CN113577064A

CN113577064A - 一种增强肿瘤免疫的联合用药物组合物及其应用

Info

Publication number: CN113577064A
Application number: CN202111058134.5A
Authority: CN
Inventors: 熊阳; 赵悦; 钱柯; 马莉莎; 张红艳; 施经斌; 许淑君
Original assignee: Zhejiang Chinese Medicine University ZCMU
Current assignee: Zhejiang Chinese Medicine University ZCMU
Priority date: 2021-09-09
Filing date: 2021-09-09
Publication date: 2021-11-02
Anticipated expiration: 2041-09-09
Also published as: CN113577064B

Abstract

本发明公开了一种增强肿瘤免疫的联合用药物组合物及其应用，所述联合用药物组合物包含大黄酸和小檗碱。大黄酸和小檗碱联合应用具有比单一成分更强的抗肿瘤活性，该联合用药物组合物能够显著增强免疫检查点抑制剂的抗肿瘤效果，能够延长荷瘤小鼠的生存期，为癌症的治疗提供新的方法和思路。

Description

一种增强肿瘤免疫的联合用药物组合物及其应用

技术领域

本发明属于药物领域，具体涉及一种增强肿瘤免疫的联合用药物组合物及其应用。

背景技术

恶性肿瘤是威胁人类生命安全的重大原因之一，目前主要的治疗手段有手术、化疗、放疗、靶向治疗和免疫疗法，其中肿瘤免疫疗法成为近年来的研究热点，PD-L1单抗等免疫检查点抑制剂已逐渐进入临床试验。然而，许多患者仍对免疫检查点抑制剂单用效果差，因此大量研究在对免疫检查点抑制剂与化疗、放疗等联合应用进行探索。由于许多化疗、放疗等方法毒副作用大，寻找联合免疫检查点抑制剂响应率高而毒副作用小的药物和给药方案具有重要意义。

大黄酸是中药大黄的主要成分，对小鼠黑色素瘤、艾氏腹水癌、肝癌、乳腺癌、P388白血病细胞都有一定的抑制作用，还可以抗菌、抗炎、利尿、泻下、治疗糖尿病肾病；小檗碱是中药黄连的主要成分，具有广泛的抗菌和调节血脂的作用，可诱导脂肪细胞代谢、减少脂肪合成。

大黄-黄连药对出自《医宗金鉴》中的大黄黄连汤，两者配伍使用，可达到清热泻火、化浊降脂之功效。但对于两者配伍在肿瘤治疗及应用上的研究目前鲜有详细报道。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明以中医药基本理论为指导原则，将大黄酸与小檗碱配伍可抑制脂肪细胞分化，降低CCL2、升高ADP的表达，联合治疗三阴性乳腺癌疗效显著。

本发明通过以下技术方案加以实现：

所述的一种增强肿瘤免疫的联合用药物组合物，其特征在于该药物组合物包括大黄酸和小檗碱，所述大黄酸与小檗碱的质量比为1:0.01-1:100，优选1:1。

进一步地，大黄酸为大黄酸单体或其药学上可接受的盐；所述小檗碱为小檗碱单体或其药学上可接受的盐。

进一步地，所述联合用药物组合物的剂型为药剂学上可接受的任意一种剂型，优选脂质体、纳米乳、纳米颗粒、微囊、微球、微丸、固体分散体，更优选为纳米乳。

进一步地，大黄酸和小檗碱共载纳米乳的平均粒径优选为50-400nm，更优选为100-300nm。

所述的大黄酸和小檗碱共载纳米乳，还包括乳化剂、助乳化剂、油剂和水。所述的乳化剂优选为泊洛沙姆188、吐温80、大豆卵磷脂、聚氧乙烯氢化蓖麻油EL35中的至少一种，更优选为聚氧乙烯氢化蓖麻油EL35。所述的助乳化剂优选为正丁醇、乙醇、聚乙二醇400、甘油、1,2-丙二醇中的至少一种，更优选为聚乙二醇400。所述的油剂优选为大豆油、肉桂油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、辛癸酸甘油酯中的至少一种，更优选为肉桂油。

所述的大黄酸和小檗碱的纳米乳的制备方法，包括如下步骤：

（1）将乳化剂、助乳化剂、油剂、大黄酸和小檗碱搅拌混合均匀，搅拌速度为200r/min，均匀指的是体系呈均一相；（2）200r/min的搅拌速度状态下滴加水，得到初乳大黄酸和小檗碱共载纳米乳。

进一步地，所述联合用药物组合物还包括药剂学上可接受的药用辅料中的任意一种或多种的组合；所述药用辅料包括肉桂油、聚氧乙烯氢化蓖麻油EL35、聚乙二醇400。

进一步地，所述联合用药物组合物的给药形式包括静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射、口服给药、舌下给药、鼻腔给药或经皮给药，优选腹腔注射。

进一步地，药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用，所述肿瘤包括黑色素瘤、胃癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、肾癌、乳腺癌、宫颈癌、子宫癌、皮肤癌、前列腺癌、甲状腺癌、白血病、淋巴癌、食管癌、口腔癌、肠癌、鼻癌、头颈癌，优选乳腺癌。

进一步地，药物组合物在增强免疫检查点抑制剂的抗肿瘤效果上的应用。

进一步地，所述免疫检查点抑制剂包括PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、CTLA-4抑制剂、TIM3抑制剂、LAG3抑制剂，优选PD-L1抑制剂。

本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：

（1）本发明提供的组合物，对增强肿瘤免疫具有协同作用；

（2）本发明提供的纳米乳一方面有效地增加了大黄酸和小檗碱的溶解度，另一方面纳米化后的体系能够增强肿瘤细胞浸润，解除肿瘤微环境中的免疫抑制作用，有效地促进了免疫检查点抑制剂对荷瘤小鼠的免疫杀伤效果。

附图说明

图1为本发明大黄酸和小檗碱共载纳米乳的透射电镜图；

图2为本发明大黄酸和小檗碱共载纳米乳的粒径分布图；

图3为本发明大黄酸和小檗碱共载纳米乳的稳定性检测结果；

图4为本发明大黄酸和小檗碱共载纳米乳的体外释放度考察；

图5为本发明大黄酸和小檗碱共载纳米乳对乳腺癌原位瘤动物模型的治疗效果图；其中，A为该纳米乳给药方案示意图；B为荷瘤鼠肿瘤体积的变化图；C为荷瘤鼠治疗期间体重的变化；D为荷瘤小鼠肿瘤发光强度变化图；E为不同药物处理组在不同时间的BLI_rel比值曲线；F为不同药物处理后荷瘤小鼠第20天的剥离的肿瘤图；G为药物处理后荷瘤小鼠第20天的剥离的肿瘤瘤重；

图6为流式细胞术检测经不同药物治疗后荷瘤小鼠的肿瘤组织中免疫细胞的变化情况；

图7为ELISA法测定经不同药物治疗后荷瘤小鼠肿瘤组织中CCL2和脂联素（ADP）表达的影响；

图8为荷瘤小鼠的主要脏器及肿瘤组织的H&E染色分析结果图（标尺为100 μm）和血液生化指标情况；

图9 为大黄酸和小檗碱联合PD-L1单抗对乳腺癌原位瘤动物模型的治疗效果图；

图10为流式分析荷瘤小鼠的肿瘤微环境中免疫细胞的变化；

图11为ELISA法测定肿瘤组织中CCL2和ADP的表达；

图12为流式分析荷瘤小鼠的脾脏中免疫细胞的变化；

图13荷瘤小鼠的主要脏器及肿瘤组织的H&E染色（标尺为100 μm）和血液生化指标；

注：与PBS组相比，^* P<0.05，^** P<0.01，^*** P<0.001；与aPD-L1组相比，^# P<0.05，^## P<0.01,^### P<0.001；与大黄酸和小檗碱共载纳米乳组相比，^& P<0.05，^&& P<0.01，^&&& P<0.001。采用t检验评估显著性差异，结果以mean ± SD表示。

具体实施方式

以下结合说明书附图及具体实施例对本发明做进一步详细说明，以便更好地理解本技术方案。

实施例1：大黄酸和小檗碱共载纳米乳的制备

本发明大黄酸和小檗碱共载纳米乳的优选配比为（大黄酸：小檗碱=1：1）：

大黄酸	0.09 g
		小檗碱	0.09 g
肉桂油	5.0 g
		聚氧乙烯氢化蓖麻油EL35	9.0 g
聚乙二醇400	6.0 g

注射用水定容至所需容量。

称取处方量的肉桂油、聚氧乙烯氢化蓖麻油EL35、聚乙二醇400、大黄酸和小檗碱，于50ml烧杯中，室温下200r/min搅拌至体系呈均一相，缓慢滴加注射用水形成纳米乳，可用注射用水稀释至所需容量。

本发明大黄酸和小檗碱共载纳米乳的优选配比为（大黄酸：小檗碱=1：100）：

大黄酸	0.002 g
		小檗碱	0.198 g
肉桂油	5.0 g
		聚氧乙烯氢化蓖麻油EL35	9.0 g
聚乙二醇400	6.0 g

注射用水定容至所需容量。

本发明大黄酸和小檗碱共载纳米乳的优选配比为（大黄酸：小檗碱=1：0.01）：

大黄酸	0.198 g
		小檗碱	0.002 g
肉桂油	5.0 g
		聚氧乙烯氢化蓖麻油EL35	9.0 g
聚乙二醇400	6.0 g

注射用水定容至所需容量。

不同配比的大黄酸和小檗碱共载纳米乳的粒径检测结果相近，大黄酸与小檗碱比例为1：100的纳米乳的平均粒径为（173.8 ±0.31）nm，大黄酸与小檗碱比例为1：1的纳米乳的平均粒径为（185.8 ± 0.44）nm，大黄酸与小檗碱比例为1：0.01的纳米乳的平均粒径为（244.7 ± 0.80）nm，优选大黄酸与小檗碱的比例为1：1进行后续实验。

实施例2：大黄酸和小檗碱共载纳米乳的表征

将制备得到的样品稀释一定的程度，用激光粒度仪测定其平均粒径与Zeta电位。将样品滴于铜网后，用2％(w/v)的磷钨酸负染，通过透射电镜(TEM)观察纳米乳的形貌与粒度大小。

检测结果如图1和图2所示：经过2％磷钨酸负染的电镜图可以看出，大黄酸和小檗碱共载纳米乳(图1)表面完整，呈现圆形，粒径分布均一，且粒径大小均在200nm左右。从Malvern激光粒度仪测得的大黄酸和小檗碱共载纳米乳(图2)的粒径分布可以看出，纳米乳的粒度分布均匀，平均粒度约为（185.8 ± 0.44）nm，多分散指数（PDI）为0.115 ± 0.02，Zeta电位为（11.77 ± 0.35）mV。

实施例3：大黄酸和小檗碱共载纳米乳的稳定性研究

考察高速离心对大黄酸和小檗碱共载纳米乳稳定性的影响，该纳米乳高速离心后，与未处理相比，没有出现药物沉淀、絮凝以及分层的现象，且粒径、PDI没有显著性差异（图3A），表明大黄酸和小檗碱共载纳米乳的稳定性不受高速离心的影响。

考察加热冷却循环对大黄酸和小檗碱共载纳米乳稳定性的影响，该纳米乳经过热-冷循环试验后，与未处理相比，粒径、PDI没有显著性差异（图3B），大黄酸和小檗碱共载纳米乳在4℃和25℃下具有较好的稳定性。

实施例4：大黄酸和小檗碱共载纳米乳的体外释放度研究

考察大黄酸和小檗碱共载纳米乳的体外释放度，精密吸取1mL 大黄酸和小檗碱共载纳米乳、大黄酸和小檗碱原料药，平行制备三份，置于预先处理好的透析袋中，透析袋两端用棉线扎紧。分别置于30 mL的pH 6.8和pH 7.4的磷酸盐缓冲液（PBS）的释放介质中，使透析袋完全浸没在液面之下，37℃恒温振荡（75r/min），分别于0.1、0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、10、12、24末从离心管中吸取2mL透析液，并补足等温等量同pH的释放介质，样品经0.45μm微孔滤膜滤过后，按照紫外分光光度法测定大黄酸、小檗碱的含量，并绘制累积释放曲线（图4）。结果表明，大黄酸和小檗碱共载纳米乳在4 h已达75.44 %，而原料药在24h内累积溶出度小于20 %，说明大黄酸和小檗碱共载纳米乳可有效提高大黄酸与小檗碱的溶出速率。

实施例5：大黄酸和小檗碱共载纳米乳的抗肿瘤作用

将0.25％胰酶消化处于对数生长期的小鼠4T1乳腺癌细胞，900rpm离心3分钟，调整细胞至适宜浓度，将细胞置于冰上备用，混匀细胞后用注射器抽取7×10⁵个细胞于小鼠左侧腋下第一对乳腺脂肪垫处种瘤（图5A）。

将小鼠分为五组，PBS组、空白纳米乳组（Blank-NE）、大黄酸纳米乳组（RHE-NE）、小檗碱纳米乳组（BBR-NE）、大黄酸和小檗碱共载纳米乳组（BBR-RHE-NE），每组5-6只小鼠。每天腹腔注射给药，每两天测量肿瘤直径，计算肿瘤体积（图5B），记录给药期间小鼠体重变化（图5C），采用小鼠活体荧光技术检测肿瘤发光强度变化（图5D），计算不同药物处理组在不同时间的BLI_rel比值曲线（图5E）。在给药第20天处死荷瘤小鼠，解剖后得到剥离的肿瘤（图5F），记录荷瘤小鼠肿瘤剥离的瘤重（图5G）。

实验结果显示，与PBS和空白纳米乳相比，大黄酸和小檗碱共载纳米乳可以显著降低乳腺癌生长，且大黄酸和小檗碱联合应用具有比单一成分更强的抗肿瘤活性。综上，大黄酸和小檗碱共载纳米乳对黑色素瘤、胃癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、肾癌、宫颈癌、子宫癌、皮肤癌、前列腺癌、甲状腺癌、白血病、淋巴癌、食管癌、口腔癌、肠癌、鼻癌、头颈癌等癌细胞作用也能取得显著降低肿瘤生长的效果。

实施例6：肿瘤组织中免疫细胞分析

调节性T细胞（Tregs）是一种具有免疫负调控功能的T淋巴细胞，是PD-L1外周耐受的关键因素之一。树突状细胞（DCs）是机体免疫系统的专职抗原递呈细胞，启动效应T细胞的抗肿瘤免疫应答。骨髓来源的抑制性细胞（MDSCs）来源于骨髓祖细胞和未成熟髓细胞，是一群具有强免疫抑制功能的细胞群。肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）是肿瘤组织中最丰富的免疫细胞，可参与自然免疫和获得性免疫对肿瘤微环境做出反应。TAMs可活化为经典的M1型和可替代的M2型，主要参与细胞内杀死病原体以及抗肿瘤免疫反应，M2型更倾向于免疫调节和促肿瘤活性。

收集肿瘤组织约100mg，置于盛有PBS的离心管中，将肿瘤切割成小块，加入消化酶液，研磨分离单细胞，离心，收集细胞，加入红细胞裂解液，裂解红细胞，PBS洗涤两次，离心，重新混悬后获得单细胞悬液，流式分析CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、Tregs、DCs、MDSCs、M1/M2ratio情况，如图6所示。

实验结果显示，与对照组相比，大黄酸和小檗碱联合应用后CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、DCs及M1/M2比值均显著上调，而Tregs和MDSCs显著下调，表明大黄酸和小檗碱的联合应用能够调节肿瘤微环境，增强肿瘤免疫治疗效果。

实施例7：ELISA法检测肿瘤组织中CCL2和ADP的表达

三阴性乳腺癌的肿瘤微环境由肿瘤细胞、脂肪细胞、浸润免疫细胞、基质细胞和其他细胞类型以及非细胞组织成分组成，其中脂肪细胞所占比例最大。肿瘤相关脂肪细胞分泌C-C趋化因子配体2（CCL2），会影响PD-L1单抗的疗效，也促进乳腺癌的侵袭和转移。脂肪细胞与乳腺癌细胞共培养后，具有抗乳腺癌作用的脂联素（ADP）降低，使抗肿瘤治疗效果降低。

将肿瘤组织制备成单细胞悬液，按照ELISA试剂盒说明书检测经不同药物治疗后荷瘤小鼠肿瘤组织中CCL2和ADP表达的情况，结果如图7所示，对照组相比，大黄酸和小檗碱的联合应用能够显著降低CCL2的表达，同时ADP的表达显著上调，说明大黄酸和小檗碱联合应用能够通过调节肿瘤微环境中的脂肪相关细胞因子增强抗肿瘤作用。

实施例8：荷瘤小鼠的主要脏器及肿瘤组织的H&E染色分析和血液生化指标情况

给药结束后，取荷瘤小鼠脏器（心、肝、脾、肺、肾）和肿瘤组织，固定于4%多聚甲醛中，并立即制备成石蜡切片，将石蜡切片脱蜡，苏木素染色5min，用盐酸乙醇分化5s，伊红染色5min后用乙醇、二甲苯梯度脱水，最后用中性树胶封片。置于 200 倍镜的显微镜下观察并拍照（图8A）。各药物处理组主要器官(心、肝、脾、肺、肾)细胞形态较完整，胞核无明显增大，未见显著性损伤。PBS组肿瘤细胞成团块状，索状排列，肿瘤核大深染，可见红染核仁，肿瘤细胞大小形态不等，肿瘤细胞基本没有发生明显的凋亡和坏死，给药组肿瘤细胞有局灶性坏死，细胞核染色加深，密度减少，可见空洞，说明部分肿瘤细胞发生了凋亡和坏死。

给药完成后，荷瘤小鼠眼球取血，取1.5 mL血于EP管，置于冰上静置30 min后离心（3500 rpm，10 min，4℃）取上清，用于检测肝肾功能指标。结果如图所示（图8B），荷瘤小鼠在给药后的谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、肌酐（CREA）和尿素氮（BUN）水平较PBS组均未产生显著性变化，结果说明各给药组对肝肾没有明显毒性。

实施例9：大黄酸和小檗碱联合应用能够增强PD-L1单抗的肿瘤免疫作用

将0.25％胰酶消化处于对数生长期的小鼠4T1乳腺癌细胞，900rpm离心3分钟，调整细胞至适宜浓度，将细胞置于冰上备用，混匀细胞后用注射器抽取7×10⁵个细胞于小鼠左侧腋下第一对乳腺脂肪垫处种瘤（图9A）。

将小鼠分为五组，PBS组、空白纳米乳组（Blank-NE）、PD-L1单抗组（aPD-L1）、大黄酸和小檗碱共载纳米乳组（BBR-RHE-NE）、大黄酸和小檗碱共载纳米乳联合PD-L1单抗组（BBR-RHE-NE+aPD-L1），每组5-6只小鼠。大黄酸和小檗碱每天腹腔注射给药，PD-L1单抗每三天腹腔注射给药（图9A），每两天测量肿瘤直径，计算肿瘤体积（图9B），记录给药期间小鼠体重变化（图9C），采用小鼠活体荧光技术检测肿瘤发光强度变化（图9D），计算不同药物处理组在不同时间的BLI_rel比值曲线（图9E）。在给药第20天处死荷瘤小鼠，解剖后得到剥离的肿瘤（图9F），记录荷瘤小鼠肿瘤剥离的瘤重（图9G）。

实验结果显示，与PD-L1单抗、大黄酸和小檗碱纳米乳相比，大黄酸和小檗碱共载纳米乳联用PD-L1单抗可以显著降低肿瘤生长。综上，大黄酸和小檗碱纳米乳联用PD-1抑制剂、CTLA-4抑制剂、TIM3抑制剂、LAG3抑制剂同样可以显著降低肿瘤生长，能够显著增强免疫检查点抑制剂的抗肿瘤效果。

实施例10：肿瘤组织中免疫细胞分析

收集肿瘤组织约100mg，置于盛有PBS的离心管中，将肿瘤切割成小块，加入消化酶液，研磨分离单细胞，离心，收集细胞，加入红细胞裂解液，裂解红细胞，PBS洗涤两次，离心，重悬获得单细胞悬液，流式分析CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、Tregs、DCs、MDSCs、M1/M2 ratio情况（图10）。

实验结果显示，与对照组相比，大黄酸和小檗碱联用PD-L1单抗后能够显著上调肿瘤组织中CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、DCs及M1/M2比值，同时显著下调Tregs和MDSCs，表明大黄酸和小檗碱联合PD-L1单抗能够调节肿瘤微环境，增强免疫检查点抑制剂的肿瘤免疫作用。

实施例11：ELISA法检测肿瘤组织中CCL2和ADP的表达

将肿瘤组织制备成单细胞悬液，按照ELISA试剂盒说明书检测经不同药物治疗后荷瘤小鼠肿瘤组织中CCL2和ADP表达的情况，结果如图11所示，对照组相比，大黄酸和小檗碱联合PD-L1单抗能够显著降低CCL2的表达，同时ADP的表达显著上调，说明大黄酸和小檗碱联合PD-L1单抗能够通过调节肿瘤微环境中的脂肪相关细胞因子增强免疫检查点抑制剂的肿瘤免疫作用。

实施例12：脾脏组织中免疫细胞分析

脾脏是体内最大的免疫器官，在抗肿瘤免疫方面占有十分重要的地位，是细胞因子产生的重要来源场所之一。

收集各组小鼠脾脏组织，置于盛有PBS的离心管中，将脾脏切割成小块，加入消化酶液，研磨分离单细胞，离心，收集细胞，加入红细胞裂解液，裂解红细胞，PBS洗涤两次，离心，重悬获得单细胞悬液，流式分析CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、Tregs、DCs、MDSCs、M1/M2 ratio情况，如图12所示。

实验结果显示，与对照组相比，大黄酸和小檗碱联用PD-L1单抗后能够显著上调肿瘤组织中CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、DCs及M1/M2比值，同时显著下调Tregs和MDSCs，表明大黄酸和小檗碱联合PD-L1单抗能够调节肿瘤微环境，增强免疫检查点抑制剂的肿瘤免疫作用

实施例13：荷瘤小鼠的主要脏器及肿瘤组织的H&E染色分析和血液生化指标情况

给药结束后，取荷瘤小鼠脏器（心、肝、脾、肺、肾）和肿瘤组织，固定于4%多聚甲醛中，并立即制备成石蜡切片，将石蜡切片脱蜡，苏木素染色5min，用盐酸乙醇分化5s，伊红染色5min后用乙醇、二甲苯梯度脱水，最后用中性树胶封片。置于 200 倍镜的显微镜下观察并拍照（图13A）。各药物处理组主要器官细胞形态较完整，胞核无明显增大，未见显著性损伤。

给药完成后，荷瘤小鼠眼球取血，取1.5 mL血于EP管，置于冰上静置30min后离心（3500rpm，10min，4℃）取上清，用于检测肝肾功能指标。结果如图所示（图13B），荷瘤小鼠在给药后的ALT、AST、CREA和BUN水平较PBS组均未产生显著性变化，结果说明各给药组对肝肾没有明显毒性。

以上实验表明，大黄酸和小檗碱的联合应用具有良好的抗肿瘤效果。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，根据情况或实际需要，可以对本发明的技术方案进行多种不同形式的变化，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

Claims

1.一种增强肿瘤免疫的联合用药物组合物，其特征在于该药物组合物包括大黄酸和小檗碱。

2.如权利要求1所述的一种增强肿瘤免疫的联合用药物组合物，其特征在于所述大黄酸为大黄酸单体或其药学上可接受的盐；所述小檗碱为小檗碱单体或其药学上可接受的盐。

3.如权利要求1所述的一种增强肿瘤免疫的联合用药物组合物，其特征在于所述大黄酸与小檗碱的质量比为1:0.01-1:100，优选大黄酸与小檗碱的质量比为1:1。

4.如权利要求1-3任一所述的一种增强肿瘤免疫的联合用药物组合物，其特征在于所述联合用药物组合物的剂型为药剂学上可接受的任意一种剂型，优选脂质体、纳米乳、纳米颗粒、微囊、微球、微丸、固体分散体，更优选为纳米乳。

5.如权利要求4所述的一种增强肿瘤免疫的联合用药物组合物，其特征在于所述联合用药物组合物还包括药剂学上可接受的药用辅料中的任意一种或多种的组合。

6.如权利要求5所述的一种增强肿瘤免疫的联合用药物组合物，其特征在于所述药用辅料包括肉桂油、聚氧乙烯氢化蓖麻油EL35、聚乙二醇400。

7.如权利要求1-3任一所述的一种增强肿瘤免疫的联合用药物组合物，其特征在于所述联合用药物组合物的给药形式包括静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射、口服给药、舌下给药、鼻腔给药或经皮给药，优选腹腔注射。

8.如权利要求1-3任一所述的一种增强肿瘤免疫的联合用药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用，所述肿瘤包括黑色素瘤、胃癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、肾癌、乳腺癌、宫颈癌、子宫癌、皮肤癌、前列腺癌、甲状腺癌、白血病、淋巴癌、食管癌、口腔癌、肠癌、鼻癌、头颈癌，优选乳腺癌。

9.如权利要求1-3任一所述的一种增强肿瘤免疫的联合用药物组合物在增强免疫检查点抑制剂的抗肿瘤效果上的应用。

10.如权利要求9所述的一种增强肿瘤免疫的联合用药物组合物，其特征在于所述免疫检查点抑制剂包括PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、CTLA-4抑制剂、TIM3抑制剂、LAG3抑制剂，优选PD-L1抑制剂。