CN113262297A - 一种基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗及其配置方法和应用 - Google Patents

Abstract

一种基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗及其配制方法和应用，根据巴氏菌（Pasteurella菌）与肺癌活检中CD8+ T细胞的浸润呈强阳性关系，利用巴斯德菌与细胞毒性CD8+ TIL呈显著正相关，与M2巨噬细胞呈负相关；以及Coriobacteriaceae菌科与M2巨噬细胞呈正相关，与CD8+细胞呈负相关；巴氏菌（Pasteurella菌）的丰度与肿瘤细胞的生长呈负相关的特性，采用巴氏菌制作基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗。本发明提出基于巴氏菌制作的肺癌治疗性疫苗，可以有效抑制肺癌肿瘤细胞的生长，延长患者的生命周期。

Description

一种基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗及其配置方法和应用

技术领域

本发明涉及到一种疫苗及其制作方法和应用，尤其是指一种基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗及其配置方法和应用，该种基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗及其配置方法和应用可以为基于细菌的肺癌疫苗治疗提供帮助；属于医药制作技术领域。

背景技术

肺癌是世界上最常见的癌症类型。尽管在癌症治疗方面取得了重大进展，但肺癌仍然在所有癌症相关死亡中所占比例最大。肺癌是癌症相关死亡的主要原因。虽然肺癌的治疗策略包括手术切除、化疗和靶向治疗已经取得了显著的进展，但患者的预后并没有发生显著的变化。目前正在评估许多疫苗策略来作为癌症免疫治疗的一种选择。以病毒为基础的疫苗TG4010加化疗可提高非小细胞肺癌(NSCLC)患者的无进展生存期。

肺部以前被认为是无菌的。基于核酸16S rRNA序列的免培养方法表明，下呼吸道含有多种类型的细菌。在许多研究中描述了肺癌患者独特的肺微生物群。微生物群影响肺癌的潜在机制可分为三类:炎症环境的形成、代谢作用和基因毒性。当有害微生物占领肺部环境时，就会发生肺部的生态失调。在肺癌患者中，口腔内的Capnocytophaga和Veillonella明显增多。在下呼吸道环境中，肺癌患者支气管肺泡液(BAL)中比较多见的是Veillonella和Megasphaera。然而，这些驻留在呼吸道的微生物在肺癌进展中的具体作用仍不清楚。

癌症和炎症之间的关系已经讨论很久了。炎症可分为急性炎症和慢性炎症，前者为积极的反应，后者与癌症进展有关。与慢性炎症相关的感染性或非感染性组织损伤易诱发癌症。慢性病毒、细菌和寄生虫感染与多种癌症类型有关。炎性微环境、血管生成、促炎性细胞因子均参与了肿瘤的进展。相反，早在1891年，威廉·柯利(William Coley)就发现了急性感染和癌症发展之间的负相关，当时他使用细菌提取物诱导肿瘤消退。

许多研究表明，呼吸道包含多种类型的细菌，在研究中描述了肺癌患者独特的肺微生物群。这些肺部微生物在肺癌进展中的具体作用尚不清楚。因此很有必要对此加以进一步的研究。

通过专利检索没发现有与本发明相同技术的专利文献报道，与本发明有一定关系的专利主要有以下几个：

1、申请号为CN201510210593.9，名称为“一种放射抗拒性肺癌全细胞疫苗及其制备方法和应用”，申请人为复旦大学附属金山医院的中国发明专利，该专利公开了一种放射抗拒性肺癌全细胞疫苗及其制备方法和应用，具体地，本发明建立了一个放射抵抗性显著提高的放射抗拒性肺癌细胞株，保藏号为CCTCC No.C201537，利用该细胞株制备得到肺癌全细胞疫苗，通过动物实验证实该肺癌全细胞疫苗具备显著抑制小鼠肺癌肿瘤生长、促进移植瘤细胞凋亡、降低移植瘤免疫逃逸PDL-1蛋白表达的作用，且与CpG ODN联用抑瘤作用更加显著，并且部分小鼠肿瘤完全消失，获得持久特异性抗肿瘤效果。

2、申请号为CN201310174082.7，名称为“干细胞样肺癌细胞制备及其抗原组合物负载树突状细胞的方法与试剂盒”，申请人为北京希普生国际生物医学研究院的中国发明专利，该专利公开了一种制备干细胞样肺癌细胞的方法，其中，所述方法包括鉴定待测肺癌细胞标本中是否存在干细胞样肺癌细胞的步骤：所述步骤包括检测所述待测肺癌细胞标本中是否特异表达以下差异蛋白的至少两种：蛋白激酶Ciota、五次跨膜单链糖蛋白Prominin1、乙醛脱氢酶1或乳腺癌耐药蛋白ATP结合转运蛋白G超家族成员2。本发明还提供了制备所述干细胞样肺癌细胞抗原负载该抗原树突状细胞的方法以及通过所述方法获得的树突细胞疫苗。

3、申请号为CN200980131202.7，名称为“CDCA1表位肽及包含它的疫苗”，申请人为肿瘤疗法科学股份有限公司的中国发明专利，该专利公开了一种针对癌症的肽疫苗。具体而言，该发明描述了自CDCA1衍生的引发CTL的表位肽；还提供特异性识别经所述肽冲激的HLA-A24阳性靶细胞的建立的CTL；还提供了呈递任何所述肽的抗原呈递细胞和外来体以及用于诱导抗原呈递细胞的方法。该发明进一步提供含有CDCA1多肽或编码它们的多核苷酸以及外来体和抗原呈递细胞作为活性组分的药物制剂。另外，该发明提供了用于治疗和/或预防(即防范)癌症(肿瘤)，和/或预防它们的手术后复发的方法，以及用于诱导CTL的方法、用于诱导抗肿瘤免疫的方法，这些方法使用该发明的CDCA1多肽、编码所述多肽的多核苷酸、呈递所述多肽的外来体或抗原呈递细胞、或药物制剂。

通过对上述这些专利的仔细分析，这些专利虽然都涉及了一些疫苗的制作和应用，但是都没有从支气管肺泡液(BAL)的Pasteurella菌与肿瘤细胞的生长的关系来进行研究，而且前面的这些研究仍一直还处于研究阶段，尚未见相关的疫苗问世，因此前面所提出的问题仍然存在，所以仍有待进一步加以研究改进。

发明内容

本发明的目的在于针对现有肺癌患者的治疗所存在的不足，提出一种新的治疗性肺癌疫苗及其配置方法和应用，该种基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗及其配置方法和应用可以为基于细菌的肺癌疫苗治疗提供帮助，形成治疗性的肺癌疫苗。

为了达到这一目的，本发明提供了一种基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗，根据巴氏菌（Pasteurella菌）与肺癌活检中CD8+ T细胞的浸润呈强阳性关系，利用巴斯德菌与细胞毒性CD8+ TIL呈显著正相关，与M2巨噬细胞呈负相关；以及Coriobacteriaceae菌科与M2巨噬细胞呈正相关，与CD8+细胞呈负相关；巴氏菌（Pasteurella菌）的丰度与肿瘤细胞的生长呈负相关的特性，采用巴氏菌作为菌种制作基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗。

进一步地，所述的治疗性肺癌疫苗为基于巴氏菌药学上可接受的载体，经过人工减毒、灭火或利用基因工程方法制成的所形成的制作的疫苗。

进一步地，所述的药学上可接受的载体包含其中存在所述免疫原的水相和油相的乳剂。

进一步地，所述的药学上可接受的载体为基于巴氏菌气溶胶所形成的气雾剂，气雾剂中含有丰度的巴氏菌（Pasteurella菌）。

进一步地，所述的巴氏菌气溶胶中巴氏菌的丰度为30%以上。

一种基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗的配制方法，采用巴氏菌（Pasteurella菌）作为疫苗的菌种，然后按照疫苗的生产制作方法，经过人工减毒、灭火或利用基因工程方法制作出基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗。

进一步地，所述的治疗性肺癌疫苗为巴氏菌（Pasteurella菌）通过雾化装置制成气雾化气溶胶，供患者吸入。

进一步地，所述的气雾化气溶胶控制在直径0.3-0.7μm。

一种如权利要求1所述基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗的应用，治疗性肺癌疫苗主要用于基于细菌的肺癌疫苗治疗；在已感染病原微生物或已患有肺癌的机体中，通过诱导特异性的免疫应答，达到治疗或防止肺癌疾病恶化。

本发明的优点在于：

在本发明研究中，发明人评估了吸入支气管肺泡液(BAL)对肺癌生长的影响。在荷瘤小鼠模型中检测了基于微生物的免疫和致癌作用。发明人发现吸入从非小细胞肺癌(NSCLC)患者收集的BAL会改变肺菌群，抑制肿瘤细胞生长。其抑制作用是由于CD3和CD8+ T细胞的浸润和M2巨噬细胞的减少。NSCLC BAL吸入组以Pasteurella菌为主，非癌对照组和PBS吸入组以Delftia为主。LDA显示NSCLC吸入组中Pasteurella菌属、Pseudomonas菌属、Chryseobacterium菌属增多，PBS组和非癌组中Delftia、Ezakiella、Blautia、Cloacibacterium、Microvirga等增多。发明人发现巴斯德菌与细胞毒性CD8+ TIL呈显著正相关，与M2巨噬细胞呈负相关。Coriobacteriaceae菌科与M2巨噬细胞呈正相关，与CD8+细胞呈负相关。Pasteurella菌的丰度与肿瘤细胞的生长呈负相关。本发明研究发现基于巴氏菌的治疗性疫苗为利用巴氏菌（Pasteurella菌）在肿瘤微环境中的CD8+ T细胞破坏癌细胞，产生全身肿瘤特异性免疫，形成长期的抗肿瘤记忆反应的特性可以制作成治疗性疫苗。

附图说明

图1是支气管和肺泡腔的BAL示意图；

图2是NSCLC患者雾化吸入BAL能够抑制肺癌细胞的生长效果图；

图3是苏木精和伊红染色显示肺内有肿瘤结节检测结果图；

图4是CD3和CD8在肺癌活检中呈正相关图；

图5是浸润CD3+和CD8+淋巴细胞的数量与肿瘤负荷呈负相关图；

图6是OTUs主成分分析图；

图7是差异丰度属图；

图8是优势属丰度之间关联图；

图9是Pasteurella丰度与肿瘤负荷关联图；

图10是Pasteurella的丰度与CD3+和CD8+ T细胞的浸润关联图；

图11是Coriobacteriaceae与肿瘤负荷关联图；

图12是Coriobacteriaceae丰度与CD8+ T细胞数量关联图；

图13是Pasteurella的丰度与细胞毒CD8+ TIL关联图；

图14是Pasteurella的丰度免疫抑制M2关联图；

图15是Coriobacteriaceae与细胞毒CD8+ TIL关联图；

图16是Coriobacteriaceae与与M2关联图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例来进一步阐述本发明。

实施例一

通过附图可以看出，本发明涉及一种基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗，根据巴氏菌（Pasteurella菌）与肺癌活检中CD8+ T细胞的浸润呈强阳性关系，利用巴斯德菌与细胞毒性CD8+ TIL呈显著正相关，与M2巨噬细胞呈负相关；以及Coriobacteriaceae菌科与M2巨噬细胞呈正相关，与CD8+细胞呈负相关；巴氏菌（Pasteurella菌）的丰度与肿瘤细胞的生长呈负相关的特性，采用巴氏菌作为菌种制作基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗。

进一步地，所述的治疗性肺癌疫苗为基于巴氏菌药学上可接受的载体，经过人工减毒、灭火或利用基因工程方法制成的所形成的制作的疫苗。

进一步地，所述的药学上可接受的载体包含其中存在所述免疫原的水相和油相的乳剂。

进一步地，所述的药学上可接受的载体为基于巴氏菌气溶胶所形成的气雾剂，气雾剂中含有丰度的巴氏菌（Pasteurella菌）。

进一步地，所述的巴氏菌气溶胶中巴氏菌的丰度为30%以上。

上述基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗的配制方法是：采用巴氏菌（Pasteurella菌）作为疫苗的菌种，然后按照疫苗的生产制作方法，经过人工减毒、灭火或利用基因工程方法制作出基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗。

进一步地，所述的治疗性肺癌疫苗为巴氏菌（Pasteurella菌）通过雾化装置制成气雾化气溶胶，供患者吸入。

进一步地，所述的气雾化气溶胶控制在直径0.3-0.7μm。

上述基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗的应用：上述治疗性肺癌疫苗主要用于基于细菌的肺癌疫苗治疗；在已感染病原微生物或已患有肺癌的机体中，通过诱导特异性的免疫应答，达到治疗或防止肺癌疾病恶化。

在本发明的研究中，发明人的发现表明，独特的微生物群组成与癌症的进展有关。肺活检中Pasteurella菌丰度高，对荷瘤小鼠的肿瘤生长有明显的抑制作用。发明人通过试验证明CD8+ T细胞浸润可以决定其抑制作用。发明人的研究为基于细菌的肺癌疫苗治疗提供了新的思路和方向。具体研究如下：

1. 肺癌患者的支气管肺泡液（BAL）中的Pasteurella菌抑制了肺癌细胞的生长

为了研究BAL在癌症进展中的作用，发明人雾化吸入了8个人，包括非癌对照和肺癌患者到试验小鼠。收集支气管和肺泡腔的BAL(如附图1所示)。治疗方案如下：

试验小鼠腹腔注射广谱抗生素头孢哌酮，每日1次，连续5天，然后雾化吸入含Pasteurella菌的细菌疫苗BAL。BAL中的气溶胶是由一个带喷嘴的雾化吸入装置产生的。小鼠分为3组:PBS组雾化吸入PBS，每天1次，连续3天;非癌对照组雾化吸入非癌对照组BAL，每日1次，连续3天；NSCLC组给予非小细胞肺癌患者BAL雾化吸入，每日1次，连续3天。雾化作用7天后，经静脉注射增效luci-LLC细胞到小鼠体内。体内成像被用来测量癌细胞在肺部的生长。发明人发现，与非癌症对照组或PBS对照组相比，NSCLC患者雾化吸入Pasteurella菌的BAL能够抑制肺癌细胞的生长(图2所示)。PBS组和非癌对照组小鼠肺内形成的肿瘤模块数量较多。苏木精和伊红染色显示肺内有肿瘤结节(图3所示)。

2. 非小细胞肺癌患者的BAL增加了肺中CD3+和CD8+ T细胞的浸润

为了研究吸入BAL抑制肿瘤生长的机制，发明人采用免疫荧光法检测荷瘤小鼠肺癌活检组织中CD3和CD8的表达。在肺癌活检中发现CD3+和CD8+ T细胞浸润。与非肿瘤对照组和PBS组相比，NSCLC组CD3+、CD8+ T细胞浸润明显增加。发明人观察到CD3和CD8在肺癌活检中呈正相关(图4所示)。浸润CD3+和CD8+淋巴细胞的数量与肿瘤负荷呈负相关(图5所示)。提示非小细胞肺癌患者BAL抑制肿瘤生长部分是由于免疫应答所致。

3. BAL吸入改变了荷瘤小鼠的肺微生物群

微生物具有高度的免疫原性，可以触发免疫反应。为了确定吸入BAL后肺部微生物群的组成，发明人做了16s rRNA测序来检测肺部的不同菌群。利用物种积累曲线来估计小鼠肺部的物种数量。随着样本量的增加，otu趋于平稳，说明本研究的样本量足够大，可以反映丰富性(数据未显示)。共检出159属核心肺菌群。非小细胞肺癌组核心肺菌群占非癌对照组总otu的41%，PBS组占非癌对照组的33%。OTUs主成分分析和相似点分析(ANOSIM)显示非小细胞肺癌组与非肿瘤对照组或PBS组肺菌群的差异(R = 0.574, p = 0.001)，如附图6所示。非癌对照组与PBS组肺菌群差异无统计学意义(R=-0.106, p=0.842)。NSCLC组的微生物群落以Pasteurella菌为主，而非癌对照组和PBS组的微生物群落以Delftia为主。基于属丰度的相似性，聚类分析所示。提示NSCLC组与其他两组存在差异。非癌对照组与PBS组在属丰度上具有较高的相似性。

4. Pasteurella菌丰度越高，肿瘤负担越轻

发明人通过LEfSe分析进一步鉴定了这3组小鼠的差异丰度属。如图7所示，LEfSe分析的plot图显示了非小细胞肺癌组、非癌对照组和PBS组的微生物分类群LDA评分差异有统计学意义。LDA显示NSCLC组Pasteurella, Pseudomonas和Chryseobacterium属的增加，PBS组Blautia、cloacibacteria和Microvirga属等增加。进化分枝图显示出组间的差异。在3组构建的微生物群落网络中，优势属丰度之间存在显著正相关。如图8所示，Pasteurella与Acinetobacter呈正相关。发明人然后分析了Pasteurella、Coriobacteriaceae与肿瘤负荷的关系。发明人发现Pasteurella丰度与肿瘤负荷呈显著负相关(图9所示)。Pasteurella的丰度与CD3+和CD8+ T细胞的浸润呈正相关(图10所示)，说明Pasteurella触发了细胞毒免疫应答。而Coriobacteriaceae与肿瘤负荷呈正相关(图11所示)，其丰度与CD8+ T细胞数量呈负相关(图12所示)。

5. 细胞毒活性CD8+ TIL抑制肿瘤生长

如上图6-9所示，吸入非小细胞肺癌患者的BAL后，肺菌群的组成发生了显著改变，Pasteurella是肺菌群的优势属。然后发明人分析了Pasteurella与免疫应答的关系。发明人发现，与PBS和非癌症对照组相比，NSCLC组的CD8+ T细胞显著增加。Pasteurella的丰度与细胞毒CD8+ TIL呈正相关(图13所示)，与免疫抑制M2呈负相关(图14所示)。而Coriobacteriaceae与细胞毒CD8+ TIL呈负相关(图15所示)，与M2呈正相关(图16所示)。

上述所列实施例，只是结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述；显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例，而且本说明书中所引用的如“上”、“下”、“前”、“后”、“中间”等用语，亦仅为便于叙述的明了，而非用以限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容下，当亦视为本发明可实施的范畴。同时，说明书附图所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容所能涵盖的范围内。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明的优点在于：

本发明在研究中发现肺癌患者的BAL改变了肺菌群的组成。Pasteurella在肺中的丰度越高，通过诱导细胞毒性CD8+细胞和抑制M2巨噬细胞来降低肿瘤负担。

肺里有各种各样的微生物。微生物群落在维持宿主的生理平衡方面起着重要的作用，如帮助宿主吸收营养、抵抗病原体、降解毒物和调节免疫系统等。健康肺的主要门是拟杆菌门，特别是普氏杆菌门和厚壁菌门。葡萄球菌，芽孢杆菌，流感嗜血杆菌和白色念珠菌已被确定在肺癌患者炎症中存在。然而，无论是SPF级还是非SPF级的小鼠，都具有相同的高级属，即Ralstonia、Lactobacillus、Enterobacteriaceae和Sphingomonas。从非spf级小鼠的肺中可以分离得到Pasteurellaceae、Enterobacteria和Firmicutes。肺癌的发生与局部生态失调和炎症有关。局部微生物区系可以通过激活肺内存在的γδT细胞引发肺腺癌的炎症反应，而共生菌群的缺失抑制了肺腺癌的发生发展。在本研究中，发明人发现非小细胞肺癌吸入组中Pasteurella含量较高而非癌对照组和PBS吸入组以Delftia为主。这提示发明人吸入肺癌患者的BAL有助于Pasteurella的生长。肿瘤微环境是一个重要的屏障，它限制了肿瘤的免疫反应和目前免疫疗法治疗癌症的有效性。肿瘤微环境中的CD8+ T细胞破坏癌细胞，产生全身肿瘤特异性免疫，形成长期的抗肿瘤记忆反应。较高的肿瘤浸润性CD8 T细胞预示着更长的患者生存期和更好的免疫治疗反应。肿瘤中CD8 T细胞浸润与临床分期和患者年龄无关。细菌和病毒是高度免疫原性的，可以用来触发对肿瘤的免疫反应。细菌疫苗含有被杀死或减毒的细菌，可以激活免疫系统，例如，肺结核疫苗。一些细菌属，包括Salmonella, Streptococcus, Listeria, Escherichia等在肿瘤内积聚并产生溶瘤作用。以Listeria菌为基础的肿瘤疫苗可产生ctl介导的肿瘤杀伤，这在临床中已被作为一种免疫治疗方法被提出。使用细菌作为治疗策略的想法是由William Coley博士提出的，他开发了“Coley毒素”来治疗癌症患者。混合细菌疫苗(MBV)含有化脓性链球菌和马氏沙雷菌，可以通过诱导免疫反应杀死肿瘤细胞。肠道微生物对肿瘤治疗反应的影响，特别是免疫检查点阻断受到了人们的广泛关注。Pasteurella是一种兼性厌氧革兰氏阴性细菌(GNB)。它是一种共生微生物，生活在健康的家养动物的口咽部，尤其是狗、老鼠和猫。它可以从动物传播到人类。在人类中，Pasteurella也是一种重要的病原体，特别是对于那些潜在的慢性肺部疾病。Pasteurella菌感染在野生动物和家畜中引起各种疾病，人类的Pasteurella菌感染与动物咬伤或抓伤有关。Pasteurella菌疫苗已被用于动物疾病的预防。本研究显示Pasteurella菌与肺癌活检中CD8+ T细胞的浸润呈强阳性关系，提示Pasteurella菌作为癌症治疗疫苗的应用前景。

肿瘤的免疫抑制微环境也被广泛报道。肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)是多种实体肿瘤中肿瘤基质的主要成分。在微环境刺激下，TAMs向经典激活细胞(M1)或选择性激活细胞(M2)极化，分别具有肿瘤抑制或肿瘤促进特性。在发明人的研究中，M2巨噬细胞与Pasteurella和肿瘤负荷呈负相关。但目前尚不清楚M2极化是由于肿瘤还是菌群失调所致。

总之，发明人的发现强调了微生物组成对癌症进展的影响。发明人发现Pasteurella与细胞毒性CD8+ TIL呈显著正相关，与M2巨噬细胞呈负相关。Pasteurella菌的丰度与肿瘤细胞的生长呈负相关。发明人的发现为肺癌患者提供了一种有希望的治疗性疫苗。

Claims (9)

1. 一种基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗，其特征在于：根据巴氏菌（Pasteurella菌）与肺癌活检中CD8+ T细胞的浸润呈强阳性关系，利用巴斯德菌与细胞毒性CD8+ TIL呈显著正相关，与M2巨噬细胞呈负相关；以及Coriobacteriaceae菌科与M2巨噬细胞呈正相关，与CD8+细胞呈负相关；巴氏菌（Pasteurella菌）的丰度与肿瘤细胞的生长呈负相关的特性，采用巴氏菌作为菌种制作基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗。

2.如权利要求1所述的基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗，其特征在于：所述的治疗性肺癌疫苗为基于巴氏菌药学上可接受的载体，经过人工减毒、灭火或利用基因工程方法制成的所形成的制作的疫苗。

3.如权利要求2所述的基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗及其应用，其特征在于：所述的药学上可接受的载体包含其中存在所述免疫原的水相和油相的乳剂。

4.权利要求3所述的基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗，其特征在于：所述的药学上可接受的载体为基于巴氏菌气溶胶所形成的气雾剂，气雾剂中含有丰度的巴氏菌（Pasteurella菌）。

5.权利要求4所述的基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗，其特征在于：所述的巴氏菌气溶胶中巴氏菌的丰度为30%以上。

6.一种基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗的配制方法，采用巴氏菌（Pasteurella菌）作为疫苗的菌种，然后按照疫苗的生产制作方法，经过人工减毒、灭火或利用基因工程方法制作出基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗。

7.权利要求6所述的基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗的配制方法，其特征在于：所述的治疗性肺癌疫苗为巴氏菌（Pasteurella菌）通过雾化装置制成气雾化气溶胶，供患者吸入。

8.权利要求7所述的基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗的配制方法，其特征在于：所述的气雾化气溶胶控制在直径0.3-0.7μm。

9.一种如权利要求1所述基于巴氏菌的治疗性肺癌疫苗的应用，治疗性肺癌疫苗主要用于基于细菌的肺癌疫苗治疗；在已感染病原微生物或已患有肺癌的机体中，通过诱导特异性的免疫应答，达到治疗或防止肺癌疾病恶化。

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