CN113267627B - 用nk细胞上tigit和tim-3确定乙肝相关肝癌预后的系统 - Google Patents

用nk细胞上tigit和tim-3确定乙肝相关肝癌预后的系统 Download PDF

Info

Publication number
CN113267627B
CN113267627B CN202110541407.5A CN202110541407A CN113267627B CN 113267627 B CN113267627 B CN 113267627B CN 202110541407 A CN202110541407 A CN 202110541407A CN 113267627 B CN113267627 B CN 113267627B
Authority
CN
China
Prior art keywords
tim
tigit
hepatitis
cells
liver cancer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110541407.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113267627A (zh
Inventor
杨志云
于莉华
杜娟
刘晓利
江宇泳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Ditan Hospital
Original Assignee
Beijing Ditan Hospital
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Ditan Hospital filed Critical Beijing Ditan Hospital
Priority to CN202110541407.5A priority Critical patent/CN113267627B/zh
Publication of CN113267627A publication Critical patent/CN113267627A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113267627B publication Critical patent/CN113267627B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56966—Animal cells
    • G01N33/56972—White blood cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57488—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds identifable in body fluids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供了一种TIGIT和TIM‑3作为生物标志物在判断乙肝相关肝癌患者预后中的应用。所述TIGIT和TIM‑3是所述患者NK细胞上的TIGIT和TIM‑3，其在NK细胞上的表达可用于辅助预测乙肝相关肝癌患者的疾病进展和结局。此外，本发明为患者提供了新的治疗靶点，为未来的乙肝相关肝癌免疫治疗提供新的思路。

Description

用NK细胞上TIGIT和TIM-3确定乙肝相关肝癌预后的系统
技术领域
本发明属于肝癌诊断领域，具体地，本发明涉及乙肝相关肝癌进展的生物标志物及其在乙肝相关肝癌的预后中的应用。
背景技术
肝癌是一种常见的恶性肿瘤，根据2018年全球癌症统计数据，肝癌的死亡率在全球癌症中排名第四。乙肝病毒感染是肝癌的最主要原因，而乙肝相关肝癌(Hepatitis BVirus Related Hepatocellular Carcinoma，HBV-HCC)的高发病率和死亡率一直是这个领域的研究重点。
能够在一定程度上反映肿瘤细胞恶性生物学行为的生物标志物，已经广泛用于肿瘤或癌症的早期检测或诊断、进展监测、预后评估等，至少可以作为一种辅助评估手段，为临床医生和患者提供非常重要的诊断信息，从而帮助针对性地实现个体化的精准医疗。而就乙肝相关肝癌患者的疾病进展监测，目前本领域尚缺乏可靠、合适的生物标志物及其相关手段与方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何对乙肝相关肝癌患者的肿瘤进展和生存进行预后预测。
本发明的发明人从NK细胞上存在的多种共抑制分子中发现，T细胞免疫球蛋白和酪氨酸基抑制基域(TIGIT)与T细胞免疫球蛋白结构域和粘液蛋白结构蛋白3(TIM-3)的共表达与乙肝相关肝癌进展呈正相关，与患者的临床预后不良有关。不受任何理论的限制，发现TIGIT和TIM-3协同介导乙肝相关肝癌患者NK细胞耗竭。
因此发现，乙肝相关肝癌患者的NK细胞上TIGIT和TIM-3可以作为一种生物标志物，二者在NK细胞上的(共)表达情况可以提供患者预后信息。基于上述发现，本发明提供以下技术方案。
一方面，本发明提供一种检测TIGIT和TIM-3表达的试剂在制备用于判断乙肝相关肝癌患者预后的产品中的应用。
在本发明的上下文中，术语“乙肝相关肝癌”是指既往已诊断为慢性乙型病毒性肝炎，同时根据2017年卫生部修订的《原发性肝癌诊疗规范》的诊断标准执行诊断的癌症。
优选地，所述TIGIT和TIM-3分别是所述患者NK细胞上的TIGIT和TIM-3。相应地，所述试剂检测所述患者NK细胞上的TIGIT和TIM-3的表达。因此，优选地，所述应用包括检测来自患者的样本中NK细胞上的TIGIT和TIM-3表达。根据本发明的具体实施方式，所述样本为血液，例如外周血。分离外周血中的单个核细胞，可以检测其中的NK细胞上TIGIT和TIM-3表达，例如表达与否或表达量(表达水平)。
根据本发明的具体实施方式，所述试剂可以分别是特异性结合TIGIT的抗体或其片段和特异性结合TIM-3的抗体或其片段，例如单克隆抗体或其片段，所述片段保持了抗体与TIGIT或TIM-3的特异性结合能力。在本发明的上下文中，针对来自患者的样本，所述试剂可以通过特异性结合细胞上TIGIT和TIM-3，检测这两种蛋白在细胞上的表达与否或表达量(表达水平)。
优选地，所述产品为检测试剂盒。
另一方面，本发明提供一种用于判断乙肝相关肝癌患者预后的系统，所述系统包括：
(1)样本处理模块，其设置为从所述患者获得外周血单个核细胞；
(2)检测模块，其设置为针对通过样本获取模块获得的外周血单个核细胞，检测其中NK细胞上TIGIT和TIM-3表达，得到TIGIT和TIM-3双阳性NK细胞(TIGIT+TIM-3+NK细胞)的比例，所述比例为TIGIT和TIM-3均为阳性的NK细胞的数量占相对NK细胞的总数量的比例；和
(3)预后判断模块，其设置为实现以下判断：
针对通过检测模块得到的比例，将所述比例与参考值相比，在所述比例高于参考值时，判断所述乙肝相关肝癌患者预后不良。
优选地，所述样本处理模块设置为从所述患者获得外周血，并从中分离外周血单个核细胞。
优选地，所述检测模块设置为使用试剂来检测TIGIT和TIM-3表达，如上文所述，所述试剂可以分别是特异性结合TIGIT的抗体或其片段和特异性结合TIM-3的抗体或其片段。根据本发明的具体实施方式，所述检测模块为流式细胞仪。
优选地，所述预后判断模块中采用的参考值为从乙肝相关肝癌患者群获得的所述比例的中位数。根据本发明的具体实施方式，从133名乙肝相关肝癌患者获得所述比例的中位数，具体为20.5％。
另一方面，本发明提供一种用于判断乙肝相关肝癌患者预后的产品，所述产品可以在本发明提供的系统中使用。
优选地，所述产品为检测试剂盒，其包括检测患者NK细胞上的TIGIT和TIM-3表达的试剂。如上所述，优选地，所述试剂可以分别是特异性结合TIGIT的抗体或其片段和特异性结合TIM-3的抗体或其片段。更优选地，所述试剂盒还包括用于从所述患者获得外周血的试剂，和/或用于从中分离外周血单个核细胞的试剂。
又一方面，本发明提供TIGIT和TIM-3作为生物标志物在制备用于判断乙肝相关肝癌患者预后的产品中的应用。
优选地，所述TIGIT和TIM-3是在所述患者NK细胞上的TIGIT和TIM-3。
优选地，所述产品为检测试剂盒。
本发明的发明人发现，乙肝相关肝癌患者的TIGIT+TIM-3+NK细胞表达比例升高，并且TIGIT+TIM-3+NK细胞高表达与乙肝相关肝癌患者的进展相关；检测发现，TIGIT+TIM-3+NK细胞的细胞因子分泌和杀伤以及增殖能力均减弱，且表现出耗竭表型。
因此，相对于现有技术，本发明针对乙肝相关肝癌，提供了一个新的双参数(TIGIT和TIM-3)的生物标记物，其在NK细胞上的表达可预测乙肝相关肝癌患者的疾病进展和结局；特别是，相对于NK细胞上的TIGIT和TIM-3的单独表达(TIGIT+NK细胞或TIM-3+NK细胞)，该双参数在NK细胞上的共表达更能有效预测患者的进展结局，因此更能为乙肝相关肝癌患者的预后提供辅助诊断信息。事实上，该双参数(TIGIT和TIM-3)不但是预测乙肝相关患者预后的一种新指标，而且还为患者提供了一个新的治疗靶点，为未来的乙肝相关肝癌治疗提供新的思路。
此外，对患者外周血单个核细胞(PMBC)进行检测即可获知该患者NK细胞上的TIGIT和TIM-3表达情况，因此本发明提供了一种基于外周血所含分子物质的简便易行的检测方法，该方法方便、易行，患者适应性好。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1.乙肝相关肝癌患者NK细胞上TIGIT和TIM-3共表达上调。其中，图1a、1b，流式细胞术分析正常人、慢乙肝、乙肝肝硬化和乙肝相关肝癌患者总NK细胞和NK细胞亚群的流式细胞术(CD56brightNK细胞调节亚群，CD56dimNK细胞杀伤亚群和CD56-NK细胞耗竭亚群)。图1c、1d，正常人、慢乙肝、乙肝肝硬化和乙肝相关肝癌患者总NK细胞和NK细胞亚群(CD56brightNK细胞调节亚群，CD56dimNK细胞杀伤亚群和CD56-NK细胞耗竭亚群)TIGIT(图1c，上面的小图从上到下依次示出正常人、慢乙肝、乙肝肝硬化和乙肝相关肝癌患者的结果；下面的小图每张从左到右依次示出正常人、慢乙肝、乙肝肝硬化和乙肝相关肝癌患者的结果)和TIM-3(图1d，上面的小图从上到下依次示出正常人、慢乙肝、乙肝肝硬化和乙肝相关肝癌患者的结果；下面的小图中每张从左到右依次示出正常人、慢乙肝、乙肝肝硬化和乙肝相关肝癌患者的结果)表达水平。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001。
图2.发生进展的乙肝相关肝癌患者NK细胞上TIGIT和TIM-3共表达比例升高。其中，图2a、2b，流式细胞术分析正常人、慢乙肝、乙肝肝硬化和乙肝相关肝癌患者总NK细胞和NK细胞亚群的(CD56brightNK细胞调节亚群，CD56dimNK细胞杀伤亚群和CD56-NK细胞耗竭亚群)TIGIT+TIM-3+NK细胞表达水平，其中图2b中每张从左到右依次示出正常人、慢乙肝、乙肝肝硬化和乙肝相关肝癌患者的结果。图2c，乙肝相关肝癌患者NK细胞上TIGIT和TIM-3相关性分析。图2d，流式细胞术展示乙肝相关肝癌患者NK细胞上TIGIT和TIM-3表达比例。图2e，箱式图分别展示TIGIT+NK细胞，TIM-3+NK细胞和TIGIT+TIM-3+NK细胞在患者进展和不进展两组中的比较。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001。
图3.生存曲线分析具有不同水平TIGIT+TIM-3+NK细胞的患者的无进展生存率比较。
图4.乙肝相关肝癌患者TIGIT+TIM-3+NK细胞存在功能耗竭。其中，图4a、4b、4c，乙肝相关肝癌患者TIGIT+TIM-3+NK细胞内染色IFN-γ(图4a)、TNF-α(图4b)和CD107a(图4c)表达比例。图4d，乙肝相关肝癌患者TIGIT+TIM-3+NK细胞Ki67表达比例。图4e，乙肝相关肝癌患者TIGIT+TIM-3+NK细胞T-betloEomeshi和T-bethiEomeslo表达比例。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。相关技术内容包括：
(一)研究对象
通过首都医科大学附属北京地坛医院中西医结合中心纳入了乙肝相关肝癌患者133例、慢性乙型病毒性肝炎(慢乙肝)患者25例、乙肝肝硬化患者23例、健康捐赠者32例的外周血样本。研究符合赫尔辛基宣言，经北京地坛医院伦理委员会批准，并获得知情同意。所有患者均排除艾滋病毒、慢性丙型病毒性感染、非噬肝病毒引起的肝病和转移性肝癌。
慢性乙型病毒性肝炎诊断标准：参照我国中华医学会制定的《慢性乙型肝炎防治指南》(2015年版)中的诊断标准执行，既往有慢性乙型病毒性肝炎病史或血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg+)阳性时间持续≥6个月即可诊断。
乙肝相关肝硬化诊断标准：参照我国中华医学会肝病分会制定的《肝硬化诊治指南》(2019年版)中的诊断标准执行，既往已诊断为慢性乙型病毒性肝炎，同时符合临床将肝硬化分为代偿期、失代偿期、再代偿期及肝硬化逆转期的诊断标准。
乙肝相关肝癌诊断标准：既往已诊断为慢性乙型病毒性肝炎，同时根据2017年卫生部修订的《原发性肝癌诊疗规范》的诊断标准执行，即可诊断。
所有纳入人群的临床特征见表1。
表1.正常人、慢乙肝、乙肝肝硬化和乙肝相关肝癌患者的临床特征
Figure BDA0003071944080000051
Figure BDA0003071944080000061
*p值<0.05慢乙肝与正常人、乙肝肝硬化和乙肝相关肝癌组比较
(二)样本收集
在本研究中，收集了纳入所有人群的5ml外周血，并置于抗凝血采集管(EDTA)中。按照已知方法分离外周血单个核细胞(PBMC)。
(三)多参数流式细胞术分析
NK细胞表面标记物用于多参数流式细胞术的抗体：抗人CD3-BV786(克隆SK7；563800)、抗CD19-APC-H7(克隆SJ25C1；560177)、抗CD14-BV650(克隆M5E2；563419)、抗CD56-BV510(克隆HCD56；318340)、抗CD16-BV711(克隆3G8；563127)、抗TIGIT-PE-CY7(克隆MBSA43；25-9500-42)，抗TIM-3-FITC(克隆F38-2E2；11-3109-42)、抗PD-1-PE(克隆EH12.2H7；329906)、抗CD39-APC(克隆A1；328210)、抗LAG-3-AF700(克隆T47-530；565775)、抗BTLA-PE-CY7(克隆MIH26；344515)、抗CD160-FITC(克隆BY55；562351)、抗2B4-BV421(克隆2-69；565750)和相应的同型对照。
NK细胞因子分泌功能检测：从乙肝相关肝癌患者外周血中分离PBMC，并用刺激系统刺激，包括IL-12(100ng/ml)、IL-15(20ng/ml)、IL-18(100ng/ml)、1μl高尔基体(1ml，cat555029)和抗CD107a-BUV395(克隆H4A3；565113)，在37℃和5％CO2培养箱中孵育4小时。细胞在PBS中洗涤，细胞外分别用CD3、CD14、CD19、CD56、CD16、TIGIT和TIM-3抗体染色，分别加入100μl试剂A固定细胞，然后加入50μl试剂B溶液进行细胞渗透，进一步用抗IFN-γ-AF700染色(克隆4S.B3；56-7319-42)和抗TNF-α-BV421(克隆单克隆抗体11；502932)抗体。
NK细胞转录因子表达分析：从乙肝相关肝癌患者外周血中分离出PBMC。用CD3、CD14、CD19、CD56、CD16、TIGIT和TIM-3抗体染色，分别加入TF-Fix/Perm工作液进行细胞固定和通透性，再加入TF-Perm/Wash工作液作为抗体稀释液和细胞洗涤缓冲液。使用抗T-bet-BV421(克隆O4-46；563318)、抗Eomes-PE(克隆WD1928；12-4877-41)和抗Ki67-BV605(克隆Ki-67；350521)抗体进行细胞内染色。用LSR-fortesa流式细胞仪获得实验数据，用FlowJo软件(10版)进行分析。
(四)统计分析
所有数据均采用GraphPad Prism 5.0和spss22.0统计软件进行分析。分类采用Fisher精确检验，连续变量采用t检验或非参数检验。对于两个以上独立样本，Tukey多重比较检验采用单因素方差分析。非正态分布数据用Mann-Whitney U检验表示和分析。用Pearson和Spearman相关系数分析TIGIT和TIM-3在NK细胞中的表达。采用生存曲线进行生存分析，采用对数秩检验比较两组的生存时间。P值<0.05具有统计学意义。
实施例1乙肝相关肝癌患者TIGIT+TIM-3+NK细胞表达比例升高
为了评估TIGIT和TIM-3的表达水平，我们采用流式细胞术分析了正常人、慢性乙型肝炎患者、乙肝肝硬化患者和乙肝相关肝癌患者中TIGIT和TIM-3的表达水平。
首先，我们发现乙肝相关肝癌患者总NK细胞比例明显低于正常人和慢性乙型肝炎患者(P<0.01)，但乙肝相关肝癌患者和乙肝肝硬化患者之间无显著差异(图1a，1b)。随后，我们比较了TIGIT和TIM-3在总NK细胞和各亚群中的比例变化，在正常人、慢性乙型肝炎患者、乙肝肝硬化患者和乙肝相关肝癌患者中的情况。与正常人、慢性乙型肝炎和乙肝肝硬化患者的总NK细胞比例相比，乙肝相关肝癌患者的TIGIT+NK细胞表达水平升高(P<0.01)(图1c)。乙肝相关肝癌患者TIM-3+NK细胞的表达水平也明显高于正常人和慢性乙型肝炎患者(P<0.001)；然而，在乙肝相关肝癌患者和乙肝肝硬化患者中，总NK细胞中TIM-3的表达没有统计学意义的差异(图1d)。有趣的是，我们发现TIGIT和TIM-3有一定比例的共表达；在乙肝相关肝癌患者中TIGIT和TIM-3的共表达水平也显著升高(P<0.01)(图2a，2b)。同时，乙肝相关肝癌患者总NK细胞TIGIT和TIM-3的表达水平呈显著正相关(r＝0.5218，P<0.0001)(图2c)。
实施例2 TIGIT+TIM-3+NK细胞高表达与乙肝相关肝癌患者的进展相关
为探讨TIGIT+TIM-3+NK细胞与乙肝相关肝癌患者临床转归的关系，我们对133例乙肝相关肝癌患者进行了研究。根据是否发生进展分为进展组和无进展组。比较TIGIT+NK细胞，TIM-3+NK细胞和TIGIT+TIM-3+NK细胞在两组中的比例。我们发现进展组乙肝相关肝癌患者中TIGIT+TIM-3+NK细胞的比例显著高于无进展组(P<0.001)(图2d，2e)。根据TIGIT+TIM-3+NK细胞比例，以TIGIT+TIM-3+NK细胞比例的中位数(20.5％)为界值。我们将133例乙肝相关肝癌患者分为两组：TIGIT+TIM-3+高表达组(>20.5％)和TIGIT+TIM-3+低表达组(≤20.5％)。其中，有65例患者为TIGIT+TIM-3+高表达组，68例患者为TIGIT+TIM-3+低表达组。我们分析了两组患者的临床特征，发现两组患者在年龄、性别、高血压、糖尿病、冠心病、巴塞罗那分期、肝功能分级、乙肝病毒载量、乙肝e抗原、肿瘤大小、肿瘤个数、血红蛋白、血小板、丙氨酸氨基转移酶、白蛋白、γ谷氨酰转肽酶、甲胎蛋白、是否有腹水、肝性脑病、血管转移和远处转移等方面无显著性差异(表2)。TIGIT+TIM-3+高表达组患者有门脉高压比例更高，但两组间无统计学差异。在不同治疗方式间两组也无统计学意义。我们进一步观察了两组患者是否发生肿瘤进展，发现TIGIT+TIM-3+高表达组的乙肝相关肝癌患者肿瘤进展率较高(38/27(58.5％)vs.23/45(33.8％)，P＝0.004，表2)。
表2.乙肝相关肝癌患者在TIGIT+TIM-3+NK细胞不同水平的人口学和临床特征
Figure BDA0003071944080000081
Figure BDA0003071944080000091
实施例3 TIGIT+TIM-3+NK细胞高表达与乙肝相关肝癌预后不良相关
为了进一步确定肿瘤进展对TIGIT+TIM-3+共表达的影响，我们采用生存曲线比较了临床亚组中两组(TIGIT+TIM-3+高表达组和TIGIT+TIM-3+低表达组)的无进展生存时间。在乙肝相关肝癌总人群中，我们发现TIGIT+TIM-3+高表达组的无进展生存率低于TIGIT+TIM-3+低表达组(图3；HR＝2.05，95％CI1.24-3.04，P＝0.005)。
实施例4乙肝相关肝癌患者TIGIT+TIM-3+NK细胞存在功能耗竭
为了进一步研究乙肝相关肝癌患者TIGIT+TIM-3+NK细胞是否存在功能耗竭，我们检测了细胞因子的分泌功能和杀伤功能。与TIGIT-TIM-3-和TIGIT-TIM-3+NK细胞相比，乙肝相关肝癌患者的TIGIT+TIM-3+NK细胞产生IFN-γ的能力降低(P<0.05，图4a)。同时，与TIGIT-TIM-3-、TIGIT+TIM-3-和TIGIT-TIM-3+NK细胞相比，乙肝相关肝癌患者的TIGIT+TIM-3+NK细胞产生TNF-α和CD107a的能力降低(P<0.05，图4b，4c)。接下来我们检测了乙肝相关肝癌患者NK细胞的增殖功能，发现乙肝相关肝癌患者TIGIT+TIM-3+NK细胞Ki67的表达水平明显低于TIGIT-TIM-3-和TIGIT+TIM-3-NK细胞，表明其增殖能力减弱(P<0.05，图4d)。此外，我们在乙肝相关肝癌患者中检测NK细胞转录因子T-bet和Eomes，发现乙肝相关肝癌患者中TIGIT+TIM-3+NK细胞上的Eomes的比例相比于TIGIT-TIM-3-、TIGIT+TIM-3-和TIGIT-TIM-3+NK细胞显著升高，而T-bet的表达水平没有显著变化(P<0.05，图4e)。
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。

Claims (9)

1.一种用于判断乙肝相关肝癌患者预后的系统，所述系统包括：
(1) 样本处理模块，其设置为从所述患者获得外周血单个核细胞；
(2) 检测模块，其设置为针对通过样本获取模块获得的外周血单个核细胞，检测其中NK细胞上TIGIT和TIM-3表达，得到TIGIT和TIM-3双阳性NK细胞（TIGIT+TIM-3+NK细胞）的比例，所述比例为TIGIT和TIM-3均为阳性的NK细胞的数量占相对NK细胞的总数量的比例；和
(3) 预后判断模块，其设置为实现以下判断：
针对通过检测模块得到的比例，将所述比例与参考值相比，在所述比例高于参考值时，判断所述乙肝相关肝癌患者预后不良。
2.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述样本处理模块设置为从所述患者获得外周血，并从中分离外周血单个核细胞。
3.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述检测模块设置为使用试剂来检测TIGIT和TIM-3表达。
4.根据权利要求3所述的系统，其特征在于，所述试剂分别是特异性结合TIGIT的抗体或其片段和特异性结合TIM-3的抗体或其片段。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的系统，其特征在于，所述预后判断模块中采用的参考值为从乙肝相关肝癌患者群获得的所述比例的中位数。
6.根据权利要求5所述的系统，其特征在于，所述中位数为20.5%。
7.一种用于在权利要求1至6中任一项所述的系统中使用以判断乙肝相关肝癌患者预后的产品，所述产品为检测试剂盒，其包括检测所述患者NK细胞上的TIGIT和TIM-3表达的试剂。
8.根据权利要求7所述的产品，其特征在于，所述试剂分别是特异性结合TIGIT的抗体或其片段和特异性结合TIM-3的抗体或其片段。
9.根据权利要求7或8所述的产品，其特征在于，所述检测试剂盒还包括用于从所述患者获得外周血的试剂，和/或用于从中分离外周血单个核细胞的试剂。
CN202110541407.5A 2021-05-18 2021-05-18 用nk细胞上tigit和tim-3确定乙肝相关肝癌预后的系统 Active CN113267627B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110541407.5A CN113267627B (zh) 2021-05-18 2021-05-18 用nk细胞上tigit和tim-3确定乙肝相关肝癌预后的系统

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110541407.5A CN113267627B (zh) 2021-05-18 2021-05-18 用nk细胞上tigit和tim-3确定乙肝相关肝癌预后的系统

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113267627A CN113267627A (zh) 2021-08-17
CN113267627B true CN113267627B (zh) 2022-09-20

Family

ID=77231482

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110541407.5A Active CN113267627B (zh) 2021-05-18 2021-05-18 用nk细胞上tigit和tim-3确定乙肝相关肝癌预后的系统

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113267627B (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110392595A (zh) * 2016-12-09 2019-10-29 昂克免疫有限公司 改进的基于nk细胞的疗法
WO2020175960A1 (ko) * 2019-02-28 2020-09-03 재단법인 아산사회복지재단 자연살해세포 활성 검출용 미세입자 및 이를 이용한 검출 방법
CN111655843A (zh) * 2017-10-24 2020-09-11 博爱米拉索勒股份公司 Nk或t细胞及其用途
WO2021054789A1 (ko) * 2019-09-18 2021-03-25 주식회사 에스엘바이젠 신규 키메라 항원 수용체 암호화 유전자가 형질도입된 유전자 변형 nk 세포주 및 그의 용도
CN112672758A (zh) * 2018-06-25 2021-04-16 英摩杜伦治疗学公司 癌症治疗

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110392595A (zh) * 2016-12-09 2019-10-29 昂克免疫有限公司 改进的基于nk细胞的疗法
CN111655843A (zh) * 2017-10-24 2020-09-11 博爱米拉索勒股份公司 Nk或t细胞及其用途
CN112672758A (zh) * 2018-06-25 2021-04-16 英摩杜伦治疗学公司 癌症治疗
WO2020175960A1 (ko) * 2019-02-28 2020-09-03 재단법인 아산사회복지재단 자연살해세포 활성 검출용 미세입자 및 이를 이용한 검출 방법
WO2021054789A1 (ko) * 2019-09-18 2021-03-25 주식회사 에스엘바이젠 신규 키메라 항원 수용체 암호화 유전자가 형질도입된 유전자 변형 nk 세포주 및 그의 용도

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Chisom Ifeoma Adaeze Okwor等.Expression of Inhibitory Receptors on T and NK Cells Defines Immunological Phenotypes of HCV Patients with Advanced Liver Fibrosis.《IScience》.2020,第23卷 *
Siyu Tan等.Tim-3 Hampers Tumor Surveillance of Liver-Resident and Conventional NK Cells by Disrupting PI3K Signaling.《Cancer Research》.2020,第80卷(第5期), *

Also Published As

Publication number Publication date
CN113267627A (zh) 2021-08-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Jones et al. Serum CD163 and TARC as disease response biomarkers in classical Hodgkin lymphoma
Morice et al. Novel immunophenotypic features of marrow lymphoplasmacytic lymphoma and correlation with Waldenström's macroglobulinemia
JP4798801B2 (ja) 循環する癌細胞におけるＨｅｒ−２／ｎｅｕタンパク質のレベルの上昇の検出および処置
He et al. HLA-G expression in human breast cancer: implications for diagnosis and prognosis, and effect on allocytotoxic lymphocyte response after hormone treatment in vitro
Periša et al. Red blood cell distribution width as a simple negative prognostic factor in patients with diffuse large B-cell lymphoma: a retrospective study
Syrigos et al. Circulating tumor cells count as a predictor of survival in lung cancer
Dlouhy et al. High serum levels of soluble interleukin-2 receptor (sIL2-R), interleukin-6 (IL-6) and tumor necrosis factor alpha (TNF) are associated with adverse clinical features and predict poor outcome in diffuse large B-cell lymphoma
Möller et al. Blood immune cell biomarkers in patient with lung cancer undergoing treatment with checkpoint blockade
Lee et al. Circulating tumor cells in breast cancer: applications in personalized medicine
Inamoto et al. Association of plasma CD163 concentration with de novo–onset chronic graft-versus-host disease
Wang et al. Distribution and reference interval establishment of neutral‐to‐lymphocyte ratio (NLR), lymphocyte‐to‐monocyte ratio (LMR), and platelet‐to‐lymphocyte ratio (PLR) in Chinese healthy adults
WO2019156568A1 (en) Methods for predicting treatment outcome and/or for selecting a subject suitable for immune checkpoint therapy
Slade et al. Persistence of bone marrow micrometastases in patients receiving adjuvant therapy for breast cancer: results at 4 years
CN107250796B (zh) 用于鉴别对雄激素受体靶向疗法的抵抗性的循环肿瘤细胞诊断
Ichiki et al. Clinicopathological analysis of 320 cases of diffuse large B-cell lymphoma using the Hans classifier
Larousserie et al. Evidence for IL-35 expression in diffuse large B-Cell lymphoma and impact on the patient's prognosis
Guerrero et al. Proteomic profiling of HTLV-1 carriers and ATL patients reveals sTNFR2 as a novel diagnostic biomarker for acute ATL
Awasthi et al. EpCAM-based flow cytometric detection of circulating tumor cells in gallbladder carcinoma cases
Karube et al. Classical Hodgkin lymphoma, lymphocyte depleted type: clinicopathological analysis and prognostic comparison with other types of classical Hodgkin lymphoma
Wang et al. Prognostic value of peripheral inflammatory markers in preoperative mucosal melanoma: a multicenter retrospective study
EP3165926A1 (en) Method for characterization of cell specific microvesicles
Cabrera et al. Hepatocellular carcinoma immunopathogenesis: clinical evidence for global T cell defects and an immunomodulatory role for soluble CD25 (sCD25)
Arana Echarri et al. A phenomic perspective on factors influencing breast cancer treatment: Integrating aging and lifestyle in blood and tissue biomarker profiling
WO2019117132A1 (ja) がん免疫療法の予後予測のためのバイオマーカー
Xia et al. Neutrophil count to lymphocyte count ratio is a potential diagnostic index for bacteremia in adult

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant