CN113584039B - 一种磁珠-核酸适配体及其与微混合器的组合产品、制备方法和应用 - Google Patents

一种磁珠-核酸适配体及其与微混合器的组合产品、制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种磁珠‑核酸适配体及其与微混合器的组合产品、制备方法和应用，属于生物医学工程技术领域。所述磁珠‑核酸适配体包括磁珠和核酸适配体；所述核酸适配体包括EpCAM蛋白适配体和CSV蛋白适配体；本发明提供的磁珠‑核酸适配体可以将肿瘤细胞快速捕获在磁珠表面，提高捕获效率。本发明还提供了一种磁珠‑核酸适配体与微混合器的组合产品，所述组合产品利用微混合器对混合液体进行微流控，能提高磁珠‑核酸适配体对肿瘤细胞的捕获效率，具有样品需求小，成本低，迅速使磁珠‑核酸适配体和肿瘤细胞尺寸匹配，实现肿瘤细胞快速分离捕获的优点。

Description

一种磁珠-核酸适配体及其与微混合器的组合产品、制备方法 和应用
技术领域
本发明属于生物医学工程技术领域，具体涉及一种磁珠-核酸适配体及 其与微混合器的组合产品、制备方法和应用。
背景技术
癌症是全球极为严重的公共健康问题之一，随着每年发病率和死亡率的 增长，癌症已成为人类健康的头号杀手之一。除了在组织里的实体肿瘤，癌 症患者的血液内也会存在循环肿瘤细胞，即从原位实体瘤脱落进入血管内随 血液循环的肿瘤细胞。循环肿瘤细胞的计数、基因分析、功能分析等检测具 有良好的临床肿瘤学意义，可以诊断癌症，判别患者预后，预测药物抗性等。因此，从患者大量的血细胞中捕获极少数的循环肿瘤细胞有重要意义。
磁珠捕获循环肿瘤细胞技术通过在磁珠表面修饰肿瘤特异蛋白，利用磁 珠与肿瘤细胞接触时的相互作用，将肿瘤细胞捕获在磁珠表面。现有使用磁 珠捕获循环肿瘤细胞技术的问题在于捕获效率低下，尤其是磁珠与肿瘤细胞 的孵育过程——为了让磁珠和和肿瘤细胞有足够接触的时间和频率，现有的 技术大多数采用旋转混合仪，但是需要30分钟至60分钟才可达到较好的捕获 效果。长时间的处理将减低肿瘤细胞的活性，使得下游分析困难，同时也限制高通量处理样本的可能性。
微流控技术是一门涉及化学、流体物理、微电子、新材料、生物学和生 物医学工程的新兴交叉学科，是一种针对小量液体，在微纳米尺寸下精确操 控的系统学技术，具有微型化、集成化等特征。微流控的重要特征之一是微 尺度环境下具有独特的流体性质，如层流和液滴等。借助这些独特的流体现 象，微流控可以实现一系列常规方法所难以完成的微加工和微操作。目前，微流控被认为在生物医学研究中具有巨大的发展潜力和广泛的应用前景。
发明内容
有鉴于背景技术中存在的问题，本发明提供了一种磁珠-核酸适配体及 其与微混合器的组合产品、制备方法和应用。
本发明提供了一种磁珠-核酸适配体，包括磁珠和核酸适配体；所述核 酸适配体包括EpCAM蛋白适配体和CSV蛋白适配体；所述EpCAM蛋白适配 体的核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示；所述CSV蛋白适配体的核苷酸序列如 SEQ ID No.2所示。
优选的，所述磁珠的直径为40～60微米。
本发明提供了上述磁珠-核酸适配体的制备方法，包括如下步骤：
(1)将所述核酸适配体和磁珠重悬于洗涤结合缓冲液中，得到重悬混 合液；(2)将所述重悬混合液旋转混合，得到所述磁珠-核酸适配体。
优选的，步骤(1)所述洗涤结合缓冲液以水为溶剂，包括5～15mM的 Tris-HCl，0.5～1.5mM的EDTA，0.5～1.5M的NaCl，0.02～0.1％v/v的Tween-20。
优选的，在步骤(1)所述重悬之前，所述核酸适配体经过加热和冷却 处理；所述加热的温度为85～85℃；所述加热的时间为5～15分钟；所述冷却 的时间为10～20分钟，所述冷却后的核酸适配体温度为15～30℃；在步骤(1) 所述重悬之前，所述磁珠用所述洗涤结合缓冲液洗涤1～5次。
本发明提供了一种磁珠-核酸适配体与微混合器的组合产品，包括上述 磁珠-核酸适配体，还包括微流控微混合器。
优选的，所述微混合器包括血液入口、磁珠溶液入口、若干个环形混合 单元和出口；所述血液入口、磁珠溶液入口通过若干个环形混合单元和出口 连接。
优选的，所述环形混合单元的数量为2～10个；所述环形混合单元在所 述微混合器中的排列模式为非对称上下颠倒排列。
优选的，所述环形混合单元的通道中设置有阻碍物。
本发明提供了上述磁珠-核酸适配体、及其与微混合器的组合产品在非 疾病诊断和治疗目的的快速捕获循环肿瘤细胞中的应用。
优选的，所述组合产品中的微流控微混合器的血液入口或磁珠溶液入口 的工作流速为2～12ml/min。
有益效果：本发明提供了一种磁珠-核酸适配体，包括磁珠和核酸适配 体；核酸适配体包括EpCAM蛋白适配体和CSV蛋白适配体；EpCAM蛋白适 配体的核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示；CSV蛋白适配体的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明选取针对EpCAM蛋白和针对CSV蛋白的核酸适配体， 在磁珠表面修饰了针对EpCAM和CSV的核酸适配体，从而使所述磁珠-核酸 适配体能捕获不同肿瘤种类且不同表型的循环肿瘤细胞(上皮、间充质和混合表型)。本发明提供的磁珠-核酸适配体可以将肿瘤细胞快速捕获在磁珠 表面，提高捕获效率。
本发明提供了上述磁珠-核酸适配体的制备方法，该制备方法能确保磁 珠表面修饰这两种核酸适配体至饱和状态，以达到最高的捕获肿瘤细胞效 率。
本发明提供了一种磁珠-核酸适配体与微混合器的组合产品，包括上述 磁珠-核酸适配体，还包括微流控微混合器。本发明利用微流控微混合器辅 助上述磁珠-核酸适配体对肿瘤细胞捕获，通过对微流控微混合器的通道设 计，以不对称上下颠倒的方式排列环形混合单元，以及在混合单元的通道设阻碍物等。50微米的磁珠与大约20微米大小的肿瘤细胞在尺寸上比较接近， 因此能匹配肿瘤细胞尺寸，利用物理原理及生物特性，极大程度的提高了磁 珠-核酸适配体对肿瘤细胞的捕获效率。具有样品需求小，成本低，迅速使磁珠-核酸适配体和肿瘤细胞匹配，实现肿瘤细胞的快速分离捕获等优点。
本发明还提供了上述磁珠-核酸适配体、及其与微流控微混合器的组合 产品在非疾病诊断和治疗目的的快速捕获循环肿瘤细胞中的应用。所述磁珠 -核酸适配体可利用磁场将磁珠-肿瘤细胞复合体从其他的血细胞中分离，达 到分离循环肿瘤细胞的效果。所述组合产品中的微流控微混合器的血液入口 或磁珠溶液入口的工作流速优选控制在2～12ml/min，更优选控制在10ml/min。工作流速的控制可以提高微混合器的混合效率至0.878。
附图说明
图1为本发明实施例1所述磁珠-核酸适配体捕获肿瘤细胞的工作原理 示意图；
图2为本发明实施例1所述磁珠-核酸适配体捕获(A)AsPC-1、(B) MIAPaCa-2、(C)BxPC-3胰腺癌细胞、(D)AsPC-1和MIAPaCa-2、(E)AsPC-1 和BxPC-3、(F)MIAPaCa-2和BxPC-3的显微图；
图3为本发明实施例1所述磁珠-核酸适配体与随机寡核苷酸序列的肿 瘤细胞捕获效率柱状图；
图4为本发明实施例3所述微流控微混合器的结构图；
图5为本发明实施例3所述微流控微混合器的真实与数字模拟可视化 图；
图6为本发明实施例3所述微流控微混合器在(A)不同单元数和(B) 不同流速下的混合效率柱状图；
图7为本发明所述磁珠-核酸适配体通过微混合器捕获血液里的肿瘤细 胞和白细胞的(A)显微图，以及微混合器在(B)不同流速和(C)不同磁 珠浓度下的捕获效率和捕获纯度柱状图。
具体实施方式
本发明提供了一种磁珠-核酸适配体，通过在磁珠表面修饰针对EpCAM 蛋白和针对CSV蛋白的两种核酸适配体，当肿瘤细胞与磁珠-核酸适配体接 触时，肿瘤细胞表面的蛋白将和核酸适配体发生相互反应并结合，从而把肿 瘤细胞捕获在磁珠表面上，进而实现肿瘤细胞的快速捕获。
本发明所述磁珠-核酸适配体包括核酸适配体。所述核酸适配体包括 EpCAM蛋白适配体和CSV蛋白适配体；所述EpCAM蛋白适配体(SYL3C)5’ 到3’的序列为：cactacagaggttgcgtctgtcccacgttgtcatggggggt-TEG-biotin(SEQ ID No.1)；所述CSV蛋白适配体(ZY5C)5’到3’的序列为：biotin-cacgcatagcctttgctcctcgtctggaacgtcgcagctttagttctgggcctatgcgtg(SEQ ID No.2)。本发明选取针对EpCAM蛋白和针对CSV蛋白的核酸适配体，可以捕获不同肿瘤种类且不同表型的循环肿瘤细胞。
本发明所述磁珠-核酸适配体包括磁珠。所述磁珠的直径优选为40～60 微米，更优选为50微米。50微米的磁珠有较大的表面积，可以同时捕获多 个肿瘤细胞或肿瘤细胞团。
本发明对所述核酸适配体或所述磁珠的来源不作特别限定，本领域常规 市售的磁珠以及本领域常规方法制得的核酸适配体均可实现本发明。
本发明提供了上述磁珠-核酸适配体的制备方法，先将所述核酸适配体 和磁珠重悬于洗涤结合缓冲液中，得到重悬混合液；再将所述重悬混合液旋 转混合，得到所述磁珠-核酸适配体。
在本发明中，所述洗涤结合缓冲液以水为溶剂，优选包括Tris-HCl、EDTA、 NaCl和Tween-20。所述溶剂优选为超纯水；所述Tris-HCl的浓度优选为 5～15mM，更优选为10mM；所述EDTA的浓度优选为0.5～1.5mM，更优选为 1mM；所述NaCl的浓度优选为0.5～1.5M，更优选为1M；所述Tween-20的 浓度优选为0.02～0.1％v/v，更优选为0.05％v/v。
在所述重悬之前，所述核酸适配体优选经过加热和冷却处理；所述加热 的温度优选为85～85℃，更优选为80℃；所述加热的时间优选为5～15分钟， 更优选为10分钟；所述冷却的时间优选为10～20分钟，更优选为15分钟； 所述冷却后的核酸适配体温度优选为15～30℃，更优选为20～25℃。在所述 重悬之前，所述磁珠优选用所述洗涤结合缓冲液洗涤；所述洗涤的次数优选为1～5次，更优选为3次。
本发明将所述重悬混合液旋转混合，所述旋转混合的时间优选为40～80 分钟；更优选为60分钟。旋转混合后，核酸适配体修饰在磁珠表面，得到 所述磁珠-核酸适配体。
当肿瘤细胞与本发明提供的磁珠-核酸适配体接触时，肿瘤细胞表面的 蛋白将和核酸适配体发生相互反应并结合，从而把肿瘤细胞快速捕获在磁珠 表面，提高捕获效率。
本发明提供了一种磁珠-核酸适配体与微混合器的组合产品，包括上述 的磁珠-核酸适配体，还包括微流控微混合器。本发明所述微混合器优选包 括血液入口、磁珠溶液入口、若干个环形混合单元和出口。所述血液入口、磁珠溶液入口通过若干个环形混合单元和出口连接。本发明所述组合产品在 使用过程中，先将磁珠-核酸适配体重悬于PBS缓冲液，配制成磁珠溶液； 然后将离体血液和所述磁珠溶液加入所述微混合器，通过微混合器的处理， 快速实现肿瘤细胞的捕获。在本发明中，所述磁珠溶液的浓度优选为每毫升 1×105磁珠～每毫升1×106磁珠，更优选为每毫升1×106磁珠。
在本发明更具体的实施方式中，所述微流控微混合器的血液入口通道及 磁珠溶液入口通道相对于混合通道的角度优选为80～100°，更优选为80°； 所述血液入口通道或磁珠溶液入口通道的长度优选为4000～5000微米，更优选为4700微米；所述混合通道的长度优选为400～800微米，更优选为600 微米；所述微流控微混合器的出口通道长度优选为3500～4500微米，更优选 为4000微米。
在本发明中，所述环形混合单元优选分成较大的主要通道和较小的次要 通道，所述主要通道的宽度优选为300～500微米，更优选为400微米，所述 次要通道的宽度优选为100～300微米，更优选为200微米。所述环形混合单 元在所述微混合器的排列优选为非对称上下颠倒排列，下一个混合单元是上 一个混合单元的上下颠倒，以达到不对称分裂与重合流体的效果，最终提高混合效率。在本发明中，所述环形混合单元的主要通道和次要通道优选设有 若干个通道阻碍物，设置通道阻碍物有助于提高混合效率。
在本发明更具体的实施方式中，所述环形混合单元的参数一共有5个： 环形混合单元的数量、主要凸点数(主要通道上的凸点数)、次要凸点数(次 要通道上的凸点数)、凸点宽比(凸点宽度和凸点所在通道宽度的比例)和 凸点高比(凸点高度和凸点所在通道宽度的比例)。在本发明中，所述环形 混合单元的数量为1个或多个，优选为2～10个，更优选为5～8个，更优选 为7个，所述主要凸点数优选为0～5个，更优选为3个；所述次要凸点数优选为0～5个，更优选为3个；所述凸点宽比优选为0.25～0.75，更优选为0.25；所述凸点高比优选为0.25～0.75，更优选为0.5。本发明所述若干个环形混合 单元能极大的提升血液和磁珠溶液的混合速率，且能保证磁珠-核酸适配体 对肿瘤细胞的高效捕获。
本发明还提供了上述磁珠-核酸适配体及其与微流控微混合器的组合产 品在非疾病诊断和治疗目的的快速捕获循环肿瘤细胞中的应用。在本发明 中，所述组合产品中的微流控微混合器的血液入口或磁珠溶液入口的工作流速优选为2～12ml/min，更优选为10ml/min。本发明所述组合产品的微混合 器结合了3种不同的混合机制：i)曲线微结构产生的迪恩力、ii)不对称分 裂与重合流体和iii)通道阻碍物。为了提高通量与混合效率，此微混合器的 血液入口或磁珠溶液入口的工作流速在10ml/min时，使用本发明所述组合 产品能更高效、快速、稳定的捕获肿瘤细胞，捕获的肿瘤细胞具有良好的生 物活性。
下面结合实施例对本发明提供的一种磁珠-核酸适配体及其与微混合器 的组合产品、制备方法和应用进行详细的说明。需要注意，以下实施例仅用 作对本发明技术构思的解释说明，不能把它们理解为对本发明保护范围的限 定。
实施例1
一种用于捕获循环肿瘤细胞的磁珠-核酸适配体。磁珠直径为50微米。 磁珠的表面修饰两种对应肿瘤细胞特异表面蛋白的核酸适配体，分别是针对 EpCAM蛋白的SYL3C，5’到3’序列：cactacagaggttgcgtctgtcccacgttgtcatggggggttggcctg-TEG-biotin(SEQ IDNo.1)和 针对CSV蛋白的ZY5C，5’到3’序列： biotin-cacgcatagcctttgctcctcgtctggaacgtcgcagctttagttctgggcctatgcgtg(SEQ ID No.2)。
本发明选取针对EpCAM蛋白和针对CSV蛋白的核酸适配体，由于磁珠 表面修饰了针对EpCAM和CSV的核酸适配体，因此此产品的磁珠可以捕获 不同表型的循环肿瘤细胞(上皮、间充质和混合表型)；具体工作原理参考 图1。
本发明进行了磁珠-核酸适配体在PBS捕获3种胰腺癌细胞的实验。首先准 备每毫升1×106磁珠的磁珠-核酸适配体浓度，重悬于1ml的PBS。之后将 3种细胞以1×105细胞/ml的浓度掺入磁珠-核酸适配体溶液，使用旋转混合 仪混合30分钟。最后将混合物放入培养皿在倒置荧光显微镜下观察。
实验结果如图2和图3所示。从图2和图3可以看出：当将三种胰腺癌 细胞AsPC-1、MIAPaCa-2和BxPC-3(分别代表混合、间充质和上皮肿瘤细胞 表型)渗入PBS，此产品不止可以捕获单个肿瘤细胞，同时也可以捕获成团 的细胞群和同一个磁珠捕获不同的肿瘤细胞。此外，其平均捕获效率为75.8 ±3.0％，其中AsPC-1的捕获效率为68.6±7.2％，MIAPaCa-2为80.2± 4.4％和BxPC-3为73.7±1.6％。相较之下，使用随机的寡核苷酸序列无法 高效地捕获细胞，其捕获效率均在20％以下。图2和图3的结果表明：磁珠 -核酸适配体可以高效地捕获不同表型的肿瘤细胞。
实施例2
一种用于捕获循环肿瘤细胞的磁珠-核酸适配体的制备方法，包括如下 步骤：
(1)准备带有链霉亲和素的磁珠(苏州知益微球科技有限公司，货号：MagSA 50μm))和生物素化的核酸适配体(通过金唯智中国引物 合成获取)。
(2)将生物素化的核酸适配体序列重悬于存储缓冲液(TE缓冲液)至 100μM的浓度，之后进行分装，保存于-20℃。
(3)使用折叠缓冲液(1x磷酸盐缓冲液，1mM MgCl2，pH 7.4)将核 酸适配体稀释至工作浓度4μM，80℃加热10分钟，然后让核酸适配体溶液 冷却15分钟至室温25℃。
(4)使用洗涤结合缓冲液(10mM Tris-HCl，1mM EDTA，1M NaCl， 0.05％v/vTween-20，pH 7.4)洗涤带有链霉亲和素的磁珠三次，并将磁珠重 悬于洗涤结合缓冲液，重悬的磁珠和缓冲液容量比为1：3。
(5)加入核酸适配体，使用旋转混合仪旋转1小时将核酸适配体修饰 在磁珠表面。
(6)使用洗涤结合缓冲液洗涤2次，将多余的核酸适配体移除，之后 重悬于PBS缓冲液，放置在4℃冰箱保存。
实施例3
一种微流控微混合器，如图4所示，包含两个入口，一个入口为血液的 入口，另一个入口为磁珠溶液的入口。图4所示微流控微混合器包含环形混 合单元，每个环形混合单元分成较大的主要通道和较小的次要通道，主要通道的宽度为400微米，次要通道的宽度为200微米。环形混合单元在微混合 器的排列为非对称上下颠倒排列，下一个混合单元是上一个混合单元的上下 颠倒，以达到不对称分裂与重合流体的效果，可提高混合效率。
微流控微混合器有8个设计参数，分别是环形混合单元数、主要凸点数、 次要凸点数、凸点宽比、凸点高比、流速、出口长度、进口角度(血液入口 通道及磁珠溶液入口通道相对于混合通道的角度)。图4所示微流控微混合 器的环形混合单元数为7个，主要凸点数为3个，次要凸点数为3个，凸点宽比为0.25，凸点高比为0.5，血液及磁珠溶液的流速均为10ml/min，出口 长度为4000微米，进口角度为80°。
微流控微混合器的真实与数字模拟可视化图如图5所示，从图5可见： 当控制血液和磁珠溶液分别从各自的入口以10ml/min的流速进入微混合器 的情况下，7个混合单元足以让两种液体(墨汁和超纯水)完全混合；实验 混合结果也与数值模拟一致。
微流控微混合器在不同单元数和不同流速下的混合效率柱状图如图6所 示，图6表明在第7个混合单元时微混合器的混合效率能达到0.878，而且 混合效率会随着流速增加。
实施例4
微混合器的加工与制作采用一种基于聚二甲硅氧烷(PDMS)的软光刻 法，包括如下步骤：
(1)量取质量比为5：1的PDMS和其固化剂，充分搅拌均匀。
(2)将混合物置于干燥器中，开启真空泵维持真空状态30分钟，直至 气泡除尽。
(3)将PDMS与固化剂的混合物缓慢浇注至芯片模具，将模具放入80℃ 恒温烘箱固化2小时。
(4)将固化的PDMS从模具上剥离修剪，并使用0.5mm直径的打孔器 在芯片的出入口打孔。
(5)打孔之后的芯片通过等离子清洗与玻片结合。
(6)把切好的芯片放入200℃恒温烘箱强化24小时。
实施例5
一种于捕获循环肿瘤细胞的磁珠-核酸适配体和微流控微混合器的组合 产品，包括实施例1所述的磁珠-核酸适配体和实施例3所述的微流控微混 合器。
本发明进行了结合磁珠-核酸适配体和微混合器捕获血液里的肿瘤细胞 的实验。抽取健康人的血液，将3种胰腺癌细胞以1×105细胞/ml的浓度参 入血液，使用蠕动泵从微混合器的血液入口打入微流控芯片。同时，微混合 器的磁珠入口输入磁珠-核酸适配体溶液，浓度为每毫升1×106磁珠。两种液 体均以10ml/min的流速进入微混合器。最终混合的结果收集与一个离心管， 之后将其放入一个培养皿使用倒置荧光显微镜观察。
实验结果如图7所示。图7A表示磁珠-核酸适配体通过微混合器捕获血 液里三种不同的肿瘤细胞，表明了微混合器可以让磁珠和血液均匀混合，提 高磁珠和肿瘤细胞碰撞的概率，从而达到捕获的效果。从图7B和图7C可见，微混合器的捕获效率随着流速和磁珠浓度的提高而增加；反而捕获纯度则随 着流速的提高而增加，却随着磁珠浓度的提高而减低。在最优的工作条件， 即流速为10ml/min和磁珠浓度为每毫升1×106磁珠时，微混合器单次的捕 获效率和纯度分别为68.8±13.7％和75.2±8.2％。
微混合器的混合时间可通过以下的公式计算
其中τ为混合时间，dmix为微混合与完全混合区域的距离和vavg为平均液 体速度。本发明的dmix是13200μm(相当于7个混合单元的长度)，vavg为 6.84m/s，因此本发明的微混合器的混合时间可得1.8ms。
本发明提供的上述结果表明：上述微混合器能高效率且高通量地将两个 液体混合均匀，处理1ml的血液只需要大约1分钟，显著地减少孵育磁珠与 肿瘤细胞的孵育时间，并且能将大部分的肿瘤细胞捕获于磁珠表面。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普 通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润 饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 江西中医药大学
<120> 一种磁珠-核酸适配体及其与微混合器的组合产品、制备方法和应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
cactacagag gttgcgtctg tcccacgttg tcatgggggg t 41
<210> 2
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
cacgcatagc ctttgctcct cgtctggaac gtcgcagctt tagttctggg cctatgcgtg 60

Claims (6)

1.一种磁珠-核酸适配体与微混合器的组合产品，其特征在于：包括权利要求磁珠-核酸适配体和微流控微混合器；
所述磁珠-核酸适配体包括磁珠和核酸适配体，所述磁珠的直径为40～60微米，所述核酸适配体包括EpCAM蛋白适配体和CSV蛋白适配体；所述EpCAM蛋白适配体的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述CSV蛋白适配体的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；
所述微混合器包括血液入口、磁珠溶液入口、若干个环形混合单元和出口；所述血液入口、磁珠溶液入口通过若干个环形混合单元和出口连接；
所述环形混合单元的数量为2～10个；所述环形混合单元在所述微混合器中的排列模式为非对称上下颠倒排列；
所述环形混合单元分成较大的主要通道和较小的次要通道，所述主要通道的宽度为300～500微米，所述次要通道的宽度为100～300微米，所述环形混合单元在所述微混合器的排列为非对称上下颠倒排列，下一个混合单元是上一个混合单元的上下颠倒，所述环形混合单元的主要通道和次要通道设有若干个通道阻碍物。
2.如权利要求1所述的组合产品，其特征在于，所述的磁珠-核酸适配体的制备方法，包括如下步骤：
(1)将所述核酸适配体和磁珠重悬于洗涤结合缓冲液中，得到重悬混合液；
(2)将所述重悬混合液旋转混合，得到所述磁珠-核酸适配体。
3.根据权利要求2所述的组合产品，其特征在于，步骤(1)所述洗涤结合缓冲液以水为溶剂，包括5～15mM的Tris-HCl，0.5～1.5mM的EDTA，0.5～1.5M的NaCl，0.02～0.1％v/v的Tween-20。
4.根据权利要求3所述的组合产品，其特征在于，在步骤(1)所述重悬之前，所述核酸适配体经过加热和冷却处理；所述加热的温度为85～95℃；所述加热的时间为5～15分钟；所述冷却的时间为10～20分钟，所述冷却后的核酸适配体温度为15～30℃，在步骤(1)所述重悬之前，所述磁珠用所述洗涤结合缓冲液洗涤1～5次。
5.权利要求1～4任意一项所述的磁珠-核酸适配体与微混合器的组合产品在非疾病诊断和治疗目的的快速捕获循环肿瘤细胞中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述组合产品中的微流控微混合器的血液入口或磁珠溶液入口的工作流速为2～12ml/min。
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