CN113195528A - 对ha-1h特异的结合蛋白及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了新的核酸组合物、载体、修饰的细胞和药物组合物，其可用于治疗或预防HLA‑A*0201阳性人类受试者同种异体干细胞移植(allo‑SCT)后血液病恶性肿瘤的复发。还提供了相应的方法和用途。
Description
技术领域
本发明提供了新的核酸组合物、载体系统、修饰的细胞和药物组合物，其可用于治疗或预防HLA-A*0201阳性人类受试者同种异体干细胞移植(allo-SCT)后血液病恶性肿瘤的复发。还提供了相应的方法和用途。
背景技术
血液病恶性肿瘤是影响血液和淋巴系统的癌症。癌症可能始于造血组织(例如骨髓)，或者在免疫系统的细胞中。血液病恶性肿瘤患者可以用人类白细胞抗原(HLA)匹配的异体干细胞移植(allo-SCT)成功治疗。为了减少移植物抗宿主病(GvHD)的发展，可以从干细胞移植物中耗尽供体T细胞，并在allo-SCT之后抢先重新施用。尽管与未消耗T细胞的allo-SCT相比，这种分两步进行的消耗T细胞allo-SCT和供体淋巴细胞输注(DLI)的程序降低了GvHD的发生率和严重程度，但GvHD仍然是发病率和死亡率的重要原因，尤其是在HLA不匹配移植的情况下。allo-SCT后早期应用DLI，诱发GvHD的风险更高。高风险白血病患者可能在移植后早期复发，而此时DLI的施用可能导致GvHD。对于这一患者群体来说，治疗选择很少，需要新的治疗方法以允许早期施用能够发挥移植物抗白血病(GvL)作用而不引起GvHD的T细胞。
具有确定的抗白血病特异性的T细胞的过继转移是从移植物抗白血病(GvL)反应中分离出移植物抗宿主病(GvHD)反应的一种策略。已经证明，识别在造血细胞上选择性表达的次要组织相容性抗原(MiHA)的供体T细胞在allo-SCT后介导抗白血病反应，而不会引起严重的GvHD。HA-1H抗原是一种次要组织相容性抗原，是免疫治疗的一个重要靶点，因为它在血液病恶性肿瘤和正常造血细胞中高度表达，但在正常非造血细胞中不表达。它也存在于HLA-A*0201(一种全球常见的人类白细胞抗原血清型)的环境中，因此是相当一部分血液病恶性肿瘤患者的合适靶抗原。以前，在HA-1不相容的供体-受体对中，HA-1特异性T细胞的出现和恶性受体细胞的完全消失之间存在直接联系(1)。因此，HA-1TCR修饰的T细胞可以潜在地用于治疗allo-SCT后患有不同血液病恶性肿瘤(包括白血病和淋巴瘤)的患者。但是，先前在I期临床研究中已经表明，源自供体T细胞库的体外培养的HA-1特异性T细胞缺乏体内持久性和体内抗白血病反应性(Meij et al.,2012)。
需要新的免疫疗法来治疗血液病恶性肿瘤。
发明内容
次要组织相容性抗原HA-1H是由HMHA1基因(也称为Rho GTPase激活蛋白45)编码的。存在于52％的个体中的HMHA1变体(rs_1801284A/A或A/G)产生含有组氨酸残基代替精氨酸的免疫原性肽(VLHDDLLEA；SEQ ID NO:10)(R139H多态性)，并且这种肽的HLA呈递发生在具有常见HLA-A*0201(A2)等位基因的个体中(2)。因此，针对HA-1H的T细胞疗法适用于约25％的血液病恶性肿瘤移植受试者，并且需要HLA-A2阴性或HA-1H阴性的T细胞供体("HA-1R"；VLRDDLLEA；SEQ ID NO:79)。
本发明人分离并测序了对HA-1H抗原特异的新型TCR。这样的TCR可用于在HLA-A*0201阳性的人类受试者中治疗或预防异体干细胞移植(allo-SCT)后的血液病恶性肿瘤的复发。
发明人先前已经表明，来自供体T细胞库的体外培养的HA-1特异性T细胞缺乏体内持久性和体内抗白血病反应性(Meij et al,2012)。发明人现已分离出来源于从经历由这些HA-1特异性T细胞介导的有效抗白血病反应的患者中分离出的HA-1特异性T细胞的HA-1TCR(Marijt et al 2003,van Loenen et al2011)。有利地，本文描述的HA-1TCR因此类似于天然T细胞应答并且对应于具有高效抗白血病反应性的高亲和力TCR。令人惊讶的是，与体外培养产生的不太可信的候选细胞相比，本文所述的HA-1特异性TCR具有更强的抗肿瘤反应性。此外，由于这些HA-1TCR是从激活的抗白血病反应中分离出来的，没有移植物抗宿主疾病(GvHD)的迹象，因此这些TCR是安全的，因为它们不会诱导移植物抗宿主疾病或其他毒性。有利地，在诊断时证明了HA-1特异性TCR对源自患者的原发性AML和ALL白血病的有效抗白血病反应，证明了这些HA1-TCR在血液病恶性肿瘤患者中的有效性。更令人信服的是，本文使用了一个临床前体内模型来显示HA-1TCR工程化T细胞在输注后非常有效地根除了已建立的多发性骨髓瘤，突出了HA-1TCR的有效体内抗肿瘤反应性。
发明人已经研究了新型TCR的哪些成分对于HA-1H抗原特异性和TCR功能是必需的。令人惊讶的是，他们发现TCRβ链可变区的CDR1区对HA-1H特异性至关重要，但对于HA-1特异性并不足够。他们还发现TCRβ链可变区(Vβ)和TCRα链可变区(Vα)的CDR3区域是必需的，并且TCRβ链可变区(Vβ)需要由TRBV7-9基因编码。
因此，本文所述的HA-1H特异性TCR需要以下最低限度的成分:
(a)包含HA-1H特异性CDR3的TCR Vα结构域(参见例如SEQ ID No:1至3)；和
(b)具有由TRBV7-9基因编码的氨基酸序列的TCR Vβ结构域，其中所述Vβ结构域包含HA-1H特异性CDR3(参见例如SEQ ID NO:4-6)和HA-1H特异性CDR1(参见例如SEQ ID No:7)。
本文所述的CDR3 TCR序列不同于现有技术(例如WO2018/058002)中已知的序列。此外，本文描述的TCR的α链序列的TRAV区域(包含CDR1和CDR2区域)与WO2018/058002中描述的TCR的α链的TRAV区域完全不同。此外，TRAJ区域与不同的TRAV区域相结合。因此，我们要求保护的TCR与所引用的现有技术的TCR之间存在若干差异。
HA-1H特异性结合蛋白(例如TCR)在本文中使用特定的CDR3和CDR1序列组合来举例说明。例如，以下组合:
(a)包含SEQ ID NO:1的CDR3的TCR Vα结构域；和
(b)本文显示了赋予HA-1H结合特异性的具有TRBV7-9基因编码的氨基酸序列的TCRVβ结构域，其中Vβ结构域包含SEQ ID NO：4的CDR3和SEQ ID NO：7的CDR1。尽管示例了这些特定的CDR序列，但CDR也可能包含与特定序列不同的可变性(例如每个特定的CDR可以与特定的SEQ ID NO具有至少80％的序列同一性)。TRBV7-9基因可以是TRBV7-9*03(参见例如TCR M7)。
此外，还有以下组合:
(a)包含SEQ ID NO:2的CDR3的TCR Vα结构域；和
(b)本文显示了赋予HA-1H结合特异性的具有TRBV7-9基因编码的氨基酸序列的TCRVβ结构域，其中Vβ结构域包含SEQ ID NO：5的CDR3和SEQ ID NO：7的CDR1。尽管示例了这些特定的CDR序列，但CDR也可能包含与特定序列不同的可变性(例如每个特定的CDR可以与特定的SEQ ID NO具有至少80％的序列同一性)。TRBV7-9基因可以是TRBV7-9*01(参见例如TCR M2)。
此外，还有以下组合:
(a)包含SEQ ID NO:3的CDR3的TCR Vα结构域；和
(b)显示了赋予HA-1H结合特异性的具有TRBV7-9基因编码的氨基酸序列的TCRVβ结构域，其中Vβ结构域包含SEQ ID NO：6的CDR3和SEQ ID NO：7的CDR1。尽管示例了这些的CDR序列，但CDR也可能包含相对特定序列的改变(例如每个特定的CDR可以与特定的SEQ IDNO具有至少80％的序列同一性)。TRBV7-9基因可以是TRBV7-9*01(参见例如TCR FK47.83)。
发明人还表明HA-1H特异性结合蛋白(例如TCR)可由本文所述的TCR Vα和TCR Vβ结构域的不同组合形成。例如，使用相当于M7克隆(SEQ ID NO:18)的TCR Vβ结构域与相当于M2克隆(SEQ ID NO:29)的TCR Vα结构域组合，产生功能性TCR。因此，功能性结合蛋白(例如TCR)也可以由以下各项的组合生成:
(a)包含SEQ ID NO:2的CDR3的TCR Vα结构域；和
(b)显示了赋予HA-1H结合特异性的具有TRBV7-9基因编码的氨基酸序列的TCRVβ结构域，其中Vβ结构域包含SEQ ID NO：4的CDR3和SEQ ID NO：7的CDR1。尽管示例了这些特定的CDR序列，但CDR也可能包含与特定序列不同的可变性(例如每个特定的CDR可以与特定的SEQ ID NO具有至少80％的序列同一性)。所述TRBV7-9基因可以是TRBV7-9*01(参见例如TCR M7)。
尽管本文提供的数据涉及上述特定组合，但也可使用其他组合来形成对HA-1H特异的功能性结合蛋白。本文也涵盖这种组合，并在下文中更详细地描述。
本发明已经通过产生对HA-1H特异的功能性TCR受体来举例说明。然而，本发明还包括具有上述赋予HA-1H抗原特异性的特征的其他结合蛋白。因此，还包括其他结合蛋白(例如TCR的抗原结合片段(例如单链TCR)或嵌合抗原受体(CAR))。这些结合蛋白(例如当由宿主细胞(如免疫细胞(例如T细胞))表达时)可用作治疗血液病恶性肿瘤或防止其复发或反复的独立疗法，或可用作包含其他疗法或药剂的治疗方案的一部分(例如，在异体SCT之后或与之组合)。
一方面，本发明提供了一种分离的核酸组合物，其编码具有TCRα链可变区(Vα)和TCRβ链可变区(Vβ)的HA-1H抗原特异性结合蛋白，该组合物包含:
(a)编码TCR Vα结构域的核酸序列，所述TCRVα结构域包含与SEQ ID NO：1-3中任一项具有至少85％序列同一性的CDR3氨基酸序列；和
(b)编码TCR Vβ结构域的核酸序列，所述TCRVβ结构域具有由TRBV7-9基因编码的氨基酸序列，其中所述Vβ结构域包含与SEQ ID NO：4-6中任一项具有至少90％序列同一性的CDR3氨基酸序列和与SEQ ID NO：7具有至少80％序列同一性的CDR1氨基酸序列。
合适地，TRBV7-9基因可以是TRBV7-9*01或TRBV7-9*03。
合适地，HA-1H抗原可以包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
合适地，编码的结合蛋白可能能够特异性结合HA-1H抗原:HLA-A*0201复合物。
合适地，核酸序列可以被密码子优化以在宿主细胞中表达，任选地，其中所述宿主细胞是人T细胞。
合适地：
(i)Vα结构域的CDR3可以包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成，
(ii)Vβ结构域的CDR3可以包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或由SEQ ID NO:4的氨基酸序列组成，
(iii)Vβ结构域的CDR1可以包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成，
合适地：
(i)Vα结构域的CDR3可由包含SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的序列的核酸序列编码；和/或
(ii)Vβ结构域的CDR3可由包含SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14的序列的核酸序列编码；和/或
(iii)Vβ结构域的CDR1可由包含SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16的序列的核酸序列编码。
合适地：
(i)Vα结构域可以包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:17具有至少90％的序列同一性、包含SEQ ID NO:17、或由SEQ ID NO:17组成；和/或
(ii)Vβ结构域可以包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:18具有至少90％的序列同一性、包含SEQ ID NO:18、或由SEQ ID NO:18组成。
合适地：
(i)Vα结构域可由包含SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20的序列的核酸序列编码；和/或
(ii)Vβ结构域可由包含SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:22的序列的核酸序列编码。
合适地：
(i)Vα结构域的CDR3可以包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成，
(ii)Vβ结构域的CDR3可以包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列或由SEQ ID NO:5的氨基酸序列组成，和
(iii)Vβ结构域的CDR1可以包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成。
合适地：
(i)Vα结构域的CDR3可由包含SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24的序列的核酸序列编码；和/或
(ii)Vβ结构域的CDR3可由包含SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26的序列的核酸序列编码；和/或
(iii)Vβ结构域的CDR1可由包含SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16的序列的核酸序列编码。
合适地：
(i)Vα结构域可以包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:29具有至少90％的序列同一性、包含SEQ ID NO:29、或由SEQ ID NO:29组成；和/或
(ii)Vβ结构域可以包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:30具有至少90％的序列同一性、包含SEQ ID NO:30、或由SEQ ID NO:30组成。
合适地：
(i)Vα结构域可由包含SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:32的序列的核酸序列编码；和/或
(ii)Vβ结构域可由包含SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34的序列的核酸序列编码。
合适地：
(i)Vα结构域的CDR3可以包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成，
(ii)Vβ结构域的CDR3可以包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或由SEQ ID NO:6的氨基酸序列组成，
(iii)Vβ结构域的CDR1可以包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成。
合适地：
(i)Vα结构域的CDR3可由包含SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:36的序列的核酸序列编码；和/或
(ii)Vβ结构域的CDR3可由包含SEQ ID NO:37或SEQ ID NO:38的序列的核酸序列编码；和/或
(iii)Vβ结构域的CDR1可由包含SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16的序列的核酸序列编码。
合适地：
(i)Vα结构域可以包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:41具有至少90％的序列同一性、包含SEQ ID NO:41、或由SEQ ID NO:41组成；和/或
(ii)Vβ结构域可以包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:42具有至少90％的序列同一性、包含SEQ ID NO:42、或由SEQ ID NO:42组成。
合适地：
(i)Vα结构域可由包含SEQ ID NO:43或SEQ ID NO:44的序列的核酸序列编码；和/或
(ii)Vβ结构域可由包含SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:46的序列的核酸序列编码。
合适地，分离的核酸组合物可以进一步包含TCRα链恒定区和/或TCRβ链恒定区。
合适地，编码的结合蛋白可以包含TCR、TCR的抗原结合片段或嵌合抗原受体(CAR)。
合适地，TCR的抗原结合片段可以是单链TCR(scTCR)。
另一方面，本发明提供了包含本文所述核酸组合物的载体系统。
合适地，所述载体可以是质粒、病毒载体或粘粒，任选地，其中所述载体选自由如下组成的组：逆转录病毒、慢病毒、腺相关病毒、腺病毒、痘苗病毒、金丝雀痘病毒、疱疹病毒、小环载体和合成DNA或RNA。
另一方面，本发明提供了用本文所述的核酸组合物转染或转化的修饰的细胞，或本文所述的载体系统，其中所述修饰的细胞为HLA-A*0201阴性和/或HA-1H阴性。
合适地，所述修饰的细胞可以选自由如下组成的组：CD8 T细胞、CD4 T细胞、NK细胞、NK-T细胞、γ-δT细胞、造血干细胞、祖细胞、T细胞系或NK-92细胞系。
合适地，修饰的细胞可以是人类细胞。
另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含本文所述的核酸组合物、本文所述的载体系统或本文所述的修饰的细胞，以及药学上可接受的赋形剂、佐剂、稀释剂和/或载体。
另一方面，本发明提供了一种治疗或预防HLA-A*0201阳性受试者异体干细胞移植(allo-SCT)后血液病恶性肿瘤复发的方法，该方法包括给受试者施用治疗有效量的本文所述的药物组合物。
另一方面，本发明提供了本文所述的药物组合物用于治疗或预防HLA-A*0201阳性的人类受试者中异体干细胞移植(allo-SCT)后血液病恶性肿瘤的复发。
另一方面，本发明提供了本文所述的药物组合物在制备用于治疗或预防HLA-A*0201阳性的人类受试者中异体干细胞移植(allo-SCT)后血液病恶性肿瘤复发的药物中的用途。
合适地，所述血液病恶性肿瘤可以包括白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常症或骨髓瘤。
合适地：
(i)血液病恶性肿瘤可包括白血病，任选地其中所述白血病选自由如下组成的组：急性髓细胞白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、混合表型急性白血病(MPAL)、慢性髓细胞白血病(CML)、B细胞前淋巴细胞白血病、毛细胞白血病或慢性淋巴细胞白血病(CLL)；或
(ii)血液病恶性肿瘤可包括淋巴瘤，任选地其中所述淋巴瘤选自由如下组成的组：霍奇金淋巴瘤(HL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、中枢神经系统淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、CD37+树突细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织(MALT)的结外边缘区B细胞淋巴瘤、结边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤或伯基特淋巴瘤；或
(iii)血液病恶性肿瘤可包括骨髓增生异常病症，任选地其中所述骨髓增生异常病症选自难治性血细胞减少症伴单系发育不良(难治性贫血、难治性中性粒细胞减少症和难治性血小板减少症)、难治性贫血伴环状铁幼粒细胞增多(RARS)、难治性贫血伴环状铁幼粒细胞增多-血小板增多症(RARS-t)、难治性血细胞减少症伴多系发育不良(RCMD)、难治性血细胞减少症伴多系发育不良和环状铁幼粒细胞增多(RCMD-RS)、难治性贫血伴成纤维细胞过多(RAEB)、不可分类的骨髓增生异常或儿童难治性血细胞减少症。
合适地，所述受试者可能以前接受过淋巴消耗性化疗。
合适地，淋巴消耗性化疗可以包括环磷酰胺、氟达拉滨、抗胸腺细胞球蛋白或其组合。
合适地，本文所述组合物中的一种或多种修饰的细胞可以与受试者同种异体。
另一方面，本发明提供了一种产生结合蛋白的方法，所述结合蛋白能够特异性结合含有HA-1H抗原的肽，而不结合不含HA-1H抗原的肽，所述方法包括在核酸组合物被细胞纳入并被细胞表达的条件下，使本文所述的核酸组合物与细胞接触。
合适地，所述方法可以是离体的。
另一方面，本发明提供了一种分离的核酸序列，其包含SEQ ID NO:11-14、19-26、31-38、43-46、49-51、54-56、59-66、69-71和74-76中任一项的核酸序列或由SEQ ID NO:11-14、19-26、31-38、43-46、49-51、54-56、59-66、69-71和74-76中任一项的核酸序列组成。
另一方面，本发明提供了一种分离的核酸序列用于治疗，其包含SEQ ID NO:11-14、19-26、31-38、43-46、49-51、54-56、59-66、69-71和74-76中任一项的核酸序列或由SEQID NO:11-14、19-26、31-38、43-46、49-51、54-56、59-66、69-71和74-76中任一项的核酸序列组成。
在本说明书的整个说明书和权利要求书中，词语“包括”和“包含”以及它们的变形意味着“含有但不限于”，并且它们不旨在(也不)排除其它部分、添加剂、组分、整体或步骤。
在本说明书的整个说明书和权利要求书中，除了上下文另外需要之外，单数涵盖复数。特别地，除非上下文另有要求，在使用不定冠词的情况下，说明书应被理解为考虑了多个以及单数。
结合本发明的特定方面、实施方案或实施例描述的特点、整体、特征、化合物、化学部分或基团应被理解为适用于本文描述的任何其它方面、实施方案或实施例，除非与其不相容。
本文所指的专利、科学和技术文献确立了本领域技术人员在申请时可获得的知识。本文引用的已发布专利、已公布的和未决的专利申请、以及其他出版物的全部公开内容通过引用并入本文，其程度与分别具体地和单独地指出通过引用并入的程度相同。在任何不一致的情况下，以本公开为准。
除非本文另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。比如Singleton和Sainsbury，《微生物学和分子生物学词典》,2d Ed.,John Wiley和Sons,NY；以及Hale和Marham,The Harper CollinsDictionary of Biology,Harper Perennial,NY(1991)向本领域技术人员提供了本发明中使用的许多术语的通用词典。尽管在本发明的实践中发现了与本文描述的方法和材料相似或等同的任何方法和材料，但是本文描述了优选的方法和材料。因此，下面定义的术语通过参考整个说明书来更全面地描述。此外，如本文所使用的，单数术语“一个”、“一个”和“所述”包括复数引用，除非上下文清楚地另外指出。除非另有说明，核酸分别以5’至3’方向从左至右书写；氨基酸序列分别以氨基到羧基的方向从左到右书写。应当理解，本发明不限于所描述的特定方法、方案和试剂，因为这些可以根据本领域技术人员使用它们的背景而变化。
下面将进一步详细描述本发明的各个方面。
附图说明
下文将参照附图进一步描述本发明的实施方案，其中:
图1显示由于HA-1-TCRβ链的固有特性造成的HA-1-TCR细胞表面低表达。(A)通过用HA-1-TCRα或TCRβ链与14种其他抗原特异性TCRα和TCRβ链的组合转化J76细胞来分析HA-1-TCRα和TCRβ链的配对特性。这些不同组合的TCR细胞表面表达通过用抗TCRαβmAb染色并在转化后5天使用流式细胞术分析eGFP/NGF-R双阳性J76细胞来测量。本文描述的是HA-2-、HA-1-、CMVB7、和CMVA2-特异性TCR的所有TCRα链与这些TCR的所有TCRβ链结合的TCRαβ表达的平均荧光强度(MFI)。所有的TCR链都是由pLZRS逆转录病毒载体编码的，除了HA-1-TCRβ链，如图所示，它还由MP71逆转录病毒载体编码。非td J76细胞几乎没有被抗TCRαβmAb染色的背景(MFI＝16)。亲本TCR组合用星号表示。(B)用抗TCRαβ和抗CD3 mAb对几个T细胞克隆进行染色，并用流式细胞术进行分析，所示T细胞克隆包括5个不同的HA-1特异性T细胞克隆、6个不同的HA-2特异性T细胞克隆和2个不同的CMV-A2特异性T细胞克隆。显示的MFI是不同T细胞克隆的手段。(C)不同的T细胞克隆用它们各自的四聚体染色，并且在点图中描绘了MFI。(D)用q-RT-PCR分析不同T细胞克隆的TCRα(封闭符号)和TCRβ链(开放符号)的mRNA水平。作为阴性对照，包括MSC的cDNA。染色一式两份进行，并且显示的数据代表两个独立实验。
图2显示CDR1区不是HA-1-TCR低表达的原因，但对于HA-1-特异性是不可或缺的。(A)不同的TRBV7链在TCR基因转移后显示出高或低的TCR表达，比对了不同的TRBV7链并分析了核苷酸序列的差异。在高表达的HA-2-TRBV7-8、JBBun-TRBV7-6、10G5-TRBV7-1和低表达的HA-1-TRBV7-9之间的309aa长的可变区观察到30个共有的核苷酸差异。显示的序列是从TRBV7链的氨基酸41到80(总aa309)，包含HA-1和HA-2TCRβ链的CDR1-和CDR2-区域(SEQID NO:77和78)。所有其他TRBV7链和HA-1TRBV7-9链之间的共有差异用箭头表示。(B)为了测试HA-1-TCRβCDR1区在低HA-1-TCR表达中的作用，用HA-1-TCRα或HA-2-TCRα与几种构建体的组合转化了J76细胞，所述构建体编码未修饰的或与HA-2-TCRβCDR1区域交换的HA-1-TCRβ链，或编码未修饰的或仅与HA-1-TCRβCDR1区域交换的或与HA-1-TCRβCDR1和CDR3区域交换的HA-2-TCRβ链。用流式细胞术分析eGFP/NGF-R双阳性J76细胞的TCR细胞表面表达。非td J76细胞几乎没有被抗TCRαβmAb染色的背景(MFI＝16)。亲本TCR组合用星号表示。(C)为了测试HA-1-TCRβCDR1区在HA-1特异性中的作用，用不同的构建体转化病毒特异性T细胞。以用不同浓度的HA-1-肽脉冲的HLA-A2pos和HA-1neg LCL-IZA、HLA-A2pos和HA-1pos LCL-BDV以及LCL-IZA刺激eGFP和NGF-R双阳性细胞，并在o/n孵育后用标准ELISA测定干扰素-γ的产生。
图3显示密码子优化和半胱氨酸修饰的组合导致了最佳的HA-1-TCR表达和HA-1-功能。测试了不同修饰策略优化HA-1-TCR表达和功能的潜力。(A)弱(pp50 VTE T细胞)和强竞争子表型(EBNA3A FLR T细胞)病毒特异性T细胞分别用未修饰的(TRAV25*01)、半胱氨酸修饰的(TRAV25*01SS)、密码子优化的(TRAV25*01opt)、或密码子优化的和半胱氨酸修饰的(TRAV25*01opt SS)HA-1-TCRα链与未修饰的(TRBV7-9)、半胱氨酸修饰的(TRBV7-9 SS)、或密码子优化的(TRBV7-9 opt)HA-1-TCRβ链的组合转化。点图描绘了eGFP和NGF-R双阳性病毒特异性T细胞。(B)所有这些修饰的HA-1-TCR td弱竞争子和强竞争子病毒特异性T细胞都在标准IFN-γELISA中进行了测试。图中的数字与A的点图中所示的数字相对应。所用的靶是用不同浓度的HA-1-肽脉冲的HLA-A2pos HA-1neg LCL-IZA、HLA-A2pos HA-1pos LCL-MRJ和LCL-IZA。显示的数据代表了使用两个不同健康供体的病毒特异性T细胞进行的三个独立实验。
图4显示，密码子优化和半胱氨酸修饰的HA-1-TCR的引入通常导致高效的HA-1-TCR表达和稳健的HA-1-特异性功能。(A)弱竞争子表型(pp65 RPH)T细胞、强竞争子表型(pp65 TPR)T细胞和多克隆外周CD8+T细胞用编码未修饰的(WT td)或密码子优化的和半胱氨酸修饰的HA-1-TCR链(opt SS td)的单一构建体转化，并分析HA-1四聚体染色。点图描绘了NGF-R阳性病毒特异性T细胞的HA-1四聚体染色，并显示了HA-1四聚体阳性T细胞的百分比。所描绘的点图代表了使用3个不同健康个体的T细胞的2个独立实验。(B/C)用编码HA-1-TCR WT或HA-1-TCR opt SS的单个构建体或空载体转化的pp65 RPH和pp65 TPR T细胞针对不同的靶进行了HA-1特异性测试(B)在铬释放试验中的细胞毒性反应和(C)IFN-γ产生。所用的靶是HLA-A2pos LCLs、AML和ALL原代细胞，它们对HA-1呈阳性或阴性。所提供的数据代表了使用3个不同健康个体的T细胞的两个独立实验。
图5显示，与HA-1-TCR WT转化的T细胞相比，用MP71HA-1-TCR opt SS转化的强竞争子表型病毒特异性T细胞显示出对AML和ALL恶性细胞更强效的HA-1特异性IFNγ产生。
为了改进临床使用的载体，在没有标记基因的MP71载体中表达了与T2A序列连接的修饰的HA-1-TCR链。pp50 VTE和EBNA3A FLR病毒特异性T细胞用编码未修饰的HA-1-TCR链的pLZRS载体转化，所述HA-1-TCR链与T2A序列连接，并通过IRES序列连接至标记基因(WTTCR)，或用不具有标记基因的编码HA-1-TCR opt SS的MP71载体或空载体(模拟td)转化，转化后一周，针对如图所示的HA-1阳性或阴性的不同的HLA-A2pos AML和ALL原代细胞，检测HA-1特异性IFNγ的产生。所述实验一式两份进行，并代表两个独立的实验。
图6显示了病毒特异性T细胞可以在Clini-MACS设备上使用基于链霉亲和素的选择程序进行纯化和转化。为了测试该程序是否可以扩大规模，使用Streptamers和Clini-MACS装置纯化病毒特异性T细胞，分离后2-3天，用HA-1-TCR转化(HA-1-TCR td)或不转化(non td)。为此，从健康供体JBC(A+E)、UPB(B+F)、UHO(C+G)和UBQ(D+H)解冻1x109 PBMC。(A-D)在CliniMACS分离之前和之后，用四聚体对供体PBMC进行染色，并在D-生物素解离步骤后，使用流式细胞术测量起始材料和阳性分离部分中病毒特异性T细胞的频率。(E-H)转化后一周和MACS分离后12-13天，使用HA-1-和病毒-四聚体测量non td和HA-1-TCR td细胞系的抗原特异性。百分比表示特定象限中病毒特异性或HA-1特异性T细胞的频率。*敏感的组合编码分析表明UBQ的白细胞分离材料含有0.008％的pp65A2特异性T细胞和0.03％的BMLF-1A2特异性T细胞。
图7显示，HA-1-TCR修饰的T细胞表现出剂量依赖性HA-1特异性反应性，并识别HA-1阳性的原发性白血病细胞样品。(A)3种不同测试程序(JBC、UPB和UBQ)的两种非转化的(灰色标识；non td)和HA-1-TCR转化的(黑色符号；HA-1-TCR td)病毒特异性T细胞在标准IFN-γELISA中，用不同浓度的HA-1肽脉冲的T2细胞检测其HA-1特异性反应性。对20,000个T2细胞测试了5,000个病毒-四聚体pos或5,000个HA-1-四聚体pos转化的T细胞。(B)此外，测试了相同的T细胞识别表达内源性加工的HA-1的HA-1阳性靶细胞的能力。靶细胞是未脉冲的(白条)或用相关病毒肽脉冲的(病毒pep；黑色条纹条)T2细胞，或HA-1neg(灰色条)或HA-1pos(黑色条)的HLA-A2pos原代ALL细胞。作为对照，包括HA-1特异性T细胞克隆。(C)所有四种不同测试程序(JBC、UPB、UHO和UBQ)的未转化的和HA-1-TCR转化的病毒特异性T细胞均在铬释放试验中使用不同的效应物-靶比测试其HA-1特异性反应性。作为代表性的例子，描述了健康个体UHO的HA-1-TCR转化的病毒特异性T细胞的细胞毒性反应性。靶细胞是未脉冲的(白条)或脉冲有HA-1肽(黑条)或相关病毒肽(病毒pep；灰色条)的T2细胞(左图)，或HA-1neg(白条)或HA-1pos(黑色条)的HLA-A2pos原代ALL细胞，或HA-1neg(浅灰色)或HA-1pos(深灰色)的HLA-A2pos原代ALL细胞(右图)。
图8表明，HA-1TCR修饰的多克隆CD8+T细胞对各种不同的HA-1阳性AML和MM细胞系产生有效的HA-1特异性反应。未转化的(模拟)和临床级逆转录病毒载体(HA-1TCR GMP)转化的HA-1-TCR修饰的CD8+T细胞都在标准IFN-γELISA中针对不同的HA-1阳性和HA-1阴性靶细胞(图例中所示)测试了它们的HA-1特异性反应性。LCL-MRJ、LCL-JY和LCL-IZA是EBV转化的B细胞系。AML 2和AML3是急性髓系白血病(AML)细胞系。U266和RPMI是多发性骨髓瘤(MM)细胞系。T2是一种装载有HA-1肽(T2+HA-1肽)或未装载有肽(T2)的TAP缺陷细胞系。
图9表明，用临床级HA-1TCR临床上清液修饰的多克隆CD8+T细胞在多发性骨髓瘤的异种移植模型中发挥了有效的抗肿瘤反应性。NSG小鼠被静脉注射荧光素酶阳性的多发性骨髓瘤细胞系U266，并在肿瘤攻击后21天，对小鼠静脉注射HA-1TCR修饰的T细胞(4×10e6或8×10e6细胞)或CMV TCR修饰的T细胞(4×10e6或8×10e6细胞)。两种TCR转化的T细胞群都由30％的TCR转化的T细胞组成。
图10显示了用两个不同的HA-1H反应性TCR(包含本文所述的M7 Vα和Vβ结构域的TCR(参见SEQ ID NO：17和18)–本文称为“LUMC”；和包含WO2018/058002A1中所述的TCR2 Vα和Vβ结构域的TCR(参见SEQ ID NO：91和SEQ ID NO：92)–本文称为“FHCRC”)转导的CD8+T细胞的HA-1H-MHC-多聚体结合。
从健康供体的PBMC中分离CD8 T细胞，并用上述TCR进行转化。随后使用小鼠恒定β区作为转化的标记通过FACS富集转化的CD8 T细胞。这些细胞扩增后，用HA-1H-MHC多聚体和抗CD8抗体以及鼠恒定β区(mmCb)染色，并用流式细胞术分析。群体以存活的CD8+/mCb+细胞为门控。
通过菲科尔梯度离心分离健康供体的PBMC。CD8 T细胞通过负磁选择(Miltenyi)富集，并在非组织培养24孔板中刺激，预包被抗CD3(5μg/ml)和抗CD28(1μg/ml)mAb(BDPharmingen，海德堡，德国)。双嗜性逆转录病毒颗粒是通过用编码TCR的逆转录病毒质粒和两个表达质粒分别转染HEK293T细胞而产生的。在刺激后的第二天，CD8 T细胞被转化，在第十二天，使用小鼠恒定β区作为转化标记物通过FACS富集转化的CD8+细胞，然后通过REP扩增。
图11(A)通过将HA-1H-TCR转基因T细胞与装载有分级浓度的HA-1H肽(10-12M-10- 5M)的T2细胞共培养来分析功能亲和力。(B)HA-1H TCR转化的T细胞对HA-1R肽的非特异性识别。用分级浓度的HA-1R肽(10-8M-10-5M)加载T2细胞，并与表达FHCRC或LUMC的CD8+转化的T细胞共培养。
图12显示了用FHCRC或LUMC转化的CD8+T细胞的不同识别基序。氨基酸取代扫描用于定义表位序列中的关键氨基酸，只要这些残基被交换，它们就会消除TCR的识别。这些“固定的”氨基酸可以用来定义独特的TCR识别基序。丝氨酸残基被用来系统地取代HA1VLH肽中的单个氨基酸(丝氨酸扫描)。图中的第一条柱表示在TCR转导的T细胞与负载有10-5M原始肽的T2细胞的共培养中IFN-γ的释放，随后是在1-9位经由丝氨酸的氨基酸取代。
具体实施方式
本发明人分离并测序了对HA-1H抗原特异的新型TCR。这样的TCR可用于在HLA-A *0201阳性的人类受试者中治疗或预防异体干细胞移植(allo-SCT)后的血液病恶性肿瘤的复发。
发明人已经研究了新型TCR的哪些成分对于HA-1H抗原特异性和TCR功能是必需的。令人惊讶的是，他们发现TCRβ链可变区的CDR1区对HA-1H特异性至关重要，但对HA-1特异性不足。他们还发现TCRβ链可变区(Vβ)和TCRα链可变区(Vα)的CDR3区域是必需的，并且TCRβ链可变区(Vβ)需要由TRBV7-9基因编码。
编码结合蛋白组分的核酸组合物
本发明提供了一种分离的核酸组合物，其编码包含特异性结合HA-1H抗原的T细胞受体(TCR)成分的结合蛋白。因此，编码的结合蛋白能够特异性结合含HA-1H抗原的肽，而不结合不含HA-1H抗原的肽。
该核酸组合物包含(a)编码具有本文所述特定特征的TCR Vα结构域的核酸序列，和(b)编码具有本文所述特定特征的TCR Vβ结构域的核酸序列。编码的TCR组分形成HA-1H抗原特异性结合蛋白。
上述(a)和(b)的核酸序列可以是核酸组合物中不同的核酸序列。因此，结合蛋白的TCR组分可以由两种(或多种)核酸序列(具有不同的核苷酸序列)编码，它们一起编码结合蛋白的所有TCR组分。换句话说，一些TCR组分可以由核酸组合物中的一种核酸序列编码，而其他组分可以由核酸组合物中的另一种(不同的)核酸序列编码。
或者，(a)和(b)的核酸序列可以是单个核酸序列的一部分。因此，结合蛋白的TCR组分可以全部由单个核酸序列编码(例如具有单个开放阅读框，或者具有多个(例如2个或更多个、3个或更多个等)开放阅读框)。
本文所述的核酸序列可以形成编码功能性结合蛋白的较大组分部分的较大核酸序列的一部分。例如，编码具有本文所述特定特征的TCR Vα结构域的核酸序列可以是编码功能性TCRα链(包括恒定结构域)的较大核酸序列的一部分。作为另一个例子，编码具有本文所述特定特征的TCR Vβ结构域的核酸序列可以是编码功能性TCRβ链(包括恒定结构域)的较大核酸序列的一部分。作为另一个例子，上述核酸序列(a)和(b)可以是编码功能性TCRα链(包括恒定区)和功能性TCRβ链(包括恒定区)的组合的较大核酸序列的一部分，任选地，其中编码功能性TCRα链的序列通过接头序列与编码功能性TCRβ链的序列分离，该接头序列能够在同一核酸序列中协调表达两种蛋白质或多肽。下面提供了更多详细信息。
本文所述的核酸序列也可以编码T细胞受体的小组分，例如仅TCR Vα结构域、或TCR Vβ结构域。所述核酸序列可以被认为是为肽结合特异性提供必需成分的“构件”。本文所述的核酸序列可以整合到不同的核酸序列中(例如载体)，所述不同的核酸序列编码功能性结合蛋白(如TCR)的其它元件，使得当本文所述的核酸序列被掺入时，产生新的核酸序列，其编码例如特异性结合HA-1H抗原的TCRα链和/或TCRβ链。因此，本文所述的核酸序列可用作赋予对HA-1H抗原的结合特异性的必需组分，并因此可用于产生编码具有所需抗原结合活性和特异性的结合蛋白的较大核酸序列。
可以对本文所述的核酸序列进行密码子优化以在宿主细胞中表达，例如，可以对它们进行密码子优化以在人类细胞中进行表达，所述人类细胞例如为免疫系统的细胞、造血干细胞、T细胞、原代T细胞、T细胞系、K细胞或自然杀伤T细胞(Scholten et al,Clin.Immunol.119:135,2006)。所述T细胞可以是CD4+或CD8+T细胞。密码子优化是本领域众所周知的在特定宿主细胞中最大化核酸序列表达的方法。如以下实施例部分所述，一个或多个半胱氨酸残基也可以被引入编码的TCRα和β链组分中(例如以降低与内源性TCR链错配的风险)。
在一个实施例中，本文所述的核酸序列对于在合适的宿主细胞中表达进行密码子优化，和/或被修饰以引入编码一个或多个半胱氨酸氨基酸的密码子(例如引入到编码的TCRα链和/或编码的TCRβ链的恒定区)以降低与内源性TCR链错配的风险。
在某些实施例中，修饰TCR恒定区以增强所需TCR链的配对。例如，由于修饰，异源TCRα链和异源TCRβ链之间的增强的配对可能导致包含两个异源链的TCR优先组装，而不是异源TCR链与内源TCR链的不期望的错配(参见，例如，Govers et al,Trends Mol.Med.16(2):11(2010))。增强异源TCR链配对的示例性修饰包括在每个异源TCRα链和β链中引入互补半胱氨酸残基。在一些实施例中，编码异源TCRα链的多核苷酸在氨基酸位置48处(对应于全长成熟人TCRα链序列的恒定区)编码半胱氨酸，编码异源TCRβ链的多核苷酸在氨基酸位置57处(对应于全长成熟人TCRβ链序列的恒定区)编码半胱氨酸。
由本文所述核酸组合物编码的结合蛋白对HA-1H抗原具有特异性，并包含HA-1H抗原特异性TCR组分。然而，编码的结合蛋白不限于TCR。还包括包含特定的HA-1H抗原特异性TCR组分的其他合适的结合蛋白。例如，编码的结合蛋白可以包含TCR、TCR的抗原结合片段或嵌合抗原受体(CAR)。TCR、其抗原结合片段和CAR在本领域中定义明确。TCR抗原结合片段的一个非限制性例子是单链TCR(scTCR)或嵌合二聚体，其由TCRα和TCRβ链的抗原结合片段连接到二聚体复合物的跨膜和胞内结构域，使得该复合物是嵌合二聚体TCR(cdTCR)。
在某些实例中，TCR的抗原结合片段包含单链TCR(scTCR)，其包含TCR Vα和TCR Vβ结构域，但仅包含单个TCR恒定结构域。在其他实例中，TCR的抗原结合片段或嵌合抗原受体是嵌合的(例如，包括来自一个以上供体或物种的氨基酸残基或基序)、人源化的(例如，包括来自非人生物的残基，这些残基经过改变或取代，从而降低了人类免疫原性的风险)、或人的。
“嵌合抗原受体”(CAR)是指一种融合蛋白，其被工程化以包含两个或多个天然存在的氨基酸序列，这些氨基酸序列以非天然存在或不在宿主细胞中天然存在的方式连接在一起，当该融合蛋白存在于细胞表面时，可以起到受体的作用。本文所述的CAR包括胞外部分，所述胞外部分包含连接至跨膜结构域的抗原结合结构域(即，获得或衍生自免疫球蛋白或免疫球蛋白样分子，例如衍生自对癌症抗原特异的抗体或TCR的scFv，或衍生自或获得自NK细胞的杀伤免疫受体的抗原结合结构域)和一个或多个细胞内信号传导结构域(任选地包含共刺激结构域)(参见，例如，Sadelain et al,Cancer Discov.,3(4):388(2013)；又见Harris and Kranz,Trends Pharmacol.Sci.,37(3):220(2016),以及Stone et al,CancerImmunol.Immunother.,63(11):1163(2014))。
生产工程化TCR的方法描述于例如Bowerman et al,Mol.Immunol,5(15):3000(2009)。制备CAR的方法在本领域中是众所周知的，并描述于例如U.S.专利No.6,410,319；U.S.专利No.7,446,191；U.S.专利公开No.2010/065818；U.S.专利No.8,822,647；PCT公开No.WO 2014/031687；U.S.专利No.7,514,537；和Brentjens et al,2007,Clin.CancerRes.73:5426。
本文所述的结合蛋白也可以表达为转基因构建体的一部分，所述转基因构建体编码其他辅助蛋白，例如安全开关蛋白、标签、选择标记、CD8辅助受体β链、a链或两者，或其任意组合。
T细胞受体(TCR)是在T细胞(T淋巴细胞)表面发现的一种分子，其负责识别与靶细胞上的主要组织相容性复合体(MHC)分子结合(由该分子呈递)的肽。本发明涉及编码结合蛋白的核酸组合物，所述结合蛋白包含在合适的MHC血清型背景下与特定肽相互作用的TCR组分，即HLA-A*02:01中的HA-1H抗原(换句话说，编码的结合蛋白能够特异性结合HA-1H抗原:HLA-A*0201复合物)。HLA-A*02:01是HLA-A血清型组中一种全球常见的人类白细胞抗原血清型。由HLA-A*02:01呈递到TCR的肽被描述为“HLA-A*02:01限制性的”。
由本文所述结合蛋白特异性结合的HA-1H抗原是一种来源于SEQ ID NO:10所示氨基酸序列的抗原性肽。所述抗原可以是SEQ ID NO：10所示序列的抗原片段(即一部分)，它可以由SEQ ID NO：10的序列组成，或者可以包括(即在更长的序列内)SEQ ID NO：10的序列。HA-1H抗原能够由HLA-A*0201呈递。因此，编码的结合蛋白能够特异性结合HA-1H抗原:HLA-A*0201复合物，其中HA-1H抗原是SEQ ID NO:10所示序列的抗原片段，或者其中HA-1H抗原包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列组成。
TCR由两条不同的多肽链组成。在人类中，95％的TCR由α链和β链组成(分别由TRA和TRB编码)。当TCR在HLA的情况下(例如在HLA-A*02:01的情况下)与肽结合时，T细胞通过信号转导被激活。
TCR的α链和β链在序列上高度可变。每条链由两个胞外结构域组成，一个可变区(V)和一个恒定区(C)。恒定区靠近T细胞的细胞膜，后跟一个跨膜区和一个短的细胞质尾，而可变区与肽/HLA-A复合物结合。
每个链的可变区有三个高变区(也称为互补决定区(CDR))。因此，TCRα可变区(本文称为TCR Vα区、TCR Vα结构域、Vα区或Vα结构域、α可变结构域等)包括CDR1、CDR2和CDR3区。类似地，TCRβ可变区(本文称为TCR Vβ区、TCR Vβ结构域、Vβ区或Vβ结构域、β可变结构域等)也包含(不同的)CDR1、CDR2和CDR3区。在每个α和β可变区中，CDR3主要负责识别由HLA-A呈递的肽。
如本领域技术人员所知，短语“TCRα链可变区”是指TCRα链的可变(V)结构域(胞外结构域)，并因此包括三个高变区(CDR1、CDR2和特定的CDR3)，以及插入序列，但不包括α链的恒定(C)区，其不形成可变区的一部分。
如本领域技术人员所知，短语“TCRβ链可变区”是指TCRβ链的可变(V)结构域(胞外结构域)，并因此包括三个高变区(CDR1、CDR2和特定的CDR3)，以及插入序列，但不包括β链的恒定(C)区，其不形成可变区的一部分。
本文提供了一种分离的核酸组合物，其编码具有TCRα链可变区(Vα)和TCRβ链可变区(Vβ)的HA-1H抗原特异性结合蛋白，该组合物包含:
(a)编码TCR Vα结构域的核酸序列，所述TCRVα结构域包含与SEQ ID NO：1-3中任一项具有至少85％序列同一性的CDR3氨基酸序列；和
(b)编码TCR Vβ结构域的核酸序列，所述TCRVβ结构域具有由TRBV7-9基因编码的氨基酸序列，其中所述Vβ结构域包含与SEQ ID NO：4-6中任一项具有至少90％序列同一性的CDR3氨基酸序列和与SEQ ID NO：7具有至少80％序列同一性的CDR1氨基酸序列。
以下针对(a)所述的排列可以与以下针对(b)的排列组合(例如以形成合适的核酸组合物，其编码具有TCRα链可变(Vα)区和TCRβ链可变(Vβ)区的HA-1H抗原特异性结合蛋白)。下面提供了关于适当组合的更多细节。
TCRα链可变(Vα)区的组分
本文所述的分离的核酸组合物编码HA-1H抗原特异性结合蛋白。所述HA-1H抗原特异性结合蛋白包含TCR Vα结构域，所述TCRVα结构域包含CDR3氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID No:1-3中的任一个具有至少80％的序列同一性。
(i)包含SEQ ID NO:1的CDR3氨基酸序列的Vα结构域及其功能性变体。
赋予与HA-1H抗原的特异性结合的合适的TCRVα结构域CDR3氨基酸序列的实例显示在SEQ ID NO：1中。对于本领域技术人员来说显而易见的是，SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的变体也可以是功能性的(即，当CDR3是TCRVα结构域的一部分时，保持它们赋予与HA-1H抗原(例如SEQ ID NO：10中所示的肽)特异性结合的能力)。因此，本文涵盖这些功能性变体。
例如，合适的(功能性)Vα结构域CDR3氨基酸序列可以与SEQ ID NO:1具有至少80％的序列同一性，即它们可以与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。合适地，同一性百分比计算为相对于参考序列(例如SEQ ID NO:1)全长的同一性百分比。换句话说，合适的(功能性)Vα结构域CDR3氨基酸序列可以与SEQ ID NO:1所示的序列相差一个或几个(例如两个等)氨基酸。
如上所述，当CDR3是TCR Vα结构域的一部分时，SEQ ID NO:1的功能性变体保留了它们赋予与HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)特异性结合的能力。
功能性变体可以是SEQ ID NO:1的天然存在的、合成的或合成改良的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ ID NO:1的氨基酸的一个、两个或多个保守取代，或CDR3非关键区中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的SEQ IDNO:1的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
在一个实例中，Vα结构域的CDR3包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列或由SEQ ID NO：1的氨基酸序列组成。在TCR Vα结构域CDR3具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的实例中，CDR3可以被SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12或其遗传简并序列(即由于遗传密码简并性而编码相同蛋白质的其他核酸序列)的核酸序列编码。注意，SEQ ID NO：12是克隆M7的CDR3的核酸序列的密码子优化版本(未优化的序列是SEQ ID NO：11)。
编码的TCR Vα结构域除了包含特定的CDR3外，还可以包含CDR1，所述CDR1包含SEQID NO:80的氨基酸序列或其功能变体(即其中所述变体保留了特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的N末端的能力)。这些功能性变体可以是SEQ ID NO:80的天然存在的、合成的或合成改进的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ ID NO:80的一个或多个氨基酸的保守取代，或者在蛋白质的非关键区域中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的N末端的SEQ ID NO:80的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
例如，合适的功能性Vα结构域CDR1氨基酸序列可以与SEQ ID NO:80具有至少80％的序列同一性，即它可以与SEQ ID NO:80具有至少80％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。合适地，同一性百分比被计算为相对于参考序列(例如SEQ ID NO:80)全长的同一性百分比。换句话说，合适的功能性Vα结构域CDR1氨基酸序列可以与SEQ ID NO:80所示的序列相差一个或几个氨基酸。如前所述，与SEQ ID NO:80所示的序列相比，该变体可以包含氨基酸取代，例如保守氨基酸取代。如上所述，当CDR1是TCR Vα结构域的一部分时，SEQ ID NO:80的功能性变体保留了特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO：10中所示的肽)的N末端的能力。
在一个实例中，Vα结构域的CDR1包含SEQ ID NO：80的氨基酸序列或由SEQ ID NO：80的氨基酸序列组成。在TCR Vα结构域CDR1具有SEQ ID NO：80的氨基酸序列的实例中，CDR1可以被SEQ ID NO：81或SEQ ID NO：82或其遗传简并序列(即由于遗传密码简并性而编码相同蛋白质的其他核酸序列)的核酸序列编码。注意，SEQ ID NO：82是克隆M7的CDR1的核酸序列的密码子优化版本(未优化的序列是SEQ ID NO：81)。
其他合适的CDR1 Vα结构域氨基酸序列在本文的其他地方有所描述，例如包含SEQID NO:8所示序列的CDR1序列。对于本领域技术人员来说，很明显，当讨论与SEQ ID NO:1(或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的相应核苷酸序列)的CDR3序列组合的VαCDR1氨基酸和核苷酸序列的排列时，上面提到的SEQ ID NO:80可以用SEQ ID NO:8(以及SEQ ID NO:9和27的相应核苷酸序列)代替。
编码的TCR Vα结构域除了特定的CDR3(以及任选地上述特定的CDR1)之外，还可以包含CDR2，该CDR 2包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列或其功能变体(即其中所述变体保留了特异性结合HLA-A*02:01的能力)。这些功能性变体可以是SEQ ID NO:83的天然存在的、合成的或合成改进的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ IDNO:83的一个或多个氨基酸的保守取代，或者在蛋白质的非关键区域中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HLA-A*02:01的SEQ ID NO:83的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
例如，合适的功能性Vα结构域CDR2氨基酸序列可以与SEQ ID NO:83具有至少80％的序列同一性，即它可以与SEQ ID NO:83具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。合适地，同一性百分比计算为相对于参考序列(例如SEQ ID NO:83)全长的同一性百分比。换句话说，合适的功能性Vα结构域CDR2氨基酸序列可以与SEQ ID NO:83所示的序列相差一个或几个氨基酸。如前所述，与SEQ ID NO:83所示的序列相比，该变体可以包含氨基酸取代，例如保守氨基酸取代。如上所述，SEQ ID NO:83的功能性变体保留了特异性结合HLA-A*02:01的能力。
在一个实例中，Vα结构域的CDR2包含SEQ ID NO：83的氨基酸序列或由SEQ ID NO：83的氨基酸序列组成。在TCR Vα结构域CDR2具有SEQ ID NO：83的氨基酸序列的实例中，CDR2可以被SEQ ID NO：84或SEQ ID NO：85或其遗传简并序列(即由于遗传密码简并性而编码相同蛋白质的其他核酸序列)的核酸序列编码。注意，SEQ ID NO：85是克隆M7的CDR2的核酸序列的密码子优化版本(未优化的序列是SEQ ID NO：84)。
其他合适的CDR2 Vα结构域氨基酸序列在本文的其他地方有所描述，例如包含SEQID NO:28所示序列的CDR2序列。对于本领域技术人员来说，很明显，当讨论与SEQ ID NO:1(或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的相应核苷酸序列)的CDR3序列组合的VαCDR2氨基酸和核苷酸序列的排列时，上面提到的SEQ ID NO:83可以用SEQ ID NO:28(和SEQ ID NO:39和40的相应核苷酸序列)代替。
编码的TCR Vα结构域因此可以包含上面详细提到的CDR(具体通过SEQ ID，即SEQID NO:1、SEQ ID NO:80(或SEQ ID NO:8)和SEQ ID NO:83(或SEQ ID NO:28)，或其功能性变体)，在CDR之间具有适当的插入序列。
编码的TCR Vα结构域可以包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列或其功能性变体(即当作为本文所述结合蛋白的一部分时，其中所述变体TCR Vα结构域保持特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的能力)。这些功能性变体可以是SEQ ID NO:17的天然存在的、合成的或合成改进的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ ID NO:17的一个或多个氨基酸的保守取代，或者在蛋白质的非关键区域中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的SEQ IDNO:17的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
在一个实例中，编码的TCR Vα结构域可以具有与SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有至少75％、至少80％、至少85％或至少90％(或至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的氨基酸序列，同时保持特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的能力。换句话说，也涵盖与SEQID NO:17的序列相比，具有一个或几个氨基酸取代的功能性TCR Vα结构域。如前所述，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代。与SEQ ID NO:17相比，序列的可变性可能都在不形成CDR的TCR Vα结构域的区域(即，所述变体可以具有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：80和/或SEQ ID NO：83的CDR，并且与SEQ ID NO：17相比仍具有25％(或更少)的序列变异性)。换句话说，SEQ IDNO:17的CDR的序列可以保留，而序列的其余部分是变化的，在上述“至少75％同一性”参数内是合适的。合适地，同一性百分比可以计算为相对于参考序列(例如SEQ ID NO:17)全长的同一性百分比。
例如，编码的TCRVα结构域可包含与SEQ ID NO：17的氨基酸序列具有至少75％(例如，至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％等)序列同一性的氨基酸序列，其中TCR Vα结构域包含具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR3。在这个实例中，TCR Vα结构域CDR1可以具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列，而TCR Vα结构域CDR2可以具有SEQ ID NO:83的氨基酸序列。
作为另一个实例，编码的TCR Vα结构域可以包含在SEQ ID NO:17的氨基酸序列上具有0至10(或0至5)个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列，其中TCR Vα结构域包含具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR3。在这个实例中，TCR Vα结构域CDR1可以具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列，而TCR Vα结构域CDR2可以具有SEQ ID NO:83的氨基酸序列。
在TCR Vα结构域具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的实例中，TCR Vα结构域可以由SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20的核酸序列或其遗传简并序列(即由于遗传密码的简并性，编码相同蛋白质的其它核酸序列)编码。注意，SEQ ID NO:20是克隆M7的TCR Vα结构域的核酸序列的密码子优化版本(非优化序列是SEQ ID NO:19)。
为了避免疑问，所述编码TCR Vα结构域的核酸序列也可以编码TCRα链恒定结构域。合适的恒定区的实例是在MP71-TCR-flex逆转录病毒载体中编码的。然而，本发明不限于该特定的恒定区，并且包括任何合适的TCRα链恒定区。恒定区可以是鼠源的、人源的或人源化的。用于识别或产生合适的恒定域的方法是本领域技术人员所熟知的，并且完全在其常规能力范围内。
仅为举例来说，恒定区可以由载体编码或衍生自载体(例如慢病毒、逆转录病毒或质粒载体，但也可以是腺病毒、腺相关病毒、痘苗病毒、金丝雀痘病毒或疱疹病毒载体，其中鼠或人恒定区是预克隆的)。最近，微环也被描述用于TCR基因转移(由R Monjezi，CMiskey，T Gogishvili，M Schleef，M Schmeer，H Einsele，Z Ivics和M Hudecek在《白血病2016》中发表的non-viral Sleeping Beauty transposition from minicirclevectors)。此外，裸(合成)DNA/RNA也可用于引入TCR。例如，如LV Coren et al.,BioTechniques2015中所述的具有预克隆的TCR-Ca和Cb基因的pMSGV逆转录病毒载体，可用于提供适当的恒定区。或者，可以通过同源定向修复将单链或双链DNA或RNA插入TCR位点(参见Roth et al 2018Nature vol 559；page 405)。作为进一步的选择，非同源末端连接是可能的。
包括本文所述的具有适当恒定结构域的TCR Vα结构域的特定TCRα链氨基酸序列的实例显示在SEQ ID NO：47和SEQ ID NO：48中。值得注意的是，SEQ ID NO：48所示的恒定区是鼠的。还包括SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48的适当功能变体(例如与SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:48的氨基酸序列具有至少75％(例如至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％等)序列同一性的变体，当作为本文所述结合蛋白的一部分时，其中所述变体TCRα链氨基酸序列保持其特异性结合HA-1H抗原(例如在SEQ ID NO:10中显示的肽)的能力)。换句话说，也涵盖与SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:48的序列相比，具有一个或几个氨基酸取代的功能性TCRα链。如前所述，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代。与SEQ ID NO:47或SEQ IDNO:48相比，序列的可变性可能都在不形成CDR的TCRα链区域(即该变异体可能具有SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:80和/或SEQ ID NO:83的CDR，并且与SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:48相比仍具有25％(或更少)的序列可变性)。换句话说，SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:48的CDR序列可以保留，而序列的其余部分是变化的，在上述“至少75％同一性”参数内是合适的。合适地，同一性百分比可以计算为相对于参考序列(例如，适当的SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:48)全长的同一性百分比。
例如，编码的TCRα链可包含与SEQ ID NO:47或SEQ ID NO：48的氨基酸序列具有至少75％(例如，至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％等)序列同一性的氨基酸序列，其中TCRα链包含具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR3。在这个实例中，TCRα链CDR1可以具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列，而TCRα链CDR2可以具有SEQ ID NO:83的氨基酸序列。
在TCRα链具有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的实例中，TCRα链可以由SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:50的核酸序列或其遗传简并序列(即由于遗传密码的简并性，编码相同蛋白质的其它核酸序列)编码。注意，SEQ ID NO:50是克隆M7的TCR Vα结构域的核酸序列的密码子优化版本(非优化序列是SEQ ID NO:49)。
在TCRα链具有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的实例中，TCRα链可以由SEQ ID NO:51的核酸序列或其遗传简并序列(即由于遗传密码的简并性，编码相同蛋白质的其它核酸序列)编码。
(ii)包含SEQ ID NO:2的CDR3氨基酸序列的Vα结构域及其功能性变体。
赋予与HA-1H抗原的特异性结合的合适的TCRVα结构域CDR3氨基酸序列的实例显示在SEQ ID NO：2中。对于本领域技术人员来说显而易见的是，SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的变体也可以是功能性的(即，当CDR3是TCRVα结构域的一部分时，保持它们赋予与HA-1H抗原(例如SEQ ID NO：10中所示的肽)特异性结合的能力)。因此，本文涵盖这些功能性变体。
例如，合适的(功能性)Vα结构域CDR1氨基酸序列可以与SEQ ID NO:2具有至少80％的序列同一性，即它们可以与SEQ ID NO:2具有至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。合适地，同一性百分比计算为相对于参考序列(例如SEQ ID NO:2)全长的同一性百分比。换句话说，合适的(功能性)Vα结构域CDR3氨基酸序列可以与SEQ IDNO:2所示的序列相差一个或几个(例如2个)氨基酸。如上所述，SEQ ID NO：2的功能性变体保留了它们赋予与HA-1H抗原(例如SEQ ID NO：10中所示的肽)特异性结合的能力，当CDR3是TCR Vα结构域的一部分时。
功能性变体可以是SEQ ID NO:2的天然存在的、合成的或合成改良的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ ID NO:2的氨基酸的一个、两个或多个保守取代，或CDR3非关键区中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的SEQ IDNO:2的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
在一个实例中，Vα结构域的CDR3包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列或由SEQ ID NO：2的氨基酸序列组成。在TCR Vα结构域CDR3具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的实例中，CDR3可以被SEQ ID NO：23或SEQ ID NO：24或其遗传简并序列(即由于遗传密码简并性而编码相同蛋白质的其他核酸序列)的核酸序列编码。注意，SEQ ID NO：24是克隆M2的CDR3的核酸序列的密码子优化版本(未优化的序列是SEQ ID NO：23)。
编码的TCR Vα结构域除了包含特定的CDR3外，还可以包含CDR1，所述CDR1包含SEQID NO:8的氨基酸序列或其功能变体(即其中所述变体保留了特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的N末端的能力)。这些功能性变体可以是SEQ ID NO:8的天然存在的、合成的或合成改进的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ ID NO:8的一个或多个氨基酸的保守取代，或者在蛋白质的非关键区域中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的N末端的SEQ ID NO:8的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
例如，合适的功能性Vα结构域CDR1氨基酸序列可以与SEQ ID NO:8具有至少80％的序列同一性，即它可以与SEQ ID NO:8具有至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。合适地，同一性百分比计算为相对于参考序列(例如SEQ IDNO:8)全长的同一性百分比。换句话说，合适的功能性Vα结构域CDR1氨基酸序列可以与SEQID NO:8所示的序列相差一个或几个氨基酸。如前所述，与SEQ ID NO:8所示的序列相比，该变体可以包含氨基酸取代，例如保守氨基酸取代。如上所述，当CDR1是TCR Vα结构域的一部分时，SEQ ID NO:8的功能性变体保留了特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO：10中所示的肽)的N末端的能力。
在一个实例中，Vα结构域的CDR1包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列或由SEQ ID NO：8的氨基酸序列组成。在TCR Vα结构域CDR1具有SEQ ID NO：8的氨基酸序列的实例中，CDR1可以被SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：27或其遗传简并序列(即由于遗传密码简并性而编码相同蛋白质的其他核酸序列)的核酸序列编码。注意，SEQ ID NO：27是克隆M2的CDR1的核酸序列的密码子优化版本(未优化的序列是SEQ ID NO：9)。
其他合适的CDR1 Vα结构域氨基酸序列在本文的其他地方有所描述，例如包含SEQID NO:80所示序列的CDR1序列。对于本领域技术人员来说，很明显，当讨论与SEQ ID NO:2(或SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24的相应核苷酸序列)的CDR3序列组合的VαCDR1氨基酸和核苷酸序列的排列时，上面提到的SEQ ID NO:8可以用SEQ ID NO:80(以及SEQ ID NO:81和82的相应核苷酸序列)代替。
编码的TCR Vα结构域除了特定的CDR3(以及任选地上述特定的CDR1)之外，还可以包含CDR2，该CDR 2包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列或其功能变体(即其中所述变体保留了特异性结合HLA-A*02:01的能力)。这些功能性变体可以是SEQ ID NO:28的天然存在的、合成的或合成改进的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ IDNO:28的一个或多个氨基酸的保守取代，或者在蛋白质的非关键区域中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HLA-A*02:01的SEQ ID NO:28的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
例如，合适的功能性Vα结构域CDR2氨基酸序列可以与SEQ ID NO:28具有至少80％的序列同一性，即它可以与SEQ ID NO:28具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。合适地，同一性百分比计算为相对于参考序列(例如SEQ ID NO:28)全长的同一性百分比。换句话说，合适的功能性Vα结构域CDR2氨基酸序列可以与SEQ ID NO:28所示的序列相差一个或几个氨基酸。如前所述，与SEQ ID NO:28所示的序列相比，该变体可以包含氨基酸取代，例如保守氨基酸取代。如上所述，SEQ ID NO:28的功能性变体保留了特异性结合HLA-A*02:01的能力。
在一个实例中，Vα结构域的CDR2包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列或由SEQ ID NO：28的氨基酸序列组成。在TCR Vα结构域CDR2具有SEQ ID NO：28的氨基酸序列的实例中，CDR2可以被SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：40或其遗传简并序列(即由于遗传密码简并性而编码相同蛋白质的其他核酸序列)的核酸序列编码。注意，SEQ ID NO：40是克隆M2的CDR2的核酸序列的密码子优化版本(未优化的序列是SEQ ID NO：39)。
其他合适的CDR2 Vα结构域氨基酸序列在本文的其他地方有所描述，例如包含SEQID NO:83所示序列的CDR2序列。对于本领域技术人员来说，很明显，当讨论与SEQ ID NO:2(或SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24的相应核苷酸序列)的CDR3序列组合的VαCDR2氨基酸和核苷酸序列的排列时，上面提到的SEQ ID NO:28可以因此用SEQ ID NO:83(以及SEQ IDNO:84和85的相应核苷酸序列)代替。
编码的TCR Vα结构域因此可以包含上面详细提到的CDR(具体通过SEQ ID，即SEQID NO:2、SEQ ID NO:8(或SEQ ID NO:80)和SEQ ID NO:28(或SEQ ID NO:83)，或其功能性变体)，在CDR之间具有适当的插入序列。
编码的TCR Vα结构域可以包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列或其功能性变体(即当作为本文所述结合蛋白的一部分时，其中所述变体TCR Vα结构域保持特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的能力)。这些功能性变体可以是SEQ ID NO:29的天然存在的、合成的或合成改进的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ ID NO:29的一个或多个氨基酸的保守取代，或者在蛋白质的非关键区域中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的SEQ IDNO:29的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
在一个实例中，编码的TCR Vα结构域可以具有与SEQ ID NO:29的氨基酸序列具有至少75％、至少80％、至少85％或至少90％(或至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的氨基酸序列，同时保持特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的能力。换句话说，也涵盖与SEQID NO:29的序列相比，具有一个或几个氨基酸取代的功能性TCR Vα结构域。如前所述，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代。与SEQ ID NO:29相比，序列的可变性可能都在不形成CDR的TCR Vα结构域的区域(即，所述变体可以具有SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：8和/或SEQ ID NO：28的CDR，并且与SEQ ID NO：29相比仍具有25％(或更少)的序列变异性)。换句话说，SEQ IDNO:29的CDR的序列可以保留，而序列的其余部分是变化的，在上述“至少75％同一性”参数内是合适的。合适地，同一性百分比可以计算为相对于参考序列(例如SEQ ID NO:29)全长的同一性百分比。
例如，编码的TCRVα结构域可包含与SEQ ID NO：29的氨基酸序列具有至少75％(例如，至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％等)序列同一性的氨基酸序列，其中TCR Vα结构域包含具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR3。在这个实例中，TCR Vα结构域CDR1可以具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列，而TCR Vα结构域CDR2可以具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列。
作为另一个实例，编码的TCR Vα结构域可以包含在SEQ ID NO:29的氨基酸序列上具有0至10(或0至5)个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列，其中TCR Vα结构域包含具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR3。在这个实例中，TCR Vα结构域CDR1可以具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列，而TCR Vα结构域CDR2可以具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列。
在TCR Vα结构域具有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的实例中，TCR Vα结构域可以由SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:32的核酸序列或其遗传简并序列(即由于遗传密码的简并性，编码相同蛋白质的其它核酸序列)编码。注意，SEQ ID NO:32是克隆M2的TCR Vα结构域的核酸序列的密码子优化版本(非优化序列是SEQ ID NO:31)。
为了避免疑问，所述编码TCR Vα结构域的核酸序列也可以编码TCRα链恒定结构域。合适的恒定区的实例是MP71-TCR-flex逆转录病毒载体中所编码的。然而，本发明不限于该特定的恒定区，并且包括任何合适的TCRα链恒定区。恒定区可以是鼠源的、人源的或人源化的。用于识别或产生合适的恒定域的方法是本领域技术人员所熟知的，并且完全在其常规能力范围内。
仅为举例来说，恒定区可以由载体编码或衍生自载体(例如慢病毒、逆转录病毒或质粒载体，但也可以是腺病毒、腺相关病毒、痘苗病毒、金丝雀痘病毒或疱疹病毒载体，其中鼠或人恒定区是预克隆的)。最近，微环也被描述用于TCR基因转移(由R Monjezi，CMiskey，T Gogishvili，M Schleef，M Schmeer，H Einsele，Z Ivics和M Hudecek在《白血病2016》中发表的non-viral Sleeping Beauty transposition from minicirclevectors)。此外，裸(合成)DNA/RNA也可用于引入TCR。例如，如LV Coren et al.,BioTechniques2015中所述的具有预克隆的TCR-Ca和Cb基因的pMSGV逆转录病毒载体，可用于提供适当的恒定区。或者，可以通过同源定向修复将单链或双链DNA或RNA插入TCR位点(参见Roth et al 2018Nature vol 559；page 405)。作为进一步的选择，非同源末端连接是可能的。
包括本文所述的具有适当恒定结构域的TCR Vα结构域的特定TCRα链氨基酸序列的实例显示在SEQ ID NO：57和SEQ ID NO：58中。值得注意的是，SEQ ID NO：58所示的恒定区是鼠的。还包括SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:58的适当功能变体(例如与SEQ ID NO:57或SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少75％(例如至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％等)序列同一性的变体，当作为本文所述结合蛋白的一部分时，其中所述变体TCRα链氨基酸序列保持其特异性结合HA-1H抗原(例如在SEQ ID NO:10中显示的肽)的能力)。换句话说，也涵盖与SEQ ID NO:57或SEQ ID NO:58的序列相比，具有一个或几个氨基酸取代的功能性TCRα链。如前所述，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代。与SEQ ID NO:57或SEQ IDNO:58相比，序列的可变性可能都在不形成CDR的TCRα链区域(即该变异体可能具有SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:8和/或SEQ ID NO:28的CDR，并且与SEQ ID NO:57或SEQ ID NO:58相比仍具有25％(或更少)的序列可变性)。换句话说，SEQ ID NO:57或SEQ ID NO:58的CDR序列可以保留，而序列的其余部分是变化的，在上述“至少75％同一性”参数内是合适的。合适地，同一性百分比可以计算为相对于参考序列(例如,适当的SEQ ID NO:57或SEQ ID NO:58)全长的同一性百分比。
例如，编码的TCRα链可包含与SEQ ID NO:57或SEQ ID NO：58的氨基酸序列具有至少75％(例如，至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％等)序列同一性的氨基酸序列，其中TCRα链包含具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR3。在这个实例中，TCRα链CDR1可以具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列，而TCRα链CDR2可以具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列。
在TCRα链具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列的实例中，TCRα链可以由SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:60的核酸序列或其遗传简并序列(即由于遗传密码的简并性，编码相同蛋白质的其它核酸序列)编码。注意，SEQ ID NO:60是克隆M2的TCR Vα结构域的核酸序列的密码子优化版本(非优化序列是SEQ ID NO:59)。
在TCRα链具有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的实例中，TCRα链可以由SEQ ID NO:61的核酸序列或其遗传简并序列(即由于遗传密码的简并性，编码相同蛋白质的其它核酸序列)编码。
(iii)包含SEQ ID NO:3的CDR3氨基酸序列的Vα结构域及其功能性变体。
赋予与HA-1H抗原的特异性结合的合适的TCRVα结构域CDR3氨基酸序列的实例显示在SEQ ID NO：3中。对于本领域技术人员来说显而易见的是，SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的变体也可以是功能性的(即，当CDR3是TCRVα结构域的一部分时，保持它们赋予与HA-1H抗原(例如SEQ ID NO：10中所示的肽)特异性结合的能力)。因此，本文涵盖这些功能性变体。
例如，合适的功能性Vα结构域CDR1氨基酸序列可以与SEQ ID NO:3具有至少80％的序列同一性，即它们可以与SEQ ID NO:3具有至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。合适地，同一性百分比计算为相对于参考序列(例如SEQ ID NO:3)全长的同一性百分比。换句话说，合适的(功能性)Vα结构域CDR3氨基酸序列可以与SEQ IDNO:3所示的序列相差一个或几个(例如2个)氨基酸。如上所述，当CDR3是TCR Vα结构域的一部分时，SEQ ID NO：2的功能性变体保留了它们赋予与HA-1H抗原(例如SEQ ID NO：10中所示的肽)特异性结合的能力。
功能性变体可以是SEQ ID NO:3的天然存在的、合成的或合成改良的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ ID NO:3的氨基酸的一个、两个或多个保守取代，或CDR3非关键区中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的SEQ IDNO:3的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
在一个实例中，Vα结构域的CDR3包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或由SEQ ID NO：3的氨基酸序列组成。在TCR Vα结构域CDR3具有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的实例中，CDR3可以被SEQ ID NO：35或SEQ ID NO：36或其遗传简并序列(即由于遗传密码简并性而编码相同蛋白质的其他核酸序列)的核酸序列编码。注意，SEQ ID NO：36是克隆FK47.83的CDR3的核酸序列的密码子优化版本(未优化的序列是SEQ ID NO：35)。
编码的TCR Vα结构域除了包含特定的CDR3外，还可以包含CDR1，所述CDR1包含SEQID NO:8的氨基酸序列或其功能变体(即其中所述变体保留了特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的N末端的能力)。这些功能性变体可以是SEQ ID NO:8的天然存在的、合成的或合成改进的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ ID NO:8的一个或多个氨基酸的保守取代，或者在蛋白质的非关键区域中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的N末端的SEQ ID NO:8的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
例如，合适的功能性Vα结构域CDR1氨基酸序列可以与SEQ ID NO:8具有至少80％的序列同一性，即它可以与SEQ ID NO:8具有至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。合适地，同一性百分比计算为相对于参考序列(例如SEQ IDNO:8)全长的同一性百分比。换句话说，合适的功能性Vα结构域CDR1氨基酸序列可以与SEQID NO:8所示的序列相差一个或几个氨基酸。如前所述，与SEQ ID NO:8所示的序列相比，该变体可以包含氨基酸取代，例如保守氨基酸取代。如上所述，当CDR1是TCR Vα结构域的一部分时，SEQ ID NO:8的功能性变体保留了特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO：10中所示的肽)的N末端的能力。
在一个实例中，Vα结构域的CDR1包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列或由SEQ ID NO：8的氨基酸序列组成。在TCR Vα结构域CDR1具有SEQ ID NO：8的氨基酸序列的实例中，CDR1可以被SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：27或其遗传简并序列(即由于遗传密码简并性而编码相同蛋白质的其他核酸序列)的核酸序列编码。注意，SEQ ID NO：27是克隆FK47.83的CDR1的核酸序列的密码子优化版本(未优化的序列是SEQ ID NO：9)。
其他合适的CDR1 Vα结构域氨基酸序列在本文的其他地方有所描述，例如包含SEQID NO:80所示序列的CDR1序列。对于本领域技术人员来说，很明显，当讨论与SEQ ID NO:3(或SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:36的相应核苷酸序列)的CDR3序列组合的VαCDR1氨基酸和核苷酸序列的排列时，上面提到的SEQ ID NO:8可以用SEQ ID NO:80(以及SEQ ID NO:81和82的相应核苷酸序列)代替。
编码的TCR Vα结构域除了特定的CDR3(和任选地上述特定的CDR1)之外，还可以包含CDR2，所述CDR 2包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列或其功能变体(即其中所述变体保留了特异性结合HLA-A*02:01的能力)。这些功能性变体可以是SEQ ID NO:28的天然存在的、合成的或合成改进的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ IDNO:28的一个或多个氨基酸的保守取代，或者在蛋白质的非关键区域中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HLA-A*02:01的SEQ ID NO:28的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
例如，合适的功能性Vα结构域CDR2氨基酸序列可以与SEQ ID NO:28具有至少80％的序列同一性，即其可以与SEQ ID NO:28具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。合适地，同一性百分比计算为相对于参考序列(例如SEQ ID NO:28)全长的同一性百分比。换句话说，合适的功能性Vα结构域CDR2氨基酸序列可以与SEQ ID NO:28所示的序列相差一个或几个氨基酸。如前所述，与SEQ ID NO:28所示的序列相比，该变体可以包含氨基酸取代，例如保守氨基酸取代。如上所述，SEQ ID NO:28的功能性变体保留了特异性结合HLA-A*02:01的能力。
在一个实例中，Vα结构域的CDR2包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列或由SEQ ID NO：28的氨基酸序列组成。在TCR Vα结构域CDR2具有SEQ ID NO：28的氨基酸序列的实例中，CDR2可以被SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：40或其遗传简并序列(即由于遗传密码简并性而编码相同蛋白质的其他核酸序列)的核酸序列编码。注意，SEQ ID NO：40是克隆FK47.83的CDR2的核酸序列的密码子优化版本(未优化的序列是SEQ ID NO：39)。
其他合适的CDR2 Vα结构域氨基酸序列在本文的其他地方有所描述，例如包含SEQID NO:83所示序列的CDR2序列。对于本领域技术人员来说，很明显，当讨论与SEQ ID NO:3(或SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:36的相应核苷酸序列)的CDR3序列组合的VαCDR2氨基酸和核苷酸序列的排列时，上面提到的SEQ ID NO:28可以因此用SEQ ID NO:83(以及SEQ IDNO:84和85的相应核苷酸序列)代替。
编码的TCR Vα结构域因此可以包含上面详细提到的CDR(具体通过SEQ ID，即SEQID NO:3、SEQ ID NO:8(或SEQ ID NO:80)和SEQ ID NO:28(或SEQ ID NO:83)，或其功能性变体)，在CDR之间具有适当的插入序列。
编码的TCR Vα结构域可以包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列或其功能性变体(即当作为本文所述结合蛋白的一部分时，其中所述变体TCR Vα结构域保持特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的能力)。这些功能性变体可以是SEQ ID NO:41的天然存在的、合成的或合成改进的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ ID NO:41的一个或多个氨基酸的保守取代，或者在蛋白质的非关键区域中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的SEQ IDNO:41的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
在一个实例中，编码的TCR Vα结构域可以具有与SEQ ID NO:41的氨基酸序列具有至少75％、至少80％、至少85％或至少90％(或至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的氨基酸序列，同时保持特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的能力。换句话说，也涵盖与SEQID NO:41的序列相比，具有一个或几个氨基酸取代的功能性TCR Vα结构域。如前所述，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代。与SEQ ID NO:41相比，序列的可变性可能都在不形成CDR的TCR Vα结构域的区域(即，所述变体可以具有SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：8和/或SEQ ID NO：28的CDR，并且与SEQ ID NO：41相比仍具有25％(或更少)的序列变异性)。换句话说，SEQ IDNO:41的CDR的序列可以保留，而序列的其余部分是变化的，在上述“至少75％同一性”参数内是合适的。合适地，同一性百分比可以计算为相对于参考序列(例如SEQ ID NO:41)全长的同一性百分比。
例如，编码的TCRVα结构域可包含与SEQ ID NO：41的氨基酸序列具有至少75％(例如，至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％等)序列同一性的氨基酸序列，其中TCR Vα结构域包含具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR3。在这个实例中，TCR Vα结构域CDR1可以具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列，而TCR Vα结构域CDR2可以具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列。
作为另一个实例，编码的TCR Vα结构域可以包含在SEQ ID NO:41的氨基酸序列上具有0至10(或0至5)个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列，其中TCR Vα结构域包含具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR3。在这个实例中，TCR Vα结构域CDR1可以具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列，而TCR Vα结构域CDR2可以具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列。
在TCR Vα结构域具有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的实例中，TCR Vα结构域可以由SEQ ID NO:43或SEQ ID NO:44的核酸序列或其遗传简并序列(即由于遗传密码的简并性，编码相同蛋白质的其它核酸序列)编码。注意，SEQ ID NO:44是克隆FK47.83的TCR Vα结构域的核酸序列的密码子优化版本(非优化序列是SEQ ID NO:43)。
为了避免疑问，所述编码TCR Vα结构域的核酸序列也可以编码TCRα链恒定结构域。合适的恒定区的实例是在MP71-TCR-flex逆转录病毒载体中编码的。然而，本发明不限于该特定的恒定区，并且包括任何合适的TCRα链恒定区。恒定区可以是鼠源的、人源的或人源化的。用于识别或产生合适的恒定域的方法是本领域技术人员所熟知的，并且完全在其常规能力范围内。
仅为举例来说，恒定区可以由载体编码或衍生自载体(例如慢病毒、逆转录病毒或质粒载体，但也可以是腺病毒、腺相关病毒、痘苗病毒、金丝雀痘病毒或疱疹病毒载体，其中鼠或人恒定区是预克隆的)。最近，微环也被描述用于TCR基因转移(由R Monjezi，CMiskey，T Gogishvili，M Schleef，M Schmeer，H Einsele，Z Ivics和M Hudecek在《白血病2016》中发表的non-viral Sleeping Beauty transposition from minicirclevectors)。此外，裸(合成)DNA/RNA也可用于引入TCR。例如，如LV Coren et al.,BioTechniques2015中所述的具有预克隆的TCR-Ca和Cb基因的pMSGV逆转录病毒载体，可用于提供适当的恒定区。或者，可以通过同源定向修复将单链或双链DNA或RNA插入TCR位点(参见Roth et al 2018Nature vol 559；page 405)。作为进一步的选择，非同源末端连接是可能的。
包括本文所述的具有适当恒定结构域的TCR Vα结构域的特定TCRα链氨基酸序列的实例显示在SEQ ID NO：67和SEQ ID NO：68中。值得注意的是，SEQ ID NO：68所示的恒定区是鼠的。还包括SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:68的适当功能变体(例如与SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的氨基酸序列具有至少75％(例如至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％等)序列同一性的变体，当作为本文所述结合蛋白的一部分时，其中所述变体TCRα链氨基酸序列保持其特异性结合HA-1H抗原(例如在SEQ ID NO:10中显示的肽)的能力)。换句话说，也涵盖与SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的序列相比，具有一个或几个氨基酸取代的功能性TCRα链。如前所述，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代。与SEQ ID NO:67或SEQ IDNO:68相比，序列的可变性可能都在不形成CDR的TCRα链区域(即该变异体可能具有SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:8和/或SEQ ID NO:28的CDR，并且与SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68相比仍具有25％(或更少)的序列可变性)。换句话说，SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的CDR序列可以保留，而序列的其余部分是变化的，在上述“至少75％同一性”参数内是合适的。合适地，同一性百分比可以计算为相对于参考序列(例如,适当的SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68)全长的同一性百分比。
例如，编码的TCRα链可包含与SEQ ID NO:67或SEQ ID NO：68的氨基酸序列具有至少75％(例如，至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％等)序列同一性的氨基酸序列，其中TCRα链包含具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR3。在这个实例中，TCRα链CDR1可以具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列，而TCRα链CDR2可以具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列。
在TCRα链具有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的实例中，TCRα链可以由SEQ ID NO:69或SEQ ID NO:70的核酸序列或其遗传简并序列(即由于遗传密码的简并性，编码相同蛋白质的其它核酸序列)编码。注意，SEQ ID NO:70是克隆FK47.83的TCR Vα结构域的核酸序列的密码子优化版本(非优化序列是SEQ ID NO:69)。
在TCRα链具有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的实例中，TCRα链可以由SEQ ID NO:71的核酸序列或其遗传简并序列(即由于遗传密码的简并性，编码相同蛋白质的其它核酸序列)编码。
TCRβ链可变(Vβ)区的组成
本文所述的分离的核酸组合物编码HA-1H抗原特异性结合蛋白。所述编码的HA-1H抗原特异性结合蛋白包含TCR Vα结构域，该结构域包含CDR3氨基酸序列，该序列与上述SEQID NO：1至3中的任何一个具有至少80％的序列同一性。编码的HA-1H抗原特异性结合蛋白还包含具有由TRBV7-9基因编码的氨基酸序列的TCR Vβ结构域，其中Vβ结构域包含与SEQID NO：4至6中任一个具有至少80％序列同一性的CDR3氨基酸序列和与SEQ ID NO：7具有至少80％序列同一性的CDR1氨基酸序列。
在人类中，TCR Vβ链氨基酸序列是通过V(D)J重组在体内产生的，该重组重新排列可用的可变区(V)、连接区(J)以及在某些情况下多样区(D)基因片段。这产生了编码具有不同抗原识别特性的独特TCR Vβ链的核酸序列的新库。人类V基因片段的一个实例是TRBV7-9基因(T细胞受体β可变区7-9基因；UniprotKB唯一标识符:P04435)。TRBV7-9具有许多已知的等位基因(例如TRBV7-9*01，TRBV7-9*02，TRBV7-9*03，TRBV7-9*04，TRBV7-9*05，TRBV7-9*06和TRBV7-9*07，具有高度保守的核苷酸序列(参见Lefranc,M.-P.and Lefranc,G.TheT cell receptor Facts Book Academic Press,London,UK(2001))。
发明人在此证实，HA-1H抗原特异性结合蛋白含有具有相似Vβ结构域的TCRβ链。在下面实施例中描述的每个HA-1H抗原特异性结合蛋白中，Vβ结构域包含由TRBV7-9基因编码的氨基酸序列。该序列被证明有助于本文所述结合蛋白的肽结合特异性。
因此，本文描述的编码的HA-1H抗原特异性结合蛋白包含具有由TRBV7-9基因编码的氨基酸序列的TCR Vβ结构域。TRBV7-9基因可以是任何TRBV7-9等位基因，例如，TRBV7-9*01、TRBV7-9*02、TRBV7-9*03、TRBV7-9*04、TRBV7-9*05、TRBV7-9*06和TRBV7-9*07。在一个特定的实例中，TRBV7-9基因是TRBV7-9*01或TRBV7-9*03。
如上所述，所述结合蛋白包含具有由TRBV7-9基因编码的氨基酸序列的TCR Vβ结构域。除此之外，本文所述结合蛋白的TCR Vβ结构域包含CDR3氨基酸序列，该序列与SEQ IDNO：4至6(直接在下面描述)中的任何一个具有至少80％的序列同一性。为了避免疑问，下面描述的任何TCR Vβ结构域CDR3序列可以与随后描述的任何TCR Vβ结构域CDR1序列组合以产生功能性TCR Vβ结构域。
(i)包含SEQ ID NO:4的CDR3氨基酸序列的Vβ结构域及其功能性变体。
赋予与HA-1H抗原的特异性结合的合适的TCR Vβ结构域CDR3氨基酸序列的实例显示在SEQ ID NO：4中。对于本领域技术人员来说显而易见的是，SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的变体也可以是功能性的(即，当CDR3是TCR Vβ结构域的一部分时，保持它们赋予与HA-1H抗原(例如SEQ ID NO：10中所示的肽)特异性结合的能力)。因此，本文涵盖这些功能性变体。
例如，合适的功能性Vα结构域CDR1氨基酸序列可以与SEQ ID NO:4具有至少80％的序列同一性，即它们可以与SEQ ID NO:4具有至少80％、至少84％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。合适地，同一性百分比计算为相对于参考序列(例如SEQ ID NO:4)全长的同一性百分比。换句话说，合适的(功能性)Vβ结构域CDR3氨基酸序列可以与SEQ IDNO:4所示的序列相差一个或几个(例如2个)氨基酸。如上所述，当CDR3是TCR Vβ结构域的一部分时，SEQ ID NO：4的功能性变体保留了它们赋予与HA-1H抗原(例如SEQ ID NO：10中所示的肽)特异性结合的能力。
功能性变体可以是SEQ ID NO:4的天然存在的、合成的或合成改良的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ ID NO:4的氨基酸的一个或多个保守取代，或CDR3非关键区中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的SEQ IDNO:4的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
在一个实例中，Vα结构域的CDR3包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或由SEQ ID NO：4的氨基酸序列组成。在TCR Vβ结构域CDR3具有SEQ ID NO：4的氨基酸序列的实例中，CDR3可以被SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14或其遗传简并序列(即由于遗传密码简并性而编码相同蛋白质的其他核酸序列)的核酸序列编码。注意，SEQ ID NO：14是克隆M7的CDR3的核酸序列的密码子优化版本(未优化的序列是SEQ ID NO：13)。
编码的TCR Vβ结构域除了包含特定的CDR3外，还可以包含CDR1，所述CDR1包含SEQID NO:7的氨基酸序列或其功能变体(即其中所述变体保留了特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的C末端的能力)。这些功能性变体可以是SEQ ID NO:7的天然存在的、合成的或合成改进的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ ID NO:7的一个或多个氨基酸的保守取代，或者在蛋白质的非关键区域中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的C末端的SEQ ID NO:7的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
例如，合适的功能性Vβ结构域CDR1氨基酸序列可以与SEQ ID NO:7具有至少80％的序列同一性，即它可以与SEQ ID NO:7具有至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。合适地，同一性百分比计算为相对于参考序列(例如SEQ IDNO:7)全长的同一性百分比。换句话说，合适的功能性Vβ结构域CDR1氨基酸序列可以与SEQID NO:7所示的序列相差一个或几个氨基酸。如前所述，与SEQ ID NO:7所示的序列相比，该变体可以包含氨基酸取代，例如保守氨基酸取代。如上所述，当CDR1是TCR Vβ结构域的一部分时，SEQ ID NO:7的功能性变体保留了特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO：10中所示的肽)的C末端的能力。
在一个实例中，Vα结构域的CDR1包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列或由SEQ ID NO：7的氨基酸序列组成。在TCR Vα结构域CDR1具有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的实例中，CDR1可以被SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：16或其遗传简并序列(即由于遗传密码简并性而编码相同蛋白质的其他核酸序列)的核酸序列编码。注意，SEQ ID NO：16是克隆M7的CDR1的核酸序列的密码子优化版本(未优化的序列是SEQ ID NO：15)。
编码的TCR Vβ结构域除了特定的CDR3(和任选地上述特定的CDR1)之外，还可以包含CDR2，该CDR2具有SEQ ID NO:86的氨基酸序列或其功能变体(即其中所述变体保留了特异性结合HLA-A*02:01的能力)。这些功能性变体可以是SEQ ID NO:86的天然存在的、合成的或合成改进的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ IDNO:86的一个或多个氨基酸的保守取代，或者在蛋白质的非关键区域中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HLA-A*02:01的SEQ ID NO:86的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
例如，合适的功能性Vβ结构域CDR2氨基酸序列可以与SEQ ID NO:86具有至少80％的序列同一性，即它可以与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少83％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。合适地，同一性百分比计算为相对于参考序列(例如SEQ ID NO:86)全长的同一性百分比。换句话说，合适的功能性Vβ结构域CDR2氨基酸序列可以与SEQ ID NO:86所示的序列相差一个或几个氨基酸。如前所述，与SEQ ID NO:86所示的序列相比，该变体可以包含氨基酸取代，例如保守氨基酸取代。如上所述，SEQ ID NO:86的功能性变体保留了特异性结合HLA-A*02:01的能力。
在一个实例中，Vα结构域的CDR2包含SEQ ID NO：86的氨基酸序列或由SEQ ID NO：86的氨基酸序列组成。在TCR Vβ结构域CDR2具有SEQ ID NO：86的氨基酸序列的实例中，CDR2可以被SEQ ID NO：87或SEQ ID NO：88或其遗传简并序列(即由于遗传密码简并性而编码相同蛋白质的其他核酸序列)的核酸序列编码。注意，SEQ ID NO：88是克隆M7的CDR2的核酸序列的密码子优化版本(未优化的序列是SEQ ID NO：87)。
编码的TCR Vβ结构域因此可以包含上面详细提到的CDR(具体到SEQ ID，即SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:86，或其功能性变体)，在CDR之间具有适当的插入序列。
编码的TCR Vβ结构域可以具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列或其功能性变体(即当作为本文所述结合蛋白的一部分时，其中所述变体TCR Vβ结构域保持特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的能力)。这些功能性变体可以是SEQ ID NO:18的天然存在的、合成的或合成改进的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ ID NO:18的一个或多个氨基酸的保守取代，或者在蛋白质的非关键区域中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的SEQ IDNO:18的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
在一个实例中，编码的TCR Vβ结构域可以具有与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少75％、至少80％、至少85％或至少90％(或至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的氨基酸序列，同时保持特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的能力。换句话说，也涵盖与SEQID NO:18的序列相比，具有一个或几个氨基酸取代的功能性TCR Vβ结构域。如前所述，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代。与SEQ ID NO:18相比，序列的可变性可能都在不形成CDR的TCR Vβ结构域的区域(即，所述变体可以具有SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：7和任选地SEQ IDNO：86的CDR，并且与SEQ ID NO：18相比仍具有25％(或更少)的序列变异性)。换句话说，SEQID NO:18的CDR的序列可以保留，而序列的其余部分是变化的，在上述“至少75％同一性”参数内是合适的。合适地，同一性百分比可以计算为相对于参考序列(例如SEQ ID NO:18)全长的同一性百分比。
例如，编码的TCR Vβ结构域可包含与SEQ ID NO：18的氨基酸序列具有至少75％(例如，至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％等)序列同一性的氨基酸序列，其中TCR Vβ结构域包含具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR3。在这个实例中，TCR Vβ结构域CDR1可以具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列，而TCR Vβ结构域CDR2可以具有SEQ ID NO:86的氨基酸序列。
在TCR Vβ结构域具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的实例中，TCR Vβ结构域可以由SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:22的核酸序列或其遗传简并序列(即由于遗传密码的简并性，编码相同蛋白质的其它核酸序列)编码。注意，SEQ ID NO:22是克隆M7的TCR Vβ结构域的核酸序列的密码子优化版本(非优化序列是SEQ ID NO:21)。
为了避免疑问，所述编码TCR Vβ结构域的核酸序列也可以编码TCRβ链恒定结构域。合适的恒定区的实例是在MP71-TCR-flex逆转录病毒载体中编码的。然而，本发明不限于该特定的恒定区，并且包括任何合适的TCRβ链恒定区。恒定区可以是鼠源的、人源的或人源化的。用于识别或产生合适的恒定域的方法是本领域技术人员所熟知的，并且完全在其常规能力范围内。
仅为举例来说，恒定区可以由载体编码或衍生自载体(例如慢病毒、逆转录病毒或质粒载体，但也可以是腺病毒、腺相关病毒、痘苗病毒、金丝雀痘病毒或疱疹病毒载体，其中鼠或人恒定区是预克隆的)。最近，微环也被描述用于TCR基因转移(由R Monjezi，CMiskey，T Gogishvili，M Schleef，M Schmeer，H Einsele，Z Ivics和M Hudecek在《白血病2016》中发表的non-viral Sleeping Beauty transposition from minicirclevectors)。此外，裸(合成)DNA/RNA也可用于引入TCR。例如，如LV Coren et al.,BioTechniques 2015中所述的具有预克隆的TCR-Ca和Cb基因的pMSGV逆转录病毒载体，可用于提供适当的恒定区。
包括本文所述的TCR Vβ结构域和适当恒定结构域的特定TCRβ链氨基酸序列的实例显示在SEQ ID NO：52和SEQ ID NO：53中。值得注意的是，SEQ ID NO：53所示的恒定区是鼠的。还包括SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:53的适当功能变体(例如与SEQ ID NO:52或SEQID NO:53的氨基酸序列具有至少75％(例如至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％等)序列同一性的变体，当作为本文所述结合蛋白的一部分时，其中所述变体TCRβ链氨基酸序列保持其特异性结合HA-1H抗原(例如在SEQ ID NO:10中显示的肽)的能力)。换句话说，也涵盖与SEQ ID NO:52或SEQ ID NO:53的序列相比，具有一个或几个氨基酸取代的功能性TCRβ链。如前所述，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代。与SEQ ID NO:52或SEQ ID NO:53相比，序列的可变性可能都在不形成CDR的TCRβ链区域(即该变异体可能具有SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:7和任选地SEQ ID NO:86的CDR，并且与SEQ ID NO:52或SEQ ID NO:53相比仍具有25％(或更少)的序列可变性)。换句话说，SEQ ID NO:52或SEQ ID NO:53的CDR序列可以保留，而序列的其余部分是变化的，在上述“至少75％同一性”参数内是合适的。合适地，同一性百分比可以计算为相对于参考序列(例如,适当的SEQ ID NO:52或SEQ ID NO:53)全长的同一性百分比。
例如，编码的TCRβ链可包含与SEQ ID NO:52或SEQ ID NO：53的氨基酸序列具有至少75％(例如，至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％等)序列同一性的氨基酸序列，其中TCRβ链包含具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR3。在这个实例中，TCRβ链CDR1可以具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列，而TCRβ链CDR2可以具有SEQ ID NO:86的氨基酸序列。
在TCRβ链具有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的实例中，TCRβ链可以由SEQ ID NO:54或SEQ ID NO:55的核酸序列或其遗传简并序列(即由于遗传密码的简并性，编码相同蛋白质的其它核酸序列)编码。注意，SEQ ID NO:55是克隆M7的TCR Vβ结构域的核酸序列的密码子优化版本(非优化序列是SEQ ID NO:54)。
在TCRβ链具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的实例中，TCRβ链可以由SEQ ID NO:56的核酸序列或其遗传简并序列(即由于遗传密码的简并性，编码相同蛋白质的其它核酸序列)编码。
在一个特定的实例中，本文所述的核酸组合物编码具有TCR Vα结构域和TCR Vβ结构域的HA-1H抗原特异性结合蛋白，所述TCR Vα结构域具有CDR3氨基酸序列，所述CDR3氨基酸序列包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成；所述TCR Vβ结构域具有由TRBV7-9基因编码的氨基酸序列，所述TCR Vβ结构域具有CDR3和CDR1，所述CDR3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或由SEQ ID NO:4的氨基酸序列组成，并且所述CDR1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成。TRBV7-9基因可能是TRBV7-9*03。此外，HA-1H抗原可以包含或由SEQ ID NO:10所示的序列组成。此外，TCR Vα结构域可以是具有恒定结构域的TCRα链的一部分，而TCR Vβ结构域可以是具有恒定结构域的TCRβ链的一部分。
在这个特定的实例中，Vα结构域的CDR3可以由包含SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的序列的核酸序列编码；Vβ结构域的CDR3可以由包含SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14的序列的核酸序列编码；并且Vβ结构域的CDR1可以由包含SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16的序列的核酸序列编码。
在这个特定的实例中，Vα结构域可以包含与SEQ ID NO:17具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，Vα结构域可以包含SEQ ID NO:17或由SEQ ID NO:17组成；并且Vβ结构域包含与SEQ ID NO:18具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，Vβ结构域包含SEQ ID NO:18或由SEQ ID NO:18组成。在一个实例中，Vα结构域包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列，而Vβ结构域包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列。在这种情况下，Vα结构域可以由包含SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20的序列的核酸序列编码；并且Vβ结构域可以由包含SEQ ID NO：21或SEQ IDNO：22的序列的核酸序列编码。
在这个特定的实例中，TCR Vα结构域可以包括CDR1氨基酸序列和CDR2氨基酸序列，所述CDR1氨基酸序列包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列或由SEQ ID NO:80的氨基酸序列组成，并且所述CDR2氨基酸序列包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列或由SEQ ID NO:83的氨基酸序列组成。此外，TCR Vβ结构域可以包括CDR2氨基酸序列，所述CDR2氨基酸序列包含SEQID NO:86的氨基酸序列或由SEQ ID NO:86的氨基酸序列组成。
为了避免疑问，这个特定的实例包括本文举例说明的TCR克隆M7的组分。TCR克隆M7的不同组分及其各自的SEQ ID No总结于下表1。
表1-克隆M7的组成部分及其各自的SEQ ID No。
(ii)包含SEQ ID NO:5的CDR3氨基酸序列的Vβ结构域及其功能性变体。
赋予与HA-1H抗原的特异性结合的合适的TCR Vβ结构域CDR3氨基酸序列的实例显示在SEQ ID NO：5中。对于本领域技术人员来说显而易见的是，SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的变体也可以是功能性的(即，当CDR3是TCR Vβ结构域的一部分时，保持它们赋予与HA-1H抗原(例如SEQ ID NO：10中所示的肽)特异性结合的能力)。因此，本文涵盖这些功能性变体。
例如，合适的功能性Vα结构域CDR1氨基酸序列可以与SEQ ID NO:5具有至少80％的序列同一性，即它们可以与SEQ ID NO:5具有至少80％、至少84％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。合适地，同一性百分比计算为相对于参考序列(例如SEQ ID NO:5)全长的同一性百分比。换句话说，合适的(功能性)Vβ结构域CDR3氨基酸序列可以与SEQ IDNO:5所示的序列相差一个或几个(例如2个)氨基酸。如上所述，当CDR3是TCR Vβ结构域的一部分时，SEQ ID NO：5的功能性变体保留了它们赋予与HA-1H抗原(例如SEQ ID NO：10中所示的肽)特异性结合的能力。
功能性变体可以是SEQ ID NO:5的天然存在的、合成的或合成改良的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ ID NO:5的氨基酸的一个或多个保守取代，或CDR3非关键区中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的SEQ IDNO:5的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
在一个实例中，Vα结构域的CDR3包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列或由SEQ ID NO：5的氨基酸序列组成。在TCR Vβ结构域CDR3具有SEQ ID NO：5的氨基酸序列的实例中，CDR3可以被SEQ ID NO：25或SEQ ID NO：26或其遗传简并序列(即由于遗传密码简并性而编码相同蛋白质的其他核酸序列)的核酸序列编码。注意，SEQ ID NO：26是克隆M2的CDR3的核酸序列的密码子优化版本(未优化的序列是SEQ ID NO：25)。
编码的TCR Vβ结构域除了包含特定的CDR3外，还可以包含CDR1，所述CDR1包含SEQID NO:7的氨基酸序列或其功能变体(即其中所述变体保留了特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的C末端的能力)。这些功能性变体可以是SEQ ID NO:7的天然存在的、合成的或合成改进的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ ID NO:7的一个或多个氨基酸的保守取代，或者在蛋白质的非关键区域中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的C末端的SEQ ID NO:7的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
例如，合适的功能性Vβ结构域CDR1氨基酸序列可以与SEQ ID NO:7具有至少80％的序列同一性，即它可以与SEQ ID NO:7具有至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。合适地，同一性百分比计算为相对于参考序列(例如SEQ IDNO:7)全长的同一性百分比。换句话说，合适的功能性Vβ结构域CDR1氨基酸序列可以与SEQID NO:7所示的序列相差一个或几个氨基酸。如前所述，与SEQ ID NO:7所示的序列相比，该变体可以包含氨基酸取代，例如保守氨基酸取代。如上所述，当CDR1是TCR Vβ结构域的一部分时，SEQ ID NO:7的功能性变体保留了特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO：10中所示的肽)的C末端的能力。
在一个实例中，Vα结构域的CDR1包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列或由SEQ ID NO：7的氨基酸序列组成。在TCR Vα结构域CDR1具有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的实例中，CDR1可以被SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：16或其遗传简并序列(即由于遗传密码简并性而编码相同蛋白质的其他核酸序列)的核酸序列编码。注意，SEQ ID NO：16是克隆M2的CDR1的核酸序列的密码子优化版本(未优化的序列是SEQ ID NO：15)。
编码的TCR Vβ结构域除了特定的CDR3(和任选地上述特定的CDR1)之外，还可以包含CDR2，该CDR2具有SEQ ID NO:86的氨基酸序列或其功能变体(即其中所述变体保留了特异性结合HLA-A*02:01的能力)。这些功能性变体可以是SEQ ID NO:86的天然存在的、合成的或合成改进的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ IDNO:86的一个或多个氨基酸的保守取代，或者在蛋白质的非关键区域中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HLA-A*02:01的SEQ ID NO:86的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
例如，合适的功能性Vβ结构域CDR2氨基酸序列可以与SEQ ID NO:86具有至少80％的序列同一性，即它可以与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。合适地，同一性百分比计算为相对于参考序列(例如SEQ IDNO:86)全长的同一性百分比。换句话说，合适的功能性Vβ结构域CDR2氨基酸序列可以与SEQID NO:86所示的序列相差一个或几个氨基酸。如前所述，与SEQ ID NO:86所示的序列相比，该变体可以包含氨基酸取代，例如保守氨基酸取代。如上所述，SEQ ID NO:86的功能性变体保留了特异性结合HLA-A*02:01的能力。
在一个实例中，Vα结构域的CDR2包含SEQ ID NO：86的氨基酸序列或由SEQ ID NO：86的氨基酸序列组成。在TCR Vβ结构域CDR2具有SEQ ID NO：86的氨基酸序列的实例中，CDR2可以被SEQ ID NO：87或SEQ ID NO：88或其遗传简并序列(即由于遗传密码简并性而编码相同蛋白质的其他核酸序列)的核酸序列编码。注意，SEQ ID NO：88是克隆M2的CDR2的核酸序列的密码子优化版本(未优化的序列是SEQ ID NO：87)。
编码的TCR Vβ结构域因此可以包含上面详细提到的CDR(具体通过SEQ ID，即SEQID NO:5、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:86，或其功能性变体)，在CDR之间具有适当的插入序列。
编码的TCR Vβ结构域可以具有SEQ ID NO:30的氨基酸序列或其功能性变体(即当作为本文所述结合蛋白的一部分时，其中所述变体TCR Vβ结构域保持特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的能力)。这些功能性变体可以是SEQ ID NO:30的天然存在的、合成的或合成改进的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ ID NO:30的一个或多个氨基酸的保守取代，或者在蛋白质的非关键区域中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的SEQ IDNO:30的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
在一个实例中，编码的TCR Vβ结构域可以具有与SEQ ID NO:30的氨基酸序列具有至少75％、至少80％、至少85％或至少90％(或至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的氨基酸序列，同时保持特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的能力。换句话说，也涵盖与SEQID NO:30的序列相比，具有一个或几个氨基酸取代的功能性TCR Vβ结构域。如前所述，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代。与SEQ ID NO:30相比，序列的可变性可能都在不形成CDR的TCR Vβ结构域的区域(即，所述变体可以具有SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7和任选地SEQ IDNO：86的CDR，并且与SEQ ID NO：30相比仍具有25％(或更少)的序列变异性)。换句话说，SEQID NO:30的CDR的序列可以保留，而序列的其余部分是变化的，在上述“至少75％同一性”参数内是合适的。合适地，同一性百分比可以计算为相对于参考序列(例如SEQ ID NO:30)全长的同一性百分比。
例如，编码的TCR Vβ结构域可包含与SEQ ID NO：30的氨基酸序列具有至少75％(例如，至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％等)序列同一性的氨基酸序列，其中TCR Vβ结构域包含具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的CDR3。在这个实例中，TCR Vβ结构域CDR1可以具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列，而TCR Vβ结构域CDR2可以具有SEQ ID NO:86的氨基酸序列。
在TCR Vβ结构域具有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的实例中，TCR Vβ结构域可以由SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34的核酸序列或其遗传简并序列(即由于遗传密码的简并性，编码相同蛋白质的其它核酸序列)编码。注意，SEQ ID NO:34是克隆M2的TCR Vβ结构域的核酸序列的密码子优化版本(非优化序列是SEQ ID NO:33)。
为了避免疑问，所述编码TCR Vβ结构域的核酸序列也可以编码TCRβ链恒定结构域。合适的恒定区的实例是在MP71-TCR-flex逆转录病毒载体中编码的。然而，本发明不限于该特定的恒定区，并且包括任何合适的TCRβ链恒定区。恒定区可以是鼠源的、人源的或人源化的。用于识别或产生合适的恒定域的方法是本领域技术人员所熟知的，并且完全在其常规能力范围内。
仅为举例来说，恒定区可以由载体编码或衍生自载体(例如慢病毒、逆转录病毒或质粒载体，但也可以是腺病毒、腺相关病毒、痘苗病毒、金丝雀痘病毒或疱疹病毒载体，其中鼠或人恒定区是预克隆的)。最近，微环也被描述用于TCR基因转移(由R Monjezi，CMiskey，T Gogishvili，M Schleef，M Schmeer，H Einsele，Z Ivics和M Hudecek在《白血病2016》中发表的non-viral Sleeping Beauty transposition from minicirclevectors)。此外，裸(合成)DNA/RNA也可用于引入TCR。例如，如LV Coren et al.,BioTechniques 2015中所述的具有预克隆的TCR-Ca和Cb基因的pMSGV逆转录病毒载体，可用于提供适当的恒定区。
包括本文所述的TCR Vβ结构域和适当恒定结构域的特定TCRβ链氨基酸序列的实例显示在SEQ ID NO：62和SEQ ID NO：63中。值得注意的是，SEQ ID NO：63所示的恒定区是鼠的。还包括SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63的适当功能变体(例如与SEQ ID NO:62或SEQID NO:63的氨基酸序列具有至少75％(例如至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％等)序列同一性的变体，当作为本文所述结合蛋白的一部分时，其中所述变体TCRβ链氨基酸序列保持其特异性结合HA-1H抗原(例如在SEQ ID NO:10中显示的肽)的能力)。换句话说，也涵盖与SEQ ID NO:62或SEQ ID NO:63的序列相比，具有一个或几个氨基酸取代的功能性TCRβ链。如前所述，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代。与SEQ ID NO:62或SEQ ID NO:63相比，序列的可变性可能都在不形成CDR的TCRβ链区域(即该变异体可能具有SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:7和任选地SEQ ID NO:86的CDR，并且与SEQ ID NO:62或SEQ ID NO:63相比仍具有25％(或更少)的序列可变性)。换句话说，SEQ ID NO:62或SEQ ID NO:63的CDR序列可以保留，而序列的其余部分是变化的，在上述“至少75％同一性”参数内是合适的。合适地，同一性百分比可以计算为相对于参考序列(例如,适当的SEQ ID NO:62或SEQ ID NO:63)全长的同一性百分比。
例如，编码的TCRβ链可包含与SEQ ID NO:62或SEQ ID NO：63的氨基酸序列具有至少75％(例如，至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％等)序列同一性的氨基酸序列，其中TCRβ链包含具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的CDR3。在这个实例中，TCRβ链CDR1可以具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列，而TCRβ链CDR2可以具有SEQ ID NO:86的氨基酸序列。
在TCRβ链具有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的实例中，TCRβ链可以由SEQ ID NO:64或SEQ ID NO:65的核酸序列或其遗传简并序列(即由于遗传密码的简并性，编码相同蛋白质的其它核酸序列)编码。注意，SEQ ID NO:65是克隆M7的TCR Vβ结构域的核酸序列的密码子优化版本(非优化序列是SEQ ID NO:64)。
在TCRβ链具有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的实例中，TCRβ链可以由SEQ ID NO:66的核酸序列或其遗传简并序列(即由于遗传密码的简并性，编码相同蛋白质的其它核酸序列)编码。
在一个特定的实例中，本文所述的核酸组合物编码具有TCR Vα结构域和TCR Vβ结构域的HA-1H抗原特异性结合蛋白，所述TCR Vα结构域具有CDR3氨基酸序列，所述CDR3氨基酸序列包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成；所述TCR Vβ结构域具有由TRBV7-9基因编码的氨基酸序列，所述TCR Vβ结构域具有CDR3和CDR1，所述CDR3包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列或由SEQ ID NO:5的氨基酸序列组成，并且所述CDR1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成。TRBV7-9基因可能是TRBV7-9*01。此外，HA-1H抗原可以包含SEQ ID NO:10所示的序列或由SEQ ID NO:10所示的序列组成。此外，TCR Vα结构域可以是具有恒定结构域的TCRα链的一部分，而TCR Vβ结构域可以是具有恒定结构域的TCRβ链的一部分。
在这个特定的实例中，Vα结构域的CDR3可以由包含SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24的序列的核酸序列编码；Vβ结构域的CDR3可以由包含SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26的序列的核酸序列编码；并且Vβ结构域的CDR1可以由包含SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16的序列的核酸序列编码。
在这个特定的实例中，Vα结构域可以包含与SEQ ID NO:29具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，Vα结构域可以包含SEQ ID NO:29或由SEQ ID NO:29组成；并且Vβ结构域包含与SEQ ID NO:30具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，Vβ结构域包含SEQ ID NO:30或由SEQ ID NO:30组成。在一个实例中，Vα结构域包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列，而Vβ结构域包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列。在这种情况下，Vα结构域可以由包含SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:32的序列的核酸序列编码；并且Vβ结构域可以由包含SEQ ID NO：33或SEQ IDNO：34的序列的核酸序列编码。
在这个特定的实例中，TCR Vα结构域可以包括CDR1氨基酸序列和CDR2氨基酸序列，所述CDR1氨基酸序列包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列或由SEQ ID NO:8的氨基酸序列组成，并且所述CDR2氨基酸序列包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列或由SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成。此外，TCR Vβ结构域可以包括CDR2氨基酸序列，所述CDR2氨基酸序列包含SEQ IDNO:86的氨基酸序列或由SEQ ID NO:86的氨基酸序列组成。
为了避免疑问，这个特定的实例包括本文举例说明的TCR克隆M2的组分。TCR克隆M2的不同组分及其各自的SEQ ID No总结于下表2。
表2-克隆M2的组成部分及其各自的SEQ ID No。
(iii)包含SEQ ID NO:6的CDR3氨基酸序列的Vβ结构域及其功能性变体。
赋予与HA-1H抗原的特异性结合的合适的TCR Vβ结构域CDR3氨基酸序列的实例显示在SEQ ID NO：6中。对于本领域技术人员来说显而易见的是，SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的变体也可以是功能性的(即，当CDR3是TCR Vβ结构域的一部分时，保持它们赋予与HA-1H抗原(例如SEQ ID NO：10中所示的肽)特异性结合的能力)。因此，本文涵盖这些功能性变体。
例如，合适的(功能性)Vβ结构域CDR1氨基酸序列可以与SEQ ID NO:6具有至少80％的序列同一性，即它们可以与SEQ ID NO:6具有至少80％、至少84％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。合适地，同一性百分比计算为相对于参考序列(例如SEQ ID NO:6)全长的同一性百分比。换句话说，合适的(功能性)Vβ结构域CDR3氨基酸序列可以与SEQ IDNO:6所示的序列相差一个或几个(例如2个)氨基酸。如上所述，SEQ ID NO：6的功能性变体保留了它们赋予与HA-1H抗原(例如SEQ ID NO：10中所示的肽)特异性结合的能力，当CDR3是TCR Vβ结构域的一部分时。
功能性变体可以是SEQ ID NO:6的天然存在的、合成的或合成改良的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ ID NO:6的氨基酸的一个或多个保守取代，或CDR3非关键区中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的SEQ IDNO:6的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
在一个实例中，Vβ结构域的CDR3包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列或由SEQ ID NO：6的氨基酸序列组成。在TCR Vβ结构域CDR3具有SEQ ID NO：6的氨基酸序列的实例中，CDR3可以被SEQ ID NO：37或SEQ ID NO：38或其遗传简并序列(即由于遗传密码简并性而编码相同蛋白质的其他核酸序列)的核酸序列编码。注意，SEQ ID NO：38是克隆FK47.83的CDR3的核酸序列的密码子优化版本(未优化的序列是SEQ ID NO：37)。
编码的TCR Vβ结构域除了包含特定的CDR3外，还可以包含CDR1，所述CDR1包含SEQID NO:7的氨基酸序列或其功能变体(即其中所述变体保留了特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的C末端的能力)。这些功能性变体可以是SEQ ID NO:7的天然存在的、合成的或合成改进的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ ID NO:7的一个或多个氨基酸的保守取代，或者在蛋白质的非关键区域中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的C末端的SEQ ID NO:7的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
例如，合适的功能性Vβ结构域CDR1氨基酸序列可以与SEQ ID NO:7具有至少80％的序列同一性，即它可以与SEQ ID NO:7具有至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。合适地，同一性百分比计算为相对于参考序列(例如SEQ IDNO:7)全长的同一性百分比。换句话说，合适的功能性Vβ结构域CDR1氨基酸序列可以与SEQID NO:7所示的序列相差一个或几个氨基酸。如前所述，与SEQ ID NO:7所示的序列相比，该变体可以包含氨基酸取代，例如保守氨基酸取代。如上所述，当CDR1是TCR Vβ结构域的一部分时，SEQ ID NO:7的功能性变体保留了特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO：10中所示的肽)的C末端的能力。
在一个实例中，Vβ结构域的CDR1包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列或由SEQ ID NO：7的氨基酸序列组成。在TCR Vα结构域CDR1具有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的实例中，CDR1可以被SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：16或其遗传简并序列(即由于遗传密码简并性而编码相同蛋白质的其他核酸序列)的核酸序列编码。注意，SEQ ID NO：16是克隆FK47.83的CDR1的核酸序列的密码子优化版本(未优化的序列是SEQ ID NO：15)。
编码的TCR Vβ结构域除了特定的CDR3(以及任选地上述特定的CDR1)之外，还可以包含CDR2，该CDR2具有SEQ ID NO:86的氨基酸序列或其功能变体(即其中所述变体保留了特异性结合HLA-A*02:01的能力)。这些功能性变体可以是SEQ ID NO:86的天然存在的、合成的或合成改进的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ IDNO:86的一个或多个氨基酸的保守取代，或者在蛋白质的非关键区域中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HLA-A*02:01的SEQ ID NO:86的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
例如，合适的功能性Vβ结构域CDR2氨基酸序列可以与SEQ ID NO:86具有至少80％的序列同一性，即它可以与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。合适地，同一性百分比计算为相对于参考序列(例如SEQ IDNO:86)全长的同一性百分比。换句话说，合适的功能性Vβ结构域CDR2氨基酸序列可以与SEQID NO:86所示的序列相差一个或几个氨基酸。如前所述，与SEQ ID NO:86所示的序列相比，该变体可以包含氨基酸取代，例如保守氨基酸取代。如上所述，SEQ ID NO:86的功能性变体保留了特异性结合HLA-A*02:01的能力。
在一个实例中，Vβ结构域的CDR2包含SEQ ID NO：86的氨基酸序列或由SEQ ID NO：86的氨基酸序列组成。在TCR Vβ结构域CDR2具有SEQ ID NO：86的氨基酸序列的实例中，CDR2可以被SEQ ID NO：87或SEQ ID NO：88或其遗传简并序列(即由于遗传密码简并性而编码相同蛋白质的其他核酸序列)的核酸序列编码。注意，SEQ ID NO：88是克隆FK47.83的CDR2的核酸序列的密码子优化版本(未优化的序列是SEQ ID NO：87)。
编码的TCR Vβ结构域因此可以包含上面详细提到的CDR(具体通过SEQ ID，即SEQID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:86，或其功能性变体)，在CDR之间具有适当的插入序列。
编码的TCR Vβ结构域可以具有SEQ ID NO:42的氨基酸序列或其功能性变体(即当作为本文所述结合蛋白的一部分时，其中所述变体TCR Vβ结构域保持特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的能力)。这些功能性变体可以是SEQ ID NO:42的天然存在的、合成的或合成改进的功能性变体。术语“变体”也包括同源物。功能性变体通常只包含SEQ ID NO:42的一个或多个氨基酸的保守取代，或者在蛋白质的非关键区域中非关键氨基酸的取代、缺失或插入。
非功能性变体是不特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的SEQ IDNO:42的氨基酸序列变体。非功能性变体通常包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的非保守取代、缺失、或插入或过早截短，或关键氨基酸或关键区域的取代、插入或缺失。鉴定功能性和非功能性变体的方法是本领域普通技术人员熟知的。
在一个实例中，编码的TCR Vβ结构域可以具有与SEQ ID NO:42的氨基酸序列具有至少75％、至少80％、至少85％或至少90％(或至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的氨基酸序列，同时保持特异性结合HA-1H抗原(例如SEQ ID NO:10所示的肽)的能力。换句话说，也涵盖与SEQID NO:42的序列相比，具有一个或几个氨基酸取代的功能性TCR Vβ结构域。如前所述，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代。与SEQ ID NO:42相比，序列的可变性可能都在不形成CDR的TCR Vβ结构域的区域(即，所述变体可以具有SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7和任选地SEQ IDNO：86的CDR，并且与SEQ ID NO：42相比仍具有25％(或更少)的序列变异性)。换句话说，SEQID NO:42的CDR的序列可以保留，而序列的其余部分是变化的，在上述“至少75％同一性”参数内是合适的。合适地，同一性百分比可以计算为相对于参考序列(例如SEQ ID NO:42)全长的同一性百分比。
例如，编码的TCR Vβ结构域可包含与SEQ ID NO：42的氨基酸序列具有至少75％(例如，至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％等)序列同一性的氨基酸序列，其中TCR Vβ结构域包含具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的CDR3。在这个实例中，TCR Vβ结构域CDR1可以具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列，而TCR Vβ结构域CDR2可以具有SEQ ID NO:86的氨基酸序列。
在TCR Vβ结构域具有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的实例中，TCR Vβ结构域可以由SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:46的核酸序列或其遗传简并序列(即由于遗传密码的简并性，编码相同蛋白质的其它核酸序列)编码。注意，SEQ ID NO:46是克隆FK47.83的TCR Vβ结构域的核酸序列的密码子优化版本(非优化序列是SEQ ID NO:45)。
为了避免疑问，所述编码TCR Vβ结构域的核酸序列也可以编码TCRβ链恒定结构域。合适的恒定区的实例是在MP71-TCR-flex逆转录病毒载体中编码的。然而，本发明不限于该特定的恒定区，并且包括任何合适的TCRβ链恒定区。恒定区可以是鼠源的、人源的或人源化的。用于识别或产生合适的恒定域的方法是本领域技术人员所熟知的，并且完全在其常规能力范围内。
仅为举例来说，恒定区可以由载体编码或衍生自载体(例如慢病毒、逆转录病毒或质粒载体，但也可以是腺病毒、腺相关病毒、痘苗病毒、金丝雀痘病毒或疱疹病毒载体，其中鼠或人恒定区是预克隆的)。最近，微环也被描述用于TCR基因转移(由R Monjezi，CMiskey，T Gogishvili，M Schleef，M Schmeer，H Einsele，Z Ivics和M Hudecek在《白血病2016》中发表的non-viral Sleeping Beauty transposition from minicirclevectors)。此外，裸(合成)DNA/RNA也可用于引入TCR。例如，如LV Coren et al.,BioTechniques 2015中所述的具有预克隆的TCR-Ca和Cb基因的pMSGV逆转录病毒载体，可用于提供适当的恒定区。
包括本文所述的TCR Vβ结构域和适当恒定结构域的特定TCRβ链氨基酸序列的实例显示在SEQ ID NO：72和SEQ ID NO：73中。值得注意的是，SEQ ID NO：73所示的恒定区是鼠的。还包括SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:73的适当功能变体(例如与SEQ ID NO:62或SEQID NO:73的氨基酸序列具有至少75％(例如至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％等)序列同一性的变体，当作为本文所述结合蛋白的一部分时，其中所述变体TCRβ链氨基酸序列保持其特异性结合HA-1H抗原(例如在SEQ ID NO:10中显示的肽)的能力)。换句话说，也涵盖与SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73的序列相比，具有一个或几个氨基酸取代的功能性TCRβ链。如前所述，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代。与SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73相比，序列的可变性可能都在不形成CDR的TCRβ链区域(即该变异体可能具有SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7和任选地SEQ ID NO:86的CDR，并且与SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73相比仍具有25％(或更少)的序列可变性)。换句话说，SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73的CDR序列可以保留，而序列的其余部分是变化的，在上述“至少75％同一性”参数内是合适的。合适地，同一性百分比可以计算为相对于参考序列(例如,适当的SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73)全长的同一性百分比。
例如，编码的TCRβ链可包含与SEQ ID NO:72或SEQ ID NO：73的氨基酸序列具有至少75％(例如，至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％等)序列同一性的氨基酸序列，其中TCRβ链包含具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的CDR3。在这个实例中，TCRβ链CDR1可以具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列，而TCRβ链CDR2可以具有SEQ ID NO:86的氨基酸序列。
在TCRβ链具有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的实例中，TCRβ链可以由SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:75的核酸序列或其遗传简并序列(即由于遗传密码的简并性，编码相同蛋白质的其它核酸序列)编码。注意，SEQ ID NO:75是克隆M7的TCR Vβ结构域的核酸序列的密码子优化版本(非优化序列是SEQ ID NO:74)。
在TCRβ链具有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的实例中，TCRβ链可以由SEQ ID NO:76的核酸序列或其遗传简并序列(即由于遗传密码的简并性，编码相同蛋白质的其它核酸序列)编码。
在一个特定的实例中，本文所述的核酸组合物编码具有TCR Vα结构域和TCR Vβ结构域的HA-1H抗原特异性结合蛋白，所述TCR Vα结构域具有CDR3氨基酸序列，所述CDR3氨基酸序列包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成；所述TCR Vβ结构域具有由TRBV7-9基因编码的氨基酸序列，所述TCR Vβ结构域具有CDR3和CDR1，所述CDR3包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或由SEQ ID NO:6的氨基酸序列组成，并且所述CDR1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成。TRBV7-9基因可能是TRBV7-9*01。此外，HA-1H抗原可以包含SEQ ID NO:10所示的序列或由SEQ ID NO:10所示的序列组成。此外，TCR Vα结构域可以是具有恒定结构域的TCRα链的一部分，而TCR Vβ结构域可以是具有恒定结构域的TCRβ链的一部分。
在这个特定的实例中，Vα结构域的CDR3可以由包含SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:36的序列的核酸序列编码；Vβ结构域的CDR3可以由包含SEQ ID NO:37或SEQ ID NO:38的序列的核酸序列编码；并且Vβ结构域的CDR1可以由包含SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16的序列的核酸序列编码。
在这个特定的实例中，Vα结构域可以包含与SEQ ID NO:41具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，Vα结构域可以包含SEQ ID NO:41或由SEQ ID NO:41组成；并且Vβ结构域包含与SEQ ID NO:42具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，Vβ结构域包含SEQ ID NO:42或由SEQ ID NO:42组成。在一个实例中，Vα结构域包含SEQ ID NO：41的氨基酸序列，而Vβ结构域包含SEQ ID NO：42的氨基酸序列。在这种情况下，Vα结构域可以由包含SEQ ID NO:43或SEQ ID NO:44的序列的核酸序列编码；并且Vβ结构域可以由包含SEQ ID NO：45或SEQ IDNO：46的序列的核酸序列编码。
在这个特定的实例中，TCR Vα结构域可以包括CDR1氨基酸序列和CDR2氨基酸序列，所述CDR1氨基酸序列包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列或由SEQ ID NO:8的氨基酸序列组成，并且所述CDR2氨基酸序列包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列或由SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成。此外，TCR Vβ结构域可以包括CDR2氨基酸序列，所述CDR2氨基酸序列包含SEQ IDNO:86的氨基酸序列或由SEQ ID NO:86的氨基酸序列组成。
为了避免疑问，这个特定的实例包括本文举例说明的TCR克隆FK47.83的组分。TCR克隆FK47.83的不同组分及其各自的SEQ ID No总结于下表3。
表3-克隆FK47.83的组成部分及其各自的SEQ ID No。
本文所述的任何TCR Vα结构域(或TCRα链)可以与任何TCR Vα结构域(或TCRα链)结合。
a)TCR克隆M2 Vα结构域的组分与TCR克隆M7(或FK47.83)Vβ结构域的组分。
例如，本文所述的核酸组合物编码具有TCR Vα结构域和TCR Vβ结构域的HA-1H抗原特异性结合蛋白，所述TCR Vα结构域具有CDR3氨基酸序列，所述CDR3氨基酸序列包含SEQID NO:3的氨基酸序列或由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成；所述TCR Vβ结构域具有由TRBV7-9基因编码的氨基酸序列，所述TCR Vβ结构域具有CDR3和CDR1，所述CDR3包含SEQ IDNO:4(或SEQ ID NO:6)的氨基酸序列或由SEQ ID NO:4(或SEQ ID NO:6)的氨基酸序列组成，并且所述CDR1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成。TRBV7-9基因可能是TRBV7-9*03(或TRBV7-9*01)。此外，HA-1H抗原可以包含SEQ ID NO:10所示的序列或由SEQ ID NO:10所示的序列组成。此外，TCR Vα结构域可以是具有恒定结构域的TCRα链的一部分，而TCR Vβ结构域可以是具有恒定结构域的TCRβ链的一部分。
在这个特定的实例中，Vα结构域的CDR3可以由包含SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24的序列的核酸序列编码；Vβ结构域的CDR3可以由包含SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14(或SEQID NO:37或SEQ ID NO:38)的序列的核酸序列编码；并且Vβ结构域的CDR1可以由包含SEQID NO:15或SEQ ID NO:16的序列的核酸序列编码。
在这个特定的实例中，Vα结构域可以包含与SEQ ID NO:29具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，Vα结构域可以包含SEQ ID NO:29或由SEQ ID NO:29组成；并且Vβ结构域包含与SEQ ID NO:18(或SEQ ID NO:42)具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，Vβ结构域包含SEQ ID NO:18(或SEQ ID NO:42)或由SEQ ID NO:18(或SEQ ID NO:42)组成。在一个实例中，Vα结构域包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列，而Vβ结构域包含SEQ ID NO:18(或SEQ IDNO:42)的氨基酸序列。在这种情况下，Vα结构域可以由包含SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:32的序列的核酸序列编码；并且Vβ结构域可以由包含SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:22(或SEQID NO：45或SEQ ID NO：46)的序列的核酸序列编码。
在这个特定的实例中，TCR Vα结构域可以包括CDR1氨基酸序列和CDR2氨基酸序列，所述CDR1氨基酸序列包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列或由SEQ ID NO:8的氨基酸序列组成，并且所述CDR2氨基酸序列包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列或由SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成。此外，TCR Vβ结构域可以包括CDR2氨基酸序列，所述CDR2氨基酸序列包含SEQ IDNO:86的氨基酸序列或由SEQ ID NO:86的氨基酸序列组成。
b)TCR克隆M7 Vα结构域的组分与TCR克隆M2(或FK47.83)Vβ结构域的组分。
例如，本文所述的核酸组合物编码具有TCR Vα结构域和TCR Vβ结构域的HA-1H抗原特异性结合蛋白，所述TCR Vα结构域具有CDR3氨基酸序列，所述CDR3氨基酸序列包含SEQID NO:1的氨基酸序列或由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成；所述TCR Vβ结构域具有由TRBV7-9基因编码的氨基酸序列，所述TCR Vβ结构域具有CDR3和CDR1，所述CDR3包含SEQ IDNO:5(或SEQ ID NO:6)的氨基酸序列或由SEQ ID NO:5(或SEQ ID NO:6)的氨基酸序列组成，并且所述CDR1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成。TRBV7-9基因可能是TRBV7-9*01。此外，HA-1H抗原可以包含SEQ ID NO:10所示的序列或由SEQ ID NO:10所示的序列组成。此外，TCR Vα结构域可以是具有恒定结构域的TCRα链的一部分，而TCR Vβ结构域可以是具有恒定结构域的TCRβ链的一部分。
在这个特定的实例中，Vα结构域的CDR3可以由包含SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的序列的核酸序列编码；Vβ结构域的CDR3可以由包含SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26(或SEQID NO:37或SEQ ID NO:38)的序列的核酸序列编码；并且Vβ结构域的CDR1可以由包含SEQID NO:15或SEQ ID NO:16的序列的核酸序列编码。
在这个特定的实例中，Vα结构域可以包含与SEQ ID NO:17具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，Vα结构域可以包含SEQ ID NO:17或由SEQ ID NO:17组成；并且Vβ结构域包含与SEQ ID NO:30(或SEQ ID NO:42)具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，Vβ结构域包含SEQ ID NO:30(或SEQ ID NO:42)或由SEQ ID NO:30(或SEQ ID NO:42)组成。在一个实例中，Vα结构域包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列，而Vβ结构域包含SEQ ID NO:30(或SEQ IDNO:42)的氨基酸序列。在这种情况下，Vα结构域可以由包含SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20的序列的核酸序列编码；并且Vβ结构域可以由包含SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34(或SEQID NO：45或SEQ ID NO：46)的序列的核酸序列编码。
在这个特定的实例中，TCR Vα结构域可以包括CDR1氨基酸序列和CDR2氨基酸序列，所述CDR1氨基酸序列包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列或由SEQ ID NO:80的氨基酸序列组成，并且所述CDR2氨基酸序列包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列或由SEQ ID NO:83的氨基酸序列组成。此外，TCR Vβ结构域可以包括CDR2氨基酸序列，所述CDR2氨基酸序列包含SEQID NO:86的氨基酸序列或由SEQ ID NO:86的氨基酸序列组成。
c)TCR克隆FK47.8 Vα结构域的组分与TCR克隆M2(或M7)Vβ结构域的组分。
例如，本文所述的核酸组合物编码具有TCR Vα结构域和TCR Vβ结构域的HA-1H抗原特异性结合蛋白，所述TCR Vα结构域具有CDR3氨基酸序列，所述CDR3氨基酸序列包含SEQID NO:3的氨基酸序列或由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成；所述TCR Vβ结构域具有由TRBV7-9基因编码的氨基酸序列，所述TCR Vβ结构域具有CDR3和CDR1，所述CDR3包含SEQ IDNO:5(或SEQ ID NO:4)的氨基酸序列或由SEQ ID NO:5(或SEQ ID NO:4)的氨基酸序列组成，并且所述CDR1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成。TRBV7-9基因可能是TRBV7-9*01(或TRBV7-9*03)。此外，HA-1H抗原可以包含SEQ ID NO:10所示的序列或由SEQ ID NO:10所示的序列组成。此外，TCR Vα结构域可以是具有恒定结构域的TCRα链的一部分，而TCR Vβ结构域可以是具有恒定结构域的TCRβ链的一部分。
在这个特定的实例中，Vα结构域的CDR3可以由包含SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:36的序列的核酸序列编码；Vβ结构域的CDR3可以由包含SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26(或SEQID NO:13或SEQ ID NO:14)的序列的核酸序列编码；并且Vβ结构域的CDR1可以由包含SEQID NO:15或SEQ ID NO:16的序列的核酸序列编码。
在这个特定的实例中，Vα结构域可以包含与SEQ ID NO:41具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，Vα结构域可以包含SEQ ID NO:41或由SEQ ID NO:41组成；并且Vβ结构域包含与SEQ ID NO:30(或SEQ ID NO:18)具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，Vβ结构域包含SEQ ID NO:30(或SEQ ID NO:18)或由SEQ ID NO:30(或SEQ ID NO:18)组成。在一个实例中，Vα结构域包含SEQ ID NO：41的氨基酸序列，而Vβ结构域包含SEQ ID NO:30(或SEQ IDNO:18)的氨基酸序列。在这种情况下，Vα结构域可以由包含SEQ ID NO:43或SEQ ID NO:44的序列的核酸序列编码；并且Vβ结构域可以由包含SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34(或SEQID NO：21或SEQ ID NO：22)的序列的核酸序列编码。
在这个特定的实例中，TCR Vα结构域可以包括CDR1氨基酸序列和CDR2氨基酸序列，所述CDR1氨基酸序列包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列或由SEQ ID NO:8的氨基酸序列组成，并且所述CDR2氨基酸序列包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列或由SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成。此外，TCR Vβ结构域可以包括CDR2氨基酸序列，所述CDR2氨基酸序列包含SEQ IDNO:86的氨基酸序列或由SEQ ID NO:86的氨基酸序列组成。
如本文其他地方更详细描述的，本文描述的核酸组合物编码TCR Vα结构域和TCRVβ结构域，它们形成能够特异性结合HA-1H抗原的结合蛋白。在TCR Vα结构域和TCR Vβ结构域由相同核酸序列编码的实例中，TCR Vα结构域和TCR Vβ结构域可以通过接头连接在一起，例如，能够从同一载体表达两种蛋白质或多肽的接头。举例来说，可以使用包含猪捷申病毒-1 2A(P2A)序列的接头，例如由A.L.Szymczak et al.,Nature Biotechnology 22,589-594(2004)发表的来自口蹄疫病毒(F2A)、马鼻炎A病毒(E2A)或明脉扁刺蛾病毒(T2A)的2A序列，或2A样序列。2A和2A样序列是接头，一旦核酸分子被转录和翻译，它们就可以被切割。接头的另一个实例是内部核糖体进入位点(IRES)，它能够翻译来自同一转录物的两种蛋白质或多肽。也可以使用任何其他合适的接头。作为另一个实例，编码TCR Vα结构域的核酸序列和编码TCR Vβ结构域的核酸序列可以被克隆到具有双内部启动子的载体中(参见，例如S Jones et al.,Human Gene Ther 2009)。能够表达TCR Vα结构域和TCR Vβ结构域的合适接头和载体的鉴定完全在本领域技术人员的常规能力范围内。
其他合适的多肽结构域也可以由编码TCR Vα结构域和/或TCR Vβ结构域的核酸序列编码。仅为举例来说，核酸序列可以包含膜靶向序列，其提供编码多肽向修饰细胞的细胞表面膜的转运。其他合适的附加结构域是众所周知的，并且在例如WO2016/071758中进行了描述。
在一个实例中，本文所述的核酸组合物可以编码可溶性TCR。例如，核酸组合物可以分别编码TCRα和β链的可变结构域以及免疫调节分子，例如CD3激动剂(例如一种抗CD3scFv)。CD3抗原存在于成熟的人类T细胞、胸腺细胞和自然杀伤细胞的子集上。它与TCR相关，并参与TCR的信号转导。人类CD3抗原特异性抗体是众所周知的。一种这样的抗体是鼠单克隆抗体OKT3，这是FDA批准的第一种单克隆抗体。还报道了对CD3特异的其他抗体(参见，例如WO2004/106380；美国专利申请公开No.2004/0202657；U.S.Pat.No.6,750,325)。对抗癌症的免疫动员mTCR(ImmTAC；Immunocore Limited，Milton Partk，阿宾顿，奥克森，英国)是双功能蛋白，其结合了亲和性单克隆T细胞受体(mTCR)靶向治疗作用机制(即抗CD3scFv)。在另一个实例中，本发明的可溶性TCR可以与放射性同位素或毒性药物结合。合适的放射性同位素和/或毒性药物在本领域是众所周知的，并且容易被本领域普通技术人员识别。
在一个实施例中，核酸组合物可以编码嵌合单链TCR，其中TCRα链可变区结构域连接到TCRβ链可变区结构域，并且恒定区结构域例如与CD3ζ信号区结构域融合。在这个实例中，接头是不可切割的。在另一个实施方案中，核酸组合物可以编码嵌合的双链TCR，其中TCRα链可变区结构域和TCRβ链可变区结构域各自连接到CD3ζ信号区结构域或其他跨膜和胞内结构域。制备这种单链TCR和双链TCR的方法在本领域是众所周知的；参见，例如RAWillemsen et al,Gene Therapy 2000。
载体系统
还提供了包含本文所述核酸组合物的载体系统。载体系统可以有一个或多个载体。如前所述，由核酸组合物编码的结合蛋白组分可以由核酸组合物中的一个或多个核酸序列编码。在所有结合蛋白组分都由单个核酸序列编码的实例中，核酸序列可以存在于单个载体中(因此本文所述的载体系统可以仅包含一个载体)。在结合蛋白组分由两个或多个核酸序列编码的实例中(其中多个核酸序列一起编码结合蛋白的所有组分)，这两个或多个核酸序列可以存在于一个载体中(例如在载体的不同开放阅读框中)，或者可以分布在两个或多个载体上。在这个实例中，载体系统将包括多个不同的载体(即具有不同核苷酸序列的载体)。
可以使用任何合适的载体。仅为举例来说，载体可以是质粒、粘粒或病毒载体，例如逆转录病毒载体或慢病毒载体。也可以使用腺病毒、腺相关病毒、痘苗病毒、金丝雀痘病毒、疱疹病毒、微环载体和裸(合成)DNA/RNA(关于微环载体的详细信息，参见例如由RMonjezi、C Miskey、T Gogishvili、M Schleef、M Schmeer、H Einsele、Z Ivics和MHudecek在Leukemia 2016发表的non-viral Sleeping Beauty transposition fromminicircle vectors)。或者，单链或双链DNA或RNA可用于用感兴趣的TCR转染淋巴细胞(参见Roth et al 2018Nature vol 559；page 405)。
如本文所用，术语“载体”是指能够运输与其可操作连接的另一个核酸序列的核酸序列。所述载体能够自主复制或整合到宿主DNA中。所述载体可以包括用于插入重组DNA的限制性酶切位点，并且可以包括一个或多个选择性标记或自杀基因。所述载体可以是质粒、噬菌体或粘粒形式的核酸序列。优选地，所述载体适合在细胞中表达(即所述载体是“表达载体”)。优选地，所述载体适合在人T细胞(如CD8+T细胞或CD4+T细胞)中表达。在某些方面，所述载体是病毒载体，例如逆转录病毒载体、慢病毒载体或腺相关载体。任选地，所述载体选自由如下组成的组：腺病毒、痘苗病毒、金丝雀痘病毒、疱疹病毒、微环载体和合成DNA或合成RNA。
优选地，所述(表达)载体能够在宿主细胞中增殖，并稳定地传递给后代。
载体可以包含调控序列。本文所用的“调控序列”是指能够控制基因表达的DNA或RNA元件。表达控制序列的实例包括启动子、增强子、沉默子、TATA盒、内部核糖体进入位点(IRES)、转录因子附着位点、转录终止子、聚腺苷酸化位点等。任选地，载体包括一个或多个与待表达的核酸序列可操作连接的调控序列。调控序列包括指导组成型表达的那些序列，以及组织特异性调控和/或诱导序列。
任选地，载体包含与启动子可操作连接的感兴趣的核酸序列。本文所用的“启动子”是指DNA中的核苷酸序列，RNA聚合酶与其结合以启动转录。启动子可以是诱导型或组成型表达的。或者，启动子受阻遏物或刺激蛋白的控制。启动子可以是宿主细胞中不天然存在的启动子(例如，它可以是外源启动子)。本领域技术人员熟知用于靶蛋白表达的合适启动子，其中所选择的启动子取决于宿主细胞。
“可操作地连接”是指下述控制元件的单个或组合与编码序列在一起，彼此之间具有功能关系(例如，连接关系)，从而指导编码序列的表达。
载体可以包含转录终止子。本文所用的“转录终止子”是指一种DNA元件，它终止负责将DNA转录成RNA的RNA聚合酶的功能。优选的转录终止子的特征是一系列T残基，其后是富含GC的二联体对称区。
所述载体可以包括翻译控制元件。本文所用的“翻译控制元件”是指控制mRNA翻译的DNA或RNA元件。优选的翻译控制元件是核糖体结合位点。优选地，翻译控制元件来自作为启动子的同源系统，例如启动子及其相关的核酶结合位点。优选的核糖体结合位点是已知的，并且取决于所选择的宿主细胞。
载体可以包含限制性酶识别位点。本文所用的“限制性内切酶识别位点”是指由限制性内切酶识别的DNA上的基序。
所述载体可以包含选择性标记。本文所用的“选择性标记”是指当在宿主细胞中表达时，赋予细胞表型的蛋白质，该表型允许选择表达所述选择性标记基因的细胞。通常，这可以是赋予宿主细胞新的有益特性的蛋白质(例如抗生素抗性)或在细胞表面表达并因此可用于抗体结合的蛋白质。合适的选择性标记在本领域是众所周知的。
任选地，载体也可以包含自杀基因。本文所用的“自杀基因”是指在用特定药物治疗时诱导修饰细胞死亡的蛋白质。举例来说，在用包括更昔洛韦在内的特定核苷类似物处理后，可以诱导由单纯疱疹病毒胸苷激酶基因修饰的细胞发生自杀；在用抗CD20单克隆抗体处理后，可以诱导被人CD20修饰的细胞发生自杀；在用AP1903处理后，可以诱导被诱导型Caspase9(iCasp9)修饰的细胞发生自杀(由BS Jones,LS Lamb,F Goldman,ADi Stasi修订的；Improving the safety of cell therapy products by suicide genetransfer.Front Pharmacol.(2014)5:254)。合适的自杀基因在本领域是众所周知的。
优选地，载体包含宿主细胞表达本文所述结合蛋白所必需的那些遗传元件。宿主细胞中转录和翻译所需的元件包括启动子、感兴趣蛋白质的编码区和转录终止子。
本领域技术人员将很清楚可用于制备(表达)载体的分子技术，以及如何将(表达)载体转导或转染到合适的宿主细胞中(从而产生下文进一步描述的修饰细胞)。本文所述的(表达)载体系统可以通过常规技术(如转化、转染或转导)引入细胞。“转化”、“转染”和“转导”通常是指将外来(外源)核酸序列导入宿主细胞的技术，因此包括诸如电穿孔、显微注射、基因枪递送、用逆转录病毒、慢病毒或腺相关载体转导、脂质体转染、superfection等方法。使用的具体方法通常取决于载体和细胞的类型。将核酸序列和载体导入宿主细胞如人类细胞的合适方法在本领域是众所周知的；例如，参见Sambrook et al(1989)MolecularCloning,ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,N.Y；Ausubel et al(1987)Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley andSons,Inc.,NY；Cohen et al(1972)Proc.Natl.Acad.Sci.USA69,2110；Luchansky et al(1988)Mol.Microbiol.2,637-646。例如，WO2016/071758中详细描述了适用于制备表达载体并将其引入合适宿主细胞的其他常规方法。
应当理解，在一些实施例中，宿主细胞与载体系统(例如病毒载体)在体外接触，并且在一些实施例中，宿主细胞与载体系统(例如病毒载体)在体内接触。
术语“宿主细胞”包括本文所述的核酸组合物或载体系统可以引入(例如转导)其中的任何细胞。一旦核酸分子或载体系统被引入细胞，其在本文中可被称为“修饰细胞”。一旦核酸分子或载体被引入宿主细胞，所得的修饰细胞应该能够表达编码的结合蛋白(并且例如正确定位编码的结合蛋白以实现其预期功能，例如将编码的结合蛋白转运到细胞表面)。
术语“经修饰的细胞”是指基因改变的(例如转化或转染的)细胞。该术语指特定的受试细胞，也指这种细胞的后代或潜在后代。因为由于突变或环境影响，某些修饰可能在随后的几代中发生，这样的后代实际上可能与亲本细胞不相同，但仍包括在本文所用该术语的范围内。
宿主细胞(以及因此修饰的细胞)通常是真核细胞，特别是人细胞(例如T细胞，例如CD8+T细胞或CD4+T细胞，或它们的混合物)。宿主细胞(以及因此修饰的细胞)可以是异体细胞(例如异体T细胞，如CD8+T细胞或CD4+T细胞，或它们的混合物)，其是指源自不同个体的细胞，该个体不同于随后对其施用的个体。换句话说，与待治疗的受试者相比，宿主细胞(以及因此修饰的细胞)可以是来自不同个体的分离的T细胞。
宿主细胞(以及因此修饰的细胞)可以是在TCR基因转移后能够赋予抗肿瘤免疫的任何细胞。合适细胞的非限制性实例包括自体或异体CD8 T细胞、CD4T细胞、自然杀伤(NK)细胞、NKT细胞、γ-δT细胞、造血干细胞或其他祖细胞，以及在TCR基因转移后能够赋予抗肿瘤免疫的任何其他自体或异体细胞或细胞系(例如NK-92或T细胞系)。
在本文所述治疗方法的上下文中，宿主细胞(以及因此修饰的细胞)通常用于对HLA-A*0201阳性的人类受试者施用。考虑到这一点，宿主细胞(以及因此修饰的细胞)通常是HLA-A*0201阴性和/或HA-1H阴性(即它不表达HLA-A*0201和HA-1H)。
有利地，修饰的细胞能够表达由本文所述的核酸组合物或载体系统编码的结合蛋白(即所述TCR组分部分)，因此经修饰的细胞提供了特异性靶向血液恶性肿瘤的免疫疗法，并因此可用于治疗或预防在HLA-A*0201阳性受试者异体干细胞移植(allo-SCT)后血液恶性肿瘤的复发。下面给出了关于这种用途的更多细节。
药物组合物
本文所述的核酸组合物、载体系统或修饰细胞可作为药物组合物的一部分提供。有利的是，这种组合物可以在异体干细胞移植(allo-SCT)后施用于患有血液恶性肿瘤的人类受试者，以治疗或预防复发(例如，通过诱导或增强HA-1H抗原靶向特异性免疫反应)。
药物组合物可包含本文所述的核酸组合物、载体系统或修饰细胞以及药学上可接受的赋形剂、佐剂、稀释剂和/或载体。
组合物通常可包含药学上可接受浓度的盐、缓冲剂、防腐剂、相容载体、辅助免疫增强剂(如佐剂和细胞因子)，以及任选的其它治疗剂或化合物。
如本文所用，“药学上可接受的”是指在生物学上或其他方面不是不希望的材料，即该物质可以与所选择的核酸组合物、载体系统或修饰的细胞一起施用给个体，而不会引起任何不希望的生物效应或以有害的方式与包含它的药物组合物的任何其它成分相互作用。
赋形剂是与活性成分一起配制的天然或合成物质(例如本文提供的核酸序列、载体、修饰的细胞或分离的肽)，其目的在于扩大制剂或赋予最终剂型中的活性成分治疗增强作用，例如促进药物吸收或溶解性。赋形剂在制造过程中也是有用的，有助于处理相关的活性物质，例如通过促进粉末流动性或不粘特性，此外还有助于体外稳定性，例如防止在预期的保存期内变性。药学上可接受的赋形剂是本领域众所周知的。因此，本领域普通技术人员很容易识别合适的赋形剂。举例来说，合适的药学上可接受的赋形剂包括水、盐水、葡萄糖水溶液、甘油、乙醇等。
佐剂是药理学和/或免疫学试剂，可改变制剂中其他试剂的作用。药学上可接受的佐剂是本领域众所周知的。因此，本领域普通技术人员很容易识别合适的佐剂。
稀释剂是用于稀释的试剂。药学上可接受的稀释剂是本领域众所周知的。因此，本领域普通技术人员很容易识别合适的稀释剂。
在所用的剂量和浓度下，载体对受体无毒，并且与制剂的其他成分相容。术语“载体”表示有机或无机成分，天然的或合成的，与活性成分结合以促进应用。药学上可接受的载体是本领域众所周知的。因此，本领域普通技术人员很容易识别合适的载体。
对受试者的治疗
本文所述的药物组合物可有利地用于治疗或预防HLA-A*0201阳性的人类受试者中异体干细胞移植(allo-SCT)后血液恶性肿瘤的复发。
在一个实例中，本文所述的治疗或预防血液恶性肿瘤复发的方法在受试者中导致诱导或增强的免疫反应(例如细胞介导的反应)(例如针对呈递HA-1H-HLA-A*0201限制性肽的恶性细胞的针对性免疫反应)。
短语“诱导或增强的免疫反应”是指与治疗前的受试者的免疫反应相比，受试者在治疗期间或之后的免疫反应(例如细胞介导的免疫反应，例如T细胞介导的免疫反应)增加。因此，“诱导或增强的”免疫反应包括直接或间接针对正在治疗(或预防)的血液恶性肿瘤的免疫反应的任何可测量的增加。
本领域技术人员将完全了解根据本发明可以治疗的血液恶性肿瘤。举例来说，适当的血液恶性肿瘤包括白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常综合征或骨髓瘤。
例如，当血液恶性肿瘤包括白血病时，白血病可以是急性髓细胞白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、混合表型急性白血病(MPAL)、慢性髓细胞白血病(CML)、B细胞前淋巴细胞白血病、毛细胞白血病或慢性淋巴细胞白血病(CLL)。
作为另一个实例，当血液恶性肿瘤包括淋巴瘤时，淋巴瘤可以是霍奇金淋巴瘤(HL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、中枢神经系统淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、CD37+树突细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织(MALT)的结外边缘区B细胞淋巴瘤、结边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤或伯基特淋巴瘤。
作为另一个实例，当血液恶性肿瘤包括骨髓增生异常综合征时，骨髓增生异常综合征可以是难治性血细胞减少症伴单系发育不良(难治性贫血、难治性中性粒细胞减少症和难治性血小板减少症)、难治性贫血伴环状铁幼粒细胞增多(RARS)、难治性贫血伴环状铁幼粒细胞增多-血小板增多症(RARS-t)、难治性血细胞减少症伴多系发育不良(RCMD)、难治性血细胞减少症伴多系发育不良和环状铁幼粒细胞增多(RCMD-RS)、难治性贫血伴成纤维细胞过多(RAEB)、不可分类的骨髓增生异常或儿童难治性血细胞减少症。
在某些情况下，受试者以前接受过淋巴消耗性化疗，例如包含环磷酰胺、氟达拉滨、抗胸腺细胞球蛋白或其组合的淋巴消耗性化疗。
通常，施用于受试者的修饰细胞是异体的。
如本文所用，术语“治疗”被认为包括旨在防止疾况、病症或症状的发展或改变其病理状态(即在这种情况下是血液恶性肿瘤)所实施的干预。因此，“治疗”是指治疗性治疗和预防性或防止性措施，其中目标是预防或减缓(减轻)目标病况、病症或症状。因此，“治疗”包括与治疗前恶性细胞的量或浓度相比，恶性细胞的量或浓度降低、减缓或抑制至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％，例如在从受试者获得的样品中测量。测量恶性细胞的数量或浓度的方法包括，例如，qRT-PCR，以及对从受试者获得的样品中的血液恶性肿瘤特异性生物标志物进行定量。
如本文所用，术语“受试者”是指个体。患有或有可能患有特定病况、病症或症状的人。受试者可以是患者，即需要根据本发明进行治疗的受试者。受试者可能已经接受了针对该病况、病症或症状的治疗。或者，受试者在根据本发明进行治疗之前没有接受过治疗。
本文所述的组合物可通过任何常规途径施用于受试者，包括注射或随时间推移逐渐输注。施用可以例如通过输注或通过肌内、血管内、腔内、脑内、病灶内、直肠、皮下、皮内、硬膜外、鞘内、经皮施用。
本文所述的组合物可以是适合上述施用方式的任何形式。例如，包含修饰细胞的组合物可以是适合输注的任何形式。作为进一步的实例，胃肠外注射(包括皮下、肌肉内、血管内或输注)的合适形式包括无菌溶液、悬浮液或乳剂。或者，施用途径可以是通过直接注射到目标区域，或通过区域施用或通过局部施用。本发明组合物的合适剂量的确定完全在本领域技术人员的常规能力范围内。
有利的是，本文所述的组合物可以配制为用于T细胞受体(TCR)基因转移，这是一种快速、可靠且能够产生大量对HA-1H抗原肽(例如SEQ ID NO:10所示的肽)具有特异性的T细胞的方法，而与患者先前存在的免疫系统无关。利用TCR基因转移，可以在几天内产生适合输注的改良的异体细胞。
本文所述的组合物以有效量施用。“有效量”是指单独或与其他剂量一起产生所需(治疗或非治疗)反应的量。使用的有效量将取决于例如治疗(或非治疗)目标、施用途径和患者/受试者的状况。例如，本发明组合物对于给定患者/受试者的合适剂量将由主治医生(或施用该组合物的人)确定，考虑已知的改变本发明组合物作用的各种因素，例如血液恶性肿瘤的严重程度和类型、体重、性别、饮食、施用时间和途径、其他药物和其他相关临床因素。剂量和时间表可以根据患者/受试者的具体病况、病症或症状的整体状况而变化。有效剂量可通过体外或体内方法确定。
本文所述的药物组合物有利地以单位剂型存在。
生成TCR的方法
还提供了一种产生结合蛋白的方法，所述结合蛋白能够特异性结合含有HA-1H抗原的肽，而不结合不含HA-1H抗原的肽，所述方法包括在核酸组合物被细胞掺入并表达的条件下，使本文所述的核酸组合物(或载体系统)与细胞接触。
该方法可以在离体或体外对宿主细胞进行。或者，该方法可以在体内进行，其中，在核酸序列被宿主细胞引入并表达以产生结合蛋白的条件下，将核酸组合物(或载体系统)施用于受试者，并在体内与宿主细胞接触。在一个实例中，该方法不是治疗人体或动物体的方法。
在核酸序列(或载体)被细胞纳入和表达的条件下，使核酸序列(或载体系统)与宿主细胞接触的合适的体内、体外和离体方法是众所周知的，如本文他处所述。
一般定义
如本文所用，“核酸序列”、“多核苷酸”、“核酸”和“核酸分子”可互换使用以指寡核苷酸序列或多核苷酸序列。核苷酸序列可以是基因组的、合成的或重组的，并且可以是双链的或单链的(代表正义或反义链)。术语“核苷酸序列”包括基因组DNA、cDNA、合成DNA和RNA(例如mRNA)和所产生的DNA或RNA的类似物，例如通过使用核苷酸类似物。
如本文所用，“分离的核酸序列”或“分离的核酸组合物”是指当核酸序列与其自然环境中的天然相关序列相连时，不在其自然环境中的核酸序列。换句话说，分离的核酸序列/组合物不是天然的核苷酸序列/组合物，其中“天然核苷酸序列/组合物”是指处于其天然环境中的完整核苷酸序列，当可操作地连接到与其天然相关的完整启动子时，该启动子也处于其天然环境中。这种核酸可以是载体的一部分和/或这种核酸或多肽可以是组合物的一部分(例如，细胞裂解物)，并且仍然被分离，因为这样的载体或组合物不是核酸或多肽的自然环境的一部分。术语“基因”是指参与产生多肽链的DNA片段；它包括编码区前后的区域(“前导和尾部”)以及各个编码片段(外显子)之间的中间序列(内含子)。
本文所用的“特异性结合”或“特异性针对”是指结合蛋白(例如，TCR受体)或结合结构域(或其融合蛋白)与靶分子的缔合或结合具有亲和力或Ka(即，特定结合相互作用的平衡缔合常数，单位为1/M)等于或大于105M-1(其等于该缔合反应的结合速率[kon]与解离速率[koff]之比)，而不与样品中的任何其他分子或组分显著缔合或结合。结合蛋白或结合结构域(或其融合蛋白)可分为“高亲和力”结合蛋白或结合结构域(或其融合蛋白)或“低亲和力”结合蛋白或结合结构域(或其融合蛋白)。“高亲和力”结合蛋白或结合结构域是指Ka为至少107M-1、至少108M-1、至少109M-1、至少1010M-1、至少1011M-1、至少1012M-1或至少1013M-1的那些结合蛋白或结合结构域。“低亲和力”结合蛋白或结合结构域是指Ka为高达107M-1、高达106M-1、高达105M-1的那些结合蛋白或结合结构域。或者，亲和力可以定义为与M单位的特定结合相互作用的平衡解离常数(Kd)(例如，10-5M至10-13M)。
在某些实施方案中，受体或结合结构域可以具有“增强的亲和力”，这是指与野生型(或亲本)结合结构域相比，与靶抗原结合更强的所选择的或工程化的受体或结合结构域。例如，增强的亲和力可能是由于靶抗原的Ka(平衡缔合常数)高于野生型结合结构域，由于靶抗原的Kd(解离常数)低于野生型结合结构域，由于靶抗原的解离率(koff)低于野生型结合结构域，或它们的组合。在某些实施方案中，可以对增强亲和力的TCR进行密码子优化，以增强特定宿主细胞中的表达，所述宿主细胞例如免疫系统的细胞、造血干细胞、T细胞、原代T细胞、T细胞系、K细胞或自然杀伤T细胞(Scholten et al,Clin.Immunol.119:135,2006)。T细胞可以是CD4+或CD8+T细胞。
如本文所用，术语“HA-1H抗原”或“HA-1H肽抗原”或“含HA-1H的肽抗原”(或“次要HA-1<H>抗原”或“次要HA-1H肽抗原”或“次要含HA-1H的肽抗原”或“次要组织相容性HA-1H抗原肽”)是指长度范围为约7个氨基酸、约8个氨基酸、约9个氨基酸、约10个氨基酸、至多约20个氨基酸并包含R139H替代多态性的HMHA1蛋白的天然地或合成地产生的肽部分，其可以与MHC(例如，HLA)分子以及对HA-1H肽特异的本公开的结合蛋白形成复合物：MHC(例如，HLA)复合物可以特异性地结合至这种复合物。示例性的HA-1H HA-1肽抗原包含具有氨基酸VLHDDLLEA(SEQ ID NO:10)的肽，其中序列中粗体组氨酸代表R139H多态性。
本文使用的术语“HA-1H特异性结合蛋白”是指特异性结合HA-1H肽抗原(或HA-1H肽抗原:HLA复合物，例如，在细胞表面)的蛋白质或多肽(例如TCR或CAR)，并且不结合不含HA-1H多态性的HMHA肽(例如，包含SEQ ID NO:79所示氨基酸序列的肽)，并且不与包含这种HMHA肽的HLA复合物结合。
在某些实施方案中，HA-1H特异性结合蛋白特异性结合含HA-1的肽(或HA-1H肽:HLA复合物)，其具有小于约10-8M、小于约10-9M、小于约10-10M、小于约10-11m、小于约10-12M或小于约10-13M的Kd，或具有约等于、至少约等于、或大于或大约等于本文提供的示例性HA-1特异性结合蛋白(例如本文提供的任何HA-1H特异性TCR)所表现出的亲和力(例如，通过相同的测定来测量)。在某些实施方案中，HA-1特异性结合蛋白包含HA-1特异性免疫球蛋白超家族结合蛋白或其结合部分。
选择性结合可以在通过HLA-A*02：01进行HA-1H抗原呈递的情况下进行。换句话说，在某些实施方案中，“特异性结合HA-1H抗原”的结合蛋白仅当其被HLA-A*02:01呈递时(即它被HLA-A*02:01结合时)，或处于与被HLA-A*02:01呈递时相同的结构形式时,它才能选择性结合。
“非必需的”(或非关键的)氨基酸残基是可以从野生型序列(例如由SEQ ID NO表示的序列)改变而没有消除、或者更优选地没有实质上改变生物活性的残基，而“必需的”(或“关键的”)氨基酸残基导致这种改变。例如，保守的氨基酸残基被预测为特别不易于改变，除了结构域的疏水核心内的氨基酸残基通常可以被具有近似相等疏水性的其他残基取代，而不会显著改变活性。
“保守氨基酸取代”是指氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基取代。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β-支链侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳香族侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，蛋白质中的非必需(或非关键)氨基酸残基优选被来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基取代。或者，在另一个实施方案中，可以随机引入突变，并且可以筛选所得突变体的活性，以鉴定保留活性的突变体。
序列之间的序列同源性或同一性(所述术语在本文中可互换使用)的计算如下进行。
为了确定两个氨基酸序列或两个核酸序列的同一性百分比，将序列进行比对以达到最佳比较目的(例如，可以在第一和第二氨基酸或核酸序列中的一个或两个中引入缺口以实现最佳比对，并且出于比较目的，可以忽略非同源序列)。在一个优选的实施方案中，为了比较目的而比对的参考序列的长度是参考序列长度的至少30％，优选至少40％，更优选至少50％，甚至更优选至少60％，甚至更优选至少70％，75％，80％，82％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或100％。然后比较相应氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸残基或核苷酸。当第一个序列中的一个位置被与第二个序列中相应位置相同的氨基酸残基或核苷酸占据时，则该位置上的分子是相同的(如本文所用，氨基酸或核酸的“同一性”相当于氨基酸或核酸的“同源性”)。两个序列之间的同一性百分比是序列共有的相同位置的数量的函数，考虑到间隙的数量和每个间隙的长度，为了两个序列的最佳比对，需要引入间隙。
序列的比较和两个序列之间同一性百分比的确定可以使用数学算法来完成。在一个优选的实施方案中，两个氨基酸序列之间的同一性百分比是使用Needleman et al.(1970)J.Mol.Biol.48:444-453描述的算法来确定的，所述算法已被纳入GCG软件包中的GAP程序(可在http://www.gcg.com上获得)，使用BLOSUM 62矩阵或PAM250矩阵，缺口权重为16、14、12、10、8、6或4，长度权重为1、2、3、4、5或6。在另一个优选的实施方案中，两个核苷酸序列之间的同一性百分比是使用GCG软件包中的GAP程序(可在http://www.gcg.com上获得)来确定的，使用NWSgapdna.CMP矩阵，缺口权重为40、50、60、70或80，长度权重为1、2、3、4、5或6。一组特别优选的参数(如果从业者不确定应使用哪些参数确定分子是否在本发明的序列同一性或同源性限制内，则应使用该参数)是BLOSUM 62评分矩阵，其缺口罚分为12，缺口延伸罚分为4，移码缺口罚分为5。
或者，两个氨基酸或核苷酸序列之间的同一性百分比可以使用Meyers et al.(1989)CABIOS 4:11-17的算法来确定，所述算法已被纳入ALIGN程序(2.0版)，使用PAM120权重余数表，缺口长度罚分为12，缺口罚分为4。
本文所述的核酸和蛋白质序列可用作“查询序列”，以对照公共数据库进行搜索，例如，鉴定其他家族成员或相关序列。这种搜索可以使用Altschul,et al.(1990)J.Mol.Biol.215:403-410的NBLAST和XBLAST程序(2.0版)来执行。BLAST核苷酸搜索可以用NBLAST程序进行，得分＝100，字长＝12，以获得与本发明核酸分子同源的核苷酸序列。BLAST蛋白质搜索可以用XBLAST程序进行，得分＝50，字长＝3，以获得与本发明蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的缺口比对，可以如Altschul et al.(1997,Nucl.Acids Res.25:3389-3402)所述使用缺口BLAST。当使用BLAST和缺口BLAST程序时，可以使用相应程序的默认参数(例如，XBLAST和NBLAST)。参见<http://www.ncbi.nlm.nih.gov>。
本文所述的多肽和核酸分子可以具有与SEQ ID NO表示的序列充分相同或基本相同的氨基酸序列或核酸序列。术语“充分相同”或“基本相同”在本文中用于指第一氨基酸或核苷酸序列，其包含与第二氨基酸或核苷酸序列足够或最少数目的相同或等同的(例如具有相似的侧链)氨基酸残基或核苷酸，以使第一和第二氨基酸或核苷酸序列具有共同的结构域或共同的功能活性。换句话说，与由SEQ ID NO表示的相应序列相比具有一个或几个(例如两个，三个，四个等)氨基酸或核酸取代的氨基酸序列或核酸序列可以与由SEQ ID NO表示的序列充分或基本相同(只要它们保留必需的功能)。在这样的实例中，一个或几个(例如两个、三个、四个等)氨基酸或核酸取代可以是保守取代。例如，包含具有至少约60％，或65％同一性，可能75％同一性，更可能85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％同一性的共同结构域的氨基酸或核苷酸序列在本文中被定义为充分或基本相同。
TCR序列是根据IMGT定义的。更多详情请参见本文的LeFranc参考文献，即[1]Lefranc M.-P."Unique database numbering system for immunogenetic analysis"Immunology Today,18:509(1997).[2]Lefranc M.-P."The IMGT unique numbering forimmunoglobulins,T cell Receptors and Ig-like domains"The immunologist,7,132-136(1999).
[3]Lefranc M.-P.et al."IMGT unique numbering for immunoglobulin andTcell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains"Dev.Comp.Immunol.,27,55-77(2003).
[4]Lefranc M.-P.et al."IMGT unique numbering for immunoglobulin and Tcell receptor constant domains and Ig superfamily C-like domains"Dev.Comp.Immunol.,2005,29,185-203PMID:15572068.
本发明的各方面由以下非限制性实施例来说明。
实施例
TCR基因转移是一种在短时间内以明确限定的特异性修饰T细胞的有吸引力的策略。最近，在用TCR修饰的自体T细胞治疗的黑色素瘤或滑膜细胞肉瘤患者中证明了TCR转移的有效性。为了设计出不会GvHD而能发挥选择性GvL的T细胞，我们更优选转移HA-1-TCR。为了扩大获得性T细胞疗法在血液恶性肿瘤中的适用性，我们开始了一项使用HA-1-TCR转移的病毒特异性T细胞的临床研究。我们对3个HA-1特异性T细胞克隆M2、M7和FK47.83的TCR链进行了测序(表4)。
表4克隆M2、M7和FK47.83的HA-1-TCR序列。
如前所述，我们再次观察到所有3个HA-1特异性T细胞克隆都表达一个具有相似V区的β链(TRBV7-9)(4)。制备LZRS逆转录病毒构建体，其编码M2和M7的TCRα和β链。M7的HA-1-TCRβ链也被克隆到逆转录病毒载体MP71中。TCRα链通过IRES与标记物eGFP相连，TCRβ链通过IRES与标记物截短的神经生长因子受体(NGF-R)相连。两个HA-1-TCR链也与T2A序列相连，并在与NGF-R结合的pLZRS载体或没有标记基因的MP71载体中表达。还制备了编码密码子优化的和半胱氨酸修饰的HA-1-TCR的MP71构建体。
根据我们(3)描述的基因转移后HA-1-TCR的细胞表面低表达，我们研究了这种低表达是由于TCR链不能有效地相互配对还是由于TCR链的内在性质。用单独的HA-1-TCRα和HA-1-TCRβ链与17种不同的TCRα和TCRβ链联合转导(td)TCRαβ缺失的J76细胞，用抗TCRαβ单克隆抗体测定TCR细胞表面表达。在图1A中，显示了HA-1-TCRαβ、CMVB7-TCRαβ、HA-2-TCRαβ、CMVA2-TCRαβ和混合的TCRα和β链组合的TCR细胞表面表达。HA-2-TCRαβtd J76细胞(MFI330)和CMVA2-TCRαβtd J76细胞(MFI 274)显示TCR高表达。HA-1-TCRαβtd J76细胞(MFI129)的TCR表达低于HA-2-TCRαβtd J76细胞。此外，当用HA-1-TCRβ与HA-2-或CMVA2-TCRα的组合转导J76细胞时，没有观察到恢复的TCR细胞表面表达(图1A)。此外，在HA-1-TCRβ链与其他14个TCRα链之一的任何转导中，都没有观察到恢复的TCR表达(数据未显示)。相比之下，HA-1-TCRα链与HA-2-或CMVA2-TCRβ链结合，导致TCR细胞表面表达与亲代HA-2-和CMVA2-TCR复合物相当，表明HA-1-TCR细胞表面表达的降低不是由于HA-1-TCRα链，而是由于HA-1-TCRβ链。
由于HA-1-TCRβ与测试的所有其他14个TCRα链的TCR细胞表面表达仍然很低，我们得出结论，HA-1-TCR细胞表面低表达不是由于HA-1-TCRα链与HA-1-TCRβ链特异性的配对效率低。为了排除用于引入TCR链的LZRS载体导致HA-1-TCR选择性低表达的可能性，HA-1-TCRβ基因被插入到被描述为介导转基因高表达的MP71载体中。从图1A可以看出，使用编码HA-1-TCRβ链的MP71载体没有提高HA-1-TCR细胞表面的表达，表明HA-1-TCR细胞表面低表达不是由于载体的特异性。为了研究HA-1-TCRβ链的转移是否由于HA-1-TRBV7-9链的始终相同的可变区的序列特异性而导致细胞表面低表达，分析了具有与HA-1-TCRβ链相同的可变区TRBV7-9但具有完全不同的CDR3区的CMVB7-TCRβ的细胞表面表达。如图1A所示，亲本CMVB7-TCR复合物表现出与亲本HA-1-TCR复合物相当的细胞表面低表达。当CMVB7-TCRβ链与HA2-或CMVA2-TCRα链结合时，这种TCR低表达也没有恢复，而CMVB7-TCRα链与HA2-或CMVA2-TCRα链结合时，导致TCR细胞表面高表达，与亲代HA-2-或CMVA2-TCR的表达相当。这些结果表明HA-1-和CMVB7-TCRβ链的低表达是由于可变区的序列特异性。这些数据共同表明，HA-1-TCR细胞表面低表达是由于HA-1-TCRβ链的内在特性。
为了证实基因转移后HA-1-TCR的次优细胞表面表达是由于HA-1-TCRβ链的内在性质，测定了不同亲本HA-1-特异性T细胞克隆的HA-1-TCR细胞表面表达和HA-1-TCRα和β链的mRNA水平。如图1B所示，用针对TCRαβ和CD3复合物的抗体进行的FACS分析表明，与HA-2-和CMVA2特异性T细胞克隆相比，HA-1特异性T细胞克隆和CMVB7特异性T细胞克隆在细胞表面表达的TCR-CD3复合物水平较低。然而，与其他T细胞克隆相比，HA-1特异性T细胞克隆与其各自的四聚体染色强度相似(图1C)，并且是基于细胞因子产生和细胞毒性的全功能T细胞(数据未显示)。为了排除TCRαβ低表达是由于较低的转录活性，测定了HA-1特异性T细胞克隆的TCRα和β的mRNA水平，并与其他T细胞克隆的TCRα和β的mRNA水平进行了比较。如图1D所示，与其他T细胞克隆相比，HA-1-TCRα或β的mRNA表达水平没有显著差异。总之，尽管TCRαβ的mRNA水平正常，然而亲本HA-1特异性T细胞克隆显示较低的TCR细胞表面表达。这些结果表明，在HA-1-TCR转移的T细胞中观察到的HA-1-TCR低表达是HA-1-TCR固有的特征，因为亲代HA-1-特异性T细胞克隆的TCR表达已经很低。
为了能够在基因转移后提高HA-1-TCR的表达，我们研究了是否可以确定负责该TCR细胞表面低表达的HA-1-TCRβ的特定区域，并通过修饰该区域来提高HA-1-TCR表达(6)。为此，属于TRBV7可变结构域家族并已知在基因转移后表现出细胞表面高表达的几个TCRβ链的序列(即HA-2-TRBV7-8、JBBun-TRBV7-6和10G5-TRBV7-1)，与HA-1和CMVB7-TRBV7-9的序列比对。总共有30个共有差异分散在309个氨基酸(aa)长的可变区，其中9个核苷酸差异聚集在18个核苷酸长的CDR1区，如图2A所示。基于这些结果，我们假设HA-1-TCR TRBV7-9的主要CDR1区域可能影响HA-1-TCRβ链的细胞表面表达。为了研究这一点，我们构建了不同的构建体，其中HA-1-TCRβCDR1区域与HA-2-TCRβCDR1区域交换，反之亦然。用抗TCRαβ特异性单克隆抗体分析用修饰的HA-1-和HA-2-TCR转导的J76细胞的TCR细胞表面表达。如图2B所示，HA-1-TCRβCDR1区与HA-2-TCRβ的CDR 1区的交换并未导致J76细胞上TCR细胞表面表达的显著提高。同样，HA-2-TCRβCDR1区域与HA-1-TCRβCDR1区域的交换并没有导致J76细胞上TCR细胞表面表达的显著降低。这些结果表明CDR1区不是TCR细胞表面低表达的唯一原因。此外，我们通过病毒特异性T细胞与不同修饰的TCR链的转导证明，HA-1-TCRβ的CDR1区与HA-2-TCRβ的CDR1区的交换导致HA-1特异性IFN-γ产生的完全消除(图2C)，说明HA-1-TCRβCDR1区对HA-1特异性至关重要。然而，HA-2-TCRβCDR1区与HA-1-TCRβCDR1区的交换表明，仅交换该区域不足以转移HA-1特异性。HA-2-TCRβCDR1和CDR3区与HA-1-TCRβ的区域的交换导致HA-1-特异性(图2C)。然而，与亲本HA-1-TCR td T细胞相比，这些td T细胞的效率仍然较低，因为只观察到非常低的内源性加工的HA-1(LCL-BDV)的识别率(图2C)。总之，HA-1-TCRβCDR1区对HA-1特异性至关重要，但不足以实现HA-1特异性。此外，CDR3区和HA-1-TCRβ链对HA-1的特异性也至关重要。
基于所有HA-1特异性T细胞克隆的类似TRBV7-9链使用(4)，我们研究了M2和M7TCR的嵌合TCR组合是否也可以是HA-1特异性的。用2个HA-1TCR和1个CMV-B7 TCR(均为TRB7-9链)的嵌合TCR组合转导外周T细胞，并将转移的嵌合TCR的功能性与最初的HA-1TCR组合进行比较。如表5所示，结果表明M7β链即可以与M7 TRAV25*01，也可以与M2 TRAV13-1*02形成功能性HA-1TCR复合物，但与CMV TRAV17*01不形成功能性HA-1TCR复合物。此外，M2TRAV13-1*02和M7 TRAV25*01与CMV-B7 TCR的TRBV7-9不形成功能性的HA-1TCR复合物。这些结果表明(如上所述)，决定HA-1特异性的是TCRα和TCRβ的组合。
| TCR | M2 | M7 | CMV | |
| TRAV13-1*02 | TRAV25*01 | TRAV17*01 | ||
| M2 | TRBV7-9 | 24,2 | 32,6 | 1,8 |
| M7 | TRBV7-9 | 2,6 | 33,8 | 2 |
| CMV | TRBV7-9 | 3,1 | 2,3 | 2,3 |
表5:嵌合HA-1TCR。显示了HA-1pMHC四聚体的平均荧光强度(MFI)。
由于HA-1-TCR的表达不能通过修饰HA-1-TCRβ链的特定序列来提高，因此探索了描述的其他提高基因转移的TCR的TCR细胞表面表达的策略。我们研究了TCR密码子优化或在HA-1-TCRα和β链的恒定结构域中包含半胱氨酸残基(7)是否导致在基因转移后有效的HA-1-特异性T细胞。我们分析了将不同构建体转移到已知具有对细胞表面表达竞争很弱的内源性TCR(弱竞争子；pp50 VTE特异性T细胞，图3)的病毒特异性T细胞和已知具有强烈竞争细胞表面表达的内源性TCR(强竞争子；EBNA3A FLR特异性T细胞，图3)的病毒特异性T细胞后，HA-1-TCR的细胞表面表达(5)。如图3A所示，将未修饰的HA-1-TCR复合物转移到弱竞争子T细胞中，导致40％的HA-1四聚体阳性T细胞，而在将未修饰的HA-1-TCR复合物转移到强竞争子T细胞中后，在转移未修饰的HA-1-TCR复合物后，使用四聚体无法测量HA-1-TCR的明确表达。在两条HA-1-TCR链中包含半胱氨酸残基提高了HA-1-TCR的表达，特别是在强竞争子病毒特异性T细胞中。不出所料，在两条HA-1-TCR链中只有一条链含有半胱氨酸残基，这显著降低了HA-1-TCR的表达。此外，密码子优化提高了弱竞争子和强竞争子病毒特异性T细胞中HA-1-TCR的表达。然而，增加的HA-1-TCR表达似乎不是由于HA1-TCRβ链表达的提高，而是由于HA1-TCRα链表达的提高，因为与用密码子优化的HA-1-TCRα和β链转移的T细胞相比，用密码子优化的HA-1-TCRα链和野生型HA-1-TCRβ链的组合转移的T细胞在HA-1-四聚体阳性T细胞的百分比方面显示出类似的提高。在弱和强竞争子的病毒特异性T细胞中，密码子优化和半胱氨酸修饰的HA-1-TCRα链与半胱氨酸修饰的HA-1-TCRβ链的组合最显著地提高了HA-1-TCR的表达(图3A)。
为了测试改善的HA-1-TCR表达是否导致HA-1特异性功能的提高，HA-1-TCR td弱和强竞争子病毒特异性T细胞针对负载HA-1肽的靶细胞以及内源性表达HA-1抗原的靶细胞被测试(图3B)。在弱竞争子病毒特异性T细胞中，密码子优化和半胱氨酸修饰的HA-1-TCRα链与半胱氨酸修饰的HA-1-TCRβ链的组合(组合#8)显示出针对肽负载靶细胞以及针对呈递内源性加工的HA-1抗原的靶细胞的最高IFN-γ产量。最明显的是，在强竞争子T细胞中，这种TCR组合是唯一能够发挥显著的HA-1特异性反应性的组合。总之，HA-1-TCR链的半胱氨酸修饰与HA-1-TCRα链的密码子优化的组合，导致基因转移后有效的HA-1-TCR表达，甚至在强竞争子T细胞中，并导致稳健的HA-1特异性功能。
为了证实这些数据的普遍性，用与小核糖核酸病毒衍生的自切割2A序列连接的编码未修饰的或密码子优化的和半胱氨酸修饰的HA-1-TCRα和链的单一逆转录病毒载体转导多克隆外周CD8+T细胞以及其他弱和强竞争子T细胞，并测试HA-1-TCR细胞表面表达(图4A)。尽管我们没有观察到密码子优化的HA-1-TCRβ链的细胞表面表达得到提高，但HA-1-TCRβ链也被密码子优化，以保证TCRβ链的mRNA稳定性不会对TCRα链的表达产生负面影响。相应地，用修饰的HA-1-TCR转导导致在弱和强竞争子T细胞中最有效的细胞表面表达。多克隆CD8+T细胞在转移修饰的HA-1-TCR后显示出与强竞争子T细胞相似的HA-1-TCR细胞表面显著表达(图4A)。
为了研究这种提高的HA-1-TCR细胞表面表达是否与临床相关的HA-1特异性功能一致，分析了用未修饰或密码子优化和半胱氨酸修饰的HA-1-TCR转导的弱和强竞争子表型T细胞的HA-1特异性细胞毒性活性(图4B)和IFN-γ产生(图4C)。用未修饰的HA-1-TCR转导的弱竞争子T细胞产生HA-1特异性细胞毒性反应和抗AML和ALL的IFN-γ产生，而修饰的TCR的引入增强了HA-1特异性反应(分别见图4B和C)。此外，用修饰的HA-1-TCR转导的强竞争子T细胞能够表现出显著的细胞毒性活性和针对HA-1+恶性细胞的IFN-γ产生(分别见图4B和4C)。总之，这些结果证实了将修饰的HA-1-TCR引入弱竞争子表型T细胞和强竞争子表型T细胞以及多克隆CD8+T细胞中提高HA-1-TCR表达的普遍性，从而证明我们可以产生有效的重定向HA-1-特异性T细胞。
为了用于临床治疗，引入的TCR必须由没有潜在免疫原性标记基因的逆转录病毒构建体编码。因此，我们构建了一个没有标记基因的MP71载体，其编码修饰的HA-1-TCRα和β链，并分析了用这种临床上有用的载体转导的弱(图5)和强竞争子T细胞(图5)是否表现出类似的提高的抗白血病反应性(8)。转导后一周，使用IFN-γELISA(图5)分析弱和强竞争子T细胞对恶性靶细胞的HA-1特异性反应性。pLZRS和MP71载体的转导效率基于NGF-R或HA-1-四聚体染色，证明分别为15％和2％。尽管与未修饰的HA-1-TCR转导的T细胞相比，用未修饰的或修饰的HA-1-TCR转导的弱竞争子T细胞同样能很好地识别恶性细胞(图5)，但用修饰的HA-1-TCR转导的强竞争子T细胞在所有靶细胞中显示出显著提高的抗AML和ALL的IFNγ产生。总之，用密码子优化的和半胱氨酸修饰的HA-1-TCR进行TCR转移，导致了引入的HA-1-TCR的有效表达和针对临床相关靶细胞的强有力的HA-1-特异性功能，无论是在弱竞争子还是在强竞争子T细胞中。
基于以前的结果，我们研究了是否可以为临床目的扩大这一程序，从而快速设计出治疗相关数量的用HA-1-TCR转导的纯病毒特异性T细胞。为了在整个过程后获得治疗细胞数，将供体白细胞与由相关CMV和EBV肽-HLA复合物组成的一种或两种链霉亲和素孵育，供体中存在大量的T细胞群。为此，我们使用从4名健康个体(供体JBC、UPB、UHO和UBQ)的白细胞分离产物中提取的1x109 PBMC进行了4个试验程序(图6)。白细胞与相关的链霉亲和素一起孵育，并使用CliniMACS进行纯化(图6A-D)。分离后，立即用D-生物素孵育T细胞，用流式细胞术分析纯度。如图6A-D所示，所有阳性部分都含有60％的病毒特异性T细胞，即使起始材料含有低频率的病毒特异性T细胞(图6D)。对于所有4个试验程序，阳性部分的起始材料中存在的病毒特异性T细胞的回收率接近60％。CliniMACS分离后，将阳性部分培养在含有irradiated autologous feeders(1:5比例)和细胞因子的T细胞培养基中。部分富含链霉亲和素的细胞系没有被转导，而最大部分的细胞系在分离后2-3天用编码HA-1-TCR的GMP级逆转录病毒上清(由Eufets(Germany)生产)转导。在8-12天的额外培养期后，用HA-1和病毒四聚体分析转导的T细胞的转导效率和纯度。用病毒四聚体测定，未转导的所有4种富含链霉亲和素的细胞系纯度均为97％(图6E-H)。4种HA-1-TCR转导的富含链霉亲和素的细胞系的转导效率在22.5％和54.2％之间(图6E-H)。在用HA-1四聚体染色呈阳性的HA-1-TCR转导的病毒特异性T细胞中，T细胞主要表达HA-1-TCR，并由于细胞表面表达竞争而表达降低水平的病毒TCR。培养期结束时(分离后第14天)，收集所有的T细胞产物，并计数活细胞。JBC、UPB和UHO的试验程序产生了≥15x106的高纯度抗原特异性T细胞。起始材料中病毒特异性T细胞频率低的试验程序UBQ在培养期结束时产生2x106的抗原特异性T细胞。总之，这些结果表明，使用GMP级分离方法，病毒特异性T细胞可以从解冻的PBMC材料中以高回收率富集，并被有效转导。
在肽滴定分析中针对3种HA-1-TCR转导的病毒特异性T细胞(JBC、UHO、UBQ)测试了HA-1特异性功能，并测量了IFN-γ的产生。所有3种转导的病毒特异性T细胞系均显示出与HA-1特异性对照T细胞克隆相当的HA-1特异性剂量依赖性IFN-γ产生。此外，未观察到非tdT细胞产生HA-1特异性IFN-γ。为了研究HA-1-TCR转导的病毒特异性T细胞是否能够识别呈递内源性加工的HA1H抗原的恶性原发性白血病细胞，HA-1-TCR转导的病毒特异性T细胞针对HLA-A2pos原发性ALL细胞(HA1H pos或HA1H neg)进行了测试。如图7B所示，所有HA-1-TCR转导的病毒特异性T细胞系(但除了非转导的病毒特异性T细胞)在刺激HA-1pos原代ALL细胞后能够产生IFN-γ，而在刺激HA-1neg原代ALL细胞后没有产生IFN-γ。HA-1-TCR转导的病毒特异性T细胞系和非转导的病毒特异性T细胞在用病毒肽脉冲的T2细胞刺激后产生IFN-γ。此外，测试了所有4个HA-1-TCR转导的病毒特异性T细胞对病毒或HA-1肽脉冲的T2细胞或对HLA-A2pos原代ALL和AML细胞(HA1H pos或HA1H neg)的HA-1特异性细胞毒性反应(图7C)。结果表明，HA-1-TCR转导的病毒特异性T细胞能有效地裂解HLA-A2pos HA1H 1pos原发性ALL和AML样品。此外，它们对病毒肽脉冲的T2细胞表现出与非转导病毒特异性T细胞相当的细胞毒性反应。这些结果表明，使用GMP级生产方法重复生产具有强抗白血病反应性的HA-1-TCR修饰的T细胞是可行的。
最近，已经证明在异体干细胞移植后用来自患者的CD19CAR修饰的T细胞治疗的患者不会诱发GvHD。因此，我们测试了多克隆CD8+T细胞是否可以被转导并在细胞表面有效表达HA1-TCR。为此，我们通过MACS从健康个体中分离CD8+T细胞，并在用PHA特异性刺激后2天，在添加有GMP级逆转录病毒上清液的IL-2培养基中转导该T细胞，所述上清液编码HA1-TCR(密码子优化的和半胱氨酸修饰的)。多克隆CD8+T细胞的转导产生50％的HA1-TCR阳性的T细胞，并且修饰的T细胞非常有效地识别HA1H阳性的靶细胞，正如在用表达HA1H的各种不同的HLA-A*0201+靶细胞(EBV-MRJ、U266、AML3)刺激后高IFN-γ产量所证明的，而不表达免疫原性HA1H的HLA-A2*0201+靶细胞未被识别(EBV-IZA、EBV-JY、AML2)(图8)。
此外，这些HA-1TCR工程化的CD8+T细胞在多发性骨髓瘤异种移植模型中介导了有效的抗白血病反应(图9)，表明这些HA-1TCR工程化的T细胞在体外和体内具有高度的抗肿瘤反应性。因此，这些数据表明，患有复发或难治性血液恶性肿瘤的患者可以用这些有效的HA1-TCR修饰的T细胞进行有效治疗。
图10和11的分析设置:
两个健康的HLA-A*02:01+供体的CD8+T细胞(它是HA-1R变体的纯合子)用两种不同的HA1-H特异性TCR(WO2018058002A1的TCR LUMC、TCR FHCRC)进行慢病毒转导。FHCRC和LUMC的TRBV-CDR3-TRBJ和TRAV-CDR3-TRBJ和鼠α和βC区克隆到pES.12-6载体中(见下文的SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:90)。
随后对转导的细胞进行鼠Cβ+和CD8+细胞分选并扩增(快速扩增方案)。
为了分析功能性亲合力，在T2细胞中负载分级浓度的HA-1H肽(VLHDDLLEA(SEQ IDNO:10),10-12M-10-5M)，在37℃孵育1-2小时，用PBS洗涤并重新悬浮在培养基中。转导的T细胞与负载肽的T2细胞以2∶1的效应物/靶比(20.000个效应物/96孔)共培养。共培养20小时后，用ELISA测定上清液中的IFN-g。
为了分析HA-1R肽的非特异性识别，将上述相同的效应细胞制剂与分级浓度的HA-1R肽(VLRDDLLEA(SEQ ID NO:79)，10-8M-10-5M)共培养。如上所述进行肽加载、共培养和读数。
感兴趣的核酸和氨基酸序列:
SEQ ID NO:1(HA-1H TCR M7的Vα结构域的CDR3的氨基酸序列):CAGNTGGFKTIF
SEQ ID NO:2(HA-1H TCR M2的Vα结构域的CDR3的氨基酸序列):CAARNSGAGSYQLTF
SEQ ID NO:3(HA-1H TCR FK47.83的Vα结构域的CDR3的氨基酸序列):CAASNLVF
SEQ ID NO:4(HA-1H TCR M7的Vβ结构域的CDR3的氨基酸序列):CASSLLGNQPQHF
SEQ ID NO:5(HA-1H TCR M2的Vβ结构域的CDR3的氨基酸序列):CASLTVQNTEAFF
SEQ ID NO:6(HA-1H TCR FK47.83的Vβ结构域的CDR3的氨基酸序列):CASSLVVVDEQFF
SEQ ID NO:7(HA-1H TCR M7、HA-1H TCR M2或HA-1H TCR FK47.83的Vβ结构域的CDR1的氨基酸序列):SEHNRL
SEQ ID NO:8(HA-1H TCR M2或HA-1H TCR FK47.83的Vα结构域的CDR1的氨基酸序列):DSASNY
SEQ ID NO:9(HA-1H TCR M2或HA-1H TCR FK47.83的Vα结构域的CDR1的氨基酸序列):GACAGTGCCTCAAACTAC
SEQ ID NO:10(HA-1H抗原的氨基酸序列):VLHDDLLEA
SEQ ID NO:11(HA-1H TCR M7的Vα结构域的CDR3的核酸序列):TGTGCAGGCAATACTGGAGGCTTCAAAACTATCTTT
SEQ ID NO:12(HA-1H TCR M7的Vα结构域的CDR3的密码子优化的核酸序列):TGTGCCGGCAATACCGGCGGCTTCAAGACCATCTTC
SEQ ID NO:13(HA-1H TCR M7的Vβ结构域的CDR3的核酸序列):TGTGCCAGCAGCTTATTGGGTAATCAGCCCCAGCATTTT
SEQ ID NO:14(HA-1H TCR M7的Vβ结构域的CDR3的密码子优化的核酸序列):TGCGCCAGCTCCCTGCTGGGCAACCAGCCCCAGCACTTC
SEQ ID NO:15(HA-1H TCR M7、HA-1H TCR M2或HA-1H TCR FK47.83的Vβ结构域的CDR1的核酸序列):TCTGAACACAACCGCCTT
SEQ ID NO:16(HA-1H TCR M7、HA-1H TCR M2或HA-1H TCR FK47.83的Vβ结构域的CDR1的密码子优化的核酸序列):AGCGAGCACAACCGGCTG
SEQ ID NO:17(HA-1H TCR M7的Vα(VJ)结构域的氨基酸序列):
MLLITSMLVLWMQLSQVNGQQVMQIPQYQHVQEGEDFTTYCNSSTTLSNIQWYKQRPGGHPVFLIQLVKSGEVKKQKRLTFQFGEAKKNSSLHITATQTTDVGTYFCAGNTGGFKTIFGAGTRLFVKA
SEQ ID NO:18(HA-1H TCR M7的Vβ(VDJ)结构域的氨基酸序列):
MGTSLLCWMALCLLGADHADTGVSQDPRHKITKRGQNVTFRCDPISEHNRLYWYRQTLGQGPEFLTYFQNEAQLEKSRLLSDRFSAERPKGSFSTLEIQRTEQGDSAMYLCASSLLGNQPQHFGDGTRLSIL
SEQ ID NO:19(HA-1H TCR M7的Vα(VJ)结构域的核酸序列):
ATGCTACTCATCACATCAATGTTGGTCTTATGGATGCAATTGTCACAGGTGAATGGACAACAGGTAATGCAAATTCCTCAGTACCAGCATGTACAAGAAGGAGAAGACTTCACCACGTACTGCAATTCCTCAACTACTTTAAGCAATATACAGTGGTATAAGCAAAGGCCTGGTGGACATCCCGTTTTTTTGATACAGTTAGTGAAGAGTGGAGAAGTGAAGAAGCAGAAAAGACTGACATTTCAGTTTGGAGAAGCAAAAAAGAACAGCTCCCTGCACATCACAGCCACCCAGACTACAGATGTAGGAACCTACTTCTGTGCAGGCAATACTGGAGGCTTCAAAACTATCTTTGGAGCAGGAACAAGACTATTTGTTAAAGCA
SEQ ID NO:20(HA-1H TCR M7的Vα(VJ)结构域的密码子优化的核酸序列):
ATGCTGCTGATCACCTCCATGCTGGTGCTGTGGATGCAGCTGTCCCAGGTGAACGGCCAGCAGGTGATGCAGATCCCCCAGTACCAGCACGTGCAGGAGGGCGAGGATTTCACCACCTACTGTAACAGCAGCACCACCCTGAGCAACATCCAGTGGTACAAGCAGAGACCTGGCGGCCACCCCGTGTTCCTGATCCAGCTGGTGAAGAGCGGCGAGGTGAAGAAGCAGAAGCGGCTGACCTTCCAGTTCGGCGAGGCCAAGAAGAATAGCAGCCTGCACATCACCGCCACCCAGACCACCGATGTGGGCACCTACTTCTGTGCCGGCAATACCGGCGGCTTCAAGACCATCTTCGGAGCCGGCACCAGACTGTTCGTGAAGGCC
SEQ ID NO:21(HA-1H TCR M7的Vβ(VDJ)结构域的核酸序列):
ATGGGCACCAGCCTCCTCTGCTGGATGGCCCTGTGTCTCCTGGGGGCAGATCACGCAGATACTGGAGTCTCCCAGGACCCCAGACACAAGATCACAAAGAGGGGACAGAATGTAACTTTCAGGTGTGATCCAATTTCTGAACACAACCGCCTTTATTGGTACCGACAGACCCTGGGGCAGGGCCCAGAGTTTCTGACTTACTTCCAGAATGAAGCTCAACTAGAAAAATCAAGGCTGCTCAGTGATCGGTTCTCTGCAGAGAGGCCTAAGGGATCTTTCTCCACCTTGGAGATCCAGCGCACAGAGCAGGGGGACTCGGCCATGTATCTCTGTGCCAGCAGCTTATTGGGTAATCAGCCCCAGCATTTTGGTGATGGGACTCGACTCTCCATCCTA
SEQ ID NO:22(HA-1H TCR M7的Vβ(VDJ)结构域的密码子优化的核酸序列):
ATGGGCACCAGCCTGCTGTGCTGGATGGCCCTGTGCCTGCTGGGCGCTGACCATGCTGATACCGGCGTGAGCCAGGACCCCCGGCACAAGATCACCAAGCGGGGCCAGAACGTGACCTTCAGATGCGACCCCATCAGCGAGCACAACCGGCTGTACTGGTACAGACAGACCCTGGGCCAGGGCCCCGAGTTCCTGACCTACTTCCAGAACGAGGCCCAGCTGGAAAAGAGCCGGCTGCTGTCCGACCGGTTCAGCGCCGAGCGGCCCAAGGGCAGCTTCAGCACCCTGGAAATCCAGCGGACCGAGCAGGGCGACAGCGCCATGTACCTGTGCGCCAGCTCCCTGCTGGGCAACCAGCCCCAGCACTTCGGCGACGGCACCAGACTGAGCATCCTG
SEQ ID NO:23(HA-1H TCR M2的Vα结构域的CDR3的核酸序列):TGTGCAGCAAGGAACTCTGGGGCTGGGAGTTACCAACTCACTTTC
SEQ ID NO:24(HA-1H TCR M2的Vα结构域的CDR3的密码子优化的核酸序列):TGCGCCGCCCGGAACAGCGGCGCCGGCAGCTACCAGCTGACCTTC
SEQ ID NO:25(HA-1H TCR M2的Vβ结构域的CDR3的核酸序列):TGTGCCAGCTTGACGGTACAGAACACTGAAGCTTTCTTT
SEQ ID NO:26(HA-1H TCR M2的Vβ结构域的CDR3的密码子优化的核酸序列):TGCGCCAGCCTGACCGTGCAGAACACCGAGGCCTTCTTC
SEQ ID NO:27(HA-1H TCR M2或HA-1H TCR FK47.83的Vα结构域的CDR1的密码子优化的核酸序列):GACAGCGCCAGCAACTAC
SEQ ID NO:28(HA-1H TCR M2或HA-1H TCR FK47.83的Vα结构域的CDR2的氨基酸序列):IRSNVGE
SEQ ID NO:29(HA-1H TCR M2的Vα(VJ)结构域的氨基酸序列):
MTSIRAVFIFLWLQLDLVNGENVEQHPSTLSVQEGDSAVIKCTYSDSASNYFPWYKQELGKRPQLIIDIRSNVGEKKDQRIAVTLNKTAKHFSLHITETQPEDSAVYFCAARNSGAGSYQLTFGKGTKLSVIP
SEQ ID NO:30(HA-1H TCR M2的Vβ(VDJ)结构域的氨基酸序列):
MGTSLLCWMALCLLGADHADTGVSQNPRHKITKRGQNVTFRCDPISEHNRLYWYRQTLGQGPEFLTYFQNEAQLEKSRLLSDRFSAERPKGSFSTLEIQRTEQGDSAMYLCASLTVQNTEAFFGQGTRLTVV
SEQ ID NO:31(HA-1H TCR M2的Vα(VJ)结构域的核酸序列):
ATGACATCCATTCGAGCTGTATTTATATTCCTGTGGCTGCAGCTGGACTTGGTGAATGGAGAGAATGTGGAGCAGCATCCTTCAACCCTGAGTGTCCAGGAGGGAGACAGCGCTGTTATCAAGTGTACTTATTCAGACAGTGCCTCAAACTACTTCCCTTGGTATAAGCAAGAACTTGGAAAAAGACCTCAGCTTATTATAGACATTCGTTCAAATGTGGGCGAAAAGAAAGACCAACGAATTGCTGTTACATTGAACAAGACAGCCAAACATTTCTCCCTGCACATCACAGAGACCCAACCTGAAGACTCGGCTGTCTACTTCTGTGCAGCAAGGAACTCTGGGGCTGGGAGTTACCAACTCACTTTCGGGAAGGGGACCAAACTCTCGGTCATACCA
SEQ ID NO:32(HA-1H TCR M2的Vα(VJ)结构域的密码子优化的核酸序列):
ATGACCAGCATCCGGGCCGTGTTCATCTTCCTGTGGCTGCAGCTGGACCTGGTGAACGGCGAGAACGTGGAGCAGCACCCCAGCACCCTGAGCGTGCAGGAGGGCGACAGCGCCGTGATCAAGTGCACCTACAGCGACAGCGCCAGCAACTACTTCCCCTGGTACAAGCAGGAGCTGGGCAAGCGGCCCCAGCTGATCATCGACATCCGGAGCAACGTGGGCGAGAAGAAGGACCAGCGGATCGCCGTGACCCTGAACAAGACCGCCAAGCACTTCAGCCTGCACATCACCGAGACCCAGCCCGAGGACAGCGCCGTGTACTTCTGCGCCGCCCGGAACAGCGGCGCCGGCAGCTACCAGCTGACCTTCGGCAAGGGCACCAAGCTGAGCGTGATCCCC
SEQ ID NO:33(HA-1H TCR M2的Vβ(VDJ)结构域的核酸序列):
ATGGGCACCAGCCTCCTCTGCTGGATGGCCCTGTGTCTCCTGGGGGCAGATCACGCAGATACTGGAGTCTCCCAGAACCCCAGACACAAGATCACAAAGAGGGGACAGAATGTAACTTTCAGGTGTGATCCAATTTCTGAACACAACCGCCTTTATTGGTACCGACAGACCCTGGGGCAGGGCCCAGAGTTTCTGACTTACTTCCAGAATGAAGCTCAACTAGAAAAATCAAGGCTGCTCAGTGATCGGTTCTCTGCAGAGAGGCCTAAGGGATCTTTCTCCACCTTGGAGATCCAGCGCACAGAGCAGGGGGACTCGGCCATGTATCTCTGTGCCAGCTTGACGGTACAGAACACTGAAGCTTTCTTTGGACAAGGCACCAGACTCACAGTTGTA
SEQ ID NO:34(HA-1H TCR M2的Vβ(VDJ)结构域的密码子优化的核酸序列):
ATGGGCACCAGCCTGCTGTGCTGGATGGCCCTGTGCCTGCTGGGCGCCGACCACGCCGACACCGGCGTGAGCCAGAACCCCCGGCACAAGATCACCAAGCGGGGCCAGAACGTGACCTTCCGGTGCGACCCCATCAGCGAGCACAACCGGCTGTACTGGTACCGGCAGACCCTGGGCCAGGGCCCCGAGTTCCTGACCTACTTCCAGAACGAGGCCCAGCTGGAGAAGAGCCGGCTGCTGAGCGACCGGTTCAGCGCCGAGCGGCCCAAGGGCAGCTTCAGCACCCTGGAGATCCAGCGGACCGAGCAGGGCGACAGCGCCATGTACCTGTGCGCCAGCCTGACCGTGCAGAACACCGAGGCCTTCTTCGGCCAGGGCACCCGGCTGACCGTGGTG
SEQ ID NO:35(HA-1H TCR FK47.83的Vα结构域的CDR3的核酸序列):TGTGCAGCAAGTAATCTGGTCTTT
SEQ ID NO:36(HA-1H TCR FK47.83的Vα结构域的CDR3的密码子优化的核酸序列):TGCGCCGCCAGCAACCTGGTGTTC
SEQ ID NO:37(HA-1H TCR FK47.83的Vβ结构域的CDR3的核酸序列):TGTGCCAGCAGCTTAGTCGTTGTGGATGAGCAGTTCTTC
SEQ ID NO:38(HA-1H TCR FK47.83的Vβ结构域的CDR3的密码子优化的核酸序列):TGCGCCAGCAGCCTGGTGGTGGTGGACGAGCAGTTCTTC
SEQ ID NO:39(HA-1H TCR M2或HA-1H TCR FK47.83的Vα结构域的CDR2的核酸序列):ATTCGTTCAAATGTGGGCGAA
SEQ ID NO:40(HA-1H TCR M2或HA-1H TCR FK47.83的Vα结构域的CDR2的密码子优化的核酸序列):ATCCGGAGCAACGTGGGCGAG
SEQ ID NO:41(HA-1H TCR FK47.83的Vα(VJ)结构域的氨基酸序列):MTSIRAVFIFLWLQLDLVNGENVEQHPSTLSVQEGDSAVIKCTYSDSASNYFPWYKQELGKRPQLIIDIRSNVGEKKDQRIAVTLNKTAKHFSLHITETQPEDSAVYFCAASNLVFGAGTILRVKS
SEQ ID NO:42(HA-1H TCR FK47.83的Vβ(VDJ)结构域的氨基酸序列):
MGTSLLCWMALCLLGADHADTGVSQNPRHKITKRGQNVTFRCDPISEHNRLYWYRQTLGQGPEFLTYFQNEAQLEKSRLLSDRFSAERPKGSFSTLEIQRTEQGDSAMYLCASSLVVVDEQFFGPGTRLTVL
SEQ ID NO:43(HA-1H TCR FK47.83的Vα(VJ)结构域的核酸序列):
ATGACATCCATTCGAGCTGTATTTATATTCCTGTGGCTGCAGCTGGACTTGGTGAATGGAGAGAATGTGGAGCAGCATCCTTCAACCCTGAGTGTCCAGGAGGGAGACAGCGCTGTTATCAAGTGTACTTATTCAGACAGTGCCTCAAACTACTTCCCTTGGTATAAGCAAGAACTTGGAAAAAGACCTCAGCTTATTATAGACATTCGTTCAAATGTGGGCGAAAAGAAAGACCAACGAATTGCTGTTACATTGAACAAGACAGCCAAACATTTCTCCCTGCACATCACAGAGACCCAACCTGAAGACTCGGCTGTCTACTTCTGTGCAGCAAGTAATCTGGTCTTTGGCGCAGGAACCATTCTGAGAGTCAAGTCC
SEQ ID NO:44(HA-1H TCR FK47.83的Vα(VJ)结构域的密码子优化的核酸序列):
ATGACCAGCATCCGGGCCGTGTTCATCTTCCTGTGGCTGCAGCTGGACCTGGTGAACGGCGAGAACGTGGAGCAGCACCCCAGCACCCTGAGCGTGCAGGAGGGCGACAGCGCCGTGATCAAGTGCACCTACAGCGACAGCGCCAGCAACTACTTCCCCTGGTACAAGCAGGAGCTGGGCAAGCGGCCCCAGCTGATCATCGACATCCGGAGCAACGTGGGCGAGAAGAAGGACCAGCGGATCGCCGTGACCCTGAACAAGACCGCCAAGCACTTCAGCCTGCACATCACCGAGACCCAGCCCGAGGACAGCGCCGTGTACTTCTGCGCCGCCAGCAACCTGGTGTTCGGCGCCGGCACCATCCTGCGGGTGAAGAGC
SEQ ID NO:45(HA-1H TCR FK47.83的Vβ(VDJ)结构域的核酸序列):
ATGGGCACCAGCCTCCTCTGCTGGATGGCCCTGTGTCTCCTGGGGGCAGATCACGCAGATACTGGAGTCTCCCAGAACCCCAGACACAAGATCACAAAGAGGGGACAGAATGTAACTTTCAGGTGTGATCCAATTTCTGAACACAACCGCCTTTATTGGTACCGACAGACCCTGGGGCAGGGCCCAGAGTTTCTGACTTACTTCCAGAATGAAGCTCAACTAGAAAAATCAAGGCTGCTCAGTGATCGGTTCTCTGCAGAGAGGCCTAAGGGATCTTTCTCCACCTTGGAGATCCAGCGCACAGAGCAGGGGGACTCGGCCATGTATCTCTGTGCCAGCAGCTTAGTCGTTGTGGATGAGCAGTTCTTCGGGCCAGGGACACGGCTCACCGTGCTA
SEQ ID NO:46(HA-1H TCR FK47.83的Vβ(VDJ)结构域的密码子优化的核酸序列):
ATGGGCACCAGCCTGCTGTGCTGGATGGCCCTGTGCCTGCTGGGCGCCGACCACGCCGACACCGGCGTGAGCCAGAACCCCCGGCACAAGATCACCAAGCGGGGCCAGAACGTGACCTTCCGGTGCGACCCCATCAGCGAGCACAACCGGCTGTACTGGTACCGGCAGACCCTGGGCCAGGGCCCCGAGTTCCTGACCTACTTCCAGAACGAGGCCCAGCTGGAGAAGAGCCGGCTGCTGAGCGACCGGTTCAGCGCCGAGCGGCCCAAGGGCAGCTTCAGCACCCTGGAGATCCAGCGGACCGAGCAGGGCGACAGCGCCATGTACCTGTGCGCCAGCAGCCTGGTGGTGGTGGACGAGCAGTTCTTCGGCCCCGGCACCCGGCTGACCGTGCTG
SEQ ID NO:47(HA-1H TCR M7的Vα(VJ)结构域和恒定区结构域的氨基酸序列):
MLLITSMLVLWMQLSQVNGQQVMQIPQYQHVQEGEDFTTYCNSSTTLSNIQWYKQRPGGHPVFLIQLVKSGEVKKQKRLTFQFGEAKKNSSLHITATQTTDVGTYFCAGNTGGFKTIFGAGTRLFVKANIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS*
SEQ ID NO:48(HA-1H TCR M7的Vα(VJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的氨基酸序列):
MKSLRVLLVILWLQLSWVWSQGQQVMQIPQYQHVQEGEDFTTYCNSSTTLSNIQWYKQRPGGHPVFLIQLVKSGEVKKQKRLTFQFGEAKKNSSLHITATQTTDVGTYFCAGNTGGFKTIFGAGTRLFVKADIQNPEPAVYQLKDPRSQDSTLCLFTDFDSQINVPKTMESGTFITDKCVLDMKAMDSKSNGAIAWSNQTSFTCQDIFKETNATYPSSDVPCDATLTEKSFETDMNLNFQNLSVMGLRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS*
SEQ ID NO:49(HA-1H TCR M7的Vα(VJ)结构域和恒定区结构域的核酸序列):
ATGCTACTCATCACATCAATGTTGGTCTTATGGATGCAATTGTCACAGGTGAATGGACAACAGGTAATGCAAATTCCTCAGTACCAGCATGTACAAGAAGGAGAAGACTTCACCACGTACTGCAATTCCTCAACTACTTTAAGCAATATACAGTGGTATAAGCAAAGGCCTGGTGGACATCCCGTTTTTTTGATACAGTTAGTGAAGAGTGGAGAAGTGAAGAAGCAGAAAAGACTGACATTTCAGTTTGGAGAAGCAAAAAAGAACAGCTCCCTGCACATCACAGCCACCCAGACTACAGATGTAGGAACCTACTTCTGTGCAGGCAATACTGGAGGCTTCAAAACTATCTTTGGAGCAGGAACAAGACTATTTGTTAAAGCAAATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCAGCTGA
SEQ ID NO:50(HA-1H TCR M7的Vα(VJ)结构域和恒定区结构域的密码子优化的核酸序列):
ATGCTGCTGATCACCTCCATGCTGGTGCTGTGGATGCAGCTGTCCCAGGTGAACGGCCAGCAGGTGATGCAGATCCCCCAGTACCAGCACGTGCAGGAGGGCGAGGATTTCACCACCTACTGTAACAGCAGCACCACCCTGAGCAACATCCAGTGGTACAAGCAGAGACCTGGCGGCCACCCCGTGTTCCTGATCCAGCTGGTGAAGAGCGGCGAGGTGAAGAAGCAGAAGCGGCTGACCTTCCAGTTCGGCGAGGCCAAGAAGAATAGCAGCCTGCACATCACCGCCACCCAGACCACCGATGTGGGCACCTACTTCTGTGCCGGCAATACCGGCGGCTTCAAGACCATCTTCGGAGCCGGCACCAGACTGTTCGTGAAGGCCAACATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGGGACAGCAAGAGCAGCGACAAGAGCGTGTGTCTGTTCACCGACTTCGACAGCCAGACCAACGTGTCCCAGAGCAAGGACAGCGACGTGTACATCACCGACAAGTGCGTGCTGGACATGCGGAGCATGGACTTCAAGAGCAACAGCGCCGTGGCCTGGAGCAACAAGAGCGACTTCGCCTGTGCCAACGCCTTCAACAACAGCATCATCCCCGAGGACACCTTTTTCCCCAGCCCTGAGAGCAGCTGTGACGTGAAACTGGTGGAGAAGAGCTTCGAGACCGACACCAACCTGAACTTCCAGAACCTGAGCGTGATCGGCTTCAGGATCCTGCTGCTGAAGGTGGCCGGCTTCAACCTGCTGATGACCCTGAGACTGTGGTCCAGCTGA
SEQ ID NO:51(HA-1H TCR M7的Vα(VJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的密码子优化的核酸序列):
ATGAAGAGCCTGCGCGTGCTGCTGGTCATCCTGTGGCTGCAATTGTCGTGGGTCTGGAGCCAAATGCTGCTGATCACCTCCATGCTGGTGCTGTGGATGCAGCTGTCCCAGGTGAACGGCCAGCAGGTGATGCAGATCCCCCAGTACCAGCACGTGCAGGAGGGCGAGGATTTCACCACCTACTGTAACAGCAGCACCACCCTGAGCAACATCCAGTGGTACAAGCAGAGACCTGGCGGCCACCCCGTGTTCCTGATCCAGCTGGTGAAGAGCGGCGAGGTGAAGAAGCAGAAGCGGCTGACCTTCCAGTTCGGCGAGGCCAAGAAGAATAGCAGCCTGCACATCACCGCCACCCAGACCACCGATGTGGGCACCTACTTCTGTGCCGGCAATACCGGCGGCTTCAAGACCATCTTCGGAGCCGGCACCAGACTGTTCGTGAAGGCCGACATTCAGAACCCGGAACCGGCTGTATACCAGCTGAAGGACCCCCGATCTCAGGATAGTACTCTGTGCCTGTTCACCGACTTTGATAGTCAGATCAATGTGCCTAAAACCATGGAATCCGGAACTTTTATTACCGACAAGTGCGTGCTGGATATGAAAGCCATGGACAGTAAGTCAAACGGCGCCATCGCTTGGAGCAATCAGACATCCTTCACTTGCCAGGATATCTTCAAGGAGACCAACGCAACATACCCATCCTCTGACGTGCCCTGTGATGCCACCCTGACAGAGAAGTCTTTCGAAACAGACATGAACCTGAATTTTCAGAATCTGAGCGTGATGGGCCTGAGAATCCTGCTGCTGAAGGTCGCTGGGTTTAATCTGCTGATGACACTGCGGCTGTGGTCCTCATGA
SEQ ID NO:52(HA-1H TCR M7的Vβ(VDJ)结构域和恒定区结构域的氨基酸序列):
MGTSLLCWMALCLLGADHADTGVSQDPRHKITKRGQNVTFRCDPISEHNRLYWYRQTLGQGPEFLTYFQNEAQLEKSRLLSDRFSAERPKGSFSTLEIQRTEQGDSAMYLCASSLLGNQPQHFGDGTRLSILEDLNKVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDF*
SEQ ID NO:53(HA-1H TCR M7的Vβ(VDJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的氨基酸序列):
MGTSLLCWMALCLLGADHADTGVSQDPRHKITKRGQNVTFRCDPISEHNRLYWYRQTLGQGPEFLTYFQNEAQLEKSRLLSDRFSAERPKGSFSTLEIQRTEQGDSAMYLCASSLLGNQPQHFGDGTRLSILEDLRNVTPPKVSLFEPSKAEIANKQKATLVCLARGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVCTDPQAYKESNYSYCLSSRLRVSATFWHNPRNHFRCQVQFHGLSEEDKWPEGSPKPVTQNISAEAWGRADCGITSASYHQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSGLVLMAMVKKKNS*
SEQ ID NO:54(HA-1H TCR M7的Vβ(VDJ)结构域和恒定区结构域的核酸序列):
ATGGGCACCAGCCTCCTCTGCTGGATGGCCCTGTGTCTCCTGGGGGCAGATCACGCAGATACTGGAGTCTCCCAGGACCCCAGACACAAGATCACAAAGAGGGGACAGAATGTAACTTTCAGGTGTGATCCAATTTCTGAACACAACCGCCTTTATTGGTACCGACAGACCCTGGGGCAGGGCCCAGAGTTTCTGACTTACTTCCAGAATGAAGCTCAACTAGAAAAATCAAGGCTGCTCAGTGATCGGTTCTCTGCAGAGAGGCCTAAGGGATCTTTCTCCACCTTGGAGATCCAGCGCACAGAGCAGGGGGACTCGGCCATGTATCTCTGTGCCAGCAGCTTATTGGGTAATCAGCCCCAGCATTTTGGTGATGGGACTCGACTCTCCATCCTAGAGGACCTGAACAAGGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTTCCCCGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACAGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCCGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCCTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTGTATGCTGTGCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTTCTGA
SEQ ID NO:55(HA-1H TCR M7的Vβ(VDJ)结构域和恒定区结构域的密码子优化的核酸序列):
ATGGGCACCAGCCTGCTGTGCTGGATGGCCCTGTGCCTGCTGGGCGCTGACCATGCTGATACCGGCGTGAGCCAGGACCCCCGGCACAAGATCACCAAGCGGGGCCAGAACGTGACCTTCAGATGCGACCCCATCAGCGAGCACAACCGGCTGTACTGGTACAGACAGACCCTGGGCCAGGGCCCCGAGTTCCTGACCTACTTCCAGAACGAGGCCCAGCTGGAAAAGAGCCGGCTGCTGTCCGACCGGTTCAGCGCCGAGCGGCCCAAGGGCAGCTTCAGCACCCTGGAAATCCAGCGGACCGAGCAGGGCGACAGCGCCATGTACCTGTGCGCCAGCTCCCTGCTGGGCAACCAGCCCCAGCACTTCGGCGACGGCACCAGACTGAGCATCCTGGAAGATCTGAACAAGGTGTTCCCCCCCGAGGTGGCCGTGTTCGAGCCCAGCGAGGCCGAGATCAGCCACACCCAGAAAGCCACCCTGGTGTGCCTGGCCACCGGCTTTTTCCCCGACCACGTGGAGCTGTCTTGGTGGGTGAACGGCAAAGAGGTGCACAGCGGCGTCAGCACCGACCCCCAGCCCCTGAAAGAGCAGCCCGCCCTGAACGACAGCCGGTACTGCCTGTCTAGCCGGCTGCGGGTGTCCGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGGAACCACTTCCGGTGCCAGGTGCAGTTCTACGGCCTGAGCGAGAACGACGAGTGGACCCAGGACAGAGCCAAGCCCGTGACCCAGATCGTGTCCGCCGAGGCCTGGGGCAGAGCCGACTGCGGCTTCACCAGCGTGTCCTACCAGCAGGGCGTGCTGTCTGCCACCATCCTGTACGAGATCCTGCTGGGGAAGGCCACCCTGTACGCCGTGCTGGTGTCCGCCCTGGTGCTGATGGCCATGGTGAAGCGGAAGGACTTCTGA
SEQ ID NO:56(HA-1H TCR M7结构域的Vβ(VDJ)和恒定区结构域(鼠)的密码子优化的核酸序列):
ATGGGCACCAGCCTGCTGTGCTGGATGGCCCTGTGCCTGCTGGGCGCTGACCATGCTGATACCGGCGTGAGCCAGGACCCCCGGCACAAGATCACCAAGCGGGGCCAGAACGTGACCTTCAGATGCGACCCCATCAGCGAGCACAACCGGCTGTACTGGTACAGACAGACCCTGGGCCAGGGCCCCGAGTTCCTGACCTACTTCCAGAACGAGGCCCAGCTGGAAAAGAGCCGGCTGCTGTCCGACCGGTTCAGCGCCGAGCGGCCCAAGGGCAGCTTCAGCACCCTGGAAATCCAGCGGACCGAGCAGGGCGACAGCGCCATGTACCTGTGCGCCAGCTCCCTGCTGGGCAACCAGCCCCAGCACTTCGGCGACGGCACCAGACTGAGCATCCTGGAAGATCTACGTAACGTGACACCACCCAAAGTCTCACTGTTTGAGCCTAGCAAGGCAGAAATTGCCAACAAGCAGAAGGCCACCCTGGTGTGCCTGGCAAGAGGGTTCTTTCCAGATCACGTGGAGCTGTCCTGGTGGGTCAACGGCAAAGAAGTGCATTCTGGGGTCTGCACCGACCCCCAGGCTTACAAGGAGAGTAATTACTCATATTGTCTGTCAAGCCGGCTGAGAGTGTCCGCCACATTCTGGCACAACCCTAGGAATCATTTCCGCTGCCAGGTCCAGTTTCACGGCCTGAGTGAGGAAGATAAATGGCCAGAGGGGTCACCTAAGCCAGTGACACAGAACATCAGCGCAGAAGCCTGGGGACGAGCAGACTGTGGCATTACTAGCGCCTCCTATCATCAGGGCGTGCTGAGCGCCACTATCCTGTACGAGATTCTGCTGGGAAAGGCCACCCTGTATGCTGTGCTGGTCTCCGGCCTGGTGCTGATGGCCATGGTCAAGAAAAAGAACTCTTGA
SEQ ID NO:57(HA-1H TCR M2的Vα(VJ)结构域和恒定区结构域的氨基酸序列):
MTSIRAVFIFLWLQLDLVNGENVEQHPSTLSVQEGDSAVIKCTYSDSASNYFPWYKQELGKRPQLIIDIRSNVGEKKDQRIAVTLNKTAKHFSLHITETQPEDSAVYFCAARNSGAGSYQLTFGKGTKLSVIPNIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS*
SEQ ID NO:58(HA-1H TCR M2的Vα(VJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的氨基酸序列):
MKSLRVLLVILWLQLSWVWSQGENVEQHPSTLSVQEGDSAVIKCTYSDSASNYFPWYKQELGKRPQLIIDIRSNVGEKKDQRIAVTLNKTAKHFSLHITETQPEDSAVYFCAARNSGAGSYQLTFGKGTKLSVIPDIQNPEPAVYQLKDPRSQDSTLCLFTDFDSQINVPKTMESGTFITDKCVLDMKAMDSKSNGAIAWSNQTSFTCQDIFKETNATYPSSDVPCDATLTEKSFETDMNLNFQNLSVMGLRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS*
SEQ ID NO:59(HA-1H TCR M2的Vα(VJ)结构域和恒定区结构域的核酸序列):
ATGACATCCATTCGAGCTGTATTTATATTCCTGTGGCTGCAGCTGGACTTGGTGAATGGAGAGAATGTGGAGCAGCATCCTTCAACCCTGAGTGTCCAGGAGGGAGACAGCGCTGTTATCAAGTGTACTTATTCAGACAGTGCCTCAAACTACTTCCCTTGGTATAAGCAAGAACTTGGAAAAAGACCTCAGCTTATTATAGACATTCGTTCAAATGTGGGCGAAAAGAAAGACCAACGAATTGCTGTTACATTGAACAAGACAGCCAAACATTTCTCCCTGCACATCACAGAGACCCAACCTGAAGACTCGGCTGTCTACTTCTGTGCAGCAAGGAACTCTGGGGCTGGGAGTTACCAACTCACTTTCGGGAAGGGGACCAAACTCTCGGTCATACCAAATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGTTGTGGTCCAGCTGA
SEQ ID NO:60(HA-1H TCR M2的Vα(VJ)结构域和恒定区结构域的密码子优化的核酸序列):
ATGACCAGCATCCGGGCCGTGTTCATCTTCCTGTGGCTGCAGCTGGACCTGGTGAACGGCGAGAACGTGGAGCAGCACCCCAGCACCCTGAGCGTGCAGGAGGGCGACAGCGCCGTGATCAAGTGCACCTACAGCGACAGCGCCAGCAACTACTTCCCCTGGTACAAGCAGGAGCTGGGCAAGCGGCCCCAGCTGATCATCGACATCCGGAGCAACGTGGGCGAGAAGAAGGACCAGCGGATCGCCGTGACCCTGAACAAGACCGCCAAGCACTTCAGCCTGCACATCACCGAGACCCAGCCCGAGGACAGCGCCGTGTACTTCTGCGCCGCCCGGAACAGCGGCGCCGGCAGCTACCAGCTGACCTTCGGCAAGGGCACCAAGCTGAGCGTGATCCCCAACATCCAGAACCCCGACCCCGCCGTGTACCAGCTGCGGGACAGCAAGAGCAGCGACAAGAGCGTGTGCCTGTTCACCGACTTCGACAGCCAGACCAACGTGAGCCAGAGCAAGGACAGCGACGTGTACATCACCGACAAGTGCGTGCTGGACATGCGGAGCATGGACTTCAAGAGCAACAGCGCCGTGGCCTGGAGCAACAAGAGCGACTTCGCCTGCGCCAACGCCTTCAACAACAGCATCATCCCCGAGGACACCTTCTTCCCCAGCCCCGAGAGCAGCTGCGACGTGAAGCTGGTGGAGAAGAGCTTCGAGACCGACACCAACCTGAACTTCCAGAACCTGAGCGTGATCGGCTTCCGGATCCTGCTGCTGAAGGTGGCCGGCTTCAACCTGCTGATGACCCTGCGGCTGTGGAGCAGCTGA
SEQ ID NO:61(HA-1H TCR M2的Vα(VJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的密码子优化的核酸序列):
ATGAAGAGCCTGCGCGTGCTGCTGGTCATCCTGTGGCTGCAATTGTCGTGGGTCTGGAGCCAAGGCGAGAACGTGGAGCAGCACCCCAGCACCCTGAGCGTGCAGGAGGGCGACAGCGCCGTGATCAAGTGCACCTACAGCGACAGCGCCAGCAACTACTTCCCCTGGTACAAGCAGGAGCTGGGCAAGCGGCCCCAGCTGATCATCGACATCCGGAGCAACGTGGGCGAGAAGAAGGACCAGCGGATCGCCGTGACCCTGAACAAGACCGCCAAGCACTTCAGCCTGCACATCACCGAGACCCAGCCCGAGGACAGCGCCGTGTACTTCTGCGCCGCCCGGAACAGCGGCGCCGGCAGCTACCAGCTGACCTTCGGCAAGGGCACCAAGCTGAGCGTGATCCCCGACATTCAGAACCCGGAACCGGCTGTATACCAGCTGAAGGACCCCCGATCTCAGGATAGTACTCTGTGCCTGTTCACCGACTTTGATAGTCAGATCAATGTGCCTAAAACCATGGAATCCGGAACTTTTATTACCGACAAGTGCGTGCTGGATATGAAAGCCATGGACAGTAAGTCAAACGGCGCCATCGCTTGGAGCAATCAGACATCCTTCACTTGCCAGGATATCTTCAAGGAGACCAACGCAACATACCCATCCTCTGACGTGCCCTGTGATGCCACCCTGACAGAGAAGTCTTTCGAAACAGACATGAACCTGAATTTTCAGAATCTGAGCGTGATGGGCCTGAGAATCCTGCTGCTGAAGGTCGCTGGGTTTAATCTGCTGATGACACTGCGGCTGTGGTCCTCATGA
SEQ ID NO:62(HA-1H TCR M2的Vβ(VDJ)结构域和恒定区结构域的氨基酸序列):
MGTSLLCWMALCLLGADHADTGVSQNPRHKITKRGQNVTFRCDPISEHNRLYWYRQTLGQGPEFLTYFQNEAQLEKSRLLSDRFSAERPKGSFSTLEIQRTEQGDSAMYLCASLTVQNTEAFFGQGTRLTVVEDLNKVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDF*
SEQ ID NO:63(HA-1H TCR M2的Vβ(VDJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的氨基酸序列):
MGTSLLCWMALCLLGADHADTGVSQNPRHKITKRGQNVTFRCDPISEHNRLYWYRQTLGQGPEFLTYFQNEAQLEKSRLLSDRFSAERPKGSFSTLEIQRTEQGDSAMYLCASLTVQNTEAFFGQGTRLTVVEDLRNVTPPKVSLFEPSKAEIANKQKATLVCLARGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVCTDPQAYKESNYSYCLSSRLRVSATFWHNPRNHFRCQVQFHGLSEEDKWPEGSPKPVTQNISAEAWGRADCGITSASYHQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSGLVLMAMVKKKNS*
SEQ ID NO:64(HA-1H TCR M2的Vβ(VDJ)结构域和恒定区结构域的核酸序列):
ATGGGCACCAGCCTCCTCTGCTGGATGGCCCTGTGTCTCCTGGGGGCAGATCACGCAGATACTGGAGTCTCCCAGAACCCCAGACACAAGATCACAAAGAGGGGACAGAATGTAACTTTCAGGTGTGATCCAATTTCTGAACACAACCGCCTTTATTGGTACCGACAGACCCTGGGGCAGGGCCCAGAGTTTCTGACTTACTTCCAGAATGAAGCTCAACTAGAAAAATCAAGGCTGCTCAGTGATCGGTTCTCTGCAGAGAGGCCTAAGGGATCTTTCTCCACCTTGGAGATCCAGCGCACAGAGCAGGGGGACTCGGCCATGTATCTCTGTGCCAGCTTGACGGTACAGAACACTGAAGCTTTCTTTGGACAAGGCACCAGACTCACAGTTGTAGAGGACCTGAACAAGGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTTCCCTGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACGGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCCGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCCTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTGTATGCTGTGCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTTCTGA
SEQ ID NO:65(HA-1H TCR M2的Vβ(VDJ)结构域和恒定区结构域的密码子优化的核酸序列):
ATGGGCACCAGCCTGCTGTGCTGGATGGCCCTGTGCCTGCTGGGCGCCGACCACGCCGACACCGGCGTGAGCCAGAACCCCCGGCACAAGATCACCAAGCGGGGCCAGAACGTGACCTTCCGGTGCGACCCCATCAGCGAGCACAACCGGCTGTACTGGTACCGGCAGACCCTGGGCCAGGGCCCCGAGTTCCTGACCTACTTCCAGAACGAGGCCCAGCTGGAGAAGAGCCGGCTGCTGAGCGACCGGTTCAGCGCCGAGCGGCCCAAGGGCAGCTTCAGCACCCTGGAGATCCAGCGGACCGAGCAGGGCGACAGCGCCATGTACCTGTGCGCCAGCCTGACCGTGCAGAACACCGAGGCCTTCTTCGGCCAGGGCACCCGGCTGACCGTGGTGGAGGACCTGAACAAGGTGTTCCCCCCCGAGGTGGCCGTGTTCGAGCCCAGCGAGGCCGAGATCAGCCACACCCAGAAGGCCACCCTGGTGTGCCTGGCCACCGGCTTCTTCCCCGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAACGGCAAGGAGGTGCACAGCGGCGTGAGCTGCGACCCCCAGCCCCTGAAGGAGCAGCCCGCCCTGAACGACAGCCGGTACTGCCTGAGCAGCCGGCTGCGGGTGAGCGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGGAACCACTTCCGGTGCCAGGTGCAGTTCTACGGCCTGAGCGAGAACGACGAGTGGACCCAGGACCGGGCCAAGCCCGTGACCCAGATCGTGAGCGCCGAGGCCTGGGGCCGGGCCGACTGCGGCTTCACCAGCGTGAGCTACCAGCAGGGCGTGCTGAGCGCCACCATCCTGTACGAGATCCTGCTGGGCAAGGCCACCCTGTACGCCGTGCTGGTGAGCGCCCTGGTGCTGATGGCCATGGTGAAGCGGAAGGACTTCTGA
SEQ ID NO:66(HA-1H TCR M2的Vβ(VDJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的密码子优化的核酸序列):
ATGGGCACCAGCCTGCTGTGCTGGATGGCCCTGTGCCTGCTGGGCGCCGACCACGCCGACACCGGCGTGAGCCAGAACCCCCGGCACAAGATCACCAAGCGGGGCCAGAACGTGACCTTCCGGTGCGACCCCATCAGCGAGCACAACCGGCTGTACTGGTACCGGCAGACCCTGGGCCAGGGCCCCGAGTTCCTGACCTACTTCCAGAACGAGGCCCAGCTGGAGAAGAGCCGGCTGCTGAGCGACCGGTTCAGCGCCGAGCGGCCCAAGGGCAGCTTCAGCACCCTGGAGATCCAGCGGACCGAGCAGGGCGACAGCGCCATGTACCTGTGCGCCAGCCTGACCGTGCAGAACACCGAGGCCTTCTTCGGCCAGGGCACCCGGCTGACCGTGGTGGAAGATCTACGTAACGTGACACCACCCAAAGTCTCACTGTTTGAGCCTAGCAAGGCAGAAATTGCCAACAAGCAGAAGGCCACCCTGGTGTGCCTGGCAAGAGGGTTCTTTCCAGATCACGTGGAGCTGTCCTGGTGGGTCAACGGCAAAGAAGTGCATTCTGGGGTCTGCACCGACCCCCAGGCTTACAAGGAGAGTAATTACTCATATTGTCTGTCAAGCCGGCTGAGAGTGTCCGCCACATTCTGGCACAACCCTAGGAATCATTTCCGCTGCCAGGTCCAGTTTCACGGCCTGAGTGAGGAAGATAAATGGCCAGAGGGGTCACCTAAGCCAGTGACACAGAACATCAGCGCAGAAGCCTGGGGACGAGCAGACTGTGGCATTACTAGCGCCTCCTATCATCAGGGCGTGCTGAGCGCCACTATCCTGTACGAGATTCTGCTGGGAAAGGCCACCCTGTATGCTGTGCTGGTCTCCGGCCTGGTGCTGATGGCCATGGTCAAGAAAAAGAACTCTTGA
SEQ ID NO:67(HA-1H TCR FK47.83的Vα(VJ)结构域和恒定区结构域的氨基酸序列):
MTSIRAVFIFLWLQLDLVNGENVEQHPSTLSVQEGDSAVIKCTYSDSASNYFPWYKQELGKRPQLIIDIRSNVGEKKDQRIAVTLNKTAKHFSLHITETQPEDSAVYFCAASNLVFGAGTILRVKSYIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS*
SEQ ID NO:68(HA-1H TCR FK47.83的Vα(VJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的氨基酸序列):
MKSLRVLLVILWLQLSWVWSQGENVEQHPSTLSVQEGDSAVIKCTYSDSASNYFPWYKQELGKRPQLIIDIRSNVGEKKDQRIAVTLNKTAKHFSLHITETQPEDSAVYFCAASNLVFGAGTILRVKSDIQNPEPAVYQLKDPRSQDSTLCLFTDFDSQINVPKTMESGTFITDKCVLDMKAMDSKSNGAIAWSNQTSFTCQDIFKETNATYPSSDVPCDATLTEKSFETDMNLNFQNLSVMGLRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS*
SEQ ID NO:69(HA-1H TCR FK47.83的Vα(VJ)结构域和恒定区结构域的核酸序列):
ATGACATCCATTCGAGCTGTATTTATATTCCTGTGGCTGCAGCTGGACTTGGTGAATGGAGAGAATGTGGAGCAGCATCCTTCAACCCTGAGTGTCCAGGAGGGAGACAGCGCTGTTATCAAGTGTACTTATTCAGACAGTGCCTCAAACTACTTCCCTTGGTATAAGCAAGAACTTGGAAAAAGACCTCAGCTTATTATAGACATTCGTTCAAATGTGGGCGAAAAGAAAGACCAACGAATTGCTGTTACATTGAACAAGACAGCCAAACATTTCTCCCTGCACATCACAGAGACCCAACCTGAAGACTCGGCTGTCTACTTCTGTGCAGCAAGTAATCTGGTCTTTGGCGCAGGAACCATTCTGAGAGTCAAGTCCTATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGTTGTGGTCCAGCTGA
SEQ ID NO:70(HA-1H TCR FK47.83的Vα(VJ)结构域和恒定区结构域的密码子优化的核酸序列):
ATGACCAGCATCCGGGCCGTGTTCATCTTCCTGTGGCTGCAGCTGGACCTGGTGAACGGCGAGAACGTGGAGCAGCACCCCAGCACCCTGAGCGTGCAGGAGGGCGACAGCGCCGTGATCAAGTGCACCTACAGCGACAGCGCCAGCAACTACTTCCCCTGGTACAAGCAGGAGCTGGGCAAGCGGCCCCAGCTGATCATCGACATCCGGAGCAACGTGGGCGAGAAGAAGGACCAGCGGATCGCCGTGACCCTGAACAAGACCGCCAAGCACTTCAGCCTGCACATCACCGAGACCCAGCCCGAGGACAGCGCCGTGTACTTCTGCGCCGCCAGCAACCTGGTGTTCGGCGCCGGCACCATCCTGCGGGTGAAGAGCTACATCCAGAACCCCGACCCCGCCGTGTACCAGCTGCGGGACAGCAAGAGCAGCGACAAGAGCGTGTGCCTGTTCACCGACTTCGACAGCCAGACCAACGTGAGCCAGAGCAAGGACAGCGACGTGTACATCACCGACAAGTGCGTGCTGGACATGCGGAGCATGGACTTCAAGAGCAACAGCGCCGTGGCCTGGAGCAACAAGAGCGACTTCGCCTGCGCCAACGCCTTCAACAACAGCATCATCCCCGAGGACACCTTCTTCCCCAGCCCCGAGAGCAGCTGCGACGTGAAGCTGGTGGAGAAGAGCTTCGAGACCGACACCAACCTGAACTTCCAGAACCTGAGCGTGATCGGCTTCCGGATCCTGCTGCTGAAGGTGGCCGGCTTCAACCTGCTGATGACCCTGCGGCTGTGGAGCAGCTGA
SEQ ID NO:71(HA-1H TCR FK47.83的Vα(VJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的密码子优化的核酸序列):
ATGAAGAGCCTGCGCGTGCTGCTGGTCATCCTGTGGCTGCAATTGTCGTGGGTCTGGAGCCAAGGCGAGAACGTGGAGCAGCACCCCAGCACCCTGAGCGTGCAGGAGGGCGACAGCGCCGTGATCAAGTGCACCTACAGCGACAGCGCCAGCAACTACTTCCCCTGGTACAAGCAGGAGCTGGGCAAGCGGCCCCAGCTGATCATCGACATCCGGAGCAACGTGGGCGAGAAGAAGGACCAGCGGATCGCCGTGACCCTGAACAAGACCGCCAAGCACTTCAGCCTGCACATCACCGAGACCCAGCCCGAGGACAGCGCCGTGTACTTCTGCGCCGCCAGCAACCTGGTGTTCGGCGCCGGCACCATCCTGCGGGTGAAGAGCGACATTCAGAACCCGGAACCGGCTGTATACCAGCTGAAGGACCCCCGATCTCAGGATAGTACTCTGTGCCTGTTCACCGACTTTGATAGTCAGATCAATGTGCCTAAAACCATGGAATCCGGAACTTTTATTACCGACAAGTGCGTGCTGGATATGAAAGCCATGGACAGTAAGTCAAACGGCGCCATCGCTTGGAGCAATCAGACATCCTTCACTTGCCAGGATATCTTCAAGGAGACCAACGCAACATACCCATCCTCTGACGTGCCCTGTGATGCCACCCTGACAGAGAAGTCTTTCGAAACAGACATGAACCTGAATTTTCAGAATCTGAGCGTGATGGGCCTGAGAATCCTGCTGCTGAAGGTCGCTGGGTTTAATCTGCTGATGACACTGCGGCTGTGGTCCTCATGA
SEQ ID NO:72(HA-1H TCR FK47.83的Vβ(VDJ)结构域和恒定区结构域的氨基酸序列):
MGTSLLCWMALCLLGADHADTGVSQNPRHKITKRGQNVTFRCDPISEHNRLYWYRQTLGQGPEFLTYFQNEAQLEKSRLLSDRFSAERPKGSFSTLEIQRTEQGDSAMYLCASSLVVVDEQFFGPGTRLTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRG*
SEQ ID NO:73(HA-1H TCR FK47.83的Vβ(VDJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的氨基酸序列):
MGTSLLCWMALCLLGADHADTGVSQNPRHKITKRGQNVTFRCDPISEHNRLYWYRQTLGQGPEFLTYFQNEAQLEKSRLLSDRFSAERPKGSFSTLEIQRTEQGDSAMYLCASSLVVVDEQFFGPGTRLTVLEDLRNVTPPKVSLFEPSKAEIANKQKATLVCLARGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVCTDPQAYKESNYSYCLSSRLRVSATFWHNPRNHFRCQVQFHGLSEEDKWPEGSPKPVTQNISAEAWGRADCGITSASYHQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSGLVLMAMVKKKNS*
SEQ ID NO:74(HA-1H TCR FK47.83的Vβ(VDJ)结构域和恒定区结构域的核酸序列):
ATGGGCACCAGCCTCCTCTGCTGGATGGCCCTGTGTCTCCTGGGGGCAGATCACGCAGATACTGGAGTCTCCCAGAACCCCAGACACAAGATCACAAAGAGGGGACAGAATGTAACTTTCAGGTGTGATCCAATTTCTGAACACAACCGCCTTTATTGGTACCGACAGACCCTGGGGCAGGGCCCAGAGTTTCTGACTTACTTCCAGAATGAAGCTCAACTAGAAAAATCAAGGCTGCTCAGTGATCGGTTCTCTGCAGAGAGGCCTAAGGGATCTTTCTCCACCTTGGAGATCCAGCGCACAGAGCAGGGGGACTCGGCCATGTATCTCTGTGCCAGCAGCTTAGTCGTTGTGGATGAGCAGTTCTTCGGGCCAGGGACACGGCTCACCGTGCTAGAGGACCTGAAAAACGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTATGCCTGGCCACAGGCTTCTACCCCGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACAGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCTGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTCACCTCCGAGTCTTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCTTGCTAGGGAAGGCCACCTTGTATGCCGTGCTGGTCAGTGCCCTCGTGCTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTCCAGAGGCTAG
SEQ ID NO:75(HA-1H TCR FK47.83的Vβ(VDJ)结构域和恒定区结构域的密码子优化的核酸序列):
ATGGGCACCAGCCTGCTGTGCTGGATGGCCCTGTGCCTGCTGGGCGCCGACCACGCCGACACCGGCGTGAGCCAGAACCCCCGGCACAAGATCACCAAGCGGGGCCAGAACGTGACCTTCCGGTGCGACCCCATCAGCGAGCACAACCGGCTGTACTGGTACCGGCAGACCCTGGGCCAGGGCCCCGAGTTCCTGACCTACTTCCAGAACGAGGCCCAGCTGGAGAAGAGCCGGCTGCTGAGCGACCGGTTCAGCGCCGAGCGGCCCAAGGGCAGCTTCAGCACCCTGGAGATCCAGCGGACCGAGCAGGGCGACAGCGCCATGTACCTGTGCGCCAGCAGCCTGGTGGTGGTGGACGAGCAGTTCTTCGGCCCCGGCACCCGGCTGACCGTGCTGGAGGACCTGAAGAACGTGTTCCCCCCCGAGGTGGCCGTGTTCGAGCCCAGCGAGGCCGAGATCAGCCACACCCAGAAGGCCACCCTGGTGTGCCTGGCCACCGGCTTCTACCCCGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAACGGCAAGGAGGTGCACAGCGGCGTGTGCACCGACCCCCAGCCCCTGAAGGAGCAGCCCGCCCTGAACGACAGCCGGTACTGCCTGAGCAGCCGGCTGCGGGTGAGCGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGGAACCACTTCCGGTGCCAGGTGCAGTTCTACGGCCTGAGCGAGAACGACGAGTGGACCCAGGACCGGGCCAAGCCCGTGACCCAGATCGTGAGCGCCGAGGCCTGGGGCCGGGCCGACTGCGGCTTCACCAGCGAGAGCTACCAGCAGGGCGTGCTGAGCGCCACCATCCTGTACGAGATCCTGCTGGGCAAGGCCACCCTGTACGCCGTGCTGGTGAGCGCCCTGGTGCTGATGGCCATGGTGAAGCGGAAGGACAGCCGGGGCTGA
SEQ ID NO:76(HA-1H TCR FK47.83的Vβ(VDJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的密码子优化的核酸序列):
ATGGGCACCAGCCTGCTGTGCTGGATGGCCCTGTGCCTGCTGGGCGCCGACCACGCCGACACCGGCGTGAGCCAGAACCCCCGGCACAAGATCACCAAGCGGGGCCAGAACGTGACCTTCCGGTGCGACCCCATCAGCGAGCACAACCGGCTGTACTGGTACCGGCAGACCCTGGGCCAGGGCCCCGAGTTCCTGACCTACTTCCAGAACGAGGCCCAGCTGGAGAAGAGCCGGCTGCTGAGCGACCGGTTCAGCGCCGAGCGGCCCAAGGGCAGCTTCAGCACCCTGGAGATCCAGCGGACCGAGCAGGGCGACAGCGCCATGTACCTGTGCGCCAGCAGCCTGGTGGTGGTGGACGAGCAGTTCTTCGGCCCCGGCACCCGGCTGACCGTGCTGGAAGATCTACGTAACGTGACACCACCCAAAGTCTCACTGTTTGAGCCTAGCAAGGCAGAAATTGCCAACAAGCAGAAGGCCACCCTGGTGTGCCTGGCAAGAGGGTTCTTTCCAGATCACGTGGAGCTGTCCTGGTGGGTCAACGGCAAAGAAGTGCATTCTGGGGTCTGCACCGACCCCCAGGCTTACAAGGAGAGTAATTACTCATATTGTCTGTCAAGCCGGCTGAGAGTGTCCGCCACATTCTGGCACAACCCTAGGAATCATTTCCGCTGCCAGGTCCAGTTTCACGGCCTGAGTGAGGAAGATAAATGGCCAGAGGGGTCACCTAAGCCAGTGACACAGAACATCAGCGCAGAAGCCTGGGGACGAGCAGACTGTGGCATTACTAGCGCCTCCTATCATCAGGGCGTGCTGAGCGCCACTATCCTGTACGAGATTCTGCTGGGAAAGGCCACCCTGTATGCTGTGCTGGTCTCCGGCCTGGTGCTGATGGCCATGGTCAAGAAAAAGAACTCTTGA
SEQ ID NO:77(编码HA-1TCR BV7-9的氨基酸1至80的核苷酸序列(图2A)):
AGGTGTGATCCAATTTCTGAACACAACCGCCTTTATTGGTACCGACAGACCCTGGGGCAGGGCCCAGAGTTTCTGACTTACTTCCAGAATGAAGCTCAACTAGAAAAATCAAGGCTGCTC
SEQ ID NO:78(编码HA-2TCR BV7-8的氨基酸1至80的核苷酸序列(图2A)):
AGGTGTGATCCAATTTCGGGTCATGTATCCCTTTTTTGGTACCAACAGGCCCTGGGGCAGGGGCCAGAGTTTCTGACTTATTTCCAGAATGAAGCTCAACTAGACAAATCGGGGCTGCCC
SEQ ID NO:79(HA-1R的氨基酸序列):VLRDDLLEA
SEQ ID NO:80(HA-1H TCR M7的Vα结构域的CDR1的氨基酸序列):TTLSN
SEQ ID NO:81(HA-1H TCR M7的Vα结构域的CDR1的核酸序列):ACTACTTTAAGCAAT
SEQ ID NO:82(HA-1H TCR M7的Vα结构域的CDR1的密码子优化的核酸序列):ACCACCCTGAGCAAC
SEQ ID NO:83(HA-1H TCR M7的Vα结构域的CDR2的氨基酸序列):LVKSGEV
SEQ ID NO:84(HA-1H TCR M7的Vα结构域的CDR2的核酸序列):TTAGTGAAGAGTGGAGAAGTG
SEQ ID NO:85(HA-1H TCR M7的Vα结构域的CDR2的密码子优化的核酸序列):CTGGTGAAGAGCGGCGAGGTG
SEQ ID NO:86(HA-1H TCR M7、HA-1H TCR M2或HA-1H TCR FK47.83的Vβ结构域的CDR2的氨基酸序列):FQNEAQ
SEQ ID NO:87(HA-1H TCR M7、HA-1H TCR M2或HA-1H TCR FK47.83的Vβ结构域的CDR2的核酸序列):TTCCAGAATGAAGCTCAA
SEQ ID NO:88(HA-1H TCR M7、HA-1H TCR M2或HA-1H TCR FK47.83的Vβ结构域的CDR2的密码子优化的核酸序列):TTCCAGAACGAGGCCCAG
SEQ ID NO:89(鼠C-β区)
gagcaaggccgagatcgccaacaagcagaaagccaccctcgtgtgcctggccagaggcttcttccccgaccatgtggaactgtcttggtgggtcaacggcaaagaggtgcacagcggagtgtccaccgaccctcaggcctacaaagagagcaactacagctactgcctgagcagcagactgcgggtgtccgccaccttctggcacaacccccggaaccacttcagatgccaggtgcagtttcacggcctgagcgaagaggacaagtggcccgaaggctcccccaagcccgtgacccagaatatctctgccgaggcctggggcagagccgactgtggaattaccagcgccagctaccaccagggcgtgctgtctgccaccatcctgtacgagatcctgctgggcaaggccaccctgtacgccgtgctggtgtctggcctggt
SEQ ID NO:90(鼠C–α区)
caggacagcaccctgtgcctgttcaccgacttcgacagccagatcaacgtgcccaagaccatggaaagcggcaccttcatcaccgacaagacagtgctggacatgaaggccatggacagcaagtccaacggcgcaatcgcctggtccaaccagaccagcttcacatgccaggacatcttcaaagagacaaacgccacataccccagcagcgacgtgccctgtgatgccaccctgacagagaagtccttcgagacagacatgaacctgaacttccagaatctgtccgtgatgggcctgagaatcctgctgctgaaggtggccggcttcaatctgctgatgaccctgcggctgtggtccagctga
SEQ ID NO:91(Seattle TCR2，来自WO2018/058002的Vβ结构域)
MGTSLLCWMALCLLGADHADTGVSQDPRHKITKRGQNVTFRCDPISEHNRLYWYRQTLGQGPEFLTYFQNEAQLEKSRLLSDRFSAERPKGSFSTLEIQRTEQGDSAMYLCASSLVKGEKLFFGSGTQLSVL
SEQ ID NO:92(Seattle TCR2，来自WO2018/058002的Vα结构域)
METLLGLLILWLQLQWVSSKQEVTQIPAALSVPEGENLVLNCSFTDSAIYNLQWFRQDPGKGLTSLLLIQSSQREQTSGRLNASLDKSSGRSTLYIAASQPGDSATYLCAVIGLGGTYKYIFGTGTRLKVLAN
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序列表
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<120> 对HA-1H特异的结合蛋白及其用途
<130> P257143WO
<150> NL 2021789
<151> 2018-10-10
<160> 92
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Cys Ala Gly Asn Thr Gly Gly Phe Lys Thr Ile Phe
1 5 10
<210> 2
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Cys Ala Ala Arg Asn Ser Gly Ala Gly Ser Tyr Gln Leu Thr Phe
1 5 10 15
<210> 3
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人
<400> 3
Cys Ala Ala Ser Asn Leu Val Phe
1 5
<210> 4
<211> 13
<212> PRT
<213> 智人
<400> 4
Cys Ala Ser Ser Leu Leu Gly Asn Gln Pro Gln His Phe
1 5 10
<210> 5
<211> 13
<212> PRT
<213> 智人
<400> 5
Cys Ala Ser Leu Thr Val Gln Asn Thr Glu Ala Phe Phe
1 5 10
<210> 6
<211> 13
<212> PRT
<213> 智人
<400> 6
Cys Ala Ser Ser Leu Val Val Val Asp Glu Gln Phe Phe
1 5 10
<210> 7
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人
<400> 7
Ser Glu His Asn Arg Leu
1 5
<210> 8
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人
<400> 8
Asp Ser Ala Ser Asn Tyr
1 5
<210> 9
<211> 18
<212> DNA
<213> 智人
<400> 9
gacagtgcct caaactac 18
<210> 10
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人
<400> 10
Val Leu His Asp Asp Leu Leu Glu Ala
1 5
<210> 11
<211> 36
<212> DNA
<213> 智人
<400> 11
tgtgcaggca atactggagg cttcaaaact atcttt 36
<210> 12
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M7的Va结构域的CDR3的密码子优化的核酸序列
<400> 12
tgtgccggca ataccggcgg cttcaagacc atcttc 36
<210> 13
<211> 39
<212> DNA
<213> 智人
<400> 13
tgtgccagca gcttattggg taatcagccc cagcatttt 39
<210> 14
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M7的Vb结构域的CDR3的密码子优化的核酸序列
<400> 14
tgcgccagct ccctgctggg caaccagccc cagcacttc 39
<210> 15
<211> 18
<212> DNA
<213> 智人
<400> 15
tctgaacaca accgcctt 18
<210> 16
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M7、HA-1H TCR M2或HA-1H TCR FK47.83的密码子优化的Vb结构域的CDR1的核酸序列
<400> 16
agcgagcaca accggctg 18
<210> 17
<211> 128
<212> PRT
<213> 智人
<400> 17
Met Leu Leu Ile Thr Ser Met Leu Val Leu Trp Met Gln Leu Ser Gln
1 5 10 15
Val Asn Gly Gln Gln Val Met Gln Ile Pro Gln Tyr Gln His Val Gln
20 25 30
Glu Gly Glu Asp Phe Thr Thr Tyr Cys Asn Ser Ser Thr Thr Leu Ser
35 40 45
Asn Ile Gln Trp Tyr Lys Gln Arg Pro Gly Gly His Pro Val Phe Leu
50 55 60
Ile Gln Leu Val Lys Ser Gly Glu Val Lys Lys Gln Lys Arg Leu Thr
65 70 75 80
Phe Gln Phe Gly Glu Ala Lys Lys Asn Ser Ser Leu His Ile Thr Ala
85 90 95
Thr Gln Thr Thr Asp Val Gly Thr Tyr Phe Cys Ala Gly Asn Thr Gly
100 105 110
Gly Phe Lys Thr Ile Phe Gly Ala Gly Thr Arg Leu Phe Val Lys Ala
115 120 125
<210> 18
<211> 132
<212> PRT
<213> 智人
<400> 18
Met Gly Thr Ser Leu Leu Cys Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Asp His Ala Asp Thr Gly Val Ser Gln Asp Pro Arg His Lys Ile Thr
20 25 30
Lys Arg Gly Gln Asn Val Thr Phe Arg Cys Asp Pro Ile Ser Glu His
35 40 45
Asn Arg Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Thr Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe
50 55 60
Leu Thr Tyr Phe Gln Asn Glu Ala Gln Leu Glu Lys Ser Arg Leu Leu
65 70 75 80
Ser Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Pro Lys Gly Ser Phe Ser Thr Leu
85 90 95
Glu Ile Gln Arg Thr Glu Gln Gly Asp Ser Ala Met Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Leu Leu Gly Asn Gln Pro Gln His Phe Gly Asp Gly Thr Arg
115 120 125
Leu Ser Ile Leu
130
<210> 19
<211> 384
<212> DNA
<213> 智人
<400> 19
atgctactca tcacatcaat gttggtctta tggatgcaat tgtcacaggt gaatggacaa 60
caggtaatgc aaattcctca gtaccagcat gtacaagaag gagaagactt caccacgtac 120
tgcaattcct caactacttt aagcaatata cagtggtata agcaaaggcc tggtggacat 180
cccgtttttt tgatacagtt agtgaagagt ggagaagtga agaagcagaa aagactgaca 240
tttcagtttg gagaagcaaa aaagaacagc tccctgcaca tcacagccac ccagactaca 300
gatgtaggaa cctacttctg tgcaggcaat actggaggct tcaaaactat ctttggagca 360
ggaacaagac tatttgttaa agca 384
<210> 20
<211> 384
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M7的Va (VJ)结构域的密码子优化的核酸序列
<400> 20
atgctgctga tcacctccat gctggtgctg tggatgcagc tgtcccaggt gaacggccag 60
caggtgatgc agatccccca gtaccagcac gtgcaggagg gcgaggattt caccacctac 120
tgtaacagca gcaccaccct gagcaacatc cagtggtaca agcagagacc tggcggccac 180
cccgtgttcc tgatccagct ggtgaagagc ggcgaggtga agaagcagaa gcggctgacc 240
ttccagttcg gcgaggccaa gaagaatagc agcctgcaca tcaccgccac ccagaccacc 300
gatgtgggca cctacttctg tgccggcaat accggcggct tcaagaccat cttcggagcc 360
ggcaccagac tgttcgtgaa ggcc 384
<210> 21
<211> 396
<212> DNA
<213> 智人
<400> 21
atgggcacca gcctcctctg ctggatggcc ctgtgtctcc tgggggcaga tcacgcagat 60
actggagtct cccaggaccc cagacacaag atcacaaaga ggggacagaa tgtaactttc 120
aggtgtgatc caatttctga acacaaccgc ctttattggt accgacagac cctggggcag 180
ggcccagagt ttctgactta cttccagaat gaagctcaac tagaaaaatc aaggctgctc 240
agtgatcggt tctctgcaga gaggcctaag ggatctttct ccaccttgga gatccagcgc 300
acagagcagg gggactcggc catgtatctc tgtgccagca gcttattggg taatcagccc 360
cagcattttg gtgatgggac tcgactctcc atccta 396
<210> 22
<211> 396
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M7的Vb (VDJ)结构域的密码子优化的核酸序列
<400> 22
atgggcacca gcctgctgtg ctggatggcc ctgtgcctgc tgggcgctga ccatgctgat 60
accggcgtga gccaggaccc ccggcacaag atcaccaagc ggggccagaa cgtgaccttc 120
agatgcgacc ccatcagcga gcacaaccgg ctgtactggt acagacagac cctgggccag 180
ggccccgagt tcctgaccta cttccagaac gaggcccagc tggaaaagag ccggctgctg 240
tccgaccggt tcagcgccga gcggcccaag ggcagcttca gcaccctgga aatccagcgg 300
accgagcagg gcgacagcgc catgtacctg tgcgccagct ccctgctggg caaccagccc 360
cagcacttcg gcgacggcac cagactgagc atcctg 396
<210> 23
<211> 45
<212> DNA
<213> 智人
<400> 23
tgtgcagcaa ggaactctgg ggctgggagt taccaactca ctttc 45
<210> 24
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M2的Va结构域的CDR3的密码子优化的核酸序列
<400> 24
tgcgccgccc ggaacagcgg cgccggcagc taccagctga ccttc 45
<210> 25
<211> 39
<212> DNA
<213> 智人
<400> 25
tgtgccagct tgacggtaca gaacactgaa gctttcttt 39
<210> 26
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M2的Vb结构域的CDR3的密码子优化的核酸序列
<400> 26
tgcgccagcc tgaccgtgca gaacaccgag gccttcttc 39
<210> 27
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M2或HA-1H TCR FK47.83的Va结构域的密码子优化的核酸序列
<400> 27
gacagcgcca gcaactac 18
<210> 28
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<400> 28
Ile Arg Ser Asn Val Gly Glu
1 5
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<211> 133
<212> PRT
<213> 智人
<400> 29
Met Thr Ser Ile Arg Ala Val Phe Ile Phe Leu Trp Leu Gln Leu Asp
1 5 10 15
Leu Val Asn Gly Glu Asn Val Glu Gln His Pro Ser Thr Leu Ser Val
20 25 30
Gln Glu Gly Asp Ser Ala Val Ile Lys Cys Thr Tyr Ser Asp Ser Ala
35 40 45
Ser Asn Tyr Phe Pro Trp Tyr Lys Gln Glu Leu Gly Lys Arg Pro Gln
50 55 60
Leu Ile Ile Asp Ile Arg Ser Asn Val Gly Glu Lys Lys Asp Gln Arg
65 70 75 80
Ile Ala Val Thr Leu Asn Lys Thr Ala Lys His Phe Ser Leu His Ile
85 90 95
Thr Glu Thr Gln Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Ala Arg
100 105 110
Asn Ser Gly Ala Gly Ser Tyr Gln Leu Thr Phe Gly Lys Gly Thr Lys
115 120 125
Leu Ser Val Ile Pro
130
<210> 30
<211> 132
<212> PRT
<213> 智人
<400> 30
Met Gly Thr Ser Leu Leu Cys Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Asp His Ala Asp Thr Gly Val Ser Gln Asn Pro Arg His Lys Ile Thr
20 25 30
Lys Arg Gly Gln Asn Val Thr Phe Arg Cys Asp Pro Ile Ser Glu His
35 40 45
Asn Arg Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Thr Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe
50 55 60
Leu Thr Tyr Phe Gln Asn Glu Ala Gln Leu Glu Lys Ser Arg Leu Leu
65 70 75 80
Ser Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Pro Lys Gly Ser Phe Ser Thr Leu
85 90 95
Glu Ile Gln Arg Thr Glu Gln Gly Asp Ser Ala Met Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Leu Thr Val Gln Asn Thr Glu Ala Phe Phe Gly Gln Gly Thr Arg
115 120 125
Leu Thr Val Val
130
<210> 31
<211> 399
<212> DNA
<213> 智人
<400> 31
atgacatcca ttcgagctgt atttatattc ctgtggctgc agctggactt ggtgaatgga 60
gagaatgtgg agcagcatcc ttcaaccctg agtgtccagg agggagacag cgctgttatc 120
aagtgtactt attcagacag tgcctcaaac tacttccctt ggtataagca agaacttgga 180
aaaagacctc agcttattat agacattcgt tcaaatgtgg gcgaaaagaa agaccaacga 240
attgctgtta cattgaacaa gacagccaaa catttctccc tgcacatcac agagacccaa 300
cctgaagact cggctgtcta cttctgtgca gcaaggaact ctggggctgg gagttaccaa 360
ctcactttcg ggaaggggac caaactctcg gtcatacca 399
<210> 32
<211> 399
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M2的Va (VJ)结构域的密码子优化的核酸序列
<400> 32
atgaccagca tccgggccgt gttcatcttc ctgtggctgc agctggacct ggtgaacggc 60
gagaacgtgg agcagcaccc cagcaccctg agcgtgcagg agggcgacag cgccgtgatc 120
aagtgcacct acagcgacag cgccagcaac tacttcccct ggtacaagca ggagctgggc 180
aagcggcccc agctgatcat cgacatccgg agcaacgtgg gcgagaagaa ggaccagcgg 240
atcgccgtga ccctgaacaa gaccgccaag cacttcagcc tgcacatcac cgagacccag 300
cccgaggaca gcgccgtgta cttctgcgcc gcccggaaca gcggcgccgg cagctaccag 360
ctgaccttcg gcaagggcac caagctgagc gtgatcccc 399
<210> 33
<211> 396
<212> DNA
<213> 智人
<400> 33
atgggcacca gcctcctctg ctggatggcc ctgtgtctcc tgggggcaga tcacgcagat 60
actggagtct cccagaaccc cagacacaag atcacaaaga ggggacagaa tgtaactttc 120
aggtgtgatc caatttctga acacaaccgc ctttattggt accgacagac cctggggcag 180
ggcccagagt ttctgactta cttccagaat gaagctcaac tagaaaaatc aaggctgctc 240
agtgatcggt tctctgcaga gaggcctaag ggatctttct ccaccttgga gatccagcgc 300
acagagcagg gggactcggc catgtatctc tgtgccagct tgacggtaca gaacactgaa 360
gctttctttg gacaaggcac cagactcaca gttgta 396
<210> 34
<211> 396
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M2的Vb (VDJ)结构域的密码子优化的核酸序列
<400> 34
atgggcacca gcctgctgtg ctggatggcc ctgtgcctgc tgggcgccga ccacgccgac 60
accggcgtga gccagaaccc ccggcacaag atcaccaagc ggggccagaa cgtgaccttc 120
cggtgcgacc ccatcagcga gcacaaccgg ctgtactggt accggcagac cctgggccag 180
ggccccgagt tcctgaccta cttccagaac gaggcccagc tggagaagag ccggctgctg 240
agcgaccggt tcagcgccga gcggcccaag ggcagcttca gcaccctgga gatccagcgg 300
accgagcagg gcgacagcgc catgtacctg tgcgccagcc tgaccgtgca gaacaccgag 360
gccttcttcg gccagggcac ccggctgacc gtggtg 396
<210> 35
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人
<400> 35
tgtgcagcaa gtaatctggt cttt 24
<210> 36
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR FK47.83的Va结构域的CDR3的密码子优化的核酸序列
<400> 36
tgcgccgcca gcaacctggt gttc 24
<210> 37
<211> 39
<212> DNA
<213> 智人
<400> 37
tgtgccagca gcttagtcgt tgtggatgag cagttcttc 39
<210> 38
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR FK47.83的Vb结构域的CDR3的密码子优化的核酸序列
<400> 38
tgcgccagca gcctggtggt ggtggacgag cagttcttc 39
<210> 39
<211> 21
<212> DNA
<213> 智人
<400> 39
attcgttcaa atgtgggcga a 21
<210> 40
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M2或HA-1H TCR FK47.83的Va结构域的CDR2的密码子优化的核酸序列
<400> 40
atccggagca acgtgggcga g 21
<210> 41
<211> 126
<212> PRT
<213> 智人
<400> 41
Met Thr Ser Ile Arg Ala Val Phe Ile Phe Leu Trp Leu Gln Leu Asp
1 5 10 15
Leu Val Asn Gly Glu Asn Val Glu Gln His Pro Ser Thr Leu Ser Val
20 25 30
Gln Glu Gly Asp Ser Ala Val Ile Lys Cys Thr Tyr Ser Asp Ser Ala
35 40 45
Ser Asn Tyr Phe Pro Trp Tyr Lys Gln Glu Leu Gly Lys Arg Pro Gln
50 55 60
Leu Ile Ile Asp Ile Arg Ser Asn Val Gly Glu Lys Lys Asp Gln Arg
65 70 75 80
Ile Ala Val Thr Leu Asn Lys Thr Ala Lys His Phe Ser Leu His Ile
85 90 95
Thr Glu Thr Gln Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Ala Ser
100 105 110
Asn Leu Val Phe Gly Ala Gly Thr Ile Leu Arg Val Lys Ser
115 120 125
<210> 42
<211> 132
<212> PRT
<213> 智人
<400> 42
Met Gly Thr Ser Leu Leu Cys Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Asp His Ala Asp Thr Gly Val Ser Gln Asn Pro Arg His Lys Ile Thr
20 25 30
Lys Arg Gly Gln Asn Val Thr Phe Arg Cys Asp Pro Ile Ser Glu His
35 40 45
Asn Arg Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Thr Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe
50 55 60
Leu Thr Tyr Phe Gln Asn Glu Ala Gln Leu Glu Lys Ser Arg Leu Leu
65 70 75 80
Ser Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Pro Lys Gly Ser Phe Ser Thr Leu
85 90 95
Glu Ile Gln Arg Thr Glu Gln Gly Asp Ser Ala Met Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Leu Val Val Val Asp Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg
115 120 125
Leu Thr Val Leu
130
<210> 43
<211> 378
<212> DNA
<213> 智人
<400> 43
atgacatcca ttcgagctgt atttatattc ctgtggctgc agctggactt ggtgaatgga 60
gagaatgtgg agcagcatcc ttcaaccctg agtgtccagg agggagacag cgctgttatc 120
aagtgtactt attcagacag tgcctcaaac tacttccctt ggtataagca agaacttgga 180
aaaagacctc agcttattat agacattcgt tcaaatgtgg gcgaaaagaa agaccaacga 240
attgctgtta cattgaacaa gacagccaaa catttctccc tgcacatcac agagacccaa 300
cctgaagact cggctgtcta cttctgtgca gcaagtaatc tggtctttgg cgcaggaacc 360
attctgagag tcaagtcc 378
<210> 44
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR FK47.83的Va (VJ)结构域的密码子优化的核酸序列
<400> 44
atgaccagca tccgggccgt gttcatcttc ctgtggctgc agctggacct ggtgaacggc 60
gagaacgtgg agcagcaccc cagcaccctg agcgtgcagg agggcgacag cgccgtgatc 120
aagtgcacct acagcgacag cgccagcaac tacttcccct ggtacaagca ggagctgggc 180
aagcggcccc agctgatcat cgacatccgg agcaacgtgg gcgagaagaa ggaccagcgg 240
atcgccgtga ccctgaacaa gaccgccaag cacttcagcc tgcacatcac cgagacccag 300
cccgaggaca gcgccgtgta cttctgcgcc gccagcaacc tggtgttcgg cgccggcacc 360
atcctgcggg tgaagagc 378
<210> 45
<211> 396
<212> DNA
<213> 智人
<400> 45
atgggcacca gcctcctctg ctggatggcc ctgtgtctcc tgggggcaga tcacgcagat 60
actggagtct cccagaaccc cagacacaag atcacaaaga ggggacagaa tgtaactttc 120
aggtgtgatc caatttctga acacaaccgc ctttattggt accgacagac cctggggcag 180
ggcccagagt ttctgactta cttccagaat gaagctcaac tagaaaaatc aaggctgctc 240
agtgatcggt tctctgcaga gaggcctaag ggatctttct ccaccttgga gatccagcgc 300
acagagcagg gggactcggc catgtatctc tgtgccagca gcttagtcgt tgtggatgag 360
cagttcttcg ggccagggac acggctcacc gtgcta 396
<210> 46
<211> 396
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR FK47.83的Vb (VDJ)结构域的密码子优化的核酸序列
<400> 46
atgggcacca gcctgctgtg ctggatggcc ctgtgcctgc tgggcgccga ccacgccgac 60
accggcgtga gccagaaccc ccggcacaag atcaccaagc ggggccagaa cgtgaccttc 120
cggtgcgacc ccatcagcga gcacaaccgg ctgtactggt accggcagac cctgggccag 180
ggccccgagt tcctgaccta cttccagaac gaggcccagc tggagaagag ccggctgctg 240
agcgaccggt tcagcgccga gcggcccaag ggcagcttca gcaccctgga gatccagcgg 300
accgagcagg gcgacagcgc catgtacctg tgcgccagca gcctggtggt ggtggacgag 360
cagttcttcg gccccggcac ccggctgacc gtgctg 396
<210> 47
<211> 269
<212> PRT
<213> 智人
<400> 47
Met Leu Leu Ile Thr Ser Met Leu Val Leu Trp Met Gln Leu Ser Gln
1 5 10 15
Val Asn Gly Gln Gln Val Met Gln Ile Pro Gln Tyr Gln His Val Gln
20 25 30
Glu Gly Glu Asp Phe Thr Thr Tyr Cys Asn Ser Ser Thr Thr Leu Ser
35 40 45
Asn Ile Gln Trp Tyr Lys Gln Arg Pro Gly Gly His Pro Val Phe Leu
50 55 60
Ile Gln Leu Val Lys Ser Gly Glu Val Lys Lys Gln Lys Arg Leu Thr
65 70 75 80
Phe Gln Phe Gly Glu Ala Lys Lys Asn Ser Ser Leu His Ile Thr Ala
85 90 95
Thr Gln Thr Thr Asp Val Gly Thr Tyr Phe Cys Ala Gly Asn Thr Gly
100 105 110
Gly Phe Lys Thr Ile Phe Gly Ala Gly Thr Arg Leu Phe Val Lys Ala
115 120 125
Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys
130 135 140
Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr
145 150 155 160
Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr
165 170 175
Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala
180 185 190
Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser
195 200 205
Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys Asp
210 215 220
Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe
225 230 235 240
Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala
245 250 255
Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
260 265
<210> 48
<211> 268
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M7的Va (VJ)结构域和恒定区结构域 (鼠)的氨基酸序列
<400> 48
Met Lys Ser Leu Arg Val Leu Leu Val Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser
1 5 10 15
Trp Val Trp Ser Gln Gly Gln Gln Val Met Gln Ile Pro Gln Tyr Gln
20 25 30
His Val Gln Glu Gly Glu Asp Phe Thr Thr Tyr Cys Asn Ser Ser Thr
35 40 45
Thr Leu Ser Asn Ile Gln Trp Tyr Lys Gln Arg Pro Gly Gly His Pro
50 55 60
Val Phe Leu Ile Gln Leu Val Lys Ser Gly Glu Val Lys Lys Gln Lys
65 70 75 80
Arg Leu Thr Phe Gln Phe Gly Glu Ala Lys Lys Asn Ser Ser Leu His
85 90 95
Ile Thr Ala Thr Gln Thr Thr Asp Val Gly Thr Tyr Phe Cys Ala Gly
100 105 110
Asn Thr Gly Gly Phe Lys Thr Ile Phe Gly Ala Gly Thr Arg Leu Phe
115 120 125
Val Lys Ala Asp Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys
130 135 140
Asp Pro Arg Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp
145 150 155 160
Ser Gln Ile Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr
165 170 175
Asp Lys Cys Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly
180 185 190
Ala Ile Ala Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe
195 200 205
Lys Glu Thr Asn Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala
210 215 220
Thr Leu Thr Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln
225 230 235 240
Asn Leu Ser Val Met Gly Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly
245 250 255
Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
260 265
<210> 49
<211> 810
<212> DNA
<213> 智人
<400> 49
atgctactca tcacatcaat gttggtctta tggatgcaat tgtcacaggt gaatggacaa 60
caggtaatgc aaattcctca gtaccagcat gtacaagaag gagaagactt caccacgtac 120
tgcaattcct caactacttt aagcaatata cagtggtata agcaaaggcc tggtggacat 180
cccgtttttt tgatacagtt agtgaagagt ggagaagtga agaagcagaa aagactgaca 240
tttcagtttg gagaagcaaa aaagaacagc tccctgcaca tcacagccac ccagactaca 300
gatgtaggaa cctacttctg tgcaggcaat actggaggct tcaaaactat ctttggagca 360
ggaacaagac tatttgttaa agcaaatatc cagaaccctg accctgccgt gtaccagctg 420
agagactcta aatccagtga caagtctgtc tgcctattca ccgattttga ttctcaaaca 480
aatgtgtcac aaagtaagga ttctgatgtg tatatcacag acaaaactgt gctagacatg 540
aggtctatgg acttcaagag caacagtgct gtggcctgga gcaacaaatc tgactttgca 600
tgtgcaaacg ccttcaacaa cagcattatt ccagaagaca ccttcttccc cagcccagaa 660
agttcctgtg atgtcaagct ggtcgagaaa agctttgaaa cagatacgaa cctaaacttt 720
caaaacctgt cagtgattgg gttccgaatc ctcctcctga aagtggccgg gtttaatctg 780
ctcatgacgc tgcggctgtg gtccagctga 810
<210> 50
<211> 810
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M7的Va (VJ)结构域和恒定区结构域的密码子优化的核酸序列
<400> 50
atgctgctga tcacctccat gctggtgctg tggatgcagc tgtcccaggt gaacggccag 60
caggtgatgc agatccccca gtaccagcac gtgcaggagg gcgaggattt caccacctac 120
tgtaacagca gcaccaccct gagcaacatc cagtggtaca agcagagacc tggcggccac 180
cccgtgttcc tgatccagct ggtgaagagc ggcgaggtga agaagcagaa gcggctgacc 240
ttccagttcg gcgaggccaa gaagaatagc agcctgcaca tcaccgccac ccagaccacc 300
gatgtgggca cctacttctg tgccggcaat accggcggct tcaagaccat cttcggagcc 360
ggcaccagac tgttcgtgaa ggccaacatc cagaaccctg accctgccgt gtaccagctg 420
agggacagca agagcagcga caagagcgtg tgtctgttca ccgacttcga cagccagacc 480
aacgtgtccc agagcaagga cagcgacgtg tacatcaccg acaagtgcgt gctggacatg 540
cggagcatgg acttcaagag caacagcgcc gtggcctgga gcaacaagag cgacttcgcc 600
tgtgccaacg ccttcaacaa cagcatcatc cccgaggaca cctttttccc cagccctgag 660
agcagctgtg acgtgaaact ggtggagaag agcttcgaga ccgacaccaa cctgaacttc 720
cagaacctga gcgtgatcgg cttcaggatc ctgctgctga aggtggccgg cttcaacctg 780
ctgatgaccc tgagactgtg gtccagctga 810
<210> 51
<211> 861
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M7的Va (VJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的密码子优化的核酸序列
<400> 51
atgaagagcc tgcgcgtgct gctggtcatc ctgtggctgc aattgtcgtg ggtctggagc 60
caaatgctgc tgatcacctc catgctggtg ctgtggatgc agctgtccca ggtgaacggc 120
cagcaggtga tgcagatccc ccagtaccag cacgtgcagg agggcgagga tttcaccacc 180
tactgtaaca gcagcaccac cctgagcaac atccagtggt acaagcagag acctggcggc 240
caccccgtgt tcctgatcca gctggtgaag agcggcgagg tgaagaagca gaagcggctg 300
accttccagt tcggcgaggc caagaagaat agcagcctgc acatcaccgc cacccagacc 360
accgatgtgg gcacctactt ctgtgccggc aataccggcg gcttcaagac catcttcgga 420
gccggcacca gactgttcgt gaaggccgac attcagaacc cggaaccggc tgtataccag 480
ctgaaggacc cccgatctca ggatagtact ctgtgcctgt tcaccgactt tgatagtcag 540
atcaatgtgc ctaaaaccat ggaatccgga acttttatta ccgacaagtg cgtgctggat 600
atgaaagcca tggacagtaa gtcaaacggc gccatcgctt ggagcaatca gacatccttc 660
acttgccagg atatcttcaa ggagaccaac gcaacatacc catcctctga cgtgccctgt 720
gatgccaccc tgacagagaa gtctttcgaa acagacatga acctgaattt tcagaatctg 780
agcgtgatgg gcctgagaat cctgctgctg aaggtcgctg ggtttaatct gctgatgaca 840
ctgcggctgt ggtcctcatg a 861
<210> 52
<211> 309
<212> PRT
<213> 智人
<400> 52
Met Gly Thr Ser Leu Leu Cys Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Asp His Ala Asp Thr Gly Val Ser Gln Asp Pro Arg His Lys Ile Thr
20 25 30
Lys Arg Gly Gln Asn Val Thr Phe Arg Cys Asp Pro Ile Ser Glu His
35 40 45
Asn Arg Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Thr Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe
50 55 60
Leu Thr Tyr Phe Gln Asn Glu Ala Gln Leu Glu Lys Ser Arg Leu Leu
65 70 75 80
Ser Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Pro Lys Gly Ser Phe Ser Thr Leu
85 90 95
Glu Ile Gln Arg Thr Glu Gln Gly Asp Ser Ala Met Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Leu Leu Gly Asn Gln Pro Gln His Phe Gly Asp Gly Thr Arg
115 120 125
Leu Ser Ile Leu Glu Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu Val Ala
130 135 140
Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr
145 150 155 160
Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser
165 170 175
Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro
180 185 190
Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu
195 200 205
Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn
210 215 220
His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu
225 230 235 240
Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu
245 250 255
Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser Tyr Gln Gln
260 265 270
Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala
275 280 285
Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val
290 295 300
Lys Arg Lys Asp Phe
305
<210> 53
<211> 305
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M7的Vb (VDJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的氨基酸序列
<400> 53
Met Gly Thr Ser Leu Leu Cys Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Asp His Ala Asp Thr Gly Val Ser Gln Asp Pro Arg His Lys Ile Thr
20 25 30
Lys Arg Gly Gln Asn Val Thr Phe Arg Cys Asp Pro Ile Ser Glu His
35 40 45
Asn Arg Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Thr Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe
50 55 60
Leu Thr Tyr Phe Gln Asn Glu Ala Gln Leu Glu Lys Ser Arg Leu Leu
65 70 75 80
Ser Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Pro Lys Gly Ser Phe Ser Thr Leu
85 90 95
Glu Ile Gln Arg Thr Glu Gln Gly Asp Ser Ala Met Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Leu Leu Gly Asn Gln Pro Gln His Phe Gly Asp Gly Thr Arg
115 120 125
Leu Ser Ile Leu Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser
130 135 140
Leu Phe Glu Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr
145 150 155 160
Leu Val Cys Leu Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser
165 170 175
Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro
180 185 190
Gln Ala Tyr Lys Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu
195 200 205
Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys
210 215 220
Gln Val Gln Phe His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly
225 230 235 240
Ser Pro Lys Pro Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg
245 250 255
Ala Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr His Gln Gly Val Leu Ser
260 265 270
Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala
275 280 285
Val Leu Val Ser Gly Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Lys Lys Asn
290 295 300
Ser
305
<210> 54
<211> 930
<212> DNA
<213> 智人
<400> 54
atgggcacca gcctcctctg ctggatggcc ctgtgtctcc tgggggcaga tcacgcagat 60
actggagtct cccaggaccc cagacacaag atcacaaaga ggggacagaa tgtaactttc 120
aggtgtgatc caatttctga acacaaccgc ctttattggt accgacagac cctggggcag 180
ggcccagagt ttctgactta cttccagaat gaagctcaac tagaaaaatc aaggctgctc 240
agtgatcggt tctctgcaga gaggcctaag ggatctttct ccaccttgga gatccagcgc 300
acagagcagg gggactcggc catgtatctc tgtgccagca gcttattggg taatcagccc 360
cagcattttg gtgatgggac tcgactctcc atcctagagg acctgaacaa ggtgttccca 420
cccgaggtcg ctgtgtttga gccatcagaa gcagagatct cccacaccca aaaggccaca 480
ctggtgtgcc tggccacagg cttcttcccc gaccacgtgg agctgagctg gtgggtgaat 540
gggaaggagg tgcacagtgg ggtcagcaca gacccgcagc ccctcaagga gcagcccgcc 600
ctcaatgact ccagatactg cctgagcagc cgcctgaggg tctcggccac cttctggcag 660
aacccccgca accacttccg ctgtcaagtc cagttctacg ggctctcgga gaatgacgag 720
tggacccagg atagggccaa acccgtcacc cagatcgtca gcgccgaggc ctggggtaga 780
gcagactgtg gctttacctc ggtgtcctac cagcaagggg tcctgtctgc caccatcctc 840
tatgagatcc tgctagggaa ggccaccctg tatgctgtgc tggtcagcgc ccttgtgttg 900
atggccatgg tcaagagaaa ggatttctga 930
<210> 55
<211> 930
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M7的Vb (VDJ)结构域和恒定区结构域的密码子优化的核酸序列
<400> 55
atgggcacca gcctgctgtg ctggatggcc ctgtgcctgc tgggcgctga ccatgctgat 60
accggcgtga gccaggaccc ccggcacaag atcaccaagc ggggccagaa cgtgaccttc 120
agatgcgacc ccatcagcga gcacaaccgg ctgtactggt acagacagac cctgggccag 180
ggccccgagt tcctgaccta cttccagaac gaggcccagc tggaaaagag ccggctgctg 240
tccgaccggt tcagcgccga gcggcccaag ggcagcttca gcaccctgga aatccagcgg 300
accgagcagg gcgacagcgc catgtacctg tgcgccagct ccctgctggg caaccagccc 360
cagcacttcg gcgacggcac cagactgagc atcctggaag atctgaacaa ggtgttcccc 420
cccgaggtgg ccgtgttcga gcccagcgag gccgagatca gccacaccca gaaagccacc 480
ctggtgtgcc tggccaccgg ctttttcccc gaccacgtgg agctgtcttg gtgggtgaac 540
ggcaaagagg tgcacagcgg cgtcagcacc gacccccagc ccctgaaaga gcagcccgcc 600
ctgaacgaca gccggtactg cctgtctagc cggctgcggg tgtccgccac cttctggcag 660
aacccccgga accacttccg gtgccaggtg cagttctacg gcctgagcga gaacgacgag 720
tggacccagg acagagccaa gcccgtgacc cagatcgtgt ccgccgaggc ctggggcaga 780
gccgactgcg gcttcaccag cgtgtcctac cagcagggcg tgctgtctgc caccatcctg 840
tacgagatcc tgctggggaa ggccaccctg tacgccgtgc tggtgtccgc cctggtgctg 900
atggccatgg tgaagcggaa ggacttctga 930
<210> 56
<211> 918
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M7的Vb (VDJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的密码子优化的核酸序列
<400> 56
atgggcacca gcctgctgtg ctggatggcc ctgtgcctgc tgggcgctga ccatgctgat 60
accggcgtga gccaggaccc ccggcacaag atcaccaagc ggggccagaa cgtgaccttc 120
agatgcgacc ccatcagcga gcacaaccgg ctgtactggt acagacagac cctgggccag 180
ggccccgagt tcctgaccta cttccagaac gaggcccagc tggaaaagag ccggctgctg 240
tccgaccggt tcagcgccga gcggcccaag ggcagcttca gcaccctgga aatccagcgg 300
accgagcagg gcgacagcgc catgtacctg tgcgccagct ccctgctggg caaccagccc 360
cagcacttcg gcgacggcac cagactgagc atcctggaag atctacgtaa cgtgacacca 420
cccaaagtct cactgtttga gcctagcaag gcagaaattg ccaacaagca gaaggccacc 480
ctggtgtgcc tggcaagagg gttctttcca gatcacgtgg agctgtcctg gtgggtcaac 540
ggcaaagaag tgcattctgg ggtctgcacc gacccccagg cttacaagga gagtaattac 600
tcatattgtc tgtcaagccg gctgagagtg tccgccacat tctggcacaa ccctaggaat 660
catttccgct gccaggtcca gtttcacggc ctgagtgagg aagataaatg gccagagggg 720
tcacctaagc cagtgacaca gaacatcagc gcagaagcct ggggacgagc agactgtggc 780
attactagcg cctcctatca tcagggcgtg ctgagcgcca ctatcctgta cgagattctg 840
ctgggaaagg ccaccctgta tgctgtgctg gtctccggcc tggtgctgat ggccatggtc 900
aagaaaaaga actcttga 918
<210> 57
<211> 274
<212> PRT
<213> 智人
<400> 57
Met Thr Ser Ile Arg Ala Val Phe Ile Phe Leu Trp Leu Gln Leu Asp
1 5 10 15
Leu Val Asn Gly Glu Asn Val Glu Gln His Pro Ser Thr Leu Ser Val
20 25 30
Gln Glu Gly Asp Ser Ala Val Ile Lys Cys Thr Tyr Ser Asp Ser Ala
35 40 45
Ser Asn Tyr Phe Pro Trp Tyr Lys Gln Glu Leu Gly Lys Arg Pro Gln
50 55 60
Leu Ile Ile Asp Ile Arg Ser Asn Val Gly Glu Lys Lys Asp Gln Arg
65 70 75 80
Ile Ala Val Thr Leu Asn Lys Thr Ala Lys His Phe Ser Leu His Ile
85 90 95
Thr Glu Thr Gln Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Ala Arg
100 105 110
Asn Ser Gly Ala Gly Ser Tyr Gln Leu Thr Phe Gly Lys Gly Thr Lys
115 120 125
Leu Ser Val Ile Pro Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln
130 135 140
Leu Arg Asp Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp
145 150 155 160
Phe Asp Ser Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr
165 170 175
Ile Thr Asp Lys Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser
180 185 190
Asn Ser Ala Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn
195 200 205
Ala Phe Asn Asn Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro
210 215 220
Glu Ser Ser Cys Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp
225 230 235 240
Thr Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu
245 250 255
Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp
260 265 270
Ser Ser
<210> 58
<211> 272
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M2的Va (VJ)结构域和恒定区结构域 (鼠)的氨基酸序列
<400> 58
Met Lys Ser Leu Arg Val Leu Leu Val Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser
1 5 10 15
Trp Val Trp Ser Gln Gly Glu Asn Val Glu Gln His Pro Ser Thr Leu
20 25 30
Ser Val Gln Glu Gly Asp Ser Ala Val Ile Lys Cys Thr Tyr Ser Asp
35 40 45
Ser Ala Ser Asn Tyr Phe Pro Trp Tyr Lys Gln Glu Leu Gly Lys Arg
50 55 60
Pro Gln Leu Ile Ile Asp Ile Arg Ser Asn Val Gly Glu Lys Lys Asp
65 70 75 80
Gln Arg Ile Ala Val Thr Leu Asn Lys Thr Ala Lys His Phe Ser Leu
85 90 95
His Ile Thr Glu Thr Gln Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala
100 105 110
Ala Arg Asn Ser Gly Ala Gly Ser Tyr Gln Leu Thr Phe Gly Lys Gly
115 120 125
Thr Lys Leu Ser Val Ile Pro Asp Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val
130 135 140
Tyr Gln Leu Lys Asp Pro Arg Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe
145 150 155 160
Thr Asp Phe Asp Ser Gln Ile Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly
165 170 175
Thr Phe Ile Thr Asp Lys Cys Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser
180 185 190
Lys Ser Asn Gly Ala Ile Ala Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys
195 200 205
Gln Asp Ile Phe Lys Glu Thr Asn Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp Val
210 215 220
Pro Cys Asp Ala Thr Leu Thr Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn
225 230 235 240
Leu Asn Phe Gln Asn Leu Ser Val Met Gly Leu Arg Ile Leu Leu Leu
245 250 255
Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
260 265 270
<210> 59
<211> 825
<212> DNA
<213> 智人
<400> 59
atgacatcca ttcgagctgt atttatattc ctgtggctgc agctggactt ggtgaatgga 60
gagaatgtgg agcagcatcc ttcaaccctg agtgtccagg agggagacag cgctgttatc 120
aagtgtactt attcagacag tgcctcaaac tacttccctt ggtataagca agaacttgga 180
aaaagacctc agcttattat agacattcgt tcaaatgtgg gcgaaaagaa agaccaacga 240
attgctgtta cattgaacaa gacagccaaa catttctccc tgcacatcac agagacccaa 300
cctgaagact cggctgtcta cttctgtgca gcaaggaact ctggggctgg gagttaccaa 360
ctcactttcg ggaaggggac caaactctcg gtcataccaa atatccagaa ccctgaccct 420
gccgtgtacc agctgagaga ctctaaatcc agtgacaagt ctgtctgcct attcaccgat 480
tttgattctc aaacaaatgt gtcacaaagt aaggattctg atgtgtatat cacagacaaa 540
actgtgctag acatgaggtc tatggacttc aagagcaaca gtgctgtggc ctggagcaac 600
aaatctgact ttgcatgtgc aaacgccttc aacaacagca ttattccaga agacaccttc 660
ttccccagcc cagaaagttc ctgtgatgtc aagctggtcg agaaaagctt tgaaacagat 720
acgaacctaa actttcaaaa cctgtcagtg attgggttcc gaatcctcct cctgaaagtg 780
gccgggttta atctgctcat gacgctgcgg ttgtggtcca gctga 825
<210> 60
<211> 825
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M2的Va (VJ)结构域和恒定区结构域的密码子优化的核酸序列
<400> 60
atgaccagca tccgggccgt gttcatcttc ctgtggctgc agctggacct ggtgaacggc 60
gagaacgtgg agcagcaccc cagcaccctg agcgtgcagg agggcgacag cgccgtgatc 120
aagtgcacct acagcgacag cgccagcaac tacttcccct ggtacaagca ggagctgggc 180
aagcggcccc agctgatcat cgacatccgg agcaacgtgg gcgagaagaa ggaccagcgg 240
atcgccgtga ccctgaacaa gaccgccaag cacttcagcc tgcacatcac cgagacccag 300
cccgaggaca gcgccgtgta cttctgcgcc gcccggaaca gcggcgccgg cagctaccag 360
ctgaccttcg gcaagggcac caagctgagc gtgatcccca acatccagaa ccccgacccc 420
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ttcgacagcc agaccaacgt gagccagagc aaggacagcg acgtgtacat caccgacaag 540
tgcgtgctgg acatgcggag catggacttc aagagcaaca gcgccgtggc ctggagcaac 600
aagagcgact tcgcctgcgc caacgccttc aacaacagca tcatccccga ggacaccttc 660
ttccccagcc ccgagagcag ctgcgacgtg aagctggtgg agaagagctt cgagaccgac 720
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gccggcttca acctgctgat gaccctgcgg ctgtggagca gctga 825
<210> 61
<211> 819
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M2的Va (VJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的密码子优化的核酸序列
<400> 61
atgaagagcc tgcgcgtgct gctggtcatc ctgtggctgc aattgtcgtg ggtctggagc 60
caaggcgaga acgtggagca gcaccccagc accctgagcg tgcaggaggg cgacagcgcc 120
gtgatcaagt gcacctacag cgacagcgcc agcaactact tcccctggta caagcaggag 180
ctgggcaagc ggccccagct gatcatcgac atccggagca acgtgggcga gaagaaggac 240
cagcggatcg ccgtgaccct gaacaagacc gccaagcact tcagcctgca catcaccgag 300
acccagcccg aggacagcgc cgtgtacttc tgcgccgccc ggaacagcgg cgccggcagc 360
taccagctga ccttcggcaa gggcaccaag ctgagcgtga tccccgacat tcagaacccg 420
gaaccggctg tataccagct gaaggacccc cgatctcagg atagtactct gtgcctgttc 480
accgactttg atagtcagat caatgtgcct aaaaccatgg aatccggaac ttttattacc 540
gacaagtgcg tgctggatat gaaagccatg gacagtaagt caaacggcgc catcgcttgg 600
agcaatcaga catccttcac ttgccaggat atcttcaagg agaccaacgc aacataccca 660
tcctctgacg tgccctgtga tgccaccctg acagagaagt ctttcgaaac agacatgaac 720
ctgaattttc agaatctgag cgtgatgggc ctgagaatcc tgctgctgaa ggtcgctggg 780
tttaatctgc tgatgacact gcggctgtgg tcctcatga 819
<210> 62
<211> 309
<212> PRT
<213> 智人
<400> 62
Met Gly Thr Ser Leu Leu Cys Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Asp His Ala Asp Thr Gly Val Ser Gln Asn Pro Arg His Lys Ile Thr
20 25 30
Lys Arg Gly Gln Asn Val Thr Phe Arg Cys Asp Pro Ile Ser Glu His
35 40 45
Asn Arg Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Thr Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe
50 55 60
Leu Thr Tyr Phe Gln Asn Glu Ala Gln Leu Glu Lys Ser Arg Leu Leu
65 70 75 80
Ser Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Pro Lys Gly Ser Phe Ser Thr Leu
85 90 95
Glu Ile Gln Arg Thr Glu Gln Gly Asp Ser Ala Met Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Leu Thr Val Gln Asn Thr Glu Ala Phe Phe Gly Gln Gly Thr Arg
115 120 125
Leu Thr Val Val Glu Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu Val Ala
130 135 140
Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr
145 150 155 160
Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser
165 170 175
Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro
180 185 190
Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu
195 200 205
Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn
210 215 220
His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu
225 230 235 240
Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu
245 250 255
Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser Tyr Gln Gln
260 265 270
Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala
275 280 285
Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val
290 295 300
Lys Arg Lys Asp Phe
305
<210> 63
<211> 305
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M2的Vb (VDJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的氨基酸序列
<400> 63
Met Gly Thr Ser Leu Leu Cys Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Asp His Ala Asp Thr Gly Val Ser Gln Asn Pro Arg His Lys Ile Thr
20 25 30
Lys Arg Gly Gln Asn Val Thr Phe Arg Cys Asp Pro Ile Ser Glu His
35 40 45
Asn Arg Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Thr Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe
50 55 60
Leu Thr Tyr Phe Gln Asn Glu Ala Gln Leu Glu Lys Ser Arg Leu Leu
65 70 75 80
Ser Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Pro Lys Gly Ser Phe Ser Thr Leu
85 90 95
Glu Ile Gln Arg Thr Glu Gln Gly Asp Ser Ala Met Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Leu Thr Val Gln Asn Thr Glu Ala Phe Phe Gly Gln Gly Thr Arg
115 120 125
Leu Thr Val Val Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser
130 135 140
Leu Phe Glu Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr
145 150 155 160
Leu Val Cys Leu Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser
165 170 175
Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro
180 185 190
Gln Ala Tyr Lys Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu
195 200 205
Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys
210 215 220
Gln Val Gln Phe His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly
225 230 235 240
Ser Pro Lys Pro Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg
245 250 255
Ala Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr His Gln Gly Val Leu Ser
260 265 270
Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala
275 280 285
Val Leu Val Ser Gly Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Lys Lys Asn
290 295 300
Ser
305
<210> 64
<211> 930
<212> DNA
<213> 智人
<400> 64
atgggcacca gcctcctctg ctggatggcc ctgtgtctcc tgggggcaga tcacgcagat 60
actggagtct cccagaaccc cagacacaag atcacaaaga ggggacagaa tgtaactttc 120
aggtgtgatc caatttctga acacaaccgc ctttattggt accgacagac cctggggcag 180
ggcccagagt ttctgactta cttccagaat gaagctcaac tagaaaaatc aaggctgctc 240
agtgatcggt tctctgcaga gaggcctaag ggatctttct ccaccttgga gatccagcgc 300
acagagcagg gggactcggc catgtatctc tgtgccagct tgacggtaca gaacactgaa 360
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gggaaggagg tgcacagtgg ggtcagcacg gacccgcagc ccctcaagga gcagcccgcc 600
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tatgagatcc tgctagggaa ggccaccctg tatgctgtgc tggtcagcgc ccttgtgttg 900
atggccatgg tcaagagaaa ggatttctga 930
<210> 65
<211> 930
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M2的Vb (VDJ)结构域和恒定区结构域的密码子优化的核酸序列
<400> 65
atgggcacca gcctgctgtg ctggatggcc ctgtgcctgc tgggcgccga ccacgccgac 60
accggcgtga gccagaaccc ccggcacaag atcaccaagc ggggccagaa cgtgaccttc 120
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tggacccagg accgggccaa gcccgtgacc cagatcgtga gcgccgaggc ctggggccgg 780
gccgactgcg gcttcaccag cgtgagctac cagcagggcg tgctgagcgc caccatcctg 840
tacgagatcc tgctgggcaa ggccaccctg tacgccgtgc tggtgagcgc cctggtgctg 900
atggccatgg tgaagcggaa ggacttctga 930
<210> 66
<211> 918
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M2的Vb (VDJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的密码子优化的核酸序列
<400> 66
atgggcacca gcctgctgtg ctggatggcc ctgtgcctgc tgggcgccga ccacgccgac 60
accggcgtga gccagaaccc ccggcacaag atcaccaagc ggggccagaa cgtgaccttc 120
cggtgcgacc ccatcagcga gcacaaccgg ctgtactggt accggcagac cctgggccag 180
ggccccgagt tcctgaccta cttccagaac gaggcccagc tggagaagag ccggctgctg 240
agcgaccggt tcagcgccga gcggcccaag ggcagcttca gcaccctgga gatccagcgg 300
accgagcagg gcgacagcgc catgtacctg tgcgccagcc tgaccgtgca gaacaccgag 360
gccttcttcg gccagggcac ccggctgacc gtggtggaag atctacgtaa cgtgacacca 420
cccaaagtct cactgtttga gcctagcaag gcagaaattg ccaacaagca gaaggccacc 480
ctggtgtgcc tggcaagagg gttctttcca gatcacgtgg agctgtcctg gtgggtcaac 540
ggcaaagaag tgcattctgg ggtctgcacc gacccccagg cttacaagga gagtaattac 600
tcatattgtc tgtcaagccg gctgagagtg tccgccacat tctggcacaa ccctaggaat 660
catttccgct gccaggtcca gtttcacggc ctgagtgagg aagataaatg gccagagggg 720
tcacctaagc cagtgacaca gaacatcagc gcagaagcct ggggacgagc agactgtggc 780
attactagcg cctcctatca tcagggcgtg ctgagcgcca ctatcctgta cgagattctg 840
ctgggaaagg ccaccctgta tgctgtgctg gtctccggcc tggtgctgat ggccatggtc 900
aagaaaaaga actcttga 918
<210> 67
<211> 267
<212> PRT
<213> 智人
<400> 67
Met Thr Ser Ile Arg Ala Val Phe Ile Phe Leu Trp Leu Gln Leu Asp
1 5 10 15
Leu Val Asn Gly Glu Asn Val Glu Gln His Pro Ser Thr Leu Ser Val
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Gln Glu Gly Asp Ser Ala Val Ile Lys Cys Thr Tyr Ser Asp Ser Ala
35 40 45
Ser Asn Tyr Phe Pro Trp Tyr Lys Gln Glu Leu Gly Lys Arg Pro Gln
50 55 60
Leu Ile Ile Asp Ile Arg Ser Asn Val Gly Glu Lys Lys Asp Gln Arg
65 70 75 80
Ile Ala Val Thr Leu Asn Lys Thr Ala Lys His Phe Ser Leu His Ile
85 90 95
Thr Glu Thr Gln Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Ala Ser
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Asn Leu Val Phe Gly Ala Gly Thr Ile Leu Arg Val Lys Ser Tyr Ile
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Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys Ser Ser
130 135 140
Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr Asn Val
145 150 155 160
Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr Val Leu
165 170 175
Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp Ser
180 185 190
Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser Ile Ile
195 200 205
Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys Asp Val Lys
210 215 220
Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe Gln Asn
225 230 235 240
Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe
245 250 255
Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
260 265
<210> 68
<211> 265
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR FK47.83的Va (VJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的氨基酸序列
<400> 68
Met Lys Ser Leu Arg Val Leu Leu Val Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser
1 5 10 15
Trp Val Trp Ser Gln Gly Glu Asn Val Glu Gln His Pro Ser Thr Leu
20 25 30
Ser Val Gln Glu Gly Asp Ser Ala Val Ile Lys Cys Thr Tyr Ser Asp
35 40 45
Ser Ala Ser Asn Tyr Phe Pro Trp Tyr Lys Gln Glu Leu Gly Lys Arg
50 55 60
Pro Gln Leu Ile Ile Asp Ile Arg Ser Asn Val Gly Glu Lys Lys Asp
65 70 75 80
Gln Arg Ile Ala Val Thr Leu Asn Lys Thr Ala Lys His Phe Ser Leu
85 90 95
His Ile Thr Glu Thr Gln Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala
100 105 110
Ala Ser Asn Leu Val Phe Gly Ala Gly Thr Ile Leu Arg Val Lys Ser
115 120 125
Asp Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys Asp Pro Arg
130 135 140
Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Ile
145 150 155 160
Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr Asp Lys Cys
165 170 175
Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly Ala Ile Ala
180 185 190
Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe Lys Glu Thr
195 200 205
Asn Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala Thr Leu Thr
210 215 220
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<211> 804
<212> DNA
<213> 智人
<400> 69
atgacatcca ttcgagctgt atttatattc ctgtggctgc agctggactt ggtgaatgga 60
gagaatgtgg agcagcatcc ttcaaccctg agtgtccagg agggagacag cgctgttatc 120
aagtgtactt attcagacag tgcctcaaac tacttccctt ggtataagca agaacttgga 180
aaaagacctc agcttattat agacattcgt tcaaatgtgg gcgaaaagaa agaccaacga 240
attgctgtta cattgaacaa gacagccaaa catttctccc tgcacatcac agagacccaa 300
cctgaagact cggctgtcta cttctgtgca gcaagtaatc tggtctttgg cgcaggaacc 360
attctgagag tcaagtccta tatccagaac cctgaccctg ccgtgtacca gctgagagac 420
tctaaatcca gtgacaagtc tgtctgccta ttcaccgatt ttgattctca aacaaatgtg 480
tcacaaagta aggattctga tgtgtatatc acagacaaaa ctgtgctaga catgaggtct 540
atggacttca agagcaacag tgctgtggcc tggagcaaca aatctgactt tgcatgtgca 600
aacgccttca acaacagcat tattccagaa gacaccttct tccccagccc agaaagttcc 660
tgtgatgtca agctggtcga gaaaagcttt gaaacagata cgaacctaaa ctttcaaaac 720
ctgtcagtga ttgggttccg aatcctcctc ctgaaagtgg ccgggtttaa tctgctcatg 780
acgctgcggt tgtggtccag ctga 804
<210> 70
<211> 804
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR FK47.83的Va (VJ)结构域和恒定区结构域的密码子优化的核酸序列
<400> 70
atgaccagca tccgggccgt gttcatcttc ctgtggctgc agctggacct ggtgaacggc 60
gagaacgtgg agcagcaccc cagcaccctg agcgtgcagg agggcgacag cgccgtgatc 120
aagtgcacct acagcgacag cgccagcaac tacttcccct ggtacaagca ggagctgggc 180
aagcggcccc agctgatcat cgacatccgg agcaacgtgg gcgagaagaa ggaccagcgg 240
atcgccgtga ccctgaacaa gaccgccaag cacttcagcc tgcacatcac cgagacccag 300
cccgaggaca gcgccgtgta cttctgcgcc gccagcaacc tggtgttcgg cgccggcacc 360
atcctgcggg tgaagagcta catccagaac cccgaccccg ccgtgtacca gctgcgggac 420
agcaagagca gcgacaagag cgtgtgcctg ttcaccgact tcgacagcca gaccaacgtg 480
agccagagca aggacagcga cgtgtacatc accgacaagt gcgtgctgga catgcggagc 540
atggacttca agagcaacag cgccgtggcc tggagcaaca agagcgactt cgcctgcgcc 600
aacgccttca acaacagcat catccccgag gacaccttct tccccagccc cgagagcagc 660
tgcgacgtga agctggtgga gaagagcttc gagaccgaca ccaacctgaa cttccagaac 720
ctgagcgtga tcggcttccg gatcctgctg ctgaaggtgg ccggcttcaa cctgctgatg 780
accctgcggc tgtggagcag ctga 804
<210> 71
<211> 798
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR FK47.83的Va (VJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的密码子优化的核酸序列
<400> 71
atgaagagcc tgcgcgtgct gctggtcatc ctgtggctgc aattgtcgtg ggtctggagc 60
caaggcgaga acgtggagca gcaccccagc accctgagcg tgcaggaggg cgacagcgcc 120
gtgatcaagt gcacctacag cgacagcgcc agcaactact tcccctggta caagcaggag 180
ctgggcaagc ggccccagct gatcatcgac atccggagca acgtgggcga gaagaaggac 240
cagcggatcg ccgtgaccct gaacaagacc gccaagcact tcagcctgca catcaccgag 300
acccagcccg aggacagcgc cgtgtacttc tgcgccgcca gcaacctggt gttcggcgcc 360
ggcaccatcc tgcgggtgaa gagcgacatt cagaacccgg aaccggctgt ataccagctg 420
aaggaccccc gatctcagga tagtactctg tgcctgttca ccgactttga tagtcagatc 480
aatgtgccta aaaccatgga atccggaact tttattaccg acaagtgcgt gctggatatg 540
aaagccatgg acagtaagtc aaacggcgcc atcgcttgga gcaatcagac atccttcact 600
tgccaggata tcttcaagga gaccaacgca acatacccat cctctgacgt gccctgtgat 660
gccaccctga cagagaagtc tttcgaaaca gacatgaacc tgaattttca gaatctgagc 720
gtgatgggcc tgagaatcct gctgctgaag gtcgctgggt ttaatctgct gatgacactg 780
cggctgtggt cctcatga 798
<210> 72
<211> 311
<212> PRT
<213> 智人
<400> 72
Met Gly Thr Ser Leu Leu Cys Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Asp His Ala Asp Thr Gly Val Ser Gln Asn Pro Arg His Lys Ile Thr
20 25 30
Lys Arg Gly Gln Asn Val Thr Phe Arg Cys Asp Pro Ile Ser Glu His
35 40 45
Asn Arg Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Thr Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe
50 55 60
Leu Thr Tyr Phe Gln Asn Glu Ala Gln Leu Glu Lys Ser Arg Leu Leu
65 70 75 80
Ser Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Pro Lys Gly Ser Phe Ser Thr Leu
85 90 95
Glu Ile Gln Arg Thr Glu Gln Gly Asp Ser Ala Met Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Leu Val Val Val Asp Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg
115 120 125
Leu Thr Val Leu Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala
130 135 140
Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr
145 150 155 160
Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser
165 170 175
Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro
180 185 190
Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu
195 200 205
Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn
210 215 220
His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu
225 230 235 240
Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu
245 250 255
Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln
260 265 270
Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala
275 280 285
Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val
290 295 300
Lys Arg Lys Asp Ser Arg Gly
305 310
<210> 73
<211> 305
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR FK47.83的Vb (VDJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的氨基酸序列
<400> 73
Met Gly Thr Ser Leu Leu Cys Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Asp His Ala Asp Thr Gly Val Ser Gln Asn Pro Arg His Lys Ile Thr
20 25 30
Lys Arg Gly Gln Asn Val Thr Phe Arg Cys Asp Pro Ile Ser Glu His
35 40 45
Asn Arg Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Thr Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe
50 55 60
Leu Thr Tyr Phe Gln Asn Glu Ala Gln Leu Glu Lys Ser Arg Leu Leu
65 70 75 80
Ser Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Pro Lys Gly Ser Phe Ser Thr Leu
85 90 95
Glu Ile Gln Arg Thr Glu Gln Gly Asp Ser Ala Met Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Leu Val Val Val Asp Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg
115 120 125
Leu Thr Val Leu Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser
130 135 140
Leu Phe Glu Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr
145 150 155 160
Leu Val Cys Leu Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser
165 170 175
Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro
180 185 190
Gln Ala Tyr Lys Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu
195 200 205
Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys
210 215 220
Gln Val Gln Phe His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly
225 230 235 240
Ser Pro Lys Pro Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg
245 250 255
Ala Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr His Gln Gly Val Leu Ser
260 265 270
Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala
275 280 285
Val Leu Val Ser Gly Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Lys Lys Asn
290 295 300
Ser
305
<210> 74
<211> 936
<212> DNA
<213> 智人
<400> 74
atgggcacca gcctcctctg ctggatggcc ctgtgtctcc tgggggcaga tcacgcagat 60
actggagtct cccagaaccc cagacacaag atcacaaaga ggggacagaa tgtaactttc 120
aggtgtgatc caatttctga acacaaccgc ctttattggt accgacagac cctggggcag 180
ggcccagagt ttctgactta cttccagaat gaagctcaac tagaaaaatc aaggctgctc 240
agtgatcggt tctctgcaga gaggcctaag ggatctttct ccaccttgga gatccagcgc 300
acagagcagg gggactcggc catgtatctc tgtgccagca gcttagtcgt tgtggatgag 360
cagttcttcg ggccagggac acggctcacc gtgctagagg acctgaaaaa cgtgttccca 420
cccgaggtcg ctgtgtttga gccatcagaa gcagagatct cccacaccca aaaggccaca 480
ctggtatgcc tggccacagg cttctacccc gaccacgtgg agctgagctg gtgggtgaat 540
gggaaggagg tgcacagtgg ggtcagcaca gacccgcagc ccctcaagga gcagcccgcc 600
ctcaatgact ccagatactg cctgagcagc cgcctgaggg tctcggccac cttctggcag 660
aacccccgca accacttccg ctgtcaagtc cagttctacg ggctctcgga gaatgacgag 720
tggacccagg atagggccaa acctgtcacc cagatcgtca gcgccgaggc ctggggtaga 780
gcagactgtg gcttcacctc cgagtcttac cagcaagggg tcctgtctgc caccatcctc 840
tatgagatct tgctagggaa ggccaccttg tatgccgtgc tggtcagtgc cctcgtgctg 900
atggccatgg tcaagagaaa ggattccaga ggctag 936
<210> 75
<211> 936
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR FK47.83的Vb (VDJ)结构域和恒定区结构域的密码子优化的核酸序列
<400> 75
atgggcacca gcctgctgtg ctggatggcc ctgtgcctgc tgggcgccga ccacgccgac 60
accggcgtga gccagaaccc ccggcacaag atcaccaagc ggggccagaa cgtgaccttc 120
cggtgcgacc ccatcagcga gcacaaccgg ctgtactggt accggcagac cctgggccag 180
ggccccgagt tcctgaccta cttccagaac gaggcccagc tggagaagag ccggctgctg 240
agcgaccggt tcagcgccga gcggcccaag ggcagcttca gcaccctgga gatccagcgg 300
accgagcagg gcgacagcgc catgtacctg tgcgccagca gcctggtggt ggtggacgag 360
cagttcttcg gccccggcac ccggctgacc gtgctggagg acctgaagaa cgtgttcccc 420
cccgaggtgg ccgtgttcga gcccagcgag gccgagatca gccacaccca gaaggccacc 480
ctggtgtgcc tggccaccgg cttctacccc gaccacgtgg agctgagctg gtgggtgaac 540
ggcaaggagg tgcacagcgg cgtgtgcacc gacccccagc ccctgaagga gcagcccgcc 600
ctgaacgaca gccggtactg cctgagcagc cggctgcggg tgagcgccac cttctggcag 660
aacccccgga accacttccg gtgccaggtg cagttctacg gcctgagcga gaacgacgag 720
tggacccagg accgggccaa gcccgtgacc cagatcgtga gcgccgaggc ctggggccgg 780
gccgactgcg gcttcaccag cgagagctac cagcagggcg tgctgagcgc caccatcctg 840
tacgagatcc tgctgggcaa ggccaccctg tacgccgtgc tggtgagcgc cctggtgctg 900
atggccatgg tgaagcggaa ggacagccgg ggctga 936
<210> 76
<211> 918
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR FK47.83的Vb (VDJ)结构域和恒定区结构域(鼠)的密码子优化的核酸序列
<400> 76
atgggcacca gcctgctgtg ctggatggcc ctgtgcctgc tgggcgccga ccacgccgac 60
accggcgtga gccagaaccc ccggcacaag atcaccaagc ggggccagaa cgtgaccttc 120
cggtgcgacc ccatcagcga gcacaaccgg ctgtactggt accggcagac cctgggccag 180
ggccccgagt tcctgaccta cttccagaac gaggcccagc tggagaagag ccggctgctg 240
agcgaccggt tcagcgccga gcggcccaag ggcagcttca gcaccctgga gatccagcgg 300
accgagcagg gcgacagcgc catgtacctg tgcgccagca gcctggtggt ggtggacgag 360
cagttcttcg gccccggcac ccggctgacc gtgctggaag atctacgtaa cgtgacacca 420
cccaaagtct cactgtttga gcctagcaag gcagaaattg ccaacaagca gaaggccacc 480
ctggtgtgcc tggcaagagg gttctttcca gatcacgtgg agctgtcctg gtgggtcaac 540
ggcaaagaag tgcattctgg ggtctgcacc gacccccagg cttacaagga gagtaattac 600
tcatattgtc tgtcaagccg gctgagagtg tccgccacat tctggcacaa ccctaggaat 660
catttccgct gccaggtcca gtttcacggc ctgagtgagg aagataaatg gccagagggg 720
tcacctaagc cagtgacaca gaacatcagc gcagaagcct ggggacgagc agactgtggc 780
attactagcg cctcctatca tcagggcgtg ctgagcgcca ctatcctgta cgagattctg 840
ctgggaaagg ccaccctgta tgctgtgctg gtctccggcc tggtgctgat ggccatggtc 900
aagaaaaaga actcttga 918
<210> 77
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人
<400> 77
aggtgtgatc caatttctga acacaaccgc ctttattggt accgacagac cctggggcag 60
ggcccagagt ttctgactta cttccagaat gaagctcaac tagaaaaatc aaggctgctc 120
<210> 78
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人
<400> 78
aggtgtgatc caatttcggg tcatgtatcc cttttttggt accaacaggc cctggggcag 60
gggccagagt ttctgactta tttccagaat gaagctcaac tagacaaatc ggggctgccc 120
<210> 79
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人
<400> 79
Val Leu Arg Asp Asp Leu Leu Glu Ala
1 5
<210> 80
<211> 5
<212> PRT
<213> 智人
<400> 80
Thr Thr Leu Ser Asn
1 5
<210> 81
<211> 15
<212> DNA
<213> 智人
<400> 81
actactttaa gcaat 15
<210> 82
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M7的Va结构域的CDR1的密码子优化的核酸序列
<400> 82
accaccctga gcaac 15
<210> 83
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<400> 83
Leu Val Lys Ser Gly Glu Val
1 5
<210> 84
<211> 21
<212> DNA
<213> 智人
<400> 84
ttagtgaaga gtggagaagt g 21
<210> 85
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M7的Va结构域的CDR2的密码子优化的核酸序列
<400> 85
ctggtgaaga gcggcgaggt g 21
<210> 86
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人
<400> 86
Phe Gln Asn Glu Ala Gln
1 5
<210> 87
<211> 18
<212> DNA
<213> 智人
<400> 87
ttccagaatg aagctcaa 18
<210> 88
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HA-1H TCR M7、HA-1H TCR M2或HA-1H TCR FK47.83的Vb结构域的CDR2的密码子优化的核酸序列
<400> 88
ttccagaacg aggcccag 18
<210> 89
<211> 441
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 89
gagcaaggcc gagatcgcca acaagcagaa agccaccctc gtgtgcctgg ccagaggctt 60
cttccccgac catgtggaac tgtcttggtg ggtcaacggc aaagaggtgc acagcggagt 120
gtccaccgac cctcaggcct acaaagagag caactacagc tactgcctga gcagcagact 180
gcgggtgtcc gccaccttct ggcacaaccc ccggaaccac ttcagatgcc aggtgcagtt 240
tcacggcctg agcgaagagg acaagtggcc cgaaggctcc cccaagcccg tgacccagaa 300
tatctctgcc gaggcctggg gcagagccga ctgtggaatt accagcgcca gctaccacca 360
gggcgtgctg tctgccacca tcctgtacga gatcctgctg ggcaaggcca ccctgtacgc 420
cgtgctggtg tctggcctgg t 441
<210> 90
<211> 363
<212> DNA
<213> 小鼠
<400> 90
caggacagca ccctgtgcct gttcaccgac ttcgacagcc agatcaacgt gcccaagacc 60
atggaaagcg gcaccttcat caccgacaag acagtgctgg acatgaaggc catggacagc 120
aagtccaacg gcgcaatcgc ctggtccaac cagaccagct tcacatgcca ggacatcttc 180
aaagagacaa acgccacata ccccagcagc gacgtgccct gtgatgccac cctgacagag 240
aagtccttcg agacagacat gaacctgaac ttccagaatc tgtccgtgat gggcctgaga 300
atcctgctgc tgaaggtggc cggcttcaat ctgctgatga ccctgcggct gtggtccagc 360
tga 363
<210> 91
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Seattle TCR2, Vb结构域
<400> 91
Met Gly Thr Ser Leu Leu Cys Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Asp His Ala Asp Thr Gly Val Ser Gln Asp Pro Arg His Lys Ile Thr
20 25 30
Lys Arg Gly Gln Asn Val Thr Phe Arg Cys Asp Pro Ile Ser Glu His
35 40 45
Asn Arg Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Thr Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe
50 55 60
Leu Thr Tyr Phe Gln Asn Glu Ala Gln Leu Glu Lys Ser Arg Leu Leu
65 70 75 80
Ser Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Pro Lys Gly Ser Phe Ser Thr Leu
85 90 95
Glu Ile Gln Arg Thr Glu Gln Gly Asp Ser Ala Met Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Leu Val Lys Gly Glu Lys Leu Phe Phe Gly Ser Gly Thr Gln
115 120 125
Leu Ser Val Leu
130
<210> 92
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Seattle TCR2, Va结构域
<400> 92
Met Glu Thr Leu Leu Gly Leu Leu Ile Leu Trp Leu Gln Leu Gln Trp
1 5 10 15
Val Ser Ser Lys Gln Glu Val Thr Gln Ile Pro Ala Ala Leu Ser Val
20 25 30
Pro Glu Gly Glu Asn Leu Val Leu Asn Cys Ser Phe Thr Asp Ser Ala
35 40 45
Ile Tyr Asn Leu Gln Trp Phe Arg Gln Asp Pro Gly Lys Gly Leu Thr
50 55 60
Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Ser Gln Arg Glu Gln Thr Ser Gly Arg
65 70 75 80
Leu Asn Ala Ser Leu Asp Lys Ser Ser Gly Arg Ser Thr Leu Tyr Ile
85 90 95
Ala Ala Ser Gln Pro Gly Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Ile
100 105 110
Gly Leu Gly Gly Thr Tyr Lys Tyr Ile Phe Gly Thr Gly Thr Arg Leu
115 120 125
Lys Val Leu Ala Asn
130
Claims (38)
1.一种分离的核酸组合物，其编码具有TCRα链可变区(Vα)和TCRβ链可变区(Vβ)的HA-1H抗原特异性结合蛋白，该组合物包含:
(a)编码TCR Vα结构域的核酸序列，所述TCRVα结构域包含与SEQ ID NO：1-3中任一项具有至少85％序列同一性的CDR3氨基酸序列；和
(b)编码TCR Vβ结构域的核酸序列，所述TCRVβ结构域具有由TRBV7-9基因编码的氨基酸序列，其中所述Vβ结构域包含与SEQ ID NO：4-6中任一项具有至少90％序列同一性的CDR3氨基酸序列和与SEQ ID NO：7具有至少80％序列同一性的CDR1氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的分离的核酸组合物，其中所述TRBV7-9基因是TRBV7-9*01或TRBV7-9*03。
3.根据前述权利要求任一项所述的分离的核酸组合物，其中所述HA-1H抗原包含SEQ IDNO:10所示的氨基酸序列。
4.根据前述权利要求任一项所述的分离的核酸组合物，其中所述编码的结合蛋白能够特异性结合HA-1H抗原:HLA-A*0201复合物。
5.根据前述权利要求任一项所述的分离的核酸组合物，其中将所述核酸序列对在宿主细胞中表达进行密码子优化，任选地其中所述宿主细胞是人T细胞。
6.根据前述权利要求任一项所述的分离的核酸组合物，其中:
(i)Vα结构域的CDR3包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成，
(ii)Vβ结构域的CDR3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或由SEQ ID NO:4的氨基酸序列组成，和
(iii)Vβ结构域的CDR1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成。
7.根据权利要求6所述的分离的核酸组合物，其中:
(i)Vα结构域的CDR3由包含SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的序列的核酸序列编码；和/或
(ii)Vβ结构域的CDR3由包含SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14的序列的核酸序列编码；和/或
(iii)Vβ结构域的CDR1由包含SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16的序列的核酸序列编码。
8.根据前述权利要求任一项所述的分离的核酸组合物，其中:
(i)Vα结构域包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:17具有至少90％的序列同一性、包含SEQ ID NO:17、或由SEQ ID NO:17组成；和/或
(ii)Vβ结构域包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:18具有至少90％的序列同一性、包含SEQ ID NO:18、或由SEQ ID NO:18组成。
9.根据权利要求8所述的分离的核酸组合物，其中:
(i)Vα结构域由包含SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20的序列的核酸序列编码；和/或
(ii)Vβ结构域由包含SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:22的序列的核酸序列编码。
10.根据前述权利要求任一项所述的分离的核酸组合物，其中:
(i)Vα结构域的CDR3包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成，
(ii)Vβ结构域的CDR3包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列或由SEQ ID NO:5的氨基酸序列组成，和
(iii)Vβ结构域的CDR1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成。
11.根据权利要求10所述的分离的核酸组合物，其中:
(i)Vα结构域的CDR3由包含SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24的序列的核酸序列编码；和/或
(ii)Vβ结构域的CDR3由包含SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26的序列的核酸序列编码；和/或
(iii)Vβ结构域的CDR1由包含SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16的序列的核酸序列编码。
12.根据前述权利要求任一项所述的分离的核酸组合物，其中:
(i)Vα结构域包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:29具有至少90％的序列同一性、包含SEQ ID NO:29、或由SEQ ID NO:29组成；和/或
(ii)Vβ结构域包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:30具有至少90％的序列同一性、包含SEQ ID NO:30、或由SEQ ID NO:30组成。
13.根据权利要求12所述的分离的核酸组合物，其中:
(i)Vα结构域由包含SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:32的序列的核酸序列编码；和/或
(ii)Vβ结构域由包含SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34的序列的核酸序列编码。
14.根据前述权利要求任一项所述的分离的核酸组合物，其中:
(i)Vα结构域的CDR3包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成，
(ii)Vβ结构域的CDR3包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或由SEQ ID NO:6的氨基酸序列组成，和
(iii)Vβ结构域的CDR1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成。
15.根据权利要求14所述的分离的核酸组合物，其中:
(i)Vα结构域的CDR3由包含SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:36的序列的核酸序列编码；和/或
(ii)Vβ结构域的CDR3由包含SEQ ID NO:37或SEQ ID NO:38的序列的核酸序列编码；和/或
(iii)Vβ结构域的CDR1由包含SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16的序列的核酸序列编码。
16.根据前述权利要求任一项所述的分离的核酸组合物，其中:
(i)Vα结构域包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:41具有至少90％的序列同一性、包含SEQ ID NO:41、或由SEQ ID NO:41组成；和/或
(ii)Vβ结构域包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:42具有至少90％的序列同一性、包含SEQ ID NO:42、或由SEQ ID NO:42组成。
17.根据权利要求16所述的分离的核酸组合物，其中:
(i)Vα结构域由包含SEQ ID NO:43或SEQ ID NO:44的序列的核酸序列编码；和/或
(ii)Vβ结构域由包含SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:46的序列的核酸序列编码。
18.根据前述权利要求任一项所述的分离的核酸组合物，其还包含TCRα链恒定区和/或TCRβ链恒定区。
19.根据前述权利要求任一项所述的分离的核酸组合物，其中所述编码的结合蛋白包含TCR、TCR的抗原结合片段或嵌合抗原受体(CAR)。
20.根据权利要求19所述的分离的核酸组合物，其中所述TCR的抗原结合片段是单链TCR(scTCR)。
21.包含根据权利要求1至20中任一项所述的核酸组合物的载体系统。
22.根据权利要求21所述的载体系统，其中所述载体是质粒、病毒载体或粘粒，任选地，其中所述载体选自由如下组成的组：逆转录病毒、慢病毒、腺相关病毒、腺病毒、痘苗病毒、金丝雀痘病毒、疱疹病毒、小环载体和合成DNA或RNA。
23.一种修饰细胞，其被根据权利要求1至20中任一项所述的核酸组合物或根据权利要求21或22所述的载体系统转染或转导，其中所述修饰细胞为HLA-A*0201阴性和/或HA-1H阴性。
24.根据权利要求23所述的修饰细胞，其中所述修饰细胞选自由如下组成的组：CD8 T细胞、CD4 T细胞、NK细胞、NK-T细胞、γ-δT细胞、造血干细胞、祖细胞、T细胞系或NK-92细胞系。
25.根据权利要求23或24所述的修饰细胞，其中所述修饰细胞是人细胞。
26.一种药物组合物，其包含权利要求1至20中任一项所述的核酸组合物、权利要求21或22所述的载体系统或权利要求23至25中任一项所述的修饰细胞，以及药学上可接受的赋形剂、佐剂、稀释剂和/或载体。
27.一种治疗或预防HLA-A*0201阳性受试者异体干细胞移植(allo-SCT)后血液病恶性肿瘤复发的方法，该方法包括给受试者施用治疗有效量的根据权利要求26所述的药物组合物。
28.根据权利要求26所述的药物组合物用于治疗或预防HLA-A*0201阳性的人类受试者中异体干细胞移植(allo-SCT)后血液病恶性肿瘤的复发。
29.根据权利要求26所述的药物组合物在制备用于治疗或预防HLA-A*0201阳性的人类受试者中异体干细胞移植(allo-SCT)后血液病恶性肿瘤的复发的药物中的用途。
30.根据权利要求27至29中任一项所述的方法、使用的药物组合物或用途，其中所述血液病恶性肿瘤包括白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常病症或骨髓瘤。
31.根据权利要求30所述的方法、使用的药物组合物或用途，其中:
(i)血液病恶性肿瘤包括白血病，其中所述白血病选自由如下组成的组：急性髓细胞白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、混合表型急性白血病(MPAL)、慢性髓细胞白血病(CML)、B细胞前淋巴细胞白血病、毛细胞白血病或慢性淋巴细胞白血病(CLL)；或
(ii)血液病恶性肿瘤包括淋巴瘤，其中所述淋巴瘤选自由如下组成的组：霍奇金淋巴瘤(HL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、中枢神经系统淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、CD37+树突细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织(MALT)的结外边缘区B细胞淋巴瘤、结边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤或伯基特淋巴瘤；或
(iii)血液病恶性肿瘤包括骨髓增生异常病症，其中所述骨髓增生异常病症选自难治性血细胞减少症伴单系发育不良(难治性贫血、难治性中性粒细胞减少症和难治性血小板减少症)、难治性贫血伴环状铁幼粒细胞增多(RARS)、难治性贫血伴环状铁幼粒细胞增多-血小板增多症(RARS-t)、难治性血细胞减少症伴多系发育不良(RCMD)、难治性血细胞减少症伴多系发育不良和环状铁幼粒细胞增多(RCMD-RS)、难治性贫血伴成纤维细胞过多(RAEB)、不可分类的骨髓增生异常或儿童难治性血细胞减少症。
32.根据权利要求27至31中任一项所述的方法、使用的药物组合物或用途，其中所述受试者之前接受过淋巴消耗性化疗。
33.根据权利要求32所述的方法、使用的药物组合物或用途，其中所述淋巴消耗性化疗包括环磷酰胺、氟达拉滨、抗胸腺细胞球蛋白或其组合。
34.根据权利要求27至33中任一项所述的方法、使用的药物组合物或用途，其中权利要求26的组合物中的一种或多种修饰细胞对受试者来说是异体的。
35.一种产生结合蛋白的方法，所述结合蛋白能够特异性结合含有HA-1H抗原的肽，而不结合不含HA-1H抗原的肽，所述方法包括在核酸组合物被纳入细胞并被细胞表达的条件下，使根据权利要求1至20中任一项所述的核酸组合物与细胞接触。
36.根据权利要求35所述的方法，其中，所述方法是离体的。
37.一种分离的核酸序列，其包含SEQ ID NO:11-14、19-26、31-38、43-46、49-51、54-56、59-66、69-71和74-76中任一项的核酸序列或由SEQ ID NO:11-14、19-26、31-38、43-46、49-51、54-56、59-66、69-71和74-76中任一项的核酸序列组成。
38.一种分离的核酸序列，所述分离的核酸序列包含SEQ ID NO:11-14、19-26、31-38、43-46、49-51、54-56、59-66、69-71和74-76中任一项的核酸序列或由SEQ ID NO:11-14、19-26、31-38、43-46、49-51、54-56、59-66、69-71和74-76中任一项的核酸序列组成，用于治疗。
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