CN113495147A

CN113495147A - 尿液α2-巨球蛋白及其多肽片段在妊娠糖尿病中的应用

Info

Publication number: CN113495147A
Application number: CN202010194287.1A
Authority: CN
Inventors: 张曼; 胡智颖
Original assignee: Beijing Shijitan Hospital
Current assignee: Beijing Shijitan Hospital
Priority date: 2020-03-19
Filing date: 2020-03-19
Publication date: 2021-10-12

Abstract

本发明提供一种尿液α2‑巨球蛋白（Alpha‑2‑macroglobin,Alpha‑2‑M）及其多肽片段的应用，具体为尿液α2‑巨球蛋白及其多肽片段在制备用于妊娠糖尿病相关检测制剂中的应用。本发明通过研究证实，与正常妊娠组相比，尿液α2‑巨球蛋白及其多肽片段在妊娠糖尿病组表达升高，可用于妊娠糖尿病相关的检测、监测及辅助诊断。本发明发挥尿液标本获取无创、可大规模重复取样、保存方便的优势，利用尿液标本检测尿液α2‑巨球蛋白及其多肽片段。

Description

尿液α2-巨球蛋白及其多肽片段在妊娠糖尿病中的应用

技术领域

本发明涉及尿液α2-巨球蛋白蛋白及其多肽片段的新用途，具体涉及尿液α2-巨球蛋白及其多肽片段在制备用于妊娠糖尿病相关检测制剂中的应用。

背景技术

妊娠过程中，为适应胎儿生长发育需要，孕妇的生殖、血液循环、泌尿、呼吸、消化及内分泌等系统会发生一系列变化，尤其是内分泌系统，促性腺激素分泌减少，催乳素、促甲状腺激素和促肾上腺皮质激素、糖皮质醇、醛固酮、甲状腺激素等分泌增加。妊娠中晚期，部分孕妇对胰岛素的敏感性下降，对胰岛素产生分解、拮抗作用，使胰岛素活性降低，孕妇不能正常代偿这种生理变化而出现妊娠期糖尿病（Gestational Diabetes Mellitus,GDM）。如果血糖水平控制不佳，妊娠期糖尿病妇女在妊娠期高血压疾病、流产、剖宫产、早产、新生儿低血糖、新生儿高胆红素血症等不良妊娠结局发生率明显高于正常孕产妇。对于确诊的妊娠期糖尿病患者，后期血糖控制标准和控制要求会更加严格，监测更加频繁。为提高妊娠期糖尿病患者的生活质量和医从性，减轻妊娠期血糖检测多次采血的痛苦，针对不同孕期制定更为精细化、个性化的监测指标，期望通过尿液蛋白或多肽研究，实现用无痛、方便、快捷、易重复的尿液检测或监测体内糖水平及糖代谢情况，也为进一步尿液多肽检测试剂盒的研究奠定基础。

α2-巨球蛋白由肝细胞与单核-巨噬细胞系统合成，是血浆中分子量最大的蛋白质。它还是一种主要的血浆蛋白酶抑制剂，它还调节包括白介素在内的多种生物活性肽的活性，并具有一系列的免疫调节作用。正常情况下无法由肾小球滤过，在尿中含量甚微。只有当肾小球基底膜严重受损或血液成分进入尿中时，尿中α2-巨球蛋白才升高。在α2-巨球蛋白与糖尿病的相关研究中指出，糖尿病患者α2-巨球蛋白水平显著升高；根据糖尿病有无并发症对糖尿病患者进行分类，糖尿病有并发症的患者α2-巨球蛋白水平明显高于无并发症的糖尿病患者。即使在疾病早期，血浆α2-巨球蛋白水平的升高可能是一种遇到与糖尿病微血管病变相关潜在性蛋白水解挑战的相应措施。α2-巨球蛋白可能是糖尿病微血管并发症最特异的标志物之一。

与常用的临床血液样本相比，尿液可以完全无创、连续、大量收集；没有稳态调节，可累积更多种类、更大幅度的变化，机体的很多病理生理变化可能体现在尿液中。一些激素和细胞因子等分子量相对较小的蛋白多肽入血后，会很快被排泄进入尿液，这些蛋白和多肽在尿液中被检测到的概率比在血中大很多；尿液收集之前，尿中可能的蛋白降解过程已经完成，所以尿蛋白可在较长时间内保持稳定。为减轻GDM患者血糖检测多次采血的痛苦，本实验在前期方法学摸索的基础上，希望通过尿液蛋白或多肽的检测能够实现对GDM患者体内糖水平及糖代谢水平的监测和了解。

发明内容

本发明的目的在于提供一种尿液α2-巨球蛋白及其多肽片段在制备用于妊娠糖尿病相关检测制剂中的应用。

优选地，所述尿液α2-巨球蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示（MGKNKLLHPSLVLLLLVLLP TDASVSGKPQ YMVLVPSLLH TETTEKGCVL LSYLNETVTV SASLESVRGN RSLFTDLEAENDVLHCVAFA VPKSSSNEEV MFLTVQVKGP TQEFKKRTTV MVKNEDSLVF VQTDKSIYKP GQTVKFRVVSMDENFHPLNE LIPLVYIQDP KGNRIAQWQS FQLEGGLKQF SFPLSSEPFQ GSYKVVVQKK SGGRTEHPFTVEEFVLPKFE VQVTVPKIIT ILEEEMNVSV CGLYTYGKPV PGHVTVSICR KYSDASDCHG EDSQAFCEKFSGQLNSHGCF YQQVKTKVFQ LKRKEYEMKL HTEAQIQEEG TVVELTGRQS SEITRTITKL SFVKVDSHFRQGIPFFGQVR LVDGKGVPIP NKVIFIRGNE ANYYSNATTD EHGLVQFSIN TTNVMGTSLT VRVNYKDRSPCYGYQWVSEE HEEAHHTAYL VFSPSKSFVH LEPMSHELPC GHTQTVQAHY ILNGGTLLGL KKLSFYYLIMAKGGIVRTGT HGLLVKQEDM KGHFSISIPV KSDIAPVARL LIYAVLPTGD VIGDSAKYDV ENCLANKVDLSFSPSQSLPA SHAHLRVTAA PQSVCALRAV DQSVLLMKPD AELSASSVYN LLPEKDLTGF PGPLNDQDNEDCINRHNVYI NGITYTPVSS TNEKDMYSFL EDMGLKAFTN SKIRKPKMCP QLQQYEMHGP EGLRVGFYESDVMGRGHARL VHVEEPHTET VRKYFPETWI WDLVVVNSAG VAEVGVTVPD TITEWKAGAF CLSEDAGLGISSTASLRAFQ PFFVELTMPY SVIRGEAFTL KATVLNYLPK CIRVSVQLEA SPAFLAVPVE KEQAPHCICANGRQTVSWAV TPKSLGNVNF TVSAEALESQ ELCGTEVPSV PEHGRKDTVI KPLLVEPEGL EKETTFNSLLCPSGGEVSEE LSLKLPPNVV EESARASVSV LGDILGSAMQ NTQNLLQMPY GCGEQNMVLF APNIYVLDYLNETQQLTPEI KSKAIGYLNT GYQRQLNYKH YDGSYSTFGE RYGRNQGNTW LTAFVLKTFA QARAYIFIDEAHITQALIWL SQRQKDNGCF RSSGSLLNNA IKGGVEDEVT LSAYITIALL EIPLTVTHPV VRNALFCLESAWKTAQEGDH GSHVYTKALL AYAFALAGNQ DKRKEVLKSL NEEAVKKDNS VHWERPQKPK APVGHFYEPQAPSAEVEMTS YVLLAYLTAQ PAPTSEDLTS ATNIVKWITK QQNAQGGFSS TQDTVVALHA LSKYGAATFTRTGKAAQVTI QSSGTFSSKF QVDNNNRLLL QQVSLPELPG EYSMKVTGEG CVYLQTSLKY NILPEKEEFPFALGVQTLPQ TCDEPKAHTS FQISLSVSYT GSRSASNMAI VDVKMVSGFI PLKPTVKMLE RSNHVSRTEVSSNHVLIYLD KVSNQTLSLF FTVLQDVPVR DLKPAIVKVY DYYETDEFAI AEYNAPCSKD LGNA）；或由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列衍生的，且与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列以及编码该氨基酸序列的核酸序列。

优选地，所述尿液α2-巨球蛋白及其多肽片段在妊娠糖尿病患者中高表达。

优选地，所述制剂为妊娠糖尿病患者尿液α2-巨球蛋白及其多肽片段检测试剂盒。

优选地，所述试剂盒包括能够特异性结合人α2-巨球蛋白及其多肽片段的适配体抗体或抗体片段中的一种或多种。

优选地，所述试剂盒还包括选自下组的成分：载体，稀释液，对照品，标准品，质控品，检测抗体，第二抗体、第二抗体稀释液，发光试剂，洗涤液、显色液、终止液中的任意一种或几种的组合。

优选地，所述标准品包括人α2-巨球蛋白标准品、人源化标签抗体标准品；较佳地，所述质控品包括：人α2-巨球蛋白质控品、人源化标签抗体质控品；较佳地，所述载体包括：微粒、微球、玻片、试纸条、塑料珠、液相芯片、微孔板或亲和膜等液相或固相载体。

优选地，所述固相载体的材质为聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺、纤维素中的任意一种。

发明人首先收集了正常妊娠妇女和妊娠糖尿病患者的尿液标本，离心后取上清，利用弱阳离子交换磁珠纯化和分离尿液标本。将 1μl标本与10μl基质混匀后，取1μl点在Anchorchip靶板上，标本离子化后进行质谱分析，采集1000-10000Da范围内的数据，获得由不同质荷比的蛋白峰构成的质谱多肽图。应用BioExplorer分析软件对正常妊娠妇女和妊娠糖尿病组的所有质谱图进行分析，筛选差异性多肽。然后发明人对具有统计学意义的差异性多肽进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定，在数据库检索得到差异表达的α2-巨球蛋白，并且与正常妊娠组相比，α2-巨球蛋白在妊娠糖尿病组的尿液中呈高表达。

本发明通过研究证实与正常妊娠组相比，α2-巨球蛋白及其多肽片段在妊娠糖尿病患者的尿液中高表达。从而提出检测尿液α2-巨球蛋白及其多肽片段可用于妊娠糖尿病的检测、监测或辅助诊断。

本发明发挥尿液标本获取无创、可大规模重复取样、保存方便的优势，利用尿液标本检测α2-巨球蛋白及其多肽片段。

为让本发明的上述和其它目的、特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，并配合附图，作详细说明如下。

附图说明

图1是正常妊娠妇女和妊娠糖尿病患者尿液α2-巨球蛋白的峰面积分布图。

图2是正常妊娠妇女和妊娠糖尿病患者尿液α2-巨球蛋白表达的散点图。

图3是α2-巨球蛋白在妊娠糖尿病患者尿液中表达的ROC曲线。

具体实施方式

实施例1 尿液标本的收集与处理

收集首都医科大学附属北京世纪坛医院产科门诊30例常规产检的正常妊娠妇女（N）和临床诊断妊娠期糖尿病患者（GDM）78例的清洁中段尿液标本，年龄均为15岁～49岁。妊娠期糖尿病患者（GDM group）符合2011年美国糖尿病协会（ADA）的糖尿病诊疗标准，不合并急慢性感染性、肿瘤、心血管疾病和严重肝肾功能障碍。78位妊娠期糖尿病患者根据OGTT实验(Oral Glucose Tolerance, OGTT）空腹血糖（Fasting Plasma Glucose, FPG）水平分为GM1（FPG≤4.50mmol/l）和GM2（FPG>4.50 mmol/L）组。尿液收集后，400×g离心5min，取上清，分装，-80℃冻存。研究对象的临床特征见表1-1所示。

实施例2 磁珠纯化和尿液多肽的筛选

利用弱阳离子交换磁珠富集尿液中的多肽，利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术（MALDI-TOF MS）分析尿液中的多肽谱。用标准品校正仪器后，将1μl洗脱液与10μl基质（0.3 %的α-氰基-4-羟基肉桂酸，HCCA）混匀，取1μl点在 Anchorchip（Autoflex MALDITOF，Bruker-Dalton）靶板上，室温干燥。通过氮激光器照射使标本离子化后进行质谱分析，采集1000-10000Da范围内的数据，获得由不同质荷比的蛋白峰构成的质谱图。对于每一个MALDI结晶点来说，共照射400次激光（每个结晶点的8个不同的位置各照射50次），平均值代表一个标本，从而得到所有样本的多肽图谱。每个样品进行三个生物学重复。应用BioExplorer分析软件对正常妊娠孕妇（N）和妊娠期糖尿病（GDM）组的质谱图进行分析，筛选差异性多肽。质荷比（m/z）1117.5的多肽峰的在2组之间差异具有统计学差异（P<0.05），其平均峰面积的分布如图1所示。

实施例3 差异多肽的鉴定及分析

从样品管中取20ul用于LC-MS/MS分析。EASY-nLC1000 HPLC系统用于分离。液相A为0.1％甲酸乙腈溶液（2％乙腈），液相B为0.1％甲酸乙腈溶液（98％乙腈）。100％A溶液平衡100×100mm的BEHnanoACquity柱，流速400nl/min。色谱喷雾针为PN：FS360-20-10-N-20-C12。通过毛细管高效液相色谱分离样品，Q-Exactive质谱仪（Thermo）进行分析。离子源电压3.5kv，分析时间120min，母离子扫描范围为300-2000m/z。按照以下方法收集多肽和多肽片段的质荷比:每次完整扫描后收集20个片段（MS2scan，HCD）。在M/Z 200下，MS1分辨率为70,000，MS2的分辨率17,500。使用数据分析软件PD（Proteome Discoverer 1.4，thermo）进行检索。检索数据库为Mascot。母离子误差设定为20ppm，碎片离子误差设为1Da，酶切方式为非酶切,可变修饰为Oxidation（M）蛋氨酸的氧化。数据卡值，Percolator算法，FDR≤1%。差异表达的质荷比（m/z）1117.5的多肽峰在数据库中检索鉴定为α2-巨球蛋白。

与正常妊娠组相比，α2-巨球蛋白在妊娠期糖尿病（GDM）组患者的尿液中高表达，如图2所示，α2-巨球蛋白在正常妊娠妇女和妊娠期糖尿病患者两组尿液中的表达有显著性差异。

进一步，发明人检测了78例妊娠期糖尿病患者和30例正常妊娠妇女尿液中1117.5的多肽峰值，建立ROC曲线，曲线下面积为0.612，如图3所示，反应α2-巨球蛋白的灵敏度和特异度均较好。

虽然本发明已以较佳实施例披露如上，然其并非用以限定本发明，任何所属技术领域的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作些许的更动与改进，因此本发明的保护范围当视权利要求所界定者为准。

序列表

<110> 首都医科大学附属北京世纪坛医院

<120> 尿液α2-巨球蛋白及其多肽片段在妊娠糖尿病中的应用

<130> 19PA2M-CN

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1474

<212> PRT

<213> Urinary α2-macroglobulin

<400> 1

Met Gly Lys Asn Lys Leu Leu His Pro Ser Leu Val Leu Leu Leu Leu

1 5 10 15

Val Leu Leu Pro Thr Asp Ala Ser Val Ser Gly Lys Pro Gln Tyr Met

20 25 30

Val Leu Val Pro Ser Leu Leu His Thr Glu Thr Thr Glu Lys Gly Cys

35 40 45

Val Leu Leu Ser Tyr Leu Asn Glu Thr Val Thr Val Ser Ala Ser Leu

50 55 60

Glu Ser Val Arg Gly Asn Arg Ser Leu Phe Thr Asp Leu Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asn Asp Val Leu His Cys Val Ala Phe Ala Val Pro Lys Ser Ser Ser

85 90 95

Asn Glu Glu Val Met Phe Leu Thr Val Gln Val Lys Gly Pro Thr Gln

100 105 110

Glu Phe Lys Lys Arg Thr Thr Val Met Val Lys Asn Glu Asp Ser Leu

115 120 125

Val Phe Val Gln Thr Asp Lys Ser Ile Tyr Lys Pro Gly Gln Thr Val

130 135 140

Lys Phe Arg Val Val Ser Met Asp Glu Asn Phe His Pro Leu Asn Glu

145 150 155 160

Leu Ile Pro Leu Val Tyr Ile Gln Asp Pro Lys Gly Asn Arg Ile Ala

165 170 175

Gln Trp Gln Ser Phe Gln Leu Glu Gly Gly Leu Lys Gln Phe Ser Phe

180 185 190

Pro Leu Ser Ser Glu Pro Phe Gln Gly Ser Tyr Lys Val Val Val Gln

195 200 205

Lys Lys Ser Gly Gly Arg Thr Glu His Pro Phe Thr Val Glu Glu Phe

210 215 220

Val Leu Pro Lys Phe Glu Val Gln Val Thr Val Pro Lys Ile Ile Thr

225 230 235 240

Ile Leu Glu Glu Glu Met Asn Val Ser Val Cys Gly Leu Tyr Thr Tyr

245 250 255

Gly Lys Pro Val Pro Gly His Val Thr Val Ser Ile Cys Arg Lys Tyr

260 265 270

Ser Asp Ala Ser Asp Cys His Gly Glu Asp Ser Gln Ala Phe Cys Glu

275 280 285

Lys Phe Ser Gly Gln Leu Asn Ser His Gly Cys Phe Tyr Gln Gln Val

290 295 300

Lys Thr Lys Val Phe Gln Leu Lys Arg Lys Glu Tyr Glu Met Lys Leu

305 310 315 320

His Thr Glu Ala Gln Ile Gln Glu Glu Gly Thr Val Val Glu Leu Thr

325 330 335

Gly Arg Gln Ser Ser Glu Ile Thr Arg Thr Ile Thr Lys Leu Ser Phe

340 345 350

Val Lys Val Asp Ser His Phe Arg Gln Gly Ile Pro Phe Phe Gly Gln

355 360 365

Val Arg Leu Val Asp Gly Lys Gly Val Pro Ile Pro Asn Lys Val Ile

370 375 380

Phe Ile Arg Gly Asn Glu Ala Asn Tyr Tyr Ser Asn Ala Thr Thr Asp

385 390 395 400

Glu His Gly Leu Val Gln Phe Ser Ile Asn Thr Thr Asn Val Met Gly

405 410 415

Thr Ser Leu Thr Val Arg Val Asn Tyr Lys Asp Arg Ser Pro Cys Tyr

420 425 430

Gly Tyr Gln Trp Val Ser Glu Glu His Glu Glu Ala His His Thr Ala

435 440 445

Tyr Leu Val Phe Ser Pro Ser Lys Ser Phe Val His Leu Glu Pro Met

450 455 460

Ser His Glu Leu Pro Cys Gly His Thr Gln Thr Val Gln Ala His Tyr

465 470 475 480

Ile Leu Asn Gly Gly Thr Leu Leu Gly Leu Lys Lys Leu Ser Phe Tyr

485 490 495

Tyr Leu Ile Met Ala Lys Gly Gly Ile Val Arg Thr Gly Thr His Gly

500 505 510

Leu Leu Val Lys Gln Glu Asp Met Lys Gly His Phe Ser Ile Ser Ile

515 520 525

Pro Val Lys Ser Asp Ile Ala Pro Val Ala Arg Leu Leu Ile Tyr Ala

530 535 540

Val Leu Pro Thr Gly Asp Val Ile Gly Asp Ser Ala Lys Tyr Asp Val

545 550 555 560

Glu Asn Cys Leu Ala Asn Lys Val Asp Leu Ser Phe Ser Pro Ser Gln

565 570 575

Ser Leu Pro Ala Ser His Ala His Leu Arg Val Thr Ala Ala Pro Gln

580 585 590

Ser Val Cys Ala Leu Arg Ala Val Asp Gln Ser Val Leu Leu Met Lys

595 600 605

Pro Asp Ala Glu Leu Ser Ala Ser Ser Val Tyr Asn Leu Leu Pro Glu

610 615 620

Lys Asp Leu Thr Gly Phe Pro Gly Pro Leu Asn Asp Gln Asp Asn Glu

625 630 635 640

Asp Cys Ile Asn Arg His Asn Val Tyr Ile Asn Gly Ile Thr Tyr Thr

645 650 655

Pro Val Ser Ser Thr Asn Glu Lys Asp Met Tyr Ser Phe Leu Glu Asp

660 665 670

Met Gly Leu Lys Ala Phe Thr Asn Ser Lys Ile Arg Lys Pro Lys Met

675 680 685

Cys Pro Gln Leu Gln Gln Tyr Glu Met His Gly Pro Glu Gly Leu Arg

690 695 700

Val Gly Phe Tyr Glu Ser Asp Val Met Gly Arg Gly His Ala Arg Leu

705 710 715 720

Val His Val Glu Glu Pro His Thr Glu Thr Val Arg Lys Tyr Phe Pro

725 730 735

Glu Thr Trp Ile Trp Asp Leu Val Val Val Asn Ser Ala Gly Val Ala

740 745 750

Glu Val Gly Val Thr Val Pro Asp Thr Ile Thr Glu Trp Lys Ala Gly

755 760 765

Ala Phe Cys Leu Ser Glu Asp Ala Gly Leu Gly Ile Ser Ser Thr Ala

770 775 780

Ser Leu Arg Ala Phe Gln Pro Phe Phe Val Glu Leu Thr Met Pro Tyr

785 790 795 800

Ser Val Ile Arg Gly Glu Ala Phe Thr Leu Lys Ala Thr Val Leu Asn

805 810 815

Tyr Leu Pro Lys Cys Ile Arg Val Ser Val Gln Leu Glu Ala Ser Pro

820 825 830

Ala Phe Leu Ala Val Pro Val Glu Lys Glu Gln Ala Pro His Cys Ile

835 840 845

Cys Ala Asn Gly Arg Gln Thr Val Ser Trp Ala Val Thr Pro Lys Ser

850 855 860

Leu Gly Asn Val Asn Phe Thr Val Ser Ala Glu Ala Leu Glu Ser Gln

865 870 875 880

Glu Leu Cys Gly Thr Glu Val Pro Ser Val Pro Glu His Gly Arg Lys

885 890 895

Asp Thr Val Ile Lys Pro Leu Leu Val Glu Pro Glu Gly Leu Glu Lys

900 905 910

Glu Thr Thr Phe Asn Ser Leu Leu Cys Pro Ser Gly Gly Glu Val Ser

915 920 925

Glu Glu Leu Ser Leu Lys Leu Pro Pro Asn Val Val Glu Glu Ser Ala

930 935 940

Arg Ala Ser Val Ser Val Leu Gly Asp Ile Leu Gly Ser Ala Met Gln

945 950 955 960

Asn Thr Gln Asn Leu Leu Gln Met Pro Tyr Gly Cys Gly Glu Gln Asn

965 970 975

Met Val Leu Phe Ala Pro Asn Ile Tyr Val Leu Asp Tyr Leu Asn Glu

980 985 990

Thr Gln Gln Leu Thr Pro Glu Ile Lys Ser Lys Ala Ile Gly Tyr Leu

995 1000 1005

Asn Thr Gly Tyr Gln Arg Gln Leu Asn Tyr Lys His Tyr Asp Gly Ser

1010 1015 1020

Tyr Ser Thr Phe Gly Glu Arg Tyr Gly Arg Asn Gln Gly Asn Thr Trp

1025 1030 1035 1040

Leu Thr Ala Phe Val Leu Lys Thr Phe Ala Gln Ala Arg Ala Tyr Ile

1045 1050 1055

Phe Ile Asp Glu Ala His Ile Thr Gln Ala Leu Ile Trp Leu Ser Gln

1060 1065 1070

Arg Gln Lys Asp Asn Gly Cys Phe Arg Ser Ser Gly Ser Leu Leu Asn

1075 1080 1085

Asn Ala Ile Lys Gly Gly Val Glu Asp Glu Val Thr Leu Ser Ala Tyr

1090 1095 1100

Ile Thr Ile Ala Leu Leu Glu Ile Pro Leu Thr Val Thr His Pro Val

1105 1110 1115 1120

Val Arg Asn Ala Leu Phe Cys Leu Glu Ser Ala Trp Lys Thr Ala Gln

1125 1130 1135

Glu Gly Asp His Gly Ser His Val Tyr Thr Lys Ala Leu Leu Ala Tyr

1140 1145 1150

Ala Phe Ala Leu Ala Gly Asn Gln Asp Lys Arg Lys Glu Val Leu Lys

1155 1160 1165

Ser Leu Asn Glu Glu Ala Val Lys Lys Asp Asn Ser Val His Trp Glu

1170 1175 1180

Arg Pro Gln Lys Pro Lys Ala Pro Val Gly His Phe Tyr Glu Pro Gln

1185 1190 1195 1200

Ala Pro Ser Ala Glu Val Glu Met Thr Ser Tyr Val Leu Leu Ala Tyr

1205 1210 1215

Leu Thr Ala Gln Pro Ala Pro Thr Ser Glu Asp Leu Thr Ser Ala Thr

1220 1225 1230

Asn Ile Val Lys Trp Ile Thr Lys Gln Gln Asn Ala Gln Gly Gly Phe

1235 1240 1245

Ser Ser Thr Gln Asp Thr Val Val Ala Leu His Ala Leu Ser Lys Tyr

1250 1255 1260

Gly Ala Ala Thr Phe Thr Arg Thr Gly Lys Ala Ala Gln Val Thr Ile

1265 1270 1275 1280

Gln Ser Ser Gly Thr Phe Ser Ser Lys Phe Gln Val Asp Asn Asn Asn

1285 1290 1295

Arg Leu Leu Leu Gln Gln Val Ser Leu Pro Glu Leu Pro Gly Glu Tyr

1300 1305 1310

Ser Met Lys Val Thr Gly Glu Gly Cys Val Tyr Leu Gln Thr Ser Leu

1315 1320 1325

Lys Tyr Asn Ile Leu Pro Glu Lys Glu Glu Phe Pro Phe Ala Leu Gly

1330 1335 1340

Val Gln Thr Leu Pro Gln Thr Cys Asp Glu Pro Lys Ala His Thr Ser

1345 1350 1355 1360

Phe Gln Ile Ser Leu Ser Val Ser Tyr Thr Gly Ser Arg Ser Ala Ser

1365 1370 1375

Asn Met Ala Ile Val Asp Val Lys Met Val Ser Gly Phe Ile Pro Leu

1380 1385 1390

Lys Pro Thr Val Lys Met Leu Glu Arg Ser Asn His Val Ser Arg Thr

1395 1400 1405

Glu Val Ser Ser Asn His Val Leu Ile Tyr Leu Asp Lys Val Ser Asn

1410 1415 1420

Gln Thr Leu Ser Leu Phe Phe Thr Val Leu Gln Asp Val Pro Val Arg

1425 1430 1435 1440

Asp Leu Lys Pro Ala Ile Val Lys Val Tyr Asp Tyr Tyr Glu Thr Asp

1445 1450 1455

Glu Phe Ala Ile Ala Glu Tyr Asn Ala Pro Cys Ser Lys Asp Leu Gly

1460 1465 1470

Asn Ala

Claims

1.尿液α2-巨球蛋白(Alpha-2-macroglobin, Alpha-2-M)及其多肽片段在制备用于妊娠糖尿病相关检测制剂中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述尿液α2-巨球蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.1所示；或由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列衍生的，且与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列以及编码该氨基酸序列的核酸序列。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述尿液α2-巨球蛋白及其多肽片段在正常妊娠妇女或妊娠糖尿病患者中高表达。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述制剂为妊娠糖尿病患者尿液α2-巨球蛋白及其多肽片段检测试剂盒。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括能够特异性结合人α2-巨球蛋白及其多肽片段的适配体抗体或抗体片段中的一种或多种。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括选自下组的成分：固相载体，稀释液，对照品，标准品，质控品，检测抗体，第二抗体、第二抗体稀释液，发光试剂，洗涤液、显色液、终止液中的任意一种或几种的组合。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述标准品包括人α2-巨球蛋白标准品、人源化标签抗体标准品；较佳地，所述质控品包括：人α2-巨球蛋白质控品、人源化标签抗体质控品；较佳地，所述固相载体包括：微粒、微球、玻片、试纸条、塑料珠、液相芯片、微孔板或亲和膜等液相或固相载体。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述固相载体的材质为聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺、纤维素中的任意一种。