CN113398253B - β2微球蛋白聚集抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种纳米复合物，该复合物能够抑制β2微球蛋白聚集，以单分子白蛋白为核心，表面包裹有聚合物外壳，所述聚合物外壳由在其N端赖氨酸的α氨基上连接有‑C(O)CH＝CH2的十三肽KDWSFYILAHTEF、丙烯酰胺(AAm)、N，N’‑亚甲基双丙烯酰胺(BIS)聚合而成，白蛋白通过其游离氨基上连接的‑C(O)CH＝CH2与所述聚合物外壳中的BIS反应而连接。

Description

β2微球蛋白聚集抑制剂
技术领域
本发明涉及生物化学领域，特别是涉及β2微球蛋白聚集抑制剂及其制备方法与应用。
背景技术
β2微球蛋白(β2-microglobulin，β2M)是人白细胞抗原(human leukocyteantigen，HLA)I类抗原的轻链部分，其对于HLA I类抗原的结构稳定性和表达量的稳定性具有重要的意义，它帮助HLA I类抗原正确组装并向T细胞呈递抗原，随后与HLA I类抗原的重链部分解离进入血液循环，极易通过肾小球滤过膜，最后几乎全部被近曲小管细胞重吸收和降解。HLA I类抗原分布于所有有核细胞表面，健康人β2M的合成速度和细胞膜释放量非常恒定，故体内β2M保持稳定。
血液透析是中晚期肾脏病人维持生命的重要手段，但长期的血液透析由于无法清除β2M导致其在人体内不断积累，浓度达到平时的60倍，最终过多的β2M变为淀粉样纤维沉积在病人的骨骼关节处，导致腕管综合征(carpal tunnel syndrome，CTS)，进而发展成全身性淀粉样变，所以称为透析相关淀粉样变(dialysis related amyloidosis，DRA)。组织学证据显示β2M沉积导致的淀粉样变远多于依靠临床证据的可疑病例，老年患者比年轻患者更早出现，血液透析及腹膜透析中均普遍存在，甚至可以出现在血液透析前晚期慢性肾脏病患者中。
最初，有关于CTS的治疗主要是通过手术切除淀粉样斑块来缓解症状，但手术治疗无法根治且复发率很高，二次手术有很大困难。由于体内β2M水平和肾小球的滤过率相关，所以临床上也采用透析膜来进行对于β2M的滤过。长期使用低通量透析膜以及商用透析液的患者由于不能完全去除β2M，导致DRA症状严重。随着高通量透析膜和高通量超纯透析液逐渐投入使用，提高了血液透析效率，降低并发症发生率，但只能达到延缓DRA发生的效果。
在药物治疗方面，多西环素治疗可以帮助减轻患者关节疼痛，与儿茶素等对于二聚体层面的聚集具有一定的抑制作用，但对于非Cu(II)导致的聚集方面没有显著效果。透析过程中的免疫吸附的开发有免疫吸附剂、血液灌流柱和免疫吸附壁等也可清除β2M，不足之处是非特异性吸附会导致重要蛋白的丢失，而特异性吸附代表性的有以筛选出的骆驼单域抗体(VHHs)为配体，化学合成法连接到树脂上制备体外免疫吸附剂，但只能在透析过程中使用，无法在体内较为前期的阶段进行吸附拦截。
总之，现有技术仍然缺乏更为前期、安全、全面的抑制和清除β2M聚集的方法，从而缺乏相应更为优选的抑制剂药物。
发明内容
本发明提供了一种纳米复合物，其能够抑制β2M聚集。本发明纳米复合物的合成方法简单，成本较低，且效果较好。
根据本发明的一个方面，本发明提供一种β2微球蛋白聚集抑制剂，其以单分子白蛋白为核心，表面包裹有聚合物外壳，所述聚合物外壳由在其N端赖氨酸的α氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的十三肽KDWSFYILAHTEF、丙烯酰胺(AAm)、N，N’-亚甲基双丙烯酰胺(BIS)聚合而成，白蛋白通过其游离氨基上连接的-C(O)CH＝CH2与所述聚合物外壳中的BIS反应而连接。
根据本发明，白蛋白与十三肽的摩尔比为1∶1-10。
根据本发明，白蛋白优选牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)。
根据本发明，β2微球蛋白聚集抑制剂的粒径为10-30nm，优选15-25nm。
根据本发明的另一个方面，本发明提供一种制备β2微球蛋白聚集抑制剂的方法，该方法包括如下步骤：
(1)将白蛋白与N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺(NAS)反应使其游离氨基上连接-C(O)CH＝CH2；
(2)将十三肽KDWSFYILAHTEF与NAS反应使其N端赖氨酸的α氨基上连接-C(O)CH＝CH2；
(3)使游离氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的白蛋白、N端赖氨酸的α氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的十三肽KDWSFYILAHTEF、丙烯酰胺(AAm)和N，N’-亚甲基双丙烯酰胺(BIS)发生聚合反应，得β2M聚集抑制剂。
优选地，在步骤(1)中，将NAS溶于有机溶剂优选DMSO中，将白蛋白溶于缓冲液优选PBS或PB中，将NAS溶液和白蛋白溶液混合、反应、透析得游离氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的白蛋白。
优选地，NAS与白蛋白的摩尔比为10-30∶1，更优选约20∶1；优选地，反应在约4℃下进行；优选地，反应时间为1-10h，更优选约2h；优选地，用缓冲液优选PBS或PB进行透析，本领域技术人员可以理解，透析的目的是为了纯化游离氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的白蛋白。
本领域技术人员可以理解，白蛋白中除了N末端带有游离的氨基以外，其中含有的赖氨酸(Lys，K)、谷氨酰胺(Gln，Q)、天冬酰胺(Asn，N)和精氨酸(Arg，R)的侧链R基上也带有游离氨基，由于这四种氨基酸属于亲水性氨基酸，在白蛋白进行三级结构折叠时更易于暴露在其表面(不排除个别被包裹在内的可能)，这些游离氨基都可与NAS反应连接-C(O)CH＝CH2。
优选地，在步骤(2)中，将NAS溶于有机溶剂优选DMSO中，将十三肽KDWSFYILAHTEF溶于有机溶剂优选DMSO中，将三乙胺溶于有机溶剂优选DMSO中，将NAS溶液、十三肽溶液和三乙胺溶液混合、反应、透析得N端赖氨酸的α氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的十三肽KDWSFYILAHTEF。
优选地，NAS、十三肽与三乙胺的摩尔比为2-6∶1∶3-5，更优选约4∶1∶4；优选地，反应在室温下进行；优选地，反应时间为6-24h，更优选约12h；优选地，用缓冲液优选PBS或PB进行透析，本领域技术人员可以理解，透析的目的是为了纯化N端赖氨酸的α氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的十三肽KDWSFYILAHTEF。
优选地，在步骤(3)中，将游离氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的白蛋白、N端赖氨酸的α氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的十三肽KDWSFYILAHTEF、丙烯酰胺(AAm)、N，N‘亚甲基双丙烯酰胺(BIS)(交联剂)混合，加入四甲基乙二胺(TEMED)和过硫酸铵(APS)，反应、透析得β2M聚集抑制剂。
优选地，游离氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的白蛋白、N端赖氨酸的α氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的十三肽KDWSFYILAHTEF、AAm、BIS、TEMED、APS的摩尔比为1∶5-50∶2000-8000∶200-1000∶500-1000∶200-500，更优选约1∶10∶5000∶600∶700∶350；优选地，反应在约4℃下进行；优选地，反应时间为1-10h，更优选约2.5h；优选地，用缓冲液优选PBS或PB进行透析，本领域技术人员可以理解，透析的目的是为了纯化β2M聚集抑制剂。
本领域技术人员可以理解，TEMED和APS为聚合反应的引发剂，N端赖氨酸的α氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的十三肽KDWSFYILAHTEF、AAm、BIS相互通过碳碳双键连接形成一个聚合物外壳包裹在游离氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的白蛋白外面，白蛋白通过其游离氨基上连接的-C(O)CH＝CH2与所述聚合物外壳中的BIS反应而连接。
根据本发明的另一个方面，本发明提供一种β2微球蛋白聚集抑制剂，其通过上述方法制备得到。
根据本发明的另一个方面，本发明提供一种多肽，其序列如下：KDWSFYILAHTEF。
本领域技术人员可以理解，本发明的多肽可以通过本领域的常规方法，例如固相合成等方法制备得到。
本发明的β2微球蛋白聚集抑制剂能够吸附β2微球蛋白，从而可以抑制β2微球蛋白聚集。
根据本发明的另一个方面，本发明提供一种体外吸附β2微球蛋白的方法，包括将β2微球蛋白聚集抑制剂与β2微球蛋白接触的步骤；优选地，将β2微球蛋白聚集抑制剂加入到透析液中，从而在透析过程中对β2微球蛋白进行吸附。优选地，所述透析过程为血液透析过程。本领域技术人员可以理解，通过常规实验可以确定透析液中β2微球蛋白聚集抑制剂的合适量，例如每升至少1mg，优选至少10mg，更优选约60mg。
根据本发明的另一个方面，本发明提供β2M聚集抑制剂在体外吸附β2微球蛋白的用途，例如在透析过程优选在血液透析过程中吸附β2微球蛋白。
根据本发明的另一个方面，本发明提供一种药物组合物，含有β2M聚集抑制剂和药学上可接受的载体。
根据本发明的另一个方面，本发明提供β2M聚集抑制剂在制备用于抑制β2M聚集的药物中的应用。
根据本发明的另一个方面，本发明提供β2M聚集抑制剂在制备用于预防和/或治疗透析相关性淀粉样变性的药物中的应用。
根据本发明的另一个方面，本发明提供β2M聚集抑制剂在制备用于预防和/或治疗腕管综合征、淀粉样关节炎等的药物中的应用。
本领域技术人员可以理解，β2M聚集抑制剂可以与药学上可接受的载体制成合适的制剂形式给药，例如可通过静脉注射等方式给药。本领域技术人员可以理解，通过常规实验可以确定β2M聚集抑制剂的治疗有效量，例如0.0001-10mg/kg/天，优选0.1-0.4mg/kg/天。
附图说明
图1.N端赖氨酸的α氨基上连接或未连接-C(O)CH＝CH2的十三肽KDWSFYILAHTEF的MALDI-TOF-MS谱图
图2.DLS测量β2M聚集抑制剂的粒径分布图
图3.β2M聚集抑制剂的TEM扫描图
图4.β2M聚集抑制剂的紫外可见光谱图
图5.β2M聚集抑制剂吸附β2M检测曲线
图6荧光共定位验证β2M聚集抑制剂与β2M相互结合，或β2M被β2M聚集抑制剂吸附
图7.ThT荧光动力学检测β2M聚集抑制剂抑制β2M聚集
图8.β2M聚集抑制剂的细胞毒性检测结果
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外，应理解，在阅读了本发明所记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本发明所限定的范围。
实施例1.β2M聚集抑制剂的制备
(1)将BSA与NAS反应使其游离氨基上连接-C(O)CH＝CH2：
将NAS溶于DMSO中，浓度为100mg/mL；将BSA溶于PBS缓冲液中，浓度为5mg/mL；将NAS溶液和BSA溶液混合，NAS与BSA的摩尔比为20∶1，在4℃下反应约2h；将反应后的溶液用PBS缓冲液透析两次，然后用PBS缓冲液将游离氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的BSA的浓度调节至1mg/mL；
(2)将十三肽KDWSFYILAHTEF与NAS反应使其N端赖氨酸的α氨基上连接-C(O)CH＝CH2：
将NAS溶于DMSO中，浓度为19.5mg/mL；将十三肽KDWSFYILAHTEF溶于DMSO中，浓度为5.4mg/mL；将三乙胺溶于DMSO中，浓度为1mg/mL；将NAS溶液、十三肽溶液、三乙胺溶液混合，NAS、十三肽和三乙胺的摩尔比为4∶1∶4，在室温下反应约12h；将反应后的溶液用PBS缓冲液透析两次，然后用PBS缓冲液将N端赖氨酸的α氨基上连接-C(O)CH＝CH2的十三肽KDWSFYILAHTEF的浓度调节至5.4mg/mL；
通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测所得产物，谱图如附图1所示，上面为未连接-C(O)CH＝CH2的十三肽质谱，下面为连接有-C(O)CH＝CH2的十三肽质谱，下面比上面的分子量多了53.873，表明十三肽KDWSFYILAHTEF的N端赖氨酸的α氨基上连接有-C(O)CH＝CH2。
(3)聚合反应：
将游离氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的BSA溶液(浓度为1mg/mL)、N端赖氨酸的α氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的十三肽KDWSFYILAHTEF溶液(浓度为5.4mg/mL)、丙烯酰胺(AAm)溶液(溶剂是PBS，浓度为100mg/mL)、N，N‘亚甲基双丙烯酰胺(BIS)溶液(交联剂，溶剂是DMSO，浓度是100mg/mL)混合，再加入四甲基乙二胺(TEMED)和过硫酸铵(APS)溶液(溶剂是超纯水，浓度为100mg/mL)，在4℃颠倒反应约2.5h，游离氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的BSA、N端赖氨酸的α氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的十三肽KDWSFYILAHTEF、AAm、BIS、TEMED、APS的摩尔比为1∶10∶5000∶600∶700∶350；将反应后的溶液用PBS缓冲液透析两次，得β2M聚集抑制剂。
通过DLS测量β2M聚集抑制剂的粒径分布，结果见附图2。进一步通过TEM扫描观测β2M聚集抑制剂的形态和大小，结果见附图3，β2M聚集抑制剂的粒径约15-25nm。
实施例2.荧光标记的β2M聚集抑制剂的制备
首先，为了成像的目的，用罗丹明B类似物TAMRA标记BSA，其可以发出红色荧光。步骤如下：
将BSA溶于PBS缓冲液中，浓度为5mg/mL；将TAMRA溶于DMSO中，浓度为10mg/mL；将BSA溶液和TAMRA溶液混合，TAMRA与BSA的摩尔比为2∶1，在4℃下避光反应过夜；将反应后的溶液用PBS缓冲液透析以纯化荧光标记的BSA。
然后，使用上述荧光标记的BSA，按照实施例1步骤(1)的方法，将其与NAS反应使其游离氨基上连接-C(O)CH＝CH2，并按照实施例1步骤(3)的方法制备荧光标记的β2M聚集抑制剂。
另外，使用上述游离氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的荧光标记的BSA溶液(浓度为1mg/mL)、丙烯酰胺(AAm)溶液(溶剂是PBS，浓度为100mg/mL)、N，N‘亚甲基双丙烯酰胺(BIS)溶液(交联剂，溶剂是DMSO，浓度是100mg/mL)混合，再加入四甲基乙二胺(TEMED)和过硫酸铵(APS)溶液(溶剂是超纯水，浓度为100mg/mL)，在4℃颠倒反应约2.5h，游离氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的BSA、AAm、BIS、TEMED、APS的摩尔比为1∶5000∶600∶700∶350；将反应后的溶液用PBS缓冲液透析两次，得荧光标记的不含十三肽的纳米复合物。
取上述荧光标记的β2M聚集抑制剂和荧光标记的不含十三肽的纳米复合物，于紫外可见分光光度计下测定其在568nm下的吸收度，调整溶液的浓度，使两者吸收度一致，确定二溶液中具有相同摩尔浓度的BSA，通过比较二溶液在280nm处的吸收度的差异，不仅能够确定十三肽KDWSFYILAHTEF位于β2M聚集抑制剂的表面，而且可以确定BSA和十三肽的摩尔比为1∶3，结果见附图4。
实施例3.β2M聚集抑制剂吸附β2M
(1)用PBS缓冲液配制β2M的溶液，浓度为0.85mg/mL；用PBS缓冲液配制实施例1制备的β2M聚集抑制剂的溶液，浓度为100μg/mL；
(2)在1.5mL的EP管中加入1mLβ2M溶液，选择截留分子量为10KD的透析管，置于EP管上部，β2M可以透过而β2M聚集抑制剂无法透过该透析管；
(3)设置实验组和对照组。实验组(sample)在透析管中加入400μLβ2M聚集抑制剂溶液；对照组(Control)在透析管中加入400μLPBS溶液；温和摇晃促进透析管两侧溶液交换；
(4)分别在5min，15min，30min，45min，60min，80min检测EP管β2M溶液中β2M的浓度，重复进行三次实验，取平均值，结果见附图5。实验组在80min时EP管β2M溶液中β2M的浓度约为0.79mg/mL，对照组在80min时EP管β2M溶液中β2M的浓度约为0.83mg/mL，二者浓度差约为0.04mg/mL，表明透析管中所含有的40μg的β2M聚集抑制剂能吸附约40μg的β2M。
实施例4.β2M聚集抑制剂吸附β2M
(1)将表达β2M和EGFP的基因重组，将含有重组基因的完整质粒环导入大肠杆菌，诱导其表达获得带有EGFP(增强绿色荧光蛋白)标签的β2M，其可以发出绿色荧光，将其溶于PBS中，浓度为20μM；用PBS缓冲液配制实施例2制备的β2M聚集抑制剂的溶液，浓度为200ng/mL；将上述两种溶液各100μL加入到96孔板中，混匀。
(2)上述体系在37℃孵育3h后用激光共聚焦显微镜进行成像，见附图6，其中图A激发波长为488nm、吸收波长为507nm，显示带有EGFP标记的β2M成像；图B激发波长为541nm、吸收波长为568nm，显示带有TAMRA标记的β2M聚集抑制剂成像；图C为图A和图B的重叠合成图；结合图A、B和C可知，β2M的荧光和β2M聚集抑制剂的荧光相互重叠，证明β2M聚集抑制剂吸附了β2M。
实施例5.β2M聚集抑制剂抑制β2M聚集
(1)配制各溶液
用PBS缓冲液配制β2M的溶液，浓度为50μM；
用PBS缓冲液配制实施例1制备的β2M聚集抑制剂的溶液，浓度为5mg/mL；
按照文献(Tipping KW，Karamanos T K，Jakhria T，et al.pH-inducedmolecular shedding drives the formation of amyloid fibril-derived oligomers[J].Proc Natl Acad sci U s A，2015，112(18)：5691-5696)方法制备加速β2M体外聚集的纤维种子：将蛋白β2m-His脱盐至pH 2.5的PBS缓冲液中，调节蛋白浓度至0.6mg/mL，先于室温25℃环境下在磁力搅拌器上600rpm搅拌2天，随后置于37℃摇床220rpm孵育1周左右；
称取2.55mg硫黄素T(Thioflavin T，ThT)溶解于4mL的超纯水中，得浓度为2mM的ThT溶液；
(2)设置β2M组、β2M+纤维种子组、β2M+纤维种子+β2M聚集抑制剂组，每组重复3次，取平均值。使用96孔板，其中：
β2M组，依次加入β2M溶液、ThT溶液、PBS溶液，加入量使体系总体积为500μL，体系中β2M的浓度为10μM，ThT的浓度为20μM；
β2M+纤维种子组，依次加入β2M溶液、纤维种子溶液、ThT溶液、PBS溶液，加入量使体系的总体积为500μL，体系中β2M的浓度为10μM，纤维种子的量为10μg，ThT的浓度为20μM；
β2M+纤维种子+β2M聚集抑制剂组，依次加入β2M溶液、纤维种子溶液、ThT溶液、β2M聚集抑制剂溶液、PBS溶液，加入量使体系的总体积为500μL，体系中β2M的浓度为10μM，纤维种子的量为10μg，ThT的浓度为20μM，β2M聚集抑制剂的浓度为100μg/mL。
(3)将96孔板在37℃孵育48小时，使用全波长荧光酶标仪监测ThT动力学，分别于0、1、5、10、15、20、25、32、35、40、45和48h检测ThT荧光强度(波长485nm处的荧光吸收)，结果如图7所示，图7表明β2M加纤维种子组随时间ThT荧光信号上升，表明蛋白聚集成纤维；β2M加纤维种子后加β2M聚集抑制剂组随时间荧光信号基本保持不变，可以说明β2M聚集抑制剂抑制了蛋白的聚集。
实施例6.β2M聚集抑制剂的细胞毒性实验
取96孔细胞培养板，设置实验组、对照组和背景组，其中背景组加入不含血清的培养基，实验组和对照组按如下操作
(1)将培养好的HEK293细胞悬浮液(细胞浓度为100000个/mL)100μL加入96孔细胞培养板(即每孔10000个细胞)，培养条件37℃，二氧化碳浓度5％，培养时间12h；
用不含血清的培养基配制实施例1制备的β2M聚集抑制剂的溶液，浓度为5/10/20/30/60μg/mL；
(2)待细胞贴壁后将培养基吸出，实验组加入β2M聚集抑制剂溶液，每孔加100μL，对照组加等量的不含血清的培养基，培养条件37℃，二氧化碳浓度5％，培养24/48h；
(3)将孔中溶液吸出，实验组和对照组每孔加入100μL MTT溶液(0.5mg/ml，即10％5mg/mLMTT(用MTT粉末配制)+90％无酚红培养基，不含血清)，培养条件37℃，二氧化碳浓度5％，避光继续培养4h；
(4)随后实验组和对照组每孔中加入100μL三联溶解液(SDS10g，异丁醇5ml，10MHCl 0.1ml用双蒸水溶解配成100ml溶液)，培养条件37℃，二氧化碳浓度5％，，继续培养4-6h，随后用酶标仪在避光条件下测量波长570nm吸光度，按照如下公式计算细胞存活率：
细胞存活率＝[(实验组OD值-背景组OD值)/(对照组OD值-背景组OD值)]×100％
结果见图8，表明本发明的β2M聚集抑制剂无细胞毒性。
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (29)

1.一种β2微球蛋白聚集抑制剂，其特征在于，以单分子白蛋白为核心，表面包裹有聚合物外壳，所述聚合物外壳由在其N端赖氨酸的α氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的十三肽KDWSFYILAHTEF、丙烯酰胺、N,N’-亚甲基双丙烯酰胺聚合而成，白蛋白通过其游离氨基上连接的-C(O)CH＝CH2与所述聚合物外壳中的N,N’-亚甲基双丙烯酰胺反应而连接，白蛋白与十三肽的摩尔比为1:1-10，β2微球蛋白聚集抑制剂的粒径为10-30nm。
2.如权利要求1所述的β2微球蛋白聚集抑制剂，其特征在于，白蛋白为牛血清白蛋白、人血清白蛋白.
3.如权利要求1所述的β2微球蛋白聚集抑制剂，其特征在于，粒径为15-25nm。
4.如权利要求1-3中任一项所述的β2微球蛋白聚集抑制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将白蛋白与N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺反应使其游离氨基上连接-C(O)CH＝CH2；
(2)将十三肽KDWSFYILAHTEF与N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺反应使其N端赖氨酸的α氨基上连接-C(O)CH＝CH2；
(3)使游离氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的白蛋白、N端赖氨酸的α氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的十三肽KDWSFYILAHTEF、丙烯酰胺和N,N’-亚甲基双丙烯酰胺发生聚合反应，得β2M聚集抑制剂。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，将N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺溶于有机溶剂中，将白蛋白溶于缓冲液中，将N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺溶液和白蛋白溶液混合、反应、透析得游离氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的白蛋白。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺与白蛋白的摩尔比为10-30:1。
7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，反应在4℃下进行。
8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，反应时间为1-10h。
9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，有机溶剂为DMSO。
10.如权利要求5所述的方法，其特征在于，缓冲液为PBS或PB。
11.如权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，将N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺溶于有机溶剂中，将十三肽KDWSFYILAHTEF溶于有机溶剂中，将三乙胺溶于有机溶剂中，将N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺溶液、十三肽溶液和三乙胺溶液混合、反应、透析得N端赖氨酸的α氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的十三肽KDWSFYILAHTEF。
12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺、十三肽与三乙胺的摩尔比为2-6:1:3-5。
13.如权利要求11所述的方法，其特征在于，反应在室温下进行。
14.如权利要求11所述的方法，其特征在于，反应时间为6-24h。
15.如权利要求11所述的方法，其特征在于，有机溶剂为DMSO。
16.如权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，将游离氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的白蛋白、N端赖氨酸的α氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的十三肽KDWSFYILAHTEF、丙烯酰胺、N，N‘亚甲基双丙烯酰胺混合，加入四甲基乙二胺和过硫酸铵，反应、透析得β2微球蛋白聚集抑制剂。
17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，游离氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的白蛋白、N端赖氨酸的α氨基上连接有-C(O)CH＝CH2的十三肽KDWSFYILAHTEF、丙烯酰胺、N，N‘亚甲基双丙烯酰胺、四甲基乙二胺、过硫酸铵的摩尔比为1:5-50:2000-8000:200-1000:500-1000:200-500。
18.如权利要求16所述的方法，其特征在于，反应在4℃下进行。
19.如权利要求16所述的方法，其特征在于，反应时间为1-10h。
20.一种体外吸附β2微球蛋白的方法，包括将如权利要求1-3任一项所述的β2微球蛋白聚集抑制剂与β2微球蛋白接触的步骤。
21.如权利要求20所述的方法，其特征在于，将β2微球蛋白聚集抑制剂加入到透析液中，从而在透析过程中对β2微球蛋白进行吸附。
22.如权利要求21所述的方法，其特征在于，所述透析过程为血液透析过程。
23.如权利要求1-3中任一项所述的β2微球蛋白聚集抑制剂在体外吸附β2微球蛋白的用途。
24.如权利要求23所述的用途，其特征在于，β2微球蛋白聚集抑制剂在透析过程中吸附β2微球蛋白。
25.如权利要求23所述的用途，其特征在于，所述透析过程为血液透析过程。
26.一种药物组合物，含有如权利要求1-3中任一项所述的β2微球蛋白聚集抑制剂和药学上可接受的载体。
27.如权利要求1-3中任一项所述的β2微球蛋白聚集抑制剂在制备用于抑制β2微球蛋白聚集的药物中的应用。
28.如权利要求1-3中任一项所述的β2微球蛋白聚集抑制剂在制备用于预防和/或治疗透析相关性淀粉样变性的药物中的应用。
29.如权利要求1-3中任一项所述的β2微球蛋白聚集抑制剂在制备用于预防和/或治疗腕管综合征、淀粉样关节炎的药物中的应用。
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