CN113376269A - 一种十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法，涉及苯丙氨酸含量测定的技术领域，十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法采用高效液相色谱法对十一烯酰基苯丙氨酸的含量进行检测，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇‑磷酸水溶液。流动相选择甲醇‑磷酸水溶液，改善了十一碳烯酰基苯丙氨酸的峰型和分离度，测定方法简便易行、准确性和灵敏度高、重现性好，经过方法验证后，专属性好，线性良好，仪器精密度良好，在本发明的测定方法下样品溶液室温放置稳定，回收率好，为十一碳烯酰基苯丙氨酸原料的含量测定提供了有效的检测方法。

Description

一种十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法
技术领域
本发明涉及苯丙氨酸含量测定的技术领域，更具体地，涉及一种十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法。
背景技术
十一烯酰基苯丙氨酸是苯基丙氨酸的脂类氨基酸结构，其结构与黑色素细胞刺激素(α-MSH)相似，是一种α-MSH的对抗物，其主要通过竞争性结合黑色素细胞上黑色素刺激素受体MC1-R，使黑色素细胞无法产生酪氨酸酶，从而抑制黑色素细胞活性，减少黑色素的生成。它可以在α-MSH引发的黑色素形成的各个阶段发挥作用，拦截黑色素生成信号，控制α-MSH与黑色素生成因子的结合，抑制酪氨酸酶的活性，进而阻断黑色素的形成，可以从多个环节全面抑制黑色素的生成。
十一烯酰基苯丙氨酸主要作为美白剂用于化妆品中，用于美白或减少表皮黑色素的沉积，改善皮肤暗黄、粗糙等问题，改善发炎后的色素沉着过度、色斑，比如老年斑等。相较于其他常用的美白剂，效果更加明显、持久且安全可靠，可用于治疗皮肤疾病相关的皮肤色素沉着。相关实验显示，十一碳烯酰基苯丙氨酸在0.001％浓度下就可以发挥阻断α-MSH的作用。因此，对十一碳烯酰基苯丙氨酸的含量进行测定尤为重要。
CN103412066A公开了一种采用微波水解-高效液相液相色谱仪(HPLC)检测技术测定蚕蛹中氨基酸的含量测定方法，该测定方法中，以十八烷基硅烷键合硅胶填料作为色谱柱，采用梯度洗脱，梯度洗脱液由pH为6.0～6.8的25mM KH2PO4缓冲液和甲醇乙腈溶液组成，流速：1.0～1.5ml/min；检测波长：436nm；柱温：30～40℃；分析时间50～70min；氨基酸经衍生化反应后注入色谱仪检测含量，氨基酸出峰顺序为：1、门冬氨酸；2、谷氨酸；3、丝氨酸；4、精氨酸；5、苏氨酸；6、甘氨酸；7、丙氨酸；8、脯氨酸；9、缬氨酸；10、甲硫氨酸；11、异亮氨酸；12、亮氨酸；13、苯丙氨酸；14、胱氨酸；15、赖氨酸；16、组氨酸；17、酪氨酸。该测定方法，能够对苯丙氨酸进行含量测定，理论上可用于十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定，但衍生化反应容易受衍生化试剂用量、种类、衍生化时间和温度等条件影响，使得测定方法复杂化和成本高，其线性分析中相关系数仅为0.9992，精密度RSD为1.15％，溶液稳定性为1.35％，回收率为2.02％，重现性差。
原料纯度对产品的质量至关重要，为了保证十一烯酰基苯丙氨酸原料在实际应用中发挥作用，使研发和生产的产品达到一定的品质和功效，能够发挥其抑制黑色素的作用，十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定具有重要意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有含量测定方法对十一烯酰基苯丙氨酸测定的重现性差的缺陷和不足，提供一种十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
一种十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法，采用高效液相色谱法对十一烯酰基苯丙氨酸的含量进行检测，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇-磷酸水溶液。
在常规的高效液相色谱测定氨基酸含量方法中，甲醇-甲酸水溶液梯度/等度洗脱系统、甲醇-磷酸水溶液梯度/等度洗脱系统、乙腈-甲酸水溶液梯度/等度洗脱系统、乙腈-水溶液梯度/等度洗脱系统、乙腈-磷酸水溶液梯度/等度洗脱系统等均是较为常见的流动相选择，但是上述流动相的选择在测定十一烯酰基苯丙氨酸的含量时易出现色谱峰对称性差、基线不平稳等问题，导致十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法重现性差，准确度和灵敏度差，因此本发明选择甲醇-磷酸水溶液作为流动相，十一烯酰基苯丙氨酸可以在甲醇中溶解，十一烯酰基苯丙氨酸为酸性化合物，加入磷酸调节流动相pH使样品稳定，改善峰型和分离度，且磷酸不易挥发，在低波长下无紫外吸收，不会对样品测定产生影响，可以有效提升十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定的重现性、准确度和灵敏度。
采用甲醇-磷酸水等度洗脱系统对十一烯酰基苯丙氨酸的含量进行测定，无需对十一烯酰基苯丙氨酸进行衍生化前处理，测定方法简单，有效降低了测定方法的成本，本发明的测定方法的对称因子在1.01～1.04之间，符合中国药典的规定，色谱峰对称性好，分离效果好，测定方法的重现性好。
本发明的测定方法专属性好,十一碳烯酰基苯丙氨酸主峰与相邻杂质峰之间的分离度为6.47，大于1.5，表明此条件下各杂质峰与主峰之间分离度符合要求；线性分析中相关系数高达0.9999，表明线性良好；精密度RSD为0.17％，表明仪器精密度良好；溶液稳定性为0.70％，表明在本发明的测定方法下供试品溶液室温放置较稳定；平均回收率为98.6％，说明本发明的测定方法回收率好，最终实现本发明测定方法具有重现性好的效果。
优选地，所述甲醇-磷酸水溶液的体积比为75～80：20～25，所述磷酸水溶液中磷酸的体积浓度为0.03～0.25％。
通过采用上述方案，获得色谱峰的对称因子在1.01～1.04范围内，符合中国药典的规定，色谱峰对称性好，分离效果好，说明测定方法的重现性好。
优选地，所述甲醇-磷酸水溶液的体积比为76～80：20～24，所述磷酸水溶液中磷酸的体积浓度为0.10～0.25％。
通过采用上述方案，获得色谱峰的对称因子在1.01～1.03范围内，进一步提高了色谱峰的对称性，分离效果更好，测定方法的重现性更好。
优选地，所述甲醇-磷酸水溶液的体积比为77～80：20～23，所述磷酸水溶液中磷酸的体积浓度为0.10～0.20％。
通过采用上述方案，获得色谱峰的对称因子在1.01～1.02范围内，进一步提高了色谱峰的对称性，分离效果更好，测定方法的重现性更好。
优选地，采用等度洗脱的方式。
采用梯度洗脱的方式容易出现色谱峰对称性差、基线不平稳等问题。
优选地，色谱柱规格为4.6×(150～250)mm，粒径为3～5μm。
优选地，洗脱时间为12～15min。
对十一碳烯酰基苯丙氨酸的含量进行测定时，洗脱时间为12～15min的出峰较好。
优选地，洗脱时间为12min。
对十一碳烯酰基苯丙氨酸的含量进行测定时，洗脱时间为12min能够更好的出峰。
优选地，进样量为10～15μL。
进样量在10～15μL的范围内均能够获得理想的测定结果，色谱峰对称性良好，不影响十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定。
优选地，检测器采用紫外吸收光检测器；柱温：28～32℃；检测波长：215nm；流速：0.90～1.2mL/min。
本发明还对甲醇-磷酸水等度洗脱系统的耐用性进行了考察，结果显示，流速在0.90～1.2mL/min，柱温在28～32℃，含量测定符合要求，不影响十一烯酰基苯丙氨酸含量测定。
与现有技术相比，本发明包括以下有益技术效果：
本发明提供了一种十一碳烯酰基苯丙氨酸的测定方法，采用高效液相色谱法进行测定，其中流动相选择甲醇-磷酸水溶液，对称因子在1.01～1.04的范围内，改善了十一碳烯酰基苯丙氨酸的峰型和分离度，测定方法简便易行、准确性和灵敏度高、重现性好；
采用本发明的甲醇-磷酸水溶液洗脱系统检测十一碳烯酰基苯丙氨酸的含量，经过方法验证后，专属性好，线性良好，仪器精密度良好，在本发明的测定方法下样品溶液室温放置稳定，回收率好，为十一碳烯酰基苯丙氨酸原料的含量测定提供了有效的检测方法。
附图说明
图1是实施例1中十一碳烯酰基苯丙氨酸对照品的高效液相色谱图。
图2是实施例1中十一碳烯酰基苯丙氨酸原料的高效液相色谱图。
图3是实施例2中十一碳烯酰基苯丙氨酸对照品的高效液相色谱图。
图4是实施例2中十一碳烯酰基苯丙氨酸原料的高效液相色谱图
图5是实施例3中十一碳烯酰基苯丙氨酸对照品的高效液相色谱图。
图6是实施例3中十一碳烯酰基苯丙氨酸原料的高效液相色谱图。
图7是实施例4中十一碳烯酰基苯丙氨酸对照品的高效液相色谱图。
图8是实施例4中十一碳烯酰基苯丙氨酸原料的高效液相色谱图。
图9是对比例1中十一碳烯酰基苯丙氨酸对照品的高效液相色谱图。
图10是对比例1中十一碳烯酰基苯丙氨酸原料的高效液相色谱图。
图11是对比例2中十一碳烯酰基苯丙氨酸对照品的高效液相色谱图。
图12是对比例2中十一碳烯酰基苯丙氨酸原料的高效液相色谱图。
图13是对比例3中十一碳烯酰基苯丙氨酸对照品的高效液相色谱图。
图14是对比例3中十一碳烯酰基苯丙氨酸原料的高效液相色谱图。
图15是对比例4中十一碳烯酰基苯丙氨酸对照品的高效液相色谱图。
图16是对比例4中十一碳烯酰基苯丙氨酸原料的高效液相色谱图。
图17是空白溶液的高效液相色谱图。
图18是十一碳烯酰基苯丙氨酸原料含量测定的标准曲线图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非另有说明，本发明实施例采用的原料试剂为常规购买的原料试剂。
实施例1
一种十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法，采用高效液相色谱法对十一烯酰基苯丙氨酸原料的含量进行检测，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为色谱纯甲醇(A)-磷酸水溶液(B)。
其中，固定相为YMC C18色谱柱(4.6×150mm，3μm)；磷酸水溶液的体积分数为0.10％，等度洗脱(0～12min，77％A，23％B)，检测器：紫外吸收光检测器；检测波长：215nm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。理论板数按十一碳烯酰基苯丙氨酸峰计不低于5000。
溶液的配制：
(1)对照品溶液的制备：取十一碳烯酰基苯丙氨酸对照品(纯度99.81％)约10.00mg，精密称定，置10mL量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，制成约1.00mg/mL的对照品溶液。
(2)供试品溶液的制备：取十一碳烯酰基苯丙氨酸样品约10.00mg，精密称定，置10mL量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，得到供试品溶液。
测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪测定，记录色谱图，对照品溶液的色谱图参见图1，供试品溶液的色谱图参见图2。色谱峰对称因子为1.01。
实施例2
一种十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法，采用高效液相色谱法对十一烯酰基苯丙氨酸原料的含量进行检测，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇(A)-磷酸水溶液(B)。
其中，固定相为YMC C18色谱柱(4.6×150mm，3μm)；磷酸水溶液的体积分数为0.20％，等度洗脱(0～12min，80％A，20％B)，检测器：紫外吸收光检测器；检测波长：215nm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。理论板数按十一碳烯酰基苯丙氨酸峰计不低于5000。
溶液的配制
(1)对照品溶液的制备：取十一碳烯酰基苯丙氨酸对照品(纯度99.81％)约10.00mg，精密称定，置10mL量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，制成约1.00mg/mL的对照品溶液。
(2)供试品溶液的制备：取十一碳烯酰基苯丙氨酸样品约10.00mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，得到供试品溶液。
测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪测定。记录色谱图，对照品溶液的色谱图参见图3，供试品溶液的色谱图参见图4。色谱峰对称因子为1.02。
实施例3
一种十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法,采用高效液相色谱法对十一烯酰基苯丙氨酸原料的含量进行检测，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇(A)-磷酸水溶液(B)。
其中，固定相为YMC C18色谱柱(4.6×150mm，3μm)；磷酸水溶液的体积分数为0.03％，等度洗脱(0～12min，75％A，25％B)，检测器：紫外吸收光检测器；柱温：30℃；检测波长：215nm；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。理论板数按十一碳烯酰基苯丙氨酸峰计不低于5000。
溶液的配制：
(1)对照品溶液的制备：取十一碳烯酰基苯丙氨酸对照品(纯度99.81％)约10.00mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，制成约1.00mg/mL的对照品溶液。
(2)供试品溶液的制备：取十一碳烯酰基苯丙氨酸样品约10.00mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，得到供试品溶液。
测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪测定。记录色谱图，对照品溶液的色谱图参见图5，供试品溶液的色谱图参见图6。色谱峰对称因子为1.04。
实施例4
一种十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法,采用高效液相色谱法对十一烯酰基苯丙氨酸原料的含量进行检测，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇(A)-磷酸水溶液(B)。
其中，固定相为YMC C18色谱柱(4.6×150mm，3μm)；磷酸水溶液的体积分数为0.25％，等度洗脱(0～12min，76％A，24％B)，检测器：紫外吸收光检测器；柱温：30℃；检测波长：215nm；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。理论板数按十一碳烯酰基苯丙氨酸峰计不低于5000。
溶液的配制：
(1)对照品溶液的制备：取十一碳烯酰基苯丙氨酸对照品(纯度99.81％)约10.00mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，制成约1.00mg/mL的对照品溶液。
(2)溶液的制备：取十一碳烯酰基苯丙氨酸样品约10.00mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，得到供试品溶液。
测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪测定。记录色谱图，对照品溶液的色谱图参见图7，供试品溶液的色谱图参见图8。色谱峰对称因子为1.03。
实施例1至实施例4，十一碳烯酰基苯丙氨酸样品含量分析结果见表1。
所述十一烯酰基苯丙氨酸含量测定计算式为：
Figure BDA0003067469390000071
公式中，C对照表示十一碳烯酰基苯丙氨酸对照品浓度，A对照表示十一碳烯酰基苯丙氨酸对照品溶液的峰面积，A样品表示十一碳烯酰基苯丙氨酸供试品溶液的峰面积。
表1实施例1-4供试品含量测定的结果
实例 实施例1 实施例2 实施例3 实施例4
含量(％) 98.23 98.03 97.79 97.88
对比例1(甲醇-甲酸水溶液等度洗脱系统)
一种十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法，采用高效液相色谱法对十一烯酰基苯丙氨酸原料的含量进行检测，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇(A)-0.1％甲酸水溶液(B)。
其中，固定相为YMC C18色谱柱(4.6×150mm，3μm)；甲酸水溶液的体积分数为0.1％，等度洗脱(0～15min，76％A，24％B)，检测器：紫外吸收光检测器；柱温：30℃；检测波长：215nm；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。
溶液的配制：
(1)对照品溶液的制备：取十一碳烯酰基苯丙氨酸对照品约10.00mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，制成约1.00mg/mL的对照品溶液。
(2)供试品溶液的制备：取十一碳烯酰基苯丙氨酸样品约10.00mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，得到供试品溶液。
测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪测定。记录色谱图，对照品溶液的色谱图参见图9，供试品溶液的色谱图参见图10。该系统流动相条件下色谱峰对称因子为0.69，色谱峰对称性差，前延严重。
对比例2(乙腈-甲酸水溶液等度洗脱系统)
一种十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法,采用高效液相色谱法对十一烯酰基苯丙氨酸原料的含量进行检测，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为乙腈(A)-0.05％甲酸水溶液(B)。
其中，固定相为YMC C18色谱柱(4.6×150mm，3μm)；甲酸水溶液的体积分数为0.05％，等度洗脱(0～15min，80％A，20％B)，检测器：紫外吸收光检测器；柱温：30℃；检测波长：215nm；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。
溶液的配制：
(1)对照品溶液的制备：取十一碳烯酰基苯丙氨酸、对照品约10.00mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，制成约1.00mg/mL的对照品溶液。
(2)供试品溶液的制备：取十一碳烯酰基苯丙氨酸样品约10.00mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，得到供试品溶液。
测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪测定。记录色谱图，对照品溶液的色谱图参见图11，供试品溶液的色谱图参见图12。该系统流动相条件下色谱峰对称性差，对称因子为0.67，前延现象严重。
对比例3(乙腈-水等度洗脱系统)
一种十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法，采用高效液相色谱法对十一烯酰基苯丙氨酸原料的含量进行检测，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为乙腈(A)-水溶液(B)。
其中，固定相为YMC C18色谱柱(4.6×150mm，3μm)；等度洗脱(0～12min，75％A，25％B)，检测器：紫外吸收光检测器；柱温：30℃；检测波长：215nm；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。
溶液的配制：
(1)对照品溶液的制备：取十一碳烯酰基苯丙氨酸对照品约10.00mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，制成约1.00mg/mL的对照品溶液。
(2)供试品溶液的制备：取十一碳烯酰基苯丙氨酸样品约10.00mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，得到供试品溶液。
测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪测定。记录色谱图，对照品溶液的色谱图参见图13，供试品溶液的色谱图参见图14。该系统流动相条件下色谱峰对称因子为4.54，对称性差，峰宽较宽。
对比例4(乙腈-磷酸水等度洗脱系统)
一种十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法,采用高效液相色谱法对十一烯酰基苯丙氨酸原料的含量进行检测，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)。
其中，固定相为YMC C18色谱柱(4.6×150mm，3μm)；磷酸水溶液的体积分数为0.1％，等度洗脱(0～15min，77％A，23％B)，检测器：紫外吸收光检测器；柱温：30℃；检测波长：215nm；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。
溶液的配制：
(1)对照品溶液的制备：取十一碳烯酰基苯丙氨酸对照品约10.00mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，制成约1.00mg/mL的对照品溶液。
(2)供试品溶液的制备：取十一碳烯酰基苯丙氨酸样品约10.00mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，得到供试品溶液。
测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪测定。记录色谱图，对照品溶液的色谱图参见图15，供试品溶液的色谱图参见图16。该系统流动相条件下色谱峰对称因子为1.26，色谱峰对称性差，有拖尾现象，且基线不平稳。
方法学考察
对十一碳烯酰基苯丙氨酸含量测定方法的以下项目进行了验证，结果证明了本方法简便可行，符合含量测定方法学的有关要求。
1.专属性
(1)空白溶液的制备：所述的空白溶液由甲醇组成。
精密量取空白溶液10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱图测定结果见图17。
由图1-2、17可见，空白溶液在十一碳烯酰基苯丙氨酸主峰对应保留时间处无吸收，说明空白溶液在该方法下无影响，且十一碳烯酰基苯丙氨酸主峰与相邻杂质峰之间的分离度为6.47，大于1.5，表明此条件下各杂质峰与主峰之间分离度符合要求，该方法专属性好。
2.线性
线性贮备液的制备：取十一碳烯酰基苯丙氨酸对照品约10.00mg，精密称定，置10mL容量瓶，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，作为线性贮备液(浓度1.00mg/mL)。
精密量取上述线性贮备液0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、1.5mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度(mg/mL)为横坐标，峰面积(mV·s)为纵坐标，绘制回归曲线，计算回归系数。得到线性方程式为Y＝10414x+166.99(Y表示峰面积，X表示浓度)，r＝0.9999，表明线性良好。结果见图18所示。
3.精密度
精密吸取同一浓度的十一烯酰基苯丙氨酸对照品溶液10μL，连续进样6次，测定峰面积，RSD为0.17％。表明仪器精密度良好，结果见表2。
表2精密度结果
Figure BDA0003067469390000111
4.回收率
(1)准确度溶液(80％)：取十一烯酰基苯丙氨酸对照品各约16.00mg，精密称定，置20ml量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，平行配制3份；
(2)准确度溶液(100％)：取十一烯酰基苯丙氨酸对照品各约20.00mg，精密称定，置20ml量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，平行配制3份；
(3)准确度溶液(120％)：取十一烯酰基苯丙氨酸对照品各约24.00mg，精密称定，置20ml量瓶中，加甲醇超声5min溶解，定容至刻度，摇匀，平行配制3份。
测定方法：精密量取10μL实施例1下的对照品溶液(1.00mg/mL)进样，取上述准确度溶液，按照含量测定方法测定，记录色谱图。计算测得量和回收率，实验结果见表3。由结果可见，平均回收率为98.60％，RSD为1.07，说明该方法回收率良好。
表3回收率实验结果
Figure BDA0003067469390000112
Figure BDA0003067469390000121
5.溶液稳定性
取实施例1下的十一烯酰基苯丙氨酸供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12h进样10μL，考察本品含量测定高效液相法的溶液稳定性，结果见表4。由结果可见，RSD为0.70％，表明在此分析方法下供试品溶液室温放置12h较稳定。
表4溶液稳定性结果
Figure BDA0003067469390000122
显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法，其特征在于：采用高效液相色谱法对十一烯酰基苯丙氨酸的含量进行检测，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇-磷酸水溶液。
2.根据权利要求1所述十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法，其特征在于：所述甲醇-磷酸水溶液的体积比为75～80：20～25，所述磷酸水溶液中磷酸的体积浓度为0.03～0.25％。
3.根据权利要求2所述十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法，其特征在于：所述甲醇-磷酸水溶液的体积比为76～80：20～24，所述磷酸水溶液中磷酸的体积浓度为0.10～0.25％。
4.根据权利要求3所述十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法，其特征在于：所述甲醇-磷酸水溶液的体积比为77～80：20～23，所述磷酸水溶液中磷酸的体积浓度为0.10～0.20％。
5.根据权利要求1-4任一项所述十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法，其特征在于：色谱柱规格为4.6×(150～250)mm，粒径为3～5μm。
6.根据权利要求1-4任一项所述十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法，其特征在于：采用等度洗脱的方式。
7.根据权利要求6任一项所述十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法，其特征在于：洗脱时间为12～15min。
8.根据权利要求7所述十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法，其特征在于：洗脱时间为12min。
9.根据权利要求1-4任一项所述十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法，其特征在于：进样量为10～15μL。
10.根据权利要求1-4任一项所述十一烯酰基苯丙氨酸的含量测定方法，其特征在于：检测器采用紫外吸收光检测器；柱温：28～32℃；检测波长：215nm；流速：0.90～1.2mL/min。
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