CN113274391B - 吡唑衍生物在制备p2y6r相关治疗动脉粥样硬化及抗炎药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了吡唑衍生物或其可药用的盐在制备治疗动脉粥样硬化及抗炎药物中的应用。本发明首次发现了吡唑衍生物具备P2Y6R拮抗剂的功能，对P2Y6R相关炎症具有明显的拮抗作用，可以用作制备P2Y6R相关的抗炎药物。

Description

吡唑衍生物在制备P2Y6R相关治疗动脉粥样硬化及抗炎药物中 的应用
技术领域
本发明涉及药物化学技术领域，尤其涉及一种吡唑衍生物在制备P2Y6R 相关治疗动脉粥样硬化及抗炎药物中的应用。
背景技术
核苷酸在细胞外的受体被确认并分类为嘌呤能受体，嘌呤受体分为P1 和P2受体两大类，其中P2受体又分为配体门控离子通道型受体(P2XR)和G 蛋白偶联型受体(P2YR)。P2受体及其胞外核苷酸广泛调控了机体的免疫应答及炎症发生过程，成为国际多个知名制药公司关注的药物靶点。目前已有 P2Y2R激动剂地夸磷索(Diquafosol)、P2Y12R拮抗剂氯吡格雷、P2X7R的选择性拮抗剂AZD9056多个靶向P2受体的药物上市或处于临床阶段。值得注意的是，氯吡格雷是目前临床广泛使用的抗血小板药物之一，已被用于单独或联合使用治疗动脉粥样硬化。然而，氯吡格雷在动脉粥样硬化方面的应用仍然是从抗血栓的角度，降低动脉粥样硬化患者心肌梗死风险，与动脉粥样硬化的发生并没有明确联系。
P2Y6R是P2Y受体家族八个亚型(P2Y1R，P2Y2R，P2Y4R，P2Y6R，P2Y11R， P2Y12R，P2Y13R和P2Y14R)中的一员，在免疫器官、心血管系统、神经组织等多种器官和组织中表达，P2Y6受体的内源性配体是胞外核苷酸分子，通过其选择性激动剂UDP特异性激活磷脂酶C(PLC)，上调细胞内Ca2+浓度，达到传递细胞间信号、调节细胞各种生理功能的目的。目前研究表明，当P2Y6R受到激动时，可促进中性粒细胞和巨噬细胞的募集和趋化，并释放多种炎症细胞因子、趋化因子和肥大细胞介质。对P2Y6R的基因敲除的小鼠模型的研究表明，P2Y6R参与心血管疾病、呼吸道炎症及胃肠道炎症等疾病的发生发展。
P2Y6R介导细胞外核苷酸的活动参与心血管疾病的发生发展，体现在促进血管炎症反应、增强血管张力、促进平滑肌细胞的收缩与增殖等方面。P2Y6R 基因敲除的小鼠模型中，血管内皮细胞、巨噬细胞和血管平滑肌细胞对UDP 的响应显著减弱，而这几类细胞恰好是动脉粥样硬化病程中的核心细胞。近期Blood上报道了P2Y6R基因的缺失能够抑制高胆固醇饮食诱导的小鼠动脉粥样硬化和斑块炎症，因此，针对P2Y6受体开发拮抗剂可通过干预机体固有免疫而达到抗炎效果，在动脉粥样硬化等炎症治疗药物开发领域很好的创新性和应用前景。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种吡唑衍生物在制备 P2Y6R相关治疗动脉粥样硬化及抗炎药物中的应用。
本发明提供了吡唑衍生物或其可药用的盐在制备治疗动脉粥样硬化及抗炎药物中的应用，其中吡唑衍生物的化学结构如下所示：
Figure BDA0003095286060000021
本发明优选的，所述动脉粥样硬化为P2Y6R相关动脉粥样硬化。
另一方面，本发明提供了吡唑衍生物或其可药用的盐在制备P2Y6R拮抗剂的应用，其中吡唑衍生物的化学结构如下所示：
Figure BDA0003095286060000022
本发明对上述小分子化合物进行了生物学活性测定，发现它对P2Y6R具有明显的拮抗活性，且能明显降低ox-LDL诱导的THP-1细胞中PLCβ、NLRP3、 ASC、Caspase-1和细胞培养上清液中IL-1β、IL-18炎症因子的表达。
上述可药用的盐选自盐酸盐、磷酸盐、硫酸盐、醋酸盐、马来酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、甲基苯磺酸盐、富马酸盐和酒石酸盐中的一种或多种。
与现有技术相比，本发明提供了吡唑衍生物或其可药用的盐在制备治疗动脉粥样硬化及抗炎药物中的应用。本发明首次发现了吡唑衍生物具备P2Y6R 拮抗剂的功能，对P2Y6R相关炎症具有明显的拮抗作用，可以用作制备P2Y6R 相关的抗炎药物。
附图说明
图1为化合物改善AS小鼠主动脉病理组织形态学改变组织切片图；
图2为化合物对ox-LDL刺激下THP-1细胞中焦亡相关蛋白表达影响 Western Blot图；
图3为化合物抑制ox-LDL刺激下NLRP3-ASC炎症小体的共定位免疫荧光印记与流式细胞检测图；
图4为化合物抑制ox-LDL刺激下Caspase-1阳性细胞数和Caspase-1、PI 双阳性细胞数柱状图。
具体实施方式
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的吡唑衍生物(以下图中编号为C3)在制备P2Y6R相关治疗动脉粥样硬化及抗炎药物中的应用进行详细描述。
实施例1
化合物对P2Y6受体体外拮抗活性测试
将前期构建的人P2Y6R稳转HEK293细胞培养于DMEM培养基中(含 10％胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素)，实验前接种至6孔培养板，接种密度为5×105cells/ml，细胞于37℃、95％O2、5％CO2湿度条件下培养。实验前换无血清培养基饥饿12h，每孔加入1μM化合物，反应30min 后加入10μM UDP孵育12h后收集样品检测胞内3磷酸肌醇(IP3)含量。
3磷酸肌醇(IP3)酶联免疫吸附测定试剂盒采用竞争ELISA法。用IP3抗原包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的IP3与包被的IP3竞争生物素标记的抗IP3单抗上的结合位点，游离的成分被洗去。加入辣根过氧化物酶标记的亲和素，生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IP3浓度与OD450值之间呈反比，通过绘制标准曲线计算出样品中IP3的浓度。最后计算每组复孔的平均OD值。以浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在双对数坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线；通过标准曲线计算出样品中IP3的浓度。实验重复三次，取平均值并计算化合物对P2Y6R的IC50和SD。
实验结果如表1所示：
表1化合物对P2Y6受体体外拮抗活性测试结果
Figure BDA0003095286060000041
实施例2
化合物在小鼠的动脉粥样硬化模型中的药效学研究
采用高脂饲料(HFD)建立LDLR-/-小鼠AS模型，并用20mg/kg的化合物进行干预治疗。结果表明，化合物能够有效地抑制HFD导致的AS血脂水平TC、TG、LDL-C和HDL-C的异常改变；同时化合物能有效改善小鼠主斑块的脂质沉积增加、动脉壁增厚、管腔狭窄、胶原纤维含量高、内膜纤维化等病理性改变(图1)，证明P2Y6R拮抗剂在小鼠AS模型中有很好的治疗效果，展现了其作为AS治疗药物的潜力。
实施例3
化合物在ox-LDL诱导的巨噬细胞中的体外抗炎活性研究
为了测试化合物抗炎活性，采用ox-LDL诱导的THP-1细胞模型，加入化合物干预治疗，检测细胞焦亡的相关指标。检测结果显示，人THP-1细胞在ox-LDL刺激后能够明显升高细胞中PLCβ、NLRP3、ASC、Caspase-1和细胞培养上清液中IL-1β、IL-18炎症因子的蛋白表达显著增加，加入化合物后相应蛋白表达降低(图2)。免疫荧光检测结果显示：化合物能够逆转ox-LDL 造成的NLRP3-ASC炎症小体的上调(图3)。流式检测结果显示：加入化合物的人THP-1细胞在ox-LDL诱导后细胞释放到上清液中的Caspase-1阳性细胞数和Caspase-1、PI双阳性细胞数较模型组均显著降低(图4)。上述结果表明，化合物通过抑制P2Y6R调控的通路从而抑制巨噬细胞的焦亡和炎症因子表达。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (3)

1.吡唑衍生物或其可药用的盐在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用，其中吡唑衍生物的化学结构如下所示：
Figure FDA0003642362350000011
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述动脉粥样硬化为P2Y6R相关动脉粥样硬化。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述可药用的盐选自盐酸盐、磷酸盐、硫酸盐、醋酸盐、马来酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、甲基苯磺酸盐、富马酸盐和酒石酸盐中的一种或多种。
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Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19744026A1 (de) * 1997-10-06 1999-04-08 Hoechst Marion Roussel De Gmbh Pyrazol-Derivate, ihre Herstellung und ihre Verwendung in Arzneimitteln
GB0514738D0 (en) * 2005-07-19 2005-08-24 Astrazeneca Ab Therapeutic agents
JP2011507910A (ja) * 2007-12-21 2011-03-10 ユニバーシティー オブ ロチェスター 真核生物の寿命を変更するための方法
KR102434226B1 (ko) * 2016-06-30 2022-08-19 한미약품 주식회사 Alk5 억제제로서의 신규 피라졸 유도체 및 이의 용도
CN113274391B (zh) * 2021-06-01 2022-07-05 苏州大学 吡唑衍生物在制备p2y6r相关治疗动脉粥样硬化及抗炎药物中的应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
The role of P2Y6R in cardiovascular diseases and recent development of P2Y6R antagonists;Mengze Zhou等;《Drug Discovery Today》;20200331;第25卷(第3期);第568-573页 *

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