CN113271954A - 免疫细胞的活化 - Google Patents
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Abstract
本文描述骨髓容器。本文描述用于将活化的免疫细胞与其他成分分开的分离系统。本文描述活化免疫细胞的方法。
Description
通过参考任何优先权申请结合
本申请根据PCT规则4.10要求2018年10月15日提交的美国国家申请号16/160006的优先权，该申请要求2018年6月29日提交的美国临时申请号62/691775的权益，其特此通过参考以其全部结合。根据37 CFR 1.57，与本申请一起提交的在申请数据表中标识了对其要求国外或国内优先权的任何和所有申请特此通过参考结合。
背景
骨髓已被用作造血干细胞(HSC)和其他再生细胞类型(比如间充质基质/干细胞(MSC))的便捷来源。由于骨髓为更新中的组织，因此其可为再生医学应用提供有用的可再生细胞来源，特别是其中自体细胞为优选的那些应用。
常规地，已经通过分离细胞成分来处理骨髓抽吸物。这些方法可通过分离出常规地认为没有价值，并且可能甚至对再生医学应用有害的红细胞(RBC)来使骨髓减积。通常，这些分离方法已利用RBC的不同物理特性来富集含有HSC和MSC的单核细胞级分。
领域
本文中的一些实施方案通常涉及用于活化免疫细胞的方法、组合物和制造。在一些实施方案中，包含非离子亲水性支链多糖和Toll样受体2 (TLR2)配体的组合物用于活化骨髓来源的骨髓细胞。
概述
在一些实施方案中，描述一种骨髓容器。骨髓容器可包含含有一定密度的非离子亲水性支链多糖的组合物，其中如果组合物与全血接触并离心，则所述密度足以允许全血流体移动穿过非离子亲水性支链多糖而不会分离红细胞。非离子亲水性支链多糖可具有大于20 kDa的分子量。组合物可包含TLR2配体。组合物可包含在容器内。容器可为无菌的。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖具有至少70 kDa的分子量。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖包含蔗糖-表氯醇共聚物。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖具有小于1克/升的密度。在一些实施方案中，TLR2配体选自透明质烷(hyaluronon)、透明质酸、尿酸单钠晶体、双糖链蛋白聚糖、内质蛋白、HMGB1、HSP60、HSP70、人类心肌肌球蛋白、酵母聚糖、脂磷壁酸、肽聚糖(包括Pam2CSK4、Pam3CSK4)、来自血浆的脂蛋白和脂多糖(LPS)。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖包含密度小于1克/升的蔗糖-表氯醇共聚物，基本上由其组成或由其组成，和其中TLR2配体包含透明质酸，基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，容器选自袋子、真空采血管(vacutainer)和注射器。在一些实施方案中，骨髓容器进一步包括整体递送装置。在一些实施方案中，骨髓容器进一步包含活化/沉降溶液。在一些实施方案中，骨髓容器进一步包含葡聚糖和/或hes。在一些实施方案中，葡聚糖的浓度为至少约4%。在一些实施方案中，骨髓容器进一步包含配置为容纳骨髓的体积，其中当所述体积中存在骨髓时，葡聚糖在骨髓和组合物中的浓度为至少约1%。在一些实施方案中，骨髓配置为由如本文所述的分离系统容纳。
在一些实施方案中，描述一种分离系统。分离系统可包括底架，底架包含配置为容纳如本文所述的骨髓容器的腔。底架可包括轨道。系统可包括布置于轨道上的轴，其中轴配置为沿着轨道移动，从而当将骨髓容器布置于底架中时压紧骨髓容器。在一些实施方案中，轴配置为抵靠底架的内表面压紧骨髓容器。在一些实施方案中，轴选自滚轴和滑块。在一些实施方案中，轴配置为抵靠布置于底架中的骨髓容器卡入就位，从而限定骨髓容器的至少两个部分。
在一些实施方案中，描述一种试剂盒。试剂盒可包含如本文所述的骨髓容器。试剂盒可进一步包含骨髓抽吸针，比如鲁尔锁(luer lock)。在一些实施方案中，试剂盒进一步包含过滤器。过滤器的孔径可小于骨髓细胞的直径。在一些实施方案中，孔径小于或等于200微米。在一些实施方案中，试剂盒进一步包含活化/沉降溶液。在一些实施方案中，试剂盒进一步包含如本文所述的分离系统。
在一些实施方案中，描述一种活化受试者的免疫细胞的方法。所述方法可包括获得受试者的骨髓。骨髓可包含免疫细胞。所述方法可包括将骨髓与非离子亲水性支链多糖和TLR2配体一起温育。非离子亲水性支链多糖的密度可使得如果骨髓与全血接触并离心，则所述密度足以允许全血流体移动穿过非离子亲水性支链多糖而不会分离红细胞。非离子亲水性支链多糖可具有大于20 kDa的分子量。可进行温育直至活化免疫细胞。例如，温育可持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12小时，包括任何两个所列数值之间的范围。所述方法可进一步包括将活化的免疫细胞给予受试者。在一些实施方案中，所述方法进一步包括将受试者鉴定为需要免疫细胞活化。在一些实施方案中，受试者患有癌症。在一些实施方案中，温育进一步包括将骨髓与癌细胞抗原一起温育。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖具有至少70 kDa的分子量。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖包含蔗糖-表氯醇共聚物。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖具有小于1克/升的密度。在一些实施方案中，TLR2配体选自透明质烷、透明质酸、尿酸单钠晶体、双糖链蛋白聚糖、内质蛋白、HMGB1、HSP60、HSP70、人类心肌肌球蛋白、酵母聚糖、脂磷壁酸、来自血浆的脂蛋白、LPS和肽聚糖(包括Pam2CSK4和Pam3CSK4)以及两种或更多种所列项目的组合。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖包含密度小于1克/升的蔗糖-表氯醇共聚物，基本上由其组成或由其组成，和TLR2配体包含透明质酸。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖包含密度小于1克/升的蔗糖-表氯醇共聚物，基本上由其组成或由其组成，和其中TLR2配体包含透明质酸，基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，温育在如本文所述的骨髓容器中进行。在一些实施方案中，所述方法进一步包括将骨髓容器布置于如本文所述的分离系统中，并且将轴抵靠骨髓容器卡入就位，从而限定骨髓容器的两个部分。所述方法可进一步包括在温育之后，使轴沿着轨道移动，从而压紧骨髓容器的内容物，并从骨髓中挤出免疫细胞。在一些实施方案中，所述方法进一步包括将骨髓与活化/沉降溶液一起温育，从而从骨髓中沉降红细胞。在一些实施方案中，活化的免疫细胞包含骨髓细胞，基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，活化的免疫细胞包含CD11b+ CD54+粒细胞和/或CD66b+嗜中性粒细胞。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在将活化的免疫细胞给予受试者之前，使活化的免疫细胞与非离子亲水性支链多糖和TLR2配体分开。在一些实施方案中，将活化的免疫细胞给予受试者的肌肉骨骼组织。在一些实施方案中，所述方法不包括白细胞去除术(leukaphoresis)。在一些实施方案中，所述方法为离体的。
附图简述
图1A-F为一系列图表，显示在骨髓抽吸物暴露于FICOLL试剂和TLR2配体之后，对髓样树突状细胞活化的流式细胞术分析。图1A和图1D (外周血样品阳性对照，PB)、图1B和图1E (暴露于Ficol和TLR2激动剂之前的全骨髓阴性对照)和图1C和图1F (暴露于Ficol和TLR2激动剂之后的骨髓抽吸物单核细胞，MNC)。谱系阴性、CD14阴性、髓样大小门控的经典树突状细胞(图1A、图1B和图1C；白色箭头表示区域1、2和3中的树突状细胞)和门控树突状细胞的活化通过按阳性百分比和相对荧光强度(图1D、图1E和图1F)测量HLA-DR表达的活化细胞百分比来分析。
图2A-I：流式细胞术门控方案通过前向和正交光散射分离髓样大小的细胞(图2A、2B和2C)，使用染料排斥区分活细胞与死细胞的生存力(图2d、图2E和图2F)，以及使用信号面积与信号宽度的比例的来自双峰和碎片的单细胞(图2G、图2H和图2I)。
图3A为本文一些实施方案的骨髓容器的图解。
图3B-C为本文一些实施方案的分离系统的图解。分离系统可配置为容纳如本文所述的骨髓容器。
详述
在本文中观察到，非离子亲水性支链多糖比如蔗糖-表氯醇共聚物与TLR2配体(比如透明质酸)组合可活化骨髓中的免疫细胞，比如再生细胞。活化的免疫细胞可包含髓样谱系，基本上由其组成或由其组成。根据本文的实施方案，描述了包含非离子亲水性支链多糖和TLR2配体的骨髓容器、组合物、方法和试剂盒。非离子亲水性支链多糖可具有至少20 kDa的分子量。非离子亲水性支链多糖的密度可足以允许全血流体移动穿过非离子亲水性支链多糖而不会分离红细胞。相反，非离子亲水性支链多糖在血液加工中的常规使用一般地会以较高浓度(大于1.0 g/l)实施这些多糖，以进行密度介导的红细胞与单核细胞级分的分离(例如在离心下)。在一些实施方案中，骨髓容器包含非离子亲水性支链多糖和TLR2配体。可将骨髓抽吸物添加至容器中，并可通过将骨髓抽吸物与非离子亲水性支链多糖和TLR2配体在容器中一起温育来活化免疫细胞。在一些实施方案中，活化免疫细胞的方法包括将骨髓(比如骨髓抽吸物)与如本文所述的非离子亲水性支链多糖和TLR2配体一起温育。
如本文使用的“活化”免疫细胞具有其普通和惯常的含义，如鉴于本公开的本领域普通技术人员所理解的。其是指免疫细胞增殖、成熟、动员(比如迁移)、代谢或分解代谢和/或活性(比如细胞因子、生长因子和/或酶分泌)。
非离子亲水性支链多糖
一些实施方案的骨髓处理容器、试剂盒和方法包含非离子亲水性支链多糖。合适的非离子亲水性支链多糖的实例包括(但不限于)蔗糖-表氯醇共聚物，其可作为FICOLL多糖市售获得。本文考虑分子量为至少20 kDa的大的支链多糖可活化先天免疫系统。不受理论的限制，考虑具有适当高分子量的非离子亲水性支链多糖具有模拟细菌细胞壁的结构。在一些实施方案中，-离子亲水性支链多糖比二糖包含更多的单体，例如至少三糖或更大。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖的密度为至少20 kDa，例如至少20 kDa、30kDa、40 kDa、50 kDa、60 kDa、70 kDA、80 kDa、90 kDa、100 kDa、150 kDa、200 kDa或500kDa，包括任何两个所列数值之间的范围，例如20-500 kDa、20-200 kDa、20-100 kDa、20-80kDa、50-500 kDa、50-200 kDa、50-100 kDa、50-80 kDa、70-500 kDa、70-200 kDa、70-100kDa和70-80 kDa。
尽管非离子亲水性支链多糖常规以高密度用于从血液中分离红细胞(例如通过离心分离)，但是本文考虑离子亲水性支链多糖可用于以低得多的密度活化免疫细胞。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖的密度使得如果与全血接触并离心，则全血可流体移动穿过非离子亲水性支链多糖而不会分离红细胞。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖以小于1克/升的密度提供，例如小于1 g/l、0.99 g/l、0.9 g/l、0.8 g/l、0.7 g/l、0.6g/7、0.5 g/l、0.4 g/l、0.3 g/l、0.2 g/l、0.1 g/l、0.05 g/l、10-2 g/l、2 x 10-3 g/l、10-3g/l、10-5 g/l、2 x 10-6 g/l、10-6 g/l、10-7 g/l、10-8 g/l、2 x 10-9 g/l或10-9 g/l，包括任何两个所列数值之间的范围，例如10-9-10-6 g/l、10-9-10-3 g/l、10-9-10-2 g/l、10-9-0.1 g/l、10-9-0.5 g/l、10-9-0.9 g/l、10-9-0.09 g/l、10-6-10-3 g/l、10-6-10-2 g/l、10-6-0.1 g/l、10-6-0.5 g/l、10-6-0.9 g/l、10-6-0.09 g/l、2 x 10-6-10-2 g/l、2 x 10-6-0.1 g/l、2 x10-6-0.5 g/l、2 x 10-6-0.9 g/l、2 x 10-6-0.09 g/l、10-3-10-2 g/l、10-3-0.1 g/l、10-3-0.5 g/l、10-3-0.9 g/l、10-3-0.09 g/l、0.002-0.01 g/l、0.002-0.1 g/l、0.002-0.5 g/l、0.002 -0.9 g/l、0.002-0.09 g/l、0.01 g/l-0.99 g/l、0.01 g/l-0.9 g/l、0.01 g/l-0.5g/l、0.01 g/l-0.2 g/l、0.01 g/l-0.1 g/l、0.1 g/l-0.99 g/l、0.1 g/l-0.9 g/l、0.1 g/l-0.5 g/l、0.1 g/l-0.2 g/l、0.5 g/l-0.99 g/l、0.5 g/l-0.9 g/l和0.5 g/l-0.7 g/l。
TLR2配体
TLR2配体可活化骨髓细胞。不受理论的限制，考虑TLR2配体可活化骨髓细胞以改善其治疗有效性。因此，一些实施方案的骨髓处理容器、试剂盒、组合物和方法包含TLR2配体。用于本文一些实施方案的方法、组合物、骨髓容器和试剂盒的合适的TLR2配体的实例包括(但不限于)透明质烷、透明质酸、尿酸单钠晶体、双糖链蛋白聚糖、内质蛋白、HMGB1、HSP60、HSP70、人类心肌肌球蛋白、酵母聚糖、脂磷壁酸、来自血浆的脂蛋白、LPS、肽聚糖(包括Pam2CSK4、Pam3CSK4)以及两种或更多种所列项目的组合。在一些实施方案中，TLR2配体包含透明质酸，基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案的骨髓处理容器、试剂盒、组合物和方法中，TLR2配体的浓度为至少1 μg/ml (例如为至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、50、100或500 µg/ml)或至少1 mg/ml (例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10 mg/ml)，包括任何两个所列数值之间的范围，例如1-10 µg/ml、1-100 µg/ml、1 µg/ml-1 mg/ml、1 µg/ml-10 mg/ml、10-100 µg/ml、10 µg/ml-1 mg/ml、10 µg/ml-10 mg/ml、100 µg/ml -1 mg/ml、100 µg/ml-10 mg/ml或1-10 mg/ml。
活化/沉降溶液
一些实施方案包括活化/沉降溶液。活化/沉降溶液可从骨髓中沉降红细胞，从而使骨髓减积并增加活化的免疫细胞的浓度。葡聚糖和/或羟乙基淀粉(hes)可沉降红细胞。因此，在一些实施方案中，活化/沉降溶液包含葡聚糖和/或hes，基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，活化/沉降溶液包含hes，基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，活化/沉降溶液包含葡聚糖，基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，葡聚糖和/或hes的浓度使得在添加骨髓后，葡聚糖和/或hes的浓度为至少1%，例如至少1%、2%、3%或4%，包括任何两个所列数值之间的范围，例如1-4%、1-3%、1-2%、2-3%、2-4%或3-4%。活化/沉降溶液可适合于与骨髓和组合物(包含非离子亲水性支链多糖和TLR2配体)在骨髓容器中一起温育，以沉降红细胞，从而使活化的免疫细胞减积。在一些实施方案中，葡聚糖和/或hes具有高分子量。在一些实施方案中，葡聚糖和/或hes具有510(k)兼容性等级。
在一些实施方案中，活化/沉降溶液与包含非离子亲水性支链多糖和TLR2配体的组合物分开。例如，活化/沉降溶液可与如本文所述的骨髓容器分开，并且可在以后添加至容器中。在一些实施方案中，活化/沉降溶液为包含如本文所述的非离子亲水性支链多糖和TLR2配体的组合物的一部分。
组合物
在一些实施方案中，组合物包含如本文所述的非离子亲水性支链多糖和如本文所述的TLR2配体。如本文所述，非离子亲水性支链多糖可具有至少20 kDa的分子量。如本文所述，非离子亲水性支链多糖可具有不超过1 g/升的密度。组合物可为无菌的。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖包含蔗糖-表氯醇共聚物，基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，TLR2配体包含透明质酸，基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，组合物包含在溶液(溶液可包含组合物，基本上由其组成或由其组成)比如水溶液中。在一些实施方案中，组合物为溶液，比如水溶液。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖以小于1克/升的密度提供，例如小于1 g/l、0.99 g/l、0.9 g/l、0.8 g/l、0.7 g/l、0.6 g/7、0.5 g/l、0.4 g/l、0.3 g/l、0.2 g/l、0.1 g/l、0.05 g/l、10-2 g/l、2 x 10-3 g/l、10-3 g/l、10-5 g/l、2 x 10-6 g/l、10-6 g/l、10-7 g/l、10-8 g/l、2 x 10-9 g/l或10-9 g/l，包括任何两个所列数值之间的范围，例如10-9-10-6 g/l、10-9-10-3 g/l、10-9-10-2 g/l、10-9-0.1 g/l、10-9-0.5 g/l、10-9-0.9 g/l、10-9-0.09 g/l、10-6-10-3 g/l、10-6-10-2 g/l、10-6-0.1 g/l、10-6-0.5 g/l、10-6-0.9 g/l、10-6-0.09 g/l、2 x 10-6-10-2 g/l、2 x 10-6-0.1 g/l、2 x 10-6-0.5 g/l、2 x 10-6-0.9 g/l、2 x 10-6-0.09 g/l、10-3-10-2 g/l、10-3-0.1 g/l、10-3-0.5g/l、10-3-0.9 g/l、10-3-0.09 g/l、0.002-0.01 g/l、0.002-0.1 g/l、0.002-0.5 g/l、0.002 -0.9 g/l、0.002-0.09 g/l、0.01 g/l-0.99 g/l、0.01 g/l-0.9 g/l、0.01 g/l-0.5g/l、0.01 g/l-0.2 g/l、0.01 g/l-0.1 g/l、0.1 g/l-0.99 g/l、0.1 g/l-0.9 g/l、0.1 g/l-0.5 g/l、0.1 g/l-0.2 g/l、0.5 g/l-0.99 g/l、0.5 g/l-0.9 g/l和0.5 g/l-0.7 g/l。在一些实施方案中，TLR配体的浓度如本文所述为至少1 μg/ml (例如为至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、50、100或500 µg/ml)或至少1 mg/ml (例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10 mg/ml)，包括任何两个所列数值之间的范围，例如1-10 µg/ml、1-100 µg/ml、1 µg/ml-1 mg/ml、1 µg/ml-10 mg/ml、10-100 µg/ml、10 µg/ml-1 mg/ml、10 µg/ml-10 mg/ml、100 µg/ml -1 mg/ml、100 µg/ml-10 mg/ml或1-10 mg/ml。
不受理论的限制，考虑非离子亲水性支链多糖可活化先天免疫应答，和TLR2配体可活化骨髓细胞。在一些实施方案中，组合物包含足以活化先天免疫应答的量的非离子亲水性支链多糖。在一些实施方案中，组合物包含足以活化骨髓细胞的量的TLR2配体。在一些实施方案中，组合物包含足以活化骨髓细胞并刺激先天免疫应答的量的非离子亲水性支链多糖和TLR2配体。在一些实施方案中，组合物包含足以活化CD66b+嗜中性粒细胞的量的非离子亲水性支链多糖和TLR2配体。
在一些实施方案中，组合物进一步包含如本文所述的活化/沉降溶液。
在一些实施方案中，组合物用于活化如本文所述的免疫细胞，例如髓样谱系的免疫细胞。在一些实施方案中，用途为体外用途。
骨髓容器
考虑包含如本文所述的非离子亲水性支链多糖和TLR2配体的骨髓容器可活化骨髓的免疫细胞。骨髓容器可用于刺激需要免疫应答的患者的自体骨髓中的免疫应答，和/或用于在植入之前使可植入的凝胶或油灰(比如脱矿质骨基质(DBM))水合。因此，在一些实施方案中，描述一种骨髓容器。骨髓容器可含有包含如本文所述的非离子亲水性支链多糖和如本文所述的TLR2配体的组合物。离子亲水性支链多糖可处于一定密度，其中如果组合物与全血接触并离心，则所述密度允许全血流体移动穿过非离子亲水性支链多糖而不会分离红细胞。参考离心参数可为例如至少50 g，例如至少100 g、200 g、300 g或400 g。非离子亲水性支链多糖可具有如本文所述的大于20 kDa，例如至少20 kDa、30 kDa、40 kDa、50 kDa、60 kDa、70 kDA、80 kDa、90 kDa、100 kDa、150 kDa、200 kDa或500 kDa的分子量，包括任何两个所列数值之间的范围，比如20-50 kDa、20-100 kDa、20-200 kDa、20-500 kDa、50-100kDa、50-200 kDa、50-500 kDa、70-100 kDa、70-200 kDa、70-500 kDa、100-200 kDa或100-500 kDa。组合物可包含在骨髓容器中。骨髓容器可为无菌的。在一些实施方案中，骨髓容器被配置用于插入到如本文所述的分离系统中。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖的密度小于1克/升。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖包括密度小于1克/升的蔗糖-表氯醇共聚物，和TLR2配体包括透明质酸。
一些实施方案的示例性骨髓容器如图3A所示。骨髓容器100可含有如本文所述的组合物110，所述组合物包含非离子亲水性支链多糖和TLR2配体，基本上由其组成或由其组成。组合物110可布置于骨髓容器110的内部。骨髓容器的内部可为无菌的。骨髓容器100可进一步包括入口120和出口130。入口和出口可使骨髓容器100的内部与外部流体连通。在一些实施方案中，入口120包括通道和/或阀门。在一些实施方案中，入口120为可密封的，例如通过压力、摩擦或粘合剂密封。在一些实施方案中，出口130包括通道和/或阀门。在一些实施方案中，出口130为可密封的，例如通过压力、摩擦或粘合剂密封。在一些实施方案中，入口120和出口130为同一结构。在一些实施方案中，入口120和出口130为分开的结构。在一些实施方案中，骨髓容器100进一步包括整体递送装置(未显示)，比如静脉内针。整体递送装置可与出口130流体连通，并且可配置为将活化的免疫细胞从容器给予需要它的受试者。
在一些实施方案中，骨髓容器选自袋子、真空采血管和注射器。根据一些实施方案，在如本文所述将骨髓于骨髓容器中温育以便活化免疫细胞之后，将活化的免疫细胞给予需要它们的受试者。免疫细胞可为自体的。因此，在一些实施方案中，骨髓容器进一步包括递送装置，例如针，比如静脉内针。在一些实施方案中，递送装置为骨髓容器的组成部分。在一些实施方案中，递送装置配置为附接于骨髓容器，并任选地与其分离。例如，递送装置可配置为置于与骨髓容器的出口流体连通。
在一些实施方案中，骨髓容器配置为容纳每次抽取2-4 ml直至每次抽取约25 ml的体积。因此，骨髓容器可具有容纳抽取的骨髓以及包含非离子亲水性支链多糖和TLR2配体的组合物的体积。因此，在一些实施方案中，骨髓容器具有至少2、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90或100 ml的体积，包括任何两个所列数值之间的范围，例如2-25ml、2-30 ml、2-40 ml、2-50 ml、2-70 ml、2-100 ml、5-25 ml、5-30 ml、5-40ml、5-50 ml、5-70 ml、5-100 ml、10-25 ml、10-30 ml、10-40 ml、10-50 ml、10-70 ml、10-100 ml、20-25ml、20-30 ml、20-40 ml、20-50 ml、20-70 ml、20-100 ml、50-70 ml或50-100 ml。
可为有利的是从包含如本文所述的活化免疫细胞的骨髓中去除一些或全部红细胞，例如使骨髓减积，并增加骨髓中活化的单核免疫细胞的浓度。在一些实施方案中，骨髓容器进一步被配置用于红细胞的沉降。因此，在一些实施方案中，骨髓容器包含如本文所述的活化/沉降溶液。活化/沉降溶液可包含葡聚糖和/或hes。在一些实施方案中，骨髓容器包含配置为容纳骨髓的体积，并且当所述体积中存在骨髓时，葡聚糖和/或hes在组合的骨髓和活化/沉降溶液中的浓度为至少约1%。
在一些实施方案中，骨髓容器为护理点装置。因此，在一些实施方案中，骨髓容器为便携式的。
分离系统
分离系统可连同如本文所述的骨髓容器一起使用，以在骨髓已经在骨髓容器中温育之后制备浓缩的活化的免疫细胞。
一些实施方案的示例性分离系统如图3B和3C所示。图3B描绘处于第一构造的分离系统200 (在骨髓容器100中分离骨髓之前)。图3C描绘处于第二构造的分离系统200 (在骨髓容器100中分离骨髓之后)。
参考图3B，分离系统200配置为容纳如本文所述的骨髓容器100。分离系统200可包括底架205，底架205包含配置为含有骨髓容器100的腔210。底架205可进一步包括轨道220。轨道220可沿着腔210的轴线布置。轴230可布置于轨道上。任选地，轴230与手柄235机械连通，使得轴230可经手柄235沿着轨道220移动。因此，当轴230沿着轨道220移动时，轴230可穿过腔。在一些实施方案中，轴230选自滚轴和滑块。在一些实施方案中，轴230配置为抵靠布置于底架205中的骨髓容器100卡入就位，从而限定骨髓容器100的至少两个部分。在一些实施方案中，轴230配置为抵靠底架205的内表面压紧骨髓容器100。在一些实施方案中，分离系统200包括配置为容纳如本文所述的骨髓容器100的腔210、包括轨道220的底架。分离系统进一步包括布置于轨道220上的轴230，其中轴230配置为沿着轨道220移动，从而在将骨髓容器100布置于底架205中时压紧骨髓容器100。在一些实施方案中，底架205为塑料的。
参考图3C，当将骨髓容器100布置于腔220内时，入口120和出口130可保持可接近。当轴230沿着轨道220移动并穿过腔210时，轴230可在其中压紧骨髓容器100。轴230沿着轨道朝向出口130的移动可将活化的免疫细胞从骨髓容器100中通过出口130挤出。在一些实施方案中，可通过入口120添加活化/沉降溶液(其可包含葡聚糖和/或hes，基本上由其组成或由其组成)并与组合物110混合且温育，从而允许如本文所述的免疫细胞活化以及其他成分(比如红细胞)的沉降。然后可例如通过拉动手柄使轴230沿着轨道220移动，从而压紧骨髓容器100并通过出口130挤出活化的免疫细胞。在一些实施方案中，温育持续至少0.5小时、1小时、1.5小时或2小时。
试剂盒
在一些实施方案中，描述一种试剂盒。试剂盒可包含如本文所述的骨髓容器。骨髓容器可包含组合物，组合物包含如本文所述的非离子亲水性支链多糖和如本文所述的TLR2配体。试剂盒可进一步包含骨髓抽吸针，例如鲁尔锁。骨髓抽吸针可适合于通过骨髓容器的入口来给予骨髓抽吸物。
在一些实施方案中，试剂盒进一步包含过滤器。过滤器可适合于将骨髓细胞与骨髓的其他成分分开。因此，在一些实施方案中，过滤器的孔径小于骨髓细胞的直径。在一些实施方案中，过滤器的孔径小于或等于200微米、150微米、100微米或50微米，包括任何两个所列数值之间的范围，例如50-200微米、50-150微米或100-200微米。在一些实施方案中，过滤器可用于保留骨髓细胞，同时处理掉骨髓容器和骨髓的较小成分(例如过滤器可布置于包括骨髓容器内部和出口的流体路径中，使得小于骨髓细胞的物质可通过出口排出同时保留骨髓细胞)。
在一些实施方案中，试剂盒进一步包含活化/沉降溶液。在一些实施方案中，活化/沉降溶液布置于试剂盒的骨髓容器内。在一些实施方案中，活化/沉降溶液与骨髓容器分开放置，例如在单独的容器中。活化/沉降溶液的干燥和/或冻干的前体也可在添加合适的流体例如骨髓后适当地重构为活化/沉降溶液。因此，尽管活化/沉降“溶液”本文中称为简写，但也应当理解，还考虑合适的干燥和/或冻干的前体。
在一些实施方案中，试剂盒进一步包含纤溶酶。纤溶酶可用于凝结和递送活化的免疫细胞。
在一些实施方案中，试剂盒进一步包含如本文所述的分离系统。
活化免疫细胞的方法
一些实施方案包括活化受试者的免疫细胞的方法。所述方法可包括获得受试者的骨髓。骨髓可包含免疫细胞。所述方法可包括将骨髓与包含非离子亲水性支链多糖和TLR2配体的组合物，例如包含如本文所述的非离子亲水性支链多糖和TLR2配体的组合物一起温育。非离子亲水支链多糖可具有大于20 kDa的分子量。非离子亲水性支链多糖可处于一定密度，使得如果骨髓与全血接触并离心，则所述密度足以允许全血流体移动穿过非离子亲水性支链多糖而不会分离红细胞。可以进行温育直至活化免疫细胞。例如，温育可持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12小时，包括任何两个所列数值之间的范围。例如，已经表明，根据一些实施方案，将骨髓与非离子亲水性支链多糖和TLR2配体一起温育过夜可活化免疫细胞(参见实施例1)。所述方法可包括将活化的免疫细胞给予受试者。因此，一些实施方案的方法将自体活化的免疫细胞递送至受试者。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖的密度不超过1 g/升。在一些实施方案中，将非离子亲水性支链多糖和TLR2配体放置于如本文所述的骨髓容器中，并且温育在骨髓容器中进行。在一些实施方案中，活化的免疫细胞包含骨髓细胞，基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，活化的免疫细胞包含CD66b+嗜中性粒细胞，基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，骨髓(和活化的免疫细胞)为受试者自体的。在一些实施方案中，例如如果患者骨髓和/或免疫细胞的产生和/或活性有缺陷，则骨髓(和活化的免疫细胞)为同种异体的。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括将受试者鉴定为需要免疫细胞活化。在一些实施方案中，受试者患有癌症。考虑活化癌症患者中的免疫细胞可用于增强针对癌症的免疫应答。此外，考虑在存在癌细胞抗原的情况下活化免疫细胞可活化靶向该肿瘤细胞的免疫应答。因此，在一些实施方案中，所述方法包括将受试者鉴定为患有癌症。所述方法可进一步包括将骨髓与癌细胞抗原(例如存在于受试者癌症的肿瘤细胞上的癌细胞抗原)一起温育。温育可在如本文所述的骨髓容器中。在一些实施方案中，癌细胞抗原被还包含非离子亲水性支链多糖和TLR2配体的组合物所包含。然后可将活化的免疫细胞给予患有癌症的受试者。在一些实施方案中，将活化的免疫细胞给予受试者的肌肉骨骼组织。
在一些实施方案的方法中，非离子亲水性支链多糖的分子量为至少20 kDa、30kDa、40 kDa、50 kDa、60 kDa、70 kDa、80 kDa、90 kDa或100 kDa，包括任何两个所列数值之间的范围。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖包含蔗糖-表氯醇共聚物，基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，非离子亲水性支链多糖包含FICOLL多糖，基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案的方法中，非离子亲水性支链多糖的密度小于1克/升，例如小于1克/升，例如小于1 g/l、0.99 g/l、0.9 g/l、0.8 g/l、0.7 g/l、0.6 g/7、0.5 g/l、0.4 g/l、0.3 g/l、0.2 g/l、0.1 g/l、0.05 g/l、10-2 g/l、10-3 g/l、10-5 g/l、10-6 g/l、10-7 g/l、10-8 g/l、10-9 g/l，包括任何两个所列数值之间的范围，例如10-9-10-6 g/l、10-9-10-3 g/l、10-9-10-2 g/l、10-9-0.1 g/l、10-9-0.5 g/l、10-9-0.9 g/l、10-9-0.09 g/l、10-6-10-3 g/l、10-6-10-2 g/l、10-6-0.1 g/l、10-6-0.5 g/l、10-6-0.9 g/l、10-6-0.09 g/l、10-3-10-2 g/l、10-3-0.1 g/l、10-3-0.5 g/l、10-3-0.9 g/l、10-3-0.09 g/l、0.01 g/l-0.99 g/l、0.01 g/l-0.9 g/l、0.01 g/l-0.5 g/l、0.01 g/l-0.2 g/l、0.01 g/l-0.1 g/l、0.1 g/l-0.99 g/l、0.1 g/l-0.9 g/l、0.1 g/l-0.5 g/l、0.1 g/l-0.2 g/l、0.5 g/l-0.99 g/l、0.5g/l-0.9 g/l和0.5 g/l-0.7 g/l。
在一些实施方案的方法中，TLR2配体选自透明质烷、透明质酸、尿酸单钠晶体、双糖链蛋白聚糖、内质蛋白、HMGB1、HSP60、HSP70、人类心肌肌球蛋白、酵母聚糖、来自血浆的脂蛋白、LPS、脂磷壁酸和肽聚糖(包括Pam2CSK4和Pam3CSK4)以及两种或更多种所列项目的组合。
在一些实施方案的方法中，非离子亲水性支链多糖包含蔗糖-表氯醇共聚物，和TLR2配体包含透明质酸。在一些实施方案的方法中，非离子亲水性支链多糖包含密度小于1克/升的蔗糖-表氯醇共聚物，和TLR2配体包含透明质酸。
在一些实施方案中，温育在如本文所述的骨髓容器中进行。在一些实施方案中，温育持续至少0.5小时、1小时、1.5小时、2小时或3小时，包括任何两个所列数值之间的范围，例如0.5-1、0.5-2、0.5-3、1-2、1-3、1.5-2、1.5-3或2-3小时。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括将骨髓容器布置于如本文所述的分离系统中。所述方法可进一步包括将轴抵靠骨髓容器卡入就位，从而限定骨髓容器的两个部分。在温育之后，所述方法可包括使轴沿着轨道移动，从而压紧骨髓容器的内容物，并从骨髓中挤出免疫细胞。在一些实施方案中，免疫细胞通过骨髓容器的出口挤出。然后可将挤出的免疫细胞给予需要它们的受试者。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括使骨髓与活化/沉降溶液接触，从而从骨髓中沉降红细胞。如本文所述，活化/沉降溶液可包含葡聚糖和/或hes，基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，温育在如本文所述的骨髓容器中进行，并且在将骨髓置于骨髓容器中时活化/沉降溶液存在于骨髓容器中。在一些实施方案中，温育在如本文所述的骨髓容器中进行，并且与骨髓抽吸物同时或在将骨髓抽吸物置于容器中之后将活化/沉降溶液添加至骨髓容器中。
在一些实施方案中，骨髓的活化的免疫细胞包含骨髓细胞(比如CD11b+ CD54+粒细胞和/或CD66b+嗜中性粒细胞)，基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，活化的免疫细胞包含CD11b+ CD54+粒细胞，基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，活化的免疫细胞包含CD66b+嗜中性粒细胞，基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，活化的免疫细胞包含CD11b+ CD54+粒细胞和CD66b+嗜中性粒细胞，基本上由其组成或由其组成。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括在将活化的免疫细胞给予受试者之前，将活化的免疫细胞与非离子亲水性支链多糖和TLR2配体分开。在一些实施方案中，分离通过过滤进行。在一些实施方案中，分离通过如本文所述的分离系统进行。
在一些实施方案中，所述方法不包括白细胞去除术。
另外的实施方案
除上述项目之外，还列出以下选项：
1. 一种骨髓容器，其包含：
组合物，其包含：
一定密度的非离子亲水性支链多糖，其中如果组合物与全血接触并离心，则所述密度足以允许全血流体移动穿过非离子亲水性支链多糖而不会分离红细胞，
所述非离子亲水性支链多糖具有大于20 kDa的分子量；和
TLR2配体，
其中所述组合物包含在所述容器内，和其中所述容器为无菌的。
2. 选项1的骨髓容器，其中所述非离子亲水性支链多糖具有至少70 kDa的分子量。
3. 选项1-2中任何一项的骨髓容器，其中所述非离子亲水性支链多糖包含蔗糖-表氯醇共聚物。
4. 选项1-3中任何一项的骨髓容器，其中所述非离子亲水性支链多糖的密度小于1克/升，例如小于1 g/l、0.99 g/l、0.9 g/l、0.8 g/l、0.7 g/l、0.6 g/7、0.5 g/l、0.4 g/l、0.3 g/l、0.2 g/l、0.1 g/l、0.05 g/l、10-2 g/l、2 x 10-3 g/l、10-3 g/l、10-5 g/l、2x10-6 g/l、10-6 g/l、10-7 g/l、10-8 g/l、2 x 10-9 g/l或10-9 g/l，包括任何两个所列数值之间的范围，例如10-9-10-6 g/l、10-9-10-3 g/l、10-9-10-2 g/l、10-9-0.1 g/l、10-9-0.5 g/l、10-9-0.9 g/l、10-9-0.09 g/l、10-6-10-3 g/l、10-6-10-2 g/l、10-6-0.1 g/l、10-6-0.5 g/l、10-6-0.9 g/l、10-6-0.09 g/l、2x10-6-10-2 g/l、2x10-6-0.1 g/l、2x10-6-0.5 g/l、2x10-6-0.9 g/l、2x10-6-0.09 g/l、10-3-10-2 g/l、10-3-0.1 g/l、10-3-0.5 g/l、10-3-0.9 g/l、10-3-0.09 g/l、0.002-0.01 g/l、0.002-0.1 g/l、0.002-0.5 g/l、0.002-0.9 g/l、0.002-0.09g/l、0.01 g/l-0.99 g/l、0.01 g/l-0.9 g/l、0.01 g/l-0.5 g/l、0.01 g/l-0.2 g/l、0.01g/l-0.1 g/l、0.1 g/l-0.99 g/l、0.1 g/l-0.9 g/l、0.1 g/l-0.5 g/l、0.1 g/l-0.2 g/l、0.5 g/l-0.99 g/l、0.5 g/l-0.9 g/l或0.5 g/l-0.7 g/l。
5. 选项1-4中任何一项的骨髓容器，其中所述TLR2配体选自透明质烷、透明质酸、尿酸单钠晶体、双糖链蛋白聚糖、内质蛋白、HMGB1、HSP60、HSP70、人类心肌肌球蛋白、酵母聚糖、脂磷壁酸、来自血浆的脂蛋白、脂多糖(LPS)和肽聚糖(包括Pam2CSK4和Pam3CSK4)。
6. 选项1的骨髓容器，其中所述非离子亲水性支链多糖包含密度小于1克/升的蔗糖-表氯醇共聚物，和其中所述TLR2配体包含透明质酸。
7. 选项1-6中任何一项的骨髓容器，其中所述容器选自袋子、真空采血管和注射器。
8. 选项1-7中任何一项的骨髓容器，其进一步包括整体递送装置。
9. 选项1-8中任何一项的骨髓容器，其进一步包含葡聚糖。
10. 选项9的骨髓容器，其中所述葡聚糖的浓度为至少约4%。
11. 选项9-10中任何一项的骨髓容器，其进一步包含配置为容纳骨髓的体积，其中当所述体积中存在骨髓时，所述葡聚糖在所述骨髓和所述组合物中的浓度为至少约1%。
12. 选项9-11中任何一项的骨髓容器，其中所述容器配置为由分离系统容纳。
13. 一种分离系统，其包含：
底架，其包括配置为容纳选项1-12中任何一项的骨髓容器的腔，所述底架包括轨道；和
布置于所述轨道上的轴，其中所述轴配置为沿着所述轨道移动，从而当将所述骨髓容器布置于所述底架中时压紧所述骨髓容器。
14. 选项13的分离系统，其中所述轴配置为抵靠所述底架的内表面压紧所述骨髓容器。
15. 选项13-14中任何一项的分离系统，其中所述轴选自滚轴和滑块。
16. 选项13-14中任何一项的分离系统，其中所述轴配置为抵靠布置于所述底架中的骨髓容器卡入就位，从而限定所述骨髓容器的至少两个部分。
17. 一种包含选项1-12中任何一项的骨髓容器和骨髓抽吸针比如鲁尔锁的试剂盒。
18. 选项17的试剂盒，其进一步包含过滤器，所述过滤器的孔径小于骨髓细胞的直径。
19. 选项18的试剂盒，其中所述孔径小于或等于200微米。
20. 选项17-19中任何一项的试剂盒，其进一步包含活化/沉降溶液。
21. 选项17-20中任何一项的试剂盒，其进一步包含选项13-16中任何一项的分离系统。
22. 一种活化受试者的免疫细胞的方法，所述方法包括：
获得所述受试者的骨髓，所述骨髓包含免疫细胞；
将所述骨髓与非离子亲水性支链多糖和TLR2配体一起温育，
其中所述非离子亲水性支链多糖处于一定密度，其中如果所述骨髓与全血接触并离心，则所述密度足以允许全血流体移动穿过所述非离子亲水性支链多糖而不会分离红细胞，
其中所述非离子亲水性支链多糖具有大于20 kDa的分子量，和
其中进行所述温育直至活化所述免疫细胞，和
将所述活化的免疫细胞给予所述受试者。
23. 选项22的方法，其进一步包括将受试者鉴定为需要免疫细胞活化。
24. 选项23的方法，其中所述受试者患有癌症。
25. 选项24的方法，其中所述温育进一步包括将所述骨髓与癌细胞抗原一起温育。
26. 选项22-25中任何一项的方法，其中所述非离子亲水性支链多糖具有至少70kDa的分子量。
25. 选项22-26中任何一项的方法，其中所述非离子亲水性支链多糖包含蔗糖-表氯醇共聚物。
26. 选项22-27中任何一项的方法，其中非离子亲水性支链多糖的密度小于1克/升。
27. 选项22-28中任何一项的方法，其中所述TLR2配体选自透明质烷、透明质酸、尿酸单钠晶体、双糖链蛋白聚糖、内质蛋白、HMGB1、HSP60、HSP70、人类心肌肌球蛋白、酵母聚糖、脂磷壁酸、来自血浆的脂蛋白、LPS和肽聚糖(包括Pam2CSK4和Pam3CSK4)。
28. 选项22的方法，其中所述非离子亲水性支链多糖包含密度小于1克/升的蔗糖-表氯醇共聚物，和其中所述TLR2配体包含透明质酸。
29. 选项23-27中任何一项的方法，其中所述非离子亲水性支链多糖包含密度小于1克/升的蔗糖-表氯醇共聚物，和其中所述TLR2配体包含透明质酸。
30. 选项22-29中任何一项的方法，其中所述温育在选项1-16中任何一项的骨髓容器中进行。
31. 选项30的方法，其进一步包括：
将所述骨髓容器布置于选项17-21中任何一项的分离系统中；
将所述轴抵靠所述骨髓容器卡入就位，从而限定所述骨髓容器的两个部分；
在所述温育之后，使所述轴沿着所述轨道移动，从而压紧所述骨髓容器的内容物，并从所述骨髓中挤出免疫细胞。
32. 选项22-31中任何一项的方法，其进一步包括将所述骨髓与活化/沉降溶液一起温育，从而从所述骨髓中沉降红细胞。
33. 选项22-32中任何一项的方法，其中所述活化的免疫细胞包含骨髓细胞。
34. 选项33的方法，其中所述活化的免疫细胞包含CD11b+ CD54+粒细胞和/或CD66b+嗜中性粒细胞。
35. 选项22-34中任何一项的方法，其进一步包括在将所述活化的免疫细胞给予所述受试者之前，使所述活化的免疫细胞与所述非离子亲水性支链多糖和所述TLR2配体分开。
36. 选项22-35中任何一项的方法，其中将所述活化的免疫细胞给予所述受试者的肌肉骨骼组织。
37. 选项22-36中任何一项的方法，其中所述方法不包括白细胞去除术。
38. 选项22-37中任何一项的方法，其中所述方法为离体的。
通常，常规的分离方法利用RBC的不同物理特性来富集含有HSC和MSC的单核细胞级分。密度介导的分离常规地使用密度大于1.0的Percoll和FICOLL-HIPAQUE多糖，并施加离心力以完成物理分离。这可允许使用单核细胞级分，其含有更小和更有用的体积的再生细胞，因为通过去除RBC和粒细胞使骨髓减积。
不受理论的限制，考虑一些实施方案的非离子亲水性支链多糖可使用与可活化人类免疫系统的先天臂的细菌细胞壁多糖相似或类似的机制活化骨髓中的再生细胞。不受理论的限制，考虑一些实施方案的TLR2配体可活化骨髓细胞，并且骨髓细胞的活化可增强其治疗有效性。因此，考虑使用根据本文所述的组合物、骨髓容器、试剂盒和方法的非离子亲水性支链多糖和TLR2配体活化免疫细胞可增强用自体骨髓细胞治疗患者的功效。
实施例1：
流式细胞术分析骨髓抽吸物暴露于FICOLL多糖和以下TLR2配体之后的髓样树突状细胞活化：来自血浆的脂蛋白、合成PAM-3CSK4和脂多糖(LPS)。从单个供体中获得外周血(PB)和骨髓(BM)的样品，并在使用无清洗方法染色之前用高渗盐溶液(FACS裂解液，BectonDickinson)处理所有样品以去除红细胞。然后，根据制造商的说明，将适当的荧光染料缀合的单克隆抗体在含2%牛血清白蛋白的PBS中于冰上温育30分钟，并立即收集关于超过50000个事件的数据。使用同种型匹配的对照设置门控。应当注意的是，PB对照为相对罕见的成熟树突状细胞提供阳性对照。在暴露于TLR-配体和Ficol (1/100 (v/v)稀释)之后，在阴性对照骨髓细胞和匹配的骨髓之间比较树突状细胞。
图1A和图1D (外周血样品阳性对照，PB)，图1B和图1E (暴露于FICOLL多糖和TLR2激动剂之前的全骨髓阴性对照)以及图1C和图1F (暴露于Ficol和TLR2激动剂之后的骨髓抽吸物单核细胞(MNC)，MNC)。谱系阴性、CD14阴性、髓样大小门控的经典树突状细胞(图1A、图1B和图1C；白色箭头1、2和3表示区域1、2和3中的树突状细胞)和门控树突状细胞的活化通过按阳性百分比和相对荧光强度(图1D、图1E和图1F)测量HLA-DR (成熟标记)表达的活化细胞百分比来分析。
图1D (PB阳性对照)图1E (BM阴性对照)白色箭头编号5显示全骨髓阴性对照的骨髓细胞活化的对照水平，而图1F白色箭头6显示在过夜暴露于TLR-2配体和低于1.0 gm/L的Ficoll之后，阳性细胞百分比(1.9对比15.9%)和相对平均荧光强度两者方面的HLA-DR上调。图1D白色箭头4显示PB对照的骨髓细胞活化的对照水平。
因此，可以得出结论，根据本文的一些实施方案，通过根据本文的一些实施方案将骨髓与FICOLL多糖和TLR2配体一起温育来活化免疫细胞。此外，通过活化增加来自髓样祖细胞的树突状细胞成熟。
实施例2：
进一步分析了用实施例1)的FICOLL多糖和TLR2配体活化的活化的骨髓细胞。门控方案如图2A-I所示。根据大小(图2A-C)、生存力(sytox blue染色) (图2D-F)和单峰(图2G-I)门控细胞。
细胞的表型特征表明，活化的免疫细胞群包括未成熟的(CD33-低，CD11b-低)骨髓细胞(图4A-I)。CD66b由嗜中性粒细胞表达，表明为新的DC群(参见图4A、4D、4G)。因此，可以得出结论，根据本文的一些实施方案活化了未成熟的骨髓细胞比如嗜中性粒细胞。
实施例3
抽吸患者，并根据制造商的说明，通过Terumo BCT SmartPrep骨髓抽吸浓缩物(bone marrow aspirate concentration，BMAC)或使用Biomet Marrow stim系统处理约25ml的全骨髓(尽管考虑根据本文的一些实施方案，可使用目前市售的用于骨髓处理和减积的任何装置)。然后将所得的骨髓浓缩物注射到无菌骨髓容器中，容器中含有100x浓度的足够量的Ficoll-Hypaque和透明质酸，以增加根据流式细胞术或基因表达分析的CD11b表达，然后允许在护理点于环境温度下温育持续至少10分钟且不超过8小时。然后将细胞过滤，使得保留细胞，并显著降低活化部分的浓度，且然后将活化的细胞递送至患者。与未使用本文公开的实施方案的组合物和方法进行处理的骨髓浓缩物相比较，植入医疗装置(包括同种异体生物组织、合成的骨填充物、用于支撑肌肉骨骼组织再生的与脊柱以及其他手术相关的硬件(比如不锈钢、钛或PEEK装置))的手术程序得以改善，并且结果得到增强。
在一些实施方案中，所述方法、用途或组合物包括作为单个步骤或特征(与多个步骤或特征相对)存在的各种步骤或特征。例如，在一些实施方案中，所述方法包括将骨髓与非离子亲水性支链多糖和TLR2配体一起进行单次温育。非离子亲水性支链多糖和TLR2配体可以有效活化免疫细胞比如骨髓细胞的量存在。方法、骨髓容器或试剂盒可包含如本文所述的有效活化免疫细胞的单一数量的亲水性支链多糖和TLR2配体。在备选实施方案中提供多种特征或成分。
尽管本文中已经公开了各个方面和实施方案，但是其他方面和实施方案对于本领域的技术人员将是显而易见的。本文中所公开的各个方面和实施方案出于说明的目的，而不旨在进行限制，真实的范围和精神由所附权利要求指明。对于本文所述的每种方法，明确考虑用于方法中的相关组合物，还明确考虑方法中组合物的用途，并且在适用时，还明确考虑制备药物用于方法中的方法。例如，对于本文所述的活化免疫细胞的方法，还考虑用于相应方法的包含亲水性支链多糖和TLR2配体的组合物(和骨髓容器)。另外，考虑确实涉及治疗患者的体外方法，例如包括以下步骤的方法：接收骨髓抽吸物，并将骨髓抽吸物与亲水性支链多糖和TLR2配体一起在体外温育，从而在体外活化免疫细胞。本领域的技术人员将意识到，对于本文公开的这个和其他过程和方法，可以不同的顺序来实施在过程和方法中执行的功能。此外，概述的步骤和操作仅作为实例提供，并且一些步骤和操作可为任选的，可组合成更少的步骤和操作，或者扩展成另外的步骤和操作而不背离所公开实施方案的本质。
关于本文中基本上任何复数和/或单数术语的使用，本领域的技术人员可根据情况和/或应用将复数转换为单数和/或将单数转换为复数。为了清楚起见，本文可明确地阐述各种单数/复数排列。
本领域内的人员将理解，通常，本文中并且尤其是在所附权利要求(例如所附权利要求的主体)中使用的术语通常旨在作为“开放”术语(例如术语“包括”应解释为“包括(但不限于)”，术语“具有”应解释为“至少具有”，术语“包含”应解释为“包含(但不限于)”等)。本领域内的人员将进一步理解，如果旨在特定数量的介绍性权利要求陈述，则将在权利要求中明确地陈述这种意图，并且在没有这种陈述的情况下不存在这种意图。例如，为了助于理解，以下所附权利要求可含有介绍性短语“至少一个”和“一个或多个”的使用以介绍权利要求的陈述。然而，使用这种短语不应解释为意指通过不定冠词“一(a)”或“一个(an)”介绍权利要求陈述将任何含有这种介绍的权利要求陈述的特定权利要求限于仅含有一个这种陈述的实施方案，即使当同一权利要求包括介绍性短语“一个或多个”或“至少一个”和不定冠词比如“一(a)”或“一个(an)”时(例如“一(a)”和/或“一个(an)”应解释为意指“至少一个”或“一个或多个”)；使用用于介绍权利要求陈述的定冠词也是如此。另外，即使明确陈述特定数量的介绍性权利要求陈述，本领域的技术人员也将认识到，这种陈述应解释为至少意指所述数量(例如没有其他修饰语的“两个陈述”的裸露陈述，意指至少两个陈述或者两个或更多个陈述)。此外，在其中使用类似于“A、B和C等中的至少一个”的约定的那些情况下，通常在本领域的技术人员将理解该约定的意义上意图这种构造(例如“具有A、B和C中的至少一个的系统”将包括(但不限于)拥有单独的A、单独的B、单独的C、A和B一起、A和C一起、B和C一起和/或A、B和C一起等的系统)。在其中使用类似于“A、B或C等中的至少一个”的约定的那些情况下，通常在本领域的技术人员将理解该约定的意义上意图这种构造(例如“具有A、B或C中的至少一个的系统”将包括(但不限于)拥有单独的A、单独的B、单独的C、A和B一起、A和C一起、B和C一起和/或A、B和C一起等的系统)。本领域内的人员将进一步理解，实际上，无论是在说明书、权利要求还是附图中，呈现两个或更多个替代术语的任何转折性词语和/或短语均应理解为考虑包括这些术语之一、这些术语中任一个或两个术语的可能性。例如，短语“ A或B”应理解为包括“ A”或“ B”或“ A和B”的可能性。
另外，在根据马库什组描述本公开的特征或方面的情况下，本领域的技术人员将认识到，由此也根据马库什组的任何单个成员或成员的子组描述本公开。
如本领域技术人员将理解的，出于任何和所有目的，比如就提供书面描述而言，本文公开的所有范围还涵盖其任何和所有可能的子范围及子范围的组合。任何所列范围均可被易于认为是充分描述并且允许将相同范围分解为至少相等的对半、三份、四份、五份、十份等。作为非限制性实例，本文讨论的每个范围可易于分解为下三分之一、中三分之一和上三分之一等。如本领域技术人员还将理解的，所有语言比如“最多”、“至少”等均包括所述数量，并且是指如上所述的可随后分解为子范围的范围。例如，“约5”应包括数字5。最后，如本领域技术人员将理解的，范围包括每个单个成员。因此，例如，具有1-3个细胞的组是指具有1、2或3个细胞的组。类似地，具有1-5个细胞的组是指具有1、2、3、4或5个细胞的组，依此类推。前面是如本文使用的术语比如“大约”、“约”和“基本上”的数字包括所述数字(例如约10%= 10%)，而且还表示仍执行期望的功能或达到期望的结果的与所述数量接近的数量。例如，术语“大约”、“约”和“基本上”可指小于所述数量10%之内、5%之内、1%之内、0.1%之内和0.01%之内的数量。
根据前述内容，应当意识到的是，出于说明的目的已经在本文中描述了本公开的各种实施方案，并且可进行各种修改而不背离本公开的范围和精神。因此，本文公开的各种实施方案不旨在限制，真实的范围和精神由所附权利要求指明。
Claims (39)
1.一种骨髓容器，其包含：
组合物，其包含：
一定密度的非离子亲水性支链多糖，其中如果所述组合物与全血接触并离心，则所述密度足以允许全血流体移动穿过所述非离子亲水性支链多糖而不会分离红细胞，
所述非离子亲水性支链多糖具有大于20 kDa的分子量；和
TLR2配体，
其中所述组合物包含在所述容器内，和其中所述容器为无菌的。
2.权利要求1的骨髓容器，其中所述非离子亲水性支链多糖具有至少70 kDa的分子量。
3.权利要求1-2中任何一项的骨髓容器，其中所述非离子亲水性支链多糖包含蔗糖-表氯醇共聚物。
4.权利要求1-3中任何一项的骨髓容器，其中所述非离子亲水性支链多糖的密度小于1克/升，例如小于1 g/l、0.99 g/l、0.9 g/l、0.8 g/l、0.7 g/l、0.6 g/7、0.5 g/l、0.4 g/l、0.3 g/l、0.2 g/l、0.1 g/l、0.05 g/l、10-2 g/l、2 x 10-3 g/l、10-3 g/l、10-5 g/l、2 x 10-6 g/l、10-6 g/l、10-7 g/l、10-8 g/l、2 x 10-9 g/l或10-9 g/l，包括任何两个所列数值之间的范围，例如10-9-10-6 g/l、10-9-10-3 g/l、10-9-10-2 g/l、10-9-0.1 g/l、10-9-0.5 g/l、10-9-0.9 g/l、10-9-0.09 g/l、10-6-10-3 g/l、10-6-10-2 g/l、10-6-0.1 g/l、10-6-0.5 g/l、10-6-0.9 g/l、10-6-0.09 g/l、2 x 10-6-10-2 g/l、2 x 10-6-0.1 g/l、2 x 10-6-0.5 g/l、2 x 10-6-0.9 g/l、2 x 10-6-0.09 g/l、10-3-10-2 g/l、10-3-0.1 g/l、10-3-0.5 g/l、10-3-0.9 g/l、10-3-0.09 g/l、0.002-0.01 g/l、0.002-0.1 g/l、0.002-0.5 g/l、0.002 -0.9 g/l、0.002-0.09 g/l、0.01 g/l-0.99 g/l、0.01 g/l-0.9 g/l、0.01 g/l-0.5 g/l、0.01 g/l-0.2 g/l、0.01 g/l-0.1 g/l、0.1 g/l-0.99 g/l、0.1 g/l-0.9 g/l、0.1 g/l-0.5 g/l、0.1 g/l-0.2 g/l、0.5 g/l-0.99 g/l、0.5 g/l-0.9 g/l或0.5 g/l-0.7 g/l。
5.权利要求1-4中任何一项的骨髓容器，其中所述TLR2配体选自透明质烷、透明质酸、尿酸单钠晶体、双糖链蛋白聚糖、内质蛋白、HMGB1、HSP60、HSP70、人类心肌肌球蛋白、酵母聚糖、脂磷壁酸、来自血浆的脂蛋白、脂多糖(LPS)和肽聚糖，包括Pam2CSK4和Pam3CSK4。
6.权利要求1的骨髓容器，其中所述非离子亲水性支链多糖包含密度小于1克/升的蔗糖-表氯醇共聚物和其中所述TLR2配体包含透明质酸。
7.权利要求1-6中任何一项的骨髓容器，其中所述容器选自袋子、真空采血管和注射器。
8.权利要求1-7中任何一项的骨髓容器，其进一步包括整体递送装置。
9.权利要求1-8中任何一项的骨髓容器，其进一步包含葡聚糖。
10.权利要求9的骨髓容器，其中所述葡聚糖的浓度为至少约4%。
11.权利要求9-10中任何一项的骨髓容器，其进一步包含配置为容纳骨髓的体积，其中当所述体积中存在骨髓时，所述葡聚糖在骨髓和组合物中的浓度为至少约1%。
12.权利要求9-11中任何一项的骨髓容器，其中所述容器配置为由分离系统容纳。
13.一种分离系统，其包括：
底架，所述底架包含配置为容纳权利要求1-12中任何一项的骨髓容器的腔，所述底架包括轨道；和
布置于所述轨道上的轴，其中所述轴配置为沿着所述轨道移动，从而当将所述骨髓容器布置于所述底架中时压紧所述骨髓容器。
14.权利要求13的分离系统，其中所述轴配置为抵靠所述底架的内表面压紧所述骨髓容器。
15.权利要求13-14中任何一项的分离系统，其中所述轴选自滚轴和滑块。
16.权利要求13-14中任何一项的分离系统，其中所述轴配置为抵靠布置于所述底架中的骨髓容器卡入就位，从而限定所述骨髓容器的至少两个部分。
17.一种包含权利要求1-12中任何一项的骨髓容器和骨髓抽吸针比如鲁尔锁的试剂盒。
18.权利要求17的试剂盒，其进一步包含过滤器，所述过滤器的孔径小于骨髓细胞的直径。
19.权利要求18的试剂盒，其中所述孔径小于或等于200微米。
20.权利要求17-19中任何一项的试剂盒，其进一步包含活化/沉降溶液。
21.权利要求17-20中任何一项的试剂盒，其进一步包含权利要求13-16中任何一项的分离系统。
22.一种活化受试者的免疫细胞的方法，所述方法包括：
获得所述受试者的骨髓，所述骨髓包含免疫细胞；
将所述骨髓与非离子亲水性支链多糖和TLR2配体一起温育，
其中所述非离子亲水性支链多糖处于一定密度，其中如果所述骨髓与全血接触并离心，则所述密度足以允许全血流体移动穿过所述非离子亲水性支链多糖而不会分离红细胞，
其中所述非离子亲水性支链多糖具有大于20 kDa的分子量，和
其中进行所述温育直至活化所述免疫细胞；和
将所述活化的免疫细胞给予所述受试者。
23.权利要求22的方法，其进一步包括将受试者鉴定为需要免疫细胞活化。
24.权利要求23的方法，其中所述受试者患有癌症。
25.权利要求24的方法，其中所述温育进一步包括将所述骨髓与癌细胞抗原一起温育。
26.权利要求22-25中任何一项的方法，其中所述非离子亲水性支链多糖具有至少70kDa的分子量。
27.权利要求22-26中任何一项的方法，其中所述非离子亲水性支链多糖包含蔗糖-表氯醇共聚物。
28.权利要求22-27中任何一项的方法，其中非离子亲水性支链多糖的密度小于1克/升。
29.权利要求22-28中任何一项的方法，其中所述TLR2配体选自透明质烷、透明质酸、尿酸单钠晶体、双糖链蛋白聚糖、内质蛋白、HMGB1、HSP60、HSP70、人类心肌肌球蛋白、酵母聚糖、脂磷壁酸、来自血浆的脂蛋白、LPS和肽聚糖，包括Pam2CSK4和Pam3CSK4。
30.权利要求22的方法，其中所述非离子亲水性支链多糖包含密度小于1克/升的蔗糖-表氯醇共聚物和其中所述TLR2配体包含透明质酸。
31.权利要求23-29中任何一项的方法，其中所述非离子亲水性支链多糖包含密度小于1克/升的蔗糖-表氯醇共聚物和其中所述TLR2配体包含透明质酸。
32.权利要求22-31中任何一项的方法，其中所述温育在权利要求1-16中任何一项的骨髓容器中进行。
33.权利要求32的方法，其进一步包括：
将所述骨髓容器布置于权利要求17-21中任何一项的分离系统中；
将所述轴抵靠所述骨髓容器卡入就位，从而限定所述骨髓容器的两个部分；
在所述温育之后，使所述轴沿着所述轨道移动，从而压紧所述骨髓容器的内容物，并从所述骨髓中挤出免疫细胞。
34.权利要求22-33中任何一项的方法，其进一步包括将所述骨髓与活化/沉降溶液一起温育，从而从所述骨髓中沉降红细胞。
35.权利要求22-34中任何一项的方法，其中所述活化的免疫细胞包含骨髓细胞。
36.权利要求35的方法，其中所述活化的免疫细胞包含CD11b+ CD54+粒细胞和/或CD66b+嗜中性粒细胞。
37.权利要求22-36中任何一项的方法，其进一步包括在将所述活化的免疫细胞给予所述受试者之前，使所述活化的免疫细胞与所述非离子亲水性支链多糖和所述TLR2配体分开。
38.权利要求22-37中任何一项的方法，其中将所述活化的免疫细胞给予所述受试者的肌肉骨骼组织。
39.权利要求22-38中任何一项的方法，其中所述方法不包括白细胞去除术。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6838086B1 (en) * | 1998-08-27 | 2005-01-04 | Universitaetsklinikum Freiburg | Composition comprising low molecular weight hyaluronic acid fragments |
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|---|---|---|---|---|
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2023
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6838086B1 (en) * | 1998-08-27 | 2005-01-04 | Universitaetsklinikum Freiburg | Composition comprising low molecular weight hyaluronic acid fragments |
| US20160243165A1 (en) * | 2013-10-21 | 2016-08-25 | Dana-Farber Cancer Institute | Processing cell therapy products |
| JP2017178890A (ja) * | 2016-03-31 | 2017-10-05 | 富山県 | 自然免疫を活性化する粘膜ワクチン用アジュバント |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| ANUSHREE C. SHIRALI 等: "Activation of the innate immune system by the endogenous ligand hyaluronan", 《CURRE NT OPINION IN ORGAN TRANSPLANTATION》, 29 February 2008 (2008-02-29), pages 22 * |
| CHING-YI LAI 等: "Type II arabinogalactan from Anoectochilus formosanus induced dendritic cell maturation through TLR2 and TLR4", 《PHYTOMEDICINE》, 23 October 2015 (2015-10-23), pages 1211 * |
| DANFEI HUANG 等: ""A novel polysaccharide from the seeds of Plantago asiatica L. induces dendritic cells maturation through toll-like receptor 4", 《INTERNATIONAL IMMUNOPHARMACOLOGY》, 5 December 2013 (2013-12-05), pages 1 * |
| 徐冬勤 等: "β葡聚糖促进小鼠骨髓来源的树突状细胞成熟并增强其迁移能力", 《细胞与分子免疫学杂志》, 18 February 2016 (2016-02-18) * |
Also Published As
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