CN113533175A - 基于四芯光纤的活体单细胞精准主动光操控方法及装置 - Google Patents
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Abstract
本发明提供的是一种基于四芯光纤的活体单细胞精准主动光操控方法及装置。其特征是:该装置由输出端加工成特定角度锥台的四芯光纤和显微成像系统所组成。激光光束在四芯光纤水平方向的两个纤芯的输出端附近形成贝塞尔光场,实现对待测细胞的稳定捕获。垂直方向的两个纤芯输出具有一定时间间隔的激光脉冲,在输出端产生推动和制动细胞旋转的推动和制动脉冲,从而实现对处于自由空间中的活体单细胞绕特定轴线旋转角度的精准光操控。本发明可用于实现对特定活体单细胞的稳定精准的捕获和自由空间旋转角度的精准操控,具有结构简单、造价低廉、灵活性高等特点,可广泛应用于在医学、生物学研究中对特定活体单细胞生命活动过程的长时间观察和研究。
Description
(一)技术领域
本发明涉及的是一种基于四芯光纤的活体单细胞精准主动光操控方法及装置,可用于活体单细胞的捕获、控制与姿态观察,属于生物光镊领域。
(二)背景技术
人们对生命的认识从结构开始,遵循着由宏观向微观,由整体向局部,从个体到器官、组织、细胞、细胞器、乃至组成生命的基本物质。细胞作为生命结构和功能的基本单位,对其进行深入的研究是揭示生命现象奥秘、征服疾病和改造生命的关键。
对于细胞研究遵循着科学发展的规律不断深入和发展,经历了细胞水平、亚细胞水平和分子水平等不同研究层次。随着研究的深入,我们面临的挑战是在尽量避免影响细胞自身性质及所处微环境的前提下,以非接触、无损伤的方式完成对细胞的精确操控。
细胞操控对于细胞结构和功能的研究、生命活动规律和本质的探索、疾病的诊断与诊疗都具有十分重要的意义。针对细胞研究应运而生的细胞操控技术一直是国内外研究的热点,其中包括诸如介电泳法、电阻抗法、免疫磁珠法、力学特性法等一系列有效方法,这些方法对保持细胞活性和对细胞非接触、无损伤具有很大的不足。
光镊技术自诞生以来,广泛用于生物学和物理学等的研究中,因为其采用非机械接触的方式对微小粒子进行捕获,不仅对生物微粒具有很强的穿透性,而且不会对微粒造成机械损伤,所以光镊技术特别适用于具有活性的生物微粒有关研究,并以其容易制作和操控等优点而备受关注。1970年,AAshkin等通过理论分析和模拟计算首先提出了利用聚焦激光束实现对微小粒子的捕获。1986 年,AAshkin等实现了以一束聚焦激光束所形成稳定的能量阱稳定捕获微小粒子的光镊技术。光镊技术利用聚焦光场形成的光阱产生力学效应,可以在不影响细胞内部及所处微环境的条件下,以非机械接触、无损伤的方式稳定捕捉、精准操控和快速筛选单个病毒、细胞甚至生物大分子。此外,光镊不仅可以操控微粒,还可以进行微小力的测量。作为定量分析工具,光镊技术可以对感兴趣的系统施加经校准的皮牛量级的光阱力,实现对光阱力作用引起的目标系统位移量的高精度、高灵敏度的测量。目前,在分子生物学、生物化学和生物物理学等研究领域中,分析光镊技术已经发展成为一种在分子水平上操控和分析细胞的强大工具,广泛应用于生物力学、生物聚合物、生物大分子和分子马达等众多研究领域中。
传统光镊为了强烈聚焦高斯光束而形成光阱,采用高数值孔径的物镜,体积庞大,价格昂贵,且整个系统移动困难。近年来光纤光镊技术得到了迅猛发展,它利用光出射的光场构成光镊,是光镊技术最重要的部分之一。
光纤光镊具有非接触性、小尺寸、操作轻便等特点,可用于微纳米粒子的捕获、分选和操控。在生物学、医学及其相关领域有着广泛的应用前景。本系统的四芯光纤光操控系统有着其特殊的结构,相比于其他光纤操控系统具有更大的捕获强度,具有低成本、高精度、易于集成等优点。
本发明涉及的是一种基于四芯光纤的细胞旋转光操控方法及装置。利用四条特殊设计的单模光纤精准操控细胞,使其绕特定轴线旋转。当细胞旋转至每一个角度并达到稳定状态后,使用科勒照明精确监测细胞转动过程的姿态。共同完成对细胞的精确操控。
(三)发明内容
本发明的目的在于提供一种无损伤、成本低廉、系统简便等优点的一种基于四芯光纤的活体单细胞精准主动光操控方法及装置。
光作为一种电磁波,同时携带着动量和能量。当光照射到物体上时,光辐射将会使光照物体受到光压力,其能量E与动量P关系可表示为P=E/c(c 为光传播速度)。光镊的原理是建立再光压的基础上的,即光照射在物体上时,物体将会受到一定的光辐射压力。
由于激光的高强度、方向性好、单色性强等特点,因此常被用作光镊系统的光源。光对粒子的作用力不仅有光辐射力导致的推力,且对粒子有拉力作用。光镊利用高聚焦的激光光束用于捕获和操控微粒、中性粒子。微粒在光镊中受到两种力的作用:散射力和梯度力,散射力是由于光子对细胞的撞击而产生,沿光束的传播方向,而梯度力是由于光场强度的不均匀造成的,沿光传播的垂直方向,指向光强最大处。
四芯光纤光操控系统主要由连续工作激光器1;输出耦合光纤2;单模光纤4、5、8、9、10、11;两端口光纤分束器3、6、7;光纤频率调制器12;光纤强度调制器13、14;光纤时间延迟器15;光纤耦合器16;四芯光纤17组成。所述系统中连续工作激光器1发出的激光经输出耦合光纤2后到达两端口光纤分束器3上,一束经过单模光纤4与光纤频率调制器12连接后到达两端口光纤分束器7上,这样就形成了脉冲波,一束经过单模光纤8与光纤强度调制器13连接作为推动脉冲,一束经过单模光纤9与光纤强度调制器14、光纤时间延迟器15连接作为制动脉冲,在考虑细胞运动受阻力的情况下,通过调节光纤强度调制器13、14使得推动脉冲略大于制动脉冲,推动脉冲占总强度的70%,制动脉冲占总强度的30%。再通过调节光纤时间延迟器15使得制动脉冲的时间延迟于推动脉冲,它们完成对待测细胞24的精确旋转控制。另一束经过单模光纤5与两端口光纤分束器6后分成两束,这两束光形成贝塞尔光束,完成对待测细胞 24的稳定捕获。这四束激光通过光纤耦合器16共同耦合进四芯光纤17上,共同完成对待测细胞24的操控。在此,由于两根双芯光纤输出端锥台的角度不同,聚焦的激光光场在输出端的聚焦位置不同,应该强调水平位置的两个纤芯到光纤中心距离应大于垂直位置的两个纤芯到光纤中心距离。当细胞旋转至一个角度并达到稳定状态后,通过光操控系统驱动细胞连续转动,最终获取整个细胞内部的三维结构荧光图像。
显微成像系统主要由白光LED光源18;全反射镜19;聚光镜20;复消色差显微物镜21;滤光片22;CCD相机23;待测细胞24组成。所述系统中,白光LED光源18发出的白光经全反射镜19反射,再经聚光镜20在待测细胞 24上形成科勒照明。复消色差显微物镜21和CCD相机23用于记录细胞空间位置的图像信息,滤光片22用于除去杂散光。该系统完成精确监测细胞转动过程的姿态,来观察四芯光纤光操控系统的效果,实现在细胞内部连续快速扫描,获得细胞的高空间分辨率三维结构图像。
(四)附图说明
图1是一种基于四芯光纤的活体单细胞精准主动光操控方法及装置的结构示意图。
图2是基于四芯光纤的细胞旋转光操控方法及装置的主视图(a)、侧视图(b)的结构示意图。
图3是接入装置的信号功率示意图。
附图标记说明:1-连续工作激光器;2-输出耦合光纤;3-两端口光纤分束器;4-单模光纤;5-单模光纤;6-两端口光纤分束器;7-两端口光纤分束器; 8-单模光纤;9-单模光纤;10-单模光纤;11-单模光纤;12-光纤频率调制器;13- 光纤强度调制器;14-光纤强度调制器;15-光纤时间延迟器;16-光纤耦合器;17- 四芯光纤;18-白光LED光源;19-全反射镜;20-聚光镜;21-复消色差显微物镜; 22-滤光片;23-CCD相机;24-待测细胞。
(五)具体实施方式
下面结合实例对本发明进行进一步的详细说明,以令本领域的技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解,本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
一种基于四芯光纤的活体单细胞精准主动光操控方法及装置,其特征是:所述系统由四芯光纤光操控系统和显微成像系统所组成。所述系统由连续工作激光器1;输出耦合光纤2;单模光纤4、5、8、9、10、11;两端口光纤分束器3、6、7;光纤频率调制器12;光纤强度调制器13、14;光纤时间延迟器15;光纤耦合器16;白光LED光源18;全反射镜19;聚光镜20;复消色差显微物镜21;滤光片22、CCD相机23;待测细胞24组成。所述系统中,连续工作激光器1输出的激光通过输出耦合光纤2到达两端口光纤分束器3后,一束经单模光纤4与光纤频率调制器12连接,激光光束至此变为脉冲信号,该脉冲信号再经过两端口光纤分束器7分为两束,一束经过单模光纤8与光纤强度调制器13 连接,形成强度大小合适的推动脉冲,一束经过单模光纤9与光纤强度调制器 14、光纤时间延迟器15连接,形成强度大小合适、时间延后的制动脉冲,推动脉冲占总强度的70%,制动脉冲占总强度的30%。这两束激光共同完成对待测细胞24的精确旋转控制。另一束经单模光纤5与两端口光纤分束器6后分成两束,这两束激光完成对待测细胞24的稳定捕获。这四束激光通过光纤耦合器16 耦合到四芯光纤17完成对待测细胞24的连接。白光LED光源18发出的白光经全反射镜19反射,再经聚光镜20在待测细胞24上形成科勒照明。复消色差显微物镜21和CCD相机23用于记录细胞空间位置的图像信息,滤光片22用于除去杂散光。该系统完成精确监测细胞转动过程的姿态。本发明可用于实现对特定活体单细胞的稳定精准的捕获和自由空间旋转角度的精准操控,可广泛用于对特定活体单细胞生命活动过程的长时间观察和研究。
所述系统中,四芯光纤光操控系统主要由连续工作激光器1;输出耦合光纤2;单模光纤4、5、8、9、10、11;两端口光纤分束器3、6、7;光纤频率调制器12;光纤强度调制器13、14;光纤时间延迟器15;光纤耦合器16;四芯光纤17组成。所述系统中连续工作激光器1发出的激光经输出耦合光纤2后到达两端口光纤分束器3上,一束经过单模光纤4与光纤频率调制器12连接后到达两端口光纤分束器7上,这样就形成了脉冲波,一束经过单模光纤8与光纤强度调制器13连接作为推动脉冲,一束经过单模光纤9与光纤强度调制器14、光纤时间延迟器15连接作为制动脉冲,在考虑细胞运动受阻力的情况下,通过调节光纤强度调制器13、14使得推动脉冲略大于制动脉冲,推动脉冲占总强度的 70%,制动脉冲占总强度的30%。再通过调节光纤时间延迟器15使得制动脉冲的时间延迟于推动脉冲,它们完成对待测细胞24的精确旋转控制。另一束经过单模光纤5与两端口光纤分束器6后分成两束,这两束光形成贝塞尔光束,完成对待测细胞24的稳定捕获。这四束激光通过光纤耦合器16共同耦合进四芯光纤 17上,共同完成对待测细胞24的操控。在此,由于两根双芯光纤输出端锥台的角度不同,聚焦的激光光场在输出端的聚焦位置不同,应该强调水平位置的两个纤芯到光纤中心距离应大于垂直位置的两个纤芯到光纤中心距离。当细胞旋转至一个角度并达到稳定状态后,通过光操控系统驱动细胞连续转动,最终获取整个细胞内部的三维结构荧光图像。
所述系统中,显微成像系统主要由白光LED光源18;全反射镜19;聚光镜20;复消色差显微物镜21;滤光片22;CCD相机23;待测细胞24组成。所述系统中,白光LED光源18发出的白光经全反射镜19反射,再经聚光镜20 在待测细胞24上形成科勒照明。复消色差显微物镜21和CCD相机23用于记录细胞空间位置的图像信息,滤光片22用于除去杂散光。该系统完成精确监测细胞转动过程的姿态,来观察四芯光纤光操控系统的效果,实现在细胞内部连续快速扫描,获得细胞的高空间分辨率三维结构图像。
提供以上实例仅仅是为了描述本发明的目的,而并非限制本发明的范围。本发明的范围由所附权利要求限定。不脱离本发明的精神和原理而做出的各种等同替换和修改均应涵盖在本发明的范围内。
Claims (3)
1.一种基于四芯光纤的活体单细胞精准主动光操控方法及装置,其特征是:所述系统由四芯光纤光操控系统和显微成像系统所组成。所述系统由连续工作激光器1;输出耦合光纤2;单模光纤4、5、8、9、10、11;两端口光纤分束器3、6、7;光纤频率调制器12;光纤强度调制器13、14;光纤时间延迟器15;光纤耦合器16;白光LED光源18;全反射镜19;聚光镜20;复消色差显微物镜21;滤光片22、CCD相机23;待测细胞24组成。
所述系统中,连续工作激光器1输出的激光通过输出耦合光纤2到达两端口光纤分束器3后,一束经单模光纤4与光纤频率调制器12连接,激光光束至此变为脉冲信号,该脉冲信号再经过两端口光纤分束器7分为两束,一束经过单模光纤8与光纤强度调制器13连接,形成强度大小合适的推动脉冲,一束经过单模光纤9与光纤强度调制器14、光纤时间延迟器15连接,形成强度大小合适、时间延后的制动脉冲,推动脉冲占总强度的70%,制动脉冲占总强度的30%。这两束激光共同完成对待测细胞24的精确旋转控制。另一束经单模光纤5与两端口光纤分束器6后分成两束,这两束激光完成对待测细胞24的稳定捕获。这四束激光通过光纤耦合器16耦合到四芯光纤17完成对待测细胞24的连接。
白光LED光源18发出的白光经全反射镜19反射,再经聚光镜20在待测细胞24上形成科勒照明。复消色差显微物镜21和CCD相机23用于记录细胞空间位置的图像信息,滤光片22用于除去杂散光。该系统完成精确监测细胞转动过程的姿态。本发明可用于实现对特定活体单细胞的稳定精准的捕获和自由空间旋转角度的精准操控,可广泛用于对特定活体单细胞生命活动过程的长时间观察和研究。
2.根据权利要求1所述的基于四芯光纤的活体单细胞精准主动光操控方法及装置。四芯光纤光操控系统主要由连续工作激光器1;输出耦合光纤2;单模光纤4、5、8、9、10、11;两端口光纤分束器3、6、7;光纤频率调制器12;光纤强度调制器13、14;光纤时间延迟器15;光纤耦合器16;四芯光纤17组成。所述系统中连续工作激光器1发出的激光经输出耦合光纤2后到达两端口光纤分束器3上,一束经过单模光纤4与光纤频率调制器12连接后到达两端口光纤分束器7上,这样就形成了脉冲波,一束经过单模光纤8与光纤强度调制器13连接作为推动脉冲,一束经过单模光纤9与光纤强度调制器14、光纤时间延迟器15连接作为制动脉冲,在考虑细胞运动受阻力的情况下,通过调节光纤强度调制器13、14使得推动脉冲略大于制动脉冲,推动脉冲占总强度的70%,制动脉冲占总强度的30%。再通过调节光纤时间延迟器15使得制动脉冲的时间延迟于推动脉冲,它们完成对待测细胞24的精确旋转控制。另一束经过单模光纤5与两端口光纤分束器6后分成两束,这两束光形成贝塞尔光束,完成对待测细胞24的稳定捕获。这四束激光通过光纤耦合器16共同耦合进四芯光纤17上,共同完成对待测细胞24的操控。在此,由于两根双芯光纤输出端锥台的角度不同,聚焦的激光光场在输出端的聚焦位置不同,应该强调水平位置的两个纤芯到光纤中心距离应大于垂直位置的两个纤芯到光纤中心距离。当细胞旋转至一个角度并达到稳定状态后,通过光操控系统驱动细胞连续转动,最终获取整个细胞内部的三维结构荧光图像。
3.根据权利要求1所述的基于四芯光纤的活体单细胞精准主动光操控方法及装置。显微成像系统主要由白光LED光源18;全反射镜19;聚光镜20;复消色差显微物镜21;滤光片22;CCD相机23;待测细胞24组成。所述系统中,白光LED光源18发出的白光经全反射镜19反射,再经聚光镜20在待测细胞24上形成科勒照明。复消色差显微物镜21和CCD相机23用于记录细胞空间位置的图像信息,滤光片22用于除去杂散光。该系统完成精确监测细胞转动过程的姿态,来观察四芯光纤光操控系统的效果,实现在细胞内部连续快速扫描,获得细胞的高空间分辨率三维结构图像。
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- 2021-07-12 CN CN202110782516.6A patent/CN113533175A/zh active Pending
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