CN113476450B - Epz015666在制备用于防治血管内膜增生类疾病的药物中的应用 - Google Patents

Epz015666在制备用于防治血管内膜增生类疾病的药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了EPZ015666在制备用于防治血管内膜增生类疾病的药物中的应用，属于医药领域。本发明将化合物EPZ015666用于抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)从收缩型向分泌型表型转化，发挥抑制血管内膜增生的作用，具有显著的抑制PDGF‑BB诱导的VSMC增殖、迁移活性、并显著降低血管损伤后内膜增生的厚度；利用化合物EPZ015666制备治疗血管内膜增生的药物以及抗动脉粥样硬化的药物。

Description

EPZ015666在制备用于防治血管内膜增生类疾病的药物中的应用
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及EPZ015666在制备用于防治血管内膜增生类疾病的药物中的应用。
背景技术
动脉粥样硬化(Atherosclerosis)是临床上的常见病，是急性冠脉综合征(AcuteCoronary Syndrome)、急性心梗(Acute Myocardial Infarction)和缺血性脑卒中等心脑血管疾病的发病基础。随着我国经济的持续发展和人民生活水平的不断提高，动脉粥样硬化的患病和死亡率呈现快速上涨的趋势，成为重大的公共健康问题。经皮冠状动脉内血管成形术是目前治疗以动脉粥样硬化为主要基础疾病的最有效方法之一，但术后血管再狭窄的问题也逐渐暴露出来。究其原因主要还是对支架内再狭窄的具体机制仍不完全明了，以及基于目前理解所寻找的调控靶点不能完全阻断其发生。研究显示，在血管受到外界因素刺激下(如细胞因子，活性氧、脂质等)，血管平滑肌细胞(VSMC)表型由收缩型转变为合成型，其增殖迁移能力明显增强，从而形成新生内膜，可导致血管重构。
经皮冠状动脉腔内血管成型术是目前治疗以动脉粥样硬化为主要疾病冠心病最有效的方法之一，该技术有效缓解了患者的疾病发展进程。但无论金属支架还是药物洗脱支架(DES)的使用，由于内膜增生导致的支架内再狭窄的发生，仍然是不可避免的重要问题。而且，DES使用目前依然需要长期的抗血栓治疗来预防支架血栓的形成，不可避免的增加出血风险。因此，寻找特异性调控血管内膜增生相关疾病有效的新药物和治疗策略仍然是迫切需要解决的重大公共卫生问题。
发明内容
为了弥补现有技术的不足，本发明提供新的治疗血管内膜增生疾病的药物，具体涉及化合物EPZ015666(C20H25N5O3)及其相关抑制剂在制备治疗血管内膜增生疾病药物中的用途。EPZ015666常作为有效的组蛋白甲基化转移酶PRMT5抑制剂，主要用于治疗肿瘤相关疾病。
EPZ015666在制备用于防治血管内膜增生类疾病的药物中的应用，EPZ015666的结构式如下：
Figure BDA0003204891000000021
本发明还提供一种用于防治血管内膜增生类疾病的药物，所述药物中包含EPZ015666。
在本发明的一种实施方式中，所述药物的剂型包括汤剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、酒剂、糖浆剂、浸膏剂、锭剂、棒剂、栓剂、曲剂、炙剂。
在本发明的一种实施方式中，所述药物的剂型还包括片剂、冲剂、袋泡剂、口服液剂、胶囊剂、滴丸剂、合剂、酊剂、气雾剂、膜剂、针剂、注射剂。
在本发明的一种实施方式中，所述药物还含有医学上可接受的辅料。
在本发明的一种实施方式中，所述医学上可接受的辅料包括黏合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、抗氧剂、矫味剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂。
在本发明的一种实施方式中，黏合剂包括羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖、阿拉伯胶。
在本发明的一种实施方式中，增溶剂包括淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸。
在本发明的一种实施方式中，崩解剂包括琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些符合硅酸盐和碳酸钠。
在本发明的一种实施方式中，润滑剂包括滑石、硬脂酸钙、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠。
在本发明的一种实施方式中，所述药物还含有药用载体。
在本发明的一种实施方式中，所述药用载体包括微囊、微球、纳米粒和脂质体。
本发明还提供了EPZ015666在制备用于抑制VSMC增殖和迁移的药物中的应用。
本发明还提供了EPZ015666在制备用于抑制血管平滑肌细胞表型转化的药物中的应用。
本发明还提供了EPZ015666在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用。
本发明的有益效果：
本发明在细胞水平发现EPZ015666能显著抑制PDGF-BB诱导的大鼠VSMC表型转化、增殖、迁移能力的影响。Western blot结果表明EPZ015666能够显著抑制PDGF-BB诱导的大鼠VSMC从收缩型转化为分泌型，BrdU实验、Transwell和划痕实验表明EPZ015666可显著抑制大鼠VSMC的增殖和迁移。本发明化合物EPZ015666具有较好的应用前景，可用于制备VSMC细胞表型转化，抑制VSMC增殖、迁移的药物用途。
本发明采用C57BL/6J小鼠左侧颈动脉结扎致血管内膜增生的模型进行实验研究，苏木精和伊红(HE)染色法检测内膜增生情况(内膜面积、中膜面积及内膜/中膜面积比)发现，化合物EPZ015666可显著抑制血管内膜损伤引起的血管内膜增生；免疫荧光法检测EPZ015666显著抑制小鼠血管内膜增生中增殖细胞核抗原(PCNA)、G1/S-特异性周期蛋白-D1(cyclin D1)的表达，提高VSMC收缩型标志物α-SMA及SM22α的表达，结果显示EPZ015666显著缓解血管内膜损伤引起VSMC由收缩型转化为分泌型。因而，所述化合物EPZ015666及其相关抑制剂可制备治疗血管内膜增生疾病的药物。
本发明化合物EPZ015666由于具有抑制将VSMC表型由收缩型转化成分泌型的功能，尤其表现出抑制异常的增殖与迀移以及功能改变，证明它在动脉粥样硬化发生发展中可发挥关键性的作用，因而，本发明化合物EPZ015666可用于制备抗动脉粥样硬化的药物用途。
附图说明
图1为EPZ015666对血管内膜增生的影响对比图；其中，Sham：假手术组，Model：左侧颈动脉结扎手术组，Model+EPZ015666：左侧颈动脉结扎手术+EPZ015666给药组。结果显示EPZ015666(15mg/kg)能够显著抑制血管内膜损伤诱导的血管内膜增生。
图2为EPZ015666对PDGF-BB诱导的大鼠VSMC迁移的影响；其中，A：PDGF-BB刺激，细胞划痕法测定大鼠VSMC的迁移能力；B：PDGF-BB刺激，Transwell法测定大鼠VSMC的迁移能力。结果显示EPZ015666(5nM)可抑制由PDGF-BB诱导的大鼠VSMC迁移，而EPZ015666(5nM)单独处理不影响大鼠VSMC迁移(*p＜0.05)。
图3为EPZ015666对PDGF-BB诱导的大鼠VSMC增殖的影响对比图；结果显示EPZ015666(5nM)可抑制由PDGF-BB诱导的大鼠VSMC增殖，而EPZ015666(5nM)单独处理不影响大鼠VSMC增殖(*p＜0.05)。
图4为EPZ015666对PDGF-BB诱导的大鼠VSMC增殖及表型转化的影响对比图；结果显示EPZ015666(5nM)单独处理不影响大鼠VSMC表型转化及增殖；但EPZ015666(5nM)显著抑制PDGF-BB诱导的大鼠VSMC的表型转化(cyclin D1、PCNA白和α-SMA)、增殖及迁移(cyclinD1、PCNA和α-SMA,*p<0.05)、增殖(*p<0.05)、迁移(*p<0.05)。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步阐述，由于篇幅原因，实验过程的描述无法做到非常详细，凡是实验中未详细描述的部分均为本领域技术人员熟知的常规操作，但实施例绝不是对本发明的任何限制。
下列实施例中所用方法如无特别说明，均为常规方法，以下实施中所需的试剂，如无特殊说明均为市场购得
实例中的数据分析均采用Graphpad Prism 8.0统计分析软件进行One-Way ANOVA多组比较。
实施例1化合物EPZ015666抑制小鼠血管内膜损伤诱导的血管内膜增生
本实施例表明了EPZ015666能显著抑制血管内膜增生。
实验中，将体重24-26g雌性C57BL/6J小鼠，3％戊巴比妥钠(75mg/kg)麻醉后仰卧固定，剃除颈部毛发，75％皮肤酒精消毒后颈上正中部切口，分离颈总动脉，采用8-0线结扎颈总动脉，缝合皮肤并消毒。待小鼠清醒后给予水和饲料分笼饲养；假手术组除不进行结扎外，其余操作均相同。EPZ015666以生理盐水溶解；随机分为假手术组(Sham，生理盐水i.p.n＝6)，模型组(Model，生理盐水i.p.n＝6)，模型+EPZ015666组(model+EPZ015666,15mg/kg/day,i.p.n＝6)，连续给药21天，常规处理取相同位置和长度的颈动脉，4％多聚甲醛固定，包埋做石蜡切片。
HE染色观察组织小鼠颈动脉内膜增生面积；HE染色法简述如下：血管切片经脱蜡，苏木精和伊红染色，显微镜拍照。
结果如图1所示，血管内膜损伤可显著增加血管内膜增生面积，使用EPZ015666后显著抑制增生面积的增加。可见，EPZ015666(15mg/kg)能够显著抑制血管内膜损伤诱导的血管内膜增生(*p<0.05,**p<0.01)。
实施例2化合物EPZ015666抑制PDGF-BB诱导的大鼠VSMC增殖迁移
(A)化合物EPZ015666(5nM)预处理VSMC 4小时(h)，采用PDGF-BB刺激24h，细胞划痕法测定大鼠VSMC的迁移能力，方法简要如下：单层VSMC细胞采用200μL微量吸管尖划痕，分别在0h和24h使用显微镜(Zeiss Axio Vert A1)拍照并后分析细胞迁移距离。
结果如图2A显示，PDGF+EPZ015666组细胞迁移距离显著降低。可见，EPZ015666(5nM)可以抑制PDGF-BB诱导的大鼠VSMC的迁移(*p<0.05)，比例尺：50μm。数据为平均值±标准差，*p<0.05，**p<0.01。
(B)化合物EPZ015666(5nM)预孵育大鼠VSMC 4小时(h)，采用PDGF-BB刺激18h，Transwell法测定大鼠VSMC的迁移能力，方法简要描述如下：VSMC细胞种入Transwell上室，经过上述处理后，迁移到小室底部VSMC用多聚甲醛固定，结晶紫染色，显微镜(Zeiss AxioVert A1)下观察迁移细胞数。
结果图2B显示，PDGF+EPZ015666组迁移细胞数显著降低。可见，EPZ015666(5nM)可以抑制PDGF-BB诱导的大鼠VSMC的迁移(*p<0.05)。
(C)化合物EPZ015666(5nM)预孵育大鼠VSMC 4小时(h)，采用PDGF-BB刺激24h，采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)染色分析细胞增殖情况；增殖试验按照BrdU增殖试剂盒说明书操作，简要描述如下：VSMC经过上述处理后，加入BrdU(10μmol/L)孵育2h，DAPI染细胞核，荧光显微镜(Zeiss LSM880)下观察BrdU阳性细胞数。
结果如图3所示，PDGF-BB+EPZ015666组BrdU阳性细胞数显著降低。可见，EPZ015666(5nM)可以显著抑制PDGF-BB诱导的大鼠VSMC的增殖(*p<0.05)。
(D)化合物EPZ015666(5nM)预孵育大鼠VSMC 4小时(h)，采用PDGF-BB(20ng/ml)刺激24h，采用Western blot分析细胞增殖标志cyclin D1、PCNA蛋白和收缩型标志分子α-SMA及SM22α；Western blot方法简要描述为，提取VSMC细胞总蛋白并进行定量，取上述总蛋白30μg采用SDS-PAGE分离并转移至硝酸纤维素膜上，5％脱脂牛奶封闭，将上述抗体4度孵育过夜，二抗孵育1h后化学发光试剂检测。
结果如图4所示，PDGF-BB刺激后可显著提高cyclin D1、PCNA蛋白的表达并降低α-SMA及SM22α的表达，EPZ015666可显著抑制此过程相关蛋白的变化。可见，EPZ015666(5nM)能够抑制PDGF-BB诱导的大鼠VSMC的表型转化。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (6)

1. EPZ015666在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用，EPZ015666的结构式如下：
；
应用过程中，EPZ015666用于抑制VSMC增殖和迁移、以及抑制血管平滑肌细胞表型转化。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型包括汤剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、酒剂、糖浆剂、浸膏剂、锭剂、棒剂、栓剂、曲剂、炙剂。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型包括片剂、冲剂、袋泡剂、口服液剂、胶囊剂、滴丸剂、合剂、酊剂、气雾剂、膜剂、针剂、注射剂。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，其特征在于，所述药物还含有医学上可接受的辅料，所述医学上可接受的辅料包括黏合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、抗氧剂、矫味剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物还含有药用载体。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述药用载体包括微囊、微球、纳米粒和脂质体。
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