CN113366983A - 红锥组培用萌条培育方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种红锥组培用萌条培育方法，包括以下步骤：对红锥枝条进行砧木嫁接；嫁接后接穗主干长至1.5cm～2.5cm时对接穗主干进行截顶处理；待截顶后的主干萌出侧枝后截取侧枝进行组织培养，截取下的侧枝的直径为0.10cm～0.25cm。

Description

红锥组培用萌条培育方法

技术领域

本发明涉及化妆品技术领域，具体涉及一种红锥组培用萌条培育方法。

背景技术

红锥(Castanopsis hystrix)又名刺栲、红栲、赤藜、红藜、黎木，属壳斗科(Fagaceae)栲属(Castanopsis)常绿乔木，树体通直，树高可达30米，胸径可达1m以上，其为华南地区重要的乡土阔叶优质珍贵用材和多用途树种。主要分布于印度锡金、东尼泊尔和我国南部的热带、亚热带低海拔地区，广东、广西、云南以及贵州、湖南、江西、附件、海南等省的南部均有分布，边缘分布达西藏的墨脱县。喜温暖湿润的气候，耐阴。红锥具有生长快、适应广、效益高等特性，其主干通直、材质坚硬、呈红色、耐腐蚀性强、不开裂、不变形、容易加工等各种优良特性，红锥可用于车、船、梁、柱、建筑及家具或工艺品的优质木材，是重要用材树种。红锥较耐荫蔽，混生性能好，可纯林种植，亦可混交造林，是与松、杉等针叶树种混交造林的理想的伴生树种之一。

随着华南地区对红锥的需求日益增加，实现优质种苗的规模化生产尤为重要，组培无性快繁手段是快速获得大量优良苗木的方法，但优树往往因林地远、树体高大、生理成熟等而不便获得适用于组培诱导的幼嫩萌条，因此总结一套以成年优树为材料，获得优质、健壮、幼化的红锥组培用萌条培育方法对建立红锥组培体系，实现优良无性系推广应用具有重要意义。

发明内容

基于此，有必要针对红锥组培用萌条不易获得的问题，提供一种红锥组培用萌条培育方法。

本发明的目的之一是提供一种红锥组培用萌条培育方法，包括以下步骤：

对红锥枝条进行砧木嫁接；

嫁接后接穗主干长至直径为1.5cm～2.5cm时对接穗主干进行截顶处理；

待截顶后的主干萌出侧枝后截取侧枝进行组织培养，截取下的侧枝的直径为0.10cm～0.25cm。

在其中一些实施例中，红锥组培用萌条培育方法还包括将砧木嫁接后长至20cm以上高度的红锥移入美植袋定植的步骤。

在其中一些实施例中，红锥组培用萌条培育方法还包括在二级侧枝隐芽萌动后将移入美植袋的红锥移入已消毒的玻璃房进行培养的步骤。

在其中一些实施例中，红锥组培用萌条培育方法还包括将红锥移入已消毒的玻璃房之前将红锥淋透水的步骤。

在其中一些实施例中，红锥组培用萌条培育方法还包括将红锥移入已消毒的玻璃房之后将美植袋的土面用经灭菌后的无纺布完全遮盖。

在其中一些实施例中，红锥组培用萌条培育方法还包括步骤：截取侧枝进行组织培养时，保留接穗主干上的3～4个侧枝，待保留的侧枝长至直径为1.0cm以上时，对保留的侧枝进行截顶处理。

在其中一些实施例中，对保留的侧枝进行截顶处理时，截顶处理后的侧枝的长度保留至55cm～65cm。

在其中一些实施例中，对保留的侧枝进行截顶处理时，截顶处理后的侧枝的直径为1.0cm～1.5cm。

在其中一些实施例中，对主干进行截顶处理的位置为距离地面65cm～75cm的高度。

在其中一些实施例中，红锥组培用萌条培育方法所述砧木选自2年生、健壮、无虫害、地径0.8cm～2.0cm的种子苗。

本发明通过选择不同方式进行修剪，选择主干在合适的直径下进行截顶，选择合适的侧枝截取粗度，发现主干长至1.5cm～2.5cm左右粗度时截顶处理，并且截取的侧枝在粗度为0.15-0.25cm时的组培诱导效果最佳。

附图说明

图1为本发明一实施例的不同月份采条对红锥初代诱导污染率的影响图；

图2为本发明一实施例的红锥组培用萌条培育技术路线图；

图3为本发明一实施例的红锥组培用萌条培育示意图；

图4为本发明一实施例的红锥组培用萌条培育主干截顶示意图；

图5为本发明一实施例的红锥组培用萌条培育主干促萌示意图；

图6为本发明一实施例的红锥组培用萌条培育侧枝截顶示意图；

图7为本发明一实施例的红锥组培用萌条培育侧枝促萌示意图；

图8为本发明一实施例的红锥组培用萌条的不同培养环境对萌条初代诱导污染率的影响示意图。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

除了在操作实施例中所示以外或另外表明之外，所有在说明书和权利要求中表示成分的量、物化性质等所使用的数字理解为在所有情况下通过术语“约”来调整。因此，除非有相反的说明，否则上述说明书和所附权利要求书中列出的数值参数均是近似值，本领域的技术人员能够利用本文所公开的教导内容寻求获得的所需特性，适当改变这些近似值。用端点表示的数值范围的使用包括该范围内的所有数字以及该范围内的任何范围，例如，1至5包括1、1.1、1.3、1.5、2、2.75、3、3.80、4和5等等。

本发明实施例提供一种红锥组培用萌条培育方法，包括以下步骤：

对红锥枝条进行砧木嫁接；

嫁接后接穗主干长至直径为1.5cm～2.5cm时对接穗主干进行截顶处理；

待截顶后的主干萌出侧枝后截取侧枝进行组织培养，截取下的侧枝的直径为0.10cm～0.25cm。

本发明通过选择不同方式进行修剪，选择主干在合适的直径下进行截顶，选择合适的侧枝截取粗度，发现主干长至1.5cm～2.5cm左右粗度时截顶处理，并且截取的侧枝在粗度为0.15-0.25cm时的组培诱导效果最佳。

在一些实施方式中，原始的红锥枝条为冬季采集的枝条。如图1所示。通过对不同月份采条对红锥初代诱导污染率的研究表明，动机采用的枝条更有利于进行红锥组培萌条的培育。

在一些实施方式中，红锥组培用萌条培育方法所述砧木选自2年生、健壮、无虫害、地径0.8cm～2.0cm的种子苗。种子苗的地径例如可以为0.8cm、0.9cm、1.0cm、1.1cm、1.2cm、1.3cm、1.4cm、1.5cm、1.6cm、1.7cm、1.8cm、1.9cm、2.0cm。

在一些实施方式中，种子苗在嫁接前1-2个月假植于苗床，有利于提高嫁接成功率。

在一些实施方式中，采用皮接的方式进行砧木嫁接。

在一些实施方式中，具体的，对接穗主干进行截顶处理时接穗主干的直径为1.5cm、1.6cm、1.7cm、1.8cm、1.9cm、2.0cm、2.1cm、2.2cm、2.3cm、2.4cm、2.5cm。

在一些实施方式中，对主干进行截顶处理的位置为距离地面65cm～75cm的高度。具体的，对主干进行截顶处理的位置为距离地面65cm、距离地面66cm、距离地面67cm、距离地面68cm、距离地面69cm、距离地面70cm、距离地面71cm、距离地面72cm、距离地面73cm、距离地面74cm、距离地面75cm的高度。

传统的红锥萌条的培育大多采用建立采穗圃的方法，地栽后已经定植，不能移动，发明人发现，每年11月份至次年1月份为组培诱导的最佳时间，自然环境下红锥母株易携带微生物，尤其在湿度较大的月份，而组培时要求萌条尽量洁净无菌，因此传统方法会导致采条时间受限，大大减少每年可用于组培诱导的有效萌条。针对上述现有技术的缺点，本发明采用将母株定植于美植袋的方法建立微型采穗圃，美植袋可随时挪动，因此嫁接苗移植入美植袋后可随时(例如母株截干前这个阶段)置于自然环境下快速生长，截干促萌后可转移至已杀菌的玻璃室内，减少萌条微生物的携带，从而降低进瓶时的污染率。

在一些实施方式中，本发明的红锥组培用萌条培育方法还包括将砧木嫁接后长至20cm以上高度的红锥移入美植袋定植的步骤。

美植袋可以为无纺布袋，价格优惠，材料环保，通风透气，有利于苗木生长。现有技术采用地栽的方式建立采穗圃，母株生长位置固定，若地块功能变化，母株不便转移，需要重新建立采穗圃。若采穗圃弃用，母株因根系深扎土里不易清除。采用美植袋的方法使得红锥苗木在培育过程可移动，若地块二次规划可不影响现有的微型采穗圃。当红锥萌条组培进瓶成功，建立好组培体系后，母株无需保留，便于销毁。

在一些实施方式中，红锥组培用萌条培育方法还包括步骤：截取侧枝进行组织培养时，保留接穗主干上的3～4个侧枝，待保留的侧枝长至直径为1.0cm以上时，对保留的侧枝进行截顶处理。

在一些实施方式中，具体的，用于组织培养的截取下的侧枝萌条的直径可以为0.11cm、0.12cm、0.13cm、0.14cm、0.15cm、0.16cm、0.17cm、0.18cm、0.19cm、0.2cm、0.21cm、0.22cm、0.23cm、0.24cm、0.25cm。

在一些实施方式中，对保留的侧枝进行截顶处理时，截顶处理后的侧枝的长度保留至55cm～65cm。具体可以保留至55cm、56cm、57cm、58cm、59cm、60cm、61cm、62cm、63cm、64cm、65cm。

在一些实施方式中，对保留的侧枝进行截顶处理时，截顶处理后的侧枝的直径为1.0cm～1.5cm。具体的，截顶处理后的侧枝的直径可以为1.0cm、1.1cm、1.2cm、1.3cm、1.4cm、1.5cm。

传统的红锥培育过程母株生长在自然环境下，阴雨天气时携带微生物较多，而组培进瓶要求红锥的萌条尽量洁净无菌，因此会导致采条受季节和天气限制，从而大大减少有效萌条的采集数量，减少萌条采集次数，从而影响组培初代诱导的进度。在一些实施方式中，本发明红锥组培用萌条培育方法还包括在二级侧枝隐芽萌动后将移入美植袋的红锥移入已消毒的玻璃房进行培养的步骤。母株在隐芽萌动转入经杀菌后的玻璃室内进行培养，可减少萌条微生物携带数量，降低组培初代诱导污染率。玻璃室内阳光充足，采条可不受时间和天气影响，辅以良好的水肥管理措施，可周年采条，提高进瓶效率。

在一些实施方式中，红锥组培用萌条培育方法还包括将红锥移入已消毒的玻璃房之前将红锥淋透水的步骤。

为了防止红锥培育土壤中某些已经存在微生物污染的土壤中的微生物扩散至其他株红锥培育的土壤中，本发明一些实施方式的红锥组培用萌条培育方法还包括将红锥移入已消毒的玻璃房之后将美植袋的土面用经灭菌后的无纺布完全遮盖的步骤，通过该操作，避免微生物在红锥之间的交叉感染。

为了从前端过程避免玻璃室内红锥的微生物感染，优选的，本发明一些实施方式的红锥组培用萌条培育方法还包括将红锥移入已消毒的玻璃房之前先对红锥进行灭菌。例如可对红锥及其土壤中喷施多菌灵进行灭菌。

在一些实施方式中，截取侧枝或者截顶处理后，红锥的断面用伤口涂抹剂进行保护，防止虫蛀或霉变，促进伤口愈合。

以下为具体实施例。

实施例1不同萌条粗度对诱导效果的影响

方法步骤如图2和图3：

材料选择：以经红锥核心种质群体精选获得的成年优树为材料，冬季采集健壮的枝条，用湿毛巾包好，冰袋低温保存，带回苗圃地备用。

砧木嫁接：选择2年生健壮、无虫害、地径0.8-2.0cm的种子苗为砧木，种子苗在嫁接前1-2个月假植于苗床。采用皮接的方式进行嫁接，切口用农用薄膜紧缠。嫁接15d后应适时淋水，未成活及时补接。新芽抽出后定期抹去砧木萌芽。

美植袋定植：苗高20cm后将母株移植入直径45cm，高40cm的无纺布袋，袋内基肥为0.25Kg钙镁磷肥，基质为黄心土：泥炭土＝2：1。

修剪方式：嫁接后12个月主干长至2.0cm左右粗时截顶处理(图4)，高度为距离地面70cm，断面用伤口涂抹剂进行保护，防止虫蛀或霉变，促进伤口愈合。1-3个月后主干萌出侧枝(图5)，截取侧枝萌条可用于组培初代组织诱导培养。

采集不同粗度侧枝萌条进瓶组织培养(表1)。结果表明，粗度为0.15-0.25cm的萌条诱导效果最佳，粗度小于0.10cm时萌条过于细嫩，易经酒精消毒而脱水干枯，粗度大于0.25cm时萌条木质化程度过高，容易褐化而不萌芽，因此可视粗度为0.15-0.2cm的半木质化带芽茎段为有效外植体。

剪取主干的萌条用于组培诱导培养后，保留主干上3-4个侧枝。3-6个月后待侧枝长至1.0-1.5cm粗时，截顶(图6)，去除顶端优势，促进二级分枝萌发，侧枝长度保留60cm长左右。株型呈掌状，控制株高120cm左右，冠幅80cm左右(图7)。1-3个月后待萌条萌出后可用于组培诱导培养，每株单次可采集有效萌条15-20条，有效带芽茎段50-80个。

水肥管理：采环形沟施法每株施用复混肥100g，安装滴灌设施和时控开关进行自动浇水，促进营养生长。每个季度施肥一次。

室内培养：转入室内培养前对母株喷施500倍多菌灵进行灭菌。二级分枝隐芽萌动后把美植袋移入已消毒好的玻璃房进行培养，注意苗木在移入前淋透水，移入后用经灭菌后的无纺布将土面遮盖严实，防止土壤内的微生物扩散。

表1不同萌条粗度对诱导效果的影响

实施例2不同主干枝条留存粗度对促萌效果的影响

方法步骤：

材料选择：以经红锥核心种质群体精选获得的成年优树为材料，冬季采集健壮的枝条，用湿毛巾包好，冰袋低温保存，带回苗圃地备用。

砧木嫁接：选择2年生健壮、无虫害、地径0.8-2.0cm的种子苗为砧木，种子苗在嫁接前1-2个月假植于苗床。采用皮接的方式进行嫁接，切口用农用薄膜紧缠。嫁接15d后应适时淋水，未成活及时补接。新芽抽出后定期抹去砧木萌芽。

美植袋定植：苗高20cm后将母株移植入直径45cm，高40cm的无纺布袋，袋内基肥为0.25Kg钙镁磷肥，基质为黄心土：泥炭土＝2：1。

修剪方式：采用不同方式进行修剪(表2)，探讨不同主干枝度留存粗度对促萌效果的影响，结果表明以下方式较优，能在嫁接后18-24个月内获得大量优质萌条。即嫁接后12个月主干长至2.0cm左右粗时截顶处理，高度为距离地面70cm，断面用伤口涂抹剂进行保护，防止虫蛀或霉变，促进伤口愈合。1-3个月后主干萌出侧枝(图5)，萌条可用于组培初代诱导培养。

采集粗度为0.15-0.25cm的萌条诱导。

剪取主干的萌条用于组培诱导培养后，保留主干上3-4个侧枝。3-6个月后待侧枝长至1.0-1.5cm粗时，截顶(图6)，去除顶端优势，促进二级分枝萌发，侧枝长度保留60cm长左右。株型呈掌状，控制株高120cm左右，冠幅80cm左右。1-3个月后待萌条萌出后可用于组培诱导培养，每株单次可采集有效萌条15-20条，有效带芽茎段50-80个。

水肥管理：采环形沟施法每株施用复混肥100g，安装滴灌设施和时控开关进行自动浇水，促进营养生长。每个季度施肥一次。

室内培养：转入室内培养前对母株喷施500倍多菌灵进行灭菌。二级分枝隐芽萌动后把美植袋移入已消毒好的玻璃房进行培养，注意苗木在移入前淋透水，移入后用经灭菌后的无纺布将土面遮盖严实，防止土壤内的微生物扩散。

表2不同主干枝条留存粗度对促萌效果的影响

实施例3不同侧枝留存粗度对促萌效果的影响

方法步骤：

材料选择：以经红锥核心种质群体精选获得的成年优树为材料，冬季采集健壮的枝条，用湿毛巾包好，冰袋低温保存，带回苗圃地备用。

砧木嫁接：选择2年生健壮、无虫害、地径0.8-2.0cm的种子苗为砧木，种子苗在嫁接前1-2个月假植于苗床。采用皮接的方式进行嫁接，切口用农用薄膜紧缠。嫁接15d后应适时淋水，未成活及时补接。新芽抽出后定期抹去砧木萌芽。

美植袋定植：苗高20cm后将母株移植入直径45cm，高40cm的无纺布袋，袋内基肥为0.25Kg钙镁磷肥，基质为黄心土：泥炭土＝2：1。

修剪方式：嫁接后12个月主干长至2.0cm左右粗时截顶处理(图4)，高度为距离地面70cm，断面用伤口涂抹剂进行保护，防止虫蛀或霉变，促进伤口愈合。1-3个月后主干萌出侧枝，截取侧枝萌条可用于组培初代组织诱导培养。采用不同方式进行修剪(表3)，探讨不同侧枝留存粗度对促萌效果的影响。

结果表明，侧枝粗度留存粗度为越粗，萌芽效果最好。但基于效率的考虑，优选留存粗度为1.0-1.5cm的侧枝。

剪取主干的萌条用于组培诱导培养后，保留主干上3-4个侧枝。3-6个月后待侧枝长至1.0-1.5cm粗时，截顶(图6)，去除顶端优势，促进二级分枝萌发，侧枝长度保留60cm长左右。株型呈掌状，控制株高120cm左右，冠幅80cm左右。1-3个月后待萌条萌出后可用于组培诱导培养，每株单次可采集有效萌条15-20条，有效带芽茎段50-80个。

水肥管理：采环形沟施法每株施用复混肥100g，安装滴灌设施和时控开关进行自动浇水，促进营养生长。每个季度施肥一次。

室内培养：转入室内培养前对母株喷施500倍多菌灵进行灭菌。二级分枝隐芽萌动后把美植袋移入已消毒好的玻璃房进行培养，注意苗木在移入前淋透水，移入后用经灭菌后的无纺布将土面遮盖严实，防止土壤内的微生物扩散。

表3不同侧枝留存粗度对促萌效果的影响

实施例4不同培育环境对促萌效果的影响

方法步骤：

材料选择：以经红锥核心种质群体精选获得的成年优树为材料，冬季采集健壮的枝条，用湿毛巾包好，冰袋低温保存，带回苗圃地备用。

砧木嫁接：选择2年生健壮、无虫害、地径0.8-2.0cm的种子苗为砧木，种子苗在嫁接前1-2个月假植于苗床。采用皮接的方式进行嫁接，切口用农用薄膜紧缠。嫁接15d后应适时淋水，未成活及时补接。新芽抽出后定期抹去砧木萌芽。

美植袋定植：苗高20cm后将母株移植入直径45cm，高40cm的无纺布袋，袋内基肥为0.25Kg钙镁磷肥，基质为黄心土：泥炭土＝2：1。

修剪方式：嫁接后12个月主干长至2.0cm左右粗时截顶处理，高度为距离地面70cm，断面用伤口涂抹剂进行保护，防止虫蛀或霉变，促进伤口愈合。1-3个月后主干萌出侧枝，截取侧枝萌条可用于组培初代组织诱导培养。

采集粗度为0.15-0.25cm的萌条进行诱导。

剪取主干的萌条用于组培诱导培养后，保留主干上3-4个侧枝。3-6个月后待侧枝长至1.0-1.5cm粗时，截顶，去除顶端优势，促进二级分枝萌发，侧枝长度保留60cm长左右。株型呈掌状，控制株高120cm左右，冠幅80cm左右。1-3个月后待萌条萌出后可用于组培诱导培养，每株单次可采集有效萌条15-20条，有效带芽茎段50-80个。

水肥管理：采环形沟施法每株施用复混肥100g，安装滴灌设施和时控开关进行自动浇水，促进营养生长。每个季度施肥一次。

室内培养：转入室内培养前对母株喷施500倍多菌灵进行灭菌。二级分枝隐芽萌动后把美植袋移入已消毒好的玻璃房进行培养，注意苗木在移入前淋透水，移入后用经灭菌后的无纺布将土面遮盖严实，防止土壤内的微生物扩散。

在夏季多雨时节采集室外自然萌出的萌条和室内促萌的萌条进行对照实验。结果如图8。结果表明，室内促萌所得萌条洁净度远高于室外，进瓶后污染率可控制在20％以下。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准，说明书可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.一种红锥组培用萌条培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

对红锥枝条进行砧木嫁接；

嫁接后接穗主干长至直径为1.5cm～2.5cm时对接穗主干进行截顶处理；

待截顶后的主干萌出侧枝后截取侧枝进行组织培养，截取下的侧枝的直径为0.10cm～0.25cm。

2.根据权利要求1所述的红锥组培用萌条培育方法，其特征在于，还包括将砧木嫁接后长至20cm以上高度的红锥移入美植袋定植的步骤。

3.根据权利要求2所述的红锥组培用萌条培育方法，其特征在于，还包括在二级侧枝隐芽萌动后将移入美植袋的红锥移入已消毒的玻璃房进行培养的步骤。

4.根据权利要求3所述的红锥组培用萌条培育方法，其特征在于，还包括将红锥移入已消毒的玻璃房之前将红锥淋透水的步骤。

5.根据权利要求4所述的红锥组培用萌条培育方法，其特征在于，还包括将红锥移入已消毒的玻璃房之后将美植袋的土面用经灭菌后的无纺布完全遮盖。

6.根据权利要求1～5任一项所述的红锥组培用萌条培育方法，其特征在于，还包括步骤：截取侧枝进行组织培养时，保留接穗主干上的3～4个侧枝，待保留的侧枝长至直径为1.0cm以上时，对保留的侧枝进行截顶处理。

7.根据权利要求6所述的红锥组培用萌条培育方法，其特征在于，对保留的侧枝进行截顶处理时，截顶处理后的侧枝的长度保留至55cm～65cm。

8.根据权利要求6所述的红锥组培用萌条培育方法，其特征在于，对保留的侧枝进行截顶处理时，截顶处理后的侧枝的直径为1.0cm～1.5cm。

9.根据权利要求1～5任一项所述的红锥组培用萌条培育方法，其特征在于，对主干进行截顶处理的位置为距离地面65cm～75cm的高度。

10.根据权利要求1～5任一项所述的红锥组培用萌条培育方法，其特征在于，所述砧木选自2年生、健壮、无虫害、地径0.8cm～2.0cm的红锥种子苗。

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