal cord injury
Aukerman et al. Different deficiencies in the prevention of tumorigenic-low-metastatic murine K-1735b melanoma cells from producing metastases
CN112915205B (zh) 一种抗肿瘤光动力学增敏治疗的光敏剂/酶组合递送系统及其制备方法
CN104434812A (zh) 一种柞蚕丝素蛋白阿霉素缓释微球及其制备方法
CN110200992A (zh) 金纳米笼在抗dna损伤中的应用
Jiang et al. Brain microenvironment responsive and pro‐angiogenic extracellular vesicle‐hydrogel for promoting neurobehavioral recovery in type 2 diabetic mice after stroke
CN113633625A (zh) 一种杂膜负载氧化磷酸化抑制剂的纳米药物及其制备方法
Cheng et al. Rabies virus glycoprotein-mediated transportation and T cell infiltration to brain tumor by magnetoelectric gold yarnballs
Wang et al. Nano-integrated cascade antioxidases opsonized by albumin bypass the blood–brain barrier for treatment of ischemia-reperfusion injury
Zhao et al. A nano-traditional chinese medicine against lymphoma that regulates the level of reactive oxygen species
Zhou et al. Stimuli-responsive nanoplatform-assisted photodynamic therapy against bacterial infections
CN113599357B (zh) 包覆有造血生长因子的ros响应型纳米粒在制备治疗造血损伤药物中的应用
CN109481393A (zh) 一种电荷反转介导的可注射型胶体粒药物凝胶缓释植入剂及其制备方法
Khemariya et al. New-fangled approach in the management of Alzheimer by formulation of polysorbate 80 coated chitosan nanoparticles of rivastigmine for brain delivery and their in vivo evaluation
CN105997892A (zh) 一种微球生物新材料包裹sod活性药物载体制备方法
Li et al. ROS-responsive EPO nanoparticles ameliorate ionizing radiation-induced hematopoietic injury
Fan et al. Polysialic acid self-assembled nanocomplexes for neutrophil-based immunotherapy to suppress lung metastasis of breast cancer
CN114533883A (zh) 一种靶向肝部位的大分子一氧化氮供体纳米药物的制备方法及应用
US20210137969A1 (en) Compositions and methods for the treatment and prevention of cerebral atrophy
CN112402632B (zh) 一种放疗增敏用纳米级配位聚合物及其制备方法和用途
Li et al. A multifunctional composite nanoparticle with antibacterial activities, anti-inflammatory, and angiogenesis for diabetic wound healing
CN112933225A (zh) 脂质包覆碳酸钙载体负载Ce6的制剂及其制备方法与应用
CN106822169B (zh) 虫草素在制备预防和/或治疗放射损伤的药物中的应用
Wang et al. Neutrophil-targeted Mn3O4 nanozyme treats myocardial ischemia reperfusion injury by scavenging reactive oxygen species
CN110585168A (zh) 一种利用细胞表面囊泡作为药物载体的用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant