CN113455380A - 一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法，属于花生新品种培育技术领域，以耐盐花生作为母本，高油酸花生作为父本，进行杂交；杂交后得到的F1代种子，进行杂种性检测，筛选真杂种；真杂种的F1种子播种大田，自交得F2代荚果种子；利用近红外仪无损伤检测脂肪酸含量，油酸含量75%以上的高油酸种子作为入选种子；将入选的高油酸的花生种子在1.0%的NaCl溶液中催芽，进行耐盐筛选；筛选1.0%的盐溶液中发芽势强的发芽种子为耐盐高油酸，经清水洗净后种植杂交圃，作为复合杂交父本，高油花生含油量55%以上作为母本，进行复合杂交等。本发明获得稳定遗传的高产、耐盐碱、高油酸、高油的性状，培育适应盐碱地环境的高产耐盐高油酸高油的花生品种。

Description

一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法

技术领域

本发明属于花生新品种培育技术领域，具体地说是涉及到一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法。

背景技术

我国是食用油紧缺国家，自给率仅为30%，70%依赖进口。花生占油料作物总产量的48%。我国生产的花生50% 用于加工花生油。我国食用油自给率低，很大程度上是因为我国耕地面积不足。我国约有15亿亩荒芜盐碱地，针对盐碱地种植作物的研究和应用十分重要。培育耐盐高含油量花生品种是缓解我国食用油紧缺压力的主要途径。普通花生品种在含盐量0.4%以上的盐碱地无法正常生长；普通花生品种籽仁含油量50% 左右，含油量55%为高油品种。作为加工油用，花生籽仁含油量每提高1个百分点，可增加纯利润7%。

花生油中的主要脂肪酸是油酸和亚油酸，两者总量一般稳定在80～85%，并且二者呈现出明显的负相关。普通花生品种的油酸含量一般为35% ~ 50%，而高油酸花生的油酸含量可以达到75% ~ 84%。油酸是影响花生油理化稳定性和营养价值的重要品质指标之一，花生油的油酸含量越高，稳定性就越好，不易变质而利于储存，可延长货架寿命；同时，高油酸能有选择性地降低人体血液中有害胆固醇，保持有益胆固醇，从而减缓动脉粥样硬化，有效预防冠心病等心脑血管疾病的发生，具有非常重要的保健功能与价值。

培育兼具耐盐高含油量高油酸的花生品种，对有效利用盐碱地、增加花生油的产量、提高花生保健功能、延长花生及花生制品、花生油的保质期，减缓我国食用油紧缺压力，增加农民受益，促进农业乡村振兴等有着重要意义。但目前尚无耐盐高含油量高油花生品种培育方法。

发明内容

为了解决背景技术的上述技术问题，本发明提供了一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法，利用本发明的培育方法，可以用于快速获得耐盐高油高油酸花生品种，此方法比一般育种方法缩短育种年限3年。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法，包括以下步骤：

（1）以耐盐花生作为母本，高油酸花生作为父本，进行杂交；

（2）杂交后得到的F1代种子，进行杂种性检测，筛选真杂种，淘汰假杂种；

（3）真杂种的F1种子播种大田，自交得F2代荚果种子；

（4）4.F2代种子，利用近红外仪无损伤检测脂肪酸含量，油酸含量75%以上的高油酸种子作为入选种子；油酸含量75%以上，说明杂交种经自交，2对控制高油酸含量的基因已经隐性纯合，后代不会再分离，均为高油酸；

（5）将入选的高油酸的花生种子在1.0%的NaCl溶液中催芽，进行耐盐筛选；

（6）筛选1.0%的盐溶液中发芽势强的发芽种子为耐盐高油酸，经清水洗净后种植杂交圃，作为复合杂交父本，高油花生含油量55%以上作为母本，进行复合杂交；

（7）复交F1代种子，进行杂种性检测，筛选真杂种，淘汰假杂种；

（8）复交真杂种的F1种子播种大田，自交得复交F2代荚果种子；

（9）复交F2代种子，利用近红外仪无损伤检测种子含油量和油酸含量，筛选含油量55%以上、油酸含量75%以上的高油高油酸种子；油酸含量75%以上，说明复合杂交种经自交，2对控制高油酸含量的基因已经纯合，后代不会再分离；

（10）筛选获得的高油高油酸复交F2代种子种植田间，生育期间田间观察，标记出苗早、开花集中、株形好的单株，收获期再选择荚果集中、单株结果多的单株，按单株收获荚果复交F3代种子；

（11）收获的复交F3代种子，在含盐量0.4～0.5%盐碱地上，按单株种成株行，进行耐盐筛选复交F4代种子；

（12）选择的复交F4代种子，利用近红外仪按单株检测含油量，选择含油量55%以上的单株；

（13）筛选的复交F4代高油高油酸单株种子，继续在含盐量0.4～0.5%盐碱地上，按单株种成株行，继续进行耐盐筛选复交F5代种子；

（14）选择的复交F5代荚果种子，利用近红外仪按单株检测含油量，选择含油量55%以上的单株；

（15）筛选的复交F5代高油高油酸单株，继续在含盐量0.4～0.5%盐碱地上，按单株种成株行，同一株行内性状表现一直、高产、耐盐的单株混收形成株系；

（16）混收的株系种子，利用近红外仪检测含油量和油酸含量，含油量55%以上、油酸含量75%以上的株系成为高产耐盐高油高油酸株系；

（17）入选的耐盐高油酸株系进行产量鉴定，并进一步进行耐盐筛选鉴定；试验田选择含盐量0.4～0.5%的土壤；试验设置3次重复，每个重复播种1垄；收获后晒干，称重产量；选择产量高、耐盐性强的高油酸株系晋升为品系；

（18）入选的品系进行产量比较试验和耐盐性鉴定；试验田选择含盐量0.4～0.5%的土壤；试验设置3次重复，每个重复播种3垄；以当地品种区域试验对照品种或当地推广品种作为对照；成熟收获后晒干，称重产量；选择产量高、耐盐性强的高油酸品系，参加省品种区域试验，试验通过，申报国家非主要农作物品种登记。

作为优选，步骤（1）中，耐盐花生选择在含盐量0.5%的盐碱地正常生长的作为母本，高油酸花生选择油酸含量75%以上的花生作为父本。

作为优选，步骤（2）中，杂种性检测方法：取F1代种子，在种胚的另一端的子叶上取下一小部分，提取全DNA，然后进行油酸基因检测；决定油酸高低的基因序列是已知的并且公开。

作为优选，步骤（5）中，

1）催芽时，先将培养皿底部垫1张滤纸，种子放在滤纸上，加上1.0%的盐溶液，使溶液“漫过”种子，浸泡4小时，使种子吸足水分；

2）去掉盐溶液，在培养皿中加新的1.0%NaCl溶液少许，防止种子失水干缩，每天更换1.0%的NaCl溶液；

3）1.0%的NaCl溶液中催芽7天后，选取发芽的种子，发芽的标准是根长≥种子长，即为耐盐种子，用清水冲洗，淘汰未发芽不耐盐的种子。

作为优选，步骤（11）和（13）中，选择盐碱地上苗期生长健壮、开花集中、株形好，生育中后期生长正常、受盐胁迫影响、抗病、抗倒伏，收获期结果多，结果整齐一直的单株，按单株收获荚果复交F4代和F5代种子。

作为优选，步骤（12）中，在复交F2代选择的含油量55%以上、油酸含量75%以上的种子，高油酸基因已经纯合，后代油酸含量不会再分离；而含油量后代会继续分离；因此，利用近红外以检测含油量，从中筛选含油量55%以上的高油高油酸单株。

作为优选，步骤（2）-（16）中播种，均为单粒播种；所述单粒播种中，起垄，垄距80～100cm，每个垄上种2行，垄上小行距25～35cm，穴距16-20cm，每穴播种1粒种子；

作为优选，步骤（17）-（18）中播种，均为双粒播种；所述双粒播种中，起垄，垄距80～90cm，每个垄上种2行，垄上小行距22～30cm，穴距16-20cm，每穴播种2粒种子。

作为优选，步骤（2）-（18）中，播种后喷施杀灭单子叶植物的除草剂后覆地膜；播种对试验田的要求是1年以上未种过花生的土壤，耕地前使用基肥每亩2000～4000公斤农家肥，或者商品有机肥150～250公斤，含N、P、K各15%的硫酸钾型复合肥30～50公斤，并使用辛硫磷杀虫剂防治地下害虫。

作为优选，选择适期适宜土壤墒情播种，地下5cm地温5天以上保持18℃以上为适宜播种期；适宜墒情为耕作层土壤手握成团，手搓松散，土壤含水量60～70%。可提前灌水造墒。生育期间，注意防治虫害。棉铃虫的防治，可喷施毒死蜱、吡虫啉、杜邦等。生育中后期降雨多，注意排水防涝。适期收获，当大部分荚果网纹清晰、果壳硬化、果壳内壁变成青褐色的硬化斑块结构时便可收获。收获后，及时晾晒，避免着雨，含水量在10%以下方可入库保存。

油酸含量高低的原理：目前广泛应用的花生高油酸材料为F435型突变体，为隐性突变，包含ahFAD2A的RF-448 bpG/A替换和ahFAD2B的ORF-441-442的“A”插入，结果导致FAD2酶部分或全部失活，阻碍了油酸向亚油酸的转化过程而产生了高油酸性状。当2对基因均为阴性纯合时，则表现为高油酸（75%以上）；当显性纯合时，表现为低油酸（35～50%）；当基因为杂合（同一植株的细胞中显性隐性基因都存在）时油酸含量60%左右。

本发明的积极意义：

1）一般来说，具有较强耐盐碱能力的花生并不具备农业生产价值。所以，本发明采用复合杂交手段，获得稳定遗传的高产、耐盐碱、高油酸、高油的性状，培育适应盐碱地环境的高产耐盐高油酸高油的花生品种。

2）本发明的实施能培育出在含盐量0.4～0.5%的盐碱地上正常生长结果，含油量达到高油标准（籽仁含油量55%以上），油酸含量达到高油酸标准（75%以上）的高产花生品种，对有效利用盐碱地，增加花生油的总产量、生产高品质、保健功能强、货架期长的花生，解决我国食用油依赖进口、食用油安全等问题有着重要意义。

具体实施方式

下面结合实施例对本申请作进一步的详细说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释相关发明，而非对该发明的限定。另外还需要说明的是，为了便于描述，以下仅示出了与发明相关的部分。

需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本申请。

实施例1

一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法，包括以下步骤：

（1）以耐盐（在含盐量0.5%的盐碱地正常生长）花生作为母本，高油酸（油酸含量75%以上）花生作为父本，进行杂交。

1）父母本花生均种于杂交圃，杂交前，母本从初见花1周不进行杂交，每日摘掉开的花。

2）初花期一周后开始杂交。每日傍晚去掉母本植株上第二天将要开花的花蕾的花药，花瓣上端轻轻揉在一起，作用是防止外来花粉授粉。

第二天早上用镊子取父本的花粉，给前一天去掉花药的柱头授粉。每日授粉时间因天气而定，一般阳光充足的天气，早上7点左右开始取花粉和授粉；多云或阴天天气需推迟取花粉和授粉的时间。根据取花粉时花药爆裂散出花粉而定。授粉后记好每日每株母本授粉的花数。

3）授粉10天后，授粉的花已从枝上长出果针，果针系上线绳，标记是杂交的果针。因为花生的胚囊是在枝上，而不在花上。授粉后，花粉管伸长，精细胞沿花粉管进入枝上的胚囊进行受精过程。因此，果针是从枝上长出。

4）根据授粉的花数和群体大小，确定授粉截至日期。授粉结束后，摘除花蕾，预防非杂交果与杂交果混淆。10天后可以不再摘花蕾，因为杂交果针已长出，系上线绳可以标记。

5）成熟后收获系线绳的荚果。

（2）杂交后得到的F1代种子，进行杂种性检测，筛选真杂种，淘汰假杂种。

因为杂交过程，经常出现母本去雄不完全，剩余的花药中的花粉会与同花朵的雌蕊授粉受精，导致自交，其结的种子为假杂种。因高油酸性状由2对隐性基因控制。利用分子辅助手段检测F1代种子，如果基因序列与高油母本相同则为假杂种。而真杂种的基因型为杂合，即母本的非高油酸基因和父本的高油酸基因同时存在。

检测方法，取F1代种子，在种胚的另一端的子叶上（花生种子绝大部分是子叶）取下一小部分，提取全DNA，然后进行油酸基因检测。决定油酸高低的基因序列是已知的并且公开。

（3）真杂种的F1种子播种大田，自交得F2代荚果种子。

（4）F2代种子，利用近红外仪无损伤检测脂肪酸含量，油酸含量75%以上的高油酸种子作为入选种子。

油酸含量75%以上，说明杂交种经自交，2对控制高油酸含量的基因已经隐性纯合，后代不会再分离，均为高油酸。

（5）将入选的高油酸的花生种子在1.0%的NaCl溶液中催芽，进行耐盐筛选。

1）催芽时，先将培养皿底部垫1张滤纸，种子放在滤纸上，加上1.0%的盐溶液，使溶液“漫过”种子，浸泡4小时，使种子吸足水分。

2）去掉盐溶液，在培养皿中加新的1.0%NaCl溶液少许，防止种子失水干缩，每天更换1.0%的NaCl溶液。

3）1.0%的NaCl溶液中催芽7天后，选取发芽的种子，发芽的标准是根长≥种子长，即为耐盐种子，用清水冲洗，淘汰未发芽不耐盐的种子。

（6）筛选1.0%的盐溶液中发芽势强的发芽种子（为耐盐高油酸），经清水洗净后种植杂交圃，作为复合杂交父本，高油花生（含油量55%以上）作为母本，进行复合杂交。

1）杂交前，母本从初见花1周不进行杂交，每日摘掉开的花。

2）初花期一周后开始杂交。每日傍晚去掉母本植株上第二天将要开花的花蕾的花药，花瓣上端轻轻揉在一起，作用是防止外来花粉授粉。

第二天早上用镊子取父本的花粉，给前一天去掉花药的柱头授粉。每日授粉时间因天气而定，一般阳光充足的天气，早上7点左右开始取花粉和授粉；多云或阴天天气需推迟取花粉和授粉的时间。根据取花粉时花药爆裂散出花粉而定。授粉后记好每日每株母本授粉的花数。

3）授粉10天后，授粉的花已从枝上长出果针，果针系上线绳，标记是杂交的果针。因为花生的胚囊是在枝上，而不在花上。授粉后，花粉管伸长，精细胞沿花粉管进入枝上的胚囊进行受精过程。因此，果针是从枝上长出。

4）根据授粉的花数和群体大小，确定授粉截至日期。授粉结束后，摘除花蕾，预防非杂交果与杂交果混淆。10天后可以不再摘花蕾，因为杂交果针已长出，系上线绳可以标记。

5）成熟后收获系线绳的荚果。

（7）复交F1代种子，进行杂种性检测，筛选真杂种，淘汰假杂种。

因为杂交过程，经常出现母本去雄不完全，剩余的花药中的花粉会与同花朵的雌蕊授粉受精，导致自交，其结的种子为假杂种。因高油酸性状由2对隐性基因控制。利用分子辅助手段检测复交F1代种子，如果基因序列与复交高油母本相同则为假杂种。而真杂种的基因型为杂合，即母本的非高油酸基因和父本的高油酸基因同时存在。

（8）复交真杂种的F1种子播种大田，自交得复交F2代荚果种子。

（9）复交F2代种子，利用近红外仪无损伤检测种子含油量和油酸含量，筛选含油量55%以上、油酸含量75%以上的高油高油酸种子。油酸含量75%以上，说明复合杂交种经自交，2对控制高油酸含量的基因已经纯合，后代不会再分离。

（10）筛选获得的高油高油酸复交F2代种子种植田间，生育期间田间观察，标记出苗早、开花集中、株形好（株形直立、分枝数10条左右、生育后期抗倒伏）的单株，收获期再选择荚果集中、单株结果多的单株，按单株收获荚果（复交F3代种子）。

（11）收获的复交F3代种子，在含盐量0.4%盐碱地上，按单株种成株行，进行耐盐筛选。

选择盐碱地上苗期生长健壮、开花集中、株形好（株形直立、分枝数10条左右），生育中后期生长正常、受盐胁迫影响、抗病、抗倒伏，收获期结果多，结果整齐一直的单株，按单株收获荚果（复交F4代种子）。

（12）选择的复交F4代种子，利用近红外仪按单株检测含油量，选择含油量55%以上的单株。

在复交F2代选择的含油量55%以上、油酸含量75%以上的种子，高油酸基因已经纯合，后代油酸含量不会再分离。而含油量后代会继续分离。因此，利用近红外以检测含油量，从中筛选含油量55%以上的高油高油酸单株。

（13）筛选的复交F4代高油高油酸单株种子，继续在含盐量0.4～0.5%盐碱地上，按单株种成株行，继续进行耐盐筛选。

选择盐碱地上苗期生长健壮、开花集中、株形好（株形直立、分枝数10条左右），生育中后期生长正常、受盐胁迫影响、抗病、抗倒伏，收获期结果多，结果整齐一直的单株，按单株收获荚果（复交F5代种子）。

（14）选择的复交F5代荚果种子，利用近红外仪按单株检测含油量，选择含油量55%以上的单株。

（15）筛选的复交F5代高油高油酸单株，继续在含盐量0.4～0.5%盐碱地上，按单株种成株行，同一株行内性状表现一直、高产、耐盐的单株混收形成株系。

（16）混收的株系种子，利用近红外仪检测含油量和油酸含量，含油量55%以上、油酸含量75%以上（因复交F2代检测75%以上，2对隐性基因已纯合，后代必定是75%以上）的株系成为高产耐盐高油高油酸株系。

以上（2）-（16）播种，均为单粒播种。起垄，垄距80cm，每个垄上种2行，垄上小行距25cm，穴距16cm，每穴播种1粒种子。播种后喷施杀灭单子叶植物的除草剂后覆地膜。对试验田的要求是1年以上未种过花生的土壤，耕地前使用基肥每亩2000公斤农家肥，或者商品有机肥150公斤，硫酸钾型复合肥（N、P、K各15%）30公斤，并适当使用辛硫磷等杀虫剂防治地下害虫。适期适宜土壤墒情播种，地下5cm地温5天以上保持18℃以上为适宜播种期。适宜墒情为耕作层土壤手握成团，手搓较松散（土壤含水量60%）。若无降雨，可提前灌水造墒（如东营盐碱地可利用黄河放水进行灌溉）。生育期间，注意防治虫害。棉铃虫的防治，可喷施毒死蜱、吡虫啉、杜邦等。生育中后期降雨多，注意排水防涝。适期收获，当大部分荚果网纹清晰、果壳硬化、果壳内壁变成青褐色的硬化斑块结构时便可收获。收获后，及时晾晒，避免着雨，含水量在10%以下方可入库保存。

（17）入选的耐盐高油酸株系进行产量鉴定，并进一步进行耐盐筛选鉴定。试验田选择含盐量0.4%的土壤。双粒播种。起垄，垄距80cm，每个垄上种2行，垄上小行距22cm，穴距16cm，每穴播种2粒种子。试验设置3次重复，每个重复播种1垄。收获后晒干，称重产量。选择产量高、耐盐性强的高油酸株系晋升为品系。

（18）入选的品系进行产量比较试验和耐盐性鉴定。试验田选择含盐量0.4%的土壤。双粒播种。起垄，垄距80cm，每个垄上种2行，垄上小行距22cm，穴距16cm，每穴播种2粒种子。试验设置3次重复，每个重复播种3垄。以当地品种区域试验对照品种或当地推广品种作为对照。成熟收获后晒干，称重产量。选择产量高、耐盐性强的高油酸品系，参加省品种区域试验，试验通过，申报国家非主要农作物品种登记。

（17）-（18）播种，均为双粒播种。起垄，垄距80cm，每个垄上种2行，垄上小行距22cm，穴距16cm，每穴播种2粒种子。播种后喷施杀灭单子叶植物的除草剂后覆地膜。对试验田的要求是1年以上未种过花生的土壤，耕地前使用基肥每亩2000公斤农家肥，或者商品有机肥150公斤，硫酸钾型复合肥（N、P、K各15%）30公斤，并适当使用辛硫磷等杀虫剂防治地下害虫。适期适宜土壤墒情播种，地下5cm地温5天以上保持18℃以上为适宜播种期。适宜墒情为耕作层土壤手握成团，手搓较松散（土壤含水量60%）。若无降雨，可提前灌水造墒（如东营盐碱地可利用黄河放水进行灌溉）。生育期间，注意防治虫害。棉铃虫的防治，可喷施毒死蜱、吡虫啉、杜邦等。生育中后期降雨多，注意排水防涝。适期收获，当大部分荚果网纹清晰、果壳硬化、果壳内壁变成青褐色的硬化斑块结构时便可收获。收获后，及时晾晒，避免着雨，含水量在10%以下方可入库保存。

实施例2

一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法，包括以下步骤：

（1）以耐盐（在含盐量0.5%的盐碱地正常生长）花生作为母本，高油酸（油酸含量75%以上）花生作为父本，进行杂交。

1）父母本花生均种于杂交圃，杂交前，母本从初见花1周不进行杂交，每日摘掉开的花。

2）初花期一周后开始杂交。每日傍晚去掉母本植株上第二天将要开花的花蕾的花药，花瓣上端轻轻揉在一起，作用是防止外来花粉授粉。

第二天早上用镊子取父本的花粉，给前一天去掉花药的柱头授粉。每日授粉时间因天气而定，一般阳光充足的天气，早上7点左右开始取花粉和授粉；多云或阴天天气需推迟取花粉和授粉的时间。根据取花粉时花药爆裂散出花粉而定。授粉后记好每日每株母本授粉的花数。

3）授粉10天后，授粉的花已从枝上长出果针，果针系上线绳，标记是杂交的果针。因为花生的胚囊是在枝上，而不在花上。授粉后，花粉管伸长，精细胞沿花粉管进入枝上的胚囊进行受精过程。因此，果针是从枝上长出。

4）根据授粉的花数和群体大小，确定授粉截至日期。授粉结束后，摘除花蕾，预防非杂交果与杂交果混淆。10天后可以不再摘花蕾，因为杂交果针已长出，系上线绳可以标记。

5）成熟后收获系线绳的荚果。

（2）杂交后得到的F1代种子，进行杂种性检测，筛选真杂种，淘汰假杂种。

因为杂交过程，经常出现母本去雄不完全，剩余的花药中的花粉会与同花朵的雌蕊授粉受精，导致自交，其结的种子为假杂种。因高油酸性状由2对隐性基因控制。利用分子辅助手段检测F1代种子，如果基因序列与高油母本相同则为假杂种。而真杂种的基因型为杂合，即母本的非高油酸基因和父本的高油酸基因同时存在。

检测方法，取F1代种子，在种胚的另一端的子叶上（花生种子绝大部分是子叶）取下一小部分，提取全DNA，然后进行油酸基因检测。决定油酸高低的基因序列是已知的并且公开。

（3）真杂种的F1种子播种大田，自交得F2代荚果种子。

（4）F2代种子，利用近红外仪无损伤检测脂肪酸含量，油酸含量75%以上的高油酸种子作为入选种子。

油酸含量75%以上，说明杂交种经自交，2对控制高油酸含量的基因已经隐性纯合，后代不会再分离，均为高油酸。

（5）将入选的高油酸的花生种子在1.0%的NaCl溶液中催芽，进行耐盐筛选。

1）催芽时，先将培养皿底部垫1张滤纸，种子放在滤纸上，加上1.0%的盐溶液，使溶液“漫过”种子，浸泡4小时，使种子吸足水分。

2）去掉盐溶液，在培养皿中加新的1.0%NaCl溶液少许，防止种子失水干缩，每天更换1.0%的NaCl溶液。

3）1.0%的NaCl溶液中催芽7天后，选取发芽的种子，发芽的标准是根长≥种子长，即为耐盐种子，用清水冲洗，淘汰未发芽不耐盐的种子。

（6）筛选1.0%的盐溶液中发芽势强的发芽种子（为耐盐高油酸），经清水洗净后种植杂交圃，作为复合杂交父本，高油花生（含油量55%以上）作为母本，进行复合杂交。

1）杂交前，母本从初见花1周不进行杂交，每日摘掉开的花。

2）初花期一周后开始杂交。每日傍晚去掉母本植株上第二天将要开花的花蕾的花药，花瓣上端轻轻揉在一起，作用是防止外来花粉授粉。

第二天早上用镊子取父本的花粉，给前一天去掉花药的柱头授粉。每日授粉时间因天气而定，一般阳光充足的天气，早上7点左右开始取花粉和授粉；多云或阴天天气需推迟取花粉和授粉的时间。根据取花粉时花药爆裂散出花粉而定。授粉后记好每日每株母本授粉的花数。

3）授粉10天后，授粉的花已从枝上长出果针，果针系上线绳，标记是杂交的果针。因为花生的胚囊是在枝上，而不在花上。授粉后，花粉管伸长，精细胞沿花粉管进入枝上的胚囊进行受精过程。因此，果针是从枝上长出。

4）根据授粉的花数和群体大小，确定授粉截至日期。授粉结束后，摘除花蕾，预防非杂交果与杂交果混淆。10天后可以不再摘花蕾，因为杂交果针已长出，系上线绳可以标记。

5）成熟后收获系线绳的荚果。

（7）复交F1代种子，进行杂种性检测，筛选真杂种，淘汰假杂种。

因为杂交过程，经常出现母本去雄不完全，剩余的花药中的花粉会与同花朵的雌蕊授粉受精，导致自交，其结的种子为假杂种。因高油酸性状由2对隐性基因控制。利用分子辅助手段检测复交F1代种子，如果基因序列与复交高油母本相同则为假杂种。而真杂种的基因型为杂合，即母本的非高油酸基因和父本的高油酸基因同时存在。

（8）复交真杂种的F1种子播种大田，自交得复交F2代荚果种子。

（9）复交F2代种子，利用近红外仪无损伤检测种子含油量和油酸含量，筛选含油量55%以上、油酸含量75%以上的高油高油酸种子。油酸含量75%以上，说明复合杂交种经自交，2对控制高油酸含量的基因已经纯合，后代不会再分离。

（10）筛选获得的高油高油酸复交F2代种子种植田间，生育期间田间观察，标记出苗早、开花集中、株形好（株形直立、分枝数10条左右、生育后期抗倒伏）的单株，收获期再选择荚果集中、单株结果多的单株，按单株收获荚果（复交F3代种子）。

（11）收获的复交F3代种子，在含盐量0.5%盐碱地上，按单株种成株行，进行耐盐筛选。

选择盐碱地上苗期生长健壮、开花集中、株形好（株形直立、分枝数10条左右），生育中后期生长正常、受盐胁迫影响、抗病、抗倒伏，收获期结果多，结果整齐一直的单株，按单株收获荚果（复交F4代种子）。

（12）选择的复交F4代种子，利用近红外仪按单株检测含油量，选择含油量55%以上的单株。

在复交F2代选择的含油量55%以上、油酸含量75%以上的种子，高油酸基因已经纯合，后代油酸含量不会再分离。而含油量后代会继续分离。因此，利用近红外以检测含油量，从中筛选含油量55%以上的高油高油酸单株。

（13）筛选的复交F4代高油高油酸单株种子，继续在含盐量0.4～0.5%盐碱地上，按单株种成株行，继续进行耐盐筛选。

选择盐碱地上苗期生长健壮、开花集中、株形好（株形直立、分枝数10条左右），生育中后期生长正常、受盐胁迫影响、抗病、抗倒伏，收获期结果多，结果整齐一直的单株，按单株收获荚果（复交F5代种子）。

（14）选择的复交F5代荚果种子，利用近红外仪按单株检测含油量，选择含油量55%以上的单株。

（15）筛选的复交F5代高油高油酸单株，继续在含盐量0.5%盐碱地上，按单株种成株行，同一株行内性状表现一直、高产、耐盐的单株混收形成株系。

（16）混收的株系种子，利用近红外仪检测含油量和油酸含量，含油量55%以上、油酸含量75%以上（因复交F2代检测75%以上，2对隐性基因已纯合，后代必定是75%以上）的株系成为高产耐盐高油高油酸株系。

以上（2）-（16）播种，均为单粒播种。起垄，垄距100cm，每个垄上种2行，垄上小行距35cm，穴距20cm，每穴播种1粒种子。播种后喷施杀灭单子叶植物的除草剂后覆地膜。对试验田的要求是1年以上未种过花生的土壤，耕地前使用基肥每亩4000公斤农家肥，或者商品有机肥250公斤，硫酸钾型复合肥（N、P、K各15%）50公斤，并适当使用辛硫磷等杀虫剂防治地下害虫。适期适宜土壤墒情播种，地下5cm地温5天以上保持18℃以上为适宜播种期。适宜墒情为耕作层土壤手握成团，手搓较松散（土壤含水量70%）。若无降雨，可提前灌水造墒（如东营盐碱地可利用黄河放水进行灌溉）。生育期间，注意防治虫害。棉铃虫的防治，可喷施毒死蜱、吡虫啉、杜邦等。生育中后期降雨多，注意排水防涝。适期收获，当大部分荚果网纹清晰、果壳硬化、果壳内壁变成青褐色的硬化斑块结构时便可收获。收获后，及时晾晒，避免着雨，含水量在10%以下方可入库保存。

（17）入选的耐盐高油酸株系进行产量鉴定，并进一步进行耐盐筛选鉴定。试验田选择含盐量0.5%的土壤。双粒播种。起垄，垄距90cm，每个垄上种2行，垄上小行距30cm，穴距20cm，每穴播种2粒种子。试验设置3次重复，每个重复播种1垄。收获后晒干，称重产量。选择产量高、耐盐性强的高油酸株系晋升为品系。

（18）入选的品系进行产量比较试验和耐盐性鉴定。试验田选择含盐量0.5%的土壤。双粒播种。起垄，垄距90cm，每个垄上种2行，垄上小行距30cm，穴距20cm，每穴播种2粒种子。试验设置3次重复，每个重复播种3垄。以当地品种区域试验对照品种或当地推广品种作为对照。成熟收获后晒干，称重产量。选择产量高、耐盐性强的高油酸品系，参加省品种区域试验，试验通过，申报国家非主要农作物品种登记。

（17）-（18）播种，均为双粒播种。起垄，垄距90cm，每个垄上种2行，垄上小行距30cm，穴距20cm，每穴播种2粒种子。播种后喷施杀灭单子叶植物的除草剂后覆地膜。对试验田的要求是1年以上未种过花生的土壤，耕地前使用基肥每亩4000公斤农家肥，或者商品有机肥250公斤，硫酸钾型复合肥（N、P、K各15%）50公斤，并适当使用辛硫磷等杀虫剂防治地下害虫。适期适宜土壤墒情播种，地下5cm地温5天以上保持18℃以上为适宜播种期。适宜墒情为耕作层土壤手握成团，手搓较松散（土壤含水量70%）。若无降雨，可提前灌水造墒（如东营盐碱地可利用黄河放水进行灌溉）。生育期间，注意防治虫害。棉铃虫的防治，可喷施毒死蜱、吡虫啉、杜邦等。生育中后期降雨多，注意排水防涝。适期收获，当大部分荚果网纹清晰、果壳硬化、果壳内壁变成青褐色的硬化斑块结构时便可收获。收获后，及时晾晒，避免着雨，含水量在10%以下方可入库保存。

实施例3

一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法，包括以下步骤：

（1）以耐盐（在含盐量0.5%的盐碱地正常生长）花生作为母本，高油酸（油酸含量75%以上）花生作为父本，进行杂交。

1）父母本花生均种于杂交圃，杂交前，母本从初见花1周不进行杂交，每日摘掉开的花。

2）初花期一周后开始杂交。每日傍晚去掉母本植株上第二天将要开花的花蕾的花药，花瓣上端轻轻揉在一起，作用是防止外来花粉授粉。

第二天早上用镊子取父本的花粉，给前一天去掉花药的柱头授粉。每日授粉时间因天气而定，一般阳光充足的天气，早上7点左右开始取花粉和授粉；多云或阴天天气需推迟取花粉和授粉的时间。根据取花粉时花药爆裂散出花粉而定。授粉后记好每日每株母本授粉的花数。

3）授粉10天后，授粉的花已从枝上长出果针，果针系上线绳，标记是杂交的果针。因为花生的胚囊是在枝上，而不在花上。授粉后，花粉管伸长，精细胞沿花粉管进入枝上的胚囊进行受精过程。因此，果针是从枝上长出。

4）根据授粉的花数和群体大小，确定授粉截至日期。授粉结束后，摘除花蕾，预防非杂交果与杂交果混淆。10天后可以不再摘花蕾，因为杂交果针已长出，系上线绳可以标记。

5）成熟后收获系线绳的荚果。

（2）杂交后得到的F1代种子，进行杂种性检测，筛选真杂种，淘汰假杂种。

因为杂交过程，经常出现母本去雄不完全，剩余的花药中的花粉会与同花朵的雌蕊授粉受精，导致自交，其结的种子为假杂种。因高油酸性状由2对隐性基因控制。利用分子辅助手段检测F1代种子，如果基因序列与高油母本相同则为假杂种。而真杂种的基因型为杂合，即母本的非高油酸基因和父本的高油酸基因同时存在。

检测方法，取F1代种子，在种胚的另一端的子叶上（花生种子绝大部分是子叶）取下一小部分，提取全DNA，然后进行油酸基因检测。决定油酸高低的基因序列是已知的并且公开。

（3）真杂种的F1种子播种大田，自交得F2代荚果种子。

（4）F2代种子，利用近红外仪无损伤检测脂肪酸含量，油酸含量75%以上的高油酸种子作为入选种子。

油酸含量75%以上，说明杂交种经自交，2对控制高油酸含量的基因已经隐性纯合，后代不会再分离，均为高油酸。

（5）将入选的高油酸的花生种子在1.0%的NaCl溶液中催芽，进行耐盐筛选。

1）催芽时，先将培养皿底部垫1张滤纸，种子放在滤纸上，加上1.0%的盐溶液，使溶液“漫过”种子，浸泡4小时，使种子吸足水分。

2）去掉盐溶液，在培养皿中加新的1.0%NaCl溶液少许，防止种子失水干缩，每天更换1.0%的NaCl溶液。

3）1.0%的NaCl溶液中催芽7天后，选取发芽的种子，发芽的标准是根长≥种子长，即为耐盐种子，用清水冲洗，淘汰未发芽不耐盐的种子。

（6）筛选1.0%的盐溶液中发芽势强的发芽种子（为耐盐高油酸），经清水洗净后种植杂交圃，作为复合杂交父本，高油花生（含油量55%以上）作为母本，进行复合杂交。

1）杂交前，母本从初见花1周不进行杂交，每日摘掉开的花。

2）初花期一周后开始杂交。每日傍晚去掉母本植株上第二天将要开花的花蕾的花药，花瓣上端轻轻揉在一起，作用是防止外来花粉授粉。

第二天早上用镊子取父本的花粉，给前一天去掉花药的柱头授粉。每日授粉时间因天气而定，一般阳光充足的天气，早上7点左右开始取花粉和授粉；多云或阴天天气需推迟取花粉和授粉的时间。根据取花粉时花药爆裂散出花粉而定。授粉后记好每日每株母本授粉的花数。

3）授粉10天后，授粉的花已从枝上长出果针，果针系上线绳，标记是杂交的果针。因为花生的胚囊是在枝上，而不在花上。授粉后，花粉管伸长，精细胞沿花粉管进入枝上的胚囊进行受精过程。因此，果针是从枝上长出。

4）根据授粉的花数和群体大小，确定授粉截至日期。授粉结束后，摘除花蕾，预防非杂交果与杂交果混淆。10天后可以不再摘花蕾，因为杂交果针已长出，系上线绳可以标记。

5）成熟后收获系线绳的荚果。

（7）复交F1代种子，进行杂种性检测，筛选真杂种，淘汰假杂种。

因为杂交过程，经常出现母本去雄不完全，剩余的花药中的花粉会与同花朵的雌蕊授粉受精，导致自交，其结的种子为假杂种。因高油酸性状由2对隐性基因控制。利用分子辅助手段检测复交F1代种子，如果基因序列与复交高油母本相同则为假杂种。而真杂种的基因型为杂合，即母本的非高油酸基因和父本的高油酸基因同时存在。

（8）复交真杂种的F1种子播种大田，自交得复交F2代荚果种子。

（9）复交F2代种子，利用近红外仪无损伤检测种子含油量和油酸含量，筛选含油量55%以上、油酸含量75%以上的高油高油酸种子。油酸含量75%以上，说明复合杂交种经自交，2对控制高油酸含量的基因已经纯合，后代不会再分离。

（10）筛选获得的高油高油酸复交F2代种子种植田间，生育期间田间观察，标记出苗早、开花集中、株形好（株形直立、分枝数10条左右、生育后期抗倒伏）的单株，收获期再选择荚果集中、单株结果多的单株，按单株收获荚果（复交F3代种子）。

（11）收获的复交F3代种子，在含盐量0.45%盐碱地上，按单株种成株行，进行耐盐筛选。

选择盐碱地上苗期生长健壮、开花集中、株形好（株形直立、分枝数10条左右），生育中后期生长正常、受盐胁迫影响、抗病、抗倒伏，收获期结果多，结果整齐一直的单株，按单株收获荚果（复交F4代种子）。

（12）选择的复交F4代种子，利用近红外仪按单株检测含油量，选择含油量55%以上的单株。

在复交F2代选择的含油量55%以上、油酸含量75%以上的种子，高油酸基因已经纯合，后代油酸含量不会再分离。而含油量后代会继续分离。因此，利用近红外以检测含油量，从中筛选含油量55%以上的高油高油酸单株。

（13）筛选的复交F4代高油高油酸单株种子，继续在含盐量0.4～0.5%盐碱地上，按单株种成株行，继续进行耐盐筛选。

选择盐碱地上苗期生长健壮、开花集中、株形好（株形直立、分枝数10条左右），生育中后期生长正常、受盐胁迫影响、抗病、抗倒伏，收获期结果多，结果整齐一直的单株，按单株收获荚果（复交F5代种子）。

（14）选择的复交F5代荚果种子，利用近红外仪按单株检测含油量，选择含油量55%以上的单株。

（15）筛选的复交F5代高油高油酸单株，继续在含盐量0.4～0.5%盐碱地上，按单株种成株行，同一株行内性状表现一直、高产、耐盐的单株混收形成株系。

（16）混收的株系种子，利用近红外仪检测含油量和油酸含量，含油量55%以上、油酸含量75%以上（因复交F2代检测75%以上，2对隐性基因已纯合，后代必定是75%以上）的株系成为高产耐盐高油高油酸株系。

以上（2）-（16）播种，均为单粒播种。起垄，垄距90cm，每个垄上种2行，垄上小行距30cm，穴距18cm，每穴播种1粒种子。播种后喷施杀灭单子叶植物的除草剂后覆地膜。对试验田的要求是1年以上未种过花生的土壤，耕地前使用基肥每亩3000公斤农家肥，或者商品有机肥200公斤，硫酸钾型复合肥（N、P、K各15%）40公斤，并适当使用辛硫磷等杀虫剂防治地下害虫。适期适宜土壤墒情播种，地下5cm地温5天以上保持18℃以上为适宜播种期。适宜墒情为耕作层土壤手握成团，手搓较松散（土壤含水量65%）。若无降雨，可提前灌水造墒（如东营盐碱地可利用黄河放水进行灌溉）。生育期间，注意防治虫害。棉铃虫的防治，可喷施毒死蜱、吡虫啉、杜邦等。生育中后期降雨多，注意排水防涝。适期收获，当大部分荚果网纹清晰、果壳硬化、果壳内壁变成青褐色的硬化斑块结构时便可收获。收获后，及时晾晒，避免着雨，含水量在10%以下方可入库保存。

（17）入选的耐盐高油酸株系进行产量鉴定，并进一步进行耐盐筛选鉴定。试验田选择含盐量0.45%的土壤。双粒播种。起垄，垄距85cm，每个垄上种2行，垄上小行距28cm，穴距18cm，每穴播种2粒种子。试验设置3次重复，每个重复播种1垄。收获后晒干，称重产量。选择产量高、耐盐性强的高油酸株系晋升为品系。

（18）入选的品系进行产量比较试验和耐盐性鉴定。试验田选择含盐量0.45%的土壤。双粒播种。起垄，垄距85cm，每个垄上种2行，垄上小行距28cm，穴距18cm，每穴播种2粒种子。试验设置3次重复，每个重复播种3垄。以当地品种区域试验对照品种或当地推广品种作为对照。成熟收获后晒干，称重产量。选择产量高、耐盐性强的高油酸品系，参加省品种区域试验，试验通过，申报国家非主要农作物品种登记。

（17）-（18）播种，均为双粒播种。起垄，垄距85cm，每个垄上种2行，垄上小行距28cm，穴距18cm，每穴播种2粒种子。播种后喷施杀灭单子叶植物的除草剂后覆地膜。对试验田的要求是1年以上未种过花生的土壤，耕地前使用基肥每亩3000公斤农家肥，或者商品有机肥200公斤，硫酸钾型复合肥（N、P、K各15%）40公斤，并适当使用辛硫磷等杀虫剂防治地下害虫。适期适宜土壤墒情播种，地下5cm地温5天以上保持18℃以上为适宜播种期。适宜墒情为耕作层土壤手握成团，手搓较松散（土壤含水量65%）。若无降雨，可提前灌水造墒（如东营盐碱地可利用黄河放水进行灌溉）。生育期间，注意防治虫害。棉铃虫的防治，可喷施毒死蜱、吡虫啉、杜邦等。生育中后期降雨多，注意排水防涝。适期收获，当大部分荚果网纹清晰、果壳硬化、果壳内壁变成青褐色的硬化斑块结构时便可收获。收获后，及时晾晒，避免着雨，含水量在10%以下方可入库保存。

以上描述仅为本申请的较佳实施例以及对所运用技术原理的说明。本领域技术人员应当理解，本申请中所涉及的发明范围，并不限于上述技术特征的特定组合而成的技术方案，同时也应涵盖在不脱离所述发明构思的情况下，由上述技术特征或其等同特征进行任意组合而形成的其它技术方案。例如上述特征与本申请中公开的(但不限于)具有类似功能的技术特征进行互相替换而形成的技术方案。

除说明书所述的技术特征外，其余技术特征为本领域技术人员的已知技术，为突出本发明的创新特点，其余技术特征在此不再赘述。

Claims (10)

1.一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）以耐盐花生作为母本，高油酸花生作为父本，进行杂交；

（2）杂交后得到的F1代种子，进行杂种性检测，筛选真杂种，淘汰假杂种；

（3）真杂种的F1种子播种大田，自交得F2代荚果种子；

（4）F2代种子，利用近红外仪无损伤检测脂肪酸含量，油酸含量75%以上的高油酸种子作为入选种子；

（5）将入选的高油酸的花生种子在1.0%的NaCl溶液中催芽，进行耐盐筛选；

（6）筛选1.0%的盐溶液中发芽势强的发芽种子为耐盐高油酸，经清水洗净后种植杂交圃，作为复合杂交父本，高油花生含油量55%以上作为母本，进行复合杂交；

（7）复交F1代种子，进行杂种性检测，筛选真杂种，淘汰假杂种；

（8）复交真杂种的F1种子播种大田，自交得复交F2代荚果种子；

（9）复交F2代种子，利用近红外仪无损伤检测种子含油量和油酸含量，筛选含油量55%以上、油酸含量75%以上的高油高油酸种子；

（10）筛选获得的高油高油酸复交F2代种子种植田间，生育期间田间观察，标记出苗早、开花集中、株形好的单株，收获期再选择荚果集中、单株结果多的单株，按单株收获荚果复交F3代种子；

（11）收获的复交F3代种子，在含盐量0.4～0.5%盐碱地上，按单株种成株行，进行耐盐筛选复交F4代种子；

（12）选择的复交F4代种子，利用近红外仪按单株检测含油量，选择含油量55%以上的单株；

（13）筛选的复交F4代高油高油酸单株种子，继续在含盐量0.4～0.5%盐碱地上，按单株种成株行，继续进行耐盐筛选复交F5代种子；

（14）选择的复交F5代荚果种子，利用近红外仪按单株检测含油量，选择含油量55%以上的单株；

（15）筛选的复交F5代高油高油酸单株，继续在含盐量0.4～0.5%盐碱地上，按单株种成株行，同一株行内性状表现一直、高产、耐盐的单株混收形成株系；

（16）混收的株系种子，利用近红外仪检测含油量和油酸含量，含油量55%以上、油酸含量75%以上的株系成为高产耐盐高油高油酸株系；

（17）入选的耐盐高油酸株系进行产量鉴定，并进一步进行耐盐筛选鉴定；试验田选择含盐量0.4～0.5%的土壤；试验设置3次重复，每个重复播种1垄；收获后晒干，称重产量；选择产量高、耐盐性强的高油酸株系晋升为品系；

（18）入选的品系进行产量比较试验和耐盐性鉴定；试验田选择含盐量0.4～0.5%的土壤；试验设置3次重复，每个重复播种3垄；以当地品种区域试验对照品种或当地推广品种作为对照；成熟收获后晒干，称重产量；选择产量高、耐盐性强的高油酸品系，参加省品种区域试验，试验通过，申报国家非主要农作物品种登记。

2.根据权利要求1所述的一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法，其特征在于：步骤（1）中，耐盐花生选择在含盐量0.5%的盐碱地正常生长的作为母本，高油酸花生选择油酸含量75%以上的花生作为父本。

3.根据权利要求1所述的一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法，其特征在于：步骤（2）中，杂种性检测方法：取F1代种子，在种胚的另一端的子叶上取下一小部分，提取全DNA，然后进行油酸基因检测；决定油酸高低的基因序列是已知的并且公开。

4.根据权利要求1所述的一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法，其特征在于：步骤（5）中，

1）催芽时，先将培养皿底部垫1张滤纸，种子放在滤纸上，加上1.0%的盐溶液，使溶液“漫过”种子，浸泡4小时，使种子吸足水分；

2）去掉盐溶液，在培养皿中加新的1.0%NaCl溶液少许，防止种子失水干缩，每天更换1.0%的NaCl溶液；

3）1.0%的NaCl溶液中催芽7天后，选取发芽的种子，发芽的标准是根长≥种子长，即为耐盐种子，用清水冲洗，淘汰未发芽不耐盐的种子。

5.根据权利要求1所述的一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法，其特征在于：步骤（11）和（13）中，选择盐碱地上苗期生长健壮、开花集中、株形好，生育中后期生长正常、受盐胁迫影响、抗病、抗倒伏，收获期结果多，结果整齐一直的单株，按单株收获荚果复交F4代和F5代种子。

6.根据权利要求1所述的一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法，其特征在于：步骤（12）中，在复交F2代选择的含油量55%以上、油酸含量75%以上的种子，高油酸基因已经纯合，后代油酸含量不会再分离；而含油量后代会继续分离；因此，利用近红外以检测含油量，从中筛选含油量55%以上的高油高油酸单株。

7.根据权利要求1所述的一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法，其特征在于：步骤（2）-（16）中播种，均为单粒播种；所述单粒播种中，起垄，垄距80～100cm，每个垄上种2行，垄上小行距25～35cm，穴距16-20cm，每穴播种1粒种子。

8.根据权利要求1所述的一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法，其特征在于：步骤（17）-（18）中播种，均为双粒播种；所述双粒播种中，起垄，垄距80～90cm，每个垄上种2行，垄上小行距22～30cm，穴距16-20cm，每穴播种2粒种子。

9.根据权利要求1所述的一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法，其特征在于：步骤（2）-（18）中，播种后喷施杀灭单子叶植物的除草剂后覆地膜；播种对试验田的要求是1年以上未种过花生的土壤，耕地前使用基肥每亩2000～4000公斤农家肥，或者商品有机肥150～250公斤，含N、P、K各15%的硫酸钾型复合肥30～50公斤，并使用辛硫磷杀虫剂防治地下害虫。

10.根据权利要求9所述的一种耐盐高油高油酸花生品种的培育方法，其特征在于：选择适期适宜土壤墒情播种，地下5cm地温5天以上保持18℃以上为适宜播种期；适宜墒情为耕作层土壤手握成团，手搓松散，土壤含水量60～70%。